本發(fā)明屬于醫(yī)藥化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種黃嘌呤氧化還原酶抑制劑及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

尿酸是嘌呤在體內(nèi)代謝的終產(chǎn)物，由次黃嘌呤、黃嘌呤在黃嘌呤氧化還原酶(XOR)的作用下生成。由于人類(lèi)和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的嘌呤代謝途徑中缺乏尿酸氧化酶，不能將尿酸降解成極易溶于水的尿囊素，只能經(jīng)腎臟排泄絕大部分尿酸，而使人類(lèi)極易形成高尿酸血癥。

高尿酸血癥會(huì)導(dǎo)致痛風(fēng)和腎機(jī)能不全，且被進(jìn)一步認(rèn)為是導(dǎo)致冠心病的因素之一。此外，高尿酸血癥也被認(rèn)為與高血壓癥等疾病的形成密切相關(guān)。因此，對(duì)于高尿酸血癥的治療不僅可以有效治療痛風(fēng)，而且可以有效預(yù)防各種與日常飲食有關(guān)和年齡增長(zhǎng)過(guò)程中形成的疾病。

目前，治療高尿酸血癥可采用抑制尿酸生成、促進(jìn)尿酸排泄和緩解疼痛等策略。促尿酸排泄的藥物主要有苯溴馬隆、Lesinurad等，雖然低劑量的苯溴馬隆降低血尿酸的作用強(qiáng)于別嘌醇，但此類(lèi)藥物排泄產(chǎn)生的尿酸鹽晶體容易沉積在尿路當(dāng)中，導(dǎo)致不同程度的腎損傷，所以腎功能不全患者禁用此類(lèi)藥物。歐洲臨床研究也有報(bào)道，苯溴馬隆具有引起肝損傷的危險(xiǎn)，現(xiàn)已撤出歐洲部分市場(chǎng)。Lesinurad藥物III期臨床研究表明：?jiǎn)斡没蚵?lián)合黃嘌呤氧化還原酶抑制劑均可有效降低血尿酸濃度，并可用于治療別嘌呤醇不耐受患者或療效不佳的患者，聯(lián)合用藥時(shí)甚至可使應(yīng)答率提高到90％，該藥于2015年10月在美國(guó)上市。

黃嘌呤氧化還原酶與高尿酸血癥、痛風(fēng)的發(fā)生密切相關(guān)，通過(guò)抑制黃嘌呤氧化還原酶的生物活性，可以抑制黃嘌呤依次氧化為次黃嘌呤和尿酸的作用，從而有效降低血清尿酸水平，預(yù)防和治療高尿酸血癥和痛風(fēng)的發(fā)生和發(fā)展。因此黃嘌呤氧化酶還原抑制劑是當(dāng)前高尿酸血癥藥物開(kāi)發(fā)的重要靶點(diǎn)?，F(xiàn)已上市的作用黃嘌呤氧化還原酶的藥物包括別嘌醇、非布索坦、托匹司他。別嘌醇在體內(nèi)通過(guò)腎臟代謝，會(huì)產(chǎn)生不同程度的不良反應(yīng)，如肝毒性、急性腎衰竭、再生障礙貧血、不同嚴(yán)重程度的皮疹以及超敏綜合征等；非布索坦作為新型的抗痛風(fēng)藥物，通過(guò)肝臟代謝，可以較好的避免別嘌醇因腎臟代謝引起的不良反應(yīng)，但其仍然存在肝功能異常，皮疹、腹瀉、頭疼和關(guān)節(jié)痛等常見(jiàn)的不良反應(yīng)；托匹司他2013年6月在日本批準(zhǔn)上市，用于痛風(fēng)或非痛風(fēng)患者的高尿酸血癥治療。正處于研究階段的黃嘌呤氧化還原酶抑制劑包括硒唑類(lèi)、咪唑類(lèi)和2-(吲哚-5-基)噻唑類(lèi)等。如硒唑類(lèi)的化合物以2-苯基-4-甲基-1，3-硒唑-5-羧酸的體外效果最好，IC₅₀值為5.5nM，是混合型抑制劑；咪唑類(lèi)的1-羥基-4-甲基-2-苯基-1-咪唑-5-羧酸衍生物IC₅₀值的范圍從0.003μM到1.2μM，顯示了很好的抑制活性；2-(吲哚-5-基)噻唑類(lèi)化合物以2-(3-氰基-2-異丁基吲哚-5-基)-4-甲基噻唑-5-羧酸的抑制效果最佳，其IC₅₀值達(dá)到3.5nM，能夠有效地降低血液中的尿酸濃度。

