本發(fā)明涉及體外診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是一種配置簡單、試劑有效期增長、開瓶穩(wěn)定性增大的用于尿酸檢測試劑的穩(wěn)定劑。
背景技術(shù)：
眾所周知，體外測定人血清或血漿中尿酸（UA）含量，是腎臟功能重要指標(biāo)之一。尿酸是人體內(nèi)嘌呤分解代謝的最終產(chǎn)物，由腎臟隨尿液排出體外。當(dāng)腎臟功能嚴(yán)重受損時，血中尿酸顯著升高；當(dāng)患有遺傳性黃嘌呤尿癥和剝脫性皮炎等時，尿酸減少。目前檢測尿酸多采用酶法測定，利用尿酸酶的作用，采用紫外分光法、氧電極法、偶聯(lián)過氧化物酶（POD）比色法、偶聯(lián)過氧化物酶（CAT）和醛脫氫酶（FADH）紫外吸收法進(jìn)行檢測；由于其高靈敏度，高準(zhǔn)確性、高精密性及適用性而在臨床上廣泛使用。但因為酶的活性會受到PH、溫度、化學(xué)試劑的干擾，從而導(dǎo)致尿酸檢測試劑存在穩(wěn)定性差的問題，影響臨床使用。
目前，有關(guān)尿酸試劑的穩(wěn)定性的資料比較少，專利CN200510111883提供了一種酶復(fù)核穩(wěn)定劑，對單獨(dú)的酶溶液具有良好的穩(wěn)定效果，但未提及對于某特定試劑是否也可起到類似的作用；專利CN201410398198.3中提到一種用于尿酸測定試劑盒的復(fù)核穩(wěn)定劑，包含明膠、海藻糖、丙二醇、聚氧乙烯月桂醚、Proclin300等，在加入穩(wěn)定劑后，開瓶穩(wěn)定性僅增加到40天，并且在雙試劑中加入同樣含量的穩(wěn)定劑對于試劑的穩(wěn)定性的效果不易把握，雙試劑操作比較復(fù)雜，也并未證明試劑加入穩(wěn)定劑后的具體效期。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種配置簡單、試劑有效期增長、開瓶穩(wěn)定性增大的用于尿酸檢測試劑的穩(wěn)定劑。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：
一種用于尿酸檢測試劑的穩(wěn)定劑，其特征在于該穩(wěn)定劑由MgSO4、甘油、海藻糖、PEG4000、二磷酸腺苷、α-酮戊二酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亞胺組成，各成分的重量份為：MgSO4 0.1～5g/L,甘油 1～5ml/L，海藻糖 0.1g/L～20 g/L，PEG 4000 0.1～10ml/L，二磷酸腺苷 0.1～5g/L，α-酮戊二酸 1～4g/L，聚乙烯吡咯烷酮 0.5～2g/L,聚乙烯亞胺 0.5～2.0g/L。
本發(fā)明中最優(yōu)化的成分比為：MgSO4 0.5 g/L，甘油 5 ml/L ，海藻糖 15 g/L, PEG4000 2 ml/L ,二磷酸腺苷2 g/L,α-酮戊二酸 2.0 g/L，聚乙烯吡咯烷酮1.5g/L,聚乙烯亞胺 0.5g/L。
本發(fā)明中的穩(wěn)定劑應(yīng)用于尿酸測定試劑中，所述的尿酸檢測試劑為單試劑，組分為尿酸酶 800U/L,過氧化物酶 500U/L，4-氨基安替比林 10mmol/L，DHBS 50mmol/L，亞鐵氰化鉀 10mmol/L，Good，s Buffer。
本發(fā)明中所述穩(wěn)定劑的使用量在尿酸測定試劑中的體積為5 ml/L。
本發(fā)明中的所述的穩(wěn)定劑的PH為5.5~8.0， 該P(yáng)H為最適PH，PH對于酶的活性有很大的影響，影響機(jī)制很復(fù)雜，主要有下列幾個方面：1.pH過?。ㄟ^酸）、過大（過堿）都能使酶蛋白變性而失活.2.pH的改變能影響酶活性中心上必須基團(tuán)的解離程度，同時也可以影響底物和輔酶的解離程度，從而影響酶分子對底物分子的結(jié)合和催化，只有在特定的pH下，酶、底物和輔酶的解離狀態(tài)，最適宜它們相互結(jié)合，并發(fā)生催化作用，從而使酶反應(yīng)速度達(dá)到最大值。這個pH稱為酶的最適PH（optimun pH）酶的最適pH不是一個常數(shù)，它的大小與底物的種類和濃度、緩沖液的性質(zhì)和濃度、介質(zhì)的離子濃度、溫度、反應(yīng)時間有關(guān)，在測定某種酶的活力時，采用該酶的最適pH，并用適當(dāng)?shù)木彌_液維持最適pH。
