本發(fā)明涉及藥物化學和晶體學領域，具體為兩種不飽和去甲基斑蝥酰亞胺二聚體的晶體結構、制備方法和在抗癌藥物領域的用途。

背景技術：
作為一種典型的小分子蛋白磷酸酶（proteinphosphatase，PP）抑制劑,從1264年開始，斑蝥素已經在世界范圍內作為抗癌藥物使用了，它對肝癌，胰腺癌，結腸癌，口腔癌，膀胱癌，乳腺癌，肺癌，消化道腫瘤均有一定的治療效果。值得注意的是，對常規(guī)藥物產生了抗藥性的癌細胞仍能被斑蝥素殺死，這使得該類化合物成為治療癌癥的新希望。不難理解，斑蝥素能殺死癌細胞的同時，對一些正常細胞也有毒性，尤其是胃腸道、尿道、腎臟處的正常細胞，這阻礙了它們在醫(yī)藥領域的廣泛應用。因此，設計合成毒性小并且能高效抑制腫瘤細胞的斑蝥素衍生物具有重要的意義。一般認為，在斑蝥素核心的三環(huán)結構中，7號位上的雜原子種類對其活性影響很大，該位氧原子換成其他任何原子都會降低其活性，而5,6位上的雙鍵對活性影響不大。如不飽和斑蝥素和斑蝥素具有類似的抑制PP2A的活性，不飽和去甲基斑蝥素和去甲基斑蝥素具有相似的抑制PP1、PP2A和PP2B的活性。當然，也有人認為5,6位上的化學鍵如果是雙鍵會減弱對腫瘤的抑制，不過這種減弱不是特別明顯。重要的是，不飽和去甲基斑蝥素相對要容易合成的多，通過呋喃與馬來酸酐發(fā)生D-A反應一步即可完成，因此該步驟也往往成為合成去甲基斑蝥素及其衍生物的第一步。但是目前對于不飽和去甲基斑蝥酰亞胺衍生物的抗癌活性研究相對較少。另一方面，在天然產物中廣泛存在的二聚體結構被普遍認為具有比相應的單體結構更好的生物活性，具有二聚體結構的藥物分子已被大量合成，并用于治療癌癥、艾滋病、阿爾茨海默病、瘧疾和各種寄生蟲病。但是基于斑蝥酰亞胺的二聚體種類非常少，這與大量斑蝥素衍生物的廣泛研究極不相稱。值得注意的是，在屈指可數(shù)的斑蝥酰亞胺二聚體衍生物中，未見一種該類化合物的晶體結構被報道。研究發(fā)現(xiàn)，大部分(>90%)小分子藥物都以晶體狀態(tài)入藥，并且當前市場上有至少一半的固態(tài)化學藥物存在多晶型問題，所以確定藥物分子的晶體結構意義重大。同時，在藥物化學中，全面可靠的分子結構對確定其與生物靶點間的關鍵作用點具有重要意義。這些都需要確定藥物分子的晶體結構。斑蝥酰亞胺二聚體至今未見一例晶體結構被報道，說明其結晶困難，這對進一步設計基于斑蝥酰亞胺的藥物分子并確定其構效關系是一個短板。

技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的內容是通過多種方法制備得到了兩種不飽和去甲基斑蝥酰亞胺二聚體晶體，這兩種二聚體晶體的結構及有關參數(shù)如下。第一種是丁二胺連接的不飽和去甲基斑蝥酰亞胺二聚體晶體，該晶體外觀呈無色棒狀，熔點165.0-166.0℃，分子式C20H20N2O6，分子量為384.38，化學名為：2,2'-(丁烷-1,4-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)，英文系統(tǒng)命名為：2,2'-(1,4-butanediyl)bis(3a,4,7,7a-tetrahydro-4,7-epoxy-1,3-bishydroisoindole-1,3-dione)，其結構如下。。元素分析表明，該二聚體C、H、N的百分含量分別為62.57%、5.31%和7.33%（按分子式C20H20N2O6計算的理論值分別為62.49%、5.24%和7.29%）；單晶結構分析表明，其結晶為單斜晶系，P21/c空間群，a=11.362(3)?，b=5.8986(17)?，c=13.186(4)?，α=γ=90°，β=98.318(4)°，V=874.4(4)?3，Z=2，有關的1HNMR譜、13CNMR譜分別見附圖1、附圖2；附圖3、附圖4分別是該化合物的熱橢球晶體結構圖和晶體結構堆積圖。