本發(fā)明涉及一種腐植酸飼料及其制備方法，特別涉及一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法。

背景技術：

腐植酸(Humic Acid，HA)是動植物的遺骸，主要是植物的遺骸，經過微生物的分解和轉化，以及地球化學的一系列過程，先分解為比較簡單的有機化合物，然后再經過縮合作用最終形成的一種無定型高分子化合物。主要由核、橋鍵與活性基團組成。腐植酸中含有多種活性官能團，可激活多種酶類，如多酚氧化酶、過氧化物酶、抗壞血酸酶，還能促進細胞吸收及代謝，增強動物的免疫功能，提高抗病力。刺激胃壁黏膜，增加胃液分泌，從而增加食欲；能興奮副交感神經，促進腸管蠕動，增加腺體分泌，促進消化吸收，增加有機物積累；激活己糖激酶，促進葡萄糖的吸收利用；促進消化酶的活力，有效地分解營養(yǎng)物質，游離出芳香烴從而提高飼料的適口性，從而增加食欲，改善飼料報酬。目前市場動物腐植酸均為腐植酸鈉單一產品，且腐植酸鈉產品質量良莠不齊，有干法、濕法、干濕混合等多種生產方法，大部分廠家生產設備簡陋、衛(wèi)生條件差，使最終產品有效成分含量不均一，重金屬、雜質含量偏高，長期飼喂動物，導致腐植酸鈉效果不穩(wěn)定，甚至會給動物帶來副作用。

技術實現要素：

為了解決上述問題，本發(fā)明公開了一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法。本發(fā)明利用“合生發(fā)酵理論”，依據腐植酸是微生物長期酵解植物或動物遺骸的產物，將自然發(fā)酵工藝在發(fā)酵罐中快速、優(yōu)化進行，腐植酸經微生物發(fā)酵轉化后，分子量變小，甲基含量降低，而羰基、羧基、羥基等活性官能團數量增加，可激活體內多種酶如多酚氧化酶、過氧化物酶、抗壞血酸酶，還能促進細胞吸收及代謝，增強動物的免疫功能，提高抗病力。尤其是增加了抗腹瀉能力。所用菌株經腐植酸誘導后，菌株活力增強，繁殖更快，抗逆性強，定值速度加快。

一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法，其制備方法為：

步驟一：將按重量分計的腐植酸發(fā)酵原料60-100份通過60目篩子，豆粕粉6-10份，玉米粉6-10份，葡萄糖2-6份，無機鹽0-0.3份，水120-180份按常規(guī)方法制備成培養(yǎng)基；

步驟二：然后用蒸汽對培養(yǎng)基進行滅菌，100-135℃滅菌15-30分鐘，之后對培養(yǎng)基進行冷卻到28℃-35℃培養(yǎng)溫度；將微生物混合發(fā)酵液接種到培養(yǎng)基上，接種比例為0.9-1.2∶0.05-0.2，先進行好氧發(fā)酵，發(fā)酵條件為攪拌速度160-200r/min，開始通氣比調至1∶0.4-0.7，培養(yǎng)期間灌壓要保持在0.03-0.06pa，隨著菌體的不斷生長溶氧值也逐漸發(fā)生變化，因此需要調通氣比和攪拌速度使溶氧相對值20％-40％，發(fā)酵時間36-48小時，發(fā)酵溫度32-35℃；然后進行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵條件為靜置發(fā)酵，發(fā)酵時間48-60小時，發(fā)酵溫度32℃-35℃，每六小時攪拌1分鐘；厭氧發(fā)酵結束得到降解的腐植酸發(fā)酵液，經干燥制得腐植酸基微生態(tài)產品。

所述腐植酸原料為腐植酸鈉、風化煤、褐煤、泥炭中的一種或多種。

所述的無機鹽為磷酸二氫鉀、硫酸亞鐵、硫酸銅、硫酸鎂、硫酸鋅、硫酸錳、氯化鈣中的一種或多種的復配。

所述微生物混合發(fā)酵液由枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、地衣芽孢桿菌發(fā)酵液、植物乳桿菌發(fā)酵液、嗜酸乳桿菌按重量比35-45％∶35-45％∶8-12％∶8-12％的比例混合而成。

