本發(fā)明屬于食品安全檢測技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種培氟沙星半抗原、抗原制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù):
培氟沙星(Pefloxacin),別名:氟哌喹酸、甲氟哌酸,是一種新的氟代喹諾酮類抗菌藥物。對G-及G+菌,包括腸細(xì)菌科、綠膿桿菌、不動桿菌屬、嗜血桿菌屬,奈瑟氏球菌屬及葡萄球菌屬(包括耐甲氧西林的菌株)具有廣譜活性。其抗金葡菌性能和萬古霉素相仿,但抗綠膿桿菌不及環(huán)丙氟哌酸和噻甲羧肟頭孢菌素,對一些多價耐藥菌株和甲氧青霉素耐藥菌也有效。
培氟沙星藥物的殘留除其本身的毒副作用對人體造成直接危害外,更為嚴(yán)重的是人類長期食用含較低濃度培氟沙星藥物的動物源性食品,容易誘導(dǎo)人類致病菌產(chǎn)生耐藥性,從而影響該類藥物的臨床療效,故美國對生產(chǎn)食品動物使用的管理方式越來越嚴(yán),并禁止在食用動物養(yǎng)殖中使用氟喹諾酮類藥物;我國以及世界衛(wèi)生組織、歐盟、日本等國家和組織都將喹諾酮類藥物列入限制使用的獸藥。
國內(nèi)外現(xiàn)已開發(fā)出檢測培氟沙星的酶聯(lián)免疫試劑盒,但是現(xiàn)在國內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒在準(zhǔn)確性、靈敏度、特異性等方面還不能完全達到檢測的要求。本發(fā)明公開的培氟沙星半抗原、抗原為進一步研制培氟沙星抗體及培氟沙星酶聯(lián)免疫試劑盒提供了原料。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的是提供一種培氟沙星半抗原、抗原制備方法及其應(yīng)用。
本發(fā)明提供的培氟沙星半抗原,是式1所示化合物:
式1。
本發(fā)明還公開了式1所示產(chǎn)物的制備方法,包括如下步驟:
100ml圓底燒瓶中加入培氟沙星原料藥922.4mg,DMF50ml,20-24℃磁力攪拌30-60min后加入NHS 797.0mg,EDC 1327.6mg,20-24℃磁力攪拌3-4小時后加入4-氨基丁酸乙酯鹽酸鹽696.0mg,20-24℃磁力攪拌反應(yīng)過夜,將反應(yīng)液滴加到300ml冰水中,攪拌30-40min析出類白色固體,過濾,濾餅用20ml水洗,收集濾餅50℃鼓風(fēng)干燥5-6小時得到990.6 mg培氟沙星4-氨基丁酸乙酯中間體。
50ml圓底燒瓶中加入990mg培氟沙星4-氨基丁酸乙酯中間體,甲醇30ml,20-24℃磁力攪拌30-60min后滴加1M氫氧化鈉水溶液6.0ml,20-24℃磁力攪拌3-4小時后35-40℃減壓濃縮,殘留物中加入20ml水,1M鹽酸調(diào)PH到6.5-7,析出類白色固體,過濾,濾餅用10ml水洗,收集濾餅50℃鼓風(fēng)干燥5-6小時得到 787.3 mg培氟沙星4-氨基丁酸半抗原。
本發(fā)明提供的培氟沙星抗原,是將式1所示產(chǎn)物和載體蛋白偶聯(lián)得到的偶聯(lián)物。
本發(fā)明還保護所述培氟沙星抗原的制備方法,包括如下步驟:
1、將18.74mg培氟沙星半抗原用1.5ml DMF溶解,200rpm攪拌10分鐘,加入EDC 21.5mg溶解后再加入NHS 13mg,室溫攪拌(500rpm)活化2-3h。
2、稱取BSA 50mg溶于3.5ml 0.1M碳酸氫鈉溶液中,200rpm攪拌10分鐘,使其充分溶解,將步驟1的反應(yīng)液在冰?。?lt;4℃)攪拌(1000rpm)條件下,逐滴加入(1ml/min)到BSA溶液中,室溫(20-24℃)攪拌(500rpm)反應(yīng)24小時;
3、將反應(yīng)產(chǎn)物裝入蒸餾水沖洗干凈透析袋(10cm),1L 0.01M pH7.2 PBS,4℃攪拌(100rpm)透析3d,每天換液3次(早中晚各一次),共計換液9次,將透析產(chǎn)物5000rpm離心6min,1.5ml/管分裝,將抗原編號,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
