本申請要求2014年3月25日提交的美國臨時申請第61/970,006號的權(quán)益，其整體通過引用并入本文。

背景

PKCι和PKCζ(分別地，存取編號NM_002740和NM_002744)一起定義蛋白激酶C(PKC)家族的非典型的子類。aPKC在結(jié)構(gòu)上和功能上區(qū)別于其他PKC子類，是經(jīng)典的/常規(guī)的且新穎的，因為aPKC的催化活性不取決于二酰甘油和鈣(Ono,Y.,Fujii,T.,Ogita,K.,Kikkawa,U.,Igarashi,K.,和Nishizuka,Y.(1989).Protein kinase C zeta subspecies from rat brain:its structure,expression,and properties.Proc Natl Acad Sci U S A 86,3099-3103)。結(jié)構(gòu)上，PKCι和PKCζ包含C末端絲氨酸/蘇氨酸激酶域(AGC類)和包含Phox Bem 1(PB1)域的N末端調(diào)節(jié)區(qū)，所述Phox Bem 1域涉及介導(dǎo)對于aPKC功能是重要的蛋白:蛋白相互作用。在氨基酸水平，aPKC共享72％總同源性(overall homology)，然而，激酶域共享84％同一性并且在活性位點(diǎn)中僅單個氨基酸不同。此顯著的同源性表明，ATP競爭性配體將不被預(yù)期呈現(xiàn)明顯的aPKC同種型選擇性。

aPKC已經(jīng)涉及不同數(shù)目的信號傳導(dǎo)通路，證明冗余的和有區(qū)別的信號傳導(dǎo)功能兩者。兩種同種型已經(jīng)在調(diào)節(jié)在多細(xì)胞類型中的細(xì)胞極性的確定和保持的機(jī)制中作為核心選手出現(xiàn)(在Suzuki,A.和Ohno,S.(2006).The PAR-aPKC system:lessons in polarity.J Cell Sci 119,979-987中評述)。使用敲除小鼠的其功能的基因解剖還已經(jīng)揭示PKCζ在調(diào)節(jié)NF-kB信號傳導(dǎo)中的優(yōu)先的作用(Leitges,M.,Sanz,L.,Martin,P.,Duran,A.,Braun,U.,Garcia,J.F.,Camacho,F.,Diaz-Meco,M.T.,Rennert,P.D.,和Moscat,J.(2001)。Targeted disruption of the zetaPKC gene results in the impairment of the NF-kappaB pathway.Mol Cell 8,771-780)以及PKCι在胰島素分泌和行為中的優(yōu)先的作用(Farese,R.V.,Sajan,M.P.,Yang,H.,Li,P.,Mastorides,S.,Gower,W.R.,Jr.,Nimal,S.,Choi,C.S.,Kim,S.,Shulman,G.I.等人(2007).Muscle-specific knockout of PKC-lambda impairs glucose transport and induces metabolic and diabetic syndromes.J Clin Invest 117,2289-2301)。此外，兩種同種型已經(jīng)涉及癌癥的發(fā)病機(jī)理，提出強(qiáng)有力的理由以用于將抑制aPKC作為新穎的治療手段。

在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中，PKCι是已知的致癌基因。在一項研究中，示出在69％的NSCLC病例中PKCι在蛋白水平下過度表達(dá)。與此一致，示出PKCι基因(位于染色體3q26上的PRKCI)在36.5％的被檢查的NSCLC腫瘤中擴(kuò)增，包括96％的鱗狀細(xì)胞癌亞型(Regala,R.P.,Weems,C.,Jamieson,L.,Khoor,A.,Edell,E.S.,Lohse,C.M.和Fields,A.P.(2005b).Atypical protein kinase C iota is an oncogene in human non-small cell lung cancer.Cancer Res 65,8905-8911)。3q26的擴(kuò)增也已經(jīng)在44％的卵巢癌中被報道，包括>70％的漿液性上皮卵巢癌(serous epithelial ovarian cancer)，其中3q26擴(kuò)增被翻譯為增加的PKCι蛋白表達(dá)中。此外，增加的PKCι表達(dá)與NSCLC和卵巢癌的不良預(yù)后相關(guān)，在NSCLC和卵巢癌中，PKCι可以用作侵襲性疾病(aggressive disease)的診斷生物標(biāo)志物(Eder,A.M.,Sui,X.,Rosen,D.G.,Nolden,L.K.,Cheng,K.W.,Lahad,J.P.,Kango-Singh,M.,Lu,K.H.,Warneke,C.L.,Atkinson,E.N.等人(2005).Atypical PKCiota contributes to poor prognosis through loss of apical-basal polarity and cyclin E overexpression in ovarian cancer.Proc Natl Acad Sci U S A 102,12519-12524；Zhang,L.,Huang,J.,Yang,N.,Liang,S.,Barchetti,A.,Giannakakis,A.,Cadungog,M.G.,O'Brien-Jenkins,A.,Massobrio,M.,Roby,K.F.等人(2006).Integrative genomic analysis of protein kinase C(PKC)family identifies PKCiota as a biomarker and potential oncogene in ovarian carcinoma.Cancer Res 66,4627-4635)。3q26擴(kuò)增已經(jīng)在許多其他癌癥包括食管鱗狀細(xì)胞癌(Yang,Y.L.,Chu,J.Y.,Luo,M.L.,Wu,Y.P.,Zhang,Y.,Feng,Y.B.,Shi,Z.Z.,Xu,X.,Han,Y.L.,Cai,Y.等人(2008).Amplification of PRKCI,located in 3q26,is associated with lymph node metastasis in esophageal squamous cell carcinoma.Genes Chromosomes Cancer 47,127-136)和乳腺癌(Kojima,Y.,Akimoto,K.,Nagashima,Y.,Ishiguro,H.,Shirai,S.,Chishima,T.,Ichikawa,Y.,Ishikawa,T.,Sasaki,T.,Kubota,Y.等人(2008).The overexpression and altered localization of the atypical protein kinase C lambda/iota in breast cancer correlates with the pathologic type of these tumors.Hum Pathol 39,824-831)中被觀察到，這表明PKCι還可以參與這些疾病的發(fā)病機(jī)理。

在NSCLC中，PKCι的主要功能是經(jīng)由Rac1/PAK/MEK/ERK信號傳導(dǎo)軸驅(qū)動被轉(zhuǎn)化的生長。然而，PKCι還用于NSCLC存活、抵抗化學(xué)療法以及經(jīng)由獨(dú)特的通路入侵(在Fields,A.P.和Regala,R.P.(2007).Protein kinase C iota:human oncogene,prognostic marker and therapeutic target.Pharmacol Res 55,487-497中評述)。在卵巢癌中，被轉(zhuǎn)化的生長與解除管制的上皮細(xì)胞極性和增加的周期E表達(dá)有關(guān)(Eder等人,2005)，表明PKCι可以通過多種機(jī)制影響癌癥表型。令人信服的證據(jù)已經(jīng)出現(xiàn)以表明，抑制PKCι對戰(zhàn)勝由增加的PKCι表達(dá)表征的腫瘤可能是有用的治療方法。在轉(zhuǎn)基因模型中，在結(jié)腸中具有升高的PKCι活性的小鼠更易患致癌物誘發(fā)的結(jié)腸癌發(fā)生，并且PKCι的激酶死亡突變體(kinase-dead mutant)的表達(dá)阻止腸道細(xì)胞通過致癌性Ras轉(zhuǎn)化(Murray,N.R.,Jamieson,L.,Yu,W.,Zhang,J.,Gokmen-Polar,Y.,Sier,D.,Anastasiadis,P.,Gatalica,Z.,Thompson,E.A.和Fields,A.P.(2004).Protein kinase Ciota is required for Ras transformation and colon carcinogenesis in vivo.J Cell Biol 164,797-802)。最后，PKCι通過金衍生物-金硫代蘋果酸鹽(ATM)的基因抑制或藥理學(xué)抑制阻止NSCLS細(xì)胞在軟瓊脂中的生長并且明顯地減小NSCLC的異種移植模型中的腫瘤體積(Regala,R.P.,Thompson,E.A.,和Fields,A.P.(2008).Atypical protein kinase C iota expression and aurothiomalate sensitivity in human lung cancer cells.Cancer Res 68,5888-5895；Regala,R.P.,Weems,C.,Jamieson,L.,Copland,J.A.,Thompson,E.A.和Fields,A.P.(2005a).Atypical protein kinase Ciota plays a critical role in human lung cancer cell growth and tumorigenicity.J Biol Chem 280,31109-31115)。

盡管aPKC同種型之間高度的相似性，但PKCζ在癌癥中的作用區(qū)別于PKCι在癌癥中的作用。PKCζ通過響應(yīng)于尼古丁磷酸化Bax和拮抗Bax的促凋亡效應(yīng)在NSCLC細(xì)胞存活中起作用(Xin,M.,Gao,F.,May,W.S.,Flagg,T.和Deng,X.(2007).Protein kinase Czeta abrogates the proapoptotic function of Bax through phosphorylation.J Biol Chem 282,21268-21277)。PKCζ活性還已經(jīng)與抵抗范圍廣泛的細(xì)胞毒性劑和基因毒性劑的抗性有關(guān)。例如，在人類白血病細(xì)胞中，PKCζ的過度表達(dá)賦予抵抗1-β-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(ara-C)、道諾霉素、依托泊苷、以及米托蒽醌誘發(fā)的細(xì)胞凋亡的抗性(Filomenko,R.,Poirson-Bichat,F.,Billerey,C.,Belon,J.P.,Garrido,C.,Solary,E.和Bettaieb,A.(2002).Atypical protein kinase C zeta as a target for chemosensitization of tumor cells.Cancer Res 62,1815-1821；Plo,I.,Hernandez,H.,Kohlhagen,G.,Lautier,D.,Pommier,Y.,和Laurent,G.(2002).Overexpression of the atypical protein kinase C zeta reduces topoisomerase II catalytic activity,cleavable complexes formation,and drug-induced cytotoxicity in monocytic U937leukemia cells.J Biol Chem 277,31407-31415)。此外，通過激酶死亡突變體的表達(dá)抑制PKCζ活性使白血病細(xì)胞對依托泊苷在體外和體內(nèi)兩者中的細(xì)胞毒性效應(yīng)敏感(Filomenko等人,2002).Atypical protein kinase C regulates dual pathways for degradation of the oncogenic coactivator SRC-3/AIB1.Mol Cell 29,465-476)，并且已經(jīng)假定這些蛋白質(zhì)中的兩者均在乳腺癌中在他莫昔芬抗性中起作用(Iorns,E.,Lord,C.J.和Ashworth,A.(2009).Parallel RNAi and compound screens identify the PDK1pathway as a target for tamoxifen sensitization.Biochem J 417,361-370；Osborne,C.K.,Bardou,V.,Hopp,T.A.,Chamness,G.C.,Hilsenbeck,S.G.,Fuqua,S.A.,Wong,J.,Allred,D.C.,Clark,G.M.和Schiff,R.(2003).Role of the estrogen receptor coactivator AIB1(SRC-3)and HER-2/neu in tamoxifen resistance in breast cancer.J Natl Cancer Inst 95,353-361)。這些研究一起表明，抑制PKCζ活性可以通過充當(dāng)對大量的在臨床中常用的化學(xué)毒性劑的化學(xué)敏化劑而具有有益的治療效果。

PKCζ的小分子抑制可能具有重要的治療益處的另外的證據(jù)最近已經(jīng)從將PKCζ信號傳導(dǎo)連接至mTOR通路的腫瘤模型中出現(xiàn)。PKCζ在濾泡性淋巴瘤中在構(gòu)成上被激活并且已經(jīng)被識別為用于抗CD20治療抗體利妥昔單抗的新穎的靶標(biāo)(Leseux,L.,Laurent,G.,Laurent,C.,Rigo,M.,Blanc,A.,Olive,D.和Bezombes,C.(2008).PKC zeta mTOR pathway:a new target for rituximab therapy in follicular lymphoma.Blood 111,285-291)。利妥昔單抗通過靶向PKCζ-MAPK-mTOR通路抑制濾泡性淋巴瘤增殖，表明PKCζ是利妥單抗的靶標(biāo)以及其抗白血病效應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑兩者。mTOR/p70S6K通路通過PKCζ的調(diào)節(jié)還已經(jīng)涉及將前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)變成雄激素非依賴性狀態(tài)(Inoue,T.,Yoshida,T.,Shimizu,Y.,Kobayashi,T.,Yamasaki,T.,Toda,Y.,Segawa,T.,Kamoto,T.,Nakamura,E.和Ogawa,O.(2006).Requirement of androgen-dependent activation of protein kinase Czeta for androgen-dependent cell proliferation in LNCaP Cells and its roles in transition to androgen-independent cells.Mol Endocrinol 20,3053-3069)。最后，包含Par4(PKCζ的負(fù)調(diào)節(jié)劑)的純合子缺失的小鼠呈現(xiàn)極大地增強(qiáng)的PKCζ活性。這些小鼠自發(fā)地發(fā)展前列腺和子宮內(nèi)膜的腫瘤，并且加強(qiáng)Ras誘發(fā)的肺癌發(fā)生，這與PKCζ在肺癌中的作用一致(Garcia-Cao,I.,Duran,A.,Collado,M.,Carrascosa,M.J.,Martin-Caballero,J.,Flores,J.M.,Diaz-Meco,M.T.,Moscat,J.和Serrano,M.(2005).Tumour-suppression activity of the proapoptotic regulator Par4.EMBO Rep 6,577-583；Joshi,J.,Fernandez-Marcos,P.J.,Galvez,A.,Amanchy,R.,Linares,J.F.,Duran,A.,Pathrose,P.,Leitges,M.,Canamero,M.,Collado,M.等人(2008).Par-4inhibits Akt and suppresses Ras-induced lung tumorigenesis.EMBO J 27,2181-2193)。

對于用作藥物劑的aPKC抑制劑存在需求。

概述

本申請?zhí)峁┦?I)的化合物

和/或其鹽，其中R¹、G和X如本文所定義。

式(I)的化合物和/或其鹽具有aPKC抑制活性，并且可以被用于治療aPKC依賴性紊亂或狀況。

本申請還提供藥物組合物，所述藥物組合物包含式(I)的化合物和/或其鹽連同至少一種其藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、或賦形劑。

在另一方面中，本申請?zhí)峁┲委熁加衋PKC依賴性紊亂或狀況的受試者的方法，所述方法包括：向受試者施用式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本申請還提供治療受試者中的增殖性紊亂的方法，所述方法包括向受試者施用治療有效量的式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽。

詳述

I.定義

如本文所使用的“約”當(dāng)指的是可測量的值例如量、短暫的持續(xù)時間及類似值時，意指涵蓋該值的合理的變化，例如比如從該特定值的±10％。例如，措辭“約50”涵蓋50的合理的變化，例如數(shù)值50的±10％，或從45至55。

“烷基(alkyl)”或“烷基(alkyl group)”指的是支鏈的或非支鏈的飽和烴鏈的單基團(tuán)(monoradical)。實例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、異丙基、叔丁基、異丁基等等。烷基典型地包含1-10個碳原子，例如1-6個碳原子或1-4個碳原子，并且可以是被取代的或未被取代的。

“亞烷基(alkylene)”或“亞烷基(alkylene group)”指的是支鏈的或非支鏈的飽和烴鏈的雙基團(tuán)(diradical)。實例包括但不限于亞甲基(–CH₂–)、亞乙基異構(gòu)體(–CH(CH₃)–和–CH₂CH₂–)、亞丙基異構(gòu)體(–CH(CH₃)CH₂–、–CH(CH₂CH₃)–、–C(CH₃)₂–、以及–CH₂CH₂CH₂–)等等。亞烷基典型地包含1-10個碳原子，例如1-6個碳原子，并且可以是被取代的或未被取代的。

“烯基(alkenyl)”或“烯基(alkenyl group)”指的是包含至少一個雙鍵的支鏈的或非支鏈的烴鏈的單基團(tuán)。實例包括但不限于乙烯基、3-丁烯-1-基、2-乙烯基丁基、以及3-己烯-1-基。烯基典型地包含2-10個碳原子，例如2-6個碳原子或2-4個碳原子，并且可以是被取代的或未被取代的。

“炔基(alkynyl)”或“炔基(alkynyl group)”指的是包含至少一個三鍵的支鏈的或非支鏈的烴鏈的單基團(tuán)。實例包括但不限于乙炔基、3-丁炔-1-基、丙炔基、2-丁炔-1-基、以及3-戊炔-1-基。炔基典型地包含2-10個碳原子，例如2-6個碳原子或2-4個碳原子，并且可以是被取代的或未被取代的。

“芳基(aryl)”或“芳基(aryl group)”指的是苯基和7-15元單基團(tuán)雙環(huán)或三環(huán)烴環(huán)體系，包括橋環(huán)體系、螺環(huán)體系、和/或稠環(huán)體系，其中環(huán)中的至少一個是芳香族的。芳基可以是被取代的或未被取代的。實例包括但不限于萘基、茚滿基(indanyl)、1,2,3,4-四氫萘基、6,7,8,9-四氫-5H-苯并環(huán)庚烯基、以及6,7,8,9-四氫-5H-苯并環(huán)庚烯基。芳基可以包含6個環(huán)原子(即苯基)或9個至15個環(huán)原子，例如6個環(huán)原子(即苯基)或9-11個環(huán)原子，例如6個環(huán)原子(即苯基)、9個或10個環(huán)原子。

“亞芳基(arylene)”或“亞芳基(arylene group)”指的是亞苯基(–C₆H₄–)或7-15元雙基團(tuán)雙環(huán)或三環(huán)烴環(huán)體系，包括橋環(huán)體系、螺環(huán)體系、和/或稠環(huán)體系，其中環(huán)中的至少一個是芳香族的。亞芳基可以是被取代的或未被取代的。例如，亞芳基可以包含6個環(huán)原子(即亞苯基)或9個至15個環(huán)原子；例如6個環(huán)原子(即亞苯基)或9-11個環(huán)原子；例如6個環(huán)原子(即亞苯基)、9個或10個環(huán)原子。亞芳基還可以包括在環(huán)碳上被一個或更多個-OH官能團(tuán)(其可以進(jìn)一步發(fā)生互變異構(gòu)以給出環(huán)C＝O基團(tuán))取代的環(huán)體系。

“芳基烷基(arylalkyl)”或“芳基烷基(arylalkyl group)”指的是其中氫原子被芳基替代的烷基，其中烷基和芳基是如先前所定義的(即芳基烷基-)。芳基烷基可以是被取代的或未被取代的。實例包括但不限于芐基(C₆H₅CH₂–)。

“環(huán)烷基(cyclolalkyl)”或“環(huán)烷基(cyclolalkyl group)”指的是單基團(tuán)非芳香族碳環(huán)體系，其可以是飽和的或不飽和的、被取代的或未被取代的，并且可以是單環(huán)、雙環(huán)、或三環(huán)，并且可以是橋接的、螺環(huán)的、和/或稠合的。實例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丙烯基、環(huán)丁基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、降冰片基、降冰片烯基、雙環(huán)[2.2.1]己烷、雙環(huán)[2.2.1]庚烷、雙環(huán)[2.2.1]庚烯、雙環(huán)[3.1.1]庚烷、雙環(huán)[3.2.1]辛烷、雙環(huán)[2.2.2]辛烷、雙環(huán)[3.2.2]壬烷、雙環(huán)[3.3.1]壬烷、以及雙環(huán)[3.3.2]癸烷。環(huán)烷基可以包含從3個至10個環(huán)原子，例如3個至7個環(huán)原子(例如3個環(huán)原子、5個環(huán)原子、6個環(huán)原子或7個環(huán)原子)。

“環(huán)烷基烷基(cyclolalkylalkyl)”或“環(huán)烷基烷基(cyclolalkylalkyl group)”指的是其中氫原子被環(huán)烷基替代的烷基，其中烷基和環(huán)烷基是如先前所定義的(即環(huán)烷基烷基-)。環(huán)烷基烷基可以是被取代的或未被取代的。實例包括但不限于環(huán)己基甲基(C₆H₁₁CH₂–)。

“鹵代烷基(haloalkyl)”或“鹵代烷基(haloalkyl group)”指的是其中一個或更多個氫原子被鹵素原子替代的烷基。鹵代烷基包括飽和的烷基以及不飽和的烯基和炔基兩者，例如比如–CF₃、–CHF₂、–CH₂F、–CF₂CF₃、–CHFCF₃、–CH₂CF₃、–CF₂CH₃、–CHFCH₃、–CF₂CF₂CF₃、–CF₂CH₂CH₃、–CF＝CF₂、–CCl＝CH₂、–CBr＝CH₂、–CI＝CH₂、–C≡C-CF₃、–CHFCH₂CH₃以及–CHFCH₂CF₃。