所述的微生物混合發(fā)酵液，其生產工藝如下：

A：枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的生產：

1)固體培養(yǎng)基為：葡萄糖1-3％、蛋白胨1-3％、酵母膏0.3-0.6％、瓊脂1-4％，蒸餾水90％-97％，調節(jié)培養(yǎng)基pH為6.5-7.0、110-120℃滅菌16-20分鐘；培養(yǎng)條件：放入25-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22-26h；

2)將上述所得物質進行搖瓶培養(yǎng)，培養(yǎng)基為：葡萄糖1-3％、蛋白胨0.5-2％、酵母膏0.3-0.8％，水94-99％，調節(jié)搖瓶培養(yǎng)基pH為6.5-7.0、110-120℃滅菌16-20分鐘；培養(yǎng)條件：在上述所得菌種中挑選生長健壯的菌落接入搖瓶，放入25-35℃恒溫搖床中，180-230r/min振蕩培養(yǎng)22-26h；

3)將上述所得物質進行種子罐、發(fā)酵罐擴繁：培養(yǎng)基為：豆粕0.5-1.3％、玉米0.2-0.8％、蔗糖1-3％、蛋白胨0.5-1.2％、酵母膏0.3-0.8％、磷酸二氫鉀0.05-0.8％、硫酸銨0.1-0.3％、氯化鈉0.02-0.05％、消泡劑0.02-0.07％，水90-98％，培養(yǎng)基起始pH＝7.0-7.5、115-130℃滅菌20-40分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶到種子罐接種量及種子罐到發(fā)酵罐按3-7％接種，種子罐培養(yǎng)時間為22-26h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為30-40h；

B：地衣芽孢桿菌發(fā)酵液的生產：

1)固體培養(yǎng)基為：蛋白胨8-12％，牛肉膏1-5％，NaCl 3-7％，瓊脂12-18％，蒸餾水58％-76％，調節(jié)培養(yǎng)基pH7.0-7.5，105-125℃滅菌15-20分鐘；培養(yǎng)條件：放入30-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22-24h；

2)將上述所得物質進行搖瓶種子培養(yǎng)：培養(yǎng)基為蛋白胨8-12％，牛肉膏1-5％，NaCl 3-7％，瓊脂12-18％，蒸餾水58％-76％，調節(jié)培養(yǎng)基pH7.0-7.5，105-125℃滅菌15-20分鐘；培養(yǎng)條件：放入30-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22-24h；培養(yǎng)條件：將上述所得菌種接入搖瓶，放入30-35℃恒溫搖床中，180-220r/min振蕩培養(yǎng)22-26h；

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：豆粕2-7％、糖蜜0.5-1.5％、蛋白胨0.3-0.8％、酵母膏0.1-0.5％、磷酸二氫鉀0.05-0.2％、硫酸銨0.05-0.5％、氯化鈉0-0.08％、豆油0.05-0.25％、消泡劑0-0.1％，水89-97％，調節(jié)培養(yǎng)基pH＝6.5-7.5、115-125℃滅菌25-35分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶到種子罐及種子罐到發(fā)酵罐接種量按3-7％接種，種子罐培養(yǎng)時間為22-26h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為32-40h；

C：植物乳桿菌發(fā)酵液的生產：

1)固體培養(yǎng)基為：葡萄糖0.5-1.5％、蛋白胨0.5-1.5％、酵母膏0.1-0.8％、牛肉膏0.1-0.8％、磷酸二氫鉀0.05-0.15％、瓊脂1-3％，水93％-98％，調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.5-7.0、110-120℃滅菌15-25分鐘；培養(yǎng)條件：放入30-35℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)22-24h；

