本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種甘草次酸-硫化氫供體試劑衍生物及其合成方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
硫化氫是相繼于CO和NO之后的一個(gè)新的生物活性氣體分子，是支持生命的重要角色，在生命活動(dòng)中具有不可替代的生理調(diào)節(jié)作用，控制多種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)過程并發(fā)揮積極的調(diào)節(jié)作用。目前關(guān)于硫化氫的潛在治療性應(yīng)用主要集中在神經(jīng)、心血管系統(tǒng)，如治療高血壓、治療心臟缺血性疾病，治療動(dòng)脈粥樣硬化，與非甾體類抗炎藥聯(lián)用，用于降低代謝、防止低氧性損傷等。
硫化氫供體在生理?xiàng)l件下可以水解自發(fā)放出H2S或在半胱氨酸(GSH)作用下釋放H2S，GSH可以接受硫化物的S硫原子形成GSSH，然后通過3-巰基丙酮酸硫轉(zhuǎn)移酶(3-MST)催化產(chǎn)生H2S。H2S的生物學(xué)效應(yīng)及信號(hào)通路機(jī)制的研究揭示了其作為信號(hào)分子涉及在心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)等許多器官的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，對(duì)機(jī)體內(nèi)多個(gè)生理過程都有影響。
甘草次酸是甘草的主要藥理活性物質(zhì)。近年來，隨著甘草次酸藥理作用的研究不斷深入，其藥理作用日漸被認(rèn)識(shí)，包括抗腫瘤、抗炎、抗病毒、治療心血管疾病、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等多種藥理作用。以天然產(chǎn)物為先導(dǎo)化合物，對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾引入相應(yīng)活性的藥效基團(tuán)，進(jìn)而進(jìn)行相應(yīng)領(lǐng)域的藥理活性研究，已成為新藥研發(fā)的研究熱點(diǎn)。
目前尚未見有將甘草次酸與硫化氫供體試劑經(jīng)烷烴鏈連接的衍生物及其合成方法和應(yīng)用的相關(guān)報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一類結(jié)構(gòu)新穎的甘草次酸-硫化氫供體試劑衍生物，以及它們的合成方法和應(yīng)用。
本發(fā)明涉及具有下述通式(I)所示結(jié)構(gòu)的甘草次酸-硫化氫供體試劑衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中，
n為2～8；
R為
本發(fā)明所述甘草次酸-硫化氫供體試劑衍生物的合成方法為：取甘草次酸、α,ω-二溴烷烴和堿在非質(zhì)子極性溶劑中反應(yīng)，得到化合物1；取化合物1、硫化氫供體試劑和堿在非質(zhì)子極性溶劑中反應(yīng)，得到目標(biāo)物粗品；其中，反應(yīng)在加熱或不加熱的條件下進(jìn)行。
更為具體的合成方法，包括以下步驟：
1)取甘草次酸、α,ω-二溴烷烴和堿在非質(zhì)子極性溶劑中反應(yīng)，所得反應(yīng)物除去溶劑，殘余物分散于乙酸乙酯、二氯甲烷或乙醚中，經(jīng)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾后，收集濾液，濾液濃縮后得到化合物1；
2)取化合物1、硫化氫供體試劑和堿在非質(zhì)子極性溶劑中反應(yīng)，所得反應(yīng)物除去溶劑，殘余物分散于乙酸乙酯、二氯甲烷或乙醚中，經(jīng)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾后，收集濾液，濾液濃縮后得到目標(biāo)物粗品。
上述具體的合成方法的步驟1)和步驟2)中，所述的洗滌優(yōu)選是依次用鹽酸、水、飽和食鹽水進(jìn)行洗滌，或者是依次用鹽酸、飽和食鹽水進(jìn)行洗滌。
本發(fā)明所述合成方法中合成得到的化合物1的結(jié)構(gòu)式如下所示：
其中，n為2～8。
上述方法中合成得到的化合物1為化合物1的粗品，為了提高化合物1的純度同時(shí)減少后續(xù)反應(yīng)中產(chǎn)生更多的副產(chǎn)物，優(yōu)選是將所得化合物1的粗品經(jīng)硅膠薄層色譜或硅膠柱層析純化后再用于后續(xù)操作。在將其進(jìn)行硅膠薄層色譜或上硅膠柱層析時(shí)，通常用由體積比為2～10：1的石油醚(PE)和乙酸乙酯(EA)組成的洗脫劑洗脫，收集洗脫液，洗脫液減壓蒸除溶劑，得到純化后的目標(biāo)物。所述組成洗脫劑的石油醚和乙酸乙酯的體積比優(yōu)選為2～5：1。
