本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于體外診斷試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑及試劑盒。

背景技術(shù)：
體外診斷試劑是可單獨(dú)使用或與儀器、器具、設(shè)備或系統(tǒng)組合使用，對人體樣本在體外進(jìn)行檢查，用于對樣本中的某種成分進(jìn)行檢測或測量的體外診斷檢驗程序的化學(xué)、生物學(xué)或免疫學(xué)等物質(zhì)。體外診斷試劑系統(tǒng)包括檢測試劑、試劑用品、校準(zhǔn)物(品)、質(zhì)量控制物(品)等諸多組成部分。體外診斷試劑已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)科研和臨床檢驗，是常規(guī)醫(yī)療過程中不可或缺的重要環(huán)節(jié)。質(zhì)量穩(wěn)定可靠的體外診斷試劑能夠提供準(zhǔn)確的臨床檢驗數(shù)據(jù)，在疾病的預(yù)防和控制以及疾病的及時診治方面發(fā)揮了重要作用。體外診斷試劑的品種和種類繁多，從臨床專業(yè)分類可分為血液學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞組織學(xué)及分子生物學(xué)等；從性狀上可分為液體、干粉、凍干培養(yǎng)基、檢測條等；以方法學(xué)分類有酶免、放免、免疫組化、免疫細(xì)胞化學(xué)、熒光和化學(xué)發(fā)光等；從檢測性能上可分為定性、半定量、定量；從檢測方法上可分為化學(xué)顯色法試劑、免疫比濁法試劑、酶法試劑、ELISA法試劑、膠體金法試劑、培養(yǎng)基類試劑、流式分析儀配套用試劑、化學(xué)發(fā)光免疫測定試劑和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)試劑等。對于眾多品種或種類的體外診斷試劑，其生產(chǎn)工藝差異很大，對產(chǎn)品的質(zhì)量要求也各有側(cè)重；同時，由于試劑的生產(chǎn)模式以及研發(fā)生產(chǎn)人員的技術(shù)能力不同，很容易導(dǎo)致各廠家的試劑產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊。其中，非常重要的質(zhì)量問題就是產(chǎn)品的穩(wěn)定性。在目前階段由于知識的普及和技術(shù)的廣泛傳播，普通技術(shù)人員可以比較容易找到生產(chǎn)某種診斷試劑的技術(shù)原理和方法并制成產(chǎn)品。新配制的診斷試劑一般可以達(dá)到基本技術(shù)要求。但如何提高試劑的穩(wěn)定性常常成為研發(fā)的難點(diǎn)。作為體外診斷試劑必須具備的重要技術(shù)指標(biāo)，穩(wěn)定性是確保試劑產(chǎn)品在使用過程中安全有效的重要指標(biāo)。穩(wěn)定性研究需根據(jù)試劑產(chǎn)品的理化性質(zhì)，設(shè)計合理的穩(wěn)定劑成分和含量，以確保試劑產(chǎn)品的主要質(zhì)量指標(biāo)隨時間的變化持續(xù)保持穩(wěn)定，進(jìn)而提高試劑產(chǎn)品的有效期。因此，體外診斷試劑產(chǎn)品中穩(wěn)定劑的選擇和添加是一門非常復(fù)雜的學(xué)問。中國專利申請(公開號：CN104946616A，名稱：一種用于體外診斷試劑的通用固體穩(wěn)定劑及其使用方法)公開了一種用于體外診斷試劑的通用固體穩(wěn)定劑。其由水溶液凍干后得到，所述的原料水溶液包含牛血清白蛋白、EDTA鈉鹽或EDTA鉀鹽、蔗糖或甘氨酸或甘露糖、吐溫20或吐溫40或吐溫80或聚乙烯吡咯烷酮、環(huán)糊精和PEG2000或PEG6000或PEG8000。該發(fā)明提供的穩(wěn)定劑應(yīng)該對增加體外診斷試劑的穩(wěn)定性起到了很好的作用，但是還有其它一些能夠提高穩(wěn)定性的物質(zhì)，該發(fā)明并未涉及。并且，所述穩(wěn)定劑為凍干粉，其在使用時需要配制，使用并不方便。中國專利(公開號：CN104195221A，名稱：一種用于葡萄糖測定試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑)公開了一種用于葡萄糖測定試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑，其穩(wěn)定了葡萄糖測定試劑檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。