1.一種海洋石油污染降解用的微生物菌劑制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)制備種子液
a、制備培養(yǎng)基:在950ml去離子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g和氯化鈉10g,搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)溶解,用5mol/L的NaOH溶液調(diào)pH至7.0,再用去離子水定容至1L,在15psi高壓下蒸汽滅菌21min;
b、在步驟a的培養(yǎng)基中接種海洋修復(fù)類菌種,并放置在搖床上培養(yǎng)至吸光度大于1.0,鏡檢無(wú)雜菌制得種子液;
(2)制備菌液
a、一級(jí)發(fā)酵:在一級(jí)發(fā)酵罐中,將胰蛋白胨450g、酵母浸粉120g、氯化鈣1.4g、硫酸鎂14g、氯化鈉800g、硫酸亞鐵4g和硫酸氫二鉀100g加入到80L水中攪拌溶解后,調(diào)節(jié)pH至7.5,在121℃、1.5MPa條件下滅菌,降溫至30℃,將種子液在無(wú)菌條件下接種至一級(jí)發(fā)酵罐;
b、二級(jí)發(fā)酵:在二級(jí)發(fā)酵罐中,將胰蛋白胨4800g、酵母浸粉1300g、氯化鈣15g、硫酸鎂140g、氯化鈉8000g、硫酸亞鐵40g和硫酸氫二鉀1000g加入到800L水中攪拌溶解后,調(diào)節(jié)pH至7.5,在121℃、1.5MPa條件下滅菌,降溫至30℃;當(dāng)一級(jí)發(fā)酵罐中的的菌液吸光度大于1.0時(shí),將發(fā)酵液在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移至二級(jí)發(fā)酵罐中,無(wú)菌過濾通風(fēng)攪拌培養(yǎng),多點(diǎn)無(wú)菌取樣,監(jiān)測(cè)至吸光度大于1.1,雜菌率控制在10wt%以下,完成二級(jí)發(fā)酵;
c、三級(jí)發(fā)酵:在三級(jí)發(fā)酵罐中,將胰蛋白胨25kg、酵母浸粉7kg、氯化鈣80g、硫酸鎂750g、氯化鈉40kg、硫酸亞鐵210g和硫酸氫二鉀5kg加入到4000L水中攪拌溶解后,調(diào)節(jié)pH至7.5,在121℃、1.5MPa條件下滅菌,降溫至30℃,將二級(jí)發(fā)酵罐中的發(fā)酵液轉(zhuǎn)移至三級(jí)發(fā)酵罐,無(wú)菌過濾通風(fēng)攪拌培養(yǎng),多點(diǎn)無(wú)菌取樣,監(jiān)測(cè)至吸光度大于1.2,雜菌率控制在20wt%以下,完成三級(jí)發(fā)酵;
d、保存:將完成三級(jí)發(fā)酵的發(fā)酵菌液在4℃條件下冷藏儲(chǔ)存在菌液上料罐中;
(3)吸附:將菌液上料罐中的菌液與沸石上料罐中的沸石按照重量比2:1加入攪拌罐Ⅰ中,進(jìn)行旋轉(zhuǎn)攪拌,混合吸附20min;
(4)控液:將步驟(3)吸附菌劑后的沸石輸送到脫水篩上,通過振動(dòng)將液體濾除,控液6min;
(5)包裹:將步驟(4)混合控液脫水后的產(chǎn)品與聚谷氨酸溶液罐中濃度7wt%的聚谷氨酸溶液同時(shí)加入攪拌罐Ⅱ中進(jìn)行攪拌、混合、包裹10min;
(6)保存:將步驟(5)包裹后的菌劑裝入噸袋中保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟(1)中所述的海洋修復(fù)類菌種為芽孢桿菌或海單胞菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟(6)噸袋中的菌劑重量為1±0.1噸,有效活菌數(shù)≥1億/克。