2)搖瓶種子培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：葡萄糖0.5-1.5％、蛋白胨0.5-1.5％、酵母膏0.1-0.8％、牛肉膏0.1-0.8％、磷酸二氫鉀0.05-0.15％，瓊脂1-3％，水93％-98％，調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.5-7.0、110-120℃滅菌15-25分鐘；培養(yǎng)條件：將上述所得菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)22-26h；

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：豆粕0.5-1.5％、玉米0.2-0.7％、蔗糖0.5-1.5％、蛋白胨1-2％、酵母膏0.2-0.7％、磷酸二氫鉀0.1-0.5％、硫酸銨0.1-0.5％、乙酸鈉0.3-0.8％、檸檬酸三鈉0.1-0.5％、吐溫80 0.05-0.2％、硫酸鎂0.01-0.05％、豆油0.1-0.3％、消泡劑0.03-0.07％，水93％-97％，起始pH＝6.5-7.0、110-125℃滅菌25-40分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶到種子罐及種子罐到發(fā)酵罐接種量按3-7％接種，種子罐培養(yǎng)時間為22-24h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為30-40h；

D.嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的生產：

1)斜面培養(yǎng)基為：葡萄糖0.5-1.5％、蛋白胨0.5-1.5％、酵母膏0.2-0.8％、牛肉膏0.2-0.8％、磷酸二氫鉀0.05-0.2％、瓊脂0.5-4％，水92-99％調節(jié)培養(yǎng)基pH＝6.5-7.0、110-125℃滅菌15-20分鐘；培養(yǎng)條件：將試管菌種擴繁至培養(yǎng)皿，放入30-40℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)22-26h；

2)搖瓶種子培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：葡萄糖0.5-1.5％、蛋白胨0.5-1.5％、酵母膏0.2-0.8％、牛肉膏0.2-0.8％、磷酸二氫鉀0.05-0.2％，水96-99％調節(jié)培養(yǎng)基pH＝6.8、110-125℃滅菌15-20分鐘；培養(yǎng)條件：將培養(yǎng)皿菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)22-26h；

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：豆粕0.5-1.5％、玉米0.3-0.8％、蔗糖0.5-1.5％、蛋白胨1-3％、酵母膏0.2-1％、磷酸二氫鉀0.05-0.3％、硫酸銨0.1-0.3％、乙酸鈉0.3-0.8％、檸檬酸三鈉0.05-0.3％、吐溫800.4-1％、硫酸鎂0-0.05％、豆油0.05-0.1％、消泡劑0.01-0.08％，水90％-97％，調節(jié)培養(yǎng)基pH＝6.5-7.0、110-130℃滅菌25-40分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶到種子罐及種子罐到發(fā)酵罐接種量按3-8％接種，種子罐培養(yǎng)時間為22-26h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為30-40h。

本發(fā)明一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法具有如下優(yōu)點：

(1)本發(fā)明基于合生發(fā)酵原理，篩選出對腐植酸有很好降解能力的復合菌，腐植酸經微生物降解后，分子量變小，生理活性提高，更易被動物利用；而微生物經腐植酸誘導后，抗逆性增強，胞外酶產量增加，如淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶、半纖維素酶等，分泌許多小肽、胞外多糖，這些物質對病原菌、有抑制和殺傷的作用，還分泌一些促生長因子，能有效提高動物生產性能；

(2)本發(fā)明可以直接降解風化煤、泥炭等含腐植酸較高的低階煤中的腐植酸，提高低值礦源的高效利用率；

(3)本發(fā)明生產出的腐植酸基微生態(tài)可廣泛用于畜禽水產各類飼料，對改善動物腸道健康，提高動物采食量，控制動物腹瀉有益處；

(4)使用本產品可以降低飼料中氧化鋅和抗生素的使用量，對提高畜產品安全、減少動物糞便中鋅和抗生素的排放，保護生態(tài)環(huán)境等方面有良好效益。

下面通過實施例，對本發(fā)明的技術方案做進一步的詳細描述。

具體實施方式：

實施例1：

一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法，制備方法為：

步驟一：將按重量分計的腐植酸鈉、風化煤、褐煤、泥炭80份通過60目篩子，豆粕粉8份，玉米粉8份，葡萄糖4份，磷酸二氫鉀、硫酸亞鐵、硫酸銅、氯化鈣混合后的無機鹽0.2份，水150份按常規(guī)方法制備成培養(yǎng)基；

