本發(fā)明涉及一種抗生素阿維拉霉素提純的方法，屬于生物醫(yī)藥、飼料添加劑領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

阿維拉霉素(Avilamycin)結(jié)構(gòu)特殊，一般由綠色產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomyces viridoehrongenes)發(fā)酵而成，屬于正糖霉素族的寡糖類抗生素，它主要抑制革蘭氏陽性菌，是一種新型的抗菌促生長劑和代謝調(diào)節(jié)劑。在畜禽業(yè)中，因其安全性高、不存在交叉耐藥性及良好穩(wěn)定的促生長效果，越來越受到人們的重視。阿維拉霉素是一種混合型低聚糖類抗生素，目前發(fā)現(xiàn)有A、B、C、D、F、G、H等多種結(jié)構(gòu)，其中最具活性的是阿維拉霉素A組分和B組分，其他成分活性很小，并且含量很低。

現(xiàn)有阿維拉霉素的生產(chǎn)技術(shù)被美國禮來一家公司壟斷，國內(nèi)在高單位的阿維拉霉素菌種選育及工藝研究上仍處于研發(fā)階段，提純研究也很少，技術(shù)很不成熟，市場上阿維拉霉素的純品幾乎沒有。CN103012519A通過結(jié)晶、硅膠柱層析、ODS柱洗脫分離、重結(jié)晶、等步驟獲得阿維拉霉素A和B純品,提純步驟復(fù)雜且需要兩次柱層析，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的問題是：克服現(xiàn)有技術(shù)中阿維拉霉素提純技術(shù)的不足之處，提出一種可行的阿維拉霉素提純方法。

為解決該技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：

提供一種阿維拉霉素提純的方法，包括以下步驟：

(1)將含有阿維拉霉素的菌絲體加入甲醇中，室溫下超聲，離心得上清液，重復(fù)上述步驟三次，合并上清夜即得浸提液，按浸提液∶水的體積比為1∶1-1∶2進(jìn)行補(bǔ)水結(jié)晶，離心，烘干得阿維拉霉素粗提物；

(2)阿維拉霉素粗提物用甲醇溶解，冰浴下按照甲醇鈉與阿維拉霉素粗提物質(zhì)量比為1∶6-1∶12分批添加甲醇鈉，攪拌30-45min，加入阿維拉霉素粗提物重量3-5倍的堿性氧化鋁，減壓濃縮得拌樣粗品；

(3)將拌樣粗品干法上樣堿性氧化鋁柱，用氯仿與甲醇體積比為96：4洗脫，分別收集阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的洗脫液，減壓濃縮得到阿維拉霉素A堿性粗品和阿維拉霉素B堿性粗品；

(4)將阿維拉霉素A堿性粗品和阿維拉霉素B堿性粗品分別用甲醇溶解，用1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)PH為6-8，按照阿維拉霉素A堿性粗品和阿維拉霉素B堿性粗品溶液∶水的體積比為1∶1-1∶2分別進(jìn)行加水重結(jié)晶，抽濾后結(jié)晶用純水漂洗，烘干后即獲得阿維拉霉素A和阿維拉霉素B純品。

本發(fā)明所得阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的純品的平均得率為42.5％以上，并且阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的純度在98.5％以上。

技術(shù)效果

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下特點：

本發(fā)明使用甲醇鈉和阿維拉霉素粗提物反應(yīng)，增大阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的極性的同時，阿維拉霉素A和阿維拉霉素B保持穩(wěn)定性，有利于進(jìn)一步提純；

本發(fā)明采用一次柱層析，兩次結(jié)晶的提純方法，大大簡化了提純步驟，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實施方式

實施例1：

將5g含量為20％阿維拉霉素的菌絲加入100mL甲醇中，室溫下超聲90min，離心得上清液，重復(fù)上述步驟三次，合并上清夜即得浸提液，按浸提液∶水的體積比為1∶1進(jìn)行補(bǔ)水結(jié)晶，離心，烘干得阿維拉霉素粗提物。

阿維拉霉素粗提物用甲醇溶解，冰浴下按照甲醇鈉與阿維拉霉素粗提物質(zhì)量比為1∶12分批添加甲醇鈉，攪拌30min，加入阿維拉霉素粗提物重量3倍的堿性氧化鋁，減壓濃縮得拌樣粗品；

將拌樣粗品干法上樣堿性氧化鋁柱，用氯仿與甲醇體積比為96：4洗脫，分別收集阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的洗脫液，減壓濃縮得到阿維拉霉素A和阿維拉霉素B堿性粗品；

將阿維拉霉素A和阿維拉霉素B堿性粗品分別用甲醇溶解，用1mol/LHCl溶液調(diào)節(jié)PH為7，按照阿維拉霉素A和阿維拉霉素B堿性粗品溶液∶水的體積比為1∶1分別進(jìn)行加水重結(jié)晶，抽濾后結(jié)晶用純水漂洗，烘干后即獲得阿維拉霉素A純品0.33g和阿維拉霉素B純品0.10g。