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一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法與流程

文檔序號:11783030閱讀:910來源:國知局

本發(fā)明涉及一種腐植酸飼料及其制備方法,特別涉及一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法。



背景技術:

腐植酸(Humic Acid,HA)是動植物的遺骸,主要是植物的遺骸,經過微生物的分解和轉化,以及地球化學的一系列過程,先分解為比較簡單的有機化合物,然后再經過縮合作用最終形成的一種無定型高分子化合物。主要由核、橋鍵與活性基團組成。腐植酸中含有多種活性官能團,可激活多種酶類,如多酚氧化酶、過氧化物酶、抗壞血酸酶,還能促進細胞吸收及代謝,增強動物的免疫功能,提高抗病力。刺激胃壁黏膜,增加胃液分泌,從而增加食欲;能興奮副交感神經,促進腸管蠕動,增加腺體分泌,促進消化吸收,增加有機物積累;激活己糖激酶,促進葡萄糖的吸收利用;促進消化酶的活力,有效地分解營養(yǎng)物質,游離出芳香烴從而提高飼料的適口性,從而增加食欲,改善飼料報酬。目前市場動物腐植酸均為腐植酸鈉單一產品,且腐植酸鈉產品質量良莠不齊,有干法、濕法、干濕混合等多種生產方法,大部分廠家生產設備簡陋、衛(wèi)生條件差,使最終產品有效成分含量不均一,重金屬、雜質含量偏高,長期飼喂動物,導致腐植酸鈉效果不穩(wěn)定,甚至會給動物帶來副作用。



技術實現要素:

為了解決上述問題,本發(fā)明公開了一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法。本發(fā)明利用“合生發(fā)酵理論”,依據腐植酸是微生物長期酵解植物或動物遺骸的產物,將自然發(fā)酵工藝在發(fā)酵罐中快速、優(yōu)化進行,腐植酸經微生物發(fā)酵轉化后,分子量變小,甲基含量降低,而羰基、羧基、羥基等活性官能團數量增加,可激活體內多種酶如多酚氧化酶、過氧化物酶、抗壞血酸酶,還能促進細胞吸收及代謝,增強動物的免疫功能,提高抗病力。尤其是增加了抗腹瀉能力。所用菌株經腐植酸誘導后,菌株活力增強,繁殖更快,抗逆性強,定值速度加快。

一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法,其制備方法為:

步驟一:將按重量分計的腐植酸發(fā)酵原料60-100份通過60目篩子,豆粕粉6-10份,玉米粉6-10份,葡萄糖2-6份,無機鹽0-0.3份,水120-180份按常規(guī)方法制備成培養(yǎng)基;

步驟二:然后用蒸汽對培養(yǎng)基進行滅菌,100-135℃滅菌15-30分鐘,之后對培養(yǎng)基進行冷卻到28℃-35℃培養(yǎng)溫度;將微生物混合發(fā)酵液接種到培養(yǎng)基上,接種比例為0.9-1.2∶0.05-0.2,先進行好氧發(fā)酵,發(fā)酵條件為攪拌速度160-200r/min,開始通氣比調至1∶0.4-0.7,培養(yǎng)期間灌壓要保持在0.03-0.06pa,隨著菌體的不斷生長溶氧值也逐漸發(fā)生變化,因此需要調通氣比和攪拌速度使溶氧相對值20%-40%,發(fā)酵時間36-48小時,發(fā)酵溫度32-35℃;然后進行厭氧發(fā)酵,發(fā)酵條件為靜置發(fā)酵,發(fā)酵時間48-60小時,發(fā)酵溫度32℃-35℃,每六小時攪拌1分鐘;厭氧發(fā)酵結束得到降解的腐植酸發(fā)酵液,經干燥制得腐植酸基微生態(tài)產品。

