本發(fā)明涉及食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種牛奶中抗生素檢測方法。
背景技術(shù)：
牛奶中抗生素殘留問題在世界范圍內(nèi)一直沒有被徹底攻克,已成為行業(yè)發(fā)展以及食品安全的隱患之一?？股刂饕改芤种苹驓⑺榔渌⑸锏囊活惢瘜W物質(zhì),如青霉素、四環(huán)素、金霉素、鏈霉素、氯霉素、磺胺類藥物等。在醫(yī)學上,抗生素被廣泛的應(yīng)用于預防和治療多種微生物感染性疾病以及某些癌癥。在奶業(yè)的源頭中,抗生素使用頻率很高,特別是治療牛乳房炎,常常大劑量反復使用。據(jù)統(tǒng)計,約有十多種抗生素以一種或多種聯(lián)合的形式采用粉劑、涂擦劑、注射劑,以及乳導管注入等方式加以應(yīng)用,導致抗生素殘留相當嚴重,在奶牛飼料中,也含有抗生素添加劑。
目前,國內(nèi)外用于檢測奶及奶制品中抗生素殘留的方法很多,而為滿足奶及奶制品生產(chǎn)需要和遵守新法規(guī),人們對快速檢測開始感興趣,而現(xiàn)有檢測方法均存在耗時長，成本高，檢測不便等諸多缺陷。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明為解決上述問題，提供一種便捷快速，成本低廉的牛奶中抗生素檢測方法。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題采用以下的技術(shù)方案來實現(xiàn)：
一種牛奶中抗生素檢測方法，包括以下步驟：
(1)使用滅菌緩沖液對試管、容量瓶進行滅菌，再用蒸餾水進行沖洗，烘干后經(jīng)115℃蒸氣滅菌20min備用；
(2)用經(jīng)過滅菌的試管量取待檢測試樣10ml進行稀釋，稀釋分三步進行，第一步取5ml待檢測試樣置于50ml容量瓶中加水稀釋，第二步從第一步所得試樣中量取5ml置于50ml容量瓶中加水稀釋，第三步從第二步所得試樣中量取5ml置于100ml容量瓶中加水稀釋，每次量取用刻度吸管，量取前用被量測溶液清洗吸管2～3次，吸取試樣溶液后，用濾紙將外壁多余的液體擦去，從起始刻度開始放液，保證量取試樣的純度和精確度；
(3)將步驟(1)中所得試樣置于恒溫槽中，控制恒溫槽溫度22℃，保持時間30min，使試樣中的抗生素進行充分活化；
(4)將經(jīng)過消毒的不銹鋼中空管放置在含有敏感試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基中，量取步驟(2)所得試樣10ml注入不銹鋼中空管，試樣中的抗生素分子向瓊脂培養(yǎng)基呈球面放射狀擴散；同時將瓊脂培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中，控制溫度20-23℃，濕度60％，瓊脂培養(yǎng)基中的試驗菌開始生長；抗生素分子在瓊脂培養(yǎng)基中的濃度，隨離開不銹鋼中空管的距離增大而降低，離不銹鋼中空管越遠，瓊脂培養(yǎng)基中抗生素分子越少，相應(yīng)的抗生素濃度越低；當抗生素分子擴散到一定時間，在不銹鋼中空管周圍形成一個能有效的抑制試驗菌生長的范圍，即抑菌圈，抑菌圈的大小隨抗生素溶液濃度的不同而不同；
(5)使用抑菌圈測量儀或者游標卡尺測量抑菌圈大小，使用游標卡尺測量時，眼睛視線與讀數(shù)刻度垂直，用游標卡尺的尖端與抑菌圈直徑的切點成垂直方向測量；
(6)將步驟(4)所測得結(jié)果進行比對，高劑量抗生素所形成的抑菌圈直徑在20～24mm，中劑量抗生素所形成的抑菌圈直徑在16～20mm，低劑量抗生素所形成的抑菌圈直徑在12～16mm；
(7)重復步驟(4)～(5)并對每次結(jié)果進行記錄，以驗證檢測結(jié)果準確性。
所述步驟(1)中滅菌緩沖液由以下重量份的原料組成：
磷酸氫二鈉30-40份，磷酸二氫鈉20-25份，氯化鈉15-20份，氯化鉀10-20份，無水乙醇12-18份，二氯化鈣6-10份，二氯化鎂5-8份，三氯甲烷4-6份，氫氧化鈉7-9份。
所述滅菌緩沖液選擇常規(guī)化學試劑，價格便宜方便配制，與市場上普通滅菌液相比，殺菌效果更好，不會對容器內(nèi)壁造成二次污染，易于清理。
所述步驟(1)中滅菌緩沖液PH值為7.4～7.6。
所述步驟(4)中試驗菌由短小芽孢桿菌，產(chǎn)氨短桿菌，凝結(jié)芽孢桿菌，雙歧桿菌一種或數(shù)種組成。
所述步驟(4)中瓊脂培養(yǎng)基由以下重量份的原料組成：