本發(fā)明由于穩(wěn)定劑由MgSO4、甘油、海藻糖、PEG4000、二磷酸腺苷、α-酮戊二酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亞胺組成，該穩(wěn)定劑置于組分為尿酸酶 800U/L,過氧化物酶 500U/L，4-氨基安替比林 10mmol/L，DHBS 50mmol/L，亞鐵氰化鉀 10mmol/L，Good，s Buffer的單試劑中，可以顯著延長尿酸測定試劑的有效期至2年，開瓶穩(wěn)定性達(dá)到3個月，且明顯降低空白吸光度值，采用單試劑操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好。
具體實施方式
一種用于尿酸檢測試劑的穩(wěn)定劑，其特征在于該穩(wěn)定劑由MgSO4、甘油、海藻糖、PEG4000、二磷酸腺苷、α-酮戊二酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亞胺組成，各成分的重量份為：MgSO4 0.1～5g/L,甘油 1～5ml/L，海藻糖 0.1g/L～20 g/L，PEG 4000 0.1～10ml/L，二磷酸腺苷 0.1～5g/L，α-酮戊二酸 1～4g/L，聚乙烯吡咯烷酮 0.5～2g/L,聚乙烯亞胺 0.5～2.0g/L，最優(yōu)化的成分比為：MgSO4 0.5 g/L，甘油 5 ml/L ，海藻糖 15 g/L, PEG4000 2 ml/L ,二磷酸腺苷2 g/L,α-酮戊二酸 2.0 g/L，聚乙烯吡咯烷酮1.5g/L,聚乙烯亞胺 0.5g/L，該穩(wěn)定劑應(yīng)用于尿酸測定試劑中，所述的尿酸檢測試劑為單試劑，組分為尿酸酶 800U/L,過氧化物酶 500U/L，4-氨基安替比林 10mmol/L，DHBS 50mmol/L，亞鐵氰化鉀 10mmol/L，Good，s Buffer，所述穩(wěn)定劑的使用量在尿酸測定試劑中的體積為5 ml/L，所述的穩(wěn)定劑的PH為5.5~8.0。
本發(fā)明試劑檢測尿酸的反應(yīng)原理為：
1） 尿酸在尿酸酶作用下，生成尿囊素和過氧化氫（H2O2），
2） 再利用Trinder反應(yīng)系統(tǒng)，過氧化氫在過氧化物酶（POD）催化下，與4-氨基安替比林（4-AAP）和3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉鹽（DHBS），生成紅紫色色素。
反應(yīng)液的顏色與尿酸濃度成正比。
本發(fā)明尿酸檢測試劑，適用于各類自動、半自動生化儀，以奧林巴斯AU400全自動生化儀為例，其操作如下：
分析方法：終點(diǎn)法，試劑的用量為300ul，樣本量為6ul，將樣本加入試劑后于37℃孵育5～10分鐘后讀取吸光度值A(chǔ)1，檢測波長主波長為520nm，副波長為660nm。
實驗采用奧林巴斯AU400全自動生化儀進(jìn)行，但本發(fā)明的試劑不限于上述儀器，還適用于其他半自動或全自動生化分析儀。
本實驗的目的是檢測試劑的空白吸光度值、開瓶穩(wěn)定性、長效穩(wěn)定性。
操作步驟：使用定標(biāo)液定標(biāo)，取三個水平的質(zhì)控各測定10次，取平均值，計算相對偏差。質(zhì)控采用朗道質(zhì)控（CAT.NO.HN1530 LOT.NO.949UN）,三個水平的靶值范圍分別為
結(jié)果分析：根據(jù)檢測數(shù)據(jù)，計算測定值均值、相對偏差。
