本發(fā)明涉及寡肽及其制備方法，具體是一種用于減輕血液中特異性自身抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的寡肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(NMOSDs)是一種嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，在東亞地區(qū)發(fā)病率遠(yuǎn)高于歐美。絕大多數(shù)NMOSD患者血液中能夠檢測(cè)到水通道蛋白4(AQP4)的自身抗體，這已經(jīng)成為診斷該疾病的重要標(biāo)志物。雖然AQP4自身抗體產(chǎn)生的原因尚不清楚，但其致病機(jī)制卻已經(jīng)基本明了：該自身抗體穿越血腦屏障后攻擊中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞，通過(guò)特異性的細(xì)胞毒性作用導(dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡，繼而引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生脫髓鞘病變。在NMOSDs2015年的診斷標(biāo)準(zhǔn)中已將AQP4自身抗體陽(yáng)性列為其中一項(xiàng)。在臨床上，通常AQP4自身抗體濃度較低的患者能夠獲得較好的治療效果。可見(jiàn)AQP4自身抗體的細(xì)胞毒性與疾病的產(chǎn)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系。減輕AQP4自身抗體的細(xì)胞毒性將成為治療NMOSD的有效方法。目前臨床上常采用血漿置換的方法來(lái)降低AQP4自身抗體的有效濃度，但該方法在降低了AQP4自身抗體濃度的同時(shí)，也降低了其他治療藥物的濃度，且該方法不能保證百分之百有效。

目前針對(duì)NMOSD急性期患者的治療方法主要有大劑量激素沖擊，血漿置換及靜脈注射大劑量免疫球蛋白。大劑量糖皮質(zhì)激素沖擊可抑制機(jī)體的免疫功能，從而減少AQP4自身抗體的產(chǎn)生，但長(zhǎng)期使用降低了自身的免疫力，可誘發(fā)感染或加重感染，引起物質(zhì)代謝和水鹽代謝紊亂，出現(xiàn)類(lèi)腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)綜合征，如浮腫、低血鉀、高血壓、糖尿、皮膚變薄、滿月臉、水牛背、向心性肥胖、多毛、痤瘡、肌無(wú)力和肌萎縮等癥狀。血漿置換能夠通過(guò)置換血清，降低患者急性期血清內(nèi)的AQP4自身抗體的水平，但是由于置換的過(guò)程中也相應(yīng)清除了血清中所有其他治療藥物和一些有益的細(xì)胞因子、趨化因子等，因此在減少AQP4自身抗體的同時(shí)也降低了其他治療手段的效果。注射大劑量免疫球蛋白目前仍然缺少足夠的證據(jù)支持其治療的有效性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種保護(hù)動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)、減少細(xì)胞毒性的用于減輕血液中特異性自身抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的寡肽及其應(yīng)用，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種用于減輕血液中特異性自身抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的寡肽，所述寡肽的氨基酸序列從N端到C端依次為：TINWGGTEKPLPVDMV。該寡肽命名為L(zhǎng)oopA寡肽。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述用于減輕血液中特異性自身抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的寡肽在制備診斷和治療視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病的藥物及裝置中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明能夠特異性地和視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病患者體液中致病的AQP4自身抗體結(jié)合，使其失去攻擊中樞神經(jīng)系統(tǒng)星形膠質(zhì)細(xì)胞的能力，從而起到減輕AQP4自身抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的作用。

附圖說(shuō)明

圖1為使用本發(fā)明后造動(dòng)物模型的大鼠的運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分曲線示意圖。

圖2為使用本發(fā)明后對(duì)造模動(dòng)物脊髓進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)的結(jié)果示意圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本專(zhuān)利的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明。

一種用于減輕血液中特異性自身抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的寡肽，所述寡肽的氨基酸序列從N端到C端依次為：TINWGGTEKPLPVDMV。所述用于減輕血液中特異性自身抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的寡肽在制備診斷和治療視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病的藥物及裝置中的應(yīng)用。

該氨基酸序列的設(shè)計(jì)依據(jù)的是水通道蛋白AQP4位于細(xì)胞膜外的一個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)，由于該環(huán)狀結(jié)構(gòu)位于細(xì)胞膜外，因此很容易成為其自身抗體的攻擊靶點(diǎn)。

