流體技術(shù)測定食品中甜蜜素含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品中添加劑成分檢測的技術(shù)領(lǐng)域，具體提供一種利用超臨界C02流 體技術(shù)測定食品中甜蜜素含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前對于食品中常用到的甜味劑一一甜蜜素，常用的分析測定方法均是利用氣相 色譜（國標(biāo)GB/T 5009. 97-2003)和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（SN/T 1948-2007)的技術(shù)進(jìn)行分 析和定量，但上述兩種技術(shù)對甜蜜素進(jìn)行分析時(shí)，存在有如下的缺失：
[0003] 1)利用氣相色譜方法進(jìn)行甜蜜素含量分析時(shí)，需要對甜蜜素進(jìn)行衍生化處理后， 才能在氣相或是液相質(zhì)譜聯(lián)用儀上進(jìn)行分析，但因試驗(yàn)過程繁瑣、前處理過程的化學(xué)反應(yīng) 不穩(wěn)定，會(huì)衍生出其他的化合物，而此類的非目標(biāo)性的衍生物會(huì)影響最終結(jié)果的判定，進(jìn)而 容易造成數(shù)據(jù)的不準(zhǔn)確性；此外，氣相色譜方法需用氮?dú)夂蜌錃庾鳛檩d氣和反應(yīng)氣，而氫氣 為易爆氣體，對試驗(yàn)室的安全造成不穩(wěn)定性因素。
[0004] 2)利用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行甜蜜素含量分析時(shí)，雖然其分析精確，但是設(shè)備 昂貴（200多萬人民幣），且操作要求高，需專業(yè)人員才能操作；而且利用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用 儀進(jìn)行分析時(shí)必須用有機(jī)試劑甲醇和乙酸作為甜蜜素衍生物的載體，不僅不環(huán)保，而且長 期操作會(huì)影響操作人員的健康。
[0005] 3)因設(shè)備的原理不同，氣相色譜只適合用于無極性到弱極性的分析物，液相質(zhì)譜 聯(lián)用儀則只適合用于中極性到強(qiáng)極性的分析物，但對于弱極性到中極性范圍的分析物，氣 相色譜和/或液相質(zhì)譜聯(lián)用儀則不能很好適用。因此氣相色譜和液相質(zhì)譜聯(lián)用儀在弱極性 到中極性范圍之間存在有技術(shù)缺陷，亟需改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了克服上述缺陷，本發(fā)明提供了一種利用超臨界C02流體技術(shù)測定食品中甜蜜 素含量的方法，該測定方法具有良好的分離度、靈密度、線性、精密度和準(zhǔn)確度，能夠準(zhǔn)確測 定待測食品中甜蜜素的含量。
[0007] 本發(fā)明為了解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種利用超臨界0)2流體技術(shù) 測定食品中甜蜜素含量的方法，包括以下步驟：
[0008] 步驟1):配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線；
[0009] 步驟2):從待測食品中提取甜蜜素，并配制樣品溶液；
[0010] 步驟3):采用色譜檢測器對上述步驟2)中所配制的樣品溶液進(jìn)行檢測，并將樣品 溶液的測定結(jié)果與所述標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線進(jìn)行比對，得到樣品溶液中的甜蜜素含量；
[0011] 另所述色譜檢測器的檢測條件為：所用色譜柱采用：直徑3. 0_、柱長100_、填料 粒徑I. 8um ;流動(dòng)相為超臨界二氧化碳流體；分析時(shí)間不超過3min ;進(jìn)樣量為1~10 μ 1 ;柱 溫為40~60°C ;紫外檢測波長為220~250nm ;背壓為1800~2200psi。
[0012] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟1)中，配制標(biāo)準(zhǔn)溶液、以及繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液曲 線的實(shí)現(xiàn)方法為：首先，量取濃度為lOmg/ml的甜蜜素原液5ml，并轉(zhuǎn)移至50ml的容量瓶 中，用超純水定容，配制成濃度為l〇〇〇mg/L的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；其次，分別量取所述甜蜜 素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2ml、4ml、6ml、8ml、IOml并轉(zhuǎn)移至五個(gè)100mL的容量瓶中，再分別用超純水定 容，配制成濃度分別為20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液系列； 然后，采用色譜檢測器對上述五個(gè)甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液系列進(jìn)行檢測，得到甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液的 