表一結(jié)果顯示，本發(fā)明試劑空白本地明顯低于對比試劑，表明試劑的準(zhǔn)確度高，精密性好，測試誤差小，干擾因素少。
表二結(jié)果顯示，對比試劑僅在一個月內(nèi)表現(xiàn)出良好的測試結(jié)果，后期偏離靶值幅度較大，而本發(fā)明試劑在開瓶后3個月，對同一質(zhì)控測定10次，相對偏差均小于4%，表明試劑在開瓶后非常穩(wěn)定，準(zhǔn)確性良好，為測試人員提供了方便快捷的檢測試劑。
表三結(jié)果顯示，對比試劑僅在一年內(nèi)內(nèi)表現(xiàn)出良好的測試結(jié)果，后期偏離靶值幅度較大，而本發(fā)明試劑在規(guī)定的儲存條件下放置兩年后，試劑依然非常穩(wěn)定，相對偏差均小于4%，準(zhǔn)確性好。顯著延長了試劑的使用期限。
表1
表2
表三
本發(fā)明試劑中一定比例的MgSO4及聚乙烯亞胺起到了降低空白本底（空白本底就是未添加樣品時試劑中某些成份本身具有的吸光度值），其中聚乙烯亞胺通過保護(hù)4-氨基安替比林的氨基從而減少因4-氨基安替比林被氧化而產(chǎn)生的顏色反應(yīng)，達(dá)到降低空白本底的效果，MgSO4的硫酸根離子可以降低4-氨基安替比林被氧化的速度而減少因4-氨基安替比林被氧化而產(chǎn)生的顏色反應(yīng)，從而降低空白本底。
不含有MgSO4及聚乙烯亞胺與含有MgSO4及聚乙烯亞胺之間的對比試驗數(shù)據(jù)對比：
本發(fā)明試劑中一定比例的聚乙二醇（PEG4000）和聚乙烯吡咯烷酮起到了穩(wěn)定試劑的作用，聚乙二醇與尿酸酶結(jié)合，以分子氧為受體，催化尿酸酶氧化為尿囊素和過氧化氫，聚乙二醇化的尿酸酶在保留原有生物活性的同時，具有更長的半衰期，更好的溶解性和儲存穩(wěn)定性，酶作為生物催化劑，會受到各種因素的影響 ，將尿酸酶與聚乙二醇反應(yīng)結(jié)合，可提高其穩(wěn)定性，從而達(dá)到延長試劑有效期的效果。聚乙烯吡咯烷酮是一種非離子型高分子化合物，它的分子結(jié)構(gòu)類似于簡單的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，它具有很好的水溶性。通過延緩、緩釋酶的活性來控制酶失活的時間，從而延長試劑的有效期。
不含有聚乙二醇（PEG4000）和聚乙烯吡咯烷酮與含有聚乙二醇（PEG4000）和聚乙烯吡咯烷酮之間的對比試驗數(shù)據(jù)：
本發(fā)明由于穩(wěn)定劑由MgSO4、甘油、海藻糖、PEG4000、二磷酸腺苷、α-酮戊二酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亞胺組成，該穩(wěn)定劑置于組分為尿酸酶 800U/L,過氧化物酶 500U/L，4-氨基安替比林 10mmol/L，DHBS 50mmol/L，亞鐵氰化鉀 10mmol/L，Good，s Buffer的單試劑中，可以顯著延長尿酸測定試劑的有效期至2年，開瓶穩(wěn)定性達(dá)到3個月，且明顯降低空白吸光度值，采用單試劑操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的用于尿酸測定試劑的穩(wěn)定劑，可以顯著延長尿酸測定試劑的有效期至2年，開瓶穩(wěn)定性達(dá)到3個月，且明顯降低空白吸光度值，單試劑操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好。
現(xiàn)有單試劑中主要成分有過氧化物酶、4-氨基安替比林、尿酸酶、緩沖液等成份，空白本底偏高，穩(wěn)定性差，開瓶后僅穩(wěn)定一個月，試劑有效期僅為1年，本專利中的試劑除含有上述成份，還添加了MgSO4、PEG4000、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亞胺等成份，對于試劑的穩(wěn)定性及空白本底起到了很好的作用。