由上述方法制得的是式(I)化合物的粗品，可采用現(xiàn)有常規(guī)的純化方法對(duì)其進(jìn)行純化以提高式(I)化合物的純度。通常采用硅膠薄層色譜或硅膠柱層析來進(jìn)行純化，在將制得的目標(biāo)化合物粗品硅膠薄層色譜或上硅膠柱層析時(shí)，通常用由體積比為2～10：1的石油醚(PE)和乙酸乙酯(EA)組成的洗脫劑洗脫，收集洗脫液，洗脫液減壓蒸除溶劑，得到純化后的目標(biāo)物。所述組成洗脫劑的石油醚和乙酸乙酯的體積比優(yōu)選為2～5：1。
本發(fā)明所述的合成方法中，所述的α,ω-二溴烷烴可以是1,2-二溴乙烷、1,3-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷、1,5-二溴戊烷、1,6-二溴己烷、1,7-二溴庚烷或1,8-二溴辛烷。
本發(fā)明所述的合成方法中，所述的堿可以是碳酸鉀、三乙胺、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀或碳酸銫。當(dāng)堿的選擇為碳酸銫時(shí)，可以獲得更高的產(chǎn)率；從成本及產(chǎn)率綜合考慮，優(yōu)選堿為碳酸鉀。
本發(fā)明所述的合成方法中，所所述的非質(zhì)子極性溶劑可以是N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、甲苯和吡啶中的一種或兩種以上的組合，當(dāng)非質(zhì)子極性溶劑的選擇是上述兩種以上的組合時(shí)，它們之間的配比可以為任意配比。所述非質(zhì)子極性溶劑的用量通常為能夠溶解參加反應(yīng)的原料即可。
本發(fā)明所述的合成方法中，所述的硫化氫供體試劑具體可以是5-對(duì)羥基苯基-1,2-二硫雜環(huán)戊烯-3-硫酮(ADT-OH)、(R)-硫辛酸(R-lipoic acid)或4-羥基硫代苯甲酰胺(TBZ)，它們的結(jié)構(gòu)式分別如下所示：
本發(fā)明所述的合成方法中，所述甘草次酸、α,ω-二溴烷烴和堿的反應(yīng)優(yōu)選是在低于或等于40℃的條件下進(jìn)行，申請(qǐng)人在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)反應(yīng)在20～40℃條件下進(jìn)行時(shí)，可以在較短的時(shí)間內(nèi)獲得較高的產(chǎn)率，同時(shí)副反應(yīng)較少；所述化合物1、硫化氫供體試劑和堿的反應(yīng)在低于或等于65℃的條件下進(jìn)行，更優(yōu)選是在35～65℃條件下進(jìn)行，這樣可以在較短的時(shí)間內(nèi)獲得較高的產(chǎn)率，并盡量減少副產(chǎn)物的生成。在上述限定溫度條件下，反應(yīng)是否完全可以通過薄層層析跟蹤檢測(cè)。
本發(fā)明所述的合成方法中，所述甘草次酸、α,ω-二溴烷烴和堿的物質(zhì)的量之比為：1：1～5：0.5～3；所述化合物1、硫化氫供體試劑和堿的物質(zhì)的量之比為：1：1～3：1～5。
申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，在化合物1、硫化氫供體試劑和堿的反應(yīng)中，加入催化劑碘化鉀(KI)可以進(jìn)一步提高目標(biāo)物的產(chǎn)率。所述碘化鉀的加入量為化合物1物質(zhì)的量的0.1～1倍。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一系列結(jié)構(gòu)新穎的甘草次酸-硫化氫供體試劑衍生物及其合成方法，同時(shí)，申請(qǐng)人還考察了這些衍生物對(duì)肝癌腫瘤細(xì)胞株及慢性骨髓性白血病細(xì)胞的抑制活性，結(jié)果表明，其中大部分化合物對(duì)慢性骨髓性白血病細(xì)胞K562具有一定的抑制活性，有望用于相應(yīng)的抗腫瘤藥物及治療慢性骨髓性白血病的藥物的制備。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳述,以更好地理解本發(fā)明的內(nèi)容,但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。
本發(fā)明所述的具有下述通式(I)所示結(jié)構(gòu)的熊果酸-硫化氫供體試劑衍生物按下述合成路線進(jìn)行合成：
其中：