“鹵素”包括氟原子、氯原子、溴原子以及碘原子。

“雜芳基(heretoaryl)”或“雜芳基(heretoaryl group)”指的是(a)除了碳原子之外還包含至少一個雜原子例如氮、氧或硫的5元和6元單環(huán)芳香族環(huán)，以及(b)除了碳原子之外還包含至少一個雜原子例如氮、氧或硫并且其中環(huán)中的至少一個是芳香族的7-15元雙環(huán)和三環(huán)。雜芳基可以是被取代的或未被取代的，并且可以是橋接的、螺環(huán)的、和/或稠合的。實例包括但不限于2,3-二氫苯并呋喃基、1,2-二氫喹啉基、3,4-二氫異喹啉基、1,2,3,4-四氫異喹啉基、1,2,3,4-四氫喹啉基、苯并噁嗪基、苯并噻嗪基、色滿基、呋喃基、2-呋喃基、3-呋喃基、咪唑基、異噁唑基、異噻唑基、噁二唑基、噁唑基、吡啶基、2-吡啶基、3-吡啶基、或4-吡啶基、嘧啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或5-嘧啶基、吡唑基、吡咯基、2-吡咯基、或3-吡咯基、吡嗪基、噠嗪基、3-噠嗪基或4-噠嗪基、2-吡嗪基、噻吩基、2-噻吩基、3-噻吩基、四唑基、噻唑基、噻二唑基、三嗪基、三唑基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、嘧啶-2-基、噠嗪-4-基、吡嗪-2-基、萘啶基、蝶啶基、酞嗪基、嘌呤基、咯嗪基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、2H-1-苯并吡喃基、苯并噻二嗪基、苯并噻嗪基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、噌啉基、呋喃并吡啶基、吲哚啉基、吲嗪基、吲哚基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基、或7-吲哚基、3H-吲哚基、喹唑啉基、喹喔啉基、異吲哚基、異喹啉基、10-氮雜-三環(huán)[6.3.1.0^2,7]十二-2(7),3,5-三烯基、12-氧雜-10-氮雜-三環(huán)[6.3.1.0^2,7]十二-2(7),3,5-三烯基、12-氮雜-三環(huán)[7.2.1.0^2,7]十二-2(7),3,5-三烯基、10-氮雜-三環(huán)[6.3.2.0^2,7]十三-2(7),3,5-三烯基、2,3,4,5-四氫-1H-苯并[d]氮雜環(huán)庚三烯基、1,3,4,5-四氫-苯并[d]氮雜環(huán)庚三烯-2-酮基、1,3,4,5-四氫-苯并[b]氮雜環(huán)庚三烯-2-酮基、2,3,4,5-四氫-苯并[c]氮雜環(huán)庚三烯-1-酮基、1,2,3,4-四氫-苯并[e][1,4]二氮雜環(huán)庚三烯-5-酮基、2,3,4,5-四氫-1H-苯并[e][1,4]二氮雜環(huán)庚三烯基、5,6,8,9-四氫-7-氧雜-苯并環(huán)庚烯基、2,3,4,5-四氫-1H-苯并[b]氮雜環(huán)庚三烯基、1,2,4,5-四氫-苯并[e][1,3]二氮雜環(huán)庚三烯-3-酮基、3,4-二氫-2H-苯并[b][1,4]二氧雜環(huán)庚三烯基、3,4-二氫-2H-苯并[f][1,4]氧氮雜環(huán)庚三烯-5-酮基、6,7,8,9-四氫-5-硫雜-8-氮雜-苯并環(huán)庚烯基、5,5-二氧代-6,7,8,9-四氫-5-硫雜-8-氮雜-苯并環(huán)庚烯基以及2,3,4,5-四氫-苯并[f][1,4]氧氮雜環(huán)庚三烯基。例如，雜芳基可以包含5個、6個、或8-15個環(huán)原子。作為另一個實例，雜芳基可以包含5個至10個環(huán)原子，例如5個、6個、9個或10個環(huán)原子。

“雜芳基烷基(heteroarylalkyl)”或“雜芳基烷基(heteroarylalkyl group)”指的是其中氫原子被雜芳基替代的烷基，其中烷基和雜芳基是如先前所定義的(即雜芳基烷基-)。雜芳基烷基可以是被取代的或未被取代的。實例包括但不限于吡啶基甲基異構(gòu)體

“雜環(huán)烷基(heterocycloalkyl)”或“雜環(huán)烷基(heterocycloalkyl group)”指的是可以是飽和的或不飽和的、可以是被取代的或未被取代的、可以是橋接的、螺環(huán)、和/或稠合的并且除了碳原子之外還包含至少一個雜原子例如氮、氧、硫或磷的3-15元單環(huán)、雙環(huán)、以及三環(huán)非芳香族環(huán)。實例包括但不限于四氫呋喃基、吡咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌啶基(piperidyl)、哌嗪基、吲哚啉基、異吲哚啉基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高嗎啉基(homomorpholinyl)、高哌啶基(homopiperidyl)、高哌嗪基(homopiperazinyl)、硫代嗎啉基-5-氧化物、硫代嗎啉基-S,S-二氧化物、吡咯烷基、四氫吡喃基、哌啶基(piperidinyl)、四氫噻吩基、高哌啶基、高硫代嗎啉基-S,S-二氧化物、噁唑烷酮基(oxazolidinonyl)、二氫吡唑基、二氫吡咯基、二氫吡嗪基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫呋喃基、二氫吡喃基、四氫噻吩基-5-氧化物、四氫噻吩基-S,S-二氧化物、高硫代嗎啉基-5-氧化物、奎寧環(huán)基(quinuclidinyl)、2-氧雜-5-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚基、8-氧雜-3-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛基、3,8-二氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛基、2,5-二氮雜-雙環(huán)[2.2.1]庚基、3,8-二氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛基、3,9-二氮雜-雙環(huán)[4.2.1]壬基、2,6-二氮雜-雙環(huán)[3.2.2]壬基、[1,4]氧膦雜環(huán)己基-4-氧化物、[1,4]氮膦雜環(huán)己基-4-氧化物、[1,2]氧磷雜環(huán)戊基-2-氧化物、膦雜環(huán)己基-1-氧化物、[1,3]氮磷雜環(huán)戊基-3-氧化物、[1,3]氧磷雜環(huán)戊基-3-氧化物以及7-氧雜雙環(huán)[2.2.1]庚基。除了碳原子之外，雜環(huán)烷基可以包含至少一個氮、氧、或硫。例如，除了碳原子之外，雜環(huán)烷基可以包含至少一個氮或氧。除了碳原子之外，雜環(huán)烷基可以包含至少一個氮。雜環(huán)烷基可以包含碳原子和1個或2個氮原子。雜環(huán)烷基可以包含碳原子和氧原子。雜環(huán)烷基可以包含碳原子、氮原子、以及氧原子。雜環(huán)烷基可以包含碳原子、氮原子、以及硫原子。雜環(huán)烷基可以包含碳原子和硫原子。雜環(huán)烷基可以包含從3個至10個環(huán)原子。雜環(huán)烷基可以包含從3個至7個環(huán)原子。雜環(huán)烷基可以包含從5個至7個環(huán)原子，例如5個環(huán)原子、6個環(huán)原子或7個環(huán)原子。除非另外指示，否則前述雜環(huán)烷基可以是C附接的或N附接的(在這樣是可能的情況下)并且導(dǎo)致產(chǎn)生穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。例如，哌啶基可以是哌啶-1-基(N-附接的)或哌啶-4-基(C-附接的)。

“亞雜環(huán)烷基(heterocycloalkylene)”或“亞雜環(huán)烷基(heterocycloalkylene group)”指的是可以是飽和的或不飽和的、可以是被取代的或未被取代的、可以是橋接的、螺環(huán)的、和/或稠合的并且除了碳原子之外還包含至少一個雜原子例如氮、氧、硫或磷的雙基團(tuán)3-15元單環(huán)、雙環(huán)、以及三環(huán)非芳香族環(huán)體系。實例包括但不限于亞氮丙啶基異構(gòu)體除了碳原子之外，亞雜環(huán)烷基可以包含至少一個氮、氧、或硫。除了碳原子之外，亞雜環(huán)烷基可以包含至少一個氮或氧。除了碳原子之外，亞雜環(huán)烷基可以包含至少一個氮。例如，亞雜環(huán)烷基可以包含從3個至10個環(huán)原子；例如從3個至7個環(huán)原子。亞雜環(huán)烷基可以包含從5個至7個環(huán)原子，例如5個環(huán)原子、6個環(huán)原子或7個環(huán)原子。除非另外指示，否則前述亞雜環(huán)烷基可以是C-附接的和/或N-附接的(在這樣是可能的情況下)并且導(dǎo)致產(chǎn)生穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。亞雜環(huán)烷基還可以包括在環(huán)碳上被一個或更多個-OH官能團(tuán)(其可以進(jìn)一步發(fā)生互變異構(gòu)以給出環(huán)C＝O基團(tuán))取代的和/或在環(huán)硫原子上被一個(1)或兩個(2)氧原子取代以分別給出S＝O基團(tuán)或SO₂基團(tuán)的和/或在環(huán)磷上被氧原子取代以給出P＝O的環(huán)體系。

“雜環(huán)烷基烷基(heterocycloalkylalkyl)”或“雜環(huán)烷基烷基(heterocycloalkylalkyl group)”指的是其中氫原子被雜環(huán)烷基替代的烷基，其中烷基和雜環(huán)烷基是如先前所定義的(即雜環(huán)烷基烷基-)。雜環(huán)烷基烷基可以是被取代的或未被取代的。實例包括但不限于吡咯烷基甲基(C₄H₈NCH₂–)。

“藥學(xué)上可接受的”指的是當(dāng)被施用至人類時生理學(xué)上可耐受的材料，其通常不產(chǎn)生過敏性反應(yīng)或其他不適宜反應(yīng)，例如胃不適、頭暈及類似反應(yīng)。

“藥物組合物”指的是可以被用于治療人類中的疾病、狀況、或紊亂的組合物。

“擬鹵素”指的是–OCN、–SCN、–CF₃、以及–CN。

“穩(wěn)定的”或“化學(xué)上穩(wěn)定的”指的是充分堅固以從反應(yīng)混合物中分離至有用的純度程度的化合物。本申請僅僅涉及穩(wěn)定的化合物的制備。當(dāng)可選擇的取代基的清單包括由于化合價要求、化學(xué)穩(wěn)定性、或其他原因不可以被用于取代特定基團(tuán)的成員時，該清單意圖在上下文中被理解為包括清單中的適合于取代該特定基團(tuán)的那些成員。例如，R¹可以是任選地被1-13個R¹⁹取代的C_1-6烷基；當(dāng)R¹是甲基時，甲基任選地被1-3個R¹⁹取代。

“治療有效量”指的是足以抑制、停止特定受試者或受試者群體中被治療的紊亂或狀況或足以引起特定受試者或受試者群體中被治療的紊亂或狀況的改進(jìn)的化合物的量。例如，在人類或其他哺乳動物中，治療有效量可以在實驗室或臨床環(huán)境中實驗地確定，或可以是用于被治療的特定疾病和受試者的由美國食品藥物管理局或?qū)?yīng)的外國機(jī)構(gòu)的指南所要求的量。應(yīng)當(dāng)理解，合適的劑型、劑量、以及施用途徑的確定是在藥學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的普通技術(shù)水平內(nèi)。

“治療”指的是與被治療的紊亂有關(guān)的或由被治療的紊亂引起的至少一種癥狀或特性的急性的或預(yù)防性的減小或緩解。例如，治療可以包括紊亂的若干癥狀的減小或紊亂的完全根除。

II.化合物

本申請的化合物通過但不限于以下編號的實施方案來描述。當(dāng)較高編號的實施方案重新提及在可選物中的多個先前較低編號的實施方案并且包含在較低編號的實施方案中不存在的新的限制時，較高編號的實施方案意圖是該可選物的每個以及所有的明確描述。例如，如果實施方案2重新提及實施方案1并且包含在實施方案1中不存在的限制，并且實施方案3重新提及實施方案1或?qū)嵤┓桨?并且包含在實施方案1或?qū)嵤┓桨?中不存在的限制，并且實施方案4重新提及實施方案1-3中任一項并且包含在實施方案1、實施方案2、或?qū)嵤┓桨?中不存在的限制，那么實施方案4意圖是具有實施方案1和實施方案4的限制的種類物的明確的描述，具有實施方案2和實施方案4(即實施方案1、實施方案2、和實施方案4)的限制的種類物的明確的描述，以及具有實施方案3和實施方案4(即實施方案1、實施方案3、和實施方案4，以及實施方案1、實施方案2、實施方案3和實施方案4)的限制的種類物的明確的描述。通過實例的方式，如果實施方案1是具有獨(dú)立地作為烷基或芳基的R²、R³以及R⁴的式(I)的化合物，并且實施方案2是將R²定義為烷基的實施方案1的化合物，并且實施方案3是將R³定義為烷基的實施方案1或?qū)嵤┓桨?的化合物，并且實施方案4是將R⁴定義為烷基的實施方案1-3中任一項的化合物，那么實施方案4是具有實施方案1和實施方案4的限制的種類物的明確的描述(即其中R²和R³是烷基或芳基并且R⁴是烷基的式(I)的化合物)，具有實施方案2和實施方案4的限制的種類物的明確的描述(即其中R³是烷基或芳基并且R²和R⁴是烷基的式(I)的化合物)，具有實施方案3和實施方案4的限制的種類物的明確的描述(即其中R²是烷基或芳基并且R³和R⁴是烷基的式(I)的化合物；以及其中R²、R³和R⁴全部是烷基的(I)的化合物)。

在這一點(diǎn)上，應(yīng)當(dāng)注意，當(dāng)較高編號的實施方案提到較低編號的實施方案并且包含在較低編號的實施方案中不存在的關(guān)于基團(tuán)的限制時，較高編號的實施方案應(yīng)當(dāng)在上下文中被解釋成忽略遺漏的基團(tuán)。例如，如果實施方案1敘述其中X是H、C_1-10烷基、或–C(＝O)R²⁸的式(I)的化合物，實施方案2敘述其中X是H或C_1-10烷基的實施方案1的化合物，并且實施方案3敘述其中R²⁸是烷基的實施方案1或?qū)嵤┓桨?的化合物，那么實施方案3定義具有實施方案1和實施方案3的限制的種類物以及具有實施方案2和實施方案3(即實施方案1、實施方案2、和實施方案3)的限制的種類物。在通過實施方案2和實施方案3的限制所定義的種類物中，X不可能是–C(＝O)R²⁸；因此，此種類物應(yīng)當(dāng)被解釋為忽略實施方案3R²⁸＝烷基的定義(即實施方案2和實施方案3的種類物具有與實施方案2的種類物相同的范圍)。

本文使用結(jié)構(gòu)式來定義本申請的化合物，該結(jié)構(gòu)式不具體地敘述構(gòu)成原子的質(zhì)量數(shù)或同位素比。意圖的是，本申請包括其中構(gòu)成原子以同位素形式的任何比率存在的化合物。例如，碳原子可以以¹²C、¹³C、以及¹⁴C的任何比率存在；氫原子可以以¹H、²H、以及³H的任何比率存在；等等。優(yōu)選地，在本申請的化合物中的構(gòu)成原子以其同位素形式的天然存在的比率存在。

實施方案1

一種式(I)(I)的化合物及其鹽，

其中：

G選自由以下組成的組：

X選自由以下組成的組：鹵素、–CN、–C(＝O)R²⁸、–C(＝O)OR²⁸、–C(＝O)NR²⁴R²⁸、–C(＝O)C(＝O)R²⁸、–NR²⁴R²⁸、–NR²⁴NR²⁴R²⁸、–N＝NR²⁸、–NR²⁴OR²⁸、–NR²⁴C(＝O)R²⁸、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)R²⁸、–NR²⁴C(＝O)OR²⁸、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)OR²⁸、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴R²⁸、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)R²⁸、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)OR²⁸、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)NR²⁴R²⁸、–NR²⁴S(＝O)₂R²⁸、–NR²⁴S(＝O)₂NR²⁴R²⁸、–OR²⁸、–OC(＝O)R²⁸、–OC(＝O)NR²⁴R²⁸、–OC(＝O)OR²⁸、–OS(＝O)R²⁸、–OS(＝O)₂R²⁸、–OS(＝O)₂OR²⁸、–OS(＝O)₂NR²⁴R²⁸、–S(＝O)_nR²⁸、–S(＝O)₂NR²⁴R²⁸、以及–S(＝O)NR²⁴R²⁸；

或X選自由以下組成的組：C_1-10烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11環(huán)烷基、C_4-17環(huán)烷基烷基、3-15元雜環(huán)烷基、4-21元雜環(huán)烷基烷基、5-15元雜芳基、以及6-21元雜芳基烷基，其中前述中的每個任選地被1-10個R¹⁹取代，

R¹選自由以下組成的組：任選地被1-10個R¹⁹取代的C_3-11環(huán)烷基、C_1-6-鹵代烷基、以及–OC_1-6烷基；

R²、R³、R⁴、R⁵各自獨(dú)立地選自由以下組成的組：H、鹵素、–CN、–C(＝O)R²⁰、–C(＝O)OR²⁰、–C(＝O)NR²²R²³、–C(＝O)C(＝O)R²⁰、–C(＝NR²⁵)R²⁰、–C(＝NR²⁵)NR²²R²³、–C(＝NOH)NR²²R²³、–C(＝NOR²⁶)R²⁰、–C(＝NNR²²R²³)R²⁰、–C(＝NNR²⁴C(＝O)R²¹)R²⁰、–C(＝NNR²⁴C(＝O)OR²¹)R²⁰、–C(＝S)NR²²R²³、–NC、–NO₂、–NR²²R²³、–NR²⁴NR²²R²³、–N＝NR²⁴、–NR²⁴OR²⁶、–NR²⁴C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)OR²¹、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)OR²¹、–NR²⁴C(＝O)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)OR²⁰、–NR²⁴C(＝NR²⁵)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝S)R²⁰、–NR²⁴C(＝S)OR²⁰、–NR²⁴C(＝S)NR²²R²³、–NR²⁴S(＝O)₂R²¹、–NR²⁴S(＝O)₂NR²²R²³、–NR²⁴P(＝O)R³⁸R³⁸、–NR²⁴P(＝O)(NR²²R²³)(NR²²R²³)、–NR²⁴P(＝O)(OR²⁰)(OR²⁰)、–NR²⁴P(＝O)(SR²⁰)(SR²⁰)、–OR²⁰、–OCN、–OC(＝O)R²⁰、–OC(＝O)NR²²R²³、–OC(＝O)OR²⁰、–OC(＝NR²⁵)NR²²R²³、–OS(＝O)R²⁰、–OS(＝O)₂R²⁰、–OS(＝O)₂OR²⁰、–OS(＝O)₂NR²²R²³、–OP(＝O)R³⁸R³⁸、–OP(＝O)(NR²²R²³)(NR²²R²³)、–OP(＝O)(OR²⁰)(OR²⁰)、–OP(＝O)(SR²⁰)(SR²⁰)、–Si(R²⁴)₃、–SCN、–S(＝O)_nR²⁰、–S(＝O)₂OR²⁰、–SO₃R²⁷、–S(＝O)₂NR²²R²³、–S(＝O)NR²²R²³、–SP(＝O)R³⁸R³⁸、–SP(＝O)(NR²²R²³)(NR²²R²³)、–SP(＝O)(OR²⁰)(OR²⁰)、–SP(＝O)(SR²⁰)(SR²⁰)、–P(＝O)R³⁸R³⁸、–P(＝O)(NR²²R²³)(NR²²R²³)、–P(＝O)(OR²⁰)(OR²⁰)、以及–P(＝O)(SR²⁰)(SR²⁰)；

或R²、R³、R⁴、R⁵各自獨(dú)立地選自由以下組成的組：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11環(huán)烷基、C_4-17環(huán)烷基烷基、3-15元雜環(huán)烷基、4-21元雜環(huán)烷基烷基、5-15元雜芳基、以及6-21元雜芳基烷基，其中前述基團(tuán)中的每個可以任選地被1-10個R¹⁹取代；

或R²和R³或R⁴和R⁵中的任一個可以與它們被附接至的原子一起形成C_6-11芳基、C_3-11環(huán)烷基、3-15元雜環(huán)烷基或5-15元雜芳基，其中前述基團(tuán)中的每個可以任選地被1-10個R¹⁹取代；

R¹⁹在每次出現(xiàn)時獨(dú)立地選自由以下組成的組：任選地被1-13個R³⁹取代的C_1-6烷基、任選地被1-11個R³⁹取代的C_2-6烯基、任選地被1-9個R³⁹取代的C_2-6炔基、任選地被1-11個R³⁹取代的C_6-11芳基、任選地被1-19個R³⁹取代的C_7-16芳基烷基、任選地被1-21個R³⁹取代的C_3-11環(huán)烷基、任選地被1-32個R³⁹取代的C_4-17環(huán)烷基烷基、任選地被1-28個R³⁹取代的3-15元雜環(huán)烷基、任選地被1-40個R³⁹取代的4-21元雜環(huán)烷基烷基、任選地被1-15個R³⁹取代的5-15元雜芳基、任選地被1-27個R³⁹取代的6-21元雜芳基烷基、鹵素、–CN、–C(＝O)R³⁰、–C(＝O)OR³⁰、–C(＝O)NR³²R³³、–C(＝O)C(＝O)R³⁰、–C(＝NR³⁵)R³⁰、–C(＝NR³⁵)NR³²R³³、–C(＝NOH)NR³²R³³、–C(＝NOR³⁶)R³⁰、–C(＝NNR³²R³³)R³⁰、–C(＝NNR³⁴C(＝O)R³¹)R³⁰、–C(＝NNR³⁴C(＝O)OR³¹)R³⁰、–C(＝S)NR³²R³³、–NC、–NO₂、–NR³²R³³、–NR³⁴NR³²R³³、–N＝NR³⁴、＝NR³⁰、＝NOR³⁰、–NR³⁴OR³⁶、–NR³⁴C(＝O)R³⁰、–NR³⁴C(＝O)C(＝O)R³⁰、–NR³⁴C(＝O)OR³¹、–NR³⁴C(＝O)C(＝O)OR³¹、–NR³⁴C(＝O)NR³²R³³、–NR³⁴C(＝O)NR³⁴C(＝O)R³⁰、–NR³⁴C(＝O)NR³⁴C(＝O)OR³⁰、–NR³⁴C(＝NR³⁵)NR³²R³³、–NR³⁴C(＝O)C(＝O)NR³²R³³、–NR³⁴C(＝S)R³⁰、–NR³⁴C(＝S)OR³⁰、–NR³⁴C(＝S)NR³²R³³、–NR³⁴S(＝O)₂R³¹、–NR³⁴S(＝O)₂NR³²R³³、–NR³⁴P(＝O)R³⁸R³⁸、–NR³⁴P(＝O)(NR³²R³³)(NR³²R³³)、–NR³⁴P(＝O)(OR³⁰)(OR³⁰)、–NR³⁴P(＝O)(SR³⁰)(SR³⁰)、–OR³⁰、＝O、–OCN、–OC(＝O)R³⁰、–OC(＝O)NR³²R³³、–OC(＝O)OR³⁰、–OC(＝NR³⁵)NR³²R³³、–OS(＝O)R³⁰、–OS(＝O)₂R³⁰、–OS(＝O)₂OR³⁰、–OS(＝O)₂NR³²R³³、–OP(＝O)R³⁸R³⁸、–OP(＝O)(NR³²R³³)(NR³²R³³)、–OP(＝O)(OR³⁰)(OR³⁰)、–OP(＝O)(SR³⁰)(SR³⁰)、–Si(R³⁴)₃、–SCN、＝S、–S(＝O)_nR³⁰、–S(＝O)₂OR³⁰、–SO₃R³⁷、–S(＝O)₂NR³²R³³、–S(＝O)NR³²R³³、–SP(＝O)R³⁸R³⁸、–SP(＝O)(NR³²R³³)(NR³²R³³)、–SP(＝O)(OR³⁰)(OR³⁰)、–SP(＝O)(SR³⁰)(SR³⁰)、–P(＝O)R³⁸R³⁸、–P(＝O)(NR³²R³³)(NR³²R³³)、–P(＝O)(OR³⁰)(OR³⁰)、以及–P(＝O)(SR³⁰)(SR³⁰)；

