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用于華法林個體化用藥相關(guān)基因SNP檢測的試劑盒及其檢測方法與流程

文檔序號:12577763閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于華法林個體化用藥相關(guān)基因SNP檢測的試劑盒,其特征在于,包括2X qPCR混合反應液和檢測基因CYP2C9*2(430C>T)SNP位點的引物mix和檢測基因CYP2C9*3(c.1075A>C)SNP位點的引物mix和檢測基因VKORC1(-1639G/A)SNP位點的引物mix;所述的檢測基因CYP2C9*2(430C>T)SNP位點的引物mix含有檢測該SNP位點的兩條特異性正向引物及一條反向引物;所述的檢測基因CYP2C9*3(c.1075A>C)SNP位點的引物mix含有檢測該SNP位點的兩條特異性正向引物及一條反向引物;所述的檢測基因VKORC1(-1639G/A)SNP位點引物mix含有檢測該SNP位點的兩條特異性正向引物和一條特異性反向引物;所述檢測基因CYP2C9*2(430C>T)SNP位點的的兩條特異性正向引物及一條反向引物序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示;所述檢測基因CYP2C9*3(c.1075A>C)SNP位點的的兩條特異性正向引物及一條反向引物序列如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示;所述檢測基因VKORC1(-1639G/A)SNP位點的兩條特異性正向引物和一條特異性反向引物序列如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于華法林個體化用藥相關(guān)基因SNP檢測的試劑盒,其特征在于,所述的2X qPCR混合反應液中含PCR Buffer、MgCl2、dNTPs、Taq DNA聚合酶、兩條分別用FAM和HEX標記的通用熒光探針,所述FAM標記的通用熒光探針序列如SEQ ID NO.1所示,所述HEX標記的通用熒光探針序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如權(quán)利要求1所述的用于華法林個體化用藥相關(guān)基因SNP檢測的試劑盒的檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:提取待檢測樣本的基因組DNA,然后分成3個反應管(a、b、c)進行檢測,首先在每個反應管中分別加入2X qPCR混合反應液,然后在第一反應管(a)加入檢測基因CYP2C9*2(430C>T)SNP位點的引物mix;在第二反應管(b)加入檢測基因CYP2C9*3(c.1075A>C)SNP位點的引物mix;在第三反應管(c)加入檢測基因VKORC1(-1639G/A)SNP位點的引物mix,最后在3個反應管(a、b、c)中加入待檢測樣本的基因組DNA,進行核酸樣本的熒光定量PCR擴增,在37℃進行熒光信號的掃描,使用LightCycler 480Software release軟件中的Endpiont Genotyping模塊根據(jù)兩種熒光信號的強度及比值對基因型進行自動判別。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于華法林個體化用藥相關(guān)基因SNP檢測的試劑盒的檢測方法,其特征在于,所述PCR擴增程序如下:

預變性的條件為:溫度為94℃,時間為15秒;

PCR擴增由第一階段和第二階段構(gòu)成;

第一階段由10次擴增循環(huán)構(gòu)成,其條件為:

變性:溫度為94℃,時間為20秒;

退火+延伸:起始溫度為61℃,每一輪擴增循環(huán)溫度遞減0.5℃,直至擴增循環(huán)結(jié)束,時間為60秒;

第二階段由29輪循環(huán)構(gòu)成,其條件為:

變性:溫度為94℃,時間為20秒;

退火+延伸:溫度為55℃,時間為60秒;

信號掃描條件為:溫度為37℃,時間為60秒。

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