但是該發(fā)明提供的穩(wěn)定劑應(yīng)用范圍比較窄，只是改善了葡萄糖測定試劑的穩(wěn)定性。針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，有必要開發(fā)新的穩(wěn)定劑來進(jìn)一步豐富體外診斷試劑的穩(wěn)定性手段。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種用于體外診斷試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中體外診斷試劑穩(wěn)定性不高的缺陷。本發(fā)明的另一個目的是提供一種包括上述用于體外診斷試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑的試劑盒。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種用于體外診斷試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑，其包含封閉劑、表面活性劑、小分子有機(jī)還原劑、核酸成分穩(wěn)定劑、生物活性物質(zhì)保護(hù)劑和生物防腐劑；所述封閉劑的含量為1～55％(m/v)，所述表面活性劑的含量為10.5～65％(v/v)，所述有機(jī)小分子還原劑的含量為0.02～1％(m/v)，所述核酸成分穩(wěn)定劑的含量為0.3～4％(m/v)，所述生物活性物質(zhì)保護(hù)劑的含量為10～50％(m/v)，所述生物防腐劑的含量為0.5～5％(v/v)，余量為超純水。在本發(fā)明提供的復(fù)合穩(wěn)定劑中，所述封閉劑優(yōu)選為牛血清白蛋白、酪蛋白、明膠和脫脂奶粉中的一種或多種。更優(yōu)選地，所述封閉劑為牛血清白蛋白或/和酪蛋白，并且該封閉劑的含量可以為7～18％(m/v)。最優(yōu)選地，所述封閉劑為牛血清白蛋白和酪蛋白，其中，所述牛血清白蛋白的含量可以為10％(m/v)，并且所述酪蛋白的含量可以為1％(m/v)。在本發(fā)明提供的復(fù)合穩(wěn)定劑中，所述表面活性劑用于降低所述復(fù)合穩(wěn)定劑的表面張力。優(yōu)選地，所述表面活性劑為吐溫20、吐溫60、吐溫80、丙二醇、丙三醇和聚乙二醇PEG中的一種或多種，其中聚乙二醇PEG包括但不限于PEG2000、PEG6000、PEG8000等。更優(yōu)選地，所述表面活性劑為吐溫20、吐溫60、吐溫80和丙二醇中的一種或多種。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述表面活性劑為吐溫20或/和丙二醇，并且該表面活性劑的含量為11～52％(v/v)。最優(yōu)選地，所述表面活性劑為吐溫20和丙二醇，其中，所述吐溫20的含量可以為2％(v/v)，并且所述丙二醇的含量可以為50％(v/v)。在本發(fā)明提供的復(fù)合穩(wěn)定劑中，所述小分子有機(jī)還原劑用于蛋白質(zhì)中二硫鍵的還原，可用于阻止蛋白質(zhì)中的半胱氨酸之間所形成的蛋白質(zhì)分子內(nèi)或分子間二硫鍵。優(yōu)選地，所述有機(jī)小分子還原劑包括但不限于硫醇類還原劑。更優(yōu)選地，所述有機(jī)小分子還原劑為二硫蘇糖醇、巰基乙酸和2-巰基乙醇(即β-巰基乙醇)中的一種或多種，并且該有機(jī)小分子還原劑的含量為0.03～0.8％(m/v)。最優(yōu)選地，所述有機(jī)小分子還原劑為二硫蘇糖醇，并且其含量可以為0.03％(m/v)。在本發(fā)明提供的復(fù)合穩(wěn)定劑中，所述核酸成分穩(wěn)定劑用于穩(wěn)定核酸類成分。優(yōu)選地，所述核酸成分穩(wěn)定劑采用硼酸鹽，包括但不限于偏硼酸鹽、原硼酸鹽、多硼酸鹽等。更優(yōu)選地，所述核酸成分穩(wěn)定劑為多硼酸鹽，如四硼酸鈉、四硼酸鉀等，并且該核酸成分穩(wěn)定劑的含量可以為0.76～3％(m/v)。最優(yōu)選地，所述核酸成分穩(wěn)定劑為四硼酸鈉，并且其含量可以為0.76％(m/v)。在本發(fā)明提供的復(fù)合穩(wěn)定劑中，所述生物活性物質(zhì)保護(hù)劑對生物活性物質(zhì)起到保護(hù)作用。優(yōu)選地，所述生物活性物質(zhì)保護(hù)劑采用非還原糖，包括但不限于海藻糖、蔗糖、淀粉和纖維素中的一種或多種，并且其含量可以為10～20％(m/v)。