R²⁰、R²¹、R²⁴、R²⁵、R²⁶、R²⁷、R³⁰、R³¹、R³⁴、R³⁵、R³⁶以及R³⁷在每次出現(xiàn)時獨(dú)立地選自由以下組成的組：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11環(huán)烷基、C_4-17環(huán)烷基烷基、3-15元雜環(huán)烷基、4-21元雜環(huán)烷基烷基、5-15元雜芳基、以及6-21元雜芳基烷基，其中前述基團(tuán)中的每個(除了氫)可以任選地被1-10個R¹⁹取代；

R²⁸在每次出現(xiàn)時獨(dú)立地選自由以下組成的組：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11環(huán)烷基、C_4-17環(huán)烷基烷基、3-15元雜環(huán)烷基、4-21元雜環(huán)烷基烷基、5-15元雜芳基、以及6-21元雜芳基烷基，其中前述基團(tuán)中的每個可以任選地被1-10個R¹⁹取代；

R²²、R²³、R³²和R³³在每次出現(xiàn)時獨(dú)立地選自由以下組成的組：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11環(huán)烷基、C_4-17環(huán)烷基烷基、3-15元雜環(huán)烷基、4-21元雜環(huán)烷基烷基、5-15元雜芳基、以及6-21元雜芳基烷基，其中前述基團(tuán)中的每個(除了氫)可以任選地被1-10個R¹⁹取代；

或任一R²²和R²³和/或R³²和R³³可以與它們被附接至的氮原子一起形成任選地被1-10個R¹⁹取代的3-15元雜環(huán)烷基或任選地被1-10個R¹⁹取代的5-15元雜芳基；

R³⁸在每次出現(xiàn)時獨(dú)立地選自由以下組成的組：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11環(huán)烷基、C_4-17環(huán)烷基烷基、3-15元雜環(huán)烷基、4-21元雜環(huán)烷基烷基、5-15元雜芳基、以及6-21元雜芳基烷基，其中前述基團(tuán)中的每個可以任選地被1-10個R¹⁹取代；

或附接至相同磷原子的任何兩個R³⁸可以與連接它們的磷原子一起形成任選地被1-6個R¹⁹取代的3-10元雜環(huán)烷基；

R³⁹在每次出現(xiàn)時獨(dú)立地選自由以下組成的組：任選地被1-13個鹵素取代的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11環(huán)烷基、C_4-17環(huán)烷基烷基、3-15元雜環(huán)烷基、4-21元雜環(huán)烷基烷基、5-15元雜芳基、6-21元雜芳基烷基、鹵素、–CN、–C(＝O)R⁴⁰、–C(＝O)OR⁴⁰、–C(＝O)NR⁴⁰R⁴⁰、–C(＝O)C(＝O)R⁴⁰、–C(＝NR⁴⁰)R⁴⁰、–C(＝NR⁴⁰)NR⁴⁰R⁴⁰、–C(＝NOH)NR⁴⁰R⁴⁰、–C(＝NOR⁴⁰)R⁴⁰、–C(＝NNR⁴⁰R⁴⁰)R⁴⁰、–C(＝NNR⁴⁰C(＝O)R⁴⁰)R⁴⁰、–C(＝NNR⁴⁰C(＝O)OR⁴⁰)R⁴⁰、–C(＝S)NR⁴⁰R⁴⁰、–NC、–NO₂、–NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰NR⁴⁰R⁴⁰、–N＝NR⁴⁰、＝NR⁴⁰、＝NOR⁴⁰、–NR⁴⁰OR⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)C(＝O)R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)OR⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)C(＝O)OR⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)NR⁴⁰C(＝O)R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)NR⁴⁰C(＝O)OR⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝NR⁴⁰)NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)C(＝O)NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝S)R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝S)OR⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝S)NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰S(＝O)₂R⁴⁰、–NR⁴⁰S(＝O)₂NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰P(＝O)R⁴¹R⁴¹、–NR⁴⁰P(＝O)(NR⁴⁰R⁴⁰)(NR⁴⁰R⁴⁰)、–NR⁴⁰P(＝O)(OR⁴⁰)(OR⁴⁰)、–NR⁴⁰P(＝O)(SR⁴⁰)(SR⁴⁰)、–OR⁴⁰、＝O、–OCN、–OC(＝O)R⁴⁰、–OC(＝O)NR⁴⁰R⁴⁰、–OC(＝O)OR⁴⁰、–OC(＝NR⁴⁰)NR⁴⁰R⁴⁰、–OS(＝O)R⁴⁰、–OS(＝O)₂R⁴⁰、–OS(＝O)₂OR⁴⁰、–OS(＝O)₂NR⁴⁰R⁴⁰、–OP(＝O)R⁴¹R⁴¹、–OP(＝O)(NR⁴⁰R⁴⁰)(NR⁴⁰R⁴⁰)、–OP(＝O)(OR⁴⁰)(OR⁴⁰)、–OP(＝O)(SR⁴⁰)(SR⁴⁰)、–Si(R⁴⁰)₃、–SCN、＝S、–S(＝O)_nR⁴⁰、–S(＝O)₂OR⁴⁰、–SO₃R⁴⁰、–S(＝O)₂NR⁴⁰R⁴⁰、–S(＝O)NR⁴⁰R⁴⁰、–SP(＝O)R⁴¹R⁴¹、–SP(＝O)(NR⁴⁰R⁴⁰)(NR⁴⁰R⁴⁰)、–SP(＝O)(OR⁴⁰)(OR⁴⁰)、–SP(＝O)(SR⁴⁰)(SR⁴⁰)、–P(＝O)R⁴¹R⁴¹、–P(＝O)(NR⁴⁰R⁴⁰)(NR⁴⁰R⁴⁰)、–P(＝O)(OR⁴⁰)(OR⁴⁰)、以及–P(＝O)(SR⁴⁰)(SR⁴⁰)；

R⁴⁰在每次出現(xiàn)時獨(dú)立地選自由以下組成的組：H、C_1-6烷基以及C_1-6鹵代烷基；

R⁴¹在每次出現(xiàn)時獨(dú)立地選自由以下組成的組：C_1-6烷基以及C_1-6鹵代烷基；并且

n在每次出現(xiàn)時獨(dú)立地選自由以下組成的組：0、1、以及2。

實施方案2.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是任選地被取代的環(huán)丙基。

實施方案3.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是任選地被取代的環(huán)丁基。

實施方案4A.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是C_1-6-鹵代烷基。

實施方案4B.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是–OC_1-6烷基。

實施方案5.根據(jù)實施方案1至4中任一項所述的化合物，其中G是

實施方案6.根據(jù)實施方案1至4中任一項所述的化合物，其中G是

實施方案7.根據(jù)實施方案1至4中任一項所述的化合物，其中G是

實施方案8.根據(jù)實施方案1至7中任一項所述的化合物，其中X選自由以下組成的組：任選地被1-6個R¹⁹取代的3-10元雜環(huán)烷基、任選地被1-6個R¹⁹取代的5-10元雜芳基、–C(＝O)R²⁸、–C(＝O)NR²⁴R²⁸、–NR²⁴R²⁸、–NR²⁴C(＝O)R²⁸、–NR²⁴S(＝O)₂R²⁸、–OC(＝O)OR²⁸、–OS(＝O)R²⁸、–OS(＝O)₂R²⁸、以及–OR²⁸。

實施方案9.根據(jù)實施方案8所述的化合物，其中X選自由以下組成的組：任選地被1-6個R¹⁹取代的3-10元雜環(huán)烷基、任選地被1-6個R¹⁹取代的5-10元雜芳基、以及–OR²⁸。

實施方案10.根據(jù)實施方案1至9中任一項所述的化合物，其中R²和R³各自獨(dú)立地選自由以下組成的組：H、鹵素、–CN、–C(＝O)R²⁰、–C(＝O)OR²⁰、–C(＝O)NR²²R²³、–C(＝O)C(＝O)R²⁰、–C(＝NR²⁵)R²⁰、–C(＝NR²⁵)NR²²R²³、–C(＝NOH)NR²²R²³、–C(＝NOR²⁶)R²⁰、–C(＝NNR²²R²³)R²⁰、–C(＝NNR²⁴C(＝O)R²¹)R²⁰、–C(＝NNR²⁴C(＝O)OR²¹)R²⁰、–C(＝S)NR²²R²³、–NC、–NO₂、–NR²²R²³、–NR²⁴NR²²R²³、–N＝NR²⁴、–NR²⁴OR²⁶、–NR²⁴C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)OR²¹、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)OR²¹、–NR²⁴C(＝O)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)OR²⁰、–NR²⁴C(＝NR²⁵)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝S)R²⁰、–NR²⁴C(＝S)OR²⁰、–NR²⁴C(＝S)NR²²R²³、–NR²⁴S(＝O)₂R²¹、–NR²⁴S(＝O)₂NR²²R²³、–NR²⁴P(＝O)R³⁸R³⁸、–NR²⁴P(＝O)(NR²²R²³)(NR²²R²³)、–OR²⁰、–OCN、–OC(＝O)R²⁰、–OC(＝O)NR²²R²³、–OC(＝O)OR²⁰、–OC(＝NR²⁵)NR²²R²³、–OS(＝O)R²⁰、–OS(＝O)₂R²⁰、–OS(＝O)₂OR²⁰、–OS(＝O)₂NR²²R²³、–S(＝O)_nR²⁰、–S(＝O)₂OR²⁰、–SO₃R²⁷、–S(＝O)₂NR²²R²³、以及–S(＝O)NR²²R²³；或R²和R³各自獨(dú)立地選自由以下組成的組：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11環(huán)烷基、C_4-17環(huán)烷基烷基、3-15元雜環(huán)烷基、4-21元雜環(huán)烷基烷基、5-15元雜芳基、以及6-21元雜芳基烷基，其中前述基團(tuán)中的每個可以任選地被1-10個R¹⁹取代。

實施方案11.根據(jù)實施方案10所述的化合物，其中R²和R³各自獨(dú)立地選自由以下組成的組：H、鹵素、–S(＝O)_nR²⁰、–C(＝O)NR²²R²³、NR²⁴S(＝O)₂R²¹、以及–NR²²R²³；或R²和R³各自獨(dú)立地選自由以下組成的組：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11環(huán)烷基、C_4-17環(huán)烷基烷基、3-15元雜環(huán)烷基、4-21元雜環(huán)烷基烷基、5-15元雜芳基、以及6-21元雜芳基烷基，其中前述基團(tuán)中的每個可以任選地被1-10個R¹⁹取代。

實施方案12.根據(jù)實施方案1至9中任一項所述的化合物，其中R²和R³與它們被附接至的原子合在一起，以形成C_6-11芳基、C_3-11環(huán)烷基、3-15元雜環(huán)烷基或5-15元雜芳基，其中前述基團(tuán)中的每個可以任選地被1-10個R¹⁹取代。

實施方案13.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是任選地被取代的環(huán)丙基并且G是

實施方案14.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是任選地被取代的環(huán)丁基并且G是

實施方案15.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是任選地被取代的環(huán)丙基并且G是

實施方案16.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是任選地被取代的環(huán)丁基并且G是

實施方案17.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是任選地被取代的環(huán)丙基并且G是

實施方案18.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是任選地被取代的環(huán)丁基并且G是

實施方案19.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是C_1-6-鹵代烷基并且G是

實施方案20.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是C_1-6-鹵代烷基并且G是

實施方案21.根據(jù)實施方案1所述的化合物，其中R¹是C_1-6-鹵代烷基并且G是

實施方案22.根據(jù)實施方案19至21中任一項所述的化合物，其中R¹是三氟甲基。

實施方案23.根據(jù)實施方案13至22中任一項所述的化合物，其中X選自由以下組成的組：任選地被1-6個R¹⁹取代的3-10元雜環(huán)烷基、任選地被1-6個R¹⁹取代的5-10元雜芳基、–C(＝O)R²⁸、–C(＝O)NR²⁴R²⁸、–NR²⁴R²⁸、–NR²⁴C(＝O)R²⁸、–NR²⁴S(＝O)₂R²⁸、–OC(＝O)OR²⁸、–OS(＝O)R²⁸、–OS(＝O)₂R²⁸、以及–OR²⁸。

實施方案24.根據(jù)實施方案1、17、18和21中任一項所述的化合物，其中R²、R³、R⁴以及R⁵全部是H。

實施方案25.根據(jù)實施方案1至23中任一項所述的化合物，其中R⁴和R⁵是H。

實施方案26.根據(jù)實施方案13至23中任一項所述的化合物，其中R²和R³各自獨(dú)立地選自由以下組成的組：H、鹵素、–S(＝O)_nR²⁰、–C(＝O)NR²²R²³、NR²⁴S(＝O)₂R²¹、以及–NR²²R²³；或R²和R³各自獨(dú)立地選自由以下組成的組：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11環(huán)烷基、C_4-17環(huán)烷基烷基、3-15元雜環(huán)烷基、4-21元雜環(huán)烷基烷基、5-15元雜芳基、以及6-21元雜芳基烷基，其中前述基團(tuán)中的每個可以任選地被1-10個R¹⁹取代。

實施方案27.根據(jù)實施方案26所述的化合物，其中R⁴和R⁵是H。

實施方案28.根據(jù)前述實施方案1-27中任一項所述的化合物，其中X選自由以下組成的組：

以及

實施方案29.根據(jù)前述實施方案1-28中任一項所述的化合物，其中R²和R³各自獨(dú)立地選自由以下組成的組：

-H、-CF₃、

-烷基、-SO₂烷基、-鹵素、-S(烷基)、以及

實施方案30.根據(jù)前述實施方案1-29中任一項所述的化合物，其中所述化合物選自由在表A中列出的那些化合物組成的組。

上文實施方案包括式(I)的酸性化合物和堿性化合物的鹽。優(yōu)選地，鹽是藥學(xué)上可接受的。式(I)的堿性化合物的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽包括但不限于衍生自無機(jī)酸的鹽以及衍生自有機(jī)酸的鹽，所述無機(jī)酸是例如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、和亞磷酸，所述有機(jī)酸是例如脂肪族一元羧酸和二元羧酸、被苯基取代的烷酸、羥基烷酸、烷二酸、芳香族酸、以及脂肪族和芳香族磺酸。因此，此類鹽包括但不限于硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、一氫磷酸鹽、二氫磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、辛酸鹽、異丁酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、以及甲磺酸鹽。見例如Berge等人,"Pharmaceutical Salts,"J.of Pharmaceutical Science,1977；66:1-19。

酸加成鹽可以通過使式(I)的化合物與充分量的期望的酸接觸以按常規(guī)的方式產(chǎn)生鹽來制備。式(I)的化合物的游離堿形式可以通過使鹽形式與堿接觸并且以常規(guī)的方式分離游離堿來再生。

式(I)的酸性化合物的藥學(xué)上可接受的堿鹽用金屬或胺例如堿金屬氫氧化物和堿土金屬氫氧化物或有機(jī)胺來形成。用作陽離子的金屬的實例包括但不限于鈉、鉀、鎂、以及鈣。合適的胺的實例包括但不限于N,N'-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺(乙烷-1,2-二胺)、N-甲基葡糖胺、以及普魯卡因。見例如Berge等人,"Pharmaceutical Salts,"J.of Pharmaceutical Science,1977；66:1-19。

堿鹽可以通過使式(I)的化合物與充分量的期望的堿接觸以按常規(guī)的方式產(chǎn)生鹽來制備。式(I)的化合物的酸形式可以通過使鹽形式與酸接觸并且以常規(guī)的方式分離酸來再生。

本申請的某些化合物可以作為立體異構(gòu)體(包括對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、以及幾何異構(gòu)體)存在。幾何異構(gòu)體包括具有烯基的本申請的化合物，所述化合物可以作為E式(entgegen)構(gòu)象或Z式(zusammen)構(gòu)象存在，在該情況下，其所有幾何形式，E式和Z式、順式(cis)和反式(trans)兩者、以及其混合物是在本申請的范圍內(nèi)。本申請的某些化合物具有環(huán)烷基，環(huán)烷基可以在多于一個碳原子處被取代，在該情況下，其所有幾何形式，順式和反式兩者以及其混合物是在本申請的范圍內(nèi)。所有這些形式，包括(R)、(S)、差向異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、順式、反式、同(syn)、反(anti)、(E)、(Z)、互變異構(gòu)體及其混合物被包括在本申請的化合物中。

III.藥物組合物

本申請還提供組合物，所述組合物包含上文實施方案中任一項的化合物(例如式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽)連同藥學(xué)上可接受的賦形劑。在某些實施方案中，此類組合物適合于藥物用途。此類組合物可以被稱為藥物組合物。在從本申請的化合物制備藥物組合物中，藥學(xué)上可接受的賦形劑可以是固體或液體。賦形劑可以是可以充當(dāng)例如載體、稀釋劑、調(diào)味劑、粘合劑、防腐劑、片劑崩解劑、或包封材料的一種或更多種物質(zhì)。應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)在本申請中使用術(shù)語“賦形劑”時，該術(shù)語可以表示載體、稀釋劑、調(diào)味劑、粘合劑、防腐劑、片劑崩解劑、或包封材料中的任一種。當(dāng)術(shù)語賦形劑結(jié)合措辭“至少一種”使用時，應(yīng)當(dāng)理解，一種或更多種賦形劑可以在組合物中存在并且如果存在多于一種賦形劑，則賦形劑可以具有相同的一般類型(即兩種或更多種粘合劑)或不同類型(即稀釋劑和防腐劑)。藥物組合物可以包含本申請的兩種或更多種化合物(例如式(I)的化合物的兩種不同的鹽形式，其可以在相同的藥物組合物中一起使用或單個組合物可以包含相同化合物的非鹽形式和鹽形式的混合物)。優(yōu)選地，藥物組合物包含治療有效量的式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一個實施方案中，組合物包含對治療非典型蛋白激酶C(aPKC)依賴性紊亂或狀況是有效的量的式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽。優(yōu)選地，本申請的化合物將引起與aPKC依賴性紊亂相關(guān)聯(lián)的癥狀或疾病征候的如定量地或定性地測量的減少。組合物除了式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的賦形劑之外還可以包含另一種治療化合物，例如在癌癥的治療中有用的化合物。

本申請的化合物可以被配制為以任何遞送形式的藥物組合物，例如糖漿、酏劑、懸浮液、粉劑、粒劑、片劑、膠囊、錠劑、糖錠、水溶液、乳膏、軟膏、洗劑、凝膠、乳液等等。固體形式制劑包括粉劑、片劑、丸劑、膠囊、扁囊劑、栓劑、以及可分散的粒劑。優(yōu)選地，藥物組合物是片劑或膠囊。在一個實施方案中，藥物組合物是片劑。在另一個實施方案中，藥物組合物是膠囊。

在粉劑中，賦形劑可以是具有細(xì)分的活性組分(即本申請的化合物)的混合物中的細(xì)分的固體。在片劑中，活性組分可以以合適的比例與具有必需的粘合性質(zhì)的賦形劑混合并且以期望的形狀和尺寸壓實。合適的賦形劑包括碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點(diǎn)蠟、可可油及類似物。

藥物組合物優(yōu)選地包含從1％(w/w)至95％(w/w)的活性化合物(即本申請的化合物)。更優(yōu)選地，藥物組合物包含從5％(w/w)至70％(w/w)的活性化合物。

為了制備栓劑，低熔點(diǎn)蠟例如脂肪酸甘油酯的混合物或可可油可以被熔化并且活性化合物如通過攪拌均勻地分散在其中。然后，熔化的均勻的混合物可以被傾倒至合適大小的模具中，允許冷卻，并且從而固化。

液體形式制劑包括溶液、懸浮液、以及乳液。適合于腸胃外施用例如比如通過靜脈內(nèi)途徑、肌肉內(nèi)途徑、皮內(nèi)途徑以及皮下途徑的制劑，包括含水和不含水的等滲無菌注射溶液以及含水和不含水的無菌懸浮液，所述含水和不含水的等滲無菌注射溶液可以包含抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑以及致使制劑與預(yù)期接受者的血液等滲的溶質(zhì)，所述含水和不含水的無菌懸浮液可以包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、以及防腐劑。在本申請的主題的實踐中，組合物可以例如通過靜脈輸注、口服地、局部地、腹膜內(nèi)地、膀胱內(nèi)地或鞘內(nèi)地來施用?；衔锏闹苿┛梢猿蔬f在單位劑量或多劑量密封的容器例如安瓿和小瓶中。注射溶液和注射懸浮液可以從先前描述的種類的無菌的粉劑、粒劑、以及片劑來制備。

本申請的化合物，單獨(dú)地或與其他合適的組分組合，可以被制成氣霧劑制劑(例如其可以“成霧狀”)以經(jīng)由吸入來施用。氣霧劑制劑可以被放置到加壓的可接受的推進(jìn)劑例如二氯二氟甲烷、丙烷、氮?dú)饧邦愃莆镏小?/p>

藥學(xué)上可接受的賦形劑部分地通過被施用的特定組合物，以及通過用于施用組合物的特定方法來確定。因此，存在多種多樣的本申請的藥物組合物的合適的制劑(見，例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,Gennaro等人編輯,Lippincott Williams and Wilkins,2000)。

根據(jù)特定應(yīng)用和劑型的期望大小，在藥物組合物中的活性組分的數(shù)量可以從例如1mg至1,000mg、從5mg至500mg、從10mg至300mg、或從25mg至250mg變化或調(diào)整。

施用至受試者的劑量優(yōu)選地足以誘發(fā)受試者隨時間的有益的治療應(yīng)答。有益的劑量可以從受試者至受試者變化，這取決于例如受試者的狀況、體重、表面積、以及副作用敏感性。施用可以經(jīng)由單劑量或分劑量來完成。

IV.治療方法

在另一方面中，本申請?zhí)峁┲委熓茉囌咧械腶PKC依賴性紊亂或狀況的方法，所述方法包括：向受試者施用如在上文實施方案中任一項所定義的式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一方面中，本申請?zhí)峁┤缟衔膶嵤┓桨钢腥我豁椝x的式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽，以用于治療受試者中的aPKC依賴性紊亂或狀況。在另一方面中，本申請?zhí)峁┤缟衔膶嵤┓桨钢腥我豁椝x的式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽，以用于制備用于治療受試者中的aPKC依賴性紊亂或狀況的藥劑。優(yōu)選地，化合物作為包含藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物被施用至受試者。優(yōu)選地，化合物以藥學(xué)上可接受的量被施用至受試者。在一個實施方案中，aPKC依賴性狀況或紊亂是癌癥。在另一個實施方案中，aPKC依賴性狀況選自：非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、鱗狀細(xì)胞癌(例如食管鱗狀細(xì)胞癌)、白血病、前列腺癌、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)(例如濾泡性淋巴瘤)、子宮內(nèi)膜癌、肺癌以及乳腺癌。

aPKC依賴性紊亂或狀況可以使用本申請的化合物預(yù)防性地、急性地、或慢性地治療，取決于紊亂或狀況的性質(zhì)。典型地，這些方法中的每種方法中的受試者是人類，盡管其他哺乳動物也可以受益于本申請的化合物的施用。應(yīng)當(dāng)理解，待通過本文描述的任何方法被治療的受試者認(rèn)可需要這樣的治療。

