專利名稱：一種邊分離-邊分析鑒別真?zhèn)误H皮阿膠的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及真?zhèn)误H皮阿膠的鑒別技術，具體地，本發(fā)明涉及一種通過比較阿膠中不同組分性質的方法進行真?zhèn)伟⒛z鑒別的技術。本發(fā)明還涉及分離阿膠中不同組分的方法，以及不同膠的組分性質的比較方法。
背景技術：
阿膠為驢皮經去毛后等預處理后再經過煎煮濃縮熬制而成的固體膠。驢皮中含有糖胺聚糖，糖蛋白，網蛋白，角質蛋白、膠原蛋白、脂肪及其它物質，在原料前處理過程中，漂、泡、搓、洗等過程將角質蛋白和脂肪等除去，制膠過程熬制溫度、時間、水分等因素作用，使驢皮中的大分子水解，膠原蛋白和其它蛋白，糖胺聚糖和蛋白聚糖水解等后，形成一系列降解產物，成分十分復雜，分子量分布范圍很大。
正品阿膠應為驢皮阿膠，而其它動物皮熬制的膠均為偽膠。偽膠功效與阿膠不同，甚至有嚴重的副作用，不但給市場帶來了混亂，而且危害消費者的身心健康。由于其它各種雜皮膠的制備工藝及膠的外觀性狀與阿膠相似，又因其成分復雜，所以鑒別真?zhèn)螛O其困難。傳統(tǒng)的鑒別方法(如查看膠斷面色澤，手感，水試，膠懸浮液性狀等)多根據膠的理化性質或表觀性狀進行鑒別而且需要相當的經驗，因此準確性差；尤其是在膠的形態(tài)和色澤十分相似的情況下更難以根據膠的形態(tài)學特征進行真?zhèn)螀^(qū)分。雖然也有人利用紫外，紅外等方式進行鑒別，但膠溶液含有不同種類物質，這種方式分析的是阿膠中不同物質的混合物，沒有針對性，而且準確性也不高，重現性非常低。另外，對于熬膠過程中利用雜皮加入驢皮方式得到混皮膠，這種利用混合物直接光譜掃描鑒別阿膠真?zhèn)蔚姆绞綔蚀_性極差。
本發(fā)明的目的在于提供一種新的鑒別方法，這種方法能夠快速而準確地鑒別阿膠地真?zhèn)?，而且鑒別所需樣品量少，預處理簡單，具有非常高的重復性。本發(fā)明涉及的真?zhèn)舞b別方法對于所有生物類的中藥中的含有蛋白或多糖的中藥均適用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的上述目的是通過將膠溶解后得到的溶液進行預處理，以去除人為加入的冰糖等輔料以及膠中的不溶物，將得到的溶液借助各種分離方法(離子交換，凝膠過濾，吸附等層析-色譜方法)得到阿膠中不同種類的組分，同時結合其它分析方法比較各類組分的性質，以邊分離邊分析的方式來實現的。阿膠溶解后含有不同種類的陰陽離子，這些離子大小及電荷性質不同。利用凝膠過濾層析根據膠溶液中分子的分子量的大小進行分離，利用離子交換層析根據膠溶液中帶不同電荷及帶相同電荷的離子的電荷多少和強度進行分離，根據膠溶液中糖種類的不同利用糖柱層析進行分離，以及利用膠溶液中不同分子的其它性質進行分離。對于層析分離出的不同種類的組分利用紫外光譜，紅外光譜，質譜或其它方式進行分析。將不同分離方式得到的色譜峰的掃描圖譜與標準阿膠溶液同一色譜峰的圖譜進行比較，或將不同色譜峰的質譜分析結果與標準膠的同一峰的質譜分析結果進行比較。
本發(fā)明的具體方法如下一種鑒別真?zhèn)误H皮阿膠的方法，其步驟如下1 取一定量的膠加入一定量的蒸餾水，在室溫下振蕩6～10小時。
2 將1得到的阿膠溶液離心，去除上層白色物質和下層沉淀物，留中間黃色透明溶液。
3 向2得到的透明溶液中加入一定濃度的沉淀劑，振蕩數分鐘后低溫保存2～4小時，離心收集沉淀，洗滌后離心，保留沉淀物。
4 將3得到的沉淀利用緩沖液重新溶解，待進行分離-分析。
5 將4得到的溶液進行色譜分離，采集各峰的紫外或紅外掃描圖譜。
6 將得到的各色譜峰掃描圖譜與真阿膠的各色譜峰的圖譜進行比對，根據各個色譜峰的光譜掃描結果與真阿膠的各個色譜峰的光譜掃描結果的比較結果區(qū)分待鑒別膠的真?zhèn)巍?br> 7 對于各個峰的光譜掃描結果完全相同的樣品需要將各個峰進行定量計算，以確定是純驢皮膠還是加入雜皮的混合膠。


