一種白酒中角鯊烯含量測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及白酒成分檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種白酒中角鯊烯含量測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 角鯊烯是一種具有生物活性的三萜類物質(zhì)，Reddy LH等人發(fā)現(xiàn)角鯊烯具有抗 癌、抗腫瘤、抗氧化等生物活性（Squalene:A natural triterpene for use in disease management and therapy. Advanced drug delivery reviews, 2009, 61(15), 1412-1426), 其大量存在于深海鯊魚的肝臟中。
[0003] 雖然角鯊烯的檢測技術(shù)已經(jīng)逐步得到發(fā)展與推廣，但是，白酒中角鯊烯含量甚微， 含量大多在幾百個ng/L到幾十個μ g/L不等，且其分子量較大（分子量為410)，屬于較難 揮發(fā)的有機物，且該物質(zhì)是不飽和三萜，在空氣中暴露過久易氧化。因此，其定性定量檢測 存在一定困難。并且，現(xiàn)有技術(shù)中還未有文獻報道白酒中的角鯊烯檢測方法。
[0004] 采用直接進樣、固相微萃取、攪拌棒吸附萃取不能實現(xiàn)其在白酒中的定性、定量檢 測，雖然液液萃取可以較大程度的富集待檢測樣中的痕量物質(zhì)，但是其操作繁瑣，使用的有 機溶劑量大，待檢樣需求量大，操作復(fù)雜，檢測成本較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種白酒中角鯊烯含量測 定方法，在液液萃取的基礎(chǔ)上改進后，采用多級液液微萃取的方式對白酒中的角鯊烯進行 萃取，避免痕量物質(zhì)不被其它風(fēng)味物質(zhì)干擾，提高了對白酒中角鯊烯的檢出限以及準(zhǔn)確性， 同時，使用的酒樣、萃取的有機溶劑大大減少，操作步驟簡單，簡化了萃取步驟，節(jié)省了前處 理時間，降低了檢測成本。
[0006] 具體是通過以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0007] -種白酒中角鯊烯含量測定方法，是將酒樣進行稀釋之后，再采用多級微萃取處 理，建立角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)曲線，并將多級微萃取處理獲得有機相采用氣相色譜-質(zhì)譜分析儀對 其進行分析，再與角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)曲線進行對比分析，具體包括以下步驟：
[0008] (1)白酒稀釋：用煮沸并冷卻至室溫的超純水將待測白酒樣品稀釋至10-20% v〇l，待用；
[0009] (2)多級萃取：按照步驟1)稀釋后酒樣的質(zhì)量體積比為1:3稱取氯化鈉，并將氯 化鈉置于樣品瓶中，再向樣品瓶中加入稀釋后酒樣，并加入1/18稀釋后酒樣的萃取劑，旋 緊樣品瓶瓶蓋，并將樣品瓶進行振蕩處理I. 5-3min，再將樣品瓶靜置處理10-15min，獲得 分層樣液，并采用吸管將樣品瓶中的上層有機相吸取出來，得第一次萃取有機相；再向其中 加入1/36稀釋后酒樣的萃取劑，旋緊樣品瓶瓶蓋，再將樣品瓶進行振蕩處理I. 5-3min，再 將樣品瓶靜置處理ll_17min，獲得分層樣液，再采用吸管將樣品瓶中的上層有機相吸取出 來，得第二次萃取有機相；將第一次萃取有機相與第二次萃取有機相進行合并，獲得有機 相，并將有機相采用氮氣吹，使得有機相濃縮至1/5,即可獲得待測有機相；
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)曲線建立：吸取一定濃度的角鯊烯加入到模擬白酒中，并用等體積的模 擬白酒進行逐級稀釋，配制成一系列濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次對每一濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶 液按照步驟2)多級萃取，獲得有機相，并對有機相采用GC-MS檢測，檢測條件為SIM模式定 量，定量離子為69,并以角鯊烯不同系列濃度為縱坐標(biāo)，角鯊烯不同系列濃度對應(yīng)的峰面積 為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0011] (4)檢測分析：將步驟2)待測有機相IyL進氣相色譜分析，采取不分流進樣，氣 相色譜進樣口溫度為280°C，毛細(xì)管色譜柱為DB-5MS，30mX0. 25_Χ0. 25μπι，載氣為He， 流速lmL/min汽相色譜的升溫條件為：160°C恒溫lmin，再以10°C /min的升溫速度升溫至 280°C，恒溫IOmin ;MS條件：EI電離源，離子源溫度230°C，電子能量70eV，采用為SM模式 定量，定量離子為69,并將獲得的結(jié)果與步驟3)獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線進行對比分析，即可獲得 白酒中角鯊烯的含量。
[0012] 所述的用上述煮沸處理過的水稀釋至酒精度為15% vol。
[0013] 所述的萃取劑為乙醚、戊烷中的一種或兩種的混合物。
[0014] 所述的乙醚、戊烷兩種混合物的混合比為任意比。
[0015] 所述的模擬白酒是10-20% vol的乙醇水溶液。
[0016] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)效果體現(xiàn)在：