常用載體蛋白均可采用,如牛血清白蛋白(BSA),卵清蛋白(OVA),人血清白蛋白(HSA),鼠血清白蛋白(MSA),甲狀腺蛋白(TG)或血藍(lán)蛋白(KLH)等。
所述培氟沙星抗原可以作為免疫原免疫動物制備培氟沙星特異性抗體,也可以作為包被原制備酶標(biāo)板。
所述抗體具體可為單克隆抗體。
式1所示產(chǎn)物、所述培氟沙星抗原、所述抗體均可應(yīng)用于檢測培氟沙星。
本發(fā)明還公布了應(yīng)用培氟沙星抗原和培氟沙星單克隆抗體制備得到的酶聯(lián)免疫試劑盒。
所述酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,是由包被有培氟沙星抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)抗體工作液、培氟沙星系列標(biāo)準(zhǔn)品、底物顯色液、終止液、濃縮復(fù)溶液、濃縮洗滌液。
本發(fā)明依靠免疫學(xué)、免疫化學(xué)基本原理和殘留分析技術(shù)手段,設(shè)計、合成小分子目標(biāo)分析物半抗原,并與載體蛋白偶聯(lián),制備有效人工抗原。本發(fā)明制備方法簡便可行、成本較低,半抗原產(chǎn)率較高。本發(fā)明的培氟沙星人工抗原,通過免疫動物可產(chǎn)生了針對培氟沙星的特異性抗體,用于快速檢測食品中的培氟沙星殘留。
附圖說明
圖1為培氟沙星半抗原的合成路線圖。
圖2為培氟沙星半抗原的質(zhì)譜檢測結(jié)果。
圖3為培氟沙星酶聯(lián)免疫檢測試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實施方式
以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明,但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法,如無特殊說明,均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料,如無特殊說明,均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。
實施例1、培氟沙星半抗原的制備
一、培氟沙星半抗原的制備
100ml圓底燒瓶中加入培氟沙星原料藥922.4mg,DMF50ml,20-24℃磁力攪拌30-60min后加入NHS 797.0mg,EDC 1327.6mg,20-24℃磁力攪拌3-4小時后加入4-氨基丁酸乙酯鹽酸鹽696.0mg,20-24℃磁力攪拌反應(yīng)過夜,將反應(yīng)液滴加到300ml冰水中,攪拌30-40min析出類白色固體,過濾,濾餅用20ml水洗,收集濾餅50℃鼓風(fēng)干燥5-6小時得到990.6 mg培氟沙星4-氨基丁酸乙酯中間體。
50ml圓底燒瓶中加入990mg培氟沙星4-氨基丁酸乙酯中間體,甲醇30ml,20-24℃磁力攪拌30-60min后滴加1M氫氧化鈉水溶液6.0ml,20-24℃磁力攪拌3-4小時后35-40℃減壓濃縮,殘留物中加入20ml水,1M鹽酸調(diào)PH到6.5-7,析出類白色固體,過濾,濾餅用10ml水洗,收集濾餅50℃鼓風(fēng)干燥5-6小時得到 787.3 mg培氟沙星4-氨基丁酸半抗原。反應(yīng)方程式如圖1。
二、培氟沙星半抗原的鑒定
對所得產(chǎn)品進行質(zhì)譜鑒定,見圖2。
結(jié)果顯示其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式1所示(MW=418),即為培氟沙星半抗原。
式1。
實施例2、培氟沙星人工抗原的制備和鑒定
一、培氟沙星免疫抗原的合成
1、將18.74mg培氟沙星半抗原用1.5ml DMF溶解,200rpm攪拌10分鐘,加入EDC 21.5mg溶解后再加入NHS 13mg,室溫500rpm攪拌活化2-3h。