步驟二：然后用蒸汽對培養(yǎng)基進行滅菌，120℃滅菌18分鐘，之后對培養(yǎng)基進行冷卻到32℃培養(yǎng)溫度；將微生物混合發(fā)酵液接種到培養(yǎng)基上，接種比例為1∶0.1，先進行好氧發(fā)酵，發(fā)酵條件為攪拌速度180r/min，開始通氣比調至1∶0.5，培養(yǎng)期間灌壓要保持在0.05pa，隨著菌體的不斷生長溶氧值也逐漸發(fā)生變化，因此需要調通氣比和攪拌速度使溶氧相對值30％，發(fā)酵時間45小時，發(fā)酵溫度33℃；然后進行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵條件為靜置發(fā)酵，發(fā)酵時間50小時，發(fā)酵溫度33℃，每六小時攪拌1分鐘；厭氧發(fā)酵結束得到降解的腐植酸發(fā)酵液，經干燥制得腐植酸基微生態(tài)產品。

所述的微生物混合發(fā)酵液，其生產工藝如下：

A：枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的生產：

1)固體培養(yǎng)基為：葡萄糖2％、蛋白胨2％、酵母膏0.5％、瓊脂3％，蒸餾水92.5％，調節(jié)培養(yǎng)基pH為6.8、115℃滅菌18分鐘；培養(yǎng)條件：放入33℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h；

2)將上述所得物質進行搖瓶培養(yǎng)，培養(yǎng)基為：葡萄糖2％、蛋白胨1％、酵母膏0.5％，水96.5％，調節(jié)搖瓶培養(yǎng)基pH為6.8、溫度在115℃滅菌18分鐘；培養(yǎng)條件：在上述所得菌種中挑選生長健壯的菌落接入搖瓶，放入25-35℃恒溫搖床中，180-230r/min振蕩培養(yǎng)22-26h；

3)將上述所得物質進行種子罐、發(fā)酵罐擴繁：培養(yǎng)基為：豆粕0.8％、玉米0.5％、蔗糖2％、蛋白胨0.8％、酵母膏0.5％、磷酸二氫鉀0.3％、硫酸銨0.2％、氯化鈉0.05％、消泡劑0.05％，水94.8％，培養(yǎng)基起始pH＝7.2、120℃滅菌30分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶培養(yǎng)所得到種子罐接種量按5％接種，種子罐培養(yǎng)時間為24h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為35h；

B：地衣芽孢桿菌發(fā)酵液的生產：

1)固體培養(yǎng)基為：蛋白胨10％，牛肉膏3％，NaCl5％，瓊脂15％，蒸餾水67％，調節(jié)培養(yǎng)基pH7.2，115℃滅菌18分鐘；培養(yǎng)條件：放入32℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23h；

2)將上述所得物質進行搖瓶種子培養(yǎng)：培養(yǎng)基為蛋白胨10％，牛肉膏3％，NaCl5％，瓊脂15％，蒸餾水67％，調節(jié)培養(yǎng)基pH7.2，115℃滅菌18分鐘；培養(yǎng)條件：放入32℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23h；培養(yǎng)條件：將上述所得菌種接入搖瓶，放入32℃恒溫搖床中，200r/min振蕩培養(yǎng)23h；

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：豆粕5％、糖蜜5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.3％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸銨0.2％、氯化鈉0.05％、豆油0.1％、消泡劑0.1％，水88.65％，調節(jié)培養(yǎng)基pH＝7.0、120℃滅菌30分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶到種子罐接種量按5％接種，種子罐培養(yǎng)時間為24h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為35h

