相關(guān)申請的交叉引用
本申請要求對于2014年10月24日提交的美國序列號62/068,244的權(quán)益，將其全部并入本申請。
本發(fā)明大體涉及可用作激酶調(diào)節(jié)劑(包括調(diào)節(jié)bruton酪氨酸激酶(btk)和其它tec家族激酶諸如itk)的三環(huán)化合物。本申請?zhí)峁┝巳h(huán)化合物、包含所述化合物的組合物和它們的使用方法。本發(fā)明還涉及含有可用于治療與激酶調(diào)節(jié)相關(guān)的病癥的至少一種本發(fā)明化合物的藥物組合物以及在哺乳動(dòng)物中抑制激酶(包括btk和其它tec家族激酶諸如itk)的活性的方法。
背景技術(shù)：
蛋白激酶是最大的人類酶家族，包括超過500種蛋白質(zhì)。btk是酪氨酸激酶的tec家族的成員，并且是早期b細(xì)胞發(fā)育以及成熟b細(xì)胞活化、信號傳導(dǎo)和存活的調(diào)節(jié)劑。
經(jīng)b細(xì)胞受體(bcr)的b細(xì)胞信號傳導(dǎo)可產(chǎn)生廣泛的生物學(xué)輸出信號，而所述信號轉(zhuǎn)而取決于b細(xì)胞的發(fā)育階段。bcr信號的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間必須被精確地調(diào)節(jié)。異常的bcr介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)能造成失調(diào)的b細(xì)胞活化和/或形成導(dǎo)致多種自身免疫疾病和/或炎性疾病的致病性自身抗體。人體內(nèi)btk的突變導(dǎo)致x相關(guān)的血內(nèi)γ球蛋白缺乏癥(x-linkedagammaglobulinaemia,xla)。這種疾病與b細(xì)胞成熟受損、免疫球蛋白產(chǎn)生減少、不依賴t細(xì)胞的免疫應(yīng)答受損以及在bcr刺激時(shí)持續(xù)的鈣信號的顯著減弱有關(guān)。
已經(jīng)在缺乏btk的小鼠模型中建立了有關(guān)btk在變應(yīng)性病癥和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病中的作用的證據(jù)。例如，已經(jīng)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)的標(biāo)準(zhǔn)鼠類臨床前模型中顯示出btk缺乏導(dǎo)致疾病進(jìn)展的顯著改善。此外，btk缺陷小鼠還可抵抗形成膠原誘發(fā)性關(guān)節(jié)炎并可對葡萄球菌誘發(fā)性關(guān)節(jié)炎更不易感。
大量的證據(jù)支持b細(xì)胞和體液免疫系統(tǒng)在自身免疫疾病和/或炎性疾病的發(fā)病機(jī)制中的作用。已開發(fā)的為了耗竭b細(xì)胞的基于蛋白質(zhì)的治療藥物諸如
btk也在肥大細(xì)胞和單核細(xì)胞中表達(dá)，并且顯示其對于這些細(xì)胞的功能很重要。例如，小鼠btk缺陷與ige介導(dǎo)的肥大細(xì)胞活化受損(顯著減少tnf-α和其它炎性細(xì)胞因子的釋放)有關(guān)，并且人體內(nèi)btk缺陷與由活化的單核細(xì)胞產(chǎn)生tnf-α大大減少有關(guān)。
由此，btk活性的抑制可用于治療變應(yīng)性病癥和/或自身免疫性和/或炎性疾病，這些疾病包括但不限于：sle、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性血管炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜(itp)、重癥肌無力、變應(yīng)性鼻炎、多發(fā)性硬化(ms)、移植排斥、i型糖尿病、膜性腎炎、炎性腸病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性甲狀腺炎、冷凝集素和溫凝集素疾病、埃文斯綜合征(evan’ssyndrome)、溶血性尿毒癥綜合征/血栓性血小板減少性紫癜(hus/ttp)、結(jié)節(jié)病、斯耶格倫綜合征(sjogren’ssyndrome)、外周神經(jīng)病(例如格林-巴利綜合征(guillain-barresyndrome))、尋常型天皰瘡和哮喘。
此外，已報(bào)道btk在某些b細(xì)胞癌癥中對控制b細(xì)胞存活起作用。例如，已顯示btk對于bcr-abl陽性b細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞的存活是重要的。因此，btk活性的抑制可用于治療b細(xì)胞淋巴瘤和白血病。
通過與酶反應(yīng)以形成共價(jià)鍵來抑制酶的化合物相比于不形成此類共價(jià)鍵的化合物可提供優(yōu)勢。(參見例如liu,q.etal.,chem.biol.,20:146(2013)；barf,t.etal.,j.med.chem.,55:6243(2012)；kalgutkar,a.etal.,expertopin.drugdiscov.,7:561(2012)；andgaruti,l.etal.,curr.med.chem.,18:2981(2011)；以及其中引用的參考文獻(xiàn))。不形成共價(jià)鍵的化合物可從酶中解離出來，使酶從由其結(jié)合產(chǎn)生的抑制中釋放。此類可逆抑制可能需要相對高且連續(xù)濃度的抑制性化合物以通過抑制劑驅(qū)使結(jié)合平衡達(dá)到足夠的酶占據(jù)以實(shí)現(xiàn)有效的酶抑制。較高的化合物濃度可能需要向需要此類抑制的哺乳動(dòng)物施用較高劑量的化合物，并且在較高濃度下，抑制劑可能由于抑制其它非靶向酶而具有不期望的作用。此類脫靶抑制可能包括毒性。另外，可能需要更頻繁的給藥，因?yàn)橐种菩曰衔镌趶陌袠?biāo)酶解離后可通過代謝和/或消除從身體中除去，降低可用于實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)酶抑制的濃度。
相反，與其靶標(biāo)酶形成共價(jià)鍵的抑制劑不可逆地抑制酶。不可逆抑制將由抑制劑的緩慢或可忽略的解離產(chǎn)生，因?yàn)榇祟惤怆x將需要破壞共價(jià)鍵。如果此類共價(jià)抑制劑對其靶標(biāo)酶的親和力相對于其它脫靶酶的親和力足夠大，則顯著較低濃度的抑制劑可導(dǎo)致相對于可逆性抑制所需的濃度的有用抑制。較低的濃度可降低不期望的脫靶抑制和潛在毒性的可能性。此外，由于共價(jià)抑制劑可基本上不可逆地與靶標(biāo)酶結(jié)合，所以隨著通過代謝和/或消除將非結(jié)合的抑制劑從身體中除去，即使還保持有用的酶抑制，抑制劑的游離(非結(jié)合)濃度可變得非常低。這可減少不期望作用的可能性。另外，由于可不可逆地抑制酶，因此可能需要較少頻率的給藥以實(shí)現(xiàn)有用的抑制作用。
某些反應(yīng)性官能團(tuán)可連接至對靶標(biāo)酶具有良好親和力的化合物，這將允許與靶標(biāo)酶中的官能團(tuán)形成共價(jià)鍵。例如，連接至吸電子基團(tuán)(諸如酮、酰胺、砜、磺酰胺)或吸電子雜環(huán)(諸如吡啶基)的親電基團(tuán)(諸如乙烯基或乙炔基)可與存在于靶標(biāo)酶中的親核基團(tuán)(諸如半胱氨酸殘基的硫醇或硫醇酯基團(tuán))反應(yīng)，以形成共價(jià)鍵。此類反應(yīng)在正常的生理?xiàng)l件下基本上是不可逆的。為了實(shí)現(xiàn)此類反應(yīng)，抑制劑化合物必須與靶標(biāo)酶結(jié)合，并且所連接的親電子基團(tuán)以正確的空間取向存在，以允許與進(jìn)攻親核試劑有良好的相互作用。如果取向不正確，則共價(jià)鍵可能不容易形成，并且可能無法實(shí)現(xiàn)期望的不可逆抑制。在這種情況下，所述化合物將表現(xiàn)為可逆性抑制劑，并且不可實(shí)現(xiàn)不可逆抑制的益處。此外，如果結(jié)合的抑制劑上親電試劑的取向不適于與靶標(biāo)酶的親核基團(tuán)反應(yīng)，則抑制劑將能夠從靶標(biāo)酶解離，導(dǎo)致較高的抑制劑濃度及反應(yīng)性親電子基團(tuán)可與其它非靶標(biāo)親核試劑反應(yīng)并引起不期望作用(諸如毒性)的更大可能性。
美國專利8,084,620和8,685,969公開了三環(huán)甲酰胺化合物，其可用作激酶抑制劑，包括btk和其它tec家族激酶的調(diào)節(jié)。
鑒于預(yù)期受益于涉及對蛋白激酶進(jìn)行調(diào)節(jié)的治療的多種病癥，非常明顯的是，能夠調(diào)節(jié)蛋白激酶諸如btk的新化合物和使用這些化合物的方法應(yīng)當(dāng)向眾多患者提供實(shí)質(zhì)上的治療益處。
仍然需要用作btk抑制劑的化合物。此外，仍然需要用作btk抑制劑的化合物，其可在較低劑量施用或在較低濃度是有效的。另外，仍然需要具有組合作為btk抑制劑的改善效力和ramosflipr測定中改善效力的化合物。
申請人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有作為btk抑制劑有效化合物。本申請?zhí)峁┛捎米魉幬锏倪@些化合物，其具有對于它們的成藥性重要的期望穩(wěn)定性、生物利用度、治療指數(shù)和毒性值。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供用作btk抑制劑并且用于治療增殖性疾病、變應(yīng)性疾病、自身免疫性疾病和炎性疾病的三環(huán)化合物，包括它們的前藥。
本發(fā)明還提供藥物組合物，所述藥物組合物包含至少一種式(i)化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明還提供抑制btk活性的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動(dòng)物施用至少一種式(i)化合物。
本發(fā)明還提供治療變應(yīng)性病癥和/或自身免疫性疾病和炎性疾病的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動(dòng)物施用至少一種式(i)化合物。
本發(fā)明還提供治療增殖性疾病諸如癌癥的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動(dòng)物施用至少一種式(i)化合物。
本發(fā)明還提供治療與btk活性相關(guān)的疾病并病癥的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳動(dòng)物施用至少一種式(i)化合物。
本發(fā)明還提供用于制備式(i)化合物的方法和中間體。
本發(fā)明還提供式(i)化合物，其用于療法中。
本發(fā)明還提供式(i)化合物在制備用于治療或預(yù)防btk相關(guān)病癥的藥物中的用途，所述btk相關(guān)病癥諸如增殖性疾病、變應(yīng)性疾病、自身免疫性疾病和炎性疾病。
本發(fā)明還提供式(i)化合物或在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。
式(i)化合物和包含式(i)化合物的組合物可用于治療、預(yù)防或治愈各種btk相關(guān)病癥。包含這些化合物的藥物組合物可用于治療、預(yù)防或減慢各種治療領(lǐng)域中疾病或病癥的進(jìn)展，所述btk相關(guān)病癥諸如增殖性疾病、變應(yīng)性疾病、自身免疫性疾病和炎性疾病。
隨著公開內(nèi)容的繼續(xù)，本發(fā)明的這些和其它特征將以擴(kuò)展形式詳述。
附圖簡述
通過參考下文所述附圖舉例說明本發(fā)明。
圖1示出實(shí)施例5(左)、實(shí)施例12(中)和實(shí)施例8(右)的絕對立體化學(xué)。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明的第一方面提供式(i)化合物或其鹽，
其中：
兩條虛線表示兩個(gè)單鍵或兩個(gè)雙鍵；且r1b如果所述兩條虛線為兩個(gè)單鍵則僅存在；
x為：
(i)當(dāng)兩條虛線表示兩個(gè)單鍵時(shí)，cr2ar2bornr2b；或
(ii)當(dāng)兩條虛線表示兩個(gè)雙鍵時(shí)，cr2a或n；
q為：
r1a為h、-cn、-cf3、-ch3、-cr6ar6boh、-ch2ch2oh、-ch(oh)ch2oh、-ch2ch2f、-nhr7或-c(o)nr8ar8b；
r1b，當(dāng)存在時(shí)，為h或-ch3，條件是如果r1a為h，則r1b也為h；
r2a為h、f或cl，條件是如果r1a不為h，則r2a為h；
r2b，當(dāng)存在時(shí)，與r2a相同；
r3為f、cl、-cn或-ch3；
r4為h、f、cl、-och3或-ocf3；
r5為-cn或-c(o)ch＝ch2；
r6a和r6b獨(dú)立地為h或-ch3；
r7為c1-4烷基；且
r8a和r8b獨(dú)立地為h或-ch3.