所述腐植酸原料為腐植酸鈉、風化煤、褐煤、泥炭中的一種或多種。

所述的無機鹽為磷酸二氫鉀、硫酸亞鐵、硫酸銅、硫酸鎂、硫酸鋅、硫酸錳、氯化鈣中的一種或多種的復配。

所述微生物混合發(fā)酵液由枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、地衣芽孢桿菌發(fā)酵液、植物乳桿菌發(fā)酵液、嗜酸乳桿菌按重量比35-45%∶35-45%∶8-12%∶8-12%的比例混合而成。

所述的微生物混合發(fā)酵液,其生產工藝如下:

A:枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的生產:

1)固體培養(yǎng)基為:葡萄糖1-3%、蛋白胨1-3%、酵母膏0.3-0.6%、瓊脂1-4%,蒸餾水90%-97%,調節(jié)培養(yǎng)基pH為6.5-7.0、110-120℃滅菌16-20分鐘;培養(yǎng)條件:放入25-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22-26h;

2)將上述所得物質進行搖瓶培養(yǎng),培養(yǎng)基為:葡萄糖1-3%、蛋白胨0.5-2%、酵母膏0.3-0.8%,水94-99%,調節(jié)搖瓶培養(yǎng)基pH為6.5-7.0、110-120℃滅菌16-20分鐘;培養(yǎng)條件:在上述所得菌種中挑選生長健壯的菌落接入搖瓶,放入25-35℃恒溫搖床中,180-230r/min振蕩培養(yǎng)22-26h;

3)將上述所得物質進行種子罐、發(fā)酵罐擴繁:培養(yǎng)基為:豆粕0.5-1.3%、玉米0.2-0.8%、蔗糖1-3%、蛋白胨0.5-1.2%、酵母膏0.3-0.8%、磷酸二氫鉀0.05-0.8%、硫酸銨0.1-0.3%、氯化鈉0.02-0.05%、消泡劑0.02-0.07%,水90-98%,培養(yǎng)基起始pH=7.0-7.5、115-130℃滅菌20-40分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶到種子罐接種量及種子罐到發(fā)酵罐按3-7%接種,種子罐培養(yǎng)時間為22-26h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為30-40h;

B:地衣芽孢桿菌發(fā)酵液的生產:

1)固體培養(yǎng)基為:蛋白胨8-12%,牛肉膏1-5%,NaCl 3-7%,瓊脂12-18%,蒸餾水58%-76%,調節(jié)培養(yǎng)基pH7.0-7.5,105-125℃滅菌15-20分鐘;培養(yǎng)條件:放入30-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22-24h;

2)將上述所得物質進行搖瓶種子培養(yǎng):培養(yǎng)基為蛋白胨8-12%,牛肉膏1-5%,NaCl 3-7%,瓊脂12-18%,蒸餾水58%-76%,調節(jié)培養(yǎng)基pH7.0-7.5,105-125℃滅菌15-20分鐘;培養(yǎng)條件:放入30-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22-24h;培養(yǎng)條件:將上述所得菌種接入搖瓶,放入30-35℃恒溫搖床中,180-220r/min振蕩培養(yǎng)22-26h;

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng):培養(yǎng)基為:豆粕2-7%、糖蜜0.5-1.5%、蛋白胨0.3-0.8%、酵母膏0.1-0.5%、磷酸二氫鉀0.05-0.2%、硫酸銨0.05-0.5%、氯化鈉0-0.08%、豆油0.05-0.25%、消泡劑0-0.1%,水89-97%,調節(jié)培養(yǎng)基pH=6.5-7.5、115-125℃滅菌25-35分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶到種子罐及種子罐到發(fā)酵罐接種量按3-7%接種,種子罐培養(yǎng)時間為22-26h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為32-40h;

C:植物乳桿菌發(fā)酵液的生產:

1)固體培養(yǎng)基為:葡萄糖0.5-1.5%、蛋白胨0.5-1.5%、酵母膏0.1-0.8%、牛肉膏0.1-0.8%、磷酸二氫鉀0.05-0.15%、瓊脂1-3%,水93%-98%,調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.5-7.0、110-120℃滅菌15-25分鐘;培養(yǎng)條件:放入30-35℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)22-24h;