α,ω-二溴烷烴可以是1,2-二溴乙烷、1,3-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷、1,5-二溴戊烷、1,6-二溴己烷、1,7-二溴庚烷或1,8-二溴辛烷；
非質(zhì)子極性溶劑可以是N,N-二甲基甲酰胺、甲苯或吡啶；
堿可以是碳酸鉀、三乙胺、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀或碳酸銫；
硫化氫供體試劑具體可以是5-對(duì)羥基苯基-1,2-二硫雜環(huán)戊烯-3-硫酮(ADT-OH)、(R)-硫辛酸(R-lipoic acid)或4-羥基硫代苯甲酰胺(TBZ)，它們的結(jié)構(gòu)式分別如下所示：
化合物1和化合物2中的n為2～8；
化合物2中的R為
實(shí)施例1：化合物1a的合成
將甘草次酸(500mg,1.06mmol)溶于無水DMF(5mL)，加入1,6-二溴乙烷(2.43mL,5.3mmol)、K2CO3(146.28mg,1.06mmol)，30℃反應(yīng)24h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散乙酸乙酯(50mL)中，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝2:1)，得化合物1a(457mg,75％,白色固體)。
Yield:457mg,75％,white solid；Rf＝0.461(Petroluem ether:EtOAc＝2:1).M.p 190-192℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):5.69(s,1H,12-H),4.41(dd,J＝28.0,5.9Hz,2H,OCH2),3.53(t,J＝5.7Hz,2H,OCH2),3.21(dd,J＝11.0,5.2Hz,1H,3-H),2.83-2.71(m,1H,18-H),2.32(s,1H),2.21-0.63(m,20H),1.35,1.17,1.12,1.11,0.99,0.80and 0.79(7s,each 3H,7×CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):200.3,176.2,169.2,128.8,78.9,63.9,61.9,55.1,48.3,45.5,44.3,43.3,41.0,39.2,37.8,37.2,32.9,32.0,31.2,29.2,28.6,28.2,27.4,26.6,23.5,18.8,17.6,16.5,15.7.HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calcd for C32H50BrO4,577.2893；found 577.2873.
實(shí)施例2：化合物1b的合成
將甘草次酸(500mg,1.06mmol)溶于無水DMF(5mL)，加入1,8-二溴丁烷(2.94mL,5.3mmol)、K2CO3(146.28mg,1.06mmol)，30℃反應(yīng)24h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散乙酸乙酯(50mL)中，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝2:1)，得化合物1b(532mg,83％,白色固體)。
Yield:532mg,83％,white solid；Rf＝0.515(Petroluem ether:EtOAc＝2:1).M.p 82-84℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):5.61(s,1H,12-H),4.12(t,J＝6.3Hz,2H,OCH2),3.43(t,J＝6.5Hz,2H,OCH2),3.21(dd,J＝11.1,5.1Hz,1H,3-H),2.77(d,J＝13.5Hz,1H,18-H),2.32(s,1H),2.13-0.61(m,24H),1.35,1.14,1.11,1.10and 0.98(5s,each 3H,5×CH3),0.79(s,6H,2×CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):200.3,176.5 169.3,128.6,78.8,63.5,61.9,55.0,48.5,45.5,44.1,43.3,41.1,39.2,37.8,37.2,33.1,32.8,31.9,31.2,29.4,28.6,28.2,27.4,26.5,23.5,18.8,17.6,16.5,15.7.HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calcd for C34H54BrO4,605.3206；found 605.3188.