瓊脂100-125份、增菌液80-100份、酵母提取物10-20份、氨基酸20-25份、磷酸二氫鉀5-10份、蛋白胨20-30份、豬膽鹽15-20份、水解酪蛋白12-18份、硝酸鈉7-12份、酵母膏5-8份、葡萄糖10-12份、牛肉膏16-20份。
所述瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)成分豐富且分布均勻，與試驗菌表面接觸充分，還能大量溶解微生物的代謝產(chǎn)物。
所述步驟(5)在測量抑菌圈大小先檢查抑菌圈是否完整，如有破圈或者不完整應(yīng)舍棄。
本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明能夠?qū)εＤ讨械母鞣N抗生素進行定性及定量檢測，樣品的前處理簡單，對檢測人員要求低，檢測結(jié)果重復性好，本方法使檢測人員無需接觸高溫、高毒物品，對人體健康安全有保障，同時檢測周期短，成本低廉。
具體實施方式
為了使本發(fā)明實現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明。
一種牛奶中抗生素檢測方法，包括以下步驟：
(1)使用滅菌緩沖液對試管、容量瓶進行滅菌，再用蒸餾水進行沖洗，烘干后經(jīng)115℃蒸氣滅菌20min備用；
(2)用經(jīng)過滅菌的試管量取待檢測試樣10ml進行稀釋，稀釋分三步進行，第一步取5ml待檢測試樣置于50ml容量瓶中加水稀釋，第二步從第一步所得試樣中量取5ml置于50ml容量瓶中加水稀釋，第三步從第二步所得試樣中量取5ml置于100ml容量瓶中加水稀釋，每次量取用刻度吸管，量取前用被量測溶液清洗吸管2～3次，吸取試樣溶液后，用濾紙將外壁多余的液體擦去，從起始刻度開始放液，保證量取試樣的純度和精確度；
(3)將步驟(1)中所得試樣置于恒溫槽中，控制恒溫槽溫度22℃，保持時間30min，使試樣中的抗生素進行充分活化；
(4)將經(jīng)過消毒的不銹鋼中空管放置在含有敏感試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基中，量取步驟(2)所得試樣10ml注入不銹鋼中空管，試樣中的抗生素分子向瓊脂培養(yǎng)基呈球面放射狀擴散；同時將瓊脂培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中，控制溫度20-23℃，濕度60％，瓊脂培養(yǎng)基中的試驗菌開始生長；抗生素分子在瓊脂培養(yǎng)基中的濃度，隨離開不銹鋼中空管的距離增大而降低，離不銹鋼中空管越遠，瓊脂培養(yǎng)基中抗生素分子越少，相應(yīng)的抗生素濃度越低；當抗生素分子擴散到一定時間，在不銹鋼中空管周圍形成一個能有效的抑制試驗菌生長的范圍，即抑菌圈，抑菌圈的大小隨抗生素溶液濃度的不同而不同；
(5)使用抑菌圈測量儀或者游標卡尺測量抑菌圈大小，使用游標卡尺測量時，眼睛視線與讀數(shù)刻度垂直，用游標卡尺的尖端與抑菌圈直徑的切點成垂直方向測量；
(6)將步驟(4)所測得結(jié)果進行比對，高劑量抗生素所形成的抑菌圈直徑在20～24mm，中劑量抗生素所形成的抑菌圈直徑在16～20mm，低劑量抗生素所形成的抑菌圈直徑在12～16mm；
(7)重復步驟(4)～(5)并對每次結(jié)果進行記錄，以驗證檢測結(jié)果準確性。
所述步驟(1)中滅菌緩沖液由以下重量份的原料組成：
磷酸氫二鈉30-40份，磷酸二氫鈉20-25份，氯化鈉15-20份，氯化鉀10-20份，無水乙醇12-18份，二氯化鈣6-10份，二氯化鎂5-8份，三氯甲烷4-6份，氫氧化鈉7-9份。
所述步驟(1)中滅菌緩沖液PH值為7.4～7.6。
所述步驟(4)中試驗菌由短小芽孢桿菌，產(chǎn)氨短桿菌，凝結(jié)芽孢桿菌，雙歧桿菌一種或數(shù)種組成。
所述步驟(4)中瓊脂培養(yǎng)基由以下重量份的原料組成：
瓊脂100-125份、增菌液80-100份、酵母提取物10-20份、氨基酸20-25份、磷酸二氫鉀5-10份、蛋白胨20-30份、豬膽鹽15-20份、水解酪蛋白12-18份、硝酸鈉7-12份、酵母膏5-8份、葡萄糖10-12份、牛肉膏16-20份。
所述步驟(5)在測量抑菌圈大小先檢查抑菌圈是否完整，如有破圈或者不完整應(yīng)舍棄。
以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的僅為本發(fā)明的優(yōu)選例，并不用來限制本發(fā)明，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。