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人源iPS干細(xì)胞體外定向分化為心肌細(xì)胞的試劑盒及方法與流程

文檔序號:12457152閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于體外定向誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞的試劑盒,所述試劑盒包括第一培養(yǎng)液,所述第一培養(yǎng)液包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基DMEM/F12,進(jìn)一步地,所述第一培養(yǎng)液還包括:

胰島素 4~11/ml;

2-磷酸抗壞血酸酯 40~70mg/ml;

亞硒酸鈉 40~80ug/ml;

人類堿性成纖維細(xì)胞生長因子 150~200ug/ml;

人類轉(zhuǎn)化生長因子TGFβ1 90~140ug/ml;

轉(zhuǎn)鐵蛋白 30~60mg/ml;

NaHCO3 4~8wt%。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其中所述第一培養(yǎng)液還包括:1~3μM TZV或8~12μM Y-27632。

3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其中所述第一培養(yǎng)液的pH值小于7。

4.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,所述試劑盒還包括第二培養(yǎng)液,所述第二培養(yǎng)液包括CDM培養(yǎng)液,進(jìn)一步地,所述第二培養(yǎng)液還包括8~12μM的CHIR99021;

其中所述CDM培養(yǎng)液包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基RPMI-1640,0.08~0.12%BSA,1×MTG、200~250μg/mL抗壞血酸磷酸酯鎂。

5.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,所述試劑盒還包括第三培養(yǎng)液,所述第三培養(yǎng)液包括CDM培養(yǎng)液,進(jìn)一步地,所述第三培養(yǎng)液還包括4~6ng/ml的堿性成纖維細(xì)胞生長因子;

其中所述CDM培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基RPMI-1640,0.08~0.12vol%BSA,1×MTG、200~250μg/mL抗壞血酸磷酸酯鎂。

6.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,所述試劑盒還包括第四培養(yǎng)液,所述第四培養(yǎng)液包括CDM培養(yǎng)液和已經(jīng)使用過的第三培養(yǎng)液,進(jìn)一步地,所述第四培養(yǎng)液還包括2~8μM的IWP2/4、1~3μM的IWR-1、或1~3μM的Wnt-C59;

其中,所述述CDM培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基RPMI-1640,0.08~0.12vol%BSA,1×MTG、200~250μg/mL抗壞血酸磷酸酯鎂;

其中,所述CDM培養(yǎng)液和已經(jīng)使用過的第三培養(yǎng)液的體積比為0.5~2。

7.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,所述試劑盒還包括第五培養(yǎng)液,所述第五培養(yǎng)液為CDM培養(yǎng)液,或所述第五培養(yǎng)液包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基RPMI-1640以及2~4vol%的KOSR或2~4vol%的B27;

其中所述CDM培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基RPMI-1640,0.08~0.12vol%BSA,1×MTG、200~250μg/mL抗壞血酸磷酸酯鎂。

8.一種用于體外定向誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞的方法,所述方法包括以下階段:

第一階段:用如權(quán)利要求1或2所述的試劑盒中的第一培養(yǎng)液傳代培養(yǎng)即將用于定向分化的多能干細(xì)胞;

第二階段:用如權(quán)利要求4所述的試劑盒中的第二培養(yǎng)液替換第一階段所用的第一培養(yǎng)液,培養(yǎng)12~36小時;

第三階段:用如權(quán)利要求5所述的試劑盒中的第三培養(yǎng)液替換第二階段所用的第二培養(yǎng)液,培養(yǎng)36~60小時;

第四階段:用如權(quán)利要求6所述的試劑盒中的第四培養(yǎng)液替換第三階段所用的第三培養(yǎng)液,培養(yǎng)36~60小時;

第五階段:用如權(quán)利要求7所述的試劑盒中的第五培養(yǎng)液替換第四階段所用的第四培養(yǎng)液。

9.如權(quán)利要求8所述的方法,所述方法還包括第六階段,所述第六階段為每2~4天更換如權(quán)利要求7所述的試劑盒中的第五培養(yǎng)液。

10.一種由權(quán)利要求8或9所述的方法獲得的心肌前體細(xì)胞系或心肌細(xì)胞系。

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