2、稱取BSA 50mg溶于3.5ml 0.1M碳酸氫鈉溶液中,200rpm攪拌10分鐘,使其充分溶解,將步驟1反應(yīng)液在<4℃冰浴1000rpm攪拌條件下,逐滴加入(1ml/min)到BSA溶液中,室溫攪拌(500rpm)反應(yīng)24小時。
3、將反應(yīng)產(chǎn)物裝入蒸餾水沖洗干凈透析袋(10cm),1L 0.01M pH7.2 PBS,4℃ 100rpm攪拌,透析3d,每天換液3次(早中晚各一次),共計換液9次,將透析產(chǎn)物5000rpm離心6min,1.5ml/管分裝,將抗原編號,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
二、培氟沙星包被抗原的合成
1、將18.74mg培氟沙星半抗原用1.5ml DMF溶解,200rpm攪拌10分鐘,加入EDC 21.5mg溶解后再加入NHS 13mg,室溫500rpm攪拌活化2-3h。
2、稱取OVA 33.6mg溶于3.5ml 0.1M碳酸氫鈉溶液中,200rpm攪拌10分鐘,使其充分溶解,將步驟1反應(yīng)液在<4℃冰浴1000rpm攪拌條件下,逐滴加入(1ml/min)到BSA溶液中,室溫攪拌(500rpm)反應(yīng)24小時。
3、將反應(yīng)產(chǎn)物裝入蒸餾水沖洗干凈透析袋(10cm),1L 0.01M pH7.2 PBS,4℃100rpm攪拌,透析3d,每天換液3次(早中晚各一次),共計換液9次,將透析產(chǎn)物5000rpm離心6min,1.5ml/管分裝,將抗原編號,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
實施例3、酶標(biāo)單抗的制備和特異性鑒定
一、培氟沙星單抗的制備
1、用上述制備出的免疫原按100μg/只,以生理鹽水溶解免疫原與弗氏完全佐劑等體積混勻,頸背部皮下注射免疫6~8周齡Balb/c雌鼠,初次免疫后第7、14、28天以免疫原與弗氏不完全佐劑等體積混勻,各追加免疫一次,融合前3天以免疫復(fù)合物100μg/只,不加弗氏佐劑再追加免疫一次。
2、按常規(guī)方法進行,取免疫小鼠的脾細(xì)胞與處于對數(shù)生長期的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(SP2/0)混合,然后在45s內(nèi)緩慢加入預(yù)熱的融合劑(PEG4000)進行融合,用HAT培養(yǎng)基懸浮均勻,再加入適量的飼養(yǎng)細(xì)胞,培養(yǎng)于96孔培養(yǎng)板,于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),5天后用HT培養(yǎng)基半換液,9天時候進行全換液。
3、細(xì)胞融合后,待細(xì)胞長到培養(yǎng)孔面積的1/4時,采用分步篩選法篩選雜交瘤細(xì)胞。初選采用間接ELISA方法,以包被抗原(預(yù)先用方陣法常規(guī)滴定其最佳包被濃度和陽性血清稀釋度)包被酶標(biāo)板,加入被測孔培養(yǎng)上清,孵育,清洗后加入羊抗鼠IgG-HRP和IgM-HRP,OPD進行顯色反應(yīng)。篩選出的陽性孔再用間接競爭ELISA方法篩選,先將細(xì)胞上清與100μg/mL的培氟沙星等體積混合,37℃水浴作用30min,再加入到包被好的酶標(biāo)板中。同時用PBS取代培氟沙星作對照,其余步驟同上。若經(jīng)培氟沙星阻斷后的OD450nm值下降到對照孔的50%以下,則判為陽性,經(jīng)2~3次檢測都為陽性的孔,立即用有限稀釋法進行亞克隆化。
4、將2~3次亞克隆建株后的雜交瘤細(xì)胞擴大培養(yǎng),收集上清液用間接ELISA測定效價,凍存;并取8~10周齡Balb/c小鼠腹腔注射液體石蠟0.5mL/只,7~10日后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞1~2×106/只,7~10日后抽取小鼠腹水,離心取上清,測定效價,并凍存?zhèn)溆谩?/p>
二、酶標(biāo)抗體的制備
(1)稱取辣根過氧化物酶(HRP)2 mg溶解于0.5 mL水中,加入0.5 mL 0.06 mol/L NaIO4溶液,4℃避光作用30 min;