近期調(diào)查顯示，美國(guó)的痛風(fēng)發(fā)生率為3.9％。在高尿酸血癥的發(fā)生人群中，年輕人就占了21.4％(430萬(wàn))。高尿酸血癥及痛風(fēng)的發(fā)生率越來(lái)越高，而且呈現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)，但是當(dāng)前治療方法常被藥物副作用、并存病和藥-藥作用所限制，因此，開(kāi)發(fā)高效耐受的降尿酸藥物迫在眉睫。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決以上現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足之處，本發(fā)明的首要目的在于提供一種黃嘌呤氧化還原酶抑制劑。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述黃嘌呤氧化還原酶抑制劑的制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述黃嘌呤氧化還原酶抑制劑在制備抗高尿酸血癥藥物或抗痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種黃嘌呤氧化還原酶抑制劑，所述黃嘌呤氧化還原酶抑制劑為具有式(I)所示結(jié)構(gòu)式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯：

其中，R₁表示C1～C10的烷基或C3～C6的環(huán)烷基；R₂為硝基或氰基；R₃為氫、甲基或三氟甲基。

優(yōu)選地，所述R₁為乙基、正丙基、異丙基、異丁基、叔丁基、新戊基、正辛基、環(huán)丙基、環(huán)丁基；R₂為硝基或氰基；R₃為甲基或三氟甲基。

更優(yōu)選地，所述具有式(I)所示結(jié)構(gòu)式的化合物為以下任一項(xiàng)所述的化合物：

1-(3’-氰基-4’-異丁氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸，

1-(3’-氰基-4’-異丁氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸，

1-(3’-氰基-4’-新戊氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸，

1-(3’-氰基-4’-新戊氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸，

1-(3’-氰基-4’-異丙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸，

1-(3’-氰基-4’-異丙氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸，

1-(3’-氰基-4’-乙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸，

1-(3’-氰基-4’-乙氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸，

1-(3’-氰基-4’-正辛氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸，

1-(3’-氰基-4’-正辛氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸，

1-(3’-硝基-4’-異丙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸。

所述“藥學(xué)上可接受的鹽”是包括式(I)的化合物與有機(jī)酸、無(wú)機(jī)酸形成的鹽，或與有機(jī)堿形成的鹽，可以保留母體化合物的生物有效性和性質(zhì)的那些鹽。這些鹽包括：

(1)與酸成鹽，通過(guò)母體化合物的游離堿與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸的反應(yīng)而得，無(wú)機(jī)酸例如(但不限于)鹽酸、氫溴酸、硝酸、磷酸、硫酸、亞硫酸和高氯酸等，有機(jī)酸(但不限于)乙酸、丙酸、草酸、蘋(píng)果酸、富馬酸、羥基苯甲酸、甲氧基苯甲酸、甲磺酸、萘-1-磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸、檸檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等。

(2)存在于母體化合物中的酸性質(zhì)子被金屬離子代替或者與有機(jī)堿配體化合所生成的鹽，金屬離子例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子，有機(jī)堿例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、哌啶、哌嗪等。

上述黃嘌呤氧化還原酶抑制劑的制備方法，包括如下步驟：

(1)將4-溴-2-氰基或硝基苯酚(II)、K₂CO₃、溴代或碘代烷烴加入到DMF或DMSO中加熱攪拌反應(yīng)，得到1-烷氧基-2-氰基或硝基-4-溴苯(III)；