本發(fā)明的第二方面提供式(ii)化合物或其鹽，
其中：
兩條虛線表示兩個(gè)單鍵或兩個(gè)雙鍵；且如果所述兩條虛線為兩個(gè)單鍵則僅存在r1b和r2b；
q為：
r1a為h、-cn、-cf3、-ch3、-cr6ar6boh、-ch(oh)ch2oh、-nhr7或-c(o)nr8ar8b；
r1b，當(dāng)存在時(shí)，為h或-ch3，條件是如果r1a為h，則r1b也為h；
r2a為h或f，條件是如果r1a不為h，則r2a為h；
r2b，當(dāng)存在時(shí)，與r2a相同；
r3為f、cl、-cn或-ch3；
r4為h、f、cl、-och3或-ocf3；
r5為-c(o)ch＝ch2；
r6a和r6b獨(dú)立地為h或-ch3；
r7為c1-4烷基；且
r8a和r8b獨(dú)立地為h或-ch3。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)化合物或其鹽，其中所述兩條虛線表示兩個(gè)雙鍵且x為cr2a。該實(shí)施方案的化合物具有式(ia)的結(jié)構(gòu)：
其中q、r1a、r2a和r3如第一方面或第二方面中所定義。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)化合物或其鹽，其中所述兩條虛線表示兩個(gè)單鍵且x為cr2ar2b。該實(shí)施方案的化合物具有式(ib)的結(jié)構(gòu)：
其中q、r1a、r1b、r2a、r2b和r3如第一方面或第二方面中所定義。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)化合物或其鹽，其中所述兩條虛線表示兩個(gè)雙鍵且x為n。該實(shí)施方案的化合物具有式(ic)的結(jié)構(gòu)：
其中q、r1a和r3如第一方面中所定義。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)化合物或其鹽，其中所述兩條虛線表示兩個(gè)單鍵且x為nr2a。該實(shí)施方案的化合物具有式(id)的結(jié)構(gòu)：
其中q、r1a、r1b、r2a和r3如第一方面中所定義。
由式(ib)表示的四氫咔唑化合物和由式(id)表示的化合物，其中r1a不為h，在連接至r1a的碳原子上也具有手性中心，并因此可在該手性中心處以s-和r-異構(gòu)體存在。這些異構(gòu)體是可分離和穩(wěn)定的。一個(gè)實(shí)施方案提供具有作為s-異構(gòu)體的連接至r1a的碳手性中心的式(ib)化合物。一個(gè)實(shí)施方案提供此類具有作為r-異構(gòu)體的連接至r1a的碳手性中心的式(ib)化合物。另一實(shí)施方案提供具有作為s-異構(gòu)體的連接至r1a的碳手性中心的式(id)化合物。另一實(shí)施方案提供此類具有作為r-異構(gòu)體的連接至r1a的碳手性中心的式(id)化合物。
阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體是由單鍵軸的受阻旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的立體異構(gòu)體，其中旋轉(zhuǎn)壁壘足夠高，以允許單個(gè)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的分離。(laplanteetal.,j.med.chem.,54:7005(2011))。式(i)化合物，其中r3不為氫，且q為取代有除氫以外的r4的苯基、經(jīng)取代的1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基、經(jīng)取代的3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基、2,3,4,5-四氫[b][1,4]氧氮雜
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)化合物或其鹽，其中僅提供一種阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，或者其中僅提供一種與少量其它阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體。如果未歸屬絕對構(gòu)型，則在特定條件下在手性固定相上進(jìn)行色譜期間，所提供的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體可通過相對于另一阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體的洗脫順序來定義。
式(i)化合物為阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，其中可提供基本上不含其互補(bǔ)阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體的每種式(i)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體化合物。本申請使用的“基本上不含”是指提供具有至少95％阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體純度，優(yōu)選至少99％阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體純度，更優(yōu)選至少99.5％阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體純度的式(i)化合物。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)或式(ib)化合物或其鹽，其中r1a為h、-cf3或-c(ch3)2oh；r1b為h；r2a為h或f，條件是如果r1a不為h，則r2a為h；r2b，當(dāng)存在時(shí)，與r2a相同；r3為f；且r4為h；r5為-c(o)ch＝ch2；且q在第一方面中定義。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)、式(ib)化合物或其鹽，其中r1a為h、-cn、-cf3、-cr6ar6boh或-nhr7；r2a為h；r3為f或cl；r4為h、f、cl或-och3；r5為-c(o)ch＝ch2；r6a為h或-ch3；r6b為h或-ch3；r7為c2-3烷基；且q在第一方面中定義。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)或式(ib)化合物或其鹽，其中q為：
且r1a、r1b、r2a、r2b、r3、r4和r5在第二方面中定義。該實(shí)施方案包括化合物，其中r1a為h或-cf3和r3為f。該實(shí)施方案還包括式(ia)化合物，其中r1a為h或-cf3；r2a為h；r3為f；且r4為h。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)或式(ib)化合物或其鹽，其中q為
一個(gè)實(shí)施方案提供式(ib)化合物或其鹽，其中q為
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)或式(ib)化合物或其鹽，其中q為
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ic)或式(id)化合物或其鹽，其中q為
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)、式(ib)、式(ic)或式(id)化合物或其鹽，其中r3為f、cl或-cn；且r1a、r1b、r2a、r2b、r4、r5和q如第一方面中所定義。該實(shí)施方案包括化合物，其中r3為f或-cn。該實(shí)施方案還包括化合物，其中r3為-cn。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)、式(ib)、式(ic)或式(id)化合物或其鹽，其中r3為f或cl；且r1a、r1b、r2a、r2b、r4、r5和q如第一方面中所定義。該實(shí)施方案包括化合物，其中r3為f。該實(shí)施方案還包括化合物，其中r3為cl。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)、式(ib)、式(ic)或式(id)化合物或其鹽，其中r3為cl、-cn或-ch3；且r1a、r1b、r2a、r2b、r4、r5和q如第一方面中所定義。該實(shí)施方案包括化合物，其中r3為-cn或-ch3。該實(shí)施方案還包括化合物，其中r3為-ch3。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)、式(ib)、式(ic)或式(id)化合物或其鹽，其中r5為-c(o)ch＝ch2；且r1a、r1b、r2a、r2b、r3、r4和q如第一方面中所定義。該實(shí)施方案包括化合物，其中r3為f或-cl。還包括化合物，其中x為cr2ar2b或cr2a。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)、式(ib)、式(ic)或式(id)化合物或其鹽，其中r5為-cn；且r1a、r1b、r2a、r2b、r3、r4、r5和q如第一方面中所定義。該實(shí)施方案包括化合物，其中r3為f或-cl。還包括化合物，其中x為cr2ar2b或cr2a。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)、式(ia)、式(ib)、式(ic)或式(id)化合物或其鹽，其中r1a為-cn、-cf3、-ch3、-cr6ar6boh、-ch2ch2oh、-ch(oh)ch2oh、-ch2ch2f、-nhr7或-c(o)nr8ar8b；且r1b、r2a、r2b、r3、r4、r5、r6a、r6b、r7、r8a、r8b和q如第一方面中所定義。該實(shí)施方案包括化合物，其中r1a為-cn、-cf3或-ch3。該實(shí)施方案還包括化合物，其中r1a為-c(ch3)2oh、-ch2ch2oh、-ch(oh)ch2oh、-ch2ch2f或-c(o)n(ch3)2。
一個(gè)實(shí)施方案提供式(i)化合物或其鹽，其中所述化合物為(rs)-5-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺(1)；(rs)-4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺(2)；(rs)-4-(4-丙烯?；?3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺(3)；(rs)-4-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺(4)；4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺,單一對映異構(gòu)體(5)；5-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺,單一對映異構(gòu)體(6)；4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺,單一對映異構(gòu)體(7)；4-(4-丙烯?；?3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺,單一對映異構(gòu)體(8)；5-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺,單一非對映異構(gòu)體(9)；5-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺,單一純手性非對映異構(gòu)體(10和11)；4-(5-丙烯?；?2,3,4,5-四氫苯并[b][1,4]氧氮雜
本發(fā)明可在不背離本發(fā)明的精神或基本特性下以其它特定形式實(shí)施。本發(fā)明涵蓋本申請所述的本發(fā)明的方面和/或?qū)嵤┓桨傅乃薪M合。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的任何和所有實(shí)施方案可連同任何其它實(shí)施方案一起來描述其它實(shí)施方案。還應(yīng)當(dāng)理解，實(shí)施方案的各個(gè)別要素意欲與任何實(shí)施方案的任何和所有其它要素組合以描述其它實(shí)施方案。
定義
本發(fā)明的特征和優(yōu)勢可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在閱讀以下詳細(xì)描述后更容易理解。應(yīng)當(dāng)理解，出于清楚原因，上文和下文在各個(gè)實(shí)施方案的情況下描述的本發(fā)明的某些特征也可組合形成單一實(shí)施方案。反之，出于簡要原因，在單一實(shí)施方案的情況下描述的本發(fā)明的各種特征也可組合形成其亞組合。本申請確定為示例性或優(yōu)選的實(shí)施方案意欲具說明性而非具限制性。
除非本申請另外特定說明，否則以單數(shù)形式提及也可包括復(fù)數(shù)。例如，“一(a)”和“一(an)”可指一個(gè)/種或者一個(gè)/種或多個(gè)/種。
本申請使用的短語“化合物”是指至少一種化合物。例如，式(i)化合物包括一種式(i)化合物和兩種或更多種式(i)化合物。
除非另外指示，否則任何具有不飽和化合價(jià)的雜原子被認(rèn)為具有足以滿足這種化合價(jià)的氫原子。
本申請所闡述的定義優(yōu)先于以引用方式并入本申請中的任何專利、專利申請和/或?qū)＠暾埞_中所闡述的定義。
用于描述本發(fā)明的各種術(shù)語的定義列于下文中。當(dāng)術(shù)語在整篇說明書(除非其在特定情況下另外限制)中個(gè)別地或作為較大基團(tuán)的部分使用時(shí)，這些定義均適用于這種術(shù)語。
在整篇說明書中，基團(tuán)及其取代基可由本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇以提供穩(wěn)定的部分和化合物。
根據(jù)本領(lǐng)域中使用慣例，用于本申請結(jié)構(gòu)式中的
本申請使用的術(shù)語“烷基”是指含有例如1至12個(gè)碳原子、1至6個(gè)碳原子和1至4個(gè)碳原子的支鏈和直鏈飽和脂族烴基。烷基的實(shí)例包括但不限于甲基(me)、乙基(et)、丙基(例如，正丙基和異丙基)、丁基(例如，正丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基)和戊基(例如，正戊基、異戊基、新戊基)、正己基、2-甲基戊基、2-乙基丁基、3-甲基戊基和4-甲基戊基。當(dāng)數(shù)字出現(xiàn)在符號“c”之后的下標(biāo)中時(shí)，下標(biāo)更特定地定義為具體基團(tuán)可含有的碳原子數(shù)。例如，“c1-4烷基”表示具有1至4個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烷基。
術(shù)語“羥基烷基”包括取代有一個(gè)或多個(gè)羥基的支鏈和直鏈飽和烷基。例如，“羥基烷基”包括-ch2oh、-ch2ch2oh和c1-4羥基烷基。
短語“藥學(xué)上可接受的”在本申請中用于指在正確醫(yī)學(xué)判斷范疇內(nèi)適用于與人類和動(dòng)物組織接觸而無過度毒性、刺激性、變應(yīng)性響應(yīng)或其它問題或并發(fā)癥且與合理效益/風(fēng)險(xiǎn)比率相稱的那些化合物、物質(zhì)、組合物和/或劑型。
式(i)化合物可以無定形固體或結(jié)晶固體形式提供?？刹捎脙龈煞ㄒ詿o定形固體形式提供式(i)化合物。
某些式(i)化合物可以游離形式(未離子化)或可形成也在本發(fā)明范圍內(nèi)的鹽。除非另有指明，否則提到本發(fā)明化合物應(yīng)被理解為包括提到游離形式及其鹽。術(shù)語“鹽”表示與無機(jī)和/或有機(jī)酸形成的酸性鹽。藥學(xué)上可接受的(即無毒的生理學(xué)上可接受的)鹽是優(yōu)選的，諸如，例如，其中陽離子并不明顯有助于所述鹽的毒性或生物活性的鹽。然而，其它鹽可用于例如在制備過程中可使用的分離或純化步驟，且因此涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。式(i)化合物的鹽可通過以下方式形成：例如，式(i)化合物與一定量(諸如等量)的酸，在介質(zhì)(諸如鹽在其中析出的介質(zhì))中或在含水介質(zhì)中反應(yīng)，然后進(jìn)行凍干。
示例性的酸加成鹽包括乙酸鹽(諸如與乙酸或三鹵代乙酸(例如三氟乙酸)形成的鹽)、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、枸櫞酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊丙酸鹽、二葡糖酸鹽(digluconate)、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽(glucoheptanoate)、甘油磷酸鹽(glycerophosphate)、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽(與鹽酸形成)、氫溴酸鹽(與氫溴酸形成)、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽(與馬來酸形成)、甲磺酸鹽(與甲磺酸形成)、萘-2-磺酸鹽、煙酸鹽(nicotinate)、硝酸鹽、草酸鹽、果膠酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽(諸如與硫酸形成的那些鹽)、磺酸鹽(諸如本申請?zhí)峒暗哪切┗撬猁})、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽(諸如甲苯磺酸鹽)、十一烷酸鹽等。
還應(yīng)當(dāng)理解，式(i)化合物的溶劑化物(例如，水合物)也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。術(shù)語“溶劑化物”意指式(i)化合物與一個(gè)或多個(gè)溶劑分子(無論是有機(jī)的還是無機(jī)的)的物理締合物。該物理締合物包括氫鍵。在一些情況中，該溶劑化物能夠分離，例如當(dāng)一個(gè)或多個(gè)溶劑分子摻入至結(jié)晶固體的晶格中時(shí)?！叭軇┗铩焙w溶液相溶劑化物和可分離的溶劑化物。示例性溶劑化物包括水合物、乙醇合物、甲醇合物、異丙醇合物、乙腈溶劑化物和乙酸乙酯溶劑化物。溶劑化的方法是本領(lǐng)域已知的。
各種前藥形式式本領(lǐng)域公知的且描述于以下文獻(xiàn)中：
a)wermuth,c.g.etal.,thepracticeofmedicinalchemistry,chapter31,academicpress(1996)；
b)bundgaard,h.ed.,designofprodrugs,elsevier(1985)；
c)bundgaard,h.,chapter5,“designandapplicationofprodrugs”,atextbookofdrugdesignanddevelopment,pp.113-191,krogsgaard-larsen,p.etal.,eds.,harwoodacademicpublishers(1991)；和
d)testa,b.etal.,hydrolysisindrugandprodrugmetabolism,wiley-vch(2003)。