(2)加入160 mmol/L的乙二醇0.5mL,室溫作用30 min;
(3)加入步驟一制備的培氟沙星單抗2 mg,混勻后裝入處理過的透析袋中,置1000 mL的0.05 mmol/L碳酸鈉緩沖液中透析,4℃過夜;
(4)透析液吸至10 mL的離心管中,加0.25mL 5g/L的NaBH4溶液,混勻后置4℃2 h;
(5)加入等體積的飽和硫酸銨溶液,4℃作用30 min后4℃下3000 r/min離心25 min,棄上清;
(6)將沉淀溶于1.5 mL0.02 mol/L pH 7.4的PBS中,吸入透析袋內(nèi),在0.02mol/L pH 7.4 PBS透析,4℃過夜(中途更換PBS 3次);
(7)將透析袋中液體吸至微量離心管中,4℃下10000r/min離心30min,將上清液吸出,加等量甘油,混勻,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
三、酶標(biāo)培氟沙星抗體效價的測定
培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品購自Sigma公司。
用方陣滴定法確定培氟沙星包被抗原和步驟一制備的單抗的工作濃度,培氟沙星包被抗原的工作濃度為1.7μg/mL,單克隆抗體的工作濃度為1:45000。
用不同濃度的培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品溶液做實驗溶液,其濃度如下:0、0.6、1.8、5.4、16.2、48.6μg/L。采用8組平行試驗(n=8)。間接競爭性ELISA方法:
(1)用上述工作濃度的培氟沙星抗原包被酶標(biāo)板,將培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品實驗溶液與酶標(biāo)抗體溶液同時加入酶標(biāo)板微孔中,再在每孔中加入50μL抗體工作液,同時設(shè)置空白孔(將添加的抗體溶液換成高純水,其它一致)和陰性對照孔(將標(biāo)準(zhǔn)品實驗溶液用PBS溶液代替,其它一致),25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min;
(2)倒出孔內(nèi)液體,用洗滌液洗滌3~5次,將酶標(biāo)板倒置在吸水紙上拍干;
(3)加入底物顯色溶液到酶標(biāo)板微孔中,25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15min;
(4)加入終止液,輕輕振蕩混勻,用酶標(biāo)儀在波長450nm處測定OD值。
以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以培氟沙星實驗溶液濃度的log10值為橫坐標(biāo),繪制半對數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。標(biāo)準(zhǔn)曲線具有完整的反S形狀,并具有上平臺和下平臺,標(biāo)準(zhǔn)曲線的平行測定次數(shù)8次,實驗重復(fù)性良好,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(變異系數(shù))均在10%以內(nèi)。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出半數(shù)抑制量(IC50),確定檢測靈敏度。
抑制率用以下式計算:
式中:ODmax:為不加標(biāo)準(zhǔn)品時的吸光值,ODx為標(biāo)準(zhǔn)品x時的吸光值,ODmin為空白對照孔的吸光值。
由上述公式計算得培氟沙星抗體在緩沖液中的半數(shù)抑制量(IC50)為1.5μg/L。
實施例4、檢測培氟沙星的酶聯(lián)免疫試劑盒及其制備
一、酶聯(lián)免疫試劑盒由下述物質(zhì)組成:
(1)包被培氟沙星抗原的酶標(biāo)板;
(2)酶標(biāo)培氟沙星抗體工作液:實施例3中所述酶標(biāo)抗體溶液;