(2)氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將1-烷氧基-2-氰基或硝基-4-溴苯、CuI、K₂CO₃、NaI和配體1加入到甲苯中，加熱攪拌反應(yīng)，得到1-烷氧基-2-氰基或硝基-4-碘苯(IV)；

(3)氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將1-烷氧基-2-氰基或硝基-4-碘苯、3-甲基或三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸酯、CuI、K₂CO₃、配體2加入到DMF中，經(jīng)C-N偶聯(lián)反應(yīng)，得到1-(3’-氰基或硝基-4’-烷氧基-苯基)-3-甲基或三氟甲基-吡唑-4-甲酸酯(V)；

(4)1-(3’-氰基或硝基-4’-烷氧基-苯基)-3-甲基或三氟甲基-吡唑-4-甲酸酯經(jīng)水解、酸化后得到1-(3’-氰基或硝基-4’-烷氧基-苯基)-3-甲基或三氟甲基吡唑-4-甲酸(I)。

上述制備方法的合成路線(xiàn)如下式所示：

a：K₂CO₃，DMF(DMSO)；b：CuI，K₂CO₃，NaI，配體1；c：CuI、K₂CO₃、配體2，DMF；d：1N NaOH，1N HCl，EtOH，THF。

步驟(2)中所述配體1為N,N’-二甲基乙二胺；步驟(3)中所述配體2選自(E)-2-((異亞硝基)甲基)苯甲腈、(E)-吡啶-2-甲醛肟、(2E,3E)-丁二酮肟、(E)-吡啶甲醛肟、1,10-二氮雜菲、1,2-二胺環(huán)己烷、N,N’-二甲基乙二胺、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺等，優(yōu)選(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺。

本發(fā)明化合物可以用上述或類(lèi)似上述的制備方法進(jìn)行制備，根據(jù)取代基的不同或取代位置的不同選用相應(yīng)的原料即可。

上述黃嘌呤氧化還原酶抑制劑在制備抗高尿酸血癥藥物或抗痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。

所述的抗高尿酸血癥藥物或抗痛風(fēng)藥物包括作為有效成分的黃嘌呤氧化還原酶抑制劑化合物和藥學(xué)上可接受的載體。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)及有益效果：

根據(jù)本發(fā)明所述式(I)所示結(jié)構(gòu)式的化合物具有與已知黃嘌呤氧化還原酶抑制劑不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。如在下面的實(shí)施例中所證實(shí)的，它們對(duì)于痛風(fēng)有關(guān)的黃嘌呤氧化還原酶表現(xiàn)出優(yōu)良的抑制作用。因此，它們可以用于預(yù)防和治療與黃嘌呤氧化還原酶相關(guān)的疾病，例如，高尿酸血癥、心力衰竭、心血管疾病、高血壓、腎疾病、炎癥、關(guān)節(jié)病等。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。

實(shí)施例1

1-(3’-氰基-4’-異丁氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₁)的合成

4-溴-2-氰基苯酚(II ₁，1.0g，5.1mmol)溶于DMF(20mL)中，加入K₂CO₃(1.4g，10.1mmol)室溫?cái)嚢?.5h，再加入溴代異丁烷(1.4g，10.1mmol)，85℃下反應(yīng)3h，TLC跟蹤反應(yīng)完全。冷至室溫，100mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?100mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，得無(wú)色液體5-溴-2-異丁氧基-苯甲腈(III₁)1.28g，收率為99.7％。

N₂保護(hù)下，Ⅲ₁(1.2g，4.8mmol)、NaI(1.2g，8.0mmol)、CuI(92mg，0.48mmol)、N,N’-二甲基乙二胺(82mg，0.96mmol)和甲苯(5mL)加入到25mL燒瓶中，110℃反應(yīng)24h。冷至室溫，10mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝20:1)，得無(wú)色液體5-碘-2-異丁氧基-苯甲腈(IV₁)1.2g，收率為83.0％。

N₂保護(hù)下，3-甲基-1-H-吡唑-4-甲酸甲酯(0.14g，1.0mmol)、CuI(19.1mg，0.1mmol)、K₂CO₃(0.29g，2.1mmol)、IV₁(0.36g，1.2mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(28.5mg，0.2mmol)和DMF(3mL)加入到10mL二頸瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，10mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝10:1)，得白色固體1-(3’-氰基-4’-異丁氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸甲酯(V₁)0.23g，收率63.9％。