此外，式(i)化合物在制備之后可被分離和純化，以獲得含有等于或大于99重量％的量的式(i)化合物(“基本上純”)的組合物，然后如本申請所述使用或配制。所述“基本上純”的式(i)化合物在本申請中也涵蓋作為本發(fā)明的部分。
“穩(wěn)定的化合物”和“穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)”是指足夠堅(jiān)固以能經(jīng)受從反應(yīng)混合物中分離至有用純度并配制成有效治療藥物的化合物。本發(fā)明意欲包含穩(wěn)定的化合物。
“治療有效量”意欲包括單獨(dú)本發(fā)明化合物的量，或要求保護(hù)的化合物組合的量，或與有效用作btk抑制劑或有效治療或預(yù)防自身免疫和/或炎性和/或增殖性疾病狀態(tài)(諸如多發(fā)性硬化和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的其它活性成分組合的本發(fā)明化合物的量。
本申請使用的“治療(treating)”或“處置(treatment)”涵蓋治療哺乳動(dòng)物(具體為人類)的疾病狀態(tài)，且包括：(a)預(yù)防哺乳動(dòng)物出現(xiàn)疾病狀態(tài)，具體為在所述哺乳動(dòng)物易患所述疾病狀態(tài)但尚未診斷為患有所述疾病狀態(tài)時(shí)；(b)抑制所述疾病狀態(tài)，即阻止其發(fā)展；和/或(c)減輕所述疾病狀態(tài)，即引起所述疾病狀態(tài)消退。
本發(fā)明化合物意欲包括本發(fā)明化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括原子序數(shù)相同但質(zhì)量數(shù)不同的那些原子。作為一般實(shí)例且非限制，氫的同位素包括氘(d)和氚(t)。碳的同位素包括13c和14c。通常，同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物可如下制備：通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)或通過類似于本申請所述方法的方法，使用適當(dāng)?shù)耐凰貥?biāo)記試劑替代以其它方式使用的未經(jīng)標(biāo)記的試劑。例如，甲基(-ch3)還包括氘代甲基諸如-cd3。
式(i)化合物可通過任何適用于待治療的病癥的方式施用，所述方式可取決于對部位特異性治療的需要或待遞送的式(i)化合物的量。
本發(fā)明還涵蓋一類藥物組合物，其包含至少一種式(i)化合物和一種或多種無毒的藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑和/或佐劑(本申請統(tǒng)稱為“載體”物質(zhì))和其它活性成分(必要時(shí))。式(i)化合物可通過任何合適途徑，優(yōu)選以適于所述途徑的藥物組合物形式且以有效用于預(yù)期治療的劑量施用。本發(fā)明的化合物和組合物可以含有常規(guī)藥學(xué)上可接受的載體、佐劑和媒介物的劑量單位制劑形式，例如口服、經(jīng)粘膜或腸胃外(包括血管內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)和胸骨內(nèi))施用。例如，藥物載體可含有甘露糖醇或乳糖和微晶纖維素的混合物?；旌衔锟珊衅渌M分，諸如潤滑劑，例如硬脂酸鎂；和崩解劑，諸如交聚維酮(crospovidone)。載體混合物可填充至明膠膠囊中或壓制成片劑。藥物組合物可以例如口服劑型或輸注劑形式施用。
對于口服施用，藥物組合物可呈例如片劑、膠囊劑、液體膠囊劑、混懸劑或液體形式。藥物組合物優(yōu)選以含有特定量的活性成分的劑量單位形式制備。例如，藥物組合物可以包含約0.1mg至1000mg，優(yōu)選約0.25mg至250mg，且更優(yōu)選約0.5mg至100mg范圍內(nèi)的量的活性成分的片劑或膠囊劑形式提供。雖然適用于人類或其它哺乳動(dòng)物的日劑量可取決于患者的病癥和其它因素而廣泛變化，但可使用常規(guī)方法確定。
本申請涵蓋的任何藥物組合物可例如經(jīng)由任何可接受且合適的口服制劑來口服遞送。示例性口服制劑包括，但不限于，例如片劑、糖衣錠(troches)、口含錠(lozenges)、水性和油性混懸劑、可分散性散劑或顆粒劑、乳劑、硬膠囊劑和軟膠囊劑、液體膠囊劑、糖漿劑和酏劑。意欲口服施用的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域中已知用于制造意欲口服施用的藥物組合物的任何方法來制備。為提供藥學(xué)上適口的制劑，本發(fā)明藥物組合物可含有至少一種選自以下的試劑：增甜劑、矯味劑、著色劑、緩和劑、抗氧化劑和防腐劑。
片劑可例如通過以下方式制備：使至少一種式(i)化合物與至少一種適用于制備片劑的無毒的藥學(xué)上可接受的賦形劑混合。示例性賦形劑包括，但不限于，例如，惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣和磷酸鈉；成粒劑和崩解劑，諸如微晶纖維素、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、玉米淀粉和海藻酸；粘合劑，諸如淀粉、明膠、聚乙烯-吡咯烷酮和阿拉伯膠(acacia)；和潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸和滑石。此外，片劑可無包衣，或通過已知技術(shù)包覆包衣以掩蔽味道令人不悅的藥物的不良味道，或延遲活性成分在胃腸道中的崩解和吸收，從而使活性成分的作用持續(xù)較長時(shí)段。示例性水溶性味道掩蔽物質(zhì)包括，但不限于，羥基丙基甲基纖維素和羥基丙基纖維素。示例性時(shí)間延遲物質(zhì)包括，但不限于，乙基纖維素和乙酸丁酸纖維素。
硬明膠膠囊劑可通過以下方式制備：例如，混合至少一種式(i)化合物與至少一種惰性固體稀釋劑，諸如碳酸鈣；磷酸鈣；和高嶺土。
軟明膠膠囊劑可通過以下方式制備：例如，混合至少一種式(i)化合物與至少一種水溶性載體，諸如聚乙二醇；和至少一種油介質(zhì)，諸如花生油、液體石蠟和橄欖油。
水性混懸劑可通過以下方式制備：例如，混合至少一種式(i)化合物與至少一種適用于制備水性混懸劑的賦形劑。適用于制備水性混懸劑的示例性賦形劑包括，但不限于，例如助懸劑，諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或濕潤劑，諸如天然存在的磷脂，例如卵磷脂；環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，諸如聚氧乙烯硬脂酸酯；環(huán)氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產(chǎn)物，諸如十七亞乙基-氧基鯨蠟醇；環(huán)氧乙烷與源自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物，諸如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯；和環(huán)氧乙烷與源自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物，諸如聚乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。水性混懸劑還可含有至少一種防腐劑，諸如對羥基苯甲酸乙酯和對羥基苯甲酸正丙酯；至少一種著色劑；至少一種矯味劑；和/或至少一種增甜劑，其包括，但不限于，例如蔗糖、糖精和阿斯巴甜。
油性混懸劑可通過以下方式制備：例如，將至少一種式(i)化合物懸浮于植物油(諸如花生油；橄欖油；芝麻油；和椰子油)；或礦物油(諸如液體石蠟)中。油性混懸劑還可含有至少一種增稠劑，諸如蜂蠟；硬石蠟；和鯨蠟醇。為提供適口的油性混懸劑，可將至少一種上文已描述的增甜劑和/或至少一種矯味劑添加至油性混懸劑中。油性混懸劑可進(jìn)一步含有至少一種防腐劑，其包括，但不限于，例如抗氧化劑，諸如丁基化羥基茴香醚和α-生育酚。
可分散性粉劑和顆粒劑可通過以下方式制備：例如，混合至少一種式(i)化合物與至少一種分散劑和/或濕潤劑；至少一種助懸劑；和/或至少一種防腐劑。合適的分散劑、濕潤劑和助懸劑如上文已描述。示例性防腐劑包括，但不限于，例如抗氧化劑，例如抗壞血酸。此外，可分散性粉劑和顆粒劑還可含有至少一種賦形劑，其包括，但不限于，例如增甜劑；矯味劑；和著色劑。
至少一種式(i)化合物的乳劑可例如制備成水包油型乳劑。包含式(i)化合物的乳劑的油相可由已知成分以已知方式構(gòu)成。油相可由(但不限于)例如植物油(諸如橄欖油和花生油)；礦物油(諸如液體石蠟)；和其混合物提供。雖然所述相可僅包含乳化劑，但其可包含至少一種乳化劑與脂肪或油或與脂肪和油兩者的混合物。合適的乳化劑包括，但不限于，例如天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂；源自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，諸如脫水山梨糖醇單油酸酯；和偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，諸如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。優(yōu)選地，親水性乳化劑連同用作穩(wěn)定劑的親脂性乳化劑一起包括在內(nèi)。還優(yōu)選包括油和脂肪兩者。具有或不具有穩(wěn)定劑的乳化劑一起組成所謂乳化蠟，且所述蠟與油和脂肪一起組成所謂乳化軟膏基質(zhì)，所述乳化軟膏基質(zhì)形成乳膏劑制劑的油性分散相。乳劑還可含有增甜劑、矯味劑、防腐劑和/或抗氧化劑。適用于本發(fā)明制劑中的乳化劑和乳劑穩(wěn)定劑包括吐溫(tween)60、斯潘(span)80、鯨蠟硬脂醇(cetostearylalcohol)、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸鈉、單獨(dú)或與蠟一起的二硬脂酸甘油酯，或本領(lǐng)域公知的其它物質(zhì)。
式(i)化合物還可例如經(jīng)由任何藥學(xué)上可接受且合適的可注射形式靜脈內(nèi)、皮下和/或肌內(nèi)遞送。示例性可注射形式包括，但不限于，例如包含可接受的媒介物和溶劑(諸如水、林格溶液(ringer'ssolution)和等張氯化鈉溶液)的無菌水溶液；無菌水包油型微乳劑；和水性或油性混懸劑。
用于腸胃外施用的制劑可為水性或非水性等張無菌注射溶液劑或混懸劑的形式。這些溶液劑和混懸劑可使用所提及的用于口服施用的制劑的一種或多種載體或稀釋劑或通過使用其它合適的分散劑或濕潤劑和助懸劑由無菌粉末或顆粒制備。所述化合物可溶于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、芐醇、氯化鈉、黃蓍膠和/或各種緩沖液中。其它佐劑和施用方式是藥物領(lǐng)域中公知的?；钚猿煞诌€可以作為含合適載體(包括鹽水、右旋糖或水)或含環(huán)糊精(即
無菌可注射制劑還可為在無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液劑或混懸劑，例如在1,3-丁二醇中的溶液劑?？墒褂玫目山邮艿拿浇槲锖腿軇樗?、林格溶液和等張氯化鈉溶液。此外，無菌不揮發(fā)性油慣常用作溶劑或懸浮介質(zhì)。出于此目的，可使用任何溫和的不揮發(fā)性油，包括合成性單酸甘油酯或二酸甘油酯。此外，在可注射劑制備中可使用脂肪酸，諸如油酸。
無菌可注射水包油型微乳劑可通過以下方式制備：例如，1)至少一種式(i)化合物溶解于油相(諸如大豆油與卵磷脂的混合物)中；2)組合含有式(i)的油相與水和甘油混合物；和3)加工所述組合，形成微乳劑。
無菌水性或油性混懸劑可根據(jù)本領(lǐng)域早已已知的方法來制備。例如，無菌水溶液劑或混懸劑可用無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑來制備，諸如1,3-丁二醇；且無菌油性混懸劑可用無菌無毒可接受的溶劑或懸浮介質(zhì)來制備，諸如無菌不揮發(fā)性油，例如合成性單酸甘油酯或二酸甘油酯；和脂肪酸，諸如油酸。
可用于本發(fā)明藥物組合物中的藥學(xué)上可接受的載體、輔料和媒介物包括，但不限于，離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂；自乳化藥物遞送系統(tǒng)(sedds)，諸如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯；用于藥物劑型中的表面活性劑，諸如吐溫、聚乙氧基蓖麻油，諸如
本發(fā)明的藥物活性化合物可根據(jù)常規(guī)藥學(xué)方法加工以產(chǎn)生用于向患者(包括人類和其它哺乳動(dòng)物)施用的醫(yī)藥藥劑。藥物組合物可經(jīng)受常規(guī)藥學(xué)操作(諸如殺菌)和/或可含有常規(guī)佐劑，諸如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、緩沖劑等。片劑和丸劑可另外用腸溶包衣制備。所述組合物還可包含佐劑，諸如濕潤劑、增甜劑、矯味劑和芳香劑。
所施用的化合物的量和以本發(fā)明的化合物和/或組合物治療疾病病癥的施用方案取決于多種因素，包括受試者的年齡、體重、性別、身體狀況(medicalcondition)、疾病的類型、疾病的嚴(yán)重度、施用的途徑和頻率以及所采用的具體化合物。因此，施用方案可廣泛變化，但可使用標(biāo)準(zhǔn)方法來常規(guī)地確定。適當(dāng)?shù)娜談┝繛榧s0.001至100mg/kg體重，優(yōu)選約0.0025mg至約50mg/kg體重且最優(yōu)選約0.005mg至10mg/kg體重。日劑量可以每日一至四個(gè)劑量施用。其它給藥時(shí)間表包括每周一個(gè)劑量或每兩周周期一個(gè)劑量。
為達(dá)治療目的，通常將本發(fā)明的活性化合物與適用于所示施用途徑的一種或多種佐劑組合。若口服施用，則可將化合物與乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸的纖維素酯、纖維素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸和硫酸的鈉鹽和鈣鹽、明膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，然后制成片劑或膠囊劑以方便施用。所述膠囊劑或片劑可含有控制釋放制劑，如可以活性化合物在羥基丙基甲基纖維素中的分散液的形式提供。
本發(fā)明的藥物組合物包含式(i)化合物和任選的其它選自任何藥學(xué)上可接受的載體、佐劑和媒介物的試劑。本發(fā)明的替代組合物包含本申請所述的式(i)化合物或其前藥和藥學(xué)上可接受的載體、佐劑或媒介物。
實(shí)用性
本發(fā)明化合物調(diào)節(jié)激酶活性，包括調(diào)節(jié)btk。其它類型的激酶活性可通過本發(fā)明化合物來調(diào)節(jié)，所述化合物包括，但不限于，tec家族的激酶，諸如bmx、btk、itk、txk和tec，及其突變體。
因此，式(i)化合物在以下方面具有實(shí)用性：治療與調(diào)節(jié)激酶活性相關(guān)的病癥，以及具體是對btk活性的選擇性抑制。所述病癥包括與b細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，其中細(xì)胞因子水平作為胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的結(jié)果進(jìn)行調(diào)節(jié)。
本申請使用的術(shù)語“治療(treating)”或“處置(treatment)”包括響應(yīng)和預(yù)防措施中的一種或兩種，例如，用于抑制或者延緩疾病或病癥發(fā)作，實(shí)現(xiàn)癥狀或病癥的完全或部分減輕，和/或緩解、改善、減少或治愈疾病或病癥和/或其癥狀的措施。
鑒于它們作為btk的選擇性抑制劑的活性，式(i)化合物可用于治療與細(xì)胞因子相關(guān)的疾病，其包括，但不限于，炎性疾病，諸如克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎、哮喘、移植物抗宿主病、慢性阻塞性肺??；自身免疫性疾病，諸如格雷夫斯病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、牛皮癬；破壞性骨疾病，諸如骨重吸收疾病、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)骨疾病；增殖性疾病，諸如急性骨髓性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病；血管生成病癥，諸如包括實(shí)體瘤、眼部新血管形成和嬰兒血管瘤的血管生成病癥；感染性疾病，諸如敗血病、感染性休克和志賀菌??；神經(jīng)變性疾病，諸如阿爾茨海默病、帕金森病、由創(chuàng)傷性損傷引起的腦缺血或神經(jīng)變性疾??；腫瘤疾病和病毒疾病，分別諸如轉(zhuǎn)移性黑素瘤、卡波西肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤，和hiv感染及cmv視網(wǎng)膜炎、aids。
更具體地，本發(fā)明化合物可治療的具體病癥或疾病包括，但不限于，胰腺炎(急性或慢性)、哮喘、變態(tài)反應(yīng)、成人呼吸窘迫綜合征、慢性阻塞性肺病、腎小球腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、斯耶格倫綜合征、慢性甲狀腺炎、格雷夫斯病、自身免疫性胃炎、糖尿病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性中性粒細(xì)胞減少癥、血小板減少癥、特應(yīng)性皮炎、慢性活動(dòng)性肝炎、重癥肌無力、多發(fā)性硬化、炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、牛皮癬、移植物抗宿主病、內(nèi)毒素誘發(fā)的炎性反應(yīng)、肺結(jié)核、動(dòng)脈粥樣硬化、肌肉變性、惡病質(zhì)、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、萊特爾綜合征(reiter’ssyndrome)、痛風(fēng)、外傷性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)疹性關(guān)節(jié)炎、急性滑膜炎、胰腺β細(xì)胞疾?。灰源罅恐行粤＜?xì)胞浸潤為特征的疾?。活愶L(fēng)濕性脊椎炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)炎病癥、川崎病、慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(cidp)、皮肌炎、葡萄膜炎、抗因子viii病、強(qiáng)直性脊柱炎、重癥肌無力，古德帕斯徹病、抗磷脂綜合征、anca相關(guān)性血管炎、皮肌炎/多肌炎、腦型瘧、慢性肺部炎性疾病、矽肺、肺結(jié)節(jié)病、骨重吸收疾病、同種異體移植物排斥、由感染引起的發(fā)熱和肌痛、繼發(fā)于感染的惡病質(zhì)、髓細(xì)胞瘤形成(myeloidformation)、瘢痕組織形成、潰瘍性結(jié)腸炎、發(fā)熱、流行性感冒、骨質(zhì)疏松癥、骨關(guān)節(jié)炎、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、卡波西肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、敗血病、感染性休克和志賀菌??；阿爾茨海默病、帕金森病、由創(chuàng)傷性損傷引起的腦缺血或神經(jīng)變性疾病；血管生成病癥，包括實(shí)體瘤、眼部新血管形成和嬰兒血管瘤；病毒疾病，包括急性肝炎感染(包括甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎)、hiv感染和cmv視網(wǎng)膜炎、aids、arc或惡性腫瘤和皰疹；中風(fēng)、心肌缺血、中風(fēng)心臟病發(fā)作中的缺血、器官機(jī)能減退、血管增生、心臟和腎臟再灌注損傷、血栓形成、心臟肥大、凝血酶誘發(fā)的血小板聚集、內(nèi)毒素血癥和/或中毒性休克綜合征、與前列腺素內(nèi)過氧化酶合酶-2相關(guān)的病癥和尋常型天皰瘡。
