本發(fā)明涉及一種三萜組合物的用途，尤其是在制備治療急性肝損傷藥物中的應用。

背景技術：

急性肝損傷(acute hepatic injury)是臨床上常見的危害人類健康的疾病，指患者在無慢性肝病的基礎上，由各種病因導致肝臟細胞損傷而發(fā)生的疾病。急性肝損傷的基本機制包括化學機制和免疫機制兩大方面?；瘜W機制主要涉及與細胞色素P450解毒相關的各種活性物質，后者能減低細胞內酶的活性、改變細胞膜通透性、影響線粒體功能或破壞細胞間離子平衡。免疫機制主要指免疫活性細胞間的協(xié)調作用，由細胞因子、一氧化氮、補體等介導。細胞凋亡也是急性肝損傷的主要病理機制。目前，化學性肝損傷模型主要以D-氨基半乳糖、四氯化碳(CCl₄)、乙醇等造模，免疫性肝損傷模型主要以刀豆蛋白(Con A)、卡介苗(BCG)等造模。

現(xiàn)代醫(yī)學對于急性肝損傷的基礎治療主要包括指保肝、降酶、退黃。急性肝損傷治療的關鍵在于保肝治療的同時針對不同病因進行治療。對于藥物性急性肝損傷應立即停用相關藥物、可疑藥物；對于感染性肝損傷應積極控制感染、并發(fā)膽囊炎膽結石時及時消炎利膽解除膽道梗阻；缺血性肝損傷則應積極糾正心衰、恢復心輸出量、糾正缺血缺氧狀態(tài)、注意保護其他臟器在低灌注中的損傷；妊娠急性脂肪肝除保肝基本治療外應盡快終止妊娠。

中醫(yī)學認為肝病的致病因素主要有疫毒、飲食或飲酒、濕熱外邪、體虛勞倦及情志不暢等。研究中藥復方治抗肝損傷的文獻報道，發(fā)現(xiàn)其功能大致包括疏肝理氣、活血化瘀、補腎健脾、益氣養(yǎng)血、清熱利濕解毒等作用。國內外許多學者對傳統(tǒng)中藥單味藥及其有效成分的抗肝損傷、促進肝再生作用進行了大量的研究，進一步肯定了中藥的地位及作用，如柴胡、郁金、茵陳、五味子、大黃、冬蟲夏草、苦參、山豆根等許多生藥均有顯著的抗肝細胞損傷作用。本發(fā)明首次報道了一種三萜組合物在制備治療急性肝損傷藥物方面的應用。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術問題在于提供一種三萜組合物的用途，具有改善急性肝損傷的功能，可用于制備治療急性肝損傷藥物。

本發(fā)明所述的三萜組合物由如下重量份比例的三萜類化合物組成：

本發(fā)明所述三萜組合物在制備治療急性肝損傷藥物的應用。

D-氨基半乳糖是肝細胞磷酸尿嘧啶核苷干擾劑，競爭生成二磷酸尿苷半乳糖使磷酸尿苷耗竭，導致物質代謝障礙，造成肝彌漫性壞死和炎癥。D-氨基半乳糖還可通過在機體內產(chǎn)生自由基、引起脂質過氧化連鎖反應，而加劇肝細胞的損傷。D-氨基半乳糖是目前常用的肝毒劑，其模型的肝臟病理改變與人類病毒性肝炎的病理改變很接近，并且模型重復性好。

機體正常情況下，谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶存在于肝細胞線粒體中；肝細胞受損時，ALT、AST被釋放出來，引起血清ALT、AST活性增高，故其活性的高低在一定范圍內反映肝細胞損傷程度的大小。SOD是機體內存在的天然抗氧化劑，能消除自由基進而阻止其與膜脂質、膜蛋白進行反應，故其活性的高低可間接的反映出機體清除自由基的能力。MDA是自由基進攻生物膜所產(chǎn)生的脂質過氧化產(chǎn)物，其在血清及組織中的含量可以反映脂質過氧化程度，從而間接的反映出細胞受自由基攻擊和損傷的程度。NO是與肝細胞的保護和損傷相關的多功能重要介質，由肝臟實質和間質細胞通過誘導型NO合酶(iNOS)催化生成，能抑制肝細胞線粒體呼吸和DNA的合成。肝細胞受損后，肝組織內內毒素使iNOS的表達增加，肝臟組織產(chǎn)生大量的NO，從而加重肝細胞的損傷。