2)搖瓶種子培養(yǎng):培養(yǎng)基為:葡萄糖0.5-1.5%、蛋白胨0.5-1.5%、酵母膏0.1-0.8%、牛肉膏0.1-0.8%、磷酸二氫鉀0.05-0.15%,瓊脂1-3%,水93%-98%,調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.5-7.0、110-120℃滅菌15-25分鐘;培養(yǎng)條件:將上述所得菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)22-26h;

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng):培養(yǎng)基為:豆粕0.5-1.5%、玉米0.2-0.7%、蔗糖0.5-1.5%、蛋白胨1-2%、酵母膏0.2-0.7%、磷酸二氫鉀0.1-0.5%、硫酸銨0.1-0.5%、乙酸鈉0.3-0.8%、檸檬酸三鈉0.1-0.5%、吐溫80 0.05-0.2%、硫酸鎂0.01-0.05%、豆油0.1-0.3%、消泡劑0.03-0.07%,水93%-97%,起始pH=6.5-7.0、110-125℃滅菌25-40分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶到種子罐及種子罐到發(fā)酵罐接種量按3-7%接種,種子罐培養(yǎng)時間為22-24h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為30-40h;

D.嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的生產:

1)斜面培養(yǎng)基為:葡萄糖0.5-1.5%、蛋白胨0.5-1.5%、酵母膏0.2-0.8%、牛肉膏0.2-0.8%、磷酸二氫鉀0.05-0.2%、瓊脂0.5-4%,水92-99%調節(jié)培養(yǎng)基pH=6.5-7.0、110-125℃滅菌15-20分鐘;培養(yǎng)條件:將試管菌種擴繁至培養(yǎng)皿,放入30-40℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)22-26h;

2)搖瓶種子培養(yǎng):培養(yǎng)基為:葡萄糖0.5-1.5%、蛋白胨0.5-1.5%、酵母膏0.2-0.8%、牛肉膏0.2-0.8%、磷酸二氫鉀0.05-0.2%,水96-99%調節(jié)培養(yǎng)基pH=6.8、110-125℃滅菌15-20分鐘;培養(yǎng)條件:將培養(yǎng)皿菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)22-26h;

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng):培養(yǎng)基為:豆粕0.5-1.5%、玉米0.3-0.8%、蔗糖0.5-1.5%、蛋白胨1-3%、酵母膏0.2-1%、磷酸二氫鉀0.05-0.3%、硫酸銨0.1-0.3%、乙酸鈉0.3-0.8%、檸檬酸三鈉0.05-0.3%、吐溫800.4-1%、硫酸鎂0-0.05%、豆油0.05-0.1%、消泡劑0.01-0.08%,水90%-97%,調節(jié)培養(yǎng)基pH=6.5-7.0、110-130℃滅菌25-40分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶到種子罐及種子罐到發(fā)酵罐接種量按3-8%接種,種子罐培養(yǎng)時間為22-26h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為30-40h。

本發(fā)明一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法具有如下優(yōu)點:

(1)本發(fā)明基于合生發(fā)酵原理,篩選出對腐植酸有很好降解能力的復合菌,腐植酸經微生物降解后,分子量變小,生理活性提高,更易被動物利用;而微生物經腐植酸誘導后,抗逆性增強,胞外酶產量增加,如淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶、半纖維素酶等,分泌許多小肽、胞外多糖,這些物質對病原菌、有抑制和殺傷的作用,還分泌一些促生長因子,能有效提高動物生產性能;

(2)本發(fā)明可以直接降解風化煤、泥炭等含腐植酸較高的低階煤中的腐植酸,提高低值礦源的高效利用率;

(3)本發(fā)明生產出的腐植酸基微生態(tài)可廣泛用于畜禽水產各類飼料,對改善動物腸道健康,提高動物采食量,控制動物腹瀉有益處;