優(yōu)選的治療方法是治療選自以下病癥的方法：克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎、同種異體移植物排斥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、強(qiáng)直性脊椎炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、尋常型天皰瘡和多發(fā)性硬化。可選地，優(yōu)選的治療方法是治療選自以下病癥的方法：缺血再灌注損傷，包括由中風(fēng)引起的腦缺血再灌注損傷和由心肌梗塞引起的心臟缺血再灌注損傷。另一種優(yōu)選的治療方法是其中病癥為多發(fā)性骨髓瘤的治療方法。
此外，本發(fā)明的btk抑制劑抑制可誘導(dǎo)促炎性蛋白的表達(dá)，所述可誘導(dǎo)促炎蛋白諸如前列腺素內(nèi)過氧化物合酶-2(pghs-2)，其也稱為環(huán)氧合酶-2(cox-2)。因此，其它與btk相關(guān)的病癥包括水腫、痛覺缺失(analgesia)、發(fā)熱和疼痛，諸如神經(jīng)肌肉疼痛、頭痛、由癌癥引起的疼痛、牙痛和關(guān)節(jié)炎疼痛。本發(fā)明化合物還可用于治療獸醫(yī)學(xué)病毒感染，諸如慢病毒屬感染，其包括，但不限于馬傳染性貧血癥病毒；或逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，其包括貓免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒和犬免疫缺陷病毒。
當(dāng)術(shù)語“btk相關(guān)病癥”或“btk相關(guān)疾病或障礙”在本申請中使用時(shí)，每種術(shù)語意欲涵蓋上文以重復(fù)詳盡定義的所有病癥以及受btk激酶活性影響的任何其它病癥。
“治療有效量”意欲包括當(dāng)單獨(dú)施用或組合施用時(shí)可有效抑制btk的本發(fā)明化合物的量。
一個(gè)實(shí)施方案提供治療所述bkt相關(guān)病癥的方法，包括向由此需要的受試者施用治療有效量的至少一種式(i)化合物?？墒┯糜糜谥委熕霾“Y的治療有效量。該實(shí)施方案的方法可用于治療btk相關(guān)病癥，諸如變應(yīng)性病癥和/或自身免疫性和/或炎性疾病的治療，所述病癥和/或疾病包括，但不限于，sle、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性血管炎、特發(fā)性血小板減少性紫癜(itp)、重癥肌無力、過敏性鼻炎、多發(fā)性硬化癥(ms)、移植排斥、i型糖尿病、膜性腎炎、炎性腸病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性甲狀腺炎、冷溫凝集素疾病、埃文斯綜合征、溶血性尿毒性綜合征/血栓性血小板減少性紫癜(hus/ttp)、結(jié)節(jié)病、斯耶格倫綜合征、周圍神經(jīng)病(例如，格林巴利綜合癥)、尋常型天皰瘡和哮喘。
治療btk激酶相關(guān)病癥的方法可包括單獨(dú)施用至少一種式(i)化合物或與每種其它和/或其它用于治療所述病癥的合適的治療藥物組合施用。可施用治療有效量的至少一種式(i)化合物或其它用于治療所述病癥的合適的治療藥物。因此，“治療有效量”還意欲包括可有效治療btk激酶相關(guān)疾病的要求保護(hù)的化合物的組合的量?；衔锏慕M合優(yōu)選為協(xié)同性組合。協(xié)同作用(synergy)，例如由chouetal.,adv.enzymeregul.,22:27-55(1984)所描述，組合施用時(shí)化合物的效應(yīng)(在本案中，btk的抑制作用)大于作為單一藥物單獨(dú)施用化合物的累加效應(yīng)時(shí)存在。一般而言，協(xié)同性效應(yīng)在化合物的亞最佳濃度最清楚地被證明。協(xié)同作用可呈現(xiàn)較低的細(xì)胞毒性，增加的抗btk效果，或與單個(gè)組分相比組合的一些其它有益效果。
所述其它治療藥物的實(shí)例包括皮質(zhì)類甾醇、咯利普蘭、鈣感光蛋白(calphostin)、細(xì)胞因子抑制性抗炎藥(csaid)、美國專利4,200,750公開的4-取代的咪唑并[1,2-a]喹喔啉；白介素-10、糖皮質(zhì)激素、水楊酸酯、一氧化氮和其它免疫抑制劑；核轉(zhuǎn)位抑制劑，諸如脫氧精胍菌素(dsg)；非甾類抗炎藥(nsaid)，諸如布洛芬、塞來考昔和羅非考昔；甾類，諸如潑尼松或地塞米松；抗病毒劑，諸如阿巴卡韋；抗增殖劑，諸如甲氨喋呤、來氟米特、fk506(他克莫司，
上述其它治療藥物，當(dāng)與本發(fā)明化合物聯(lián)用時(shí)，可例如以physicians'deskreference(pdr)中標(biāo)示的那些量或本領(lǐng)域技術(shù)人員所確定的其它量使用。在本發(fā)明的方法中，所述其它治療藥物可在施用本發(fā)明化合物之前、同時(shí)或之后施用。如上文所述，本發(fā)明還提供能夠治療btk激酶相關(guān)病癥(包括il-1、il-6、il-8、ifnγ和tnf-α介導(dǎo)的疾病)的藥物組合物。
本發(fā)明組合物可含有上述其它治療藥物，并且可例如如下配制：按照例如藥物制劑領(lǐng)域公知的技術(shù)，使用常規(guī)的固態(tài)或液態(tài)媒介物或稀釋劑以及適于所期望施用模式的藥物添加劑(例如賦形劑、粘合劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、香料等)。
另一實(shí)施方案提供式(i)化合物，其用于療法中。在本實(shí)施方案中，用于療法可包括施用治療有效量的式(i)化合物。
另一實(shí)施方案提供式(i)化合物，其用于療法中。在本實(shí)施方案中，用于療法可包括施用治療有效量的式(i)化合物。
本發(fā)明還提供式(i)化合物在制備用于治療或預(yù)防變應(yīng)性病癥和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病的藥物中的用途。在本實(shí)施方案中，制備藥物的用途可包括施用治療有效量的式(i)化合物用于治療或預(yù)防變應(yīng)性病癥和/或炎性疾病的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供式(i)化合物用于治療癌癥的藥物中的用途。本發(fā)明可包括制備用于治療或預(yù)防變應(yīng)性病癥和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病的藥物中的用途，其包括施用治療有效量的式(i)化合物。
本發(fā)明還包括組合物，所述組合物包含一種或多種式(i)化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明還包括組合物，所述組合物包含一種或多種式(i)化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
“藥學(xué)上可接受的載體”是指本領(lǐng)域通常接受的用于將生物活性藥物遞送至動(dòng)物特別是哺乳動(dòng)物的介質(zhì)。藥學(xué)上可接受的載體根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員知識范圍內(nèi)公知的多種因素來配制。這些因素包括但不限于所配制的活性藥物的類型和性質(zhì)；待施用含試劑組合物的受試者；組合物的預(yù)期施用途徑；和所靶向的治療適應(yīng)癥。藥學(xué)上可接受的載體包括水性和非水性液體介質(zhì)以及各種固體和半固體劑型。除活性藥物之外，所述載體還可包括多種不同的成分和添加劑，這樣的其它成分出于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的各種原因(例如使活性藥物、粘合劑等穩(wěn)定)而包含于制劑中。有關(guān)合適的藥學(xué)上可接受的載體和選擇它們時(shí)所涉及的因素的描述可很容易找到，參考如remington’spharmaceuticalsciences，第17版(1985)，通過引用的方式將其全文并入本申請。
式(i)化合物可以適于待治療病癥的任何方式施用，這可取決于對位點(diǎn)特異性治療或待遞送藥物的量的需要。盡管其它遞送模式也包括在本發(fā)明中，局部施用通常優(yōu)選用于皮膚相關(guān)疾病，而全身治療優(yōu)選用于癌癥病癥或癌前病癥(pre-cancerouscondition)。例如，所述化合物可口服遞送，諸如以片劑、膠囊、顆粒、粉末或液態(tài)制劑(包括糖漿劑)的形式；局部遞送，諸如以溶液、混懸液、凝膠或軟膏的形式；舌下遞送；口腔遞送；腸胃外遞送，諸如通過皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或胸骨內(nèi)注射或輸注技術(shù)(例如以無菌注射水或非水溶液或混懸液)；經(jīng)鼻遞送，諸如通過吸入噴霧；局部遞送，諸如以乳液或軟膏的形式；經(jīng)直腸遞送，諸如以栓劑的形式；或通過脂質(zhì)體遞送?？墒┯煤袩o毒的藥學(xué)上可接受的媒介物或稀釋劑的劑量單位制劑。所述化合物可按適于立即釋放或延長釋放的形式施用。立即釋放或延長釋放可通過以下方法實(shí)現(xiàn)：使用合適的藥物組合物，或特別是在延長釋放的情況下，使用諸如皮下植入物或滲透泵那樣的裝置。
用于局部施用的示例性組合物包括局部載體諸如plastibase(與聚乙烯一起膠凝的礦物油)。
用于口服施用的示例性組合物包括混懸劑，其可含有例如用于賦予體積(bulk)的微晶纖維素、作為助懸劑的海藻酸或海藻酸鈉、作為增稠劑的甲基纖維素以及諸如本領(lǐng)域已知的增甜劑或矯味劑；立即釋放的片劑，其可含有例如微晶纖維素、磷酸二鈣、淀粉、硬脂酸鎂和/或乳糖和/或如本領(lǐng)域已知的其它賦形劑、粘合劑、膨脹劑、崩解劑、稀釋劑和潤滑劑。本發(fā)明化合物還可通過舌下施用和/或口腔施用例如以模制的、壓制的或冷凍干燥的片劑的形式經(jīng)口遞送。示例性組合物可包括快速溶解的稀釋劑，諸如甘露醇、乳糖、蔗糖和/或環(huán)糊精。所述制劑還可包括高分子量賦形劑諸如纖維素
用于鼻氣霧劑或用于吸入施用的示例性組合物包括溶液，其可含有例如芐醇或其它合適的防腐劑、提高吸收和/或生物利用度的吸收促進(jìn)劑，和/或諸如本領(lǐng)域已知的其它增溶劑或分散劑。
用于腸胃外施用的示例性組合物包括注射用溶液或混懸劑，其可含有例如合適的無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑(諸如甘露醇、1,3-丁二醇、水、林格溶液、等張氯化鈉溶液)或其它合適的分散劑或濕潤劑及助懸劑(包括合成的甘油一酯或甘油二酯及脂肪酸(包括油酸))。
直腸施用的示例性組合物包括栓劑，其可含有例如合適的非刺激性的賦形劑，諸如可可酯、合成的甘油酯或聚乙二醇，所述栓劑在常溫是固態(tài)的，但在直腸腔道中液化和/或溶解以釋放藥物。
本發(fā)明化合物的治療有效量可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定，并且包括用于哺乳動(dòng)物的示例性劑量即每日每千克體重約0.05-1000mg、1-1000mg、1-50mg、5-250mg、250-1000mg活性化合物，其可按單一劑量形式施用或按各個(gè)分開劑量(諸如每天1至4次)形式施用。應(yīng)當(dāng)理解，就任何特定受試者而言的具體劑量水平和施用頻率可發(fā)生變化且將取決于多種因素，這些因素包括所使用的具體化合物的活性；所述化合物的代謝穩(wěn)定性和作用持續(xù)時(shí)間；受試者的物種、年齡、體重、一般健康情況、性別和飲食；施用模式和施用時(shí)間；排泄速率；藥物組合和具體病癥的嚴(yán)重程度。優(yōu)選的治療受試者包括動(dòng)物，最優(yōu)選為哺乳動(dòng)物物種，諸如人類和家畜(諸如狗、貓、馬等)。因此，當(dāng)術(shù)語“患者”在本申請使用時(shí)，該術(shù)語意欲包括受btk酶水平介導(dǎo)所影響的所有受試者，最優(yōu)選為哺乳動(dòng)物物種。
下文“實(shí)施例”節(jié)中詳述的式(i)化合物的實(shí)施例，已在一種或多種下文所述的測定法中的測試。
在一個(gè)實(shí)施方案中，如通過人重組btk酶測定所測量，式(i)化合物抑制btk酶，ic50值為0.4nm或更小，例如0.001至0.4nm。該實(shí)施方案包括抑制btk酶的式(i)化合物，ic50值為0.3nm和更小，例如0.001至0.3nm。該實(shí)施方案的其它化合物抑制btk酶，ic50值為0.25nm或更小，例如0.001至0.25nm。
在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物具有抑制用抗-人igm刺激的ramosra1b細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)鈣通量的有用效力，ic50值為25nm或更小，例如0.1至25nm。該實(shí)施方案包括式(i)化合物，其具有抑制用抗人igm刺激的ramosra1b細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)鈣通量的效力，ic50值為20nm或更小，例如為0.1至20nm；并且ic50值為15nm或更小，例如0.1至15nm。
在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物抑制btk酶，如通過人重組btk酶測定法所測量，ic50值為0.4nm或更小，例如0.001至0.4nm，并且抑制用抗-人igm刺激的ramosra1b細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)鈣通量，ic50值為25nm或更小，例如0.1至25nm。
在一個(gè)實(shí)施方案中，式(i)化合物抑制btk酶，如通過人重組btk酶測定法所測量，ic50值為0.4nm或更小，例如0.001至0.4nm，并且抑制用抗-人igm刺激的ramosra1b細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)鈣通量，ic50值為20nm或更小，例如0.1至20nm。
制備方法
本發(fā)明化合物可以有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種方式制備。本發(fā)明化合物可使用下文描述的方法以及合成有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域已知的合成方法，或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的它們的變化形式合成。優(yōu)選的方法包括但不限于下述那些。反應(yīng)在適用于所采用的試劑和材料且適用于所進(jìn)行的轉(zhuǎn)化的溶劑或溶劑混合物中進(jìn)行。有機(jī)合成領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，分子上存在的官能團(tuán)應(yīng)與所提出的轉(zhuǎn)化一致。為了獲得期望的本發(fā)明化合物，有時(shí)需要作出判斷以修正合成步驟的順序，或者相對于另一種方法而選擇一種特定的方法。
有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，一些存在于中間體化合物或式(i)化合物中的官能團(tuán)可能不穩(wěn)定或以其它方式不適于一些用于制備它們或?qū)⑺鼈冝D(zhuǎn)化成其它中間體或式(i)化合物的反應(yīng)條件。在這些情況下，可通過轉(zhuǎn)化成替代官能團(tuán)來保護(hù)所述官能團(tuán)，所述替代官能團(tuán)對所要采用的反應(yīng)條件是穩(wěn)定的或更適于所要采用的反應(yīng)條件。然后，這些經(jīng)保護(hù)的官能團(tuán)可在合成的后期轉(zhuǎn)化回原來的官能團(tuán)。實(shí)例是將羧酸保護(hù)成羧酸酯，將伯胺或仲胺保護(hù)成叔丁基氧基羰基(boc)衍生物或芐基氧基羰基(cbz)衍生物，或?qū)⑦沁蚧蛩臍溥沁虻Ｗo(hù)成2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(sem)衍生物。保護(hù)基團(tuán)的使用是文獻(xiàn)中公知的；對于受過培訓(xùn)的從業(yè)者而言，描述許多替代物的權(quán)威性著作是wuts,p.etal.,greene'sprotectivegroupsinorganicsynthesis,fourthedition,wiley-interscience(2006)。
表示某些式(i)化合物的化合物3可使用方案1中所示的方法制備。
方案1
經(jīng)取代的咔唑甲酰胺或四氫咔唑甲酰胺1，其中y為適當(dāng)?shù)幕鶊F(tuán)諸如br、cl或三氟甲磺?；趸c硼酸或硼酸酯2(其中r為例如h、烷基或一起形成任選取代的1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷或1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)己烷)，其中ar表示式(i)的基團(tuán)q之一，以提供化合物3。該反應(yīng)可如下進(jìn)行：通過使用合適的堿(諸如碳酸鉀、碳酸銫或磷酸三鉀)，以及合適的催化劑(諸如四(三苯基膦)鈀、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵氯化鈀(ii)或1,1'-雙(二叔丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(ii))，于合適的溶劑(諸如1,4-二噁烷、n,n-二甲基甲酰胺或四氫呋喃)中，所述溶劑任選地含有一種或多種合適的助溶劑(諸如水或乙醇)。此類偶聯(lián)反應(yīng)通常稱為suzuki-miyaura偶聯(lián)反應(yīng)，并且在化學(xué)文獻(xiàn)中已知(參見例如heravi,m.etal.,tetrahedron,68:9145(2012)及其中引用的參考文獻(xiàn))。
可選擇地，使用化學(xué)文獻(xiàn)中已知的方法(參見，例如ishiyama,t.etal.,tetrahedron,57:9813(2001)及其中引用的參考文獻(xiàn))，可將經(jīng)取代的咔唑甲酰胺或四氫咔唑甲酰胺1轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的硼酸或硼酸酯4(其中r為例如h、烷基或一起形成任選取代的1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷或1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)己烷)。此類方法的實(shí)例為1與試劑(諸如4,4,4′,4′,5,5,5′,5′-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷))在堿(諸如乙酸鉀)和合適的催化劑(諸如1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵氯化鈀(ii))存在下于合適的溶劑中的反應(yīng)。可選擇地，化合物1(其中y為br)與有機(jī)金屬試劑(諸如丁基鋰或異丙基氯化鎂)反應(yīng)，隨后用硼酸酯(諸如硼酸三甲酯或硼酸三異丙酯)處理，隨后水解所得硼酸酯，可得到硼酸4(r＝h)。使用如上所述的suzuki-miyaura偶聯(lián)反應(yīng)，化合物4與合適的化合物5反應(yīng)，其中ar表示式(i)的基團(tuán)q之一，y為適當(dāng)?shù)幕鶊F(tuán)，諸如br、cl或三氟甲磺?；趸?，也可得到化合物3。