實(shí)施例3：化合物1c的合成
將甘草次酸(1.0g,2.12mmol)溶于無水DMF(5mL)，加入1,6-二溴己烷(1.62mL,10.62mmol)、K2CO3(293.0mg,2.12mmol)，30℃反應(yīng)24h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散乙酸乙酯(50ml)中，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝5:2)，得化合物1c(929mg,69％,白色固體)。
Yield:929mg,69％,white solid；Rf＝0.452(Petroluem ether:EtOAc＝5:2).M.p 102-104℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):5.61(s,1H,12-H),4.08(m,2H,OCH2),3.39(m,2H,CH2-Br),3.20(dd,J＝11.1,5.2Hz,1H,3-H),2.76(d,J＝13.5Hz,1H,18-H),2.32(s,1H,10-H),2.09-0.69(m,35H),1.35,1.13,1.11,1.10and 0.98(5s,each 3H,5×CH3),0.79(s,6H,2×CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):200.3,176.6,169.4,128.6,61.9,78.8,64.4,55.0,48.5,45.5,44.1,43.3,41.2,39.2,37.9,37.2,33.9,32.9,32.7 31.9,31.2,28.7,28.5,28.2,27.8,27.4,26.6,26.5,25.4,23.5,18.8,17.6,16.5,15.7.HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calcd for C36H58BrO4,633.3519；found 633.3525.
實(shí)施例4：化合物1d的合成
將甘草次酸(1.0g,2.12mmol)溶于無水DMF(5mL)，加入1,8-二溴辛烷(1.62mL,10.62mmol)、K2CO3(293.0mg,2.12mmol)，30℃反應(yīng)24h。減壓蒸除溶劑，殘余物分散乙酸乙酯(50mL)中，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝5:2)，得化合物1d(984mg,62％,白色固體)。
Yield:984mg,62％,white solid；Rf＝0.500(Petroluem ether:EtOAc＝5:2).M.p 67-69℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):5.62(s,1H,12-H),4.07(m,2H,OCH2),3.39(m,2H,CH2-Br),3.21(dd,J＝11.1,5.2Hz,1H,3-H),2.77(d,J＝13.6Hz,1H,18-H),2.32(s,1H,10-H),2.10-0.69(m,35H),1.35,1.13,1.12,1.11and 0.99(5s,each 3H,5×CH3),0.79(s,6H,2×CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):200.3,176.6,169.4,128.6,78.9,64.6,61.9,55.1,48.5,45.5,44.1,43.3,41.2,39.2,37.9,34.1,37.2,32.9,31.9,31.3,29.1,28.7,28.8,28.7,28.6,28.3,28.2,27.4,26.6,26.5,26.0,23.5,18.8,17.6,16.5,15.7.HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calcd for C38H62BrO4,661.3831；found 661.3836.