第二種是己二胺連接的不飽和去甲基斑蝥酰亞胺二聚體晶體，該晶體外觀同樣呈無色棒狀，熔點158.8-159.4℃，分子式C22H24N2O6，分子量為412.43，化學名為：2,2'-(己烷-1,6-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)，英文系統(tǒng)命名為：2,2'-(1,6-hexanediyl)bis(3a,4,7,7a-hexahydro-4,7-epoxy-1,3-bishydroisoindole-1,3-dione)，其結構如下。。元素分析表明，該二聚體C、H、N的百分含量分別為64.15%、5.91%和6.83%（按分子式C22H24N2O6計算的理論值分別為64.07%、5.87%和6.79%）；單晶結構分析表明，其結晶為單斜晶系，P21/n空間群，a=5.246(3)?，b=28.643(17)?，c=6.546(4)?，α=γ=90°，β=94.401(10)°，V=980.8(10)?3，Z=2，有關的1HNMR譜、13CNMR譜、熱橢球晶體結構圖和晶體結構堆積圖分別見附圖5、附圖6、附圖7和附圖8。這兩種二聚體晶體均有三種合成方法：方法一是以不飽和去甲基斑蝥素和丁二胺（或己二胺）為原料，步驟如下。將不飽和去甲基斑蝥素和丁二胺（或己二胺）分別溶于合適的有機溶劑后，按照一定的物質的量之比混合，在一定溫度下攪拌反應一定時間，得到白色粉末狀固體，揮發(fā)濃縮溶液，過濾，粉末狀固體用合適的溶劑洗滌，然后通過合適的溶劑重結晶，得無色棒狀晶體，即為目標產物晶體。方法二是以不飽和去甲基斑蝥酰亞胺和1,4-二溴丁烷（或1,6-二溴己烷）為原料，步驟如下。將不飽和去甲基斑蝥酰亞胺和1,4-二溴丁烷（或1,6-二溴己烷）溶于合適的有機溶劑后，按照一定的物質的量之比混合，在一定溫度下攪拌反應一定時間，得到白色粉末狀固體，揮發(fā)濃縮溶液，過濾，粉末狀固體用合適的溶劑洗滌，然后通過合適的溶劑重結晶，得無色棒狀晶體，即為目標產物晶體。方法三是以1,1’-(丁烷-1,4-二基)-二(1H-吡咯-2,5-二酮)[或1,1’-(己烷-1,6-二基)-二(1H-吡咯-2,5-二酮)]與呋喃為原料，步驟如下。將1,1’-(丁烷-1,4-二基)-二(1H-吡咯-2,5-二酮)[或1,1’-(己烷-1,6-二基)-二(1H-吡咯-2,5-二酮)]溶于合適的有機溶劑后，按照一定的物質的量之比加入呋喃，在一定溫度下攪拌反應或靜置一定時間，得到白色粉末狀固體，揮發(fā)濃縮溶液，過濾，粉末狀固體用合適的溶劑洗滌，然后通過合適的溶劑重結晶，得無色棒狀晶體，即為目標產物晶體。以上三種方法的區(qū)別在于反應物不同，但反應物的摩爾比均介于4:1與1:4之間。以上三種方法中的有機溶劑（反應、洗滌、重結晶用溶劑）選自：甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙酸乙酯、甲苯、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）等。優(yōu)選的,所述反應溫度和重結晶溫度為常溫或加熱，反應方法為攪拌或靜置，重結晶方法為靜置狀態(tài)下自然揮發(fā)。優(yōu)選的，所述反應時間和重結晶時間選自：2小時－3天。本發(fā)明的有益效果是：能夠以比較簡單的步驟和反應物合成比較復雜的藥物分子材料。體外抗腫瘤活性測試。將處于對數(shù)期生長的A549肺癌細胞，4T1乳腺癌細胞和CT-26結腸癌細胞，分別用0.25%胰酶消化細胞，使其成為單細胞，分別用含10%胎牛血清的F12K培養(yǎng)液制成濃度為1.25×107個/L的單細胞懸液，將細胞接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔200μL（每孔2.5×103個細胞）。將96孔細胞培養(yǎng)板置于CO2培養(yǎng)箱中，在37℃，5%CO2條件下，培養(yǎng)48h。當孔內細胞長滿（90%滿即可）時，按實驗分組加入不同劑量的本斑蝥酰亞胺二聚體溶液（200μL/孔），使待測化合物的終濃度分別為5μM、10μM、30μM、50μM、100μM，150μM，200μM，250μM，300μM，每組設3個復孔，培養(yǎng)96h。