本發(fā)明屬三萜皂苷類化合物領(lǐng)域，具體涉及冷水七中分離的三萜皂苷類化合物及其在制備T淋巴細(xì)胞抑制劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
民族藥冷水七為鳳仙花科鳳仙花屬植物冷水七(ImpatienspritzelliiHook.f.var.hupehensisHook.f.)的根莖，又名紅莧﹑一口血﹑霸王七，多年生草本，分布于我國鄂西恩施自治州﹑宜昌市的宜昌﹑宜都﹑長陽﹑五峰﹑秭歸等縣以及神農(nóng)架；建始縣有栽培，栽培史達(dá)百年以上?！吨袊兴庂Y源志要》記載，其根莖入藥，性味辛、甘、涼，有小毒；具有祛風(fēng)除濕，散瘀消腫，止痛止血，清熱解毒之功效。民間單用或配方，用于風(fēng)濕疼痛，四肢麻木，關(guān)節(jié)腫大，急性脘腹疼痛，食積腹脹泄瀉，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)來腹痛，腸炎痢疾等癥。目前，國內(nèi)外對冷水七的研究僅限于生藥學(xué)，而化學(xué)成分和生物活性研究報道較少。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供冷水七中分離的三萜皂苷類化合物及其在制備T淋巴細(xì)胞抑制劑中的應(yīng)用。冷水七中分離的三萜皂苷類化合物，其具有如下所述的結(jié)構(gòu)式：各化合物的化學(xué)名稱如下：化合物2：刺囊酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-28-O-β-D-吡喃木糖(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(2)，化合物3：刺囊酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-28-O-β-D-吡喃木糖-(1→4)-[3″′-乙?；鵠-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(3),化合物4：刺囊酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸-28-O-β-D-吡喃木糖(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-β-D-吡喃木糖苷(4),化合物5：刺囊酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯-28-O-β-D-吡喃木糖-(1→4)-[3″′-乙?；鵠-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(5),化合物1：刺囊酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯-28-O-β-D-吡喃木糖-(1→4)-[3″′-乙?；鵠-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-β-D-吡喃木糖苷(1)。上述冷水七中分離的三萜皂苷類化合物的獲得方法：冷水七根莖粉碎后，經(jīng)乙醇加熱提取得到乙醇提取物，將乙醇提取物加水混懸，脫酯后，以正丁醇萃取，減壓回收有機(jī)溶劑得到正丁醇部位；正丁醇部位留樣后，利用硅膠柱層析，用氯仿－甲醇溶液梯度洗脫，收集洗脫液，采用MCI柱以水-甲醇溶液梯度洗脫分離，再次收集洗脫液，回收溶劑，得到粗品總皂苷類成分；將粗品總皂苷類上硅膠柱分離，以CHCl3:CH3OH:H2O體積比為60:20:3的混合溶劑洗脫，收集含目標(biāo)產(chǎn)物的餾分，再用制備HPLC分離，用含0.05％(體積百分比)甲酸的32％乙腈-水溶液(體積百分比)洗脫，分離得到上述各目標(biāo)三萜皂苷化合物。按上述方案，所述氯仿－甲醇溶液梯度洗脫為：依此采用全氯仿、體積比100:1的氯仿-甲醇溶液、體積比50:1的氯仿-甲醇溶液、體積比2:1的氯仿-甲醇溶液、體積比1:1的氯仿-甲醇溶液、全甲醇溶液洗脫，收集體積比2:1的氯仿-甲醇溶液，體積比1:1的氯仿-甲醇溶液，全甲醇溶液的洗脫液。按上述方案，所述水-甲醇溶液梯度洗脫為：依次用H2O、30％(體積百分比)的甲醇水溶液、60％的甲醇水溶液、80％的甲醇水溶液洗脫，收集80％CH3OH:H2O洗脫液。上述冷水七中分離的三萜皂苷類化合物在制備T淋巴細(xì)胞抑制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供一種T淋巴細(xì)胞抑制劑，由有效量的上述冷水七中分離的三萜皂苷類化合物和藥學(xué)上可接受的輔料組成。所述可接受輔料可以采用本領(lǐng)域常規(guī)的輔料，按照常規(guī)制備方法制備即可。按上述方案，所述T淋巴細(xì)胞抑制劑包括片劑等口服劑型以及外用的巴布劑等外用劑型。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明通過從冷水七中分離得到的三萜皂苷化合物1-5均有抑制T淋巴細(xì)胞增殖活性。在人類自身免疫性疾病中，化合物1-5可以抑制T淋巴細(xì)胞增殖，糾正機(jī)體免疫反應(yīng)異常及失衡狀況，恢復(fù)人體正常免疫平衡?；甲陨砻庖咝约膊☆愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病人關(guān)節(jié)中恢存在著T淋巴免疫細(xì)胞異常增高，Treg細(xì)胞減少的現(xiàn)象。