更優(yōu)選地，所述生物活性物質(zhì)保護(hù)劑為海藻糖，并且其含量可以為20％(m/v)。在本發(fā)明提供的復(fù)合穩(wěn)定劑中，所述生物防腐劑優(yōu)選為納他霉素、聚賴氨酸、疊氮鈉、硫柳汞、ProClin150、ProClin300和Proclin950中的一種或多種，其中ProClin系列防腐劑的活性成分主要是2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(MCI)和5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮(CMCI)。更優(yōu)選地，所述生物防腐劑為ProClin150、ProClin300和ProClin950中的一種或多種，并且其含量可以為0.5～1％(v/v)。最優(yōu)選地，所述生物防腐劑為ProClin950，并且其含量可以為1％(v/v)。本發(fā)明提供的復(fù)合穩(wěn)定劑的制備方法是：1)按組分含量分別稱取所述封閉劑、小分子有機(jī)還原劑、核酸成分穩(wěn)定劑和生物活性物質(zhì)保護(hù)劑，將上述各組分充分溶解、混合，得溶液1；2)按組分含量分別量取所述表面活性劑和生物防腐劑，并加入到溶液1中，混勻，得溶液2；3)將溶液2用超純水進(jìn)行定容，即制得所述復(fù)合穩(wěn)定劑。另一方面，本發(fā)明還提供了一種包括上述用于體外診斷試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑的試劑盒。與現(xiàn)技術(shù)相比，本發(fā)明提供的復(fù)合穩(wěn)定劑的有益效果在于：提供了更多種類能改善穩(wěn)定性的物質(zhì)，豐富了提高穩(wěn)定性的手段；液體復(fù)合穩(wěn)定劑使用更方便；所述復(fù)合穩(wěn)定劑中各成分之間相互協(xié)同作用，從而可以長期儲存；并且能普遍應(yīng)用于各種體外診斷試劑，其對試劑的穩(wěn)定效果更好，有效地延長了試劑的有效期。附圖說明圖1為實施例1制得的復(fù)合穩(wěn)定劑用于肌酸激酶測定試劑檢測結(jié)果c-t曲線圖。圖2為實施例1制得的復(fù)合穩(wěn)定劑用于尿素測定試劑檢測結(jié)果c-t曲線圖。圖3為實施例1制得的復(fù)合穩(wěn)定劑用于丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑檢測結(jié)果c-t曲線圖。圖4為實施例2制得的復(fù)合穩(wěn)定劑用于肌酸激酶測定試劑檢測結(jié)果c-t曲線圖。圖5為實施例2制得的復(fù)合穩(wěn)定劑用于尿素測定試劑檢測結(jié)果c-t曲線圖。圖6為實施例2制得的復(fù)合穩(wěn)定劑用于丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑檢測結(jié)果c-t曲線圖。圖7為實施例3制得的復(fù)合穩(wěn)定劑用于肌酸激酶測定試劑檢測結(jié)果c-t曲線圖。圖8為實施例3制得的復(fù)合穩(wěn)定劑用于尿素測定試劑檢測結(jié)果c-t曲線圖。圖9為實施例3制得的復(fù)合穩(wěn)定劑用于丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑檢測結(jié)果c-t曲線圖。具體實施方式下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，這些實施例僅作為對本發(fā)明的說明，而不是用于對本發(fā)明的保護(hù)范圍進(jìn)行限制。在本發(fā)明的以下實施例中涉及到的試劑有：牛血清白蛋白，純度>98％，BR，由上海寶曼生物科技有限公司生產(chǎn)；酪蛋白，BR，由北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；海藻糖，純度>98％，BR，由江蘇寶萊生物科技有限公司生產(chǎn)；丙二醇，AR，由北京化工廠生產(chǎn)；吐溫20，AR，由Sigma生產(chǎn)；二硫蘇糖醇，AR，由Amresco生產(chǎn)；硼酸鈉，AR，Sigma生產(chǎn)；Proclin950，IVD，Sigma生產(chǎn)；肌酸激酶測定試劑、尿素測定試劑和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑，由本公司自行配制；質(zhì)控品，由英國朗道實驗診斷有限公司生產(chǎn)。