化合物2可使用與由化合物1制備化合物4所述相同的方法由化合物5制備。
方案2
如方案2所示，空間位阻可引起圍繞標(biāo)記為a的鍵的受限旋轉(zhuǎn)，并且化合物3a展現(xiàn)出手性，稱為阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，并且可以兩種對映異構(gòu)體3b和3c存在。(在方案2中，為了說明的目的，q表示為四氫異喹啉-5-基)。在某些條件下，諸如手性固定相上的色譜，可在色譜圖中觀察到對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體作為兩個(gè)單獨(dú)的峰?？蓪⒋祟惢衔镒鳛閷τ钞悩?gòu)體的混合物分離，或者可使用本領(lǐng)域已知的方法分離對映異構(gòu)體，諸如固定相上的制備型色譜。在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存和處理?xiàng)l件下，分離的對映體可為可分離且穩(wěn)定的。
在某些情況下，化合物3為四氫咔唑甲酰胺(其中虛線表示單鍵)，且r1a和r1b彼此不同。一個(gè)實(shí)例為3d，如方案3所示，其中r1a不為氫。(該實(shí)例僅為說明性的而非限制性的)。在這種情況下，存在兩個(gè)手性中心：r1a的連接點(diǎn)和如上所述的標(biāo)記為a的鍵。因此，四種非對映異構(gòu)體是可能的(3e、3f、3g和3h)。因此，化合物3d可作為所有四種非對映異構(gòu)體的混合物，或作為單一非對映異構(gòu)體，或作為兩種或更多種非對映異構(gòu)體的混合物存在。非對映異構(gòu)體對(3e、3f、3g和3h)的外消旋混合物是可能的。如上所述，非對映異構(gòu)體可使用文獻(xiàn)中已知的方法分離，諸如手性固定相上的色譜。
方案3
在某些情況下，化合物3可由手性四氫咔唑甲酰胺1或4的單一對映異構(gòu)體制備。在這些情況下，兩種非對映異構(gòu)體的混合物可由得到化合物3的suzuki-miyaura反應(yīng)產(chǎn)生。實(shí)例為3i和3j，如方案3所示，其中r1、r3和r4均不為氫。(這些實(shí)例僅為說明性的而非限制性的)。由適當(dāng)化合物1或4的一種對映異構(gòu)體形成的化合物3i將是非對映異構(gòu)體3e和3f的混合物，而由適當(dāng)化合物1或4的另一種對映異構(gòu)體形成的化合物3j將是非對映異構(gòu)體3g和3h的混合物。如上所述，可使用文獻(xiàn)中已知的方法分離這些非對映異構(gòu)體，諸如色譜或選擇性結(jié)晶。
在某些情況下，其中1或4為手性四氫咔唑甲酰胺，在suzuki-miyaura偶聯(lián)反應(yīng)中可發(fā)生手性誘導(dǎo)，以得到化合物3。在這些情況下，可獲得不是等摩爾混合物的非對映異構(gòu)體的混合物；也就是說，化合物3可為非對映異構(gòu)體的混合物，其中一種或多種具有鍵a(具有一種絕對構(gòu)型)的非對映異構(gòu)體比一種或多種具有鍵a(具有相反絕對構(gòu)型)的非對映異構(gòu)體以更大的程度存在。
某些由7表示的式(i)化合物可使用方案4中所示的方法制備。
方案4
這些方法涉及使攜帶仲胺的化合物6(即，其中xh表示式(i)的基團(tuán)q，其中r5被h替代)與適當(dāng)?shù)脑噭﹔5-z反應(yīng)，其中z表示離去基團(tuán)諸如cl或oh，以得到化合物7，其中xr5表示由此類反應(yīng)得到的式(i)的基團(tuán)q之一。此類胺的反應(yīng)是文獻(xiàn)中已知的。此類反應(yīng)的一個(gè)實(shí)例為化合物6的胺與羧酸酰氯或羧酸酐的?；ǔＴ诤线m的溶劑(諸如四氫呋喃、乙酸乙酯、乙腈或二氯甲烷)中，通常在堿(諸如三乙胺、二異丙基乙基胺、吡啶)或無機(jī)堿(諸如氫氧化鈉或碳酸鉀)的水溶液存在下進(jìn)行?？商鎿Q地，可使用溶劑(諸如吡啶)，在這種情況下溶劑也可用作堿。
方案4中所示的反應(yīng)的另一實(shí)例是使用文獻(xiàn)中已知的許多酰胺偶聯(lián)劑，使化合物6的胺與羧酸進(jìn)行酰化，例如，(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻鎓六氟磷酸鹽(也稱為bop或castro試劑)、o-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-n,n,n′,n′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(也稱為hatu)，或n,n′-二環(huán)己基碳二亞胺或1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(也稱為edc)與試劑諸如1-羥基苯并三唑(也稱為hobt)或1-羥基-7-氮雜苯并三唑(也稱為hoat)的組合。此類反應(yīng)通常在合適的溶劑(諸如乙酸乙酯、二氯甲烷、四氫呋喃、n,n-二甲基甲酰胺或n-甲基吡咯烷-2-酮)中，在合適的堿(諸如三乙胺或二異丙基乙基胺)存在下進(jìn)行。
方案4的某些化合物6，其中xh表示其中r5被h替代的式(i)的基團(tuán)q，可如方案5所示制備。
方案5
化合物1與硼酸或硼酸酯8(其中xp類似于方案4中的xh)的反應(yīng)；p可為h或合適的胺保護(hù)基，例如叔丁基氧基羰基(boc)或芐基氧基羰基(cbz)，其在文獻(xiàn)中被稱為胺的保護(hù)基團(tuán))，使用如上所述的suzuki-miyaura偶聯(lián)物(方案1)，如果必要，可在除去保護(hù)基團(tuán)p后得到相應(yīng)的化合物6。如果化合物8中的p表示h，則可直接獲得化合物6。
通過類似于方案1中所示的方法，方法5中還示出了制備方案4的化合物6的替代方法，其中xh表示其中r5被h替代的式(i)的基團(tuán)q。方案1的硼酸或硼酸酯4(其中r為例如h、烷基或一起形成任選取代的1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷或1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)己烷)與化合物9反應(yīng)，其中y為適當(dāng)?shù)碾x去基團(tuán)諸如br、cl或三氟磺?；趸褂萌缟纤龅膕uzuki-miyaura偶聯(lián)，也可得到化合物6。如上所述，p可為h，或p可為合適的保護(hù)基團(tuán)，在這種情況下脫保護(hù)可得到化合物6。
此外，化合物8可使用針對由化合物1制備化合物4所述的方法(方案1)相同的方法由化合物9制備。
用于制備式(i)化合物的化合物1(參見方案1)可使用方案6中所示的操作制備。
方案6
可使用文獻(xiàn)中已知的方法將經(jīng)取代的2-氨基苯甲酸10(文獻(xiàn)中已知的或使用文獻(xiàn)中已知的方法制備)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的2-肼基苯甲酸11，其為鹽酸鹽，例如通過用亞硝酸鈉/鹽酸水溶液處理，隨后用氯化錫(ii)還原，轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的重氮鹽。11與合適的環(huán)己酮12于合適的溶劑中與合適的催化劑(例如乙醇與鹽酸、甲苯與對甲苯磺酸或三氟乙酸或乙酸)反應(yīng)(在這種情況下，溶劑也可作為催化劑)，可得到相應(yīng)的經(jīng)取代的四氫咔唑13。該反應(yīng)通常稱為fischer吲哚合成，并且是化學(xué)文獻(xiàn)中已知的(例如，參見kamata,j.etal.,chem.pharm.bull.,52:1071(2004))?？蛇x擇地，可在兩個(gè)連續(xù)的步驟中進(jìn)行fischer吲哚合成：11可在合適的條件下(諸如在合適的溶劑(諸如乙醇或甲苯)中，任選用合適的催化劑(諸如對甲苯磺酸))與12反應(yīng)形成中間體腙，其可被分離，然后在合適的條件(例如乙醇與鹽酸、乙酸與氯化鋅或三氟乙酸與甲苯)下進(jìn)一步反應(yīng)，得到化合物13。
可使用化學(xué)文獻(xiàn)中已知的方法將化合物13的羧酸轉(zhuǎn)化成化合物14的相應(yīng)的羧酰胺(其為方案1中所示的化合物1的實(shí)例)，例如通過以下方法將化合物13轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酰氯：用草酰氯或亞硫酰氯處理相應(yīng)的酸，隨后用氨處理；或在偶聯(lián)劑諸如碳二亞胺或edc與hoat的混合物存在下用氨或氯化銨處理化合物13。在其中r1b和r2b均為h的化合物14的情況下，可使用化學(xué)文獻(xiàn)中已知的方法將化合物14轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的咔唑16(其為方案1所示的化合物1的另一實(shí)例)，例如，在合適的溶劑中用氧化劑(諸如ddq)處理化合物14。
可選擇地，可顛倒酰胺形成和氧化步驟的順序以將化合物13(其中r1b和r2b均為h)轉(zhuǎn)化成化合物16。因此，可使用上述方法或類似操作將化合物13(其中r1b和r2b均為h)氧化，得到相應(yīng)的化合物15。然后，可再次使用上述方法或類似操作將化合物15的羧酸轉(zhuǎn)化成伯酰胺，得到相應(yīng)的化合物16。
化合物13和14(其中r1a和r1b彼此不同)含有手性中心，因此作為兩種對映異構(gòu)體存在。如方案6所示的化合物13和14的制備可得到外消旋產(chǎn)物，其可用于制備如方案1所示的式(i)化合物。可選擇地，化合物13和14可使用公知的方法諸如手性固定相上的色譜解析成分離的對映異構(gòu)體。
有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識到，，一些取代基r1a可能與如方案1、4、5和6所示用于制備式(i)化合物或中間體化合物的反應(yīng)條件不相容。在這些情況下，在某些合成步驟中不同的取代基可代替r1a，并且在合成的適當(dāng)階段使用化學(xué)文獻(xiàn)中已知的方法將其轉(zhuǎn)化為r1a。可選擇地，在某些情況下，合適的保護(hù)基團(tuán)可用于在某些合成步驟中保護(hù)r1a，并在合成的適當(dāng)階段除去。此類情況對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。此類合成轉(zhuǎn)化的一些實(shí)例示于方案7。
方案1所示的攜帶某些取代基r1a和r1b的化合物1可由前體化合物17制備?；衔?7可使用方案6中所示的方法制備，但是在方案6中用3-氧代環(huán)己烷甲酸乙酯代替化合物12。(化合物17的一些實(shí)例述于文獻(xiàn)中，例如美國專利8,084,620中的中間體47-2和48-1及實(shí)施例73-1)?；衔?7的羧酸酯向r1a和r1b的一些轉(zhuǎn)化示于方案7；這些中的一些以及其它也在美國專利8,084,620的實(shí)施例中說明。方案7中的化合物18、20和22為方案1中所示的化合物1的實(shí)例。
方案7
通過用合適的還原劑(諸如氫化鋁鋰)在合適的溶劑(諸如四氫呋喃)中處理，可將化合物17的酯部分還原成化合物18的相應(yīng)的伯甲醇(primarycarbinol)(ra和rb均為h)?？蛇x擇地，通過在合適的溶劑(諸如四氫呋喃)中，用合適的試劑(諸如甲基氯化鎂或甲基鋰)處理，可將化合物17的酯部分轉(zhuǎn)化成化合物18的相應(yīng)的叔甲醇(ra和rb均為甲基)。
化合物17的酯部分可水解成化合物19的相應(yīng)羧酸，例如，通過在合適的共溶劑(諸如甲醇、乙醇或四氫呋喃)中用氫氧化鋰或氫氧化鈉水溶液處理?；衔?9的羧酸部分可轉(zhuǎn)化成化合物18的仲甲醇部分(ra和rb中的一個(gè)為h，另一個(gè)為甲基)，例如，通過轉(zhuǎn)化為n,o-二甲基羥肟酸酯(通常稱為weinreb酰胺)，隨后用試劑(諸如甲基氯化鎂或甲基鋰)處理，隨后用合適的還原劑(諸如硼氫化鈉)還原如此形成的酮?？蛇x擇地，化合物19的羧酸部分可使用各種方法中的任一種轉(zhuǎn)化為化合物20的酰胺，諸如轉(zhuǎn)化成酰氯，然后用氨或伯胺或仲胺處理，或通過在合適的偶聯(lián)試劑(諸如hatu、bop或edc與hobt或hoat的組合)存在下用氨或氯化銨或伯胺或仲胺處理。
在化合物17的虛線表示單鍵的情況下，可通過在合適的溶劑(諸如四氫呋喃)中用堿(諸如雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰或二異丙基氨基鋰)處理化合物17，并用烷基化劑(諸如碘甲烷)處理所得陰離子，將攜帶酯部分的碳原子烷基化，得到化合物21，其中r'為甲基。然后通過與如上所述用于制備化合物18相同的方法，可將化合物21的酯部分轉(zhuǎn)化成化合物22的甲醇(carbinol)部分(其中ra和rb均為h、甲基或一個(gè)為h，且另一個(gè)為甲基)。
用于制備式(i)化合物的方案1的某些化合物1也可使用方案8中所示的操作制備。
方案8
可用適當(dāng)?shù)柠u化試劑處理如方法6所示由適當(dāng)?shù)?-肼基苯甲酸制備的化合物23(參見，例如，美國專利8,084,620，中間體48-1)，得到化合物24，其中r3為鹵素原子。例如，用氯化試劑諸如n-氯代琥珀酰亞胺處理化合物23可得到其中r3為cl的化合物24，而用氟化試劑諸如1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮雜二環(huán)[2.2.2]辛烷-雙(四氟硼酸)鹽
如方案9所示，化合物26可轉(zhuǎn)化成化合物27，化合物27為方案1的化合物5的實(shí)例。類似地，化合物28可轉(zhuǎn)化成化合物29，化合物29為方案1的化合物2的實(shí)例。
方案9
在方案11中，y表示適合的基團(tuán)，諸如br、cl或三氟甲磺酰基氧基；(ro)2b表示硼酸或硼酸酯；并且xh表示式(i)的基團(tuán)q，其中r5被h替代?；衔?6轉(zhuǎn)化成化合物27，化合物28轉(zhuǎn)化成化合物29可使用與針對方案4中化合物6轉(zhuǎn)化成化合物7的類似轉(zhuǎn)化所述相同的方法來實(shí)現(xiàn)。此外，化合物26轉(zhuǎn)化成化合物28以及化合物27轉(zhuǎn)化成化合物29可使用與針對方案1中化合物1轉(zhuǎn)化成化合物4的轉(zhuǎn)化所述的方法來實(shí)現(xiàn)。
在一些情況下，當(dāng)中間體化合物轉(zhuǎn)化成另一種中間體化合物或式(i)化合物需要多于一個(gè)合成反應(yīng)時(shí)，可改變各步驟的順序。有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到這些情況。一個(gè)實(shí)例示于方案9?；衔?6轉(zhuǎn)化成化合物29可通過以下方式進(jìn)行：(1)將化合物26的胺轉(zhuǎn)化成化合物27的經(jīng)取代的胺，隨后(2)將化合物27的基團(tuán)y轉(zhuǎn)化成化合物29的硼酸或硼酸酯?？蛇x擇地，化合物26向化合物29的相同轉(zhuǎn)化可通過以下方式進(jìn)行：(1)將化合物26的基團(tuán)y轉(zhuǎn)化成化合物28的硼酸或硼酸酯，隨后(2)將化合物28的胺轉(zhuǎn)化為化合物29的經(jīng)取代的胺。另一實(shí)例示于方案6。化合物13轉(zhuǎn)化成化合物16可通過以下方式進(jìn)行：(1)將化合物13的羧酸轉(zhuǎn)化成化合物14的羧酰胺，隨后(2)將化合物14氧化成咔唑16?？蛇x擇地，化合物13向化合物16的相同轉(zhuǎn)化可通過以下方式進(jìn)行：(1)將化合物13氧化成咔唑15，隨后(2)將化合物15的羧酸轉(zhuǎn)化成化合物16的羧酰胺。
實(shí)施例
本發(fā)明化合物和用于制備本發(fā)明化合物的中間體可使用以下實(shí)施例和相關(guān)存在中所示的存在制備。這些實(shí)施例中使用的方法和條件以及這些實(shí)施例中制備的實(shí)際化合物并非意在限制，而是意在說明可如何制備本發(fā)明化合物。這些實(shí)施例中使用的起始物質(zhì)和試劑，當(dāng)不是通過本申請所述的方法制備時(shí)，通常是可商購的，或化學(xué)文獻(xiàn)中報(bào)道的，或者可通過使用化學(xué)文獻(xiàn)中描述的方法制備。本發(fā)明在以下實(shí)施例中進(jìn)一步限定。應(yīng)當(dāng)理解，實(shí)施例僅以說明的方式給出。從上述討論和實(shí)例中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定本發(fā)明的基本特征，并且在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可進(jìn)行各種改變和修正，以使本發(fā)明適應(yīng)各種用途和條件。結(jié)果是，本發(fā)明不受下文闡述的說明性示例的限制，而是由所附權(quán)利要求限定。
在給定實(shí)施例中，短語“干燥和濃縮”通常是指使用無水硫酸鈉或硫酸鎂從有機(jī)溶劑中的溶液中除去大部分殘留水，隨后過濾并從濾液中除去溶劑(通常在減壓下且在適于待制備的物質(zhì)的穩(wěn)定性的溫度)。柱色譜通常如下進(jìn)行：使用快速色譜法(still,w.etal.,j.org.chem.,43:2923(1978))或使用isco中壓色譜儀用預(yù)先填充的硅膠管柱(teledynecorporation)，用指示的溶劑或溶劑混合物洗脫。制備型高壓液相色譜(hplc)如下進(jìn)行：以適于柱尺寸和分離的洗脫速度，使用具有適于待分離物質(zhì)的量的尺寸的反相柱(waterssunfirec18,watersxbridgec18,
使用cukα輻射
化學(xué)名稱使用chembiodrawultra12.0版(cambridgesoft)來確定。
縮寫
ac乙酰基
acn乙腈
acoh乙酸
aq.含水的
anhyd.無水的
boc叔丁基氧基羰基
bop苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻鎓六氟磷酸鹽
cbz芐基氧基羰基
conc.濃度
dcm二氯甲烷
ddq2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌
diea二異丙基乙基胺
dmfn,n-二甲基甲酰胺
dmso二甲基亞砜
dppf1,1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵
edc1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽
eq.或eq.或equiv.當(dāng)量
etoac乙酸乙酯
h或hr小時(shí)
hatuo-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽
hoat1-羥基-7-氮雜苯并三唑
hobt1-羥基苯并三唑
lc液相色譜
lcms或lc/ms液相色譜質(zhì)譜
me甲基
meoh甲醇
mhz兆赫
min.分鐘
m+(m+h)+
m+1(m+h)+
ms質(zhì)譜
m/z質(zhì)荷比
n當(dāng)量濃度
