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裂解酶以及不對(duì)稱合成(S)?苯基乙?;状嫉姆椒ㄅc流程

文檔序號(hào):12070527閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.裂解酶,

其特征在于,

在相對(duì)于巴氏醋桿菌野生型修飾的蛋白ApPDC-E469G中在位置號(hào)468中的氨基酸異亮氨酸被比異亮氨酸較不占空間的氨基酸置換。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的裂解酶,

其特征在于,

其具有根據(jù)序列1、2或3之一的氨基酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的裂解酶,

其特征在于,

在位置號(hào)543中的氨基酸此外被比色氨酸較小占據(jù)空間的氨基酸替換。

4.根據(jù)權(quán)利要求3的裂解酶,

其特征在于,

其具有根據(jù)序列9至47之一的氨基酸序列。

5.編碼根據(jù)權(quán)利要求1或2的裂解酶的脫氧核糖核酸,

其特征在于,

其編碼酶ApPDC-E469G的變體,其中位置號(hào)1402-1404中的密碼子被編碼比異亮氨酸較不占空間的氨基酸的密碼子替換。

6.編碼根據(jù)權(quán)利要求3或4的裂解酶的脫氧核糖核酸,

其特征在于,

其編碼酶ApPDC-E469G的變體,其中位置號(hào)1402-1404中的密碼子被編碼比異亮氨酸較不占空間的氨基酸的密碼子替換,且其中此外位置號(hào)1627至1629 中的密碼子被編碼比色氨酸較不占空間的氨基酸的密碼子替換。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6之一的脫氧核糖核酸,

其特征在于,

其具有根據(jù)序列4或48的核苷酸序列。

8.載體,

其特征在于,

其包含根據(jù)序列4或48的脫氧核糖核酸。

9.根據(jù)權(quán)利要求8的載體,

其特征在于,

其是質(zhì)粒。

10.根據(jù)權(quán)利要求9的載體,

其特征在于,

根據(jù)權(quán)利要求8的序列連接在選自pET-20b(+)、pET-21a-d(+)、pET-22b(+)、pET-23a-d(+)、pET-24a-d(+)、pET-25b(+)、pET-26b(+)、pET-27b(+)、pET-28a(+)、pET-29a-c(+)、pET-30a-c(+)、pET-31b(+)、pET-34b(+)、pET-35b(+)、pET-36b(+)、pET-37b(+)、pET-38b(+)的空載體中。

11.用于制備(S)-苯基乙?;状嫉姆椒?,其中使苯甲醛與丙酮酸或與乙醛根據(jù)式(1)反應(yīng),

式(1)

其特征在于,

所述反應(yīng)通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求1至4的裂解酶進(jìn)行。

12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法,

其特征在于,

其在5 - 9的pH值下進(jìn)行。

13.根據(jù)權(quán)利要求11或12的方法,

其特征在于,

使用HEPES、MOPS、TEA或TRIS-HCl作為緩沖液。

14.根據(jù)權(quán)利要求11至13任一項(xiàng)的方法,

其特征在于,

使用磷酸硫胺素和硫酸鎂作為輔因子。

15.根據(jù)權(quán)利要求11至14任一項(xiàng)的方法,

其特征在于,

所述反應(yīng)在體內(nèi)進(jìn)行。

16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法,

其特征在于,

(S)-苯基乙?;状嫉纳a(chǎn)在選自大腸桿菌,棒狀桿菌,谷氨酸棒狀桿菌,或酵母,釀酒酵母的生產(chǎn)生物體中進(jìn)行。

17.根據(jù)權(quán)利要求15或16任一項(xiàng)的方法,

其特征在于,

所述生物體用序列4或48的DNA的至少一種轉(zhuǎn)化和/或?qū)⒏鶕?jù)序列4或48的DNA整合到基因組中。

18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法,

其特征在于,

對(duì)于所述轉(zhuǎn)化使用根據(jù)權(quán)利要求8至10任一項(xiàng)的載體。

19.根據(jù)權(quán)利要求11至14任一項(xiàng)的方法,

其特征在于,

所述反應(yīng)在體外進(jìn)行。

20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法,

其特征在于,

使用根據(jù)序列1至3或9至47之一的分離的酶。

21.根據(jù)權(quán)利要求19的方法,

其特征在于,

使用來(lái)自生產(chǎn)生物體的粗細(xì)胞提取物。

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