V₁(0.23g，0.73mmol)溶于THF(8mL)和乙醇(4mL)的混合溶液中，加入1N NaOH水溶液(1.5mL)，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-氰基-4’-異丁氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₁)0.15g，收率68.7％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.49(s,1H),8.92(s,1H),8.25(d,J＝2.6Hz,1H),8.15(dd,J＝9.2,2.6Hz,1H),7.38(d,J＝9.2Hz,1H),3.98(d,2H),2.44(s,3H),2.09(m,1H),1.03(d,6H)；HRMS(ESI,m/z):[M+H]⁺,Calcd.300.1303,Found 300.1345。

實(shí)施例2

1-(3’-氰基-4’-異丁氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸(I₂)的合成

N₂保護(hù)下，3-三氟甲基-1-H-吡唑-4-甲酸乙酯(0.21g，1.0mmol)、CuI(19.1mg，0.1mmol)、K₂CO₃(0.29g，2.1mmol)、IV₁(0.36g，1.2mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(28.5mg，0.2mmol)和DMF(3mL)加入到25mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，10mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝10:1)，得白色固體1-(3’-氰基-4’-異丁氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸乙酯(V₂)0.22g，收率58.0％。

V₂(0.21g，0.55mmol)溶于THF(8mL)和乙醇(4mL)的混合溶液中，加入1N NaOH水溶液(1.5mL)，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-氰基-4’-異丁氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸(I₂)0.10g，收率51.5％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.29(s,3H),9.30(s,3H),8.42(d,J＝2.8Hz,1H),8.26(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),7.52(d,J＝9.3Hz,1H),4.08(d,3H),2.25-2.04(m,1H),1.10(d,6H)；HRMS(ESI,m/z):[M+Na]⁺,Calcd.376.0879,Found 376.0894。

實(shí)施例3

1-(3’-氰基-4’-新戊氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₃)的合成

II₁(1.0g，5.1mmol)溶于DMF(20mL)中，加入K₂CO₃(1.4g，10.1mmol)室溫?cái)嚢?.5h，再加入溴代新戊烷(1.53g，10.1mmol)，85℃下反應(yīng)3h，TLC跟蹤反應(yīng)完全。冷至室溫，100mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?100mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，得無(wú)色液體5-溴-2-新戊氧基-苯甲腈(III₃)0.6g，收率為44.3％。

N₂保護(hù)下，III₃(1.05g，4.0mmol)、NaI(1.0g，6.7mmol)、CuI(77mg，0.4mmol)、N,N’-二甲基乙二胺(69mg，0.8mmol)和甲苯(4mL)加入到25mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，10mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝20:1)，得無(wú)色液體5-碘-2-新戊氧基-苯甲腈(IV₃)1.2g，收率為99.6％。

N₂保護(hù)下，3-甲基-1-H-吡唑-4-甲酸甲酯(0.14g，1.0mmol)、CuI(19.1mg，0.1mmol)、K₂CO₃(0.29g，2.1mmol)、IV₃(0.38g，1.2mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(28.5mg，0.2mmol)和DMF(2mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h，冷至室溫，10mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝10:1)，得白色固體1-(3’-氰基-4’-新戊氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸甲酯(V₃)0.28g，收率88.0％。

V₃(0.28g，0.9mmol)溶于THF(10mL)和乙醇(5mL)的混合溶液中，加入1N NaOH水溶液1.8mL，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-氰基-4’-新戊氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₃)0.15g，收率54.2％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.52(s,1H),8.92(s,1H),8.24(d,1H),8.14(dd,J＝9.0Hz,1H),7.36(d,J＝9.2Hz,1H),3.85(s,2H),2.42(s,3H),1.04(s,9H)；HRMS(ESI,m/z):[M+H]⁺,Calcd.314.1460,Found 314.1499。