nmpn-甲基吡咯烷酮
nmr核磁共振
ppm百萬分之一
rettime或rt保留時(shí)間
sat.或sat'd.飽和的
sec秒
tfa三氟乙酸
thf四氫呋喃
中間體1
(rs)-5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺
中間體1a：4-溴-2,5-二氟苯甲酸
將于干冰-丙酮浴中冷卻的1,4-二溴-2,5-二氟苯(640mg,2.35mmol)在無水乙醚(10ml)中的溶液用2.5m正丁基鋰/己烷(1.04ml,2.59mmol)逐滴處理。將溶液在-78℃攪拌30分鐘，然后用一片干冰處理。5分鐘后移除冷卻浴并將混合物再攪拌30分鐘，同時(shí)溫?zé)嶂潦覝?。用etoac和水洗滌該混合物。分出有機(jī)相并用飽和nahco3水溶液洗滌兩次。用1mhcl水溶液酸化合并的有機(jī)相，用dcm萃取兩次，將合并的有機(jī)相干燥并濃縮，得到4-溴-2,5-二氟苯甲酸，其為白色固體(297mg,53％產(chǎn)率)。
中間體1b：4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽
將4-溴-2,5-二氟苯甲酸(2.50g,10.6mmol)和肼(3.81ml,121mmol)在n-甲基-2-吡咯烷酮(2ml)中的混合物在95℃加熱4小時(shí)。將冷卻的混合物傾入在nacl-冰浴中冷卻的劇烈攪拌的6mhcl水溶液(400ml)中。通過過濾收集所得析出物，用6mhcl水溶液(200ml)洗滌并在真空下干燥，得到4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽，其為黃色固體(1.88g,71％純度,44％產(chǎn)率)，未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。
中間體1b的替代合成：
將在nacl-冰浴上攪拌的2-氨基-4-溴-5-氟苯甲酸(10.0g,42.7mmol)在37％hcl水溶液(42.7ml)和水(14.3ml)的混合物中的混懸液用亞硝酸鈉(3.24g,47.0mmol)在水(15.7ml)中的溶液逐滴處理。當(dāng)添加完成時(shí)，將混合物再攪拌30分鐘。逐滴添加氯化亞錫(ii)二水合物(28.9g,128mmol)在37％hcl水溶液(27.5ml)中的溶液。移除冷卻浴并將混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘。過濾濃混懸液，用水徹底洗滌所收集的析出物并減壓干燥過夜。伴隨超聲處理用meoh研磨固體，通過過濾收集沉淀，用meoh洗滌并干燥。將濾液濃縮，并用dcm研磨殘余物。通過過濾收集所得固體并干燥，將兩種固體合并，得到4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(5.37g,44％產(chǎn)率)，其為白色固體。質(zhì)譜m/z249,251(m+h)+。
中間體1c：5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-23，4，9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸
將4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(5.00g,17.5mmol)和(rs)-3-三氟甲基環(huán)己酮(4.07g,24.5mmol)在乙酸(8.0ml)中的混合物在78℃攪拌18小時(shí)。將混合物冷卻至室溫并濃縮。將殘余物混懸于etoac，通過過濾收集析出物并干燥。濃縮濾液并將殘余物混懸于dcm。通過過濾收集析出物并干燥，將兩種析出物合并，得到5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸，其為淺橙色固體(4.10g,55％產(chǎn)率)。質(zhì)譜m/z380,382(m+h)+。
中間體1：
將5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸(2.00g,5.26mmol)、nh4cl(2.81g,52.6mmol)和hatu(2.20g,5.79mmol)在dmf(25ml)中的溶液用三乙胺(3.67ml,26.3mmol)處理并將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。添加冰水(30ml)并將混合物攪拌30分鐘。通過過濾收集析出物并用水(60ml)洗滌。將所收集的固體兩次混懸于甲苯(30ml)并真空濃縮，然后干燥。殘余物經(jīng)受用10％meoh/etoac-己烷(0-100％的梯度)洗脫的硅膠柱色譜，得到5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺，其為淺黃色固體(1.55g,74％產(chǎn)率)。質(zhì)譜m/z379,381(m+h)+。1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ7.46(d,j＝9.9hz,1h),3.46(dd,j＝16.1,4.4hz,1h),3.11(dd,j＝16.4,5.3hz,1h),3.06-2.93(m,1h),2.92-2.80(m,1h),2.79-2.59(m,1h),2.37-2.23(m,1h),1.86-1.65(m,1h)。
中間體2
5-溴-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺
遵循用于將中間體1b轉(zhuǎn)化成中間體1的操作，將4,4-二氟環(huán)己酮轉(zhuǎn)化成5-溴-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺。質(zhì)譜m/z347,349(m+h)+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.34(s,1h),8.12(br.s.,1h),7.64(d,j＝10.1hz,1h),7.57(br.s.,1h),3.54(t,j＝14.4hz,2h),2.97(t,j＝6.6hz,2h),2.31(tt,j＝13.9,6.7hz,2h)。
中間體3
4-溴-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺
中間體3a：5-溴-6-氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸
將4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽[中間體1b](12.0g,42.0mmol)和環(huán)己酮(12.4g,126mmol)在乙酸(90ml)中的混合物在攪拌90℃過夜。將混合物冷卻至室溫并通過過濾收集析出物，用水洗滌并干燥，得到5-溴-6-氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸(5.02g,16.1mmol,38％產(chǎn)率)，其為淺黃色固體。質(zhì)譜m/z312,314(m+h)+。
中間體3b：4-溴-3-氟-9h-咔唑-1-甲酸
將5-溴-6-氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸(5.00g,16.0mmol)和ddq(8.00g,35.2mmol)在thf(60ml)中的混合物在60℃攪拌3小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，用etoac稀釋，依序用飽和nahco3水溶液、水和1mhcl水溶液洗滌，干燥并濃縮，得到粗制的4-溴-3-氟-9h-咔唑-1-甲酸(5.30g,86％純度,80％純度)，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。
中間體3：
將4-溴-3-氟-9h-咔唑-1-甲酸(4.70g,15.3mmol)、hobt(2.34g,15.3mmol)和edc(2.92g,15.3mmol)在thf(70ml)中的混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。添加氫氧化銨水溶液(0.891ml,22.9mmol)并將混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。濃縮該混合物并將殘余物溶于etoac，用水洗滌兩次，然后用飽和nahco3水溶液洗滌，干燥并濃縮。用dcm研磨殘余物，得到4-溴-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺，其為淺棕色固體(3.40g,73％產(chǎn)率)。質(zhì)譜m/z307,309(m+h)+,290,292(m+h-nh3)+。1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ8.73(dd,j＝8.1,0.9hz,1h),7.83(d,j＝9.9hz,1h),7.69-7.63(m,1h),7.54(ddd,j＝8.2,7.1,1.2hz,1h),7.29(ddd,j＝8.1,7.1,1.0hz,1h)。
中間體4
4-溴-3-氟-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺
遵循用于將中間體3a轉(zhuǎn)化成中間體3的操作，將5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸[中間體1c]轉(zhuǎn)化成4-溴-3-氟-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺。質(zhì)譜m/z416,418(m+h+ch3cn)+。1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ8.83(d,j＝8.6hz,1h),8.00(d,j＝0.7hz,1h),7.89(d,j＝9.8hz,1h),7.52(dd,j＝8.4,1.1hz,1h)。
中間體5
(rs)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺
中間體5a：(rs)-5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸
將4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽[中間體1b](5.37g,18.8mmol)、(rs)-3-氧代環(huán)己烷甲酸乙酯(3.52g,20.7mmol)和乙酸(3.23ml,56.4mmol)在甲苯(90ml)中的混合物在110℃加熱20小時(shí)。減壓除去溶劑，并用甲苯(43ml)和tfa(11ml)稀釋殘余物。將混合物在90-94℃攪拌過夜。用etoac稀釋經(jīng)冷卻的混合物，超聲處理，并通過過濾收集析出物。濃縮濾液并伴隨超聲將殘余物混懸于etoac，得到另一份析出物，同樣通過過濾收集并用etoac洗滌。用meoh研磨合并的固體兩次，得到固體。濃縮合并的濾液并用meoh研磨殘余物，得到另外的固體。合并固體，得到(rs)-5-溴-2-乙氧基羰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸，其為淡黃色固體(3.38g)。質(zhì)譜m/z384,386(m+h)+。
中間體5b：(rs)-5-溴-8-氨甲酰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-2-甲酸乙酯
將(rs)-5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸(0.513g,1.34mmol)、edc(0.384g,2.00mmol)和hobt(0.307g,2.00mmol)在thf(10ml)和dcm(1.7ml)中的混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。添加nh4oh水溶液(28％,0.078ml,2.00mmol)，并將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。將混合物用etoac稀釋并先后用飽和nahco3水溶液和鹽水洗滌。用etoac萃取水層，將合并的有機(jī)層干燥并濃縮。伴隨超聲在meoh中研磨殘余物，得到(rs)-5-溴-8-氨甲酰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-2-甲酸乙酯，其為黃色固體(0.432g,84％產(chǎn)率)。質(zhì)譜m/z383,385(m+h)+。
中間體5：
在-78℃，歷時(shí)30分鐘，將(rs)-5-溴-8-氨甲?；?6-氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-2-甲酸乙酯(10.0g,26.1mmol)在thf(200ml)中的溶液用1.6m甲基鋰/醚(49ml,78mmol)逐滴處理。將混合物在-78℃攪拌45分鐘，然后歷時(shí)25分鐘用另外的甲基鋰溶液處理(33ml)。將混合物在-78℃再攪拌90分鐘，然后用飽和nh4cl水溶液處理并溫?zé)嶂潦覝?。用etoac稀釋該混合物并依序用水和鹽水洗滌。用etoac萃取水層。將合并的有機(jī)層干燥并濃縮。將殘余物溶于etoac(約100ml)并經(jīng)頂置硅膠墊的
中間體6和7
(r)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺(i-6)，和
(s)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺(i-7)
通過手性超臨界流體色譜(柱：
替代的超臨界流體色譜分離：
通過手性超臨界流體色譜(柱：
中間體8
6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-5-(rs)-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺(非對映異構(gòu)體的混合物)
中間體8a：5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊-2-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯
使5-溴-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯(0.500g,1.60mmol)和4,4,4′,4′,5,5,5′,5′-八甲基-2,2′-二(1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷)(0.488g,1.92mmol)在dmf(8ml)中的混合物經(jīng)受3次的抽真空-用氮?dú)馓畛涞难h(huán)。添加乙酸鉀(0.472g,4.80mmol)和pdcl2(dppf)dcm絡(luò)合物(0.117g,0.160mmol)，并使混合物再經(jīng)受2次抽真空-用氮?dú)馓畛涞难h(huán)，并在90℃在氮?dú)鈿夥障录訜徇^夜。將混合物冷卻至室溫，用etoac稀釋，依序用水、10％licl水溶液和飽和鹽水洗滌，干燥并濃縮。殘余物經(jīng)受用etoac-己烷洗脫的硅膠柱色譜，得到5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊-2-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯，其為白色固體(0.514g,89％產(chǎn)率)。質(zhì)譜m/z360(m+h)+。
中間體8b：5-(rs)-(8-氨甲?；?6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-5-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯(非對映異構(gòu)體的混合物)
將(s)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺[中間體7](0.155g,0.420mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊-2-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯(0.181g,0.504mmol)、2mk3po4水溶液(0.630ml,1.26mmol)和thf(3ml)的混合物經(jīng)受3次抽真空-用氮?dú)馓畛涞难h(huán)。將混合物用1,1′-雙(二叔丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(0.014g,0.021mmol)處理并使混合物再經(jīng)受2次抽真空-用氮?dú)馓畛涞难h(huán)。將混合物在室溫?cái)嚢柽^夜，然后用etoac稀釋，依序用水和飽和鹽水洗滌，干燥并濃縮。殘余物經(jīng)受用etoac-己烷(50-70％的梯度)洗脫的硅膠柱色譜，得到5-(rs)-(8-氨甲?；?6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-5-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯，即非對映異構(gòu)體的混合物，其為灰白色固體(0.178g,81％產(chǎn)率)。質(zhì)譜m/z522(m+h)+。
中間體8：
將5-(rs)-(8-氨甲?；?6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-5-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯(非對映異構(gòu)體的混合物)(0.178g,0.341mmol)和tfa(5ml)的混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。濃縮該混合物并用etoac稀釋殘余物，依序用1.5mk2hpo4水溶液和飽和鹽水洗滌，干燥并濃縮，得到6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-5-(rs)-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺，即非對映異構(gòu)體的混合物，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。質(zhì)譜m/z422(m+h)+。
中間體9和10
6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺(單一非對映異構(gòu)體)
粗制的6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-5-(rs)-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺(非對映異構(gòu)體的混合物)[中間體8]經(jīng)受制備型反相hplc。用飽和nahco3水溶液中和后，從柱中洗脫出的第一個(gè)峰提供一種6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的一種非對映異構(gòu)體[中間體9](0.036g,25％產(chǎn)率)，摻雜有1-2％第二個(gè)峰的非對映異構(gòu)體。用飽和nahco3水溶液中和后，從柱中洗脫出的第二個(gè)峰提供6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的另一種非對映異構(gòu)體[中間體10](0.031g,20％產(chǎn)率)，摻雜有8％第一個(gè)峰的非對映異構(gòu)體。兩種非對映異構(gòu)體的質(zhì)譜與中間體8的相同。hplc保留時(shí)間(柱：