(4)使用本產品可以降低飼料中氧化鋅和抗生素的使用量,對提高畜產品安全、減少動物糞便中鋅和抗生素的排放,保護生態(tài)環(huán)境等方面有良好效益。

下面通過實施例,對本發(fā)明的技術方案做進一步的詳細描述。

具體實施方式:

實施例1:

一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法,制備方法為:

步驟一:將按重量分計的腐植酸鈉、風化煤、褐煤、泥炭80份通過60目篩子,豆粕粉8份,玉米粉8份,葡萄糖4份,磷酸二氫鉀、硫酸亞鐵、硫酸銅、氯化鈣混合后的無機鹽0.2份,水150份按常規(guī)方法制備成培養(yǎng)基;

步驟二:然后用蒸汽對培養(yǎng)基進行滅菌,120℃滅菌18分鐘,之后對培養(yǎng)基進行冷卻到32℃培養(yǎng)溫度;將微生物混合發(fā)酵液接種到培養(yǎng)基上,接種比例為1∶0.1,先進行好氧發(fā)酵,發(fā)酵條件為攪拌速度180r/min,開始通氣比調至1∶0.5,培養(yǎng)期間灌壓要保持在0.05pa,隨著菌體的不斷生長溶氧值也逐漸發(fā)生變化,因此需要調通氣比和攪拌速度使溶氧相對值30%,發(fā)酵時間45小時,發(fā)酵溫度33℃;然后進行厭氧發(fā)酵,發(fā)酵條件為靜置發(fā)酵,發(fā)酵時間50小時,發(fā)酵溫度33℃,每六小時攪拌1分鐘;厭氧發(fā)酵結束得到降解的腐植酸發(fā)酵液,經干燥制得腐植酸基微生態(tài)產品。

所述的微生物混合發(fā)酵液,其生產工藝如下:

A:枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的生產:

1)固體培養(yǎng)基為:葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母膏0.5%、瓊脂3%,蒸餾水92.5%,調節(jié)培養(yǎng)基pH為6.8、115℃滅菌18分鐘;培養(yǎng)條件:放入33℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h;

2)將上述所得物質進行搖瓶培養(yǎng),培養(yǎng)基為:葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%,水96.5%,調節(jié)搖瓶培養(yǎng)基pH為6.8、溫度在115℃滅菌18分鐘;培養(yǎng)條件:在上述所得菌種中挑選生長健壯的菌落接入搖瓶,放入25-35℃恒溫搖床中,180-230r/min振蕩培養(yǎng)22-26h;

3)將上述所得物質進行種子罐、發(fā)酵罐擴繁:培養(yǎng)基為:豆粕0.8%、玉米0.5%、蔗糖2%、蛋白胨0.8%、酵母膏0.5%、磷酸二氫鉀0.3%、硫酸銨0.2%、氯化鈉0.05%、消泡劑0.05%,水94.8%,培養(yǎng)基起始pH=7.2、120℃滅菌30分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶培養(yǎng)所得到種子罐接種量按5%接種,種子罐培養(yǎng)時間為24h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為35h;

B:地衣芽孢桿菌發(fā)酵液的生產:

1)固體培養(yǎng)基為:蛋白胨10%,牛肉膏3%,NaCl5%,瓊脂15%,蒸餾水67%,調節(jié)培養(yǎng)基pH7.2,115℃滅菌18分鐘;培養(yǎng)條件:放入32℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23h;

2)將上述所得物質進行搖瓶種子培養(yǎng):培養(yǎng)基為蛋白胨10%,牛肉膏3%,NaCl5%,瓊脂15%,蒸餾水67%,調節(jié)培養(yǎng)基pH7.2,115℃滅菌18分鐘;培養(yǎng)條件:放入32℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23h;培養(yǎng)條件:將上述所得菌種接入搖瓶,放入32℃恒溫搖床中,200r/min振蕩培養(yǎng)23h;