C：植物乳桿菌發(fā)酵液的生產：

1)固體培養(yǎng)基為：葡萄糖1％、蛋白胨1％、酵母膏0.5％、牛肉膏0.5％、磷酸二氫鉀0.1％、瓊脂2％，水94.9％調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.8、115℃滅菌18分鐘；培養(yǎng)條件：放入32℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)24h；

2)搖瓶種子培養(yǎng)：葡萄糖1％、蛋白胨1％、酵母膏0.5％、牛肉膏0.5％、磷酸二氫鉀0.1％、瓊脂2％，水94.9％調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.8、115℃滅菌18分鐘；培養(yǎng)條件：將上述所得菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)24h；

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：豆粕1％、玉米0.5％、蔗糖0.1％、蛋白胨1.5％、酵母膏0.5％、磷酸二氫鉀0.3％、硫酸銨0.3％、乙酸鈉0.5％、檸檬酸三鈉0.3％、吐溫800.1％、硫酸鎂0.03％、豆油0.2％、消泡劑0.05％，水93.65％，起始pH＝6.8、115℃滅菌30分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶到種子罐接種量按5％接種，種子罐培養(yǎng)時間為24h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為35h；

D.嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的生產：

1)斜面培養(yǎng)基為：1)固體培養(yǎng)基為：葡萄糖1％、蛋白胨1％、酵母膏0.5％、牛肉膏0.5％、磷酸二氫鉀0.1％、瓊脂2％，水94.9％調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.8、115℃滅菌18分鐘；培養(yǎng)條件：將試管菌種擴繁至培養(yǎng)皿，放入32℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)24h；

2)搖瓶種子培養(yǎng)：培養(yǎng)基為葡萄糖1％、蛋白胨1％、酵母膏0.5％、牛肉膏0.5％、磷酸二氫鉀0.1％、水96.9％調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.8、115℃滅菌18分鐘；培養(yǎng)條件：將培養(yǎng)皿菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)24h；

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：豆粕1％、玉米0.5％、蔗糖1％、蛋白胨2％、酵母膏0.5％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸銨0.2％、乙酸鈉0.5％、檸檬酸三鈉0.1％、吐溫800.8％、硫酸鎂0.02％、豆油0.08％、消泡劑0.05％，水93.2％，調節(jié)培養(yǎng)基pH＝6.8、120℃滅菌35分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶到種子罐接種量按5％接種，種子罐培養(yǎng)時間為24h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為35h。

將A-D所得發(fā)酵液即枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、地衣芽孢桿菌發(fā)酵液、植物乳桿菌發(fā)酵液、嗜酸乳桿菌按重量比40％∶40％∶10％∶10％的比例混合即得微生物混合發(fā)酵液。

實施例2：一種微生物降解腐植酸飼料及其制備方法，制備方法為：

步驟一：將按重量分計的腐植酸發(fā)酵原料腐植酸鈉、褐煤70份通過60目篩子，豆粕粉6份，玉米粉6份，葡萄糖6份，由硫酸亞鐵、硫酸鎂、硫酸鋅、氯化鈣組成的無機鹽0.1份，水150份按常規(guī)方法制備成培養(yǎng)基；

步驟二：然后用蒸汽對培養(yǎng)基進行滅菌，110℃滅菌25分鐘，之后對培養(yǎng)基進行冷卻到30℃培養(yǎng)溫度；將微生物混合發(fā)酵液接種到培養(yǎng)基上，接種比例為1∶0.15，先進行好氧發(fā)酵，發(fā)酵條件為攪拌速度170r/min，開始通氣比調至1∶0.6，培養(yǎng)期間灌壓要保持在0.04pa，隨著菌體的不斷生長溶氧值也逐漸發(fā)生變化，因此需要調通氣比和攪拌速度使溶氧相對值25％，發(fā)酵時間40小時，發(fā)酵溫度35℃；然后進行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵條件為靜置發(fā)酵，發(fā)酵時間55小時，發(fā)酵溫度35℃，每六小時攪拌1分鐘；厭氧發(fā)酵結束得到降解的腐植酸發(fā)酵液，經干燥制得腐植酸基微生態(tài)產品。