實(shí)施例4

1-(3’-氰基-4’-新戊氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸(I₄)的合成

N₂保護(hù)下，3-三氟甲基-1-H-吡唑-4-甲酸乙酯(0.18g，0.84mmol)、CuI(19.1mg，0.09mmol)、K₂CO₃(0.25g，1.8mmol)、IV₃(0.32g，1.0mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(24.2mg，0.17mmol)和DMF(2mL)加入10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，10mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水(10mL)洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝8:1)，得白色固體1-(3’-氰基-4’-新戊氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸乙酯(V₄)0.23g，收率69.3％。

V₄(0.2g，0.5mmol)溶于THF(10mL)和乙醇(5mL)的混合溶液中，加入1N NaOH水溶液1.0mL，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-氰基-4’-新戊氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸(I₄)0.10g，收率54.4％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.23(s,1H),8.35(d,J＝2.8Hz,1H),8.19(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),7.43(d,J＝9.3Hz,1H),3.88(s,2H),1.05(s,9H)；HRMS(ESI,m/z):[M+Na]⁺,Calcd.390.1036,Found 390.1042。

實(shí)施例5

1-(3’-氰基-4’-異丙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₅)的合成

II₁(1.0g，5.1mmol)溶于DMF(20mL)中，加入K₂CO₃(1.4g，10.1mmol)室溫?cái)嚢?.5h，再加入碘代異丙烷(1.7g，10.1mmol)，50℃下反應(yīng)5h，TLC跟蹤反應(yīng)完全。冷至室溫，100mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?100mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，得無(wú)色液體5-溴-2-異丙氧基-苯甲腈(III₅)1.2g，收率為99.0％。

N₂保護(hù)下，III₅(0.6g，2.5mmol)、NaI(0.63g，4.2mmol)、CuI(48mg，0.25mmol)、N,N’-二甲基乙二胺(43mg，0.5mmol)和甲苯(2mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，10mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝30:1)，得無(wú)色液體5-碘-2-異丙氧基-苯甲腈(IV₅)0.6g，收率為83.6％。

N₂保護(hù)下，3-甲基-1-H-吡唑-4-甲酸甲酯(0.21g，1.5mmol)、CuI(29mg，0.15mmol)、K₂CO₃(0.44g，3.1mmol)、IV₅(0.52g，1.8mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(43mg，0.3mmol)和DMF(3mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，15mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝6:1)，得白色固體1-(3’-氰基-4’-異丙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸甲酯(V₅)0.33g，收率73.5％。

V₅(0.33g，1.1mmol)溶于THF(15mL)和乙醇(10mL)的混合溶液中，加入1N NaOH水溶液1.5mL，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-氰基-4’-異丙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₅)0.18g，收率55.8％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.50(s,1H),8.92(s,1H),8.23(d,J＝2.8Hz,1H),8.13(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),7.41(d,J＝9.4Hz,1H),5.03-4.69(m,1H),2.43(s,3H),1.34(d,6H)；HRMS(ESI,m/z):[M+Na]⁺,Calcd.308.1006,Found308.1013。

實(shí)施例6

1-(3’-氰基-4’-異丙氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸(I₆)的合成

N₂保護(hù)下，3-三氟甲基-1-H-吡唑-4-甲酸乙酯(0.21g，1.0mmol)、CuI(19mg，0.1mmol)、K₂CO₃(0.29g，2.1mmol)、IV₅(0.35g，1.2mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(29mg，0.2mmol)和DMF(3mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，15mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝4:1)，得白色固體1-(3’-氰基-4’-異丙氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸乙酯(V₆)0.23g，收率65.1％。

V₆(0.23g，0.6mmol)溶于THF(10mL)和乙醇(6mL)的混合溶液中，加入1N NaOH水溶液2.2mL，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-氰基-4’-異丙氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸(I₆)0.11g，收率51.5％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.24(s,1H),9.22(s,1H),8.33(d,J＝2.8Hz,1H),8.17(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),7.47(d,J＝9.4Hz,1H),5.09-4.66(m,1H),1.35(d,6H)；HRMS(ESI,m/z):[M+Na]⁺,Calcd.362.0723,Found 362.0718。