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng):培養(yǎng)基為:豆粕5%、糖蜜5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.3%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸銨0.2%、氯化鈉0.05%、豆油0.1%、消泡劑0.1%,水88.65%,調節(jié)培養(yǎng)基pH=7.0、120℃滅菌30分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶到種子罐接種量按5%接種,種子罐培養(yǎng)時間為24h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為35h

C:植物乳桿菌發(fā)酵液的生產:

1)固體培養(yǎng)基為:葡萄糖1%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、牛肉膏0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、瓊脂2%,水94.9%調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.8、115℃滅菌18分鐘;培養(yǎng)條件:放入32℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)24h;

2)搖瓶種子培養(yǎng):葡萄糖1%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、牛肉膏0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、瓊脂2%,水94.9%調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.8、115℃滅菌18分鐘;培養(yǎng)條件:將上述所得菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)24h;

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng):培養(yǎng)基為:豆粕1%、玉米0.5%、蔗糖0.1%、蛋白胨1.5%、酵母膏0.5%、磷酸二氫鉀0.3%、硫酸銨0.3%、乙酸鈉0.5%、檸檬酸三鈉0.3%、吐溫800.1%、硫酸鎂0.03%、豆油0.2%、消泡劑0.05%,水93.65%,起始pH=6.8、115℃滅菌30分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶到種子罐接種量按5%接種,種子罐培養(yǎng)時間為24h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為35h;

D.嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的生產:

1)斜面培養(yǎng)基為:1)固體培養(yǎng)基為:葡萄糖1%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、牛肉膏0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、瓊脂2%,水94.9%調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.8、115℃滅菌18分鐘;培養(yǎng)條件:將試管菌種擴繁至培養(yǎng)皿,放入32℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)24h;

2)搖瓶種子培養(yǎng):培養(yǎng)基為葡萄糖1%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、牛肉膏0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、水96.9%調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.8、115℃滅菌18分鐘;培養(yǎng)條件:將培養(yǎng)皿菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)24h;

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng):培養(yǎng)基為:豆粕1%、玉米0.5%、蔗糖1%、蛋白胨2%、酵母膏0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸銨0.2%、乙酸鈉0.5%、檸檬酸三鈉0.1%、吐溫800.8%、硫酸鎂0.02%、豆油0.08%、消泡劑0.05%,水93.2%,調節(jié)培養(yǎng)基pH=6.8、120℃滅菌35分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶到種子罐接種量按5%接種,種子罐培養(yǎng)時間為24h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為35h。

將A-D所得發(fā)酵液即枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、地衣芽孢桿菌發(fā)酵液、植物乳桿菌發(fā)酵液、嗜酸乳桿菌按重量比40%∶40%∶10%∶10%的比例混合即得微生物混合發(fā)酵液。

實施例2:一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法,制備方法為:

步驟一:將按重量分計的腐植酸發(fā)酵原料腐植酸鈉、褐煤70份通過60目篩子,豆粕粉6份,玉米粉6份,葡萄糖6份,由硫酸亞鐵、硫酸鎂、硫酸鋅、氯化鈣組成的無機鹽0.1份,水150份按常規(guī)方法制備成培養(yǎng)基;

步驟二:然后用蒸汽對培養(yǎng)基進行滅菌,110℃滅菌25分鐘,之后對培養(yǎng)基進行冷卻到30℃培養(yǎng)溫度;將微生物混合發(fā)酵液接種到培養(yǎng)基上,接種比例為1∶0.15,先進行好氧發(fā)酵,發(fā)酵條件為攪拌速度170r/min,開始通氣比調至1∶0.6,培養(yǎng)期間灌壓要保持在0.04pa,隨著菌體的不斷生長溶氧值也逐漸發(fā)生變化,因此需要調通氣比和攪拌速度使溶氧相對值25%,發(fā)酵時間40小時,發(fā)酵溫度35℃;然后進行厭氧發(fā)酵,發(fā)酵條件為靜置發(fā)酵,發(fā)酵時間55小時,發(fā)酵溫度35℃,每六小時攪拌1分鐘;厭氧發(fā)酵結束得到降解的腐植酸發(fā)酵液,經干燥制得腐植酸基微生態(tài)產品。