所述的微生物混合發(fā)酵液，其生產工藝如下：

A：枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的生產：

1)固體培養(yǎng)基為：葡萄糖3％、蛋白胨3％、酵母膏0.3％、瓊脂2％，蒸餾水91.2％，調節(jié)培養(yǎng)基pH為7.0、110℃滅菌20分鐘；培養(yǎng)條件：放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)25h；

2)將上述所得物質進行搖瓶培養(yǎng)，培養(yǎng)基為：葡萄糖3％、蛋白胨1％、酵母膏0.5％，水95.5％，調節(jié)搖瓶培養(yǎng)基pH為7.0、110℃滅菌20分鐘；培養(yǎng)條件：在上述所得菌種中挑選生長健壯的菌落接入搖瓶，放入30℃恒溫搖床中，200r/min振蕩培養(yǎng)25h；

3)將上述所得物質進行種子罐、發(fā)酵罐擴繁：培養(yǎng)基為：豆粕0.9％、玉米0.7％、蔗糖3％、蛋白胨1％、酵母膏0.6％、磷酸二氫鉀0.2％、硫酸銨0.2％、氯化鈉0.04％、消泡劑0.06％，水93.3％，培養(yǎng)基起始pH＝7.0、125℃滅菌38分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶培養(yǎng)所得到種子罐接種量按6％接種，種子罐培養(yǎng)時間為26h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為35h；

B：地衣芽孢桿菌發(fā)酵液的生產：

1)固體培養(yǎng)基為：蛋白胨10％，牛肉膏4％，NaCl3％，瓊脂13％，蒸餾水70％，調節(jié)培養(yǎng)基pH7.1，115℃滅菌20分鐘；培養(yǎng)條件：放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h；

2)將上述所得物質進行搖瓶種子培養(yǎng)：培養(yǎng)基為蛋白胨9％，牛肉膏3％，NaCl 7％，瓊脂12％，蒸餾水69％，調節(jié)培養(yǎng)基pH7.1，125℃滅菌16分鐘；培養(yǎng)條件：放入34℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23h；培養(yǎng)條件：將上述所得菌種接入搖瓶，放入34℃恒溫搖床中，180r/min振蕩培養(yǎng)23h；

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：豆粕5％、糖蜜1.5％、蛋白胨0.8％、酵母膏0.4％、磷酸二氫鉀0.2％、硫酸銨0.3％、氯化鈉0.01％、豆油0.25％、消泡劑0.1％，水91.44％，調節(jié)培養(yǎng)基pH＝7.1、120℃滅菌30分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶到種子罐接種量按6％接種，種子罐培養(yǎng)時間為25h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為32h；

C：植物乳桿菌發(fā)酵液的生產：

1)固體培養(yǎng)基為：葡萄糖1.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.3％、牛肉膏0.2％、磷酸二氫鉀0.05％、瓊脂1％，水96.45％，調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.5、113℃滅菌22分鐘；培養(yǎng)條件：放入31℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)23h；

2)搖瓶種子培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：葡萄糖1.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.3％、牛肉膏0.2％、磷酸二氫鉀0.05％、瓊脂1％，水96.45％，調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.5、113℃滅菌22分鐘；培養(yǎng)條件：將上述所得菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)23h；

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：豆粕0.5％、玉米0.2％、蔗糖0.8％、蛋白胨1.5％、酵母膏0.6％、磷酸二氫鉀0.4％、硫酸銨0.4％、乙酸鈉0.6％、檸檬酸三鈉0.1％、吐溫800.2％、硫酸鎂0.05％、豆油0.2％、消泡劑0.05％，水94.4，起始pH＝6.7、122℃滅菌33分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶到種子罐接種量按3％接種，種子罐培養(yǎng)時間為24h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為40h

