1.一種牛奶中抗生素檢測方法,包括以下步驟:
(1)使用滅菌緩沖液對試管、容量瓶進(jìn)行滅菌,再用蒸餾水進(jìn)行沖洗,烘干后經(jīng)115℃蒸氣滅菌20min備用;
(2)用經(jīng)過滅菌的試管量取待檢測試樣10ml進(jìn)行稀釋,稀釋分三步進(jìn)行,第一步取5ml待檢測試樣置于50ml容量瓶中加水稀釋,第二步從第一步所得試樣中量取5ml置于50ml容量瓶中加水稀釋,第三步從第二步所得試樣中量取5ml置于100ml容量瓶中加水稀釋,每次量取用刻度吸管,量取前用被量測溶液清洗吸管2~3次,吸取試樣溶液后,用濾紙將外壁多余的液體擦去,從起始刻度開始放液,保證量取試樣的純度和精確度;
(3)將步驟(1)中所得試樣置于恒溫槽中,控制恒溫槽溫度22℃,保持時間30min;
(4)將經(jīng)過消毒的不銹鋼中空管放置在含有敏感試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基中,量取步驟(2)所得試樣10ml注入不銹鋼中空管,試樣中的抗生素分子向瓊脂培養(yǎng)基呈球面放射狀擴(kuò)散;同時將瓊脂培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中,控制溫度20-23℃,濕度60%,瓊脂培養(yǎng)基中的試驗菌開始生長;抗生素分子在瓊脂培養(yǎng)基中的濃度,隨離開不銹鋼中空管的距離增大而降低,離不銹鋼中空管越遠(yuǎn),瓊脂培養(yǎng)基中抗生素分子越少,相應(yīng)的抗生素濃度越低;當(dāng)抗生素分子擴(kuò)散到一定時間,在不銹鋼中空管周圍形成一個能有效的抑制試驗菌生長的范圍,即抑菌圈,抑菌圈的大小隨抗生素溶液濃度的不同而不同;
(5)使用抑菌圈測量儀或者游標(biāo)卡尺測量抑菌圈大小,使用游標(biāo)卡尺測量時,眼睛視線與讀數(shù)刻度垂直,用游標(biāo)卡尺的尖端與抑菌圈直徑的切點成垂直方向測量;
(6)將步驟(4)所測得結(jié)果進(jìn)行比對,高劑量抗生素所形成的抑菌圈直徑在20~24mm,中劑量抗生素所形成的抑菌圈直徑在16~20mm,低劑量抗生素所形成的抑菌圈直徑在12~16mm;
(7)重復(fù)步驟(4)~(5)并對每次結(jié)果進(jìn)行記錄,以驗證檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。
2.如權(quán)利要求1所述的牛奶中抗生素檢測方法,其特征在于,所述步驟(1)中滅菌緩沖液由以下重量份的原料組成:
磷酸氫二鈉30-40份,磷酸二氫鈉20-25份,氯化鈉15-20份,氯化鉀10-20份,無水乙醇12-18份,二氯化鈣6-10份,二氯化鎂5-8份,三氯甲烷4-6份,氫氧化鈉7-9份。
3.如權(quán)利要求1所述的牛奶中抗生素檢測方法,其特征在于,所述步驟(1)中滅菌緩沖液PH值為7.4~7.6。
4.如權(quán)利要求1所述的牛奶中抗生素檢測方法,其特征在于,所述步驟(4)中試驗菌由短小芽孢桿菌,產(chǎn)氨短桿菌,凝結(jié)芽孢桿菌,雙歧桿菌一種或數(shù)種組成。
5.如權(quán)利要求1所述的牛奶中抗生素檢測方法,其特征在于,所述步驟(4)中瓊脂培養(yǎng)基由以下重量份的原料組成:
瓊脂100-125份、增菌液80-100份、酵母提取物10-20份、氨基酸20-25份、磷酸二氫鉀5-10份、蛋白胨20-30份、豬膽鹽15-20份、水解酪蛋白12-18份、硝酸鈉7-12份、酵母膏5-8份、葡萄糖10-12份、牛肉膏16-20份。
6.如權(quán)利要求1所述的牛奶中抗生素檢測方法,其特征在于,所述步驟(5)在測量抑菌圈大小先檢查抑菌圈是否完整,如有破圈或者不完整舍棄。