所述的微生物混合發(fā)酵液,其生產工藝如下:

A:枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的生產:

1)固體培養(yǎng)基為:葡萄糖3%、蛋白胨3%、酵母膏0.3%、瓊脂2%,蒸餾水91.2%,調節(jié)培養(yǎng)基pH為7.0、110℃滅菌20分鐘;培養(yǎng)條件:放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)25h;

2)將上述所得物質進行搖瓶培養(yǎng),培養(yǎng)基為:葡萄糖3%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%,水95.5%,調節(jié)搖瓶培養(yǎng)基pH為7.0、110℃滅菌20分鐘;培養(yǎng)條件:在上述所得菌種中挑選生長健壯的菌落接入搖瓶,放入30℃恒溫搖床中,200r/min振蕩培養(yǎng)25h;

3)將上述所得物質進行種子罐、發(fā)酵罐擴繁:培養(yǎng)基為:豆粕0.9%、玉米0.7%、蔗糖3%、蛋白胨1%、酵母膏0.6%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸銨0.2%、氯化鈉0.04%、消泡劑0.06%,水93.3%,培養(yǎng)基起始pH=7.0、125℃滅菌38分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶培養(yǎng)所得到種子罐接種量按6%接種,種子罐培養(yǎng)時間為26h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為35h;

B:地衣芽孢桿菌發(fā)酵液的生產:

1)固體培養(yǎng)基為:蛋白胨10%,牛肉膏4%,NaCl3%,瓊脂13%,蒸餾水70%,調節(jié)培養(yǎng)基pH7.1,115℃滅菌20分鐘;培養(yǎng)條件:放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h;

2)將上述所得物質進行搖瓶種子培養(yǎng):培養(yǎng)基為蛋白胨9%,牛肉膏3%,NaCl 7%,瓊脂12%,蒸餾水69%,調節(jié)培養(yǎng)基pH7.1,125℃滅菌16分鐘;培養(yǎng)條件:放入34℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23h;培養(yǎng)條件:將上述所得菌種接入搖瓶,放入34℃恒溫搖床中,180r/min振蕩培養(yǎng)23h;

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng):培養(yǎng)基為:豆粕5%、糖蜜1.5%、蛋白胨0.8%、酵母膏0.4%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸銨0.3%、氯化鈉0.01%、豆油0.25%、消泡劑0.1%,水91.44%,調節(jié)培養(yǎng)基pH=7.1、120℃滅菌30分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶到種子罐接種量按6%接種,種子罐培養(yǎng)時間為25h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為32h;

C:植物乳桿菌發(fā)酵液的生產:

1)固體培養(yǎng)基為:葡萄糖1.5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.3%、牛肉膏0.2%、磷酸二氫鉀0.05%、瓊脂1%,水96.45%,調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.5、113℃滅菌22分鐘;培養(yǎng)條件:放入31℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)23h;

2)搖瓶種子培養(yǎng):培養(yǎng)基為:葡萄糖1.5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.3%、牛肉膏0.2%、磷酸二氫鉀0.05%、瓊脂1%,水96.45%,調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.5、113℃滅菌22分鐘;培養(yǎng)條件:將上述所得菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)23h;

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng):培養(yǎng)基為:豆粕0.5%、玉米0.2%、蔗糖0.8%、蛋白胨1.5%、酵母膏0.6%、磷酸二氫鉀0.4%、硫酸銨0.4%、乙酸鈉0.6%、檸檬酸三鈉0.1%、吐溫800.2%、硫酸鎂0.05%、豆油0.2%、消泡劑0.05%,水94.4,起始pH=6.7、122℃滅菌33分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶到種子罐接種量按3%接種,種子罐培養(yǎng)時間為24h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為40h