各個孔中分別加入20μL濃度為0.5g/L的MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4h，使MTT還原為甲瓚（Formazan）。吸出全部上清液后，每孔加入200μL的DMSO，震搖15min，使甲瓚充分溶解后，運用酶聯(lián)免疫檢測儀測定490nm處的吸光度（OD值）。然后按照下式進行計算。細胞抑制率%=（對照組OD值-實驗組OD值）/對照組OD值×100%。測試結果表明，第一種二聚體晶型[即2,2'-(丁烷-1,4-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)]對肺癌細胞A549、乳腺癌細胞4T1和結腸癌細胞CT-26的IC50（藥物的半數(shù)抑制濃度）分別為262.0μM、256.0μM、229.0μM；第二種二聚體晶型[即2,2'-(己烷-1,6-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)]對肺癌細胞A549、乳腺癌細胞4T1和結腸癌細胞CT-26的IC50分別為234.0μM、226.0μM、205.0μM；這表明這兩種斑蝥酰亞胺二聚體晶型對三種癌細胞均具有溫和的抑制效果。具體實施方式。為了更好的理解本發(fā)明內容，下面通過三個具體實施例進一步說明本發(fā)明的技術方案。實施例1。將0.33g不飽和去甲基斑蝥素溶解于30ml丙酮中，以物質的量比例2:1加入丁二胺0.09g，常溫攪拌24h，得白色粉末狀沉淀，待溶劑揮發(fā)至剩余約10ml，過濾，分別用二氯甲烷和乙醇洗滌沉淀，然后用甲醇重結晶，可得無色棒狀晶體，即為目標產物。實施例2。將0.33g不飽和去甲基斑蝥酰亞胺溶解于30ml丙酮中，以物質的量比例2:1加入1,4-二溴丁烷0.22g，常溫攪拌24h，得白色粉末狀沉淀，待溶劑揮發(fā)至剩余約10ml，過濾，用二氯甲烷洗滌沉淀，然后用甲醇重結晶，可得無色棒狀晶體，即為目標產物。實施例3。將0.25g1,1’-(丁烷-1,4-二基)-二(1H-吡咯-2,5-二酮)溶解于50ml甲苯中，以物質的量比例1:2加入0.20g呋喃，加熱回流10h后濃縮溶液至20ml，靜置兩天，若得無色棒狀結晶，即為目標產物；若得白色粉末狀沉淀，則為粗產品，過濾后用二氯甲烷洗滌沉淀，然后用甲醇重結晶，可得無色棒狀晶體，即為目標產物。附圖說明。附圖1是2,2'-(丁烷-1,4-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)的1HNMR譜圖。附圖2是2,2'-(丁烷-1,4-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)的13CNMR譜圖。附圖3是2,2'-(丁烷-1,4-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)的晶體結構圖，橢球概率30%。附圖4是2,2'-(丁烷-1,4-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)的晶體結構堆積圖。附圖5是2,2'-(己烷-1,6-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)的1HNMR譜圖。附圖6是2,2'-(己烷-1,6-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)的13CNMR譜圖。附圖7是2,2'-(己烷-1,6-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)的晶體結構圖，橢球概率30%。附圖8是2,2'-(己烷-1,6-二基)二(3a,4,7,7a-四氫-4,7-環(huán)氧-1,3-二氫異吲哚-1,3-二酮)的晶體結構堆積圖。