中間體11
(rs)-3-氟-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-9h-咔唑-1-甲酰胺
遵循用于制備中間體8的操作，將4-溴-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺[中間體3]轉(zhuǎn)化成(rs)-3-氟-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-9h-咔唑-1-甲酰胺。質(zhì)譜m/z360(m+h)+。1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ7.85(d,j＝10.4hz,1h),7.60(d,j＝8.2hz,1h),7.53-7.46(m,1h),7.45-7.41(m,1h),7.40-7.36(m,1h),7.36-7.30(m,1h),6.93-6.86(m,1h),6.85-6.78(m,1h),4.50-4.27(m,2h),3.30-3.07(m,2h),2.85-2.68(m,1h),2.62-2.43(m,1h)。
中間體12
(rs)-3,3,6-三氟-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺
遵循用于制備中間體8的操作，將5-溴-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺[中間體2]轉(zhuǎn)化成(rs)-3,3,6-三氟-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺。質(zhì)譜m/z400(m+h)+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.10(br.s.,1h),7.34-7.29(m,1h),7.27-7.23(m,1h),7.20(d,j＝9.8hz,1h),7.15(dd,j＝7.4,1.3hz,1h),4.81-4.55(m,2h),3.75-3.59(m,1h),3.47(ddd,j＝12.8,7.9,4.6hz,1h),3.01(t,j＝6.6hz,2h),2.68-2.17(m,6h)。
中間體13
(rs)-3-氟-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺tfa鹽
遵循用于制備中間體8的操作，將4-溴-3-氟-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺[中間體4]轉(zhuǎn)化成(rs)-3-氟-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺tfa鹽。質(zhì)譜m/z428(m+h)+,469(m+h+ch3cn)+。
中間體14
6-氟-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺tfa鹽(非對映異構(gòu)體的混合物)
遵循用于制備中間體8的操作，將(rs)-5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺[中間體1]轉(zhuǎn)化成(rs)-3-氟-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺tfa鹽，其為非對映異構(gòu)體的混合物。質(zhì)譜m/z432(m+h)+,473(m+h+ch3cn)+。
中間體15
(rs)-4-(3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺
中間體15a：8-溴-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-4(3h)-甲酸叔丁酯
將8-溴-3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噁嗪[根據(jù)pct公開號wo2012/149236的實(shí)施例10中所述的操作制備](1.20g,5.61mmol)、一縮二碳酸二叔丁酯(1.43ml,6.17mmol)和三乙胺(2.34ml,16.8mmol)在thf(20ml)中的溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。未觀察到反應(yīng)，故將混合物濃縮。將殘余物溶于1,4-二噁烷(25ml)，用k2co3(0.775g,5.61mmol)和另外的一縮二碳酸二叔丁酯(1.43ml,6.17mmol)處理，并將混合物在90℃加熱3天。過濾該混合物并濃縮濾液。通過用etoac-己烷(0-50％的梯度)洗脫的硅膠柱色譜純化殘余物，得到8-溴-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-4(3h)-甲酸叔丁酯，其為淺棕色油狀物(1.37g,78％產(chǎn)率)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.75(d,j＝7.5hz,1h),7.27(dd,j＝8.0,1.5hz,1h),6.78(t,j＝8.2hz,1h),4.38(dd,j＝5.1,4.2hz,2h),3.92-3.87(m,2h),1.56(s,9h)。
中間體15：
遵循用于制備中間體8的操作，但在步驟b中用4-溴-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺[中間體3]替代(s)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺[中間體7]，將8-溴-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-4(3h)-甲酸叔丁酯轉(zhuǎn)化成(rs)-4-(3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺。質(zhì)譜m/z362(m+h)+。1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ7.76(d,j＝10.4hz,1h),7.56(d,j＝8.2hz,1h),7.35(ddd,j＝8.2,7.1,1.2hz,1h),7.24-7.18(m,1h),6.98-6.89(m,2h),6.87-6.81(m,1h),6.67(dd,j＝7.3,1.6hz,1h),4.16-3.96(m,2h),3.43-3.34(m,2h)。
中間體16
(rs)-3-氟-4-(2,3,4,5-四氫苯并[b][1,4]氧氮雜
遵循用于制備中間體8的操作，但用9-溴-3,4-二氫苯并[b][1,4]氧氮雜
中間體17
3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊-2-基)-9h-咔唑-1-甲酰胺
遵循用于制備中間體15的操作，將4-溴-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺[中間體3]轉(zhuǎn)化成3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊-2-基)-9h-咔唑-1-甲酰胺，其為黃色玻璃狀固體，產(chǎn)率12％。質(zhì)譜m/z355(m+h)+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.56(d,j＝8.1hz,1h),7.58-7.48(m,2h),7.37-7.20(m,2h),1.56(s,12h)。
中間體18
(rs)-4-(3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噻嗪-8-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺tfa鹽
中間體18a：8-溴-2h-苯并[b][1,4]噻嗪-4(3h)-甲酸叔丁酯
遵循用于制備中間體15a的操作，將8-溴-3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噻嗪[根據(jù)pct公開號wo2012/149236的實(shí)施例331中所述的操作制備]轉(zhuǎn)化成8-溴-2h-苯并[b][1,4]噻嗪-4(3h)-甲酸叔丁酯，其為棕色油狀物，產(chǎn)率65％。質(zhì)譜m/z274,276(m+h-c4h8)+。
中間體18：
將3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊-2-基)-9h-咔唑-1-甲酰胺[中間體17](38mg,0.107mmol)、8-溴-2h-苯并[b][1,4]噻嗪-4(3h)-甲酸叔丁酯(37.2mg,0.113mmol)、k3po4(45.5mg,0.215mmol)和1,1′-雙(二叔丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(3.5mg,5.36μmol)在thf(1.5ml)和水(0.2ml)中的混合物用氮?dú)馇逑床⒃?0℃攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫，經(jīng)
實(shí)施例1
(rs)-5-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺
將3,3,6-三氟-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺[中間體12](47mg,0.118mmol)和diea(62μl,0.353mmol)在3:1dcm-thf(0.5ml)中的混合物在0℃用丙烯酰氯(11μl,0.129mmol)處理。攪拌10分鐘后，將混合物用dcm稀釋，用水洗滌，干燥并濃縮。用etoac研磨殘余物，得到(rs)-5-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺，其為白色固體(47mg,84％產(chǎn)率)。質(zhì)譜m/z454(m+h)+。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.20(s,1h),8.14(br.s.,1h),7.62(d,j＝10.7hz,1h),7.55(br.s.,1h),7.42-7.26(m,2h),7.19-7.11(m,1h),7.00-6.70(m,1h),6.14(d,j＝16.6hz,1h),5.88-5.62(m,1h),4.95-4.66(m,2h),3.80-3.48(m,2h),2.94(t,j＝5.5hz,2h),2.48-2.08(m,6h)。
通過實(shí)施例1所述的通用操作或類似操作，使用指定的原料制備表1中的實(shí)施例。
表1
實(shí)施例5
4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺(單一對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
通過手性超臨界流體色譜(柱：
實(shí)施例6
5-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺(單一對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
通過手性超臨界流體色譜(柱：
實(shí)施例7
4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺(單一對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
通過手性超臨界流體色譜(柱：ic(3×25cm,5μm)；流動(dòng)相：co2-meoh(60:40)at140ml/min,100巴,30℃；樣品制備：2.5mg/ml于meoh中；注射：1.7ml)分離(rs)-4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺[實(shí)施例4]的樣品(20mg)。從柱中洗脫的第二個(gè)峰提供的一種對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體4-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺[實(shí)施例7](5.8mg)。質(zhì)譜m/z482(m+h)+。1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ8.02-7.90(m,2h),7.56-7.45(m,2h),7.37-7.28(m,1h),7.19-7.08(m,1h),6.96-6.85(m,1h),6.71(dd,j＝16.7,10.7hz,1h),6.24(t,j＝15.7hz,1h),5.88-5.63(m,1h),5.06-4.92(m,2h),3.80(td,j＝12.4,5.6hz,1h),3.72-3.55(m,1h),2.74-2.57(m,1h),2.56-2.35(m,1h)。尚未歸屬實(shí)施例7的絕對構(gòu)型。
實(shí)施例8
4-(4-丙烯?；?3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺(單一對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
通過手性超臨界流體色譜(柱：
實(shí)施例9
5-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺(單一非對映異構(gòu)體)
將6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的單一非對映異構(gòu)體[中間體9](0.036g,0.085mmol)和diea(0.060ml,0.342mmol)在thf(2ml)中的混合物在室溫用丙烯酰氯(6.9μl,0.085mmol)處理。將混合物攪拌30分鐘，用etoac稀釋，依序用水和飽和鹽水洗滌，干燥并濃縮。通過用etoac-己烷(50-75％的梯度)洗脫的硅膠柱色譜純化殘余物。通過手性超臨界流體色譜(柱：
實(shí)施例10和11
5-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺,單一純手性非對映異構(gòu)體
遵循用于制備實(shí)施例1的操作，將6-氟-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺tfa鹽(非對映異構(gòu)體的混合物)[中間體14]轉(zhuǎn)化成5-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺，其為四種非對映異構(gòu)體的混合物，產(chǎn)率49％。質(zhì)譜m/z486(m+h)+。
通過手性超臨界流體色譜(柱：chiralic(3×25cm,5μm)；流動(dòng)相：co2-meoh(70:30)at85ml/min；樣品制備：10.7mg/ml于meoh中；注射：1.0ml)分離該物質(zhì)的樣品(107mg)。從柱中洗脫的第三個(gè)峰提供5-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的一種純手性非對映異構(gòu)體[實(shí)施例10](14.5mg)。1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ7.49(d,j＝10.4hz,1h),7.38-7.28(m,2h),7.24-7.13(m,1h),6.99-6.68(m,1h),6.26(dd,j＝16.8,1.8hz,1h),5.87-5.71(m,1h),4.93-4.87(m,2h),3.77(quin,j＝6.2hz,2h),3.08(dd,j＝16.4,4.6hz,1h),2.83(dd,j＝16.3,11.4hz,1h),2.67-2.40(m,3h),2.08-1.86(m,3h),1.66-1.43(m,1h)。
從柱中洗脫的第四個(gè)峰提供5-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的另一種純手性非對映異構(gòu)體[實(shí)施例11](21.2mg)，其摻雜有約2％作為第三個(gè)峰洗脫的純手性非對映異構(gòu)體[實(shí)施例10]。1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ7.48(d,j＝10.5hz,1h),7.36-7.27(m,2h),7.19-7.11(m,1h),6.98-6.70(m,1h),6.26(d,j＝16.8hz,1h),5.86-5.68(m,1h),4.99-4.75(m,2h),3.96-3.56(m,2h),3.09(dd,j＝16.5,5.3hz,1h),2.90-2.75(m,1h),2.74-2.33(m,3h),2.24-2.07(m,1h),1.95(dd,j＝15.2,2.9hz,1h),1.82(d,j＝16.0hz,1h),1.49(qd,j＝12.2,5.2hz,1h)。
兩種純手性非對映異構(gòu)體的質(zhì)譜與混合物的相同：m/z486(m+h)+。尚未歸屬實(shí)施例10和11的絕對構(gòu)型。
實(shí)施例12
4-(5-丙烯?；?2,3,4,5-四氫苯并[b][1,4]氧氮雜
遵循用于制備實(shí)施例1的操作，(rs)-3-氟-4-(2,3,4,5-四氫苯并[b][1,4]氧氮雜
通過手性超臨界流體色譜(柱：
使用所示的起始物質(zhì)和操作，通過上述操作制備的其它實(shí)施例示于表2。
表2
(a)遵循用于實(shí)施例1制備的操作或類似操作制備。
(b)通過外消旋混合物的超臨界流體色譜制備。尚未歸屬絕對構(gòu)型。
比較實(shí)施例15
4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺(單一對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
在通過分離實(shí)施例2以分離出實(shí)施例5的過程中，由從柱中洗脫的第二個(gè)峰分離出4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺的另一種對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，并提供比較實(shí)施例12(6.1mg)。該物質(zhì)具有與實(shí)施例5相同的質(zhì)譜和nmr譜。尚未確定比較實(shí)施例12的絕對構(gòu)型。
比較實(shí)施例16
5-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺(單一對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
在通過分離實(shí)施例1以分離出實(shí)施例6的過程中，由從柱中洗脫的第二個(gè)峰分離出5-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的另一種對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，并提供比較實(shí)施例13(5mg)。該物質(zhì)具有與實(shí)施例6相同的質(zhì)譜和nmr譜。尚未確定比較實(shí)施例13的絕對構(gòu)型。
比較實(shí)施例17