實(shí)施例5：化合物2a的合成
將化合物1a(250mg,0.43mmol)溶于DMF(5mL)，加入(R)-lipoic acid(88.58mg,0.43mmol)、K2CO3(178.02mg,1.29mmol)，50℃反應(yīng)24h。殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝2:1)，得化合物2a(231mg,76％,淡黃色固體)。
Yield:231mg,76％,yellow solid；Rf＝0.490(Petroluem ether:EtOAc＝2:1).M.p 64-66℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):5.62(s,1H,12-H),4.41-4.18(m,4H,2×OCH2),3.52(dd,J＝8.2,6.4Hz,1H,3-H),3.25-2.98(m,3H),2.75(d,J＝13.5Hz,1H,18-H),2.44(s,1H),2.33(dd,J＝14.7,7.2Hz,3H),2.14-0.60(m,26H),1.34,1.13,1.10,1.09,0.97,0.78and 0.77(7s,each 3H,7×CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):200.1,176.2,173.3,169.2,128.5,78.8,62.3,61.9,56.4,55.0,48.4,45.5,44.1,43.3,41.1,40.3,39.2,38.6,37.8,37.2,34.6,34.0,32.8,31.9,31.2,28.8,28.7,28.3,28.2,27.3,26.5,24.6,23.5,18.8,17.6,16.4,15.7,14.3.HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calcd for C40H62ClO6S2,737.3676；found 737.3696.
實(shí)施例6：化合物2b的合成
將化合物1b(250mg,0.41mmol)溶于DMF(5mL)F，加入(R)-lipoic acid(85.12mg,0.41mmol)、K2CO3(169.74mg,1.23mmol)，50℃反應(yīng)24h。殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝2:1)，得化合物2b(190mg,63％,淡黃色固體)。
Yield:190mg,63％,yellow solid；Rf＝0.431(Petroluem ether:EtOAc＝2:1).M.p 60-62℃.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):5.60(s,1H,12-H),4.09(m,4H,2×OCH2),3.54(dd,J＝8.2,6.4Hz,1H,3-H),3.21-3.02(m,3H),2.75(dd,J＝13.3,3.3Hz,1H,18-H),2.45(s,1H),2.30(dd,J＝9.8,4.7Hz,3H),2.15-0.61(m,30H),1.34,1.13,1.10,1.09and 0.98(5s,each 3H,5×CH3),0.78(s,6H,2×CH3).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ(ppm):200.2,176.5,173.6,169.3,128.6,78.8,63.9,61.9,56.4,55.0,48.5,45.5,44.1,43.3,41.1,40.3,39.2,38.6,37.8,37.2,34.7,34.1,32.8,31.9,31.2,28.8,28.7,28.5,28.2,27.4,26.6,26.5,25.6,25.5,24.7,23.5,18.8,17.6,16.5,15.7.HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calcd for C42H66ClO6S2,765.3989；found 765.4008.
實(shí)施例7：化合物2c的合成
將化合物1c(500mg,0.79mmol)溶于DMF(5mL)，加入(R)-lipoic acid(163.0mg,0.79mmol)、K2CO3(327.58mg,2.37mmol)，50℃反應(yīng)24h。殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2c(402mg,67％,淡黃色固體)。
Yield:402mg,67％,yellow solid；Rf＝0.339(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 51-53℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):5.60(s,1H,12-H),4.05(m,4H,2×OCH2),3.54(dd,J＝8.0,6.5Hz,1H,3-H),3.25-3.03(m,3H),2.75(dd,J＝10.1,3.4Hz,1H,18-H),2.42(m,1H),2.29(m,2H),2.12-0.58(m,36H),1.35(s,3H,CH3),1.12–1.04(m,9H,3×CH3),0.97(s,3H,CH3),0.77(s,6H,2×CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ(ppm):200.2,176.5,173.6,169.3,128.6,78.8,64.4,61.9,56.4,55.0,48.5,45.5,44.1,43.3,41.2,40.3,39.2,38.5,37.8,37.2,34.7,34.2,32.8,31.9,31.2,28.6,28.2,27.4,26.5,25.8,25.6,24.8,23.5,18.8,17.6,16.4,15.7.HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calcd for C44H71O6S2,759.4692；found 759.4696.