五次平行測量結(jié)果；最后，以上述五次平行測量結(jié)果中的目標(biāo)峰的峰面積為縱坐標(biāo)（y)，甜 蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的濃度為橫坐標(biāo)（X)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0013] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟2)中，樣品溶液的配制方法為：步驟2a)， 利用超純水對質(zhì)量為m的待測食品進(jìn)行甜蜜素的提取處理，得到體積為V 1的上清液；步 驟2b)，在上述上清液中依次加入硫酸溶液、次氯酸鈉溶液和正己烷后進(jìn)行柱前衍生化處 理，棄去下層水層部分，得到衍生化的提取液；步驟2c)，對衍生化的提取液進(jìn)行中和反應(yīng) 處理，得到凈化后的提取液，即為樣品溶液；所述色譜檢測器對所述凈化后的提取液進(jìn)行檢 測。
[0014] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟2a)中提取上清液的具體操作方法為：首先， 取質(zhì)量m為3~6g的待測食品放入50ml的離心管中，再于離心管中加入20ml的超純水， 超聲振動(dòng)萃取25~45min后，進(jìn)行離心處理，收集全部上清液I ;然后，再向上述去除上清 液I后的沉淀物中加入IOml的超純水，超聲振動(dòng)萃取25~45min后，進(jìn)行離心處理，收集 全部上清液II ;最后，將上清液I和上清液II進(jìn)行混合，待用。
[0015] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，在提取所述上清液的具體操作方法中，兩次超聲振動(dòng) 萃取的時(shí)間均為30min ;兩次離心處理的轉(zhuǎn)速均為4000r/min，且兩次離心處理時(shí)間均為 IOmin0
[0016] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟2b)中得到衍生化的提取液的具體操作方法 為：取上清液I和上清液II的混合液于100mL分液漏斗中；再依次加入2ml的硫酸溶液、 Iml的次氯酸鈉溶液、以及5ml的正己烷溶液，用力震蕩混勻，棄去下層水層，即得到衍生化 的提取液。
[0017] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟2c)中對衍生化的提取液進(jìn)行中和反應(yīng)處理 的具體操作方法為：在所述衍生化的提取液中加入濃度為5%的碳酸氫鈉溶液25ml，震蕩 混勻后即得到凈化后的提取液。
[0018] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述色譜檢測器的檢測條件為：分析時(shí)間為3min，進(jìn) 樣量為5 μ 1，柱溫為50°C，紫外檢測波長為230nm，背壓為2000psi。
[0019] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，還包括步驟4):通過以下公式計(jì)算得到待測食品中的 甜蜜素含量：（甜蜜素的質(zhì)量濃度*^/111。
[0020] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明所提供的利用超臨界CO2流體技術(shù)測定食品中甜蜜 素含量的方法具有如下優(yōu)點(diǎn)：①本發(fā)明通過對色譜檢測器的測定條件進(jìn)行改進(jìn)，采用超臨 界CO 2流體為流動(dòng)相，并配以優(yōu)化其它測定參數(shù)，從而使本發(fā)明測定方法具有良好的分離 度、靈密度、線性、精密度和準(zhǔn)確度，能夠準(zhǔn)確的測定待測食品中的甜蜜素含量；②相較于傳 統(tǒng)氣相色譜儀和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，本發(fā)明所用的色譜檢測器采用超臨界〇) 2流體為流 動(dòng)相，不僅環(huán)保，又不會(huì)對操作人員的健康及人身安全造成影響；③相較于傳統(tǒng)氣相色譜的 分析物出峰時(shí)間需要4min左右，液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的分析物出峰時(shí)間需要5min左右，本 發(fā)明測定方法的分析物出峰時(shí)間只需要I. 2min，分析非常的快，提高了檢測效率。
【附圖說明】
[0021] 圖1為采用本發(fā)明測定方法來檢測得到的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；
[0022] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例2中雞肉粉樣品中甜蜜素的色譜圖；
[0023] 圖3為圖2中雞肉粉樣品在1. 153分鐘時(shí)出的色譜峰的光譜圖；
[0024] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例3中辣椒粉樣品中甜蜜素的色譜圖；
[0025] 圖5為圖4中辣椒粉樣品在1. 156分鐘時(shí)出的色譜峰的光譜圖；