圖1待鑒別膠的預處理過程示意2真阿膠及一種待測膠的離子交換圖譜曲線1真阿膠，曲線2待測膠圖3四種膠的圖2中第一個峰的紫外掃描圖譜T-真阿膠，A待測膠a，B待測膠b，C待測膠c圖4真阿膠及一種待測膠的陽離子交換圖譜曲線1真阿膠，曲線2待測膠圖5四種膠的圖4中第一個峰的紫外掃描圖譜T-真阿膠，A待測膠I，B待測膠II，C待測膠III以下借助具體實施例說明本發(fā)明的方法實施例一 陰離子交換分離—分析區(qū)別阿膠的真?zhèn)? 待鑒別樣品 3種膠2 所需儀器(1)離心機(2)高效液相色譜儀(3)檢測器二極管陣列檢測器3 樣品處理(1)分別取真阿膠和3種待鑒別膠(膠a，膠b，膠c)各2克，分別加入20毫升蒸餾水，利用超聲振蕩4小時。
(2)將(1)得到的各溶液在10000r/m下離心5分鐘，分別取4種膠的中間清液10毫升。
(3)向(2)得到的4種溶液中加入15毫升沉淀劑，靜置2小時，在12000r/m下離心10分鐘。
(4)收集(3)得到的4種沉淀，加入15毫升0.05mol/ml磷酸緩沖液(pH＝7.0)。振蕩，直至沉淀全部溶解。
(5)利用陰離子交換色譜法分析4種樣品，色譜柱SynChropak AX300。
(6)比較待測樣品與真阿膠的各個色譜峰的紫外掃描圖譜。如圖2所示，曲線1為真阿膠的色譜圖，曲線2為其中一種待測膠的色譜圖。圖3為4種樣品的色譜圖中的第一個色譜峰的紫外掃描圖譜，因此，待測的三種膠均為假阿膠。
實施例二 陽離子交換分離—分析區(qū)別阿膠的真?zhèn)? 待鑒別樣品 2種膠2 所需儀器(1)離心機(2)高效液相色譜儀(3)檢測器二極管陣列檢測器3 樣品處理(1)分別取真阿膠和3種待鑒別膠(膠I，膠II，膠III)各2克，分別加入20毫升蒸餾水，在室溫下利用搖床振蕩4小時。
(2)將(1)得到的各溶液在10000r/m下離心5分鐘，分別4種膠的中間清液10毫升。
(3)向(2)得到的3種溶液中加入15毫升沉淀劑，靜置2小時，在12000r/m下離心10分鐘。
(4)收集(3)得到的4種沉淀，加入15毫升0.05mol/ml磷酸緩沖液(pH＝7.0)。振蕩，直至沉淀全部溶解。
(5)利用陽離子交換色譜法分析4種樣品，色譜柱SynChropak CM300。
(6)比較待測樣品與真阿膠的各個色譜峰的紫外掃描圖譜。如圖5所示，曲線1為真阿膠的色譜圖，曲線2為其中一種膠II的色譜圖。圖6為3種樣品的色譜圖中的第一個色譜峰的紫外掃描圖譜，因此，待測的兩種膠中膠I和膠III為假阿膠。膠II與真阿膠的圖譜相同，峰1的峰面積相等，且其它峰的紫外圖譜與真膠一致，因此，膠II為真阿膠。
權利要求
1.一種邊分離邊分析鑒別真?zhèn)误H皮阿膠的方法，其特征在于，該方法包括(1)取待測樣品，用適當的溶液溶解；(2)將(1)得到的溶液經離心后取中間的清液；(3)將(2)得到的清液中加入沉淀劑，離心后收集沉淀物；(4)利用適當的緩沖液將(3)得到的沉淀重新溶解；(5)將(4)得到的溶液進行邊分離邊分析或直接進行分析。
2.根據權利要求1所述的方法，膠溶液離心后收集的是中間的清液。
3.根據權利要求1的要求，向權利要求2的清液中加入的沉淀劑可以是三氯乙酸，丙酮，甲醇，硫酸銨等。
4.根據權利要求1所述的方法，沉淀重新溶解后，所得溶液的分離方法含離子交換色譜分離和凝膠過濾色譜分離等色譜分離技術和膜過濾(含超濾)等。
5.根據權利要求1所述的方法，權利要求4所說的分離方法的檢測方式含光譜掃描和質譜，包括紫外光譜掃描和紅外光譜掃描等。
6.根據權利要求1所述的方法，權利要求4分離的不同組分可以定量分析。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種真?zhèn)伟⒛z的鑒別方法，具體地，該方法將膠溶解后得到的溶液進行預處理，以去除人為加入的輔料以及不溶物，借助各種分離方法得到阿膠中不同種類的組分，同時結合其它分析方法比較各類組分的性質，以邊分離邊分析的方式得到各組分地分析結果，將該結果與真阿膠的分析結果相比以實現真?zhèn)伟⒛z的鑒別。該方法重復性好，準確性高。
文檔編號G01N30/86GK1548954SQ0313083
公開日2004年11月24日 申請日期2003年5月8日 優(yōu)先權日2003年5月8日
發(fā)明者蘇志國, 張貴鋒 申請人:中國科學院過程工程研究所