D-氨基半乳糖誘發(fā)的大鼠肝損傷模型，其肝臟病理改變與人類病毒性肝炎的病理改變很接近，而且實驗結果表明：模型對照組與正常對照組比較，血清ALT、AST、TBIL、MDA及NO含量均明顯升高，血清SOD含量明顯降低。模型對照組大鼠肝細胞腫大，肝小葉中央?yún)^(qū)呈現(xiàn)多發(fā)彌漫性片狀壞死，肝細胞脂肪變性，部分血管充血且炎性細胞浸潤明顯。上述實驗證明大鼠急性肝損傷模型成功地建立。三萜組合物能明顯抑制D-氨基半乳糖所致急性肝損傷大鼠血清中ALT、AST、TBIL的活性，升高血清SOD，降低MDA含量，有效的改善D-氨基半乳糖所致急性肝損傷大鼠的肝功能，其對受損肝臟的保護機制可能與保護肝細胞膜完整性、增強機體自由基清除能力、減輕脂質過氧化有關。該研究為其在臨床上的應用奠定了良好的實驗基礎，具有重要的臨床研究及應用價值。

附圖說明

圖1三萜組合物對D-氨基半乳糖急性肝損傷大鼠血清ALT含量的影響

圖2三萜組合物對D-氨基半乳糖急性肝損傷大鼠血清AST含量的影響

圖3三萜組合物對D-氨基半乳糖急性肝損傷大鼠血清TBIL含量的影響

圖4三萜組合物對D-氨基半乳糖急性肝損傷大鼠血清MDA含量的影響

圖5三萜組合物對D-氨基半乳糖急性肝損傷大鼠血清SOD含量的影響

圖6三萜組合物對D-氨基半乳糖急性肝損傷大鼠血清NO含量的影響

具體實施方式

按以下重量份數(shù)取各化合物：

粉碎，混合均勻即可。

然后將制備得到的三萜組合物進行動物實驗。

1.實驗動物 雄性SPF級SD大鼠，體重200±20g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。

2.動物分組 健康SD雄性大鼠50只，適應性喂養(yǎng)一周后，標號，稱重。依照隨機數(shù)字表，按體質量隨機分為5組，每組10只，即正常組(A)、模型對照組(B)、0.5％CMC-Na助溶劑對照組(C)、陽性對照組(D)、三萜組合物組(E)。

3.造模及給藥 各組動物灌胃給藥，具體如下：A、B組給予蒸餾水，4.00mL/只；C組給予0.5％CMC-Na 水溶液，4.00mL/只；D組給予甘草酸二胺，100mg/kg體重；E組給予三萜組合物，100mg/kg體重。各組動物第6次給藥后12小時，除正常組外，各組大鼠經(jīng)腹腔注射D-氨基半乳糖(600mg/kg體重)1次，誘導急性肝損傷模型(正常對照組腹腔注射等量生理鹽水)。大鼠造模后禁食不禁水，于第七次給藥后24h測定結果。

4.取材及指標測定 大鼠經(jīng)腹腔注射10％水合氯醛，麻醉后腹主動脈取血，分取血清，按試劑盒要求測定ALT、AST、TBIL、MDA、SOD、NO水平。取血后及時分離肝臟，生理鹽水沖洗瘀血，取肝右葉，10％甲醛溶液固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，光學顯微鏡下觀察肝臟病理組織學變化。