對(duì)Lewis大鼠行髓鞘置管手術(shù)，隨后向大鼠鞘內(nèi)注射視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病患者的血清及補(bǔ)體，通過(guò)患者血清中致病的AQP4自身抗體及補(bǔ)體聯(lián)合發(fā)揮抗體依賴的補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，來(lái)造視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病的大鼠模型。通過(guò)事先將一定量本發(fā)明所述的寡肽與患者血清及補(bǔ)體共孵育處理，由于本發(fā)明依據(jù)AQP4細(xì)胞膜外環(huán)狀結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，因此能夠中和患者血清中特定的AQP4自身抗體，從而大大降低了其細(xì)胞毒性，在大鼠動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上有效地降低了行為學(xué)及組織學(xué)上的疾病癥狀。

采用本發(fā)明所述的寡肽中和視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病患者血清后再造模，Lewis大鼠的癥狀從行為學(xué)上得到減輕，如圖1所示。

請(qǐng)參閱圖2的免疫熒光檢測(cè)，用本發(fā)明所述的寡肽中和視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病患者血清后造模組(LoopA處理組)相比未用本發(fā)明寡肽造模組，AQP4表達(dá)較多，GFAP表達(dá)較多(數(shù)據(jù)未顯示)，GFAP為星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記蛋白，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的AQP4絕大多數(shù)分布在星形膠質(zhì)細(xì)胞的終足上，這些表明本發(fā)明所述的寡肽對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用較好。MBP為成熟髓鞘的標(biāo)志蛋白，通過(guò)比較MBP發(fā)現(xiàn)，LoopA處理組對(duì)脊髓髓鞘的保護(hù)較好，而MBP為成熟髓鞘的標(biāo)記蛋白。

將本發(fā)明所述的寡肽固定于一定介質(zhì)上，將患者血清通過(guò)該介質(zhì)，由于本發(fā)明所述的寡肽能夠特異性地與患者血清中致病的特定AQP4自身抗體相結(jié)合，因此該固定了本發(fā)明所述的寡肽的介質(zhì)便具備了清除致病自身抗體的能力，因此能夠起到類(lèi)似血漿置換，但更優(yōu)于血漿置換效果的過(guò)濾作用。

將本發(fā)明所述的寡肽固定于一定介質(zhì)上，通過(guò)封閉處理后，將待檢測(cè)患者的血清與之混合并孵育一段時(shí)間，隨后通過(guò)多次洗滌將血清中未結(jié)合的自身抗體洗去，僅留下與該寡肽特異性結(jié)合的自身抗體，再通過(guò)與一定濃度螯合了特定酶的動(dòng)物抗人二抗共孵育，通過(guò)加入酶底物進(jìn)行顯色反應(yīng)來(lái)判斷該患者血清中是否有針對(duì)該寡肽的致病自身抗體。通過(guò)上述方法來(lái)診斷該患者血清中是否含有針對(duì)該寡肽的致病自身抗體，實(shí)現(xiàn)針對(duì)性較高的特異性診斷，方便制定更具針對(duì)性的治療方案。

本發(fā)明所述的寡肽是依據(jù)人體AQP4膜外抗原決定簇的氨基酸序列設(shè)計(jì)的，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該序列在視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病模型中能有效減輕視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病的疾病癥狀，保護(hù)動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞及髓鞘，從行為學(xué)和組織學(xué)上減輕動(dòng)物模型的疾病癥狀。

本發(fā)明能夠特異性地和視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病患者體液中致病的AQP4自身抗體結(jié)合，使其失去攻擊中樞神經(jīng)系統(tǒng)星形膠質(zhì)細(xì)胞的能力，從而起到減輕AQP4自身抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的作用。

上面對(duì)本專(zhuān)利的較佳實(shí)施方式作了詳細(xì)說(shuō)明，但是本專(zhuān)利并不限于上述實(shí)施方式，在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所具備的知識(shí)范圍內(nèi)，還可以在不脫離本專(zhuān)利宗旨的前提下作出各種變化。