D.嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的生產:

1)斜面培養(yǎng)基為:葡萄糖1.5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.3%、牛肉膏0.2%、磷酸二氫鉀0.05%、瓊脂1%,水96.45%,調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.5、113℃滅菌22分鐘;培養(yǎng)條件:將試管菌種擴繁至培養(yǎng)皿,放入35℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)25h;

2)搖瓶種子培養(yǎng):培養(yǎng)基為:葡萄糖0.5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.3%、牛肉膏0.2%、磷酸二氫鉀0.05,水98.45%調節(jié)培養(yǎng)基pH=6.8、120℃滅菌17分鐘;培養(yǎng)條件:將培養(yǎng)皿菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)23h;

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng):培養(yǎng)基為:豆粕0.7%、玉米0.3%、蔗糖1.4%、蛋白胨3%、酵母膏0.6%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸銨0.3%、乙酸鈉0.4%、檸檬酸三鈉0.1%、吐溫801%、硫酸鎂0.05%、豆油0.05%、消泡劑0.05%,水91.85%,調節(jié)培養(yǎng)基pH=6.7、128℃滅菌26分鐘;培養(yǎng)條件:搖瓶到種子罐接種量按7%接種,種子罐培養(yǎng)時間為23h,發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為34h。

將上述A-D制得的發(fā)酵液即枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、地衣芽孢桿菌發(fā)酵液、植物乳桿菌發(fā)酵液、嗜酸乳桿菌按重量比38%∶38%∶12%∶12%的比例混合即得微生物混合發(fā)酵液。

下面通過具體的試驗來說明本發(fā)明的顯著功效。

實施例1:

客戶名稱:某知名教保料企業(yè)

試驗時間:2015年7月11日至2015年7月25日

試驗動物:選用(21±2)日齡五元雜交配套系斷奶仔豬240頭,每個欄20頭豬,共12欄,其中6欄試驗組,6欄對照組。

試驗方法:對照組為:基礎料+2.8kg/t氧化鋅;試驗組為:基礎料+1.8kg/t氧化鋅+1kg/t本發(fā)明產品。目的是在斷奶后2周內減少氧化鋅的使用,還能有效的抗腹瀉

試驗結果:試驗組仔豬無腹瀉,對照組有腹瀉,腹瀉率平均是7%。;試驗組皮毛比對照組皮毛提高2度(包括皮膚紅潤程度,毛的長短和亮度);試驗組采食量比對照組多12克,增重比對照組增18克。

結果表明在乳仔豬飼料中添加本發(fā)明產品,可以等量取代氧化鋅,對腹瀉有很好的預防效果,并能改善自住皮毛,提高采食量。

實施例2:

客戶名稱:某知名飼料集團

試驗時間:2016年2月21日至2016年3月2日

試驗動物:保育豬,選擇180頭保育豬,分成試驗組和對照組

試驗方法:試驗組用1公斤/噸本發(fā)明產品,替代對照組中200克/噸進口抗敵素,其他不變。目的是在尋找抗敵素的有效替代品,同時能在保育料中預防腹瀉。

試驗結果:同時試驗的還有其他廠家的微生態(tài)制劑和抗菌肽,使用本發(fā)明產品組無腹瀉,其他試驗組腹瀉率為5-9%。料比在所有組中本發(fā)明產品的最好。在乳仔豬飼料中添加本發(fā)明產品,按每噸1-1.5千克,可以完全取代硫酸粘桿菌素,抗腹瀉效果顯著。

以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案而非限制,在本發(fā)明基礎上,本領域技術人員比較容易在不脫離本發(fā)明技術方案的精神和范圍內做一些修改或者等同替換。因此,在不偏離本發(fā)明精神的基礎上所做的這些修改或改進,均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。

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