D.嗜酸乳桿菌發(fā)酵液的生產：

1)斜面培養(yǎng)基為：葡萄糖1.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.3％、牛肉膏0.2％、磷酸二氫鉀0.05％、瓊脂1％，水96.45％，調節(jié)培養(yǎng)基pH值到6.5、113℃滅菌22分鐘；培養(yǎng)條件：將試管菌種擴繁至培養(yǎng)皿，放入35℃恒溫培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)25h；

2)搖瓶種子培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：葡萄糖0.5％、蛋白胨0.5％、酵母膏0.3％、牛肉膏0.2％、磷酸二氫鉀0.05，水98.45％調節(jié)培養(yǎng)基pH＝6.8、120℃滅菌17分鐘；培養(yǎng)條件：將培養(yǎng)皿菌種接入搖瓶厭氧培養(yǎng)23h；

3)種子罐、發(fā)酵罐擴繁培養(yǎng)：培養(yǎng)基為：豆粕0.7％、玉米0.3％、蔗糖1.4％、蛋白胨3％、酵母膏0.6％、磷酸二氫鉀0.2％、硫酸銨0.3％、乙酸鈉0.4％、檸檬酸三鈉0.1％、吐溫801％、硫酸鎂0.05％、豆油0.05％、消泡劑0.05％，水91.85％，調節(jié)培養(yǎng)基pH＝6.7、128℃滅菌26分鐘；培養(yǎng)條件：搖瓶到種子罐接種量按7％接種，種子罐培養(yǎng)時間為23h，發(fā)酵罐培養(yǎng)時間為34h。

將上述A-D制得的發(fā)酵液即枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、地衣芽孢桿菌發(fā)酵液、植物乳桿菌發(fā)酵液、嗜酸乳桿菌按重量比38％∶38％∶12％∶12％的比例混合即得微生物混合發(fā)酵液。

下面通過具體的試驗來說明本發(fā)明的顯著功效。

實施例1：

客戶名稱：某知名教保料企業(yè)

試驗時間：2015年7月11日至2015年7月25日

試驗動物：選用(21±2)日齡五元雜交配套系斷奶仔豬240頭，每個欄20頭豬，共12欄，其中6欄試驗組，6欄對照組。

試驗方法：對照組為：基礎料+2.8kg/t氧化鋅；試驗組為：基礎料+1.8kg/t氧化鋅+1kg/t本發(fā)明產品。目的是在斷奶后2周內減少氧化鋅的使用，還能有效的抗腹瀉

試驗結果：試驗組仔豬無腹瀉，對照組有腹瀉，腹瀉率平均是7％。；試驗組皮毛比對照組皮毛提高2度(包括皮膚紅潤程度，毛的長短和亮度)；試驗組采食量比對照組多12克，增重比對照組增18克。

結果表明在乳仔豬飼料中添加本發(fā)明產品，可以等量取代氧化鋅，對腹瀉有很好的預防效果，并能改善自住皮毛，提高采食量。

實施例2：

客戶名稱：某知名飼料集團

試驗時間：2016年2月21日至2016年3月2日

試驗動物：保育豬，選擇180頭保育豬，分成試驗組和對照組

試驗方法：試驗組用1公斤/噸本發(fā)明產品，替代對照組中200克/噸進口抗敵素，其他不變。目的是在尋找抗敵素的有效替代品，同時能在保育料中預防腹瀉。

試驗結果：同時試驗的還有其他廠家的微生態(tài)制劑和抗菌肽，使用本發(fā)明產品組無腹瀉，其他試驗組腹瀉率為5-9％。料比在所有組中本發(fā)明產品的最好。在乳仔豬飼料中添加本發(fā)明產品，按每噸1-1.5千克，可以完全取代硫酸粘桿菌素，抗腹瀉效果顯著。

以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案而非限制，在本發(fā)明基礎上，本領域技術人員比較容易在不脫離本發(fā)明技術方案的精神和范圍內做一些修改或者等同替換。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。