本發(fā)明的藥物通過對T淋巴細(xì)胞增殖的抑制，可對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎起到一定的治療作用。另外，腫瘤的免疫療法會導(dǎo)致人體的異常免疫反應(yīng)，應(yīng)用化合物1-5也可以減低人體的免疫反應(yīng)，恢復(fù)人體正常免疫平衡。附圖說明圖1為本發(fā)明不同濃度的5種三萜皂苷單體對T淋巴細(xì)胞的存活率。圖中各濃度中從左到右分別對應(yīng)為在該濃度下三萜皂苷單體化合物2，3，4，5，1的T淋巴細(xì)胞的存活率。圖2為化合物5的HSQC-TOCSY圖譜。圖3為化合物5的HMBC圖譜。圖4為化合物5的HMBC圖(5.99-170.34)。圖5為濕法壓片工藝圖。圖6為濕法壓片工藝圖。具體實施方式實施例1冷水七中三萜皂苷化合物的提取分離冷水七根莖20kg經(jīng)適當(dāng)粉碎后，50％乙醇加熱回流提取4次，每次2h，減壓回收溶劑得乙醇總浸膏2.0kg。取乙醇總浸膏2.0kg加適量水使之混懸，先用等倍體積石油醚脫酯后，以等倍體積正丁醇(n-BuOH)分別萃取4次，減壓回收有機(jī)溶劑得到正丁醇部位343g。正丁醇部位適當(dāng)留樣后，利用硅膠柱層析，以氯仿－甲醇系統(tǒng)梯度洗脫：依此采用全氯仿，體積比100:1的氯仿-甲醇溶液，體積比50:1的氯仿-甲醇溶液，體積比2:1的氯仿-甲醇溶液，體積比1：1的氯仿-甲醇溶液，全甲醇溶液洗脫，收集體積比2:1的氯仿-甲醇溶液，體積比1：1的氯仿-甲醇溶液，全甲醇溶液的洗脫液，將其混合后，采用MCI柱色譜，依次用H2O,30％的甲醇水溶液,60％的甲醇水溶液，80％的甲醇水溶液洗脫分離，取80％CH3OH:H2O洗脫液，回收溶劑，得到粗品總皂苷類成分。將粗品總皂苷類上硅膠柱分離，以CHCl3:CH3OH:H2O(體積比60:20:3)溶劑洗脫，收集含目標(biāo)產(chǎn)物的3個餾分(Fr.7-4-1～Fr.7-4-3)，再分別用制備HPLC分離，檢測波長205nm，32％乙腈-水溶液(0.05％甲酸)洗脫，流速為5ml/min，分離得到5個三萜皂苷化合物。5個三萜皂苷的結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)化合物2：白色粉末.IR(KBr):3408,2945,1735,1629,1449,1388,1364,1222cm-1.1HNMR(C5D5N,800MHz)和13CNMR(C5D5N,200MHz),表征結(jié)果見表1-4，ESIMS(negitive)m/z1058[M]–化合物3：白色粉末.IR(KBr):3408,2944,1735,1754,1629,1449,1388,1364,1222cm-1.1HNMR(C5D5N,800MHz)和13CNMR(C5D5N,200MHz),表征結(jié)果見表1-4，ESIMS(negitive)m/z1100[M]–化合物4：白色粉末.IR(KBr):3408,2944,1735,1629,1449,1388,1364,1222cm-1.1HNMR(C5D5N,800MHz)和13CNMR(C5D5N,200MHz)表征結(jié)果見表1-4，ESIMS(negitive)m/z1058[M]–.化合物5：白色粉末.IR(KBr):3410,2938,1737,1756,1643,1449,1388,1364,1222cm-1.1HNMR(C5D5N,800MHz)和13CNMR(C5D5N,200MHz)表征結(jié)果見表1-4，ESIMS(negitive)m/z1114[M]–.化合物1：白色粉末.IR(KBr):3411,2939,1738,1754,1642,1450,1387,1363,1223cm-1.1HNMR(C5D5N,800MHz)和13CNMR(C5D5N,200MHz)表征結(jié)果見表1-4，ESIMS(negitive)m/z1114[M]–.5個皂苷化合物的結(jié)構(gòu)確定：通過比對5個皂苷的苷元13C-NMR，1H-NMR數(shù)據(jù)，可以發(fā)現(xiàn)與文獻(xiàn)(Chemical&PharmaceuticalBulletin,1991,39(2):388～396)中刺囊酸(echinocysticacid)的數(shù)據(jù)基本一致?；衔?-5的3位碳由于連有糖，化學(xué)位移值發(fā)生苷化位移，數(shù)據(jù)由78變?yōu)?9左右，增加11ppm；化合物1-5中苷元由于28位羧基和糖連接有酯苷鍵，也發(fā)生苷化位移，化學(xué)位移值由180變?yōu)?76左右，減少4ppm。因此化合物2-5是3，28位都連有糖的雙糖鏈苷?；衔?-5中糖的個數(shù)可通過13C-NMR譜95-115之間碳的個數(shù)確定，進(jìn)一步地，通過HSQC-TOCSY二維譜表征糖的種類木糖，葡萄糖醛酸，鼠李糖，阿拉伯糖通，化合物5的HSQC-TOCSY圖譜見圖2。通過HMBC譜確定糖與糖之間連接位置以及化合物3,5,1中乙酰氧基連接位置、甲氧基連接位置?；衔?的HMBC圖譜見圖3和圖4。舉例如下：化合物5為白色粉末，Liebermann-Burchard和Molish反應(yīng)陽性，提示該化合物可能為甾體或三萜皂苷類化合物。ESI-...