在另一個實施方案中，本申請?zhí)峁┲委熓茉囌咧械脑鲋承晕蓙y的方法，所述方法包括向受試者施用如上文實施方案中任一項中所定義的式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽。在另一方面中，本申請?zhí)峁┤缟衔膶嵤┓桨钢腥我豁椫兴x的式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽，以用于治療受試者中的增殖性紊亂。在另一方面中，本申請?zhí)峁┤缟衔膶嵤┓桨钢腥我豁椫兴x的式(I)的化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽，以用于制備用于治療受試者中的增殖性紊亂的藥劑。優(yōu)選地，化合物和/或其鹽以包含藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物施用至受試者。優(yōu)選地，化合物和/或其鹽以藥學(xué)上可接受的量施用至受試者。在某些實施方案中，增殖性紊亂是aPKC依賴性的。在某些實施方案中，增殖性紊亂是癌癥。在某些實施方案中，增殖性紊亂選自：非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、鱗狀細(xì)胞癌(例如食管鱗狀細(xì)胞癌)、白血病、前列腺癌、非霍奇金氏淋巴瘤(例如濾泡性淋巴瘤)、子宮內(nèi)膜癌、肺癌以及乳腺癌。

增殖性紊亂可以使用本申請的化合物預(yù)防性地、急性地、或慢性地來治療，取決于紊亂或狀況的性質(zhì)。典型地，這些方法中的每種方法中的受試者是人類，盡管其他哺乳動物也可以受益于本申請的化合物的施用。

在治療應(yīng)用中，本申請的化合物可以以多種多樣的口服劑型和腸胃外劑型來制備和施用。因此，本申請的化合物可以通過注射即靜脈內(nèi)地、肌肉內(nèi)地、皮內(nèi)地、皮下地、十二指腸內(nèi)地、或腹膜內(nèi)地來施用。此外，本文描述的化合物可以通過吸入例如經(jīng)鼻內(nèi)地施用。另外，本申請的化合物可以透皮地施用。在另一個實施方案中，本申請的化合物口服地遞送?；衔镞€可以直腸地、口腔地或通過吹入法遞送。

用于特定情形的合適的劑量的確定是在實踐者的技術(shù)內(nèi)。通常，治療以小于化合物的最優(yōu)劑量的較小劑量開始。其后，將劑量以小增量增加，直到達(dá)到在該情況下的最優(yōu)效果。為了便利，如果需要，總的日劑量可以被劃分并且在這一天期間按份施用。典型的劑量是約1mg每天至約1,000mg每天，例如約5mg每天至約500mg每天。在某些實施方案中，劑量是約10mg每天至約300mg每天，例如約25mg每天至約250mg每天。

V.化學(xué)

縮寫

為了便利，本文使用以下常用縮寫：

LCMS 用于液相色譜-質(zhì)譜法。

HPLC 用于高壓液相色譜法。

NMR 用于核磁共振。

RT 用于保留時間。

MI 用于分子離子

h 用于小時

min 用于分鐘

AlCl₃ 用于氯化鋁

BBr₃ 用于三溴化硼

Boc 用于叔丁氧羰基

cataCXium C 用于反式-雙(乙酸)雙[鄰-(二-鄰-甲苯基膦)芐基]二鈀(II)

Cs₂CO₃ 用于碳酸銫

CuI 用于碘化亞銅(I)

DAST 用于二乙基氨基三氟化硫

DBU 用于1,8-二氮雜雙環(huán)(5.4.0)十一-7-烯

DMAP 用于4-(二甲基氨基)吡啶

DCE 用于1,1-二氯乙烷(1,1-dichloroethane)或亞乙基二氯(ethylidene chloride)

DCM 用于二氯甲烷或亞甲基氯

DEA 用于二乙醇胺

DIPEA 用于N,N-二異丙基乙胺，Hunig’s堿

DMA 用于N,N-二甲基乙酰胺

DMF 用于N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 用于二甲基亞砜

Et₃N 用于三乙胺

EtOH 用于乙醇(ethyl alcohol)、乙醇(ethanol)

Ex 用于實施例

HCl 用于鹽酸

H₂SO₄ 用于硫酸

Int 用于中間體

KOH 用于氫氧化鉀

MW 用于微波

mCPBA 用于間氯過氧苯甲酸

MeOH 用于甲醇(methyl alcohol)、甲醇(methanol)

Mo(CO)₆ 用于六羰基鉬

MP-BH₄ 用于大孔甲基聚苯乙烯硼氫化三乙基銨

NaOH 用于氫氧化鈉

Na₂CO₃ 用于碳酸鈉

Na₂SO₄ 用于硫酸鈉

NaOAc 用于乙酸鈉

NaOtBu 用于叔丁醇鈉

NMP 用于1-甲基-2吡咯烷酮

NMM 用于N-甲基嗎啉

Pd(dba)₂ 用于雙(二亞芐基丙酮)鈀

Pd(OAc)₂ 用于二乙酸鈀

Pd(Ph₃)₄ 用于四(三苯基膦)鈀

Pd(Ph₃)Cl₂ 用于雙(三苯基膦)二氯化鈀(II)

POCl₃ 用于氧氯化磷

PPh₃ 用于三苯基膦

PS-TsCl 用于聚苯乙烯磺酰氯

PS-PPh₃-Pd 用于聚苯乙烯三苯基膦-Pd(0)

SCX-2 用于具有化學(xué)鍵合的丙磺酸官能團(tuán)的基于二氧化硅的吸附劑

TBAF 用于四正丁基氟化銨

TBDMS 用于叔丁基二甲基甲硅烷基

TCA 用于三氯乙酸

TFA 用于三氟乙酸

THF 用于四氫呋喃

TMS 疊氮化物用于三甲基甲硅烷基疊氮化物

Xantphos 用于4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽

XPhos 用于2-二環(huán)己基膦-2′,4′,6′-三異丙基聯(lián)苯

LCMS方法

通過高效液相色譜-質(zhì)譜法分析的樣品采用以下條件。除非另外注明，否則利用方法X。

方法1

方法1采用Gilson 306泵、Gilson 811混合器、Gilson 806測壓模塊以及在254nm波長處的Gilson UV/VIS 152檢測器。質(zhì)譜儀是Finnigan AQA并且使用的柱是Waters SunFire、5μm孔徑、尺寸50x 4.60mm的C18。注射體積是10μl。流動相由包含0.1％甲酸的水和乙腈的混合物組成。洗脫劑流速是1.5mL/min，使用95％水:5％乙腈，經(jīng)過5.5分鐘線性改變至5％水:95％乙腈并且然后保持在此混合物下持續(xù)2分鐘。

方法2

方法2采用Waters 515泵、Waters 2525混合器以及Waters 2996二極管陣列檢測器。檢測在210nm和650nm之間進(jìn)行。質(zhì)譜儀是Waters micromass ZQ并且使用的柱是Waters SunFire、5μm孔徑、尺寸50x 4.60mm的C18。注射體積是10μl。流動相由包含0.1％甲酸的水和乙腈的混合物組成。洗脫劑流速是1.5mL/min，使用95％水:5％乙腈，經(jīng)過5.5分鐘線性改變至5％水:95％乙腈并且然后保持在此混合物下持續(xù)2分鐘。

方法3

方法3采用Waters 515泵、Waters 2525混合器以及Waters 2487 UV檢測器(單波長254nm)。質(zhì)譜儀是Waters micromass ZQ并且使用的柱是Waters SunFire、5μm孔徑、尺寸50x 4.60mm的C18。注射體積是10μl。流動相由包含0.1％甲酸的水和乙腈的混合物組成。洗脫劑流速是1.5mL/min，使用95％水:5％乙腈，經(jīng)過5.5分鐘線性改變至5％水:95％乙腈并且然后保持在此混合物下持續(xù)2分鐘。

方法4

方法4采用Waters 515泵、具有導(dǎo)向不同柱的閥的Waters 2545混合器以及Waters 2996二極管陣列檢測器。檢測在210nm和650nm之間進(jìn)行。使用的質(zhì)譜儀是Waters 3100，其檢測在100g/mol和700g/mol之間的質(zhì)量。使用的柱是XBridge、5微米孔徑、50x4.60mm的C18。注射體積是10μl的溶液(約1mg/ml)。流速是1.5mL/min并且流動相由水pH 100.03％氫氧化銨(3ml/10 l)和乙腈0.03％氫氧化銨(3ml/10 l)組成。洗脫以95％水:5％乙腈開始，經(jīng)過5.50分鐘增加至5％水:95％乙腈。將洗脫水平經(jīng)過6秒鐘返回至95％水:5％乙腈的開始條件。將這些條件保持持續(xù)1.4分鐘以允許在注射下一個樣品之前使柱平衡。運(yùn)行持續(xù)總計7分鐘。

方法5

方法5采用Waters 515泵、具有導(dǎo)向不同柱的閥的Waters 2525混合器以及Waters 2487 UV檢測器。檢測在254nm處進(jìn)行。使用的質(zhì)譜儀是Waters micromass ZQ，其檢測在100g/mol和700g/mol之間的質(zhì)量。使用的柱是SunFire、5微米孔徑，使用尺寸50x4.60mm的C18柱。注射體積是10μL的溶液(約1mg/mL)。流速是1.5mL/min并且水和甲醇的流動相包含0.1％甲酸。洗脫以85％水:15％甲醇開始，經(jīng)過4.5分鐘增加至15％水:85％甲醇，將這些條件保持持續(xù)1分鐘，之后將洗脫水平經(jīng)過6秒鐘返回至85％水:15％甲醇的開始條件。將這些條件保持持續(xù)1.4分鐘以允許在注射下一個樣品之前使柱平衡。運(yùn)行持續(xù)總計7分鐘。

方法6

方法6采用Waters 515泵、具有導(dǎo)向不同柱的閥的Waters 2545混合器以及Waters 2996二極管陣列檢測器。檢測在210nm和650nm之間進(jìn)行。使用的質(zhì)譜儀是Waters 3100，其檢測在100g/mol和700g/mol之間的質(zhì)量。使用的柱是XBridge、5微米孔徑、50x4.60mm的C18。注射體積是10μL的溶液(約1mg/ml)。流速是1.5mL/min并且流動相由水pH 100.03％氫氧化銨(3ml/10 l)和甲醇0.03％氫氧化銨(3ml/10 l)組成。洗脫以85％水:15％甲醇開始，經(jīng)過4.5分鐘增加至15％水:85％甲醇。將這些條件保持持續(xù)1分鐘，之后將洗脫劑水平經(jīng)過6秒鐘返回至85％水:15％甲醇的開始條件。將這些條件保持持續(xù)1.4分鐘以允許在注射下一個樣品之前使柱平衡。運(yùn)行持續(xù)總計7分鐘。

方法7

方法7采用Waters 515泵、具有導(dǎo)向不同柱的閥的Waters 2545混合器以及Waters 2487 UV檢測器。檢測在254nm處進(jìn)行。使用的質(zhì)譜儀是Waters micromass ZQ，其檢測在100g/mol和700g/mol之間的質(zhì)量。使用的柱是SunFire、5微米孔徑，使用尺寸50x4.60mm的C18柱。注射體積是10μL的溶液(約1mg/mL)。流速是1.5mL/min并且水和甲醇的流動相包含0.1％甲酸。洗脫以85％水:15％甲醇開始，經(jīng)過4.5分鐘增加至15％水:85％甲醇，將這些條件保持持續(xù)1分鐘，之后將洗脫劑水平經(jīng)過6秒鐘返回至85％水:15％甲醇的開始條件。將這些條件保持持續(xù)1.4分鐘以允許在注射下一個樣品之前使柱平衡。運(yùn)行持續(xù)總計7分鐘。

方法8

方法8采用Waters 515泵、具有導(dǎo)向不同柱的閥的Waters 2525混合器以及Waters 2487 UV檢測器。檢測在254nm處進(jìn)行。使用的質(zhì)譜儀是Waters micromass ZQ，其檢測在100g/mol和700g/mol之間的質(zhì)量。使用的柱是SunFire、5微米孔徑，使用尺寸50x4.60mm的C18柱。注射體積是10μL的溶液(約1mg/mL)。流速是1.5mL/min并且水和甲醇的流動相包含0.1％甲酸。洗脫以85％水:15％甲醇開始，經(jīng)過3分鐘增加至15％水:85％甲醇。將這些條件保持持續(xù)2.5分鐘，之后將洗脫劑水平經(jīng)過6秒鐘返回至85％水:15％甲醇的開始條件。將這些條件保持持續(xù)1.4分鐘以允許在注射下一個樣品之前使柱平衡。運(yùn)行持續(xù)總計7分鐘。

方法9

方法9采用Waters 515泵、具有導(dǎo)向不同柱的閥的Waters 2545混合器以及Waters 2487 UV檢測器。檢測在254nm處進(jìn)行。使用的質(zhì)譜儀是Waters micromass ZQ，其檢測在100g/mol和700g/mol之間的質(zhì)量。使用的柱是XBridge、5微米孔徑、50x4.60mm的C18。注射體積是10μL的溶液(約1mg/ml)。流速是1.5mL/min并且流動相由水pH 10 0.03％氫氧化銨(3ml/10 l)和甲醇0.03％氫氧化銨(3ml/10 l)組成。洗脫以85％水:15％甲醇開始，經(jīng)過4.5分鐘增加至15％水:85％甲醇。將這些條件保持持續(xù)1分鐘，之后將洗脫劑水平經(jīng)過6秒鐘返回至85％水:15％甲醇的開始條件。將這些條件保持持續(xù)1.4分鐘以允許在注射下一個樣品之前使柱平衡。運(yùn)行持續(xù)總計7分鐘。

方法10

在兩種儀器中的任一個上獲得LCMS結(jié)果。在具有2.1mm x 50mm Waters Aquity UPLC BEH C18 1.7μm柱的Waters Aquity Ultra Performance LC上進(jìn)行LCMS分析。目標(biāo)柱溫是45℃，具有兩(2)分鐘的運(yùn)行時間，0.600mL/min的流速以及5％(0.1％甲酸/水):95％(乙腈/0.1％甲酸)的溶劑混合物。在Micromass LC-ZQ 2000四級質(zhì)譜儀上獲取質(zhì)譜數(shù)據(jù)?？蛇x擇地，LCMS分析在Bruker Esquire 200離子阱上進(jìn)行。

制備型HPLC方法

通過質(zhì)譜引導(dǎo)的高效液相色譜法純化的樣品采用以下條件。

方法A

方法A采用Waters 515泵、Waters 2525混合器以及Waters 2487 UV檢測器(單波長254nm)。質(zhì)譜儀是Waters micromass ZQ并且使用的柱是Waters SunFire、5μm孔徑、尺寸50x 19mm的C18。注射體積是在50mg/mL的最大濃度下的多達(dá)500μL的溶液。流動相由包含0.1％甲酸的水和乙腈的混合物組成。洗脫劑流速是25mL/min，使用95％水、5％乙腈，經(jīng)過5.3分鐘線性改變至95％乙腈、5％水，并且保持持續(xù)0.5分鐘。

方法B

方法B采用Waters 515泵、具有導(dǎo)向不同柱的閥的Waters 2545混合器以及Waters 2996二極管陣列檢測器。檢測在210nm和650nm之間進(jìn)行。使用的質(zhì)譜儀是Waters 3100，其檢測在100g/mol和700g/mol之間的質(zhì)量。使用的柱是XBridge、5微米孔徑、50x19mm的C18。注射體積由使用者來選擇并且可以是多達(dá)500μL的溶液(最大50mg/ml)。流速是25mL/min并且流動相為水pH 10 0.03％氫氧化銨(3ml/10 l)和乙腈0.03％氫氧化銨(3ml/10 l)。洗脫以95％水:5％乙腈開始，經(jīng)過5.30分鐘增加至5％水:95％乙腈。將洗脫劑水平經(jīng)過0.6分鐘返回至95％水:5％乙腈的開始條件。將這些條件保持持續(xù)1.4分鐘以允許在注射下一個樣品之前使柱平衡。運(yùn)行持續(xù)總計7分鐘。

分析型HPLC方法

方法X

方法X在Agilent 1100系列HPLC上以2.5ml/min在4.6X 75mm(2.5微米)Zorbax XDB-C8柱上采用乙腈(包含0.1％三氟乙酸):水(包含0.1％三氟乙酸)經(jīng)過五分鐘的梯度洗脫(0％至100％)。

合成

本文描述用于本申請的4-取代的-2-(吡啶-4-基)-氮雜喹唑啉化合物(為了便利，在本文統(tǒng)稱為“4PAZ化合物”)的化學(xué)合成的若干方法。這些方法和/或其他熟知的方法可以以已知的方式被修改和/或調(diào)整以便有利于在本申請的范圍內(nèi)的另外的化合物的合成。制造本公開內(nèi)容的化合物的方法還可以在WO 2014/052699中找到，其公開內(nèi)容通過引用并入本文。

在一種方法中，通式[F-001]的4PAZ化合物(其中A＝NH或N烷基)通過使式[F-002]的化合物(其中X是鹵素例如氯或磺酸酯)與式[F-003]的化合物(其中A是NH或NH2并且在末端氮上的Z是H、烷基或合適的氮保護(hù)基例如Boc、Alloc、Cbz或Fmoc)在合適的溶劑例如DMF中在合適的堿例如三乙胺的存在下反應(yīng)來制備。反應(yīng)在升高的溫度例如40℃下合適地進(jìn)行。在Z是合適的氮保護(hù)基例如Boc、Alloc、Cbz或Fmoc的情況下，式[F-001]的化合物通過合適的脫保護(hù)反應(yīng)來制備。例如：在Z是Boc保護(hù)基時，與酸例如TFA在合適的溶劑例如DCM中反應(yīng)。反應(yīng)在環(huán)境溫度下合適地進(jìn)行。在一種方法中，式[F-001]的化合物(其中A＝O)通過使式[F-002]的化合物(其中X是鹵素例如氯或磺酸酯)與式[F-003]的化合物(其中A是OH并且在末端氮上的Z是H、烷基或合適的氮保護(hù)基例如Boc、Alloc、Cbz或Fmoc)在合適的溶劑例如DMA中在合適的堿例如氫化鈉的存在下反應(yīng)來制備。反應(yīng)在環(huán)境溫度下合適地進(jìn)行。在Z是合適的氮保護(hù)基例如Boc、Alloc、Cbz或Fmoc的情況下，式[F-001]的化合物通過合適的脫保護(hù)反應(yīng)來制備。例如：在Z是Boc保護(hù)基時，與酸例如TFA在合適的溶劑例如DCM中反應(yīng)。

反應(yīng)在環(huán)境溫度下合適地進(jìn)行。

在一種方法中，式[F-002]的化合物(其中X是鹵素例如氯)通過使式[F-004]的化合物與合適的鹵化劑例如氧氯化磷反應(yīng)來制備。反應(yīng)在升高的溫度例如125℃下合適地進(jìn)行。式[F-002]的化合物(其中X是磺酸酯)通過使[F-004]的化合物與被合適地取代的磺酰氯在合適的溶劑例如DMA中在合適的堿例如三乙胺和催化量的DMAP的存在下反應(yīng)來制備。反應(yīng)在環(huán)境溫度下合適地進(jìn)行。

在一種方法中，式[F-004]的化合物通過使式[F-005]的化合物(其中Rx是烷基例如甲基或乙基)與式[F-006]的化合物在合適的溶劑中在干燥的非質(zhì)子溶劑例如二氧六環(huán)或THF中在有位阻的醇鹽堿例如1.7M在甲苯中的叔戊醇鉀或叔丁醇鉀的存在下反應(yīng)來制備。反應(yīng)在環(huán)境溫度下合適地進(jìn)行。

在一種方法中，式[F-004]的化合物通過使式[F-007]的化合物與式[F-006]的化合物在合適的溶劑中在質(zhì)子溶劑例如甲醇中在堿例如甲醇鈉的存在下反應(yīng)來制備。反應(yīng)首先在環(huán)境溫度下然后在回流下過夜來合適地進(jìn)行。

如上文描述的方法的實施例在以下方案中被圖示。

通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物的一般合成 方案A1

通式[F-001]的被取代的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物通過通式[F-005]的2-氨基-吡啶基衍生物與通式[F-006]的4-氰基吡啶基衍生物在堿例如甲醇鈉的存在下在極性質(zhì)子溶劑例如甲醇中的反應(yīng)來制備。反應(yīng)在升高的溫度下合適地進(jìn)行以產(chǎn)生通式[F-004]的環(huán)化的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇產(chǎn)物。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通過使通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與氯化劑例如氧氯化磷反應(yīng)以產(chǎn)生通式[F-008]的4-氯-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物、后者與通式[F-003]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et3N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)來制備[方法A]。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放(acidic ion exchange catch-release)的純化之后，N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且粗制的反應(yīng)產(chǎn)物通過正相硅膠色譜法或反相制備型HPLC純化。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通過通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與2,4,6-三異丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中的反應(yīng)來制備[方法B]。然后，將中間體6,7-取代的-(2,4,6-三異丙基苯磺酸)-2-吡啶-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基酯與通式[F-003]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且粗制的反應(yīng)產(chǎn)物通過反相制備型HPLC純化。

方案A1

方法A

方法B

4-哌嗪-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[1]的合成 方法A

2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[A001]的合成

將4-氰基吡啶(8.25g,79.2mmol)、甲醇鈉(891mg,16.5mmol)和甲醇(400mL)的混合物在室溫下攪拌持續(xù)60分鐘。添加3-氨基異煙酸(9.12g,66.0mmol)并且將混合物加熱至回流持續(xù)3天。在冷卻至室溫之后，固體沉淀通過過濾來收集，然后在真空烘箱中干燥以產(chǎn)生作為灰白色固體的標(biāo)題化合物(6.02g)：(1H,300MHz,d6-dmso)13.10(1H,br s),9.16(1H,s),8.80(2H,dd),8.70(1H,d),8.10(2H,dd),8.00(1H,dd)

4-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[A002]的合成

將在POCl₃(50mL,538mmol)中的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[A001](4g,17.8mmol)加熱至110℃持續(xù)3小時。將反應(yīng)混合物在真空下濃縮，用飽和的NaHCO₃溶液猝滅，萃取到DCM中，用水然后鹽水洗滌，通過相分離器筒并且蒸發(fā)以產(chǎn)生作為黃色/棕色固體的標(biāo)題化合物[A002](2.6g)，所述標(biāo)題化合物在不進(jìn)一步純化的情況下被使用：LCMS方法1：RT:4.09min，MI 243[M+H]。