實(shí)施例8：化合物2d的合成
將化合物1d(500mg,0.76mmol)溶于DMF(5mL)，加入(R)-lipoic acid(156.81mg,0.76mmol)、K2CO3(315.12mg,2.28mmol)，50℃反應(yīng)24h。殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2d(475mg,80％,淡黃色固體)。
Yield:475mg,80％,yellow solid；Rf＝0.578(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 52-54℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):5.60(s,1H,H-12),4.13-3.97(s,4H,2×OCH2),3.53(m,1H,3-H),3.27(m,3H),2.74(d,J＝13.5Hz,1H,18-H),2.42(dd,J＝12.5,6.2Hz,1H),2.28(dd,J＝13.7,6.3Hz,3H),2.10-0.60(m,40H),1.12-1.05(m,9H,2×CH3),0.96(s,6H,2×CH3),0.77(s,6H,2×CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ(ppm):200.2,176.5,173.6,169.3,128.5,78.7,64.5,61.9,56.4,55.0,48.4,45.4,44.0,43.3,41.1,40.2,39.2,38.5,37.8,37.1,34.6,34.1,32.8,31.9,31.2,29.1,28.8,28.7,28.6,28.5,28.2,27.4,26.5,25.9,24.8,23.5,18.7,17.5,16.4,15.7.HRMS(ESI)m/z:[M+H]+calcd for C46H75O6S2,787.5005；found 787.5019.
實(shí)施例9：化合物2e的合成
將化合物1c(500mg,0.79mmol)溶于DMF(5mL)，加入ADT-OH(178.57mg,0.79mmol)、K2CO3(327.58mg,2.37mmol)、KI(13.28mg,0.08mmol)，65℃反應(yīng)24h。殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2e(126mg,21％,橙色固體)。
Yield:126mg,21％,orange solid；Rf＝0.352(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 92-94℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.60(d,J＝8.8Hz,2H,Ar-H),7.39(s,1H,Ar-H),6.96(d,J＝8.8Hz,2H,Ar-H),5.63(s,1H,12-H),4.22-3.97(m,4H,2×OCH2),3.23(dd,J＝10.9,5.3Hz,1H,3-H),2.79(d,J＝13.5Hz,1H,18-H),2.34(s,1H,9-H),2.13-0.69(m,29H),1.19-1.09(m,9H,3×CH3),1.01(s,6H,2×CH3),0.81(s,6H,2×CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ(ppm):215.1,200.3,176.6,173.3,169.5,162.6,134.6,128.7,128.6,124.0,115.6,78.8,68.3,64.4,61.9,55.0,48.6,45.5,44.1,43.3,41.2,39.2,37.8,37.2,32.9,31.9,31.2,29.0,28.8,28.7,28.5,28.2,27.4,26.54,26.51,25.9,25.7,23.5,18.8,17.6,16.5,15.7.HRMS(APCl)m/z:[M+H]+calcd for C45H63O5S3,779.3838；found 779.3820.
實(shí)施例10：化合物2f的合成
將化合物1d(500mg,0.76mmol)溶于DMF(5mL)，加入ADT-OH(169.74mg,0.76mmol)、K2CO3(315.12mg,2.28mmol)、KI(13.28mg,0.08mmol)，65℃反應(yīng)24h。殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2f(118mg,19％,橙色固體)。
Yield:118mg,19％,orange solid；Rf＝0.369(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 87-89℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.60(d,J＝8.8Hz,2H,Ar-H),7.39(s,1H),6.96(d,J＝8.8Hz,2H,Ar-H),5.64(s,1H,12-H),4.14-3.98(m,4H,2×OCH2),3.22(dd,J＝10.7,5.3Hz,1H,3-H),2.78(d,J＝13.5Hz,1H,18-H),2.34(s,1H,9-H),2.17-0.64(m,33H),1.16-1.10(m,9H,3×CH3),1.00(s,3H,CH3),0.80(s,6H,2×CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ(ppm):215.2,200.3,176.6,173.3,169.4,162.7,134.6,128.7,128.6,124.0,115.6,78.8,68.5,64.6,61.9,55.1,48.5,45.5,44.1,43.3,41.2,39.2,37.9,37.2,32.9,31.9,31.3,29.3,29.2,29.1,28.7,28.5,28.2,27.4,26.6,26.5,26.0,26.0,23.5,18.8,17.6,16.5,15.7.HRMS(APCl)m/z:[M+H]+calcd for C47H67O5S3,807.4151；found 807.4118.