實(shí)施例7

1-(3’-氰基-4’-乙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₇)的合成

II₁(1.0g，5.1mmol)溶于DMF(15mL)中，加入K₂CO₃(1.4g，10.1mmol)室溫?cái)嚢?.5h，再加入碘代乙烷(1.6g，10.1mmol)，室溫下反應(yīng)12h，TLC跟蹤反應(yīng)完全。冷至室溫，100mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?100mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，得無(wú)色液體5-溴-2-乙氧基-苯甲腈(III₇)1.1g，收率為96.3％。

N₂保護(hù)下，III₇(0.57g，2.5mmol)、NaI(0.63g，4.2mmol)、CuI(48mg，0.25mmol)、N,N’-二甲基乙二胺(43mg，0.5mmol)和甲苯(2mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，10mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝30:1)，得無(wú)色液體5-碘-2-乙氧基-苯甲腈(IV₇)0.48g，收率為70.3％。

N₂保護(hù)下，3-甲基-1-H-吡唑-4-甲酸甲酯(0.16g，1.2mmol)、CuI(23mg，0.12mmol)、K₂CO₃(0.33g，2.4mmol)、IV₇(0.39g，1.4mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(32mg，0.23mmol)和DMF(3mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，15mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝6:1)，得白色固體1-(3’-氰基-4’-乙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸甲酯(V₇)0.33g，收率96.4％。

V₇(0.33g，1.2mmol)溶于THF(15mL)和乙醇(10mL)的混合溶液中，加入1N NaOH水溶液1.5mL，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-氰基-4’-乙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₇)0.12g，收率36.0％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.49(s,1H),8.91(s,1H),8.24(d,J＝2.8Hz,1H),8.14(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),7.36(d,J＝9.3Hz,1H),4.24(m,2H),2.42(s,3H),1.38(t,3H)；HRMS(ESI,m/z):[M+Na]⁺,Calcd.294.0849,Found 294.0846。

實(shí)施例8

1-(3’-氰基-4’-乙氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸(I₈)的合成

N₂保護(hù)下，3-三氟甲基-1-H-吡唑-4-甲酸乙酯(0.29g，1.4mmol)、CuI(27mg，0.14mmol)、K₂CO₃(0.41g，3.0mmol)、IV₇(0.46g，1.7mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(40mg，0.28mmol)和DMF(3mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，15mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝4:1)，得白色固體1-(3’-氰基-4’-乙氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸乙酯(V₈)0.4g，收率80.9％。

V₈(0.24g，0.68mmol)溶于THF(15mL)和乙醇(6mL)的混合溶液中，加入1N NaOH水溶液1.5mL，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-氰基-4’-乙氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸(I₈)0.11g，收率47.0％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.24(s,1H),9.24(s,1H),8.36(d,J＝2.7Hz,1H),8.20(dd,J＝9.2,2.7Hz,1H),7.44(d,J＝9.3Hz,1H),4.29(m,2H),1.41(t,3H)；HRMS(ESI,m/z):[M+Na]⁺,Calcd.348.0566,Found 348.0567。

實(shí)施例9

1-(3’-氰基-4’-正辛氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₉)的合成

II₁(1.0g，5.1mmol)溶于DMF(15mL)中，加入K₂CO₃(1.4g，10.1mmol)，室溫?cái)嚢?.5h，再加入溴代正辛烷(1.95g，10.1mmol)，100℃下反應(yīng)2h，TLC跟蹤反應(yīng)完全。冷至室溫，100mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?100mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，得無(wú)色液體5-溴-2-正辛氧基-苯甲腈(III₉)1.3g，收率為91.2％。

N₂保護(hù)下，III₇(1.14g，5.0mmol)、NaI(1.26g，8.4mmol)、CuI(96mg，0.5mmol)、N,N’-二甲基乙二胺(86mg，1.0mmol)和甲苯(4mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，10mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝30:1)，得無(wú)色液體5-碘-2-正辛氧基-苯甲腈(IV₉)0.96g，收率為70.3％。