4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺(單一對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
在通過分離實(shí)施例4以分離出實(shí)施例7的過程中，由從柱中洗脫的第二個(gè)峰分離出4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9h-咔唑-1-甲酰胺的另一種對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，并提供比較實(shí)施例14(5.9mg)。該物質(zhì)具有與實(shí)施例7相同的質(zhì)譜和nmr譜。尚未確定比較實(shí)施例14的絕對構(gòu)型。
比較實(shí)施例18
4-(4-丙烯?；?3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺(單一對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
在通過分離實(shí)施例3以分離出實(shí)施例8的過程中，由從柱中洗脫的第二個(gè)峰分離出4-(4-丙烯?；?3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺的另一種對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，并提供比較實(shí)施例15(32.1mg)。該物質(zhì)具有與實(shí)施例8相同的質(zhì)譜和nmr譜。尚未確定比較實(shí)施例15的絕對構(gòu)型。
比較實(shí)施例19
5-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺(單一非對映異構(gòu)體)
遵循用于由中間體10制備實(shí)施例9的操作，將6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的另一中非對映異構(gòu)體[中間體11]轉(zhuǎn)化成5-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(s)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的單一非對映異構(gòu)體，其為白色固體，產(chǎn)率76％。質(zhì)譜m/z476(m+h)+。未確定阻轉(zhuǎn)異構(gòu)鍵的絕對構(gòu)型。
比較實(shí)施例20和21
5-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺,單一純手性非對映異構(gòu)體
在通過手性超臨界流體色譜分離實(shí)施例10和11的過程中，分離出5-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的兩種另外的純手性非對映異構(gòu)體。從柱中洗脫的第一個(gè)峰提供5-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的一種純手性非對映異構(gòu)體[比較實(shí)施例20](15.0mg)。該物質(zhì)具有與實(shí)施例10相同的nmr譜，且因此實(shí)施例10和比較實(shí)施例20為對映異構(gòu)體。
從柱中洗脫的第二個(gè)峰提供5-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酰胺的另一種純手性非對映異構(gòu)體[比較實(shí)施例21](21.2mg)，其摻雜有約2％作為第一個(gè)峰洗脫的純手性非對映異構(gòu)體[比較實(shí)施例20]。該物質(zhì)具有與實(shí)施例11相同的nmr譜，且因此實(shí)施例11和比較實(shí)施例21為對映異構(gòu)體。
兩種純手性非對映異構(gòu)體的質(zhì)譜與混合物的相同：m/z486(m+h)+。尚未確定比較實(shí)施例10和21的絕對構(gòu)型。
比較實(shí)施例22
4-(5-丙烯酰基-2,3,4,5-四氫苯并[b][1,4]氧氮雜
在通過手性超臨界流體色譜分離實(shí)施例12的過程中，由從柱中洗脫的第一個(gè)峰分離出4-(5-丙烯?；?2,3,4,5-四氫苯并[b][1,4]氧氮雜
比較實(shí)施例23
4-(4-丙烯?；?3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噻嗪-8-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺(單一對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
在通過手性超臨界流體色譜分離實(shí)施例14的過程中，由從柱中洗脫的第二個(gè)峰分離出4-(4-丙烯?；?3,4-二氫-2h-苯并[b][1,4]噻嗪-8-基)-3-氟-9h-咔唑-1-甲酰胺的另一種對映異構(gòu)的阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，并提供比較實(shí)施例23。該物質(zhì)具有與實(shí)施例14相同的質(zhì)譜和nmr譜。尚未確定比較實(shí)施例23的絕對構(gòu)型。
實(shí)施例24
4-(2-丙烯酰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氯-9h-咔唑-1-甲酰胺,阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體1
中間體24a：4-溴-3-氯-9h-咔唑-1-甲酸
向5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1h-咔唑-8-甲酸(793mg,2.413mmol)在thf(30ml)中的溶液中添加ddq(1096mg,4.83mmol)，將混合物在60℃攪拌18小時(shí)。濃縮該混合物。粗產(chǎn)物經(jīng)受isco快速色譜(硅膠/dcm:meoh:hoac93.5:5:1.5)。得到4-溴-3-氯-9h-咔唑-1-甲酸(350mg,1.024mmol,42.5％產(chǎn)率)，其為棕色固體。lcms：1.19分鐘,m+h324。
中間體24b：4-溴-3-氯-9h-咔唑-1-甲酰胺
將4-溴-3-氯-9h-咔唑-1-甲酸(350mg,1.078mmol)、氯化銨(288mg,5.39mmol)、bop(525mg,1.186mmol)和tea(1.503ml,10.78mmol)在dmf(5.0ml)中的混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。用etoac(15ml)稀釋該混合物并用1.0mhcl水溶液(2x15ml)洗滌。將乙酸乙酯層以硫酸鈉干燥并濃縮。粗產(chǎn)量：4-溴-3-氯-9h-咔唑-1-甲酰胺(203mg,0.596mmol,55.3％產(chǎn)率)，其為棕色固體。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.77(d,j＝8.2hz,1h),8.08(s,1h),7.71-7.62(m,1h),7.60-7.49(m,1h),7.30(ddd,j＝8.2,7.2,1.0hz,1h)。
中間體24c：5-(1-氨甲?；?3-氯-9h-咔唑-4-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯
將4-溴-3-氯-9h-咔唑-1-甲酰胺(80mg,0.247mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊-2-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯(89mg,0.247mmol)、1,1′-雙(二叔丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(8.06mg,0.012mmol)和2.0m磷酸鉀水溶液(0.618ml,1.236mmol)在二噁烷(4.0ml)中的混合物在60℃在密封小瓶中在氮?dú)庀聰嚢?8小時(shí)。用etoac(15ml)稀釋該混合物并用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×15ml)和1.0mhcl水溶液(15ml)洗滌。將乙酸乙酯層以硫酸鈉干燥并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)受isco快速色譜(硅膠/dcm-etoac100:0至0:100梯度)。得到5-(1-氨甲?；?3-氯-9h-咔唑-4-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯(90mg,0.180mmol,72.7％產(chǎn)率)，其為白色泡沫狀物。lcms：1.21分鐘,2m+h324。
實(shí)施例24：
向5-(1-氨甲?；?3-氯-9h-咔唑-4-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯(70mg,0.147mmol)在dcm(1.0ml)中的溶液中添加tfa(1.0ml)，將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。將混合物濃縮，得到粗制的3-氯-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-9h-咔唑-1-甲酰胺,tfa鹽.
在0℃，向3-氯-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-9h-咔唑-1-甲酰胺,tfa鹽和tea(0.102ml,0.735mmol)在dcm(1.0ml)中的溶液中添加丙烯酰氯(0.013ml,0.162mmol)在dcm(0.5ml)中的溶液，將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。粗產(chǎn)物經(jīng)受isco快速色譜(硅膠/己烷-etoac100:0至0:100梯度)，得到4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氯-9h-咔唑-1-甲酰胺(43.52mg,0.096mmol,65.4％產(chǎn)率)。lcms：0.88分鐘,m+h430。
通過手性超臨界流體色譜(chiralic(3×25cm,5μm)；流動(dòng)相：co2-meoh60-40，850ml/min；樣品制備：85mg在5mlmeoh中)分離4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氯-9h-咔唑-1-甲酰胺(33mg)。從柱中洗脫的第一個(gè)峰提供4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氯-9h-咔唑-1-甲酰胺的一種對映異構(gòu)體，其為白色粉末(11.99mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.11(s,1h),7.59(d,j＝8.2hz,1h),7.52-7.41(m,2h),7.39-7.28(m,1h),7.26-7.13(m,1h),6.89-6.79(m,1h),6.74-6.50(m,2h),6.32-6.10(m,1h),5.88-5.62(m,1h),4.95(d,j＝13.7hz,2h),3.83-3.54(m,2h),2.66-2.49(m,1h),2.37(m,1h)。lcms：0.88分鐘,m+h430。從柱中洗脫的第二個(gè)峰提供4-(2-丙烯?；?1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-3-氯-9h-咔唑-1-甲酰胺的另一種對映異構(gòu)體，其為白色粉末(10.78mg)。1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.11(s,1h),7.59(d,j＝8.2hz,1h),7.52-7.41(m,2h),7.38-7.29(m,1h),7.24-7.16(m,1h),6.90-6.79(m,1h),6.73-6.52(m,2h),6.32-6.13(m,1h),5.86-5.64(m,1h),4.97(m,2h),3.82-3.55(m,2h),2.58(m,1h),2.44-2.27(m,1h)。lcms：0.88分鐘,m+h430.
使用適當(dāng)?shù)钠鹗嘉镔|(zhì)，通過上述實(shí)施例所述的通用操作或本領(lǐng)域已知的類似操作制備表1中的實(shí)施例。
表1
生物學(xué)測定
本發(fā)明化合物的藥理學(xué)性質(zhì)可通過許多生物測定來證實(shí)。已用本發(fā)明化合物進(jìn)行以下示例性生物測定。
人重組btk酶測定
向v形底384孔板中加入測試化合物、人重組btk(1nm,invitrogencorporation)、熒光素肽(fluoresceinatedpeptide)(1.5μm)、atp(20μm)和測定緩沖液(20mmhepesph7.4,10mmmgcl2,0.015％brij35表面活性劑和4mmdtt在1.6％dmso中的溶液)，終體積為30μl。在室溫溫育60分鐘后，通過向每個(gè)樣品中加入45μl35mmedta終止反應(yīng)。通過熒光底物和磷酸化產(chǎn)物的電泳分離在caliper
ramosflipr測定
將在含0.1％bsa(sigmaa8577)的rpmiminus酚紅(invitrogen11835-030)和50mmhepes(invitrogen15630-130)中密度為2×106個(gè)細(xì)胞/ml的ramosra1b細(xì)胞(atcccrl-1596)加至一半體積的鈣上樣緩沖液(用于丙磺舒敏感性測定的bd大試劑盒(bulkkit),#640177)中并在室溫在黑暗中溫育1小時(shí)。將負(fù)載染料的細(xì)胞dye-loadedcellswerepelleted(beckmanngs-ckr,1200rpm,室溫,5分鐘)并在室溫重新混懸在具有50mmhepes和10％fbs的rpmiminus酚紅中至密度為1×106個(gè)細(xì)胞/ml。將150μl等分試樣(150,000個(gè)細(xì)胞/孔)加至96孔聚-d-賴氨酸包覆的測定板(bd354640)中并短暫離心(beckmanngs-ckr800rpm,5分鐘,無制動(dòng))。接著，將50μl化合物在0.4％dmso/rpmiminus酚紅+50mmhepes+10％fbs中的稀釋液加至孔中并將板在室溫在黑暗中溫育1小時(shí)。在測量鈣水平之前將測定板如上所述短暫離心。使用flipr1(moleculardevices)，通過加入山羊抗-人igm(invitrogenahi0601)至2.5μg/ml來刺激細(xì)胞。歷時(shí)180秒測量細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的變化并確定相對于僅存在刺激時(shí)觀察到的峰值鈣水平的抑制百分?jǐn)?shù)。ramos測定法測量化合物通過細(xì)胞膜移入細(xì)胞內(nèi)部的能力。較低的ic50值表明進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的能力更大。
表3示出在人重組btk酶測定和ramosflipr測定中獲自實(shí)施例1、3和5-14的評價(jià)的btkic50值和ramosic50值。
表3
表4示出人重組btk酶測定和ramosflipr測定中實(shí)施例5-12和14以及比較實(shí)施例15至23的btkic50值和ramosic50值。
表4
a重組人btk酶測定中的ic50(nm)
bramosflipr測定中的ic50(nm)
c比較實(shí)施例的重組人btk酶測定中與相應(yīng)實(shí)施例中ic50值的比率。
d比較實(shí)施例的ramosflipr測定中與相應(yīng)實(shí)施例中ic50值的比率。
已將實(shí)施例5至12和14所例舉的式(i)化合物與其立體異構(gòu)體(比較實(shí)施例15至23)進(jìn)行比較，且已發(fā)現(xiàn)具有改善的btk效力。增加的效力由較小的btkic50值表示。如表4所示，在報(bào)道的btk測定中，實(shí)施例5至12和14的btkic50值小于0.4nm。相比之下，比較實(shí)施例15至23的btkic50值在1.5至28nm的范圍內(nèi)。表4中還報(bào)道了實(shí)施例5至12和14的btkic50值與其相應(yīng)的立體異構(gòu)體的btkic50值的比較。btk比率被報(bào)道為相應(yīng)的立體異構(gòu)體(比較實(shí)施例15至23)的btkic50活性值與式(i)的實(shí)施例的btkic50值的比。與其立體異構(gòu)體相比，較高的btkic50比率表明實(shí)施例化合物的效力改善。與它們的立體異構(gòu)體相比，實(shí)施例5至12和14所例舉的式(i)化合物顯示出效力改善至少19倍或更大。
已將實(shí)施例5至12和14所例舉的式(i)化合物與其立體異構(gòu)體(比較實(shí)施例15-23)進(jìn)行比較，且已發(fā)現(xiàn)在ramosflipr測定中具有改善的效力。增加的效力由較小的ramosic50值表示。如表4所示，在報(bào)道的ramos測定中，實(shí)施例5至12和14的ramosic50值為23nm或更低。相比之下，比較實(shí)施例15-23的ramosic5050值為65nm或更大。表4中還報(bào)道了實(shí)施例5至12和14的ramosic50值與其相應(yīng)立體異構(gòu)體的ramosic50值的比較。ramos比率被報(bào)道為對應(yīng)的立體異構(gòu)體(比較實(shí)施例15-23)的ramosic50活性值與式(i)的實(shí)施例的ramosic50值的比。與其立體異構(gòu)體相比，較高的ramosic50比率表明實(shí)施例化合物的效力改善。與其立體異構(gòu)體相比，實(shí)施例5至12和14所例舉的式(i)化合物顯示出ramos效力改善至少9.4倍或更大。
已將實(shí)施例5至12和14所例舉的式(i)化合物與其立體異構(gòu)體(比較實(shí)施例15-23)進(jìn)行比較，且已發(fā)現(xiàn)是有利的。與其立體異構(gòu)體相比，式(i)化合物具有令人驚訝的優(yōu)點(diǎn)：增加的btk效力和增加的ramos活性的組合。與其立體異構(gòu)體相比，實(shí)施例5至12和14顯示出以下組合：btk效力改善至少19倍或更大，且ramos效力改善至少9.4倍或更大。
這些結(jié)果表明分子的絕對三維排列對于式(i)化合物的效力是重要的。
人重組btk解離透析測定
將測試化合物與人重組btk(100nm)溫育1.5小時(shí)，濃度為btk抑制的ic50的25倍或200nm(取較大者)。在測定緩沖液(20mmhepesph7.5，10mmmgcl2，2mm二硫蘇糖醇，50μg/ml胎牛血清和0.015％brij35)中進(jìn)行溫育。然后將反應(yīng)混合物每次對1l測定緩沖液透析兩次，每次6小時(shí)。然后將透析的反應(yīng)混合物(0.5μl)稀釋至atp(2mm)和底物肽(5μmsrc-tide,anaspec)的溶液(100μl)，使得最終的btk濃度為1nm(連同仍然結(jié)合的任何抑制劑)。在基質(zhì)聚丙烯384孔板中進(jìn)行測定。通過電泳分離底物和磷酸化產(chǎn)物(壓力-1.2psi，下游電壓-500v，上游電壓-2300v)，在caliper