技術(shù)特征：

1.一種基于MGB探針鑒定驢皮、馬皮和騾子皮的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)的PCR反應(yīng)液。

2.如權(quán)利要求1所述的一種基于MGB探針鑒定驢皮、馬皮和騾子皮的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應(yīng)液包括驢和馬ckm基因通用性引物ckm-F/ckm-R，驢MGB探針MGB-Lv，馬MGB探針MGB-Ma，質(zhì)控引物和質(zhì)控探針；

其中，所述驢和馬ckm基因通用性引物序列為：

ckm-F：5‘-CAAGCTCTCCTAAACACCTATC-3‘；

ckm-R：5‘-CTGACCTAAAGCCTACGTA-3‘；

所述驢MGB探針序列為：

MGB-Lv：5‘-AGCCATTCATTACGCCT-3‘；

所述馬MGB探針序列為：

MGB-Ma：5‘-CGTTACCGTTACATAC-3‘；

所述質(zhì)控引物序列為：

16SRNA-F：5‘-ACCTGAAACTAGAACTGACTT-3‘；

16SRNA-R：5‘-GCTTCAATGGGTCCAATGTGAC-3‘；

所述質(zhì)控探針序列為：

16SRNA-P：5‘-CTTGAATCCTGACGTCTGGCT-3‘。

3.如權(quán)利要求1或2所述的一種基于MGB探針鑒定驢皮、馬皮和騾子皮的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應(yīng)液還包括Taq DNA聚合酶，無(wú)水D-(+)-海藻糖；Tris-HCl；KCl；MgCl₂；dNTPs；甘油；牛血清白蛋白；ROX參比染料。

4.如權(quán)利要求2所述的一種基于MGB探針鑒定驢皮、馬皮和騾子皮的試劑盒，其特征在于，所述驢MGB探針5‘端修飾FAM熒光基團(tuán)，3‘端修飾MGB基團(tuán)。

5.如權(quán)利要求2所述的一種基于MGB探針鑒定驢皮、馬皮和騾子皮的試劑盒，其特征在于，所述馬MGB探針5‘端修飾HEX熒光基團(tuán)，3‘端修飾MGB基團(tuán)。

6.如權(quán)利要求2所述的一種基于MGB探針鑒定驢皮、馬皮和騾子皮的試劑盒，其特征在于，所述質(zhì)控探針5‘端修飾JOE熒光基團(tuán)，3‘端修飾Dabcyl基團(tuán)。

7.如權(quán)利要求2所述的一種基于MGB探針鑒定驢皮、馬皮和騾子皮的試劑盒，其特征在于，所述驢和馬ckm基因通用性引物序列濃度均為250nM；所述驢和馬的MGB探針濃度均為500nM；所述質(zhì)控引物濃度均為250nM；所述質(zhì)控探針濃度為500nM。

8.如權(quán)利要求3所述的一種基于MGB探針鑒定驢皮、馬皮和騾子皮的試劑盒，其特征在于，所述Taq DNA聚合酶活性濃度為0.05U/μL；所述無(wú)水D-(+)-海藻糖濃度為8％；所述Tris-HCl濃度為20mM，pH為8.3；所述KCl濃度為100mM；所述MgCl₂濃度為7mM；所述dNTPs濃度為0.4mM；所述甘油體積分?jǐn)?shù)為20％(v/v)；所述牛血清白蛋白濃度為1μgμL^-1；所述ROX參比染料濃度為1μM。

9.利用權(quán)利要求1～8任意一項(xiàng)所述試劑盒進(jìn)行檢測(cè)的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)采用市售動(dòng)物基因組DNA提取試劑盒提取待檢樣品DNA；

(2)配置擴(kuò)增反應(yīng)體系；

(3)將步驟(2)配制好的擴(kuò)增反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)條件為：95℃30s；95℃5s，60℃30s，在60℃收集熒光信號(hào)，共計(jì)40個(gè)循環(huán)；

(4)結(jié)果判定：Ct值≤36為陽(yáng)性反應(yīng)，Ct值＞36為陰性反應(yīng)，按下表對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定：

10.如權(quán)利要求9所述檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(2)中擴(kuò)增反應(yīng)體系包括：PCR反應(yīng)液10μL，所述步驟(1)制備樣品DNA2μL，使用無(wú)菌水補(bǔ)足至20μL；同時(shí)設(shè)置用無(wú)菌水代替DNA的空白對(duì)照。