N₂保護(hù)下，3-甲基-1-H-吡唑-4-甲酸甲酯(0.28g，2.0mmol)、CuI(38mg，0.2mmol)、K₂CO₃(0.58g，4.2mmol)、IV₉(0.86g，2.4mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(57mg，0.4mmol)和DMF(3mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，15mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝8:1)，得白色固體1-(3’-氰基-4’-正辛氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸甲酯(V₉)0.52g，收率80.9％。

V₉(0.2g，0.62mmol)溶于THF(10mL)和乙醇(5mL)的混合溶液中，加入1N NaOH水溶液1.3mL，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-氰基-4’-正辛氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₉)0.13g，收率66.5％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.50(s,1H),8.88(s,1H),8.24(s,1H),8.14(d,J＝9.2Hz,1H),7.37(d,J＝9.0Hz,1H),4.17(t,J＝5.9Hz,2H),2.43(s,3H),1.83-1.67(m,2H),1.49-1.38(m,2H),1.30(dd,8H),0.86(t,J＝6.5Hz,3H)；HRMS(ESI,m/z):[M+Na]⁺,Calcd.378.1778,Found 378.1793。

實(shí)施例10

1-(3’-氰基-4’-正辛氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸(I₁₀)的合成

N₂保護(hù)下，3-三氟甲基-1-H-吡唑-4-甲酸乙酯(0.35g，1.7mmol)、CuI(33mg，0.17mmol)、K₂CO₃(0.48g，3.5mmol)、IV₉(0.74g，2.0mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(48mg，0.34mmol)和DMF(3mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，15mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝8:1)，得白色固體1-(3’-氰基-4’-正辛氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸乙酯(V₁₀)0.50g，收率68.5％。

V₁₀(0.2g，0.46mmol)溶于THF(15mL)和乙醇(6mL)的混合溶液中，加入1N NaOH水溶液1.0mL，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-氰基-4’-正辛氧基-苯基)-3-三氟甲基-吡唑-4-甲酸(I₁₀)0.12g，收率63.6％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.24(s,1H),9.24(s,1H),8.35(d,J＝2.6Hz,1H),8.20(dd,J＝9.2,2.6Hz,1H),7.45(d,J＝9.3Hz,1H),4.23(t,J＝6.3Hz,2H),1.89-1.70(m,2H),1.54-1.42(m,2H),1.42-1.21(m,8H),0.88(t,J＝6.0Hz,3H)；HRMS(ESI,m/z):[M+Na]⁺,Calcd.390.1036,Found 390.1042。

實(shí)施例11

1-(3’-硝基-4’-異丙氧基-苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(I₁₁)的合成

5-溴-2-氟-1-硝基苯(II₂，1.0g，4.6mmol)溶于DMF(15mL)中，加入K₂CO₃(1.26g，9.2mmol)室溫?cái)嚢?.5h，再加入碘代異丙烷(1.56g，9.2mmol)，50℃下反應(yīng)5h，TLC跟蹤反應(yīng)完全。冷至室溫，100mL的水稀釋?zhuān)宜嵋阴?100mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，得無(wú)色液體5-溴-2-異丙氧基-1-硝基苯(III₁₁)1.1g，收率為91.9％。

N₂保護(hù)下，3-甲基-1-H-吡唑-4-甲酸甲酯(0.28g，2.0mmol)、CuI(38mg，0.2mmol)、K₂CO₃(0.58g，4.2mmol)、IV₉(0.62g，2.4mmol)、(E)-N,N’-二甲基-1,2-環(huán)己基二胺(57mg，0.4mmol)和DMF(3mL)加入到10mL燒瓶中，110℃下反應(yīng)24h。冷至室溫，15mL水稀釋?zhuān)宜嵋阴?15mL×3)萃取，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，硅膠柱純化(V_乙酸乙酯：V_石油醚＝6:1)，得白色固體1-(3’-硝基-4’-異丙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸甲酯(V₁₁)0.3g，收率47.0％。