實(shí)施例11：化合物2g的合成
將化合物1c(250mg,0.39mmol)溶于DMF(5mL)，加入TBZ(60.35mg,0.39mmol)、K2CO3(28mg,0.2mmol)、KI(6.30mg,0.04mmol)，35℃反應(yīng)12h。殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2g(91mg,32％,淺黃色固體)。
Yield:91mg,32％,yellow solid；Rf＝0.267(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 119-120℃.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.30(s,1H,NH)，8.23(s,1H,NH),7.48(d,J＝8.8Hz,2H,Ar-H),6.99(d,J＝8.9Hz,2H,Ar-H),5.40(s,1H,12-H),4.02–3.96(m,4H,2×OCH2),2.98(d,J＝4.5Hz,1H,3-H),2.55(d,J＝13.2Hz,1H,18-H),2.30(s,1H),2.18–0.63(m,28H),1.08,0.89and 0.72(3s,each 3H,3×CH3,1.00and 0.67(2s,each 6H,4×CH3).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ(ppm):199.1,191.7,175.9,169.5,161.6,134.2,126.4,120.9,115.0,76.6,67.8,63.9,61.2,54.1,48.1,44.9,43.6,42.9,37.4,36.7,32.1,31.6,30.4,29.1,28.7,28.6,28.5,28.32,28.28,28.2,27.8,27.0,26.1,25.8,25.6,25.4,23.0,22.2,18.4,17.2,16.2,16.1.HRMS(ESI)m/z:[M+Na]+calcd for C43H64NO5S,706.4505；found 706.4500.
實(shí)施例12：化合物2h的合成
將化合物1d(250mg,0.38mmol)溶于DMF(5mL)，加入TBZ(57.80mg,0.38mmol)、K2CO3(28mg,0.20mmol)、KI(6.30mg,0.04mmol)，35℃反應(yīng)12h。殘余物分散在乙酸乙酯(50mL)，依次用HCl(1N)、水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，柱層析分離(VPE:VEA＝3:1)，得化合物2h(107mg,39％,淺黃色固體)。
Yield:107mg,39％,yellow solid；Rf＝0.206(Petroluem ether:EtOAc＝3:1).M.p 117-119℃.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.63(s,1H,NH),9.31(s,1H,NH),7.94(d,J＝8.9Hz,2H,Ar-H),6.91(d,J＝8.9Hz,2H,Ar-H),5.42(s,1H,12-H),4.01(m,4H,2×OCH2),3.01(dd,J＝11.4,4.4Hz,1H,3-H),2.58(s,1H,18-H),2.31(s,1H),2.15-0.64(m,32H),1.09,0.90and 0.73(3s,each 3H,3×CH3),1.02and 0.68(2s,each 6H,4×CH3).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ(ppm):199.0,198.5,175.8,169.4,161.4,131.1,129.5,127.4,113.4,76.6,67.7,63.9,61.2,59.8,54.1,48.1,44.9,43.6,42.9,37.4,36.7,32.1,31.5,30.4,28.5,28.2,27.8,27.0,26.1,25.8,25.4,25.2,23.0,20.8,18.4,16.2,16.0,14.4.HRMS(ESI)m/z:[M+Na]+calcd for C45H68NO5S,734.4818；found 734.4816.