(3)培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品:培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度分別為0、0.6、1.8、5.4、16.2、48.6μg/L;
(4)底物顯色液:由A液和B液組成,A液為2%過氧化脲的水溶液,B液為1%四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的水溶液;
(5)終止液:0.2M硫酸水溶液;
(6)濃縮洗滌液:每1升所述洗滌液是按照如下方法配制得到的:將10mL吐溫-20、5g疊氮化鈉和990mL磷酸鹽緩沖液混合,得到所述洗滌液;所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.01M pH值為7.4;
(7)濃縮復(fù)溶液:0.04mo1/L的磷酸鹽緩沖液。
二、包被有培氟沙星抗原的酶標(biāo)板及其制備
包被培氟沙星抗原的聚苯乙烯酶標(biāo)板:用0.05M的碳酸鹽溶液將抗原稀釋至1.6μg/mL,包被96孔聚苯乙烯酶標(biāo)板,每孔100μL,37℃溫育2h,傾去包被液,用洗滌液洗滌3次,每次10s,拍干,然后在每孔中加入150μL封閉液,37℃溫育2h,傾去孔內(nèi)液體,干燥后用鋁膜真空密封保存。
包被緩沖液:pH9.6,0.05mo1/L的碳酸鈉緩沖液;
封閉液:每1升封閉液按照如下方法配制:將5mL馬血清、1g疊氮化鈉、30g酪蛋白混合,用磷酸鹽緩沖液溶解并定容至1000mL,得到封閉液;其中,磷酸鹽緩沖液的濃度為0.02M,pH值為7.2。
三、試劑盒檢測方法
(一)樣品前處理
(1)雞肉、鴨肉
a) 準(zhǔn)確稱取1±0.01 g 新鮮樣品于 50 mL離心管中;b) 雞肉樣本:加入4 mL雞肉樣品提取液;鴨肉樣本:加入4 mL鴨肉樣品提取液,渦動2 min; c) 4000 g 離心10 min;d) 取500 mL上清液于心的離心管中;e) 加入500 mL樣品稀釋液,渦動10s;f)取50 mL上清液進行檢測。
(2)純牛奶
a) 將純牛奶樣品充分平衡至室溫(25±2℃),混勻;b) 取50mL純牛奶樣品于離心管中,加入450mL樣品稀釋液,渦動20s;c) 取50mL進行檢測。
(3)牛肉、豬肉、豬肝、雞肝
a) 準(zhǔn)確稱取1±0.01g均質(zhì)后的樣品于離心管中;b) 加入0.5mL樣品稀釋液,渦動20s;c) 再加入4.5mL乙腈,渦動至組織完全分散;d) 室溫(25±2℃)下,搖床300rpm振搖20min;e) 4000g以上,離心10 min;f) 取1mL上清液于新的離心管中;g) 50-60℃水浴中,氮氣吹干;h)加入2mL正己烷,渦動20s,再加入1mL樣品稀釋液,低速渦動10s;i) 4000g以上,離心5min,完全棄去上層正己烷及中間層雜質(zhì);j) 豬肉樣品:直接取50mL進行檢測;牛肉、豬肝、雞肝樣品:取100 mL與100 μL樣品稀釋液,渦動20 s后,取50mL進行檢測。
(二)用試劑盒檢測
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
向包被有培氟沙星抗原的酶標(biāo)板微孔中加入培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品溶液50μL,然后加入酶標(biāo)二抗工作液50mL/孔,再在每孔中加入50mL抗體工作液,輕輕振蕩混合均勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)40min。小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,加入洗滌工作液260 mL/孔,充分洗滌4~5次,每次間隔10s,潑掉板孔內(nèi)洗滌液,用吸水紙拍干。加入底物A液50μL/孔、底物B液50μL/孔,輕輕振蕩混勻,25℃恒溫箱避光顯色15min,每孔加入終止液50μL,輕輕振蕩混勻,用酶標(biāo)儀,測定每孔吸光度值。