V₁₁(0.13g，0.4mmol)溶于THF(10mL)和乙醇(5mL)的混合溶液中，加入1N NaOH(1.0mL)水溶液，加熱回流1h。冷至室溫，1N HCl水溶液調(diào)節(jié)pH為2-3，加水稀釋?zhuān)腆w析出，抽濾，濾餅用水洗至中性，干燥，得白色固體1-(3’-硝基-4’-異丙氧基-苯基)-3-甲基-吡唑-4-甲酸(I₁₁)65mg，收率51.9％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.57(s,1H),8.96(s,1H),8.35(d,J＝2.0Hz,1H),8.12(dd,J＝9.2,1.7Hz,1H),7.52(d,J＝9.2Hz,1H),5.05-4.75(m,1H),2.43(s,2H),1.30(d,6H)；HRMS(ESI,m/z):[M+Na]⁺,Calcd.328.0904,Found328.0909。

以上實(shí)施例所得化合物I對(duì)黃嘌呤氧化還原酶的抑制活性評(píng)價(jià)：

1.溶液配制

緩沖液：將購(gòu)于海利克斯(上海雙螺旋生物科技有限公司)的10×PBS(pH7.4)稀釋為1×PBS。除特別說(shuō)明，反應(yīng)體系中所指PBS均指1×PBS。

底物：稱(chēng)取15.2mg黃嘌呤，加入45mL PBS超聲促溶，再加PBS定容至200mL，即得0.5mmol/L的底物溶液。

酶液：冰浴下，用20mL的PBS稀釋10.2μL黃嘌呤氧化還原酶母液，即得到0.5μg/100μL的酶液。

待測(cè)化合物：準(zhǔn)確稱(chēng)取所需化合物，用DMSO配制成1mmol/L的溶液貯備，于20℃避光儲(chǔ)存。使用前用PBS稀釋至所需濃度，DMSO含量要控制在5％以?xún)?nèi)以保證其對(duì)酶活無(wú)影響。

2.酶抑制活性的測(cè)定

將上述配好的PBS、樣品或空白溶液(空白溶液為PBS)、100μL酶液依次加入96孔板，在酶標(biāo)儀中37℃下孵育3min，接著向孵化好的微孔板中加入底物啟動(dòng)反應(yīng)，292nm處每隔1min讀數(shù)一次，共讀10min，每組實(shí)驗(yàn)平行測(cè)定三次。將在各濃度下的試驗(yàn)化合物的初速度轉(zhuǎn)化為基于沒(méi)有抑制劑劑存在下的初速度的抑制率百分比(％)，計(jì)算IC₅₀值。結(jié)果如表1所示。

表1.化合物I對(duì)黃嘌呤氧化還原酶的抑制活性(n＝3)

“-”表示抑制劑的IC₅₀值高于0.100μM/L。

由表1可知，1)部分化合物顯示了明顯的黃嘌呤氧化還原酶抑制活性，如化合物I₃、I₅和I₁₁；2)抑制XOR酶活性的結(jié)果表現(xiàn)出非常明顯的構(gòu)效關(guān)系：吡唑環(huán)C-3取代修飾對(duì)化合物酶抑活性的影響至關(guān)重要，如化合物I₃、I₅和I₉均為甲基取代，而所有該位置為三氟甲基取代的化合物如I₂、I₄和I₆等都基本無(wú)酶抑制活性；苯環(huán)上C-4'取代修飾對(duì)化合物酶抑活性的影響也比較重要，以新戊基取代的化合物I₃活性最好；苯環(huán)C-3'上為硝基取代的化合物I₁₁的抑酶活性較苯環(huán)C-3'上為氰基取代的化合物I₅明顯降低。

總之，上述結(jié)果表明化合物I具有成為黃嘌呤氧化還原酶抑制劑的開(kāi)發(fā)潛力。因此，本發(fā)明的化合物可用作用于治療和預(yù)防與人黃嘌呤氧化還原酶相關(guān)的疾病，諸如高尿酸血癥、心力衰竭、心血管疾病、高血壓、腎疾病、炎癥、關(guān)節(jié)病等的藥物。

上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其它的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。