1-[2-(吡啶-4-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪[1]的合成

將4-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[A002](100mg,0.43mmol)、哌嗪(172mg,2mmol)在無水DMA(5mL)中的溶液在室溫下攪拌持續(xù)3天。使反應(yīng)混合物在NaOH(2M水溶液)和乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)層用水然后鹽水進(jìn)一步洗滌，干燥(MgSO₄)，通過相分離器筒并且蒸發(fā)以產(chǎn)生粗制材料，所述粗制材料通過制備型HPLC(方法A)純化以產(chǎn)生標(biāo)題化合物(1.87mg)。LCMS方法1：RT:3.49min，MI 293[M+H]；1H-NMR(300MHz；DMSO-d6)：9.26(1H,s),8.76(2H,d),8.58(1H,d),8.32(2H,d),8.24(1H,s),7.92(1H,d),3.96(4H,br tr),2.99(4H,br tr)

(5-甲氧基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-(R)-吡咯烷-3-基-胺[2]的合成 方法B

5-甲氧基-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[A003]的合成

向2-氯-4-吡啶甲腈(1g,9.6mmol)在MeOH(20mL)中的攪拌的溶液添加0.5M NaOMe(2mmol,4mL)，隨后添加3-氨基-5-甲氧基異煙酸(1.35g,8mmol)。將RM在75℃下加熱過夜。使RM靜置冷卻并且形成固體沉淀(solid ppt)，所述固體沉淀通過過濾來收集，用冷的MeOH洗滌并且在真空烘箱中干燥以給出作為淺棕色固體的標(biāo)題化合物(610mg，30％收率)。LCMS方法1：RT:3.82min，MI 255.09[M+H]。

(5-甲氧基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-(R)-吡咯烷-3-基-胺[2]的合成

將5-甲氧基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[A003](0.157mmol,0.04g)、2,4,6-三異丙基苯磺酰氯(0.173mmol,0.052g)溶解在無水DMA(2mL)中，并且相繼添加Et₃N(0.314mmol,0.045mL)和DMAP(5mg)。將混合物在室溫下攪拌持續(xù)1小時并且添加(R)-3-氨基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.236mmol,0.044g)。將混合物在室溫下攪拌過夜。然后，將溶劑在減壓下除去并且將殘余物在三氟乙酸(1mL)中在室溫下攪拌持續(xù)3h。將溶液傾倒至SCX-2筒(5g)上，用甲醇(10mL)洗滌并且然后用氨(2N，在甲醇中，20mL)洗滌。將氨洗滌物在真空中濃縮成棕色殘余物，所述棕色殘余物通過制備型HPLC(方法A)純化以產(chǎn)生標(biāo)題化合物(0.016g)。LCMS方法1：RT:1.47min,MI 323[M+H]；1H-NMR 300MHz(1H d6-dmso)8.81(1H,s),8.76(2H,dd),8.35(1H,s),8.32(2H,dd),8.23(1H,d),6.42(1H,s),4.98(1H,m),4.14(3H,s),3.19-3.07(2H,m),2.41-2.29(2H,m),2.07-1.95(2H,m)。

通式[F-001]的5-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物的一般合成 方案A7

通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物通過通式[F-016]的鄰位-鹵代-異煙酸衍生物與通式[F-018]的合適地被取代的4-甲脒?；?吡啶在合適的偶聯(lián)劑例如O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)下在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA或DMF中的偶聯(lián)來制備。然后將通式[F-017]的異煙?；哐苌锃h(huán)化以替代有關(guān)的鹵素基團(tuán)以產(chǎn)生期望的通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通過通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與氯化劑例如氧氯化磷的反應(yīng)來制備，并且然后使中間體4-氯代衍生物與通式[F-015]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)[方法A]。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相硅膠色譜法或反相制備型HPLC純化。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通過通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與2,4,6-三異丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中的反應(yīng)來制備[方法B]。然后，將中間體6,7-取代的-(2,4,6-三異丙基苯磺酸)-2-吡啶-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基酯與通式[F-015]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過反相制備型HPLC純化。

方案A7

5-氯-4-哌嗪-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[132]的合成

3,5-二氯-N-(亞氨基-吡啶-4-基-甲基)-異煙酰胺[A060]的合成

將3,5-二氯-異煙酸(10.4mmol,1.997g)在室溫下溶解在無水DMF(50mL)中并且一次性添加HATU(10.4mmol,3.95g)，并且將混合物攪拌持續(xù)5min。然后一次性添加DIPEA(28.6mmol,5.0mL)并且將反應(yīng)攪拌持續(xù)40分鐘。一次性添加吡啶-4-甲脒鹽酸鹽(9.52mmol,1.5g)并且將反應(yīng)在室溫下攪拌持續(xù)18小時。

然后，將反應(yīng)混合物傾倒至在錐形燒瓶中的水(總計～250mL，包括反應(yīng)容器的沖洗)中。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌持續(xù)90分鐘并且將形成的沉淀過濾，用水(x2)和醚(x2)洗滌。然后將固體在真空烘箱中干燥持續(xù)4小時以產(chǎn)生作為淺棕色粉末的標(biāo)題化合物[A060](2.359g)。LCMS方法1：RT:3.31min，MI 295[M+H]。

5-氯-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[A061]的合成

在25mL Biotage微波容器中，在氮?dú)庀绿砑?,5-二氯-N-(亞氨基-吡啶-4-基-甲基)-異煙酰胺[A060](1.5mmol,0.443g)、碳酸銫(3.0mmol,0.978g)以及N,N'-二芐基乙二胺(0.3mmol,0.071mL)。將混合物在無水DMA(10mL)中劇烈地攪拌并且一次性添加氯化鐵(III)(0.15mmol,0.024g)。然后，將混合物在微波中在120℃下加熱持續(xù)90min。允許反應(yīng)冷卻至室溫并且在約5分鐘內(nèi)逐滴地添加乙酸(12.0mmol,0.69mL)并且產(chǎn)生的混合物用MeOH(10mL)稀釋，并且在室溫下攪拌持續(xù)30min。將混合物添加至10g SCX-2筒并且用甲醇(～25-30mL)洗滌。然后，將筒用氨(2N，在MeOH中,40mL)洗滌并且氨洗滌物在真空中濃縮以產(chǎn)生5-氯-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮(130mg)。將SCX-2筒的非堿性甲醇洗滌物留下靜置過夜，形成沉淀。將此過濾，用甲醇(x1)洗滌，并且在真空烘箱中干燥過夜以產(chǎn)生作為灰白色固體的標(biāo)題化合物[A061](13mg)。LCMS方法1：RT:2.12min，MI259[M+H]。

4-(5-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[A062]的合成

將5-氯-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[A061](0.553mmol,0.143g)在室溫下在氮?dú)庀聭腋≡跓o水DCM(14mL)中，并且相繼添加三乙胺(1.38mmol,0.193mL)、DMAP(約0.005g)以及2,4,6-三異丙基苯磺酰氯(0.663mmol,0.201g)。將反應(yīng)在室溫下作為灰白色懸浮液攪拌持續(xù)2小時。混合物緩慢地變成淺綠色懸浮液，使其攪拌過夜。然后，添加吡啶(4mL)并且將反應(yīng)容器進(jìn)行聲處理持續(xù)5分鐘以嘗試改進(jìn)溶解，引起反應(yīng)顏色從綠色懸浮液改變?yōu)樽厣珣腋∫?。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌持續(xù)1小時。一次性添加Boc-哌嗪(0.608mmol,0.113g)并且使混合物攪拌持續(xù)18小時。

反應(yīng)用水稀釋并且用DCM(x3)萃取。合并的有機(jī)物用鹽水洗滌(x1)，干燥(MgSO₄)，過濾并且在真空中濃縮。以產(chǎn)生標(biāo)題化合物[A062]，所述標(biāo)題化合物在下一個反應(yīng)中在不進(jìn)一步純化的情況下被使用：LCMS方法1：RT:5.69min，MI 427[M+H]。

5-氯-4-哌嗪-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[132]的合成

在室溫下向4-(5-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[A062](0.47mmol,0.201g)在無水DCM(8mL)中的溶液添加HCl(4.0N，在二氧六環(huán)中，2mL)以產(chǎn)生橙色懸浮液，將所述橙色懸浮液在室溫下攪拌持續(xù)3小時。然后，將混合物在真空中濃縮，重新溶解在DCM/MeOH(1:1，總計6mL)中并且添加至SCX-2 10g筒。將筒用DCM和MeOH(總計～35mL，分別地～2:3比率)洗滌。然后，將筒用在甲醇中的氨(2N,40mL)洗滌并且將氨洗滌物在真空中濃縮以產(chǎn)生92mg棕色油。將粗制材料通過柱色譜法(具有0-20％MeOH/DCM 15體積的SP1 4g VWR柱)純化以產(chǎn)生作為橙黃色泡沫的標(biāo)題化合物[138](0.044g)。LCMS方法1：RT:1.60min，MI 327[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；9.15(1H,s),8.77(2H,d),8.61(1H,s),8.29(2H,d),3.69(4H,br s),2.85(4H,br s)。

3-溴-5-氟-N-(亞氨基-吡啶-4-基-甲基)-異煙酰胺[A065]的合成

2-溴-5-氟-N-(亞氨基-吡啶-4-基-甲基)-異煙酰胺[A066]通過3-溴-4-羧基-5-氟-吡啶、氯化物、吡啶-4-甲脒鹽酸鹽、HATU、DIPEA和DMF在室溫下的反應(yīng)來制備以給出標(biāo)題化合物。LCMS方法1：RT:3.20min，MI 325[M+H]。

將2-溴-5-氟-N-(亞氨基-吡啶-4-基-甲基)-異煙酰胺[A066](0.05g,0.155mmol)、DMA(0.5mL)、K₂CO₃(0.022g,0.16mmol)、DIPEA(0.28mL,0.16mmol)以及DBA(0.024mL,0.16mmol)在150℃下在微波中加熱持續(xù)45min。將粗制反應(yīng)混合物在減壓下蒸發(fā)并且將粗制材料通過柱色譜法(在0.5％Et3N/DCM/0-20％MeOH中的SP1 4g VWR柱)純化以產(chǎn)生作為橙黃色泡沫的標(biāo)題化合物[A065](0.044g,80％收率)。LCMS方法1：RT:11.57min，MI 304[M+H]。

通式[F-001]的5-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物的一般合成 方案A8

通式[F-020]的鄰位-鹵代-異煙酸衍生物通過通式[F-019]的二鹵代異煙酸衍生物與通式[F-021]的格氏試劑在極性非質(zhì)子溶劑例如THF或Et₂O中的反應(yīng)來制備。通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物通過通式[F-020]的鄰位-鹵代-異煙酸衍生物與通式[F-018]的合適地被取代的4-甲脒酰基-吡啶在合適的偶聯(lián)劑例如O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)下在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA或DMF中的偶聯(lián)來制備。將通式[F-022]的異煙酰基脒衍生物環(huán)化以替代有關(guān)的鹵素基團(tuán)以產(chǎn)生期望的通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通過通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與氯化劑例如氧氯化磷的反應(yīng)來制備，并且然后使中間體4-氯代衍生物與通式[F-015]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)[方法A]。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相硅膠色譜法或反相制備型HPLC純化。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通過通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與2,4,6-三異丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中的反應(yīng)來制備[方法B]。然后，將中間體6,7-取代的-(2,4,6-三異丙基苯磺酸)-2-吡啶-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基酯與通式[F-015]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過反相制備型HPLC純化。

方案A8

5-丁基-4-哌嗪-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[135]的合成

3-丁基-5-氟-異煙酸[A067]的合成

將3,5-二氟異煙酸(0.557g,3.5mmol)在0℃下在氮?dú)獾臍夥障聭腋≡跓o水THF(8mL)中。向此在10分鐘內(nèi)逐滴地添加丁基氯化鎂(2.0M，在二乙醚中，5.25mL，10.5mmol)。在緩慢添加期間，懸浮液緩慢地改變形式，其中固體的初步團(tuán)聚，然后固體開始緩慢地溶解，大致在試劑的添加完成時實現(xiàn)充分的溶液。允許反應(yīng)混合物加溫至室溫并且攪拌超過72小時以形成粘稠的黃色懸浮液。用水稀釋并且轉(zhuǎn)移到單頸燒瓶中并且在真空中濃縮。將黃色固體用水(10mL)和EtOAc(10mL)稀釋。通過逐滴添加HCl(濃)將pH調(diào)整為pH～2，并且用EtOAc(x3-黃色的某些進(jìn)入有機(jī)物中)萃取。將合并的有機(jī)物用鹽水(x1)洗滌，干燥(MgSO₄)并且在真空中濃縮以產(chǎn)生作為緩慢地固化的橙色膠狀物/固體的標(biāo)題化合物[A067](0.402g)：NMR:(1H,300MHz,d6-dmso)；8.52(1H,s),8.42(1H,s),2.67(2H,t),1.58-1.48(2H,m),1.35-1.22(2H,m),0.87(3H,t)；LCMS方法1：RT:1.22min，MI 198[M+H]。

3-丁基-5-氟-N-(亞氨基-吡啶-4-基-甲基)-異煙酰胺[A068]的合成

將3-丁基-5-氟-異煙酸[A067](2.05mmol,0.402g)溶解在無水DMF(8mL)中并且添加二異丙基乙胺(DIPEA)(5.95mmol,1.04mL)并且將混合物在室溫下攪拌持續(xù)5分鐘。然后，一次性添加O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(2.0 5mmol,0.78g)并且將產(chǎn)生的混合物攪拌持續(xù)1小時。然后，將吡啶-4-甲脒鹽酸鹽(1.95mmol，0.307g)經(jīng)過5分鐘分批地添加至反應(yīng)。將產(chǎn)生的溶液在室溫下攪拌持續(xù)18小時。將反應(yīng)混合物傾倒至水(85mL)中并且攪拌持續(xù)30分鐘并且然后用EtOAc(x3)萃取。合并的有機(jī)物用水(x4)、鹽水(x1)洗滌，干燥(MgSO₄)，過濾并且在真空中濃縮以產(chǎn)生作為棕色固體的標(biāo)題化合物[A068](480mg)。材料在下一個反應(yīng)中作為粗品使用：NMR:(1H,300MHz,d6-dmso)；10.28(1H,brs),9.93(1H,br s),8.74(2H,d),8.45(1H,s),8.37(1H,s),7.90(2H,d),2.72-2.66(2H,m),1.58-1.48(2H,m),1.28-1.15(2H,m),0.79(3H,t)；LCMS方法1：RT:3.90min，MI 301[M+H]。

5-丁基-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[A069]的合成

將3-丁基-5-氟-N-(亞氨基-吡啶-4-基-甲基)-異煙酰胺[A068]放置到在無水DMA(5mL)中的溶液中的25mL Biotage微波容器中并且在150℃下在微波中加熱持續(xù)45min。將反應(yīng)混合物過濾，材料通過SCX-2 25g筒。將筒用甲醇(50mL)洗滌。然后，將筒用氨(2N,40mL)洗滌并且將氨洗滌物在真空中濃縮以產(chǎn)生作為淺棕色固體的標(biāo)題化合物[A069](390mg)：NMR:(1H,300MHz,d6-dmso)；8.95(1H,s),8.79(2H,dd),8.46(1H,s),8.10(2H,dd),3.21(2H,t),1.63-1.50(2H,m),1.43-1.27(2H,m),0.91(3H,t)–還示出一個當(dāng)量的DMA；LCMS方法1：RT:3.29min，MI 281[M+H]。

5-丁基-4-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[A070]的合成

將5-丁基-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[A069](1.35mmol,0.378g)懸浮在無水1,2-二氯乙烷(DCE)(10mL)中并且在2-3分鐘內(nèi)逐滴地添加氧氯化磷(POCl₃)(1.4mmol,0.131mL)。最后，添加DIPEA(2.0mmol,0.348mL)并且將混合物在室溫下在氮?dú)庀聰嚢柽^夜。在POCl₃添加之后，棕色固體緩慢地改變外觀，然后在添加DIPEA之后進(jìn)一步變深成深棕色外觀的溶液。將反應(yīng)留在室溫下在氮?dú)庀聰嚢柽^夜。在20小時之后，添加POCl₃(65μL)并且在室溫下攪拌過夜。將粗制混合物在真空中濃縮，然后與甲苯(x2)共沸至干燥。將殘余物用碳酸鈉(水溶液，2N,20mL)稀釋并且用DCM(x2)、EtOAc(x1)萃取。合并的有機(jī)物用鹽水(x1)洗滌，干燥(MgSO₄)，通過二氧化硅墊過濾并且在真空中濃縮以產(chǎn)生作為淺棕色固體的標(biāo)題化合物[A070](180mg)，所述標(biāo)題化合物在下一個反應(yīng)中在不進(jìn)一步純化的情況下使用：LCMS方法1：RT:5.66min，MI 299[M+H]。

4-(5-丁基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[A071]的合成

將5-丁基-4-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[A070](0.615mmol,0.180g)在氮?dú)庀略谑覝叵氯芙庠跓o水DCM(5mL)中，并且用三乙胺(0.868mmol,0.121mL)和N-Boc-哌嗪(0.682mmol,0.127g)一次性處理。將產(chǎn)生的混合物在室溫下攪拌持續(xù)2小時。然后，添加碳酸鈉(1N水溶液,20mL)并且用DCM(x2)和EtOAc(x1)萃取。合并的有機(jī)物用鹽水(x1)洗滌，干燥(MgSO₄)，過濾并且在真空中濃縮成深棕色固體，所述深棕色固體通過柱色譜法(在0-10％MeOH/DCM中的25g VWR筒上的SP1，15個柱體積)純化以產(chǎn)生作為棕色膠狀物的標(biāo)題化合物[A071](0.092g)，所述標(biāo)題化合物在下一個反應(yīng)中在不進(jìn)一步純化的情況下使用：NMR:(1H,300MHz,d6-dmso)；9.24(1H,s),8.79(2H,d),8.49(1H,s),8.36(2H,d),3.77-3.48(8H,m),3.19-3.07(2H,m),1.64-1.23(4H,m),1.48(9H,s),0.96-0.87(3H,t)。

5-丁基-4-哌嗪-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[135]的合成

將4-(5-丁基-2-吡啶-4-基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[A071](0.20mmol,0.09g)溶解在無水DCM(4mL)中并且用氯化氫(4N，在二氧六環(huán)中，4mL)在室溫下處理并且攪拌持續(xù)2小時。將反應(yīng)用甲醇稀釋并且傾倒至SCX-2筒(5g)上，用MeOH/DCM(20mL)洗滌。然后，將筒用氨(2N,20mL)洗滌并且將氨洗滌物在真空中濃縮以產(chǎn)生棕色膠狀物(0.059g)。將殘余物通過柱色譜法(SP1 4g柱，以梯度5-20％MeOH/DCM，15個柱體積)純化以產(chǎn)生作為橙棕色膠狀物的標(biāo)題化合物[133](0.020g)；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；9.09(1H,s),8.76(2H,d),8.51(1H,s),8.31(2H,d),3.73-3.58(2H,br s),3.50-3.37(2H,br s),3.07(2H,t),2.90-2.79(4H,br s),1.51-1.38(2H,m),1.28-1.15pm(2H,m),0.84(3H,t)；LCMS方法1：RT:2.58min，MI 349[M+H]。

通式[G-003]的被取代的2-氨基吡啶基取代的2-(2-氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物的一般合成 方案B1

通式[G-002]的2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通過通式[G-001]的2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與2,4,6-三異丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中的反應(yīng)來制備。然后，將中間體6,7-取代的-(2,4,6-三異丙基苯磺酸)-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯與通式[G-004]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)。使通式[G-002]的2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物參與Buchwald型反應(yīng)(Buchwald type reaction)，利用通式[G-005]的合適的胺、鈀催化劑例如Pd(dba)₂或Pd(OAc)₂、配體例如Xantphos和堿例如NaOtBu或Cs₂CO₃在極性溶劑例如二氧六環(huán)或二氧六環(huán)和DMA的組合中在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器，以產(chǎn)生通式[G-003]的被取代的2-氨基吡啶基取代的2-(2-氨基吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，將中間體通過柱色譜法純化并且將N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、HCl在溶劑例如DCM、DCE或1,4-二氧六環(huán)中或通過捕放磺酸樹脂例如聚合物負(fù)載的甲苯磺酸脫保護(hù)，并且將粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相色譜法或反相制備型HPLC純化。

方案B1

[4-(5-甲氧基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-苯胺[200]的合成

2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-甲氧基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B001]

向2-氯-4-吡啶甲腈(0.97g,7.03mmol)在MeOH(35mL)中的溶液在室溫下在氮?dú)庀绿砑覰aOMe(0.08g,1.46mmol)并且留下攪拌持續(xù)60min。然后，將3-氨基-5-甲氧基異煙酸(1g,5.86mmol)在MeOH(15mL)中的溶液經(jīng)過5-10min逐滴地添加至(經(jīng)由注射器)深棕色混合物。將溶液在室溫下攪拌持續(xù)2h并且然后在85℃下過夜。在冷卻下來之后，將固體過濾，并且用甲醇洗滌并且在不進(jìn)一步純化的情況下使用，以產(chǎn)生標(biāo)題化合物[B001](0.97g 57％收率：LCMS方法5：RT:6.32min，MI 287.34[M+H]。

4-[2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-甲氧基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B002]

將2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-甲氧基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B001](0.58g,2mmol)、無水DMA(5mL)、三乙胺(0.58mL,4mmol)和DMAP(20mg,0.16mmol)的混合物進(jìn)行聲處理持續(xù)10min，然后在室溫下攪拌持續(xù)10min。添加2,4,6-三異丙基苯磺酰氯(0.67g,2.2mmol)并且將混合物進(jìn)行聲處理持續(xù)5min，然后留在室溫下攪拌持續(xù)2小時。在此時間期間，材料進(jìn)入到溶液中以形成粘稠的溶液。添加Boc哌嗪(0.56g,3mmol)在無水DMA(1mL)中的溶液并且將反應(yīng)混合物留在室溫下攪拌過夜。添加水(20mL)并且將反應(yīng)混合物用DCM(2x 30mL)萃取，將萃取物合并并且用水(20mL)、飽和的碳酸氫鹽溶液(2x 20mL)和水(20mL)洗滌，干燥(MgSO₄)，過濾并且在減壓下蒸發(fā)以給出淺黃色油，所述淺黃色油通過快速柱色譜法(SP1,50g SiO₂筒100％EtOAc直到95％EtOAc:5％MeOH梯度)純化，以給出作為無色固體的標(biāo)題化合物[B002](0.22g 24％收率)。LCMS方法5：RT:10.86min，MI 457[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)；9.0(1H,s),8.53(1H,d),8.35(1H,s),8.28(1H,1H,d),8.23(1H,s),3.70(4H,br s),3.64(4H,br s),1.50(9H,s)。