用每個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度平均值(B)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,得到百分吸光度值。以培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/L)的半對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3所示。
百分吸光度值(%)=(B/B0) ×100%
2、樣品中培氟沙星濃度的測定
用每個檢測樣本溶液的吸光度平均值(B)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,得到百分吸光度值。相對應(yīng)每一個檢測樣本溶液的百分吸光度值,則可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出檢測樣本溶液的吸光度值,再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度值換算出樣本溶液中培氟沙星的殘留量,最后再乘以各樣品前處理過程的稀釋倍數(shù),即可計算出樣品中培氟沙星的濃度。
四、試劑盒檢測效果評價
(一)準(zhǔn)確度和精密度試驗
向不含培氟沙星的雞肉、豬肉樣品中添加培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品,使培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品在樣品中的終濃度分別為4、8、16μg/L;將添加后的樣品分別按照實驗三中所述方法進行前處理,得到檢測樣本溶液。
從三個不同批次的試劑盒中各抽取3個試劑盒進行檢測,檢測方法如實驗三中所述,每個實驗重復(fù)5次,分別計算變異系數(shù)。結(jié)果分別見表1。
表1準(zhǔn)確度和精密度試驗結(jié)果
批內(nèi)變異系數(shù):同一次測定中各平行樣本的變異系數(shù)。
批間變異系數(shù):同一樣本在不同批次測定結(jié)果的變異系數(shù),取其平均值。
結(jié)果表明:雞肉樣品的平均添加回收率在95.6~102.7%,批內(nèi)變異系數(shù)在2.6~11.7%,批間變異系數(shù)在8.4~9.5%;豬肉樣品的平均添加回收率在92.8~105.5%,批內(nèi)變異系數(shù)在5.5~12.8%,批間變異系數(shù)在7.8~10.4%。
(二)試劑盒保存期
試劑盒保存條件為2~8℃,經(jīng)過15個月的測定,試劑盒的最大吸光度值(0標(biāo)準(zhǔn)),50%抑制濃度、培氟沙星添加實際測定值均在正常范圍之內(nèi)??紤]到運輸和使用過程中,會有非正常保存條件出現(xiàn),將試劑盒在37℃保存的條件下放置9天,進行加速老化實驗,結(jié)果表明該試劑盒的各項指標(biāo)完全符合要求??紤]到試劑盒冷凍情況發(fā)生,將試劑盒放入-20℃冰箱冷凍9天,測定結(jié)果也表明試劑盒各項指標(biāo)完全正常。從以上結(jié)果可得出試劑盒可以在2~8℃至少可以保存12個月以上。
(三)交叉反應(yīng)率試驗
選擇與培氟沙星結(jié)構(gòu)或功能相似的其他藥物進行交叉反應(yīng)試驗,通過各種藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線分別得到其50%抑制濃度。計算試劑盒對其它類似物的交叉反應(yīng)率。與其他藥物的交叉反應(yīng)率越小,說明培氟沙星酶聯(lián)免疫檢測試劑盒對培氟沙星的檢測特異性越好。結(jié)果見表2。
表2 培氟沙星試劑盒交叉反應(yīng)率
試驗結(jié)果表明,本發(fā)明試劑盒對培氟沙星的交叉反應(yīng)率為100%、氧氟沙星、達氟沙星、洛美沙星和諾氟沙星的交叉反應(yīng)率均小于1%,所以試劑盒對培氟沙星的特異性好,即本發(fā)明試劑盒可以用于檢測培氟沙星。