5.統(tǒng)計方法 實驗所得數(shù)據(jù)用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料用表示，組間差異用t檢驗。以P＜0.05具有統(tǒng)計學差異，P＜0.01具有統(tǒng)計學顯著差異。

6.結果分析

(1)三萜組合物對D-氨基半乳糖急性肝損傷大鼠血清ALT、AST及TBIL含量的影響各組大鼠血清ALT、AST、TBIL含量檢測結果顯示：與正常組比較，模型對照組、CMC-Na助溶劑對照組大鼠血清中ALT、AST及TBIL含量呈顯著升高趨勢(P＜0.01)。與模型對照組比較，三萜組合物組、甘草酸二胺組大鼠血清中ALT、AST含量均顯著降低(P＜0.01)TBIL含量也明顯降低(P＜0.05)。見表1。

表1各組血清中ALT、AST及TBIL含量檢測結果

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組比較，^#P＜0.05，^##P＜0.01。

(2)三萜組合物對D-氨基半乳糖急性肝損傷大鼠血清MDA、SOD及NO含量的影響各組大鼠血清MDA、SOD及NO含量檢測結果顯示：與正常組比較，模型對照組大鼠血清中MDA、NO含量呈顯著升高趨勢(P＜0.01)，血清中SOD呈顯著下降趨勢(P＜0.01)。與模型對照組比較，三萜組合物組血清MDA含量顯著降低(P＜0.01)，血清SOD含量顯著升高(P＜0.01)，血清NO含量呈顯著降低(P＜0.01)。見表2。

表2各組血清中MDA、SOD及NO含量檢測結果

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組比較，^#P＜0.05，^##P＜0.01。

(3)肝臟病理切片結果

肉眼觀察，正常組大鼠肝臟新鮮，色澤紅潤，質地柔軟，形態(tài)大小正常，未見有瘀血或壞死；模型對照組及CMC-Na對照組大鼠肝臟顏色偏暗紅，且有不同程度的白點，個別肝臟色澤暗黃、水腫嚴重；其他各受試藥物干擾組肝臟損傷程度較模型對照組及CMC-Na對照組更輕。

光鏡下可見正常組大鼠肝組織及細胞形態(tài)結構完整，未見變性、壞死；模型對照組及CMC-Na溶質對照組肝細胞大部分壞死，肝細胞腫脹、脂肪變性明顯，可見較多點環(huán)狀壞死、灶狀壞死，甚至出現(xiàn)橋接壞死，炎性細胞浸潤明顯；陽性對照組肝細胞病變不明顯，肝細胞輕度腫脹，部分肝細胞變性、僅有少量炎性細胞浸潤。三萜組合物組肝細胞變性、壞死較輕，壞死病灶明顯減少，多為散在分布，且以點狀壞死為主，匯管區(qū)炎性細胞浸潤亦明顯減輕，有部分水腫現(xiàn)象，肝索結構完整、肝竇擴張不明顯。計數(shù)資料采用秩和檢驗，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。各組肝細胞損傷病理分級見表3(肝細胞損傷病理分級標準如下：-或±表示正?；蜉p度變性，計0分；+表示點狀壞死，匯管區(qū)細胞浸潤，計1分；++表示肝細胞呈小灶或灶狀壞死，計2分；+++為肝細胞片狀壞死，計3分。遵循雙盲法要求，每張病理切片由兩位病理技師分別計分)。

表3三萜組合物組對D-氨基半乳糖所致急性肝損傷大鼠肝臟病理改變的影響

注：與正常對照組相比，P＞0.05；與病理模型組相比，^▲P＜0.05，^▲▲P＜0.01

綜上所述，三萜組合物組能顯著明顯抑制D-氨基半乳糖所致急性肝損傷大鼠血清中ALT、AST、TBIL的活性，升高血清SOD，降低MDA含量，對D-氨基半乳糖所致急性肝損傷大鼠的肝功能有顯著的保護作用。

以上實施例顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，而不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍，在不脫離本發(fā)明范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的范圍內。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。