4-[5-甲氧基-2-(2-苯基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B003]

將4-[2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-甲氧基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B002](0.100g,0.22mmol)、Pd(dba)₂(10mg,0.013mmol)、Xantphos(17.5mg,0.025mmol)、NaOtBu(43mg,0.440mmol)以及無水二氧六環(huán)(4ml)的混合物添加至微波小瓶。然后，添加苯胺，將小瓶密封并且在150℃下加熱持續(xù)20min。添加水(10mL)并且將反應(yīng)混合物用DCM(2x 10mL)萃取，將萃取物合并并且用水(10mL)、飽和的碳酸氫鹽(2x 10mL)和水(10mL)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并且蒸發(fā)以給出淺黃色油，所述淺黃色油通過快速柱色譜法(SP1,25g SiO2筒100％EtOAc直到95％EtOAc:5％MeOH梯度)純化以給出作為無色固體的標(biāo)題化合物[B003](0.04g 36％收率)。LCMS方法5：RT:7.80min，MI 514[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)；8.93(1H,s),8.65(1H,d),8.41(1H,s),7.39(1H,d),7.58(5H,m),6.55(1H,br s),3.63(4H,m),3.57(4H,m),1.49(9H,s)。

通式[G-008]的5-氯取代的2-氨基吡啶基取代的2-(2-氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物的一般合成 方案B2

通式[G-007]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通過通式[G-006]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與2,4,6-三異丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中的反應(yīng)來制備。然后，將中間體6,7-取代的-(2,4,6-三異丙基苯磺酸)-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯與通式[G-004]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)。使通式[G-007]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物參與Buchwald型反應(yīng)，這利用通式[G-005]的合適的胺、鈀催化劑例如Pd(dba)₂或Pd(OAc)₂、配體例如Xantphos和堿例如NaOtBu或Cs₂CO₃在極性溶劑例如二氧六環(huán)或二氧六環(huán)和DMA的組合中在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，將中間體通過柱色譜法純化并且將N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、HCl在溶劑例如DCM、DCE或1,4-二氧六環(huán)中或通過捕放磺酸樹脂例如聚合物負(fù)載的甲苯磺酸脫保護(hù)，并且將粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相色譜法或反相制備型HPLC純化。

方案B2

[4-(5-氯-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-苯胺[246]的合成

3,5-二氯-N-[(2-氯-吡啶-4-基)-亞氨基-甲基]-異煙酰胺[B007]

將3,5-二氯吡啶-4-羧酸(15g,78.12mmol)、DIPEA(37.5mL,214mmol)在DMF(400mL)中的混合物在室溫下攪拌，然后一次性添加HATU(29.7g,78.12mmol)并且將混合物留下攪拌持續(xù)45min。添加2-氯-異煙酰胺(14.25g,74.2mmol)并且將混合物留下攪拌持續(xù)另外的2小時。然后，將粗制反應(yīng)混合物傾倒至水(800mL)上并且留下攪拌過夜。將粗制反應(yīng)混合物過濾并且將固體用水洗滌，然后在真空烘箱中干燥過夜以給出作為灰白色固體的標(biāo)題化合物(22g,85％收率)：LCMS方法1：RT:4.89min，MI 330[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；10.25(1H,br s),10.10(1H,br s),8.70(2H,s),8.57(1H,s),7.99(1H,s),7.88(1H,s)。

5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B008]

將3,5-二氯-N-[(2-氯-吡啶-4-基)-亞氨基-甲基]-異煙酰胺[B007](10g,30.34mmol)、碳酸銫(19.8g,60.69mmol)和DMA(180mL)在室溫下攪拌。將混合物用氮?dú)鉀_洗，然后添加氯化鐵(III)(0.98g,6.07mmol)并且將混合物在140℃下在氮?dú)獾臍夥障录訜徇^夜。將粗制反應(yīng)混合物冷卻，然后傾倒至冰水的混合物上，然后將混合物通過添加冰乙酸酸化，并且然后將混合物留在室溫下攪拌持續(xù)2小時。將固體沉淀通過過濾收集，用水洗滌，然后在真空烘箱中干燥過夜以給出作為淺棕色固體的標(biāo)題化合物(5.26g,59％收率)：LCMS方法1：RT:4.83min,MI 293[M+H]；

4-[5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B009]

將5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B008](1.05g,3.58mmol)、無水DMF(40mL)、三乙胺(1.5mL,10.7mmol)和DMAP(440mg,3.58mmol)的混合物進(jìn)行聲處理持續(xù)45min。添加2,4,6-三異丙基苯磺酰氯(1.3g,4.3mmol)并且將反應(yīng)混合物留在室溫下攪拌持續(xù)2小時。在此時間期間，材料進(jìn)入到溶液中以形成粘稠的溶液。添加1-Boc-哌嗪(0.800g,4.3mmol)并且將反應(yīng)混合物留在室溫下攪拌過夜。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且殘余物在DCM中研磨以給出棕色固體，所述棕色固體通過快速柱色譜法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到95％DCM:5％MeOH梯度)純化，以給出作為米黃色固體的標(biāo)題化合物[B009](1.1g,67％收率)。LCMS方法1：RT:5.50min,MI 461[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；9.20(1H,s),8.67(1H,s),8.62(1H,d),8.33(1H,d),8.32(1H,s),7.94(1H,s),3.72(4H,m,br),3.53(4H,m,br),1.41(9H,s)。

4-[5-氯-2-(2-苯基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B010]

將4-[5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B009](0.150g,0.325mmol)、苯胺(61μL,0.650mml)、Pd(OAc)₂(4mg,0.017mmol)、Xantphos(19mg,0.033mmol)、碳酸銫(212mg,0.650mmol)以及無水二氧六環(huán)(1ml)的混合物在90℃下加熱過夜。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且殘余物通過快速柱色譜法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到97％DCM:3％MeOH梯度)純化以給出作為米黃色固體的標(biāo)題化合物[B010](65mg,39％收率)。LCMS方法1：RT:4.34min,MI:518.31[M+H]。

[4-(5-氯-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-苯胺[246]

將4-[5-氯-2-(2-苯基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B010](60mg,0.125mmol)在二氧六環(huán)(1mL)中的4N HCl中的混合物在室溫下攪拌持續(xù)2小時。在完成之后，將溶劑在真空中蒸發(fā)并且殘余物用MeOH(5mL)稀釋并且傾倒至1g SCX-2筒上并且用DCM和MeOH洗滌，之后用2N NH3/MeOH洗脫，將NH3/MeOH在減壓下蒸發(fā)。殘余物通過快速柱色譜法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到90％DCM:10％MeOH梯度)純化以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物[246](23mg,44％收率)。LCMS方法1：RT:5.48min,MI:418.29[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；9.33(1H,s),9.12(1H,s),8.60(1H,s),8.32(1H,d),7.89(1H,s),7.74(2H,d),7.65(1H,dd),7.27(2H,t),6.89(1H,t),3.68(4H,m),3.15(1H,d),2.86(4H,m)。

通式[G-003]的被取代的2-氨基吡啶基取代的2-(2-氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物的一般合成 方案B3

通式[G-007]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通過通式[G-006]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與2,4,6-三異丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中的反應(yīng)來制備。然后，將中間體6,7-取代的-(2,4,6-三異丙基苯磺酸)-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯與通式[G-004]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)。使通式[G-007]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物參與Buchwald型反應(yīng)，這利用通式[G-005]的合適的胺、鈀催化劑例如Pd(dba)₂或Pd(OAc)₂、配體例如Xantphos和堿例如NaOtBu或Cs₂CO₃在極性溶劑例如二氧六環(huán)或二氧六環(huán)和DMA的組合中在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器。使通式[G-008]的5-氯-2-氨基-吡啶基取代的2-(2-氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物在Suzuki型反應(yīng)中反應(yīng)，這利用通式[G-009]的合適的硼酸或硼酸酯、鈀催化劑例如Pd(PPh₃)₄或Pd(PPh₃)₂Cl₂、堿例如Et₃N、KOH、Na₂CO₃或NaOH在極性溶劑例如EtOH、THF、DMA或二氧六環(huán)中在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，將中間體通過柱色譜法純化并且將N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、HCl在溶劑例如DCM、DCE或1,4-二氧六環(huán)中或通過捕放磺酸樹脂例如聚合物負(fù)載的甲苯磺酸脫保護(hù)，并且將粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相色譜法或反相制備型HPLC純化。

方案B3

[4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-(2-氟-苯基)-胺[263]的合成

4-{5-氯-2-[2-(2-氟苯基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B010]

將4-[5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B009](3g,6.48mmol)、2-氟苯胺(654μL,6.48mml)、Pd(OAc)₂(79mg,0.324mmol)、Xantphos(375mg,0.648mmol)、碳酸銫(4.11g,12.6mmol)以及無水二氧六環(huán)(20ml)的混合物在90℃下加熱過夜。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且殘余物通過快速柱色譜法(ISCO,120g SiO₂筒100％環(huán)己烷直到70％環(huán)己烷:30％乙酸乙酯梯度)純化，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物[B010](1.2g,52％收率)。LCMS方法5：RT:4.19min，MI 516.57[M+H]。

4-{5-環(huán)丙基-2-[2-(2-氟苯基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B011]

將4-{5-氯-2-[2-(2-氟苯基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B010](1.8g,3.36mmol)、Pd(dppf)Cl₂.CH₂Cl₂(137mg,0.168mmol)、K₃PO₄(2.14g,10.075mmol)、環(huán)丙基硼酸(578mg,6.72mmol)以及無水二氧六環(huán)(30ml)加上幾滴的DMA的混合物添加至微波小瓶。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且殘余物通過快速柱色譜法(ISCO,40g SiO₂筒100％環(huán)己烷直到70％環(huán)己烷:30％乙酸乙酯梯度)純化以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物[B011](950mg,52％收率)。LCMS方法5：RT:4.72min，MI 542[M+H]。

[4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-(2-氟-苯基)-胺[263]

將4-{5-環(huán)丙基-2-[2-(2-氟-苯基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B011](300mg,0.554mmol)在二氧六環(huán)(1.5mL)中的4N HCl中的混合物在室溫下攪拌持續(xù)2小時。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且殘余物通過反相快速柱色譜法(ISCO,24g SiO₂筒，100％H₂O:0.1％甲酸直到20％H₂O:0.1％甲酸:80％MeOH:0.1％甲酸梯度)純化。將殘余物用MeOH(5mL)稀釋并且傾倒至1g SCX-2筒上并且用DCM和MeOH洗滌，之后用2N NH3/MeOH洗脫，將NH3/MeOH在減壓下蒸發(fā)以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物[263](110mg,45％收率)：LCMS方法1：RT:4.03min，MI 442[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)；8.95(1H,s),8.27(1H,d),8.21(1H,m),8.08(1H,s),8.03(1H.s),7.70-7.69(1H,dd),7.23(1H,m),7.14(1H,m),6.99(1H,m),3.78-3.62(4H,m),2.84(4H,s),2.61(1H,m),1.25-1.24(2H,m),1.02-1.01(2H,m)。

通式[G-012]的5-環(huán)丙基取代的2-氨基吡啶基取代的2-(2-氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物的一般合成

方案B4

通式[G-011]的5-環(huán)丙基-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通過通式[G-010]的5-環(huán)丙基-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與2,4,6-三異丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中的反應(yīng)來制備。然后，將中間體6,7-取代的-(2,4,6-三異丙基苯磺酸)-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯與通式[G-004]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)。使通式[G-011]的5-環(huán)丙基-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物參與Buchwald型反應(yīng)，這利用通式[G-005]的合適的胺、鈀催化劑例如Pd(dba)₂或Pd(OAc)₂、配體例如Xantphos和堿例如NaOtBu或Cs₂CO₃在極性溶劑例如二氧六環(huán)或二氧六環(huán)和DMA的組合中在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，將中間體通過柱色譜法純化并且將N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、HCl在溶劑例如DCM、DCE或1,4-二氧六環(huán)中或通過捕放磺酸樹脂例如聚合物負(fù)載的甲苯磺酸脫保護(hù)，并且將粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相色譜法或反相制備型HPLC純化。

[4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-(4,5-二甲基-噁唑-2-基)-胺[272]的合成，

3-溴-5-氟-異煙酸叔丁酯[B012]的合成

向冷卻至約-70℃的LDA(2M,72mL,144mmol)在THF(100mL)中的溶液經(jīng)由套管逐滴地添加預(yù)冷卻至-70℃的3-溴-5-氟吡啶(21.12g,120mmol)在無水THF(50mL)中的溶液?？刂铺砑铀俾?，使得內(nèi)部溫度不升高高于-65℃。將深紅棕色溶液攪拌持續(xù)1小時。將在THF(50mL)中的二碳酸二叔丁酯(52.4g,240mmol)在甲醇/冰浴中冷卻至-10℃，然后經(jīng)由套管逐滴地添加至深紅棕色溶液。將混合物攪拌持續(xù)2小時，然后允許加溫至室溫并且攪拌持續(xù)另一個1小時。緩慢地添加飽和的氯化銨水溶液(100mL)，并且然后添加水(200mL)和EtOAc(200mL)并且將混合物劇烈地攪拌持續(xù)45分鐘。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗并且將層分離。將水層用EtOAc(200mL)萃取。將THF層和EtOAc層合并，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且蒸發(fā)。將回收的深紅棕色油通過柱色譜法(環(huán)己烷/AcOEt:1/0至97/3)純化。將包含期望的材料的級分在真空中濃縮以產(chǎn)生作為淺黃色油的標(biāo)題化合物[B012](14g,85％)。LCMS方法1：RT:5.44min,MI:277[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；8.56(s,1H),8.43(s,1H),1.62(s,9H)。

3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酸叔丁酯[B013]的合成

使在無水二氧六環(huán)(100mL)中包含3-溴-5-氟-異煙酸叔丁酯[B012](5.52g,20mmol)、磷酸三鉀(12.74g,60mmol)和環(huán)丙基硼酸(2.58g,30mmol)的溶液經(jīng)受真空/氬氣球(三次)。添加[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷加合物(0.408g,0.5mmol)，并且反應(yīng)在96℃下在氮?dú)獾恼龎合录訜徇^夜。將混合物冷卻至室溫并且通過200g二氧化硅的墊過濾并且用EtOAc(1L)洗滌。將濾液在真空中濃縮并且將粗品通過柱色譜法(環(huán)己烷/AcOEt:98:2至96:4)純化。將合并的級分在減壓下濃縮以產(chǎn)生作為無色油的標(biāo)題化合物[B013](3.42g,72％)。LCMS方法1：RT:5.36min,MI:238[M+H]。

3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酸[B014]的合成

在微波小瓶中，將3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酸叔丁酯[B013](1.186g,5mmol)溶解在無水甲醇中并且然后在微波中在140℃下加熱持續(xù)1小時。將反應(yīng)在真空中濃縮以給出作為白色結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物[B014]0.84g(92％)。LCMS方法1：RT:1.51min,MI:182[M+H]。

2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B015]的合成

攪拌3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酸[B014](5g,27.6mmol)和HATU(10.5g,82.86mmol)在DMF(35mL)中的混合物，并且添加DIPEA(14.5mL,82.86mmol)。將混合物留在室溫下攪拌持續(xù)1小時，然后一次性添加2-氯-異煙脒鹽酸鹽(2-Chloro-isonicotinamidine hydrochloride)(5.3g,27.52mmol)并且將混合物留在室溫下攪拌持續(xù)18小時。將粗制反應(yīng)混合物傾倒至水(180mL)上并且留下攪拌持續(xù)2小時，并且然后米黃色固體通過過濾收集、用水洗滌并且在真空烘箱中干燥以給出N-[(2-氯-吡啶-4-基)-亞氨基-甲基]-3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酰胺(6.60g,75％收率)，該化合物在下一個步驟中在不進(jìn)一步純化的情況下使用：LCMS方法1：RT:3.45min,MI：319[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；10.25(s,br,1H),9.92(s,br,1H),8.59(d,1H),8.42(s,1H),8.11(s,1H),8.00(s,1H),7.92(dd,1H),2.01(m,1H),0.98(m,2H),0.85(m,2H)。

將N-[(2-氯-吡啶-4-基)-亞氨基-甲基]-3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酰胺(6.60g,20.70mmol)和Cs2CO3(6.7g,20.7mmol)以及DMA(90mL)的混合物在90℃下加熱過夜。將反應(yīng)混合物傾倒到冰/水(100ml)中，然后通過逐滴添加冰乙酸酸化并且將混合物留在0℃下攪拌持續(xù)1小時。將米黃色沉淀通過過濾收集并且用水洗滌，然后在真空烘箱中干燥以給出標(biāo)題化合物[B015](4.8g,78％收率)。LCMS方法1：RT:3.90min,MI：299[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；12.92(s,1H),8.88(s,1H),8.66(d,1H),8.25(dd,2H),8.16(dd,1H),3.39(m,1H),1.11(m,2H),0.94(m,2H)。

4-[2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B016]

將2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B015](280mg,0.937mmol)、無水DMF(9mL)、三乙胺(0.390mL,2.81mmol)和DMAP(115mg,0.937mmol)的混合物進(jìn)行聲處理持續(xù)10min，然后在室溫下攪拌持續(xù)10min。添加2,4,6-三異丙基苯磺酰氯(340mg,1.12mmol)并且將混合物進(jìn)行聲處理持續(xù)5min，然后留在室溫下攪拌持續(xù)2小時。在此時間期間，材料進(jìn)入到溶液中以形成粘稠的溶液。添加1-Boc-哌嗪(190mg,1.03mmol)并且將反應(yīng)混合物留在室溫下攪拌過夜。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且殘余物通過快速柱色譜法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到95％DCM:5％MeOH梯度)純化以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物[B016](276mg,63％收率)。LCMS方法5：RT:5.16min,MI：467[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)；9.02(1H,s),8.61(1H,dd),8.34(2H,m),8.15(1H,s),3.68-3.83(4H,非常寬的單峰),3.51(4H,br s),2.59(1H,m),1.24(2H,m),1.16(2H,m)。

4-{5-環(huán)丙基-2-[2-(4,5-二甲基-噁唑-2-基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B017]

將4-[2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B016](280mg,0.591mmol)、4,5-二甲基-噁唑-2-基胺(132mg,1.18mml)、Pd(OAc)₂(7mg,0.030mmol)、Xantphos(35mg,0.060mmol)、碳酸銫(384mg,1.18mmol)以及無水二氧六環(huán)(1.5ml)的混合物在90℃下加熱過夜。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且殘余物通過快速柱色譜法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到96％DCM:4％MeOH梯度)純化以給出作為米黃色固體的標(biāo)題化合物[B017](61mg,19％收率)。LCMS方法5：RT:4.07min,MI：543[M+H]。

[4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-(4,5-二甲基-噁唑-2-基)-胺[272]

將4-{5-環(huán)丙基-2-[2-(4,5-二甲基-噁唑-2-基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B017](60mg,0.112mmol)在二氧六環(huán)(1mL)中的4N HCl中的混合物在室溫下攪拌持續(xù)2小時。在完成之后，將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且殘余物用MeOH(5mL)稀釋并且傾倒至1g SCX-2筒上并且用DCM和MeOH洗滌，之后用2N NH3/MeOH洗脫，將NH3/MeOH在減壓下蒸發(fā)。然后，將殘余物通過快速柱色譜法(SP1,10g SiO₂筒100％DCM直到90％DCM:10％MeOH梯度)純化以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物[272](22mg,44％收率)。LCMS方法5：RT:2.70min,MI：443[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)；10.61(1H,s),9.17(1H,s),9.05(1H,s),8.38(1H,d),8.16(1H,s),7.87(1H,d),3.94(1H,s,br),3.26(4H,m,br),2.69(2H,m),2.19(3H,s),2.04(3H,s),1.25-1.22(3H,m),1.06-1.05(2H,m)。

環(huán)戊基-[4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-胺[281]的合成

4-[2-(2-環(huán)戊基氨基-吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B018]

將4-[2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B016][根據(jù)在方案B4中示出的一般合成制備的](170mg,0.364mmol)、環(huán)戊胺(73μL,0.728mmol)、Pd(t-Bu₃P)₂(38mg,0.073mmol)、叔丁醇鈉(54mg,0.546mmol)和無水二氧六環(huán)(2ml)的混合物在110℃下加熱過夜。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且殘余物通過快速柱色譜法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到96％DCM:4％MeOH梯度)純化以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物[B018](92mg,48％收率)。LCMS方法5：RT:4.19min,MI:516.57[M+H]。

環(huán)戊基-[4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-胺[281]

將4-[2-(2-環(huán)戊基氨基-吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B018](90mg,0.178mmol)在二氧六環(huán)(2mL)中的4N HCl中的混合物在室溫下攪拌持續(xù)2小時。將溶劑在減壓下蒸發(fā)并且殘余物用MeOH(5mL)稀釋并且傾倒至1g SCX-2筒上并且用DCM和MeOH洗滌，之后用2N NH3/MeOH洗脫，將NH3/MeOH在減壓下蒸發(fā)。然后，將殘余物通過快速柱色譜法(SP1,10g SiO₂筒100％DCM直到95％DCM:5％MeOH梯度)純化以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物[281](26mg,37％收率)。LCMS方法5：RT:2.22min，MI 416.25[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)；8.95(1H,s),8.10(2H,d),8.08(1H,s),7.51(1H,s),7.38(1H,dd),6.75(1H,d),4.17(1H,m),3.84-3.65(4H,m),3.11(4H,m),2.91(1H,m),2.62(2H,m),1.98-1.92(2H,m),1.69(2H,m),1.55(2H,m),1.46(2H,m),1.24-1.22(2H,m),1.03(2H,m)。

4PPAZ化合物

本文描述用于本申請的通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮雜喹唑啉化合物(為了便利，本文統(tǒng)稱為“4PPAZ化合物”)的化學(xué)合成的若干方法。這些方法和/或其他熟知的方法可以以已知的方式被修改和/或調(diào)整以便有助于在本申請的范圍內(nèi)的另外的化合物的合成。

