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研究人體無精癥和嚴(yán)重少精癥快速檢測的方法及應(yīng)用其方法的試劑盒與流程

文檔序號(hào):11809762閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種研究人體無精癥和嚴(yán)重少精癥快速測試的方法,其步驟包括:

a)樣品收集:提取相同等份嚴(yán)重少精癥/無精癥患者和正常男性的血液、精漿、尿液樣本,及提取所述相同等份嚴(yán)重少精癥/無精癥患者和正常男性睪丸中的睪丸組織和液氮,進(jìn)行保存;

b)樣品處理,包括:精漿處理、尿液處理、睪丸組織處理;

所述精漿處理是指首先將精液進(jìn)行離心處理、收集上清,提取精漿中總蛋白,再用蛋白組學(xué)方法獲取不同類型群體精漿的差異蛋白,最后用western blotting方法對差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證;

所述尿液處理是指首先將收集到的尿液進(jìn)行離心處理,去除雜質(zhì),再用代謝組學(xué)方法檢測不同類型群體尿液代謝產(chǎn)物差異;

所述睪丸組織處理是指采集的睪丸組織從RNA保護(hù)液中取出,再用提取RNAs,然后利用miRCURY LNA expression array方法進(jìn)行差異microRNA的鑒定,最后用real-time PCR方法進(jìn)一步驗(yàn)證差異microRNA的表達(dá)。

c)根據(jù)差異基因的表達(dá),利用real-timePCR平臺(tái)診斷及利用所述精漿中差異蛋白或所述尿液中的差異代謝產(chǎn)物的結(jié)果進(jìn)行ELISA檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的研究人體無精癥和嚴(yán)重少精癥快速測試的方法,其特征在于,還包括蛋白標(biāo)記,所述蛋白的相對表達(dá)量用掃描積分光密度值表示,差異點(diǎn)標(biāo)記為兩組間量升高或降低2倍者,且每個(gè)樣品均重復(fù)5次,選取凝膠上分析的差異蛋白點(diǎn),同時(shí)選一空白膠作為對照,將切下的膠點(diǎn)放入具有微量水的離心管中,進(jìn)行HDMS鑒定。

3.根據(jù)權(quán)利要求1or2所述的研究人體無精癥和嚴(yán)重少精癥快速測試的方法,其特征在于,樣品的數(shù)量為300個(gè)。

4.一種應(yīng)用權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法的試劑盒,其特征在于,包括所述睪丸組織處理后提取的RNAs或組織的代謝物。

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