實(shí)施例13：化合物2a的合成
重復(fù)實(shí)施例5，不同的是：用甲苯替代DMF，用碳酸銫替代K2CO3，且將溫度改為40℃反應(yīng)12h。
所得產(chǎn)物(228mg,75％,淡黃色固體)經(jīng)過核磁鑒定為化合物2a，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
實(shí)施例14：化合物2b的合成
重復(fù)實(shí)施例6，不同的是：用吡啶替代DMF，用碳酸氫鉀替代K2CO3，且加入相當(dāng)于化合物1b物質(zhì)的量0.5倍的催化劑KI。
所得產(chǎn)物(166mg,55％,淡黃色固體)經(jīng)過核磁鑒定為化合物2b，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
實(shí)施例15：化合物2e的合成
重復(fù)實(shí)施例9，不同的是：用甲苯替代DMF，用碳酸鈉替代K2CO3，且不加入催化劑KI，將殘余物分散于二氯甲烷中。
所得產(chǎn)物(72mg,12％,橙色固體)經(jīng)過核磁鑒定為化合物2e，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
實(shí)施例16：化合物2f的合成
重復(fù)實(shí)施例10，不同的是：用用甲苯和DMF的組合物(由甲苯和DMF按1：1的體積比組成)替代DMF，用三乙胺替代K2CO3，且不加入催化劑KI，將殘余物分散于乙醚中。
所得產(chǎn)物(62mg,10％,橙色固體)經(jīng)過核磁鑒定為化合物2f，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
實(shí)施例16：化合物2h的合成
重復(fù)實(shí)施例12，不同的是：用吡啶和甲苯的組合物(由甲吡啶和甲苯按1：5的體積比組成)替代DMF，用碳酸氫鈉替代K2CO3，且不加入催化劑KI。
所得產(chǎn)物(49mg,18％,淺黃色固體)經(jīng)過核磁鑒定為化合物2h，其結(jié)構(gòu)式如下所示：
申請(qǐng)人對(duì)本發(fā)明所述化合物2a～2h對(duì)人肝癌腫瘤細(xì)胞株及慢性骨髓性白血病細(xì)胞的增殖抑制活性進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)：
1、細(xì)胞株與細(xì)胞培養(yǎng)
本實(shí)驗(yàn)選用人肝癌細(xì)胞BEL-7402、慢性骨髓性白血病細(xì)胞K562以及人正常肝細(xì)胞L-O2等3種人類細(xì)胞株。
所有細(xì)胞株均培養(yǎng)在含10wt％小牛血、100U/mL青霉素、100U/mL鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)，置37℃含體積濃度5％CO2孵箱中培養(yǎng)。
2、待測(cè)化合物的配制
所用的受試藥物的純度≥95％，將其DMSO儲(chǔ)液用生理緩沖液稀釋后配制成200μmol/L的終溶液，其中助溶劑DMSO的終濃度≤1％，測(cè)試該濃度下化合物對(duì)各種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制程度。
3、細(xì)胞生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)(MTT法)
(1)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞，經(jīng)胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培養(yǎng)液配制成濃度為5000個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，以每孔190μL接種于96孔培養(yǎng)板中，使待測(cè)細(xì)胞密度至1000～10000孔(邊緣孔用無菌PBS填充)；
(2)5％CO2，37℃孵育24h，至細(xì)胞單層鋪滿孔底，每孔加入一定濃度梯度的藥物10μL，每個(gè)濃度梯度設(shè)4個(gè)復(fù)孔；
(3)5％CO2，37℃孵育48小時(shí)，倒置顯微鏡下觀察；
(4)每孔加入10μL的MTT溶液(5mg/mL PBS，即0.5％MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4h；
(5)終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150μL的DMSO充分溶解甲瓚沉淀，振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀用波長(zhǎng)為570nm，參比波長(zhǎng)為450nm測(cè)定各孔的光密度值；
(6)同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、DMSO)，對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、DMSO)。
(7)根據(jù)測(cè)得的光密度值(OD值)，來判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性越強(qiáng)。利用公式：
計(jì)算化合物對(duì)各細(xì)胞株生長(zhǎng)的抑制率，其結(jié)果如以下表1所示。
表1：各化合物對(duì)不同細(xì)胞株的IC50值(μM)
注：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為3次實(shí)驗(yàn)的平均值，Nd表示受試化合物對(duì)此細(xì)胞檢測(cè)不到抑制活性。