通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮雜喹唑啉衍生物的一般合成 方案D1

通式[I-003]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮雜喹唑啉衍生物通過使在方案C2中制備的通式[I-002]的2-氯-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物在Suzuki型鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)中與通式[I-004]的硼酸或硼酸酯衍生物、鈀催化劑例如Pd(PPh₃)₄、堿例如K₂PO₄在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA或DMF中在升高的溫度下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器反應(yīng)來制備，以產(chǎn)生通式[I-003]的4PPAZ衍生物。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，將中間體通過柱色譜法純化。然后，使中間體通式[I-003]的芳基磺酸酯保護(hù)的衍生物在堿例如氫氧化鈉的存在下在極性質(zhì)子溶劑例如乙醇中經(jīng)受脫保護(hù)反應(yīng)。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，將中間體通過柱色譜法純化并且將N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、HCl在溶劑例如DCM、DCE或1,4-二氧六環(huán)中或通過捕放磺酸樹脂例如聚合物負(fù)載的甲苯磺酸脫保護(hù)，并且將粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相色譜法或反相制備型HPLC純化。

方案D1

5-甲氧基-4-哌嗪-1-基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶[1200]的合成

4-{5-甲氧基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D001]

制備4-(2-氯-5-甲氧基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[在方案C2中制備的C011](250mg,0.671mmol)在DMA(7.5mL)中的溶液。添加4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D002](374mg,0.940mmol)、Pd(PPh₃)₄(77mg,0.067mmol)以及K₃PO₄(2.68mL的在水中的0.5M溶液)。將反應(yīng)混合物在微波中加熱至150℃持續(xù)10min。將反應(yīng)混合物通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮并且通過二氧化硅柱色譜法(用包含0-100％EtOAc的環(huán)己烷洗脫)純化。將合適的級分合并并且濃縮以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物[D001](115mg,28％)。LCMS方法5：RT 5.13min，MI 616[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)8.92(s,1H),8.53(d,1H),8.37(s,1H),8.26(d,1H),8.05(d,1H),8.02(d,1H),7.77(d,1H),7.64–7.60(m,1H),7.57–7.53(m,1H),7.43(d,2H),4.09(s,3H),3.67(br.m,4H),3.56(br.m,4H),1.43(s,9H)。

5-甲氧基-4-哌嗪-1-基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶[1200]

制備4-{5-甲氧基-2-[1-(甲苯-4-磺?；?-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D001](100mg,0.162mmol)在乙醇(4mL)中的溶液并且添加NaOH(1mL的5M溶液)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮并且殘余物溶解在DCM(10mL)和水(10mL)中。將pH通過添加氯化銨調(diào)整至約7并且混合物用DCM(3x 10mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物干燥(相分離器)并且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將殘余物通過二氧化硅柱色譜法(用包含75-100％EtOAc的環(huán)己烷洗脫)純化。將合適的級分合并并且濃縮以給出中間體4-[5-甲氧基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯，將該中間體在二氧六環(huán)(2mL)中的4M HCl中在室溫下攪拌持續(xù)1小時。將反應(yīng)混合物通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，加載至SCX-2筒上，用甲醇洗滌并且用在甲醇中的7N氨洗脫。將氨級分通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物[1200](29mg,49％)。LCMS方法5：RT 2.23min，MI 362[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)11.81(1H,s),8.89(1H,s),8.37(1H,d,J＝5.0Hz),8.31(1H,s),8.09(1H,d,J＝5.0Hz),7.63-7.62(1H,m),7.43(1H,dd,J＝3.3,1.8Hz),4.07(3H,s),3.66-3.64(4H,m),2.91-2.89(4H,m)。

通式[I-004]的被取代的硼酸衍生物或硼酸酯衍生物的一般合成 方案D2

通式[I-004]的被取代的硼酸衍生物或硼酸酯衍生物通過通式[I-005]的4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物與通式[I-008]的芳基磺酰氯衍生物在堿例如NaH下在極性非質(zhì)子溶劑例如THF中在低溫下的反應(yīng)來制備。然后，使通式[I-006]的1-芳基磺?；?4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物在強(qiáng)堿例如LDA下在極性非質(zhì)子溶劑例如THF中在低溫下和通式[I-009]的烷基鹵化物衍生物反應(yīng)。然后，使通式[I-007]的C2取代的4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物在鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)中與鈀催化劑例如PdCl₂dppf、硼劑例如雙頻哪醇合二硼、乙酸鉀在極性非質(zhì)子溶劑例如二氧六環(huán)中在升高的溫度下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器來反應(yīng)，以產(chǎn)生通式[I-004]的被取代的硼酸酯衍生物，該被取代的硼酸酯衍生物在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后通過柱色譜法純化。

方案D2

4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺?；?-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D002]的合成

4-溴-1-(甲苯-4-磺?；?-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D003]

將4-溴-7-氮雜吲哚(3g,15.22mmol)稱重到圓底燒瓶中并且在氮?dú)庀氯芙庠赥HF(50mL)中。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并且用氫化鈉(60％在礦物油中，0.67g，16.75mmol)分批處理，添加伴隨著冒氣泡。在添加之后，允許反應(yīng)混合物在室溫下攪拌持續(xù)30分鐘并且然后用苯磺酰氯(2.14mL,16.75mmol)處理。允許反應(yīng)混合物加溫至室溫并且攪拌持續(xù)2小時。將反應(yīng)混合物在減壓下蒸發(fā)并且溶解在DCM 30mL中，將有機(jī)物用2x30mL份的2M碳酸鈉洗滌、用MgSO4干燥、過濾并且蒸發(fā)成橙色油。通過快速柱色譜法(用1:9乙酸乙酯:環(huán)己烷洗脫)純化以提供作為灰白色固體的標(biāo)題化合物(92％)。LCMS方法5：RT 5.36min，MI 337[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)8.22(d,1H),8.18(d,2H),7.78(d,1H),7.58(t,1H),7.48(t,2H),7.35(d,1H),6.63(d,1H)。

4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D002]

將4-溴-1-(甲苯-4-磺?；?-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.57g,4.47mmol)、雙(頻哪醇合)二硼[D003](2.71g,10.72mmol)、PdCl2.dppf CH2Cl2加合物(0.365g,0.45mmol)和乙酸鉀(0.876g,8.94mmol)稱重到微波小瓶中。添加二氧六環(huán)(30mL)并且將反應(yīng)混合物加蓋并且在130℃下在微波反應(yīng)器中加熱持續(xù)30分鐘。將溶劑在減壓下除去并且將殘余物在氯化銨20mL和乙酸乙酯20mL之間分配。將有機(jī)物用MgSO4干燥，過濾并且在減壓下蒸發(fā)成棕色油。將此通過二氧化硅的短柱，用1:4乙酸乙酯:環(huán)己烷洗脫。將級分集中并且蒸發(fā)以產(chǎn)生作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物[D002]。LCMS方法5：RT:4.77min，MI 317[對于硼酸中間體的M+H]

苯磺?；?2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D004]的合成

1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D005]

將4-溴-7-氮雜吲哚(3g,15.22mmol)稱重到圓底燒瓶中并且在氮?dú)庀氯芙庠赥HF(50mL)中。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并且用氫化鈉(60％在礦物油中，0.67g，16.75mmol)分批處理，添加伴隨著冒氣泡。在添加之后，允許反應(yīng)混合物在室溫下攪拌持續(xù)30分鐘并且然后用苯磺酰氯(2.14mL,16.75mmol)處理。允許反應(yīng)混合物加溫至室溫并且攪拌持續(xù)2小時。將反應(yīng)混合物在減壓下蒸發(fā)并且溶解在DCM 30mL中，將有機(jī)物用2x30mL份的2M碳酸鈉洗滌，用MgSO4干燥，過濾并且蒸發(fā)成橙色油。通過快速柱色譜法(用1:9乙酸乙酯:環(huán)己烷洗脫)純化以提供作為灰白色固體的標(biāo)題化合物[D005](92％)。LCMS方法5：RT 5.36min，MI 337[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)8.22(d,1H),8.18(d,2H),7.78(d,1H),7.58(t,1H),7.48(t,2H),7.35(d,1H),6.63(d,1H)。

1-苯磺?；?4-溴-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D006]

向1-苯磺?；?4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D005](2g,5.93mmol)在THF(50mL)中的溶液在-78℃下逐滴地添加LDA(2M,5.9mL,11.86mmol)。將溶液攪拌30min。允許溫度加溫至0℃并且然后逐滴地添加甲基碘(3.67mL,59mmol)并且將溶液在0℃下攪拌3h并且允許攪拌至室溫過夜。將反應(yīng)用氯化銨水溶液猝滅并且用DCM萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)MgSO4干燥并且在真空中濃縮。將粗品通過SP1(洗脫劑，梯度：環(huán)己烷/AcOEt:1/0至8/2)純化。將級分收集并且在減壓下濃縮以產(chǎn)生作為白色固體的標(biāo)題化合物[D006](87％)。LCMS方法5：RT 5.80min，MI 351[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)8.12-8.15(m,3H),7.56(t,1H),7.47(t,2H),7.29(d,1H),6.34(s,1H),2.74(s,3H)。

苯磺?；?2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D004]

遵循在方案D2中描述的程序，用1-苯磺?；?4-溴-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶替代1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶給出作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物[D004](72％)。LCMS方法5：RT 6.19min，MI 399[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)8.34(d,1H),8.07(d,2H),7.50(t,1H),7.46(d,1H),7.41(t,2H),6.70(s,1H),2.73(s,3H),1.33(s,12H)。

根據(jù)方案D2制備以下化合物：

1-苯磺?；?2-芐基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D007]

1-苯磺?；?2-芐基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D008]

遵循在方案D2中描述的程序，使1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶與芐基溴反應(yīng)以給出標(biāo)題化合物[D008]，所述標(biāo)題化合物在下一步中作為粗品使用。LCMS方法5：RT 6.62min,MI 427[M+H]。

1-苯磺?；?2-芐基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D007]

遵循在方案D2中描述的程序，用1-苯磺?；?2-芐基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶替代1-苯磺?；?4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶給出作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物[D007]：LCMS方法5：RT 5.59min,MI 392[M+H，硼酸酯在LCMS條件中水解成對應(yīng)的硼酸]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)8.38(d,1H),7.70(dd,1H),7.49(d,1H),7.42(t,1H),7.23-7.30(m,7H),6.75(s,1H),4.54(d,2H),1.34(s,12H)。

1-苯磺?；?2-(2-氟芐基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D009]的合成

步驟1：1-苯磺酰基-4-溴-2-(2-氟芐基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D010]

遵循在方案D2中描述的程序，使1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶與2-氟芐溴反應(yīng)以給出標(biāo)題化合物[D010](75％)：LCMS方法5：RT6.45min,MI 445[M+H]。

步驟2：1-苯磺?；?2-(2-氟芐基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D009]

遵循在方案D2中描述的程序，用1-苯磺?；?4-溴-2-(2-氟芐基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶替代1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶給出作為白色固體的標(biāo)題化合物[D009]。LCMS方法5：RT 5.50min,MI 411[M+1,硼酸酯水解成其對應(yīng)的硼酸]。

1-苯磺酰基-2-乙基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D011]的合成

1-苯磺?；?4-溴-2-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D012]

遵循在方案D2中描述的程序，使1-苯磺?；?4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶與碘乙烷反應(yīng)以給出作為白色固體的標(biāo)題化合物[D012]：LCMS方法5：RT 6.01min，MI 351[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)8.11-8.15(m,3H),7.56(d,1H),7.45-7.48(m,2H),7.30(d,1H),6.39(s,1H),3.19(q,2H),1.42(t,3H)。

1-苯磺?；?2-乙基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜環(huán)戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D011]

遵循在方案D2中描述的程序，用1-苯磺?；?4-溴-2-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶替代1-苯磺?；?4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶給出作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物[D011]：LCMS方法5：RT 6.42min,MI 413[M+H]；LCMS方法1：LCMS5,6.42min,MI:413[M+1]。

通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮雜喹唑啉衍生物的一般合成 方案D3

通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮雜喹唑啉衍生物通過通式[I-010]的鹵化吡啶衍生物與強(qiáng)堿例如LDA在極性非質(zhì)子溶劑例如THF、對稱的酸酐例如二碳酸二叔丁酯中在低溫下的反應(yīng)來制備，以產(chǎn)生通式[I-011]的鹵素取代的異煙酸叔丁酯衍生物。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將中間體通過柱色譜法純化。然后，使通式[I-011]的鹵素取代的異煙酸叔丁酯衍生物經(jīng)受與通式[I-018]的硼酸或硼酸酯衍生物、鈀催化劑例如Pd(PPh₃)₄、堿例如K₂PO₄在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA或DMF中在升高的溫度下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器的Suzuki型鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)，以產(chǎn)生通式[I-012]的取代的異煙酸叔丁酯衍生物。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將中間體通過柱色譜法純化。然后，使叔丁酯中間體[I-012]在堿例如氫氧化鈉的存在下在極性質(zhì)子溶劑例如乙醇中經(jīng)受脫保護(hù)反應(yīng)，以產(chǎn)生通式[I-013]的被取代的異煙酸衍生物，然后使通式[I-013]的被取代的異煙酸衍生物在合適的偶聯(lián)劑例如O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)下在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA或DMF中經(jīng)受與通式[I-014]的被取代的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒衍生物的偶聯(lián)反應(yīng)。然后，通式[I-015]的異煙?；哐苌锟梢员画h(huán)化以替代有關(guān)的鹵素基團(tuán)以產(chǎn)生期望的通式[I-016]的2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物。通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮雜喹唑啉衍生物通過通式[I-016]的2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與氯化劑例如氧氯化磷的反應(yīng)來制備，以給出通式的化合物并且然后使中間體4-氯代衍生物進(jìn)一步與通式[I-017]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)[方法A]。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相硅膠色譜法或反相制備型HPLC純化。通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮雜喹唑啉衍生物通過通式[I-016]的2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與2,4,6-三異丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中的反應(yīng)來制備[方法B]。然后，將中間體6,7-取代的-(2,4,6-三異丙基苯磺酸)-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯與通式[G-117]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過反相制備型HPLC純化。

方案D3

5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶[1209]的合成

3-溴-5-氟-異煙酸叔丁酯[D013]

向LDA(2M,72mL,144mmol)在THF(100mL)中的溶液在-78℃下經(jīng)由套管逐滴地添加在-78℃下預(yù)冷卻的3-溴-5-氟吡啶(21.12g,120mmol)在THF(50mL)中的溶液。在添加期間，內(nèi)部溫度不升高高于-65℃。將深紅棕色溶液攪拌持續(xù)1小時。將在THF(50mL)中的二碳酸二叔丁酯(52.4g,240mmol)在甲醇/冰浴中冷卻至-10℃，然后經(jīng)由套管逐滴地添加至深紅棕色溶液。將混合物攪拌持續(xù)2小時，然后允許加溫至室溫并且攪拌持續(xù)1小時。緩慢地添加飽和的含水氯化銨(100mL)，并且然后添加水(200mL)和EtOAc(200mL)，并且將混合物劇烈地攪拌持續(xù)45分鐘。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗并且將層分離。將水層用EtOAc(200mL)萃取。將THF層和EtOAc層合并，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且蒸發(fā)。將回收的深紅棕色油通過柱色譜法(環(huán)己烷/AcOEt:1/0至97/3)純化。將包含期望的材料的級分在真空中濃縮(14g,85％)。LCMS方法5：RT 5.44min，MI 277[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl3)8.56(s,1H),8.43(s,1H),1.62(s,9H)。

3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酸叔丁酯[D014]

使在二氧六環(huán)(100mL)中包含3-溴-5-氟-異煙酸叔丁酯[D013](5.52g,20mmol)、磷酸三鉀(12.74g,60mmol)和環(huán)丙基硼酸(2.58g,30mmol)的溶液經(jīng)受真空/氬氣球(三次)。添加[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷加合物(0.408g,0.5mmol)并且反應(yīng)在96℃下在氮?dú)獾恼龎合录訜徇^夜。將混合物冷卻至室溫并且通過200g二氧化硅的墊過濾并且用EtOAc(1L)洗滌。將濾液在真空中濃縮并且將粗品通過柱色譜法(環(huán)己烷/AcOEt：98:2至96:4)純化。將合并的級分在減壓下濃縮以給出作為無色油的標(biāo)題化合物[D014](3.42g,72％)。LCMS方法5：RT 5.36min，MI 238[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl3)8.33(s,1H),8.15(s,1H),2.05-2.00(m,1H),1.62(s,9H),1.04-1.00 9m,2H),0.82-0.78(m,2H)。

3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酸[D015]

在微波小瓶中，將3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酸叔丁酯[D014](1.186g,5mmol)溶解在甲醇中并且然后在微波中在140℃下加熱持續(xù)1小時。將反應(yīng)在真空中濃縮以產(chǎn)生白色結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物[D015]0.84g(92％)。LC-MS:1NJM406_1_28Jul2011；1.51min,87％；182+；1LCMS5。

3-環(huán)丙基-5-氟-N-[亞氨基-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-甲基]-異煙酰胺[D016]

將3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酸[D015](0.681g,3.76mmol)、HATU(1.43g,3.76mmol)和二異丙基乙胺(2.29mL,13.16mmol)在DMF(5mL)中攪拌。在1小時之后，添加1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸鹽(0.92g,3.76mmol)。已經(jīng)攪拌持續(xù)18小時，將混合物傾倒到水(180ml)中，攪拌持續(xù)2小時并且然后白色固體通過過濾收集并且用H2O洗滌以產(chǎn)生作為白色固體的標(biāo)題化合物[D016](1.17g)，所述標(biāo)題化合物在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。LCMS方法5：RT 3.22min,MI 324[M+H]。

5-環(huán)丙基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[D017]

將N-[(2-氯-吡啶-4-基)-亞氨基-甲基]-3-環(huán)丙基-5-氟-異煙酰胺[D016](1.164g,3.6mmol)和Cs2CO3(1.18g,3.60mmol)在DMA(12mL)中的混合物在90℃下熱地加熱過夜。將反應(yīng)混合物傾倒到H2O(20ml)中并且在于0℃下逐滴地添加乙酸下酸化。將米黃色沉淀(0.474,43％)通過過濾收集并且用H2O洗滌以產(chǎn)生標(biāo)題化合物[D017]，所述標(biāo)題化合物在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。LCMS方法5：RT 4.58min，MI 304[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)12.12(brs,1H),9.09(s,1H),8.54(d,1H),8.37(s,1H),7.90(d,1H),7.83(s,1H),7.36(s,1H),3.56-3.64(m,1H),1.24-1.30(m,2H),1.08-1.14(m,2H)。

4-[5-環(huán)丙基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D018]

向5-環(huán)丙基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[D017](0.47g,1.55mmol)在DMF(25mL)中的溶液添加DIPEA(0.809mL,4.65mmol)和DMAP(5mg)。然后，添加2,4,6-三異丙基苯磺酰氯(0.563g,1.86mmol)并且將混合物攪拌2小時。然后，添加N-Boc-哌嗪(0.318g,1.705mmol)并且將混合物攪拌過夜。添加水(60-70mL)并且將溶液在室溫下攪拌持續(xù)15min。將產(chǎn)生的固體收集并且用水洗滌兩次。將固體溶解在DCM中并且通過柱色譜法(洗脫劑：DCM/MeOH，梯度0％至10％MeOH)純化，以產(chǎn)生作為深棕色膠狀物的標(biāo)題化合物[D018](0.6g,82％)，所述標(biāo)題化合物在下一步中在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。LCMS方法5：RT 5.85min,MI 472[M+H]。

5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶[1209]

向4-[5-環(huán)丙基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D018](0.6g,1.27mmol)在DCM(15mL)中的溶液添加HCl(4N，二氧六環(huán)，2mL)并且將產(chǎn)生的亮黃色懸浮液在室溫下攪拌持續(xù)90min。將溶液在減壓下濃縮并且溶解在MeOH中并且添加至SCX-2筒(10g)，用MeOH/DCM(1:1,40mL)和MeOH(20mL)洗滌。然后，將SCX-2筒用氨(7N在MeOH中,30mL)洗滌。將氨洗滌物在真空中濃縮并且將材料以柱色譜法(洗脫劑DCM/MeOH，梯度0-20％MeOH/DCM)純化。將級分合并并且在減壓下濃縮以產(chǎn)生標(biāo)題化合物[1009]：LCMS方法5：RT 2.65min，MI 372[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)11.82(brs,1H),9.13(s,1H),8.36(d,1H),8.10(d,1H),7.62(t,1H),7.45(dd,1H),3.50-3.90(m,4H),2.88-2.91(m,4H),2.66-2.69(m,1H),1.22-1.27(m,2H),1.02-1.06

通式[I-012]的被取代的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒衍生物的一般合成 方案D4

通式[I-012]的被取代的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒衍生物通過使通式[I-019]的2-甲基吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯衍生物在強(qiáng)堿例如nBuLi下在極性非質(zhì)子溶劑例如THF中與通式[I-025]的被取代的Weinreb酰胺衍生物在低溫下反應(yīng)、隨后與礦物酸例如鹽酸在升高的溫度下反應(yīng)以產(chǎn)生通式[I-020]的1-H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物來制備，在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將中間體通過柱色譜法純化。然后，使通式[I-020]的1-H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物經(jīng)受與氧化劑例如mCPBA在溶劑例如DCM中的吡啶N-氧化反應(yīng)。然后，使中間體通式[I-021]的1-H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-氧化物衍生物與氯化劑例如甲磺酰氯在極性非質(zhì)子溶劑例如DMF中在升高的溫度下反應(yīng)，在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將中間體通過柱色譜法純化。然后，將中間體通式[I-022]的4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物經(jīng)受與氰化物物質(zhì)例如氰化鋅、鈀催化劑例如[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷加合物、鋅粉在極性非質(zhì)子溶劑例如DMF中在升高的溫度下的鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)，在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將中間體通過柱色譜法純化。然后，使中間體通式[I-023]的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物與羥胺(50％wt/wt在水中)和極性質(zhì)子溶劑例如EtOH在升高的溫度下反應(yīng)。然后，使中間體通式[I-024]的N-羥基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲酰胺經(jīng)受與乙酸酐在極性質(zhì)子溶劑例如甲醇中、在鈀催化劑例如活性炭載鈀(palladium on activated charcoal)下在氫氣的氣氛下的氫解反應(yīng)，以產(chǎn)生通式[I-012]的被取代的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒衍生物，方案D4。

方案D4

2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸鹽[D036]的合成

步驟1：2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D031]