實施例1本實施例制備的用于體外診斷試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑，其組成為：所述復(fù)合穩(wěn)定劑的制備方法是：1)按組分含量分別稱取牛血清白蛋白5g、酪蛋白2g、二硫蘇糖醇0.8g、硼酸鈉3g和海藻糖10g，將上述各組分在30mL的超純水中充分溶解、混合，得溶液1；2)按組分含量分別量取所述丙二醇20mL、吐溫202mL和ProClin9501mL，并加入到溶液1中，混勻，得溶液2；3)將溶液2用超純水進(jìn)行定容至100mL，即制得所述復(fù)合穩(wěn)定劑。實施例2本實施例制備的用于體外診斷試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑，其組成為：制備方法同實施例1。實施例3本實施例制備的用于體外診斷試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑，其組成為：制備方法同實施例1。實驗例1分別將實施例1制得的體外診斷試劑的復(fù)合穩(wěn)定劑加入到肌酸激酶測定試劑、尿素測定試劑和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑中的R1與R2試劑中。所述復(fù)合穩(wěn)定劑按10％(v/v)的量加入各體外診斷試劑中。同時取未加入復(fù)合穩(wěn)定劑的各體外診斷試劑用水稀釋10％(v/v)作為對照。所述各體外診斷試劑的質(zhì)控品為：肌酸激酶測定試劑：朗道質(zhì)控血清水平2，肌酸激酶靶值213U/L；朗道質(zhì)控血清水平3，肌酸激酶靶值588U/L；尿素測定試劑：朗道質(zhì)控血清水平2，尿素靶值7.16mmol/L；朗道質(zhì)控血清水平3，尿素靶值21.10mmol/L；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑：朗道質(zhì)控血清水平2，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶靶值36U/L；朗道質(zhì)控血清水平3，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶靶值136U/L。37℃、7天加速穩(wěn)定性試驗：1)取4℃儲存的體外診斷試劑對生化分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，并分別檢測相應(yīng)質(zhì)控品，所得檢測值為第0天的檢測值；2)將1)中體外診斷試劑分為兩組，一組加入復(fù)合穩(wěn)定劑，另一組不加復(fù)合穩(wěn)定劑，并同時放入37℃恒溫箱中；3)從放入37℃恒溫箱后1天開始，每天在生化分析儀上分別測定質(zhì)控品，直到第7天，結(jié)果如下表1-3所示：表1.肌酸激酶測定試劑檢測結(jié)果(單位：U/L)表2.尿素測定試劑檢測結(jié)果(單位：mmol/L)表3.丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑檢測結(jié)果(單位：U/L)實驗例2在本實驗例中，除加入的復(fù)合穩(wěn)定劑為實施例2制得的之外，其余操作與實驗例1中的一致，37℃、7天加速穩(wěn)定性試驗結(jié)果如下表4-6所示：表4.肌酸激酶測定試劑檢測結(jié)果(單位：U/L)表5.尿素測定試劑檢測結(jié)果(單位：mmol/L)表6.丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑檢測結(jié)果(單位：U/L)實驗例3在本實驗例中，除加入的復(fù)合穩(wěn)定劑為實施例3制得的之外，其余操作與實驗例1中的一致，37℃、7天加速穩(wěn)定性試驗結(jié)果如下表7-9所示：表7.肌酸激酶測定試劑檢測結(jié)果(單位：U/L)表8.尿素測定試劑檢測結(jié)果(單位：mmol/L)表9.丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑檢測結(jié)果(單位：U/L)由實驗例1至3中的試驗結(jié)果可知，未加復(fù)合穩(wěn)定劑的試劑隨著37℃孵育時間的推移，試劑的活性明顯下降，而加入了實施例1、2或3中制得的復(fù)合穩(wěn)定劑后的試劑隨著37℃孵育時間的推移，其試劑活性下降很緩慢，尤其是在實驗例2中，37℃、7天加速試驗后，加入實施例2制得的復(fù)合穩(wěn)定劑的各體外診斷試劑的活性仍在90％以上。