[0017] 本發(fā)明通過對萃取級數(shù)，酒樣稀釋度，有機溶劑種類及色譜柱選擇等條件進行優(yōu) 化，建立了多級液液微萃?。∕ultistage-LLME)結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS)測定白酒中 微量角鯊烯的方法。該方法具有簡便、準(zhǔn)確、靈敏、快速的優(yōu)點。角鯊烯的檢測限為0.17 μ g/ L，定量限為0.55 μ g/L，測定11種白酒中的角鯊烯的回收率為85. 12% -113. 64%，相對標(biāo) 準(zhǔn)偏差小于13. 80%，能夠滿足白酒中含量在ng/L或μ g/L級別的微量生物活性三萜的定 量分析。獲得的線性相關(guān)系數(shù)R2大于0.99。
[0018] 該方法對角鯊烯具有較寬的線性范圍，在線性范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系（R2大 于0. 99)，以3倍信噪比時的濃度計算角鯊烯的檢測限（LOD)，以10倍信噪比時的濃度計算 定量限（LOQ)，表1中列出了角鯊烯的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、線性范圍、檢測限、定量限等。
[0019] 表 1
【主權(quán)項】
1. 一種白酒中角鯊烯含量測定方法，是將酒樣進行稀釋之后，再采用多級微萃取處理， 建立角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)曲線，并將多級微萃取處理獲得有機相采用氣相色譜-質(zhì)譜分析儀對其進 行分析，再與角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)曲線進行對比分析，其特征在于，具體包括以下步驟： (1) 白酒稀釋：用煮沸并冷卻至室溫的超純水將待測白酒樣品稀釋至10-20%vol，待 用； (2) 多級萃?。喊凑詹襟E1)稀釋后酒樣的質(zhì)量體積比為1:3稱取氯化鈉，并將氯化鈉 置于樣品瓶中，再向樣品瓶中加入稀釋后酒樣，并加入1/18稀釋后酒樣的萃取劑，旋緊樣 品瓶瓶蓋，并將樣品瓶進行振蕩處理I. 5-3min，再將樣品瓶靜置處理10-15min，獲得分層 樣液，并采用吸管將樣品瓶中的上層有機相吸取出來，得第一次萃取有機相；再向其中加入 1/36稀釋后酒樣的萃取劑，旋緊樣品瓶瓶蓋，再將樣品瓶進行振蕩處理I. 5-3min，再將樣 品瓶靜置處理Il_17min，獲得分層樣液，再采用吸管將樣品瓶中的上層有機相吸取出來，得 第二次萃取有機相；將第一次萃取有機相與第二次萃取有機相進行合并，獲得有機相，并將 有機相采用氮氣吹，使得有機相濃縮至1/5,即可獲得待測有機相； (3) 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立：吸取一定濃度的角鯊烯加入到模擬白酒中，并用等體積的模擬白 酒進行逐級稀釋，配制成一系列濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次對每一濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液按 照步驟2)多級萃取，獲得有機相，并對有機相采用GC-MS檢測，質(zhì)譜條件：EI電離源，離子 源溫度230°C，電子能量70eV，采用SM模式定量，定量離子為69,并以角鯊烯不同系列濃度 為縱坐標(biāo)，角鯊烯不同系列濃度對應(yīng)的峰面積為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線； (4) 檢測分析：將步驟2)待測有機相l(xiāng)yL進氣相色譜分析，采取不分流進樣，氣相 色譜進樣口溫度為280°C，毛細(xì)管色譜柱為DB-5MS，30mX0? 25mmX0? 25ym，載氣為He，流 速lmL/min;氣相色譜的升溫條件為：160°C恒溫lmin，再以KTC/min的升溫速度升溫至 280°C，恒溫IOmin;MS條件：EI電離源，離子源溫度230°C，電子能量70eV，采用為SM模式 定量，定量離子為69,并將獲得的結(jié)果與步驟3)獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線進行對比分析，即可獲得 白酒中角鯊烯的含量。
2. 如權(quán)利要求1所述的白酒中角鯊烯含量測定方法，其特征在于，所述的用上述煮沸 處理過的水稀釋至酒精度為15%vol。
3. 如權(quán)利要求1所述的白酒中角鯊烯含量測定方法，其特征在于，所述的萃取劑為乙 醚、戊烷中的一種或兩種的混合物。
4. 如權(quán)利要求4所述的白酒中角鯊烯含量測定方法，其特征在于，所述的乙醚、戊烷兩 種混合物的混合比為任意比。
5. 如權(quán)利要求1所述的白酒中角鯊烯含量測定方法，其特征在于，所述的模擬白酒是 10-20%vol的乙醇水溶液。
【專利摘要】本發(fā)明涉及白酒成分檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種白酒中角鯊烯含量測定方法，通過對萃取級數(shù)，酒樣稀釋度，有機溶劑種類及色譜柱選擇等條件進行優(yōu)化，建立了多級液液微萃取(Multistage-LLME)結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)測定白酒中微量角鯊烯的方法。該方法具有簡便、準(zhǔn)確、靈敏、快速的優(yōu)點。角鯊烯的檢測限為0.17μg/L，定量限為0.55μg/L，測定11種白酒中的角鯊烯的回收率為85.12％-113.64％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于13.80％，能夠滿足白酒中含量在ng/L或μg/L級別的微量生物活性三萜的定量分析。
【IPC分類】G01N30-88
【公開號】CN104792906
【申請?zhí)枴緾N201510155894
【發(fā)明人】胡光源, 林琳, 汪地強, 王莉
【申請人】貴州茅臺酒股份有限公司
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年4月3日