向(3-甲基-吡啶-2-基)-氨基甲酸叔丁酯(5g,24mmol)在THF(50mL)中的溶液在-30℃下添加BuLi(2.5M,28.5mL,72mmol)，并且將反應(yīng)混合物加溫至0℃并且攪拌持續(xù)90min。緩慢地添加2,2,2-三氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(2.9mL,24mmol)在THF(10mL)中的溶液，并且將反應(yīng)在0℃下攪拌持續(xù)3h。將反應(yīng)混合物用HCl(30mL,6M)緩慢地處理，隨后在60℃下加熱持續(xù)18h。將反應(yīng)混合物冷卻，將層分離并且水層用NaOH(5M)制成堿性并且用AcOEt萃取兩次。使合并的有機(jī)層(加上來自第一次萃取的有機(jī)層)經(jīng)MgSO4干燥，濃縮并且將殘余物通過柱色譜法(洗脫劑環(huán)己烷/AcOEt 1/0至8/2)純化，以提供作為黃色固體的標(biāo)題化合物[D031](1.2g,27％)：LCMS方法5：RT 4.44min，MI 187[M+H]，NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)14.33(brs,1H),8.49(d,1H),8.09(d,1H),7.27(dd,1H),6.90(s,1H)。

2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-氧化物[D032]

向2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D031](1.2g,6.45mmol)在DCM(10mL)中的溶液添加3-氯過氧苯甲酸(1.22g,7.09mmol)并且將混合物攪拌過夜。添加NaHCO3的飽和溶液并且將層分離。使有機(jī)物經(jīng)MgSO4干燥并且在減壓下濃縮，以產(chǎn)生作為黃色固體的標(biāo)題化合物[D032](0.82g,63％)，所述標(biāo)題化合物在不進(jìn)一步純化的情況下被使用：LCMS方法5：RT 3.43min，MI 203[M+H]，NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)8.34(d,1H),7.76(d,1H),7.19(d,1H),7.18(s,1H)。

4-氯-2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D033]

向2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-氧化物[D032](0.82g,4.05mmol)在DMF(10mL)中的溶液在50℃下逐滴地添加甲磺酰氯(1.57mL,20.28mmol)。將溶液在50℃下攪拌3h。然后將反應(yīng)冷卻至室溫并且添加水(5mL)。添加5M NaOH的溶液并且將固體收集，使用具有甲苯的共沸物干燥以產(chǎn)生標(biāo)題化合物[D032]，所述標(biāo)題化合物在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。LCMS：1LCMS5 5.77min,221-223[M+1,Cl模式]。

2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D034]

可密封的小瓶裝載有4-氯-2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D033](0.6g,2.72mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷加合物(0.222g,0.27mmol)、氰化鋅(0.958g,8.16mmol)、鋅(粉，0.036g,0.54mmol)以及DMF(15mL)。將小瓶加蓋并且在90℃下加熱過夜。將反應(yīng)傾入水中并且用AcOEt萃取。將水層再次用AcOEt萃取并且將有機(jī)物合并，用水和鹽水洗滌并且經(jīng)MgSO4干燥以產(chǎn)生標(biāo)題化合物[D043]，所述標(biāo)題化合物在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。LCMS方法5：RT 4.98min,MI 212[M+H]。

N-羥基-2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D035]

將2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D034](0.68g,3.22mmol)和羥胺(50％wt/wt在水中,0.205mL,6.44mmol)和EtOH(5mL)的混合物在80℃下加熱過夜。然后，將溶劑蒸發(fā)并且將混合物用甲苯在真空下共沸兩次。以產(chǎn)生作為黃色固體的標(biāo)題化合物[D035](0.78g,99％)，所述標(biāo)題化合物在下一步中在不進(jìn)一步純化的情況下被使用：LCMS方法5：RT 2.22min，MI 245[M+H]，NMR：(1H,500MHz,d6-dmso):13.14(brs,1H),10.40(s,1H),8.70(s,1H),7.70(s,1H),7.56(d,1H),6.27(s,2H)。

2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒；與乙酸的化合物[D036]

向N-羥基-2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D035](0.43g,1.76mmol)在MeOH(10mL)中的懸浮液在室溫下逐滴地添加乙酸酐(0.175mL,1.85mmol)。將懸浮液攪拌15min并且添加炭載鈀(5％wt/wt,0.1g)。將容器密封并且氫氣(氣球)在混合物中鼓泡持續(xù)10min并且留在氫氣氣氛下在室溫下攪拌過夜。將混合物通過硅藻土過濾并且在真空中濃縮以產(chǎn)生作為黃色固體的標(biāo)題化合物[D036](0.51g,100％)，所述標(biāo)題化合物在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。LCMS方法5：RT 4.45min，MI 229[M+H]，NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)1.79(s,3H,CH₃CO₂H),8.50(s,1H),7.35(s,1H),7.03(s,1H)。

2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸鹽[D042]的合成

2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D037]

遵循在方案D4，步驟1中描述的程序，通過(3-甲基-吡啶-2-基)-氨基甲酸叔丁酯、噻吩-2-羧酸甲氧基-甲基-酰胺、BuLi和THF的反應(yīng)來制備，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 4.79min,MI 201[M+H]。

2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-氧化物[D038]

遵循在方案D4、步驟2中描述的程序，通過2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D037]、m-CPBA和DCM的反應(yīng)來制備，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 3.38min,MI 217[M+H]。

4-氯-2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D039]

遵循在方案D4、步驟3中描述的程序，通過2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-氧化物[D038]、甲磺酰氯和DMF的反應(yīng)來制備，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 6.05min,MI 235[M+H]。

2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D040]

遵循在方案D4、步驟4中描述的程序，通過4-氯-2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D039]、PdCl2dppf：CH2Cl2、氰化鋅、鋅粉和DMA的反應(yīng)來制備，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 5.28min,MI 226[M+H]。

N-羥基-2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D041]

遵循在方案D4、步驟5中描述的程序，通過2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D040]、羥胺和EtOH的反應(yīng)來制備，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 2.38min,MI 259[M+H]。

2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸鹽[D042]

遵循在方案D4、步驟6中描述的程序，通過N-羥基-2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D041]、乙酸酐、Pd/C、氫氣和MeOH的反應(yīng)來制備，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 4.45min,MI243[M+H]。

2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸鹽[D045]的合成

2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D043]

遵循在方案D4、步驟4中描述的程序，通過4-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶、PdCl2dppf：CH2Cl2、氰化鋅、鋅粉和DMA的反應(yīng)來制備，以給出作為白色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 4.17min,MI 158[M+H]。

N-羥基-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D044]

遵循在方案D4、步驟5中描述的程序，通過2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D043]、羥胺和EtOH的反應(yīng)來制備，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 1.92min,MI 191[M+H]。

2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸鹽[D045]

遵循在方案D4、步驟6中描述的程序，通過N-羥基-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D044]、乙酸酐、Pd/C、氫氣和MeOH的反應(yīng)來制備，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 2.44min,MI 175[M+H]。

例如1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸鹽[D047]的合成

N-羥基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D047]

遵循在方案D4、步驟5中描述的程序，通過1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈、羥胺和EtOH的反應(yīng)來制備，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 1.24min,MI 162[M+H]。

2-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸鹽[D047]

遵循在方案D4、步驟6中描述的程序，通過N-羥基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D047]、乙酸酐、Pd/C、氫氣和MeOH的反應(yīng)來制備，以給出作為黃色固體的標(biāo)題化合物。LCMS方法5：RT 1.23min，MI 161[M+H]，NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)8.38(1H,d),7.71(1H,d),7.30(1H,d),6.58(1H,d),1.80(8H,s)。

通式[I-034]的2-取代的-氮雜吲哚衍生物的一般合成 方案D5

通式[I-034]的2-取代的氮雜吲哚衍生物通過通式[I-030]的1-苯磺?；?4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物在鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)中與鈀催化劑例如PdCl₂dppf：CH₂Cl₂、氰化物試劑例如Zn(CN)₂、鋅粉在極性非質(zhì)子溶劑例如DMF中在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器的反應(yīng)來制備。將粗產(chǎn)物通過柱色譜法純化。然后，使通式[I-031]的1-苯磺?；?1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物在強(qiáng)堿例如LDA下在極性非質(zhì)子溶劑例如THF中在低反應(yīng)溫度例如-78℃下與通式[I-035]的親電體例如酮、二硫化物或鹵化劑例如NIS或NCS反應(yīng)，以產(chǎn)生通式[I-032]的2-取代的1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物，之后是典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理和通過柱色譜法的純化。將通式[I-032]的中間體通過與氟化物試劑例如TBAF在極性非質(zhì)子溶劑例如THF中反應(yīng)來脫保護(hù)，以產(chǎn)生通式[I-033]的反應(yīng)中間體。然后，使通式[I-033]的反應(yīng)中間體與羥胺(50％wt/wt在水中)和極性質(zhì)子溶劑例如EtOH在升高的溫度下反應(yīng)。然后，使中間體N-羥基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒經(jīng)受與乙酸酐在極性質(zhì)子溶劑例如甲醇中、在鈀催化劑例如活性炭載鈀下在氫氣的氣氛下的氫解反應(yīng)，以產(chǎn)生通式[I-034]的2-取代的-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒衍生物。

方案D5

2-(1-羥基-環(huán)丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D054]的合成

1-(苯磺?；?吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D051]

制備1-(苯磺酰基)-4-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶[D050](15.24g,45.2mmol)、氰化鋅(7.96g,67.8mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷加合物(1.85g,2.26mmol)以及活化的鋅粉(0.59g,9.04mmol)在DMF(90mL)中的懸浮液，其被均分在6個微波小瓶之間，被密封并且加熱(熱地)至85℃過夜。將反應(yīng)混合物用水稀釋并且將產(chǎn)生的沉淀過濾，用水洗滌并且在燒結(jié)物中干燥。然后，將沉淀用CH₂Cl₂洗滌并且使濾液經(jīng)MgSO₄干燥，過濾并且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將產(chǎn)生的橙色殘余物通過硅膠柱色譜法(用包含5-50％EtOAc的環(huán)己烷洗脫)純化。將合適的級分合并并且濃縮以給出作為灰白色固體的1-(苯磺酰基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D051](9.159g,72％)。LCMS方法6：RT＝3.62min,MI+1＝284。

1-(苯磺?；?-2-(1-羥基環(huán)丁基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D052]

在氮?dú)庀轮苽涠惐?0.62mL,4.41mmol)在THF(20mL)中的攪拌的溶液并且冷卻至-78℃。添加nBuLi(1.6M)(2.65mL,4.24mmol)并且將反應(yīng)混合物加溫至0℃并且在此溫度下攪拌持續(xù)10min，然后冷卻回至-78℃。將該溶液逐滴地添加至1-(苯磺?；?吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D051](1.0g,3.53mmol)在THF(20mL)中的-78℃溶液并且將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌持續(xù)45min。將環(huán)丁酮(0.4mL,5.29mmol)作為在THF(5mL)中的溶液逐滴地添加。允許反應(yīng)混合物在2h內(nèi)緩慢地加溫(不除去干冰/丙酮浴)。將反應(yīng)混合物用NH₄Cl(含水的)(20mL)猝滅，允許加溫至室溫并且用EtOAc(3x 10mL)萃取。將合并的有機(jī)萃取物合并，經(jīng)MgSO₄干燥，過濾并且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將粗制殘余物通過硅膠柱色譜法(用包含5-40％EtOAc的環(huán)己烷洗脫)純化。將合適的級分合并并且濃縮以給出作為米黃色固體的1-(苯磺酰基)-2-(1-羥基環(huán)丁基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D052](0.835g,67％)。LCMS方法6：RT＝3.81min,MI+1＝354。

2-(1-羥基環(huán)丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D053]

制備1-(苯磺?；?-2-(1-羥基環(huán)丁基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D052](1.92g,5.44mmol)在THF(30mL)中的溶液并且逐滴地添加TBAF(8.15mL的在THF中的1M溶液,8.15mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物傾倒到飽和的NH₄Cl(含水的)(50mL)中并且用EtOAc(3×20mL)萃取。使有機(jī)相經(jīng)MgSO₄干燥、過濾并且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將殘余物通過硅膠柱色譜法(用包含10-100％EtOAc的環(huán)己烷洗脫)純化。將合適的級分合并并且濃縮以給出作為米黃色固體的2-(1-羥基環(huán)丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D052](0.799g,69％)。LCMS方法6：RT3.32min,MI+1＝214。

2-(1-羥基-環(huán)丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D054]

經(jīng)由羥胺/氫化路線制備脒(方案D4)：LCMS方法5：RT＝0.67,MI+1＝231。

通式[I-041]的3-取代的-氮雜吲哚衍生物的一般合成 方案D6

通式[I-041]的3-取代的氮雜吲哚衍生物通過使通式[I-036]的2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與鹵化劑例如NCS或NBS在極性非質(zhì)子溶劑例如DMF中反應(yīng)以產(chǎn)生通式[I-037]的2-(3-鹵代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物來制備，在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將中間體通過柱色譜法純化。通式[I-038]的2-(3-鹵代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通過通式[I-037]的2-(3-鹵代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物與2,4,6-三異丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中的反應(yīng)來制備。然后，使中間體與通式[I-017]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在極性非質(zhì)子溶劑例如DMA、DMF、NMP中在叔胺堿例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在環(huán)境溫度下反應(yīng)。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將通式[I-038]的2-(3-鹵代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通過柱色譜法純化。通式[I-039]的2-(1-苯磺?；?3-鹵代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通過使通式[I-038]的2-(3-鹵代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物在強(qiáng)堿例如NaH下在極性非質(zhì)子溶劑例如THF中與苯磺酰氯在低反應(yīng)溫度例如0℃下反應(yīng)來制備，隨后是典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理和通過柱色譜法的純化。使通式[I-039]的2-(1-苯磺酰基-3-鹵代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物在Suzuki型反應(yīng)中反應(yīng)，這利用通式[I-042]的合適的硼酸或硼酸酯、鈀催化劑例如Pd(PPh₃)₄或PdCl₂dppf:CH₂Cl₂、堿例如Et₃N、KOH、Na₂CO₃或NaOH，在極性溶劑例如EtOH、THF、DMA或二氧六環(huán)中在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，將通式[I-040]的中間體衍生物在兩步程序中脫保護(hù)，首先通過與氟化物試劑例如TBAF在極性非質(zhì)子溶劑例如THF中反應(yīng)，然后將N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相色譜法或反相制備型HPLC純化。

方案D6

5-環(huán)丙基-2-(3-苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶的合成

步驟1：2-(3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[D055]的合成

將5-環(huán)丙基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[D017](50mg,0.160mmol)和1-溴吡咯烷-2,5-二酮(44.01mg,0.250mmol)在DMF(11mL)中合并并且允許混合物在室溫下在氮?dú)庀聰嚢璩掷m(xù)5h。將水(15mL)添加至混合物并且將產(chǎn)生的亮棕色沉淀通過過濾收集。將固體用水洗滌并且在真空下在40℃下干燥以提供標(biāo)題化合物(30mg，48％)。LCMS方法5：RT:4.55min,MI：384(MH)⁺。

步驟2：4-[2-(3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D056]的合成

向2-(3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[D055](0.9g,2.35mmol)在DMA(20mL)中的懸浮液添加DIPEA(1.23mL,7.06mmol)，隨后是2,4,6-三異丙基苯磺酰氯(0.73g,2.4mmol)和DMAP(14.38mg,0.120mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌持續(xù)2h，然后添加哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.53g,2.83mmol)并且繼續(xù)攪拌過夜。將混合物用水稀釋并且將產(chǎn)生的固體通過過濾收集并且用水然后二乙醚洗滌。將固體通過用在環(huán)己烷中的10-100％EtOAc洗脫的硅膠柱色譜法純化，以提供作為深棕色固體的標(biāo)題化合物(200mg，15％)。LCMS方法5：RT:5.53min,MI：552.35(MH)⁺。¹H NMR(500MHz,d6-DMSO)12.29(1H,s),8.99(1H,s),8.39(1H,d),8.16(1H,s),7.75(1H,d),7.46(1H,d),3.93-3.64(4H,br m),3.49(4H,br s),2.73-2.66(1H,m),1.39(9H,s),1.31-1.24(2H,m),1.07-1.01(2H,m)。

步驟3：4-[2-[1-(苯磺?；?-3-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D057]的合成

將4-[2-(3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D056](200mg,0.360mmol)在無水THF(5mL)中的溶液冷卻至0℃并且添加NaH(在礦物油中的60％分散體,0.02mL,0.400mmol)。允許混合物在0℃下攪拌持續(xù)30min，之后添加苯磺酰氯(0.05mL,0.400mmol)。允許混合物加溫至室溫并且攪拌持續(xù)5h。將反應(yīng)用水猝滅并且用乙酸乙酯(x3)萃取。將有機(jī)物用鹽水洗滌、經(jīng)硫酸鎂干燥并且在真空中濃縮。將殘余物通過硅膠快速色譜法(用5％-90％乙酸乙酯/環(huán)己烷洗脫)純化以提供作為深橙色固體的標(biāo)題化合物(128mg，51％)。LCMS方法5：RT:6.26min,MI：692.53(MH)⁺。

步驟4：4-[2-[1-(苯磺?；?-3-苯基-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D058]的合成

將4-[2-[1-(苯磺酰基)-3-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D057](120mg,0.170mmol)、苯硼酸(31.59mg,0.260mmol)、新鮮研磨的磷酸三鉀(73.8mg,0.350mmol)以及[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷加合物(7.09mg,0.010mmol)在小瓶中合并并且用氮?dú)?x3)吹掃。添加無水1,4-二氧六環(huán)(0.55mL)并且將混合物加熱至90℃過夜。將混合物用乙酸乙酯稀釋并且用水隨后是鹽水洗滌。使有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥并且在真空中濃縮。將殘余物通過硅膠快速色譜法(用0-50％EtOAc/環(huán)己烷洗脫)純化以提供作為黃色固體的標(biāo)題化合物(48mg，40％)。LCMS方法5：RT:6.32min,MI：688.58(MH)⁺。

步驟5：5-環(huán)丙基-2-(3-苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[2483]的合成

向4-[2-[1-(苯磺?；?-3-苯基-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D058](45mg,0.070mmol)在THF(1mL)中的溶液逐滴地添加TBAF(在THF中的1M溶液,0.1mL,0.100mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌持續(xù)6h。將反應(yīng)混合物用NH₄Cl的飽和的水溶液猝滅，用EtOAc稀釋并且分離有機(jī)相。將水相用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且在真空中濃縮。將殘余物通過硅膠快速色譜法(用20％EtOAc/DCM-100％EtOAc洗脫)純化以提供4-[5-環(huán)丙基-2-(3-苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(23mg,64％)。LCMS方法5：RT:5.64min,MI：548.52(MH)⁺。

向4-[5-環(huán)丙基-2-(3-苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(15mg,0.030mmol)在二乙醚(2mL)中的溶液添加在二氧六環(huán)中的4M HCl(0.14mL,0.550mmol)，并且允許混合物在室溫下攪拌持續(xù)4h，之后在真空中濃縮。將殘余物溶解在水中并且用乙酸乙酯、隨后的環(huán)己烷洗滌。然后，將碳酸鈉的飽和的溶液添加至水層直到堿性并且產(chǎn)物用乙酸乙酯(x3)萃取。使有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且濃縮以提供作為淺黃色固體的標(biāo)題化合物(11mg,91％)。LCMS方法5：RT:2.97min,MI：448.4(MH)⁺。¹H NMR(500MHz,d6-DMSO)12.04(1H,s),8.69(1H,s),8.39(1H,d),8.01(1H,s),7.61(1H,d),7.52(1H,d),7.00-6.92(1H,m),6.84-6.77(4H,m),3.19-2.89(4H,m),2.71-2.59(4H,m),2.45-2.38(1H,m),1.32-1.23(2H,m),1.05-1.00(2H,m)。

通式[I-045]的3-取代的-氮雜吲哚衍生物的一般合成 方案D7

通式[I-045]的3-取代的氮雜吲哚衍生物通過使通式[I-043]的2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物與鹵化試劑例如NCS或NBS在極性非質(zhì)子溶劑例如DMF中反應(yīng)以產(chǎn)生通式[I-044]的2-(3-鹵代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物來制備，在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將中間體通過柱色譜法純化。將通式[I-044]的中間體衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且將粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相色譜法或反相制備型HPLC純化。

方案D7

2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[2209]的合成

步驟1：4-[2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D060]的合成

向4-[5-環(huán)丙基-2-(2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D059，根據(jù)方案D4制備的](317mg,0.650mmol)在DMF(4.53mL)中的溶液添加1-氯吡咯烷-2,5-二酮(87.17mg,0.650mmol)并且允許混合物在室溫下在氮?dú)庀聰嚢柽^夜。將混合物用乙酸乙酯稀釋并且用水(x4)洗滌。將有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且濾液在真空中濃縮。將殘余物通過硅膠色譜法(用10％-100％EtOAc/環(huán)己烷洗脫)純化以提供作為橙色固體的4-[2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(201mg,59％)。LCMS方法5：RT:5.75min,MI：520.25(MH)⁺。

步驟2：2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[2209]的合成

將4-[2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D060](188mg,0.360mmol)和在二氧六環(huán)溶液中的4M HCl(1.81mL,7.23mmol)在氮?dú)庀潞喜⒉⑶以试S混合物在室溫下攪拌持續(xù)2h。將混合物在真空中濃縮以產(chǎn)生橙色固體。將固體溶解在甲醇中并且通過SCX柱，用甲醇并且然后在甲醇溶液中的7N氨洗脫。將溶液在真空中濃縮并且殘余物通過硅膠色譜法(用0-10％MeOH/DCM洗脫)純化，以產(chǎn)生黃色固體。將固體用醚研磨，過濾并且在真空下干燥以提供2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶(67mg,44％)。LCMS方法5：RT:3.00min,MI：420.14(MH)⁺。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)12.12(1H,s),8.96(1H,s),8.29(1H,d),8.11(1H,s),7.45(1H,d),3.88-3.41(4h,m),2.90(4H,s),2.71-2.64(1H,m),2.38(3H,s),1.31-1.23(2H,m),1.07-1.01(2H,m)。

2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒二鹽酸鹽[D067]的合成 方案D8

方案D8

步驟1：1-(苯磺?；?-4-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛[D062]的合成

N,N-二異丙胺(0.36g,3.56mmol)在無水THF(10mL)中的攪拌的溶液在氮?dú)庀卤恢苽洳⑶冶焕鋮s至-78℃。添加n-BuLi(1.6M在己烷中)(2.22mL,3.56mmol)并且將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌持續(xù)2-3min，然后0℃持續(xù)10min，然后重新冷卻至-78℃。1-(苯磺?；?-4-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶[D061](1.0g,2.97mmol)作為在無水THF(3mL)中的溶液被逐滴地添加并且將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌持續(xù)2h。逐滴地添加N,N-二甲基甲酰胺(0.92mL,11.86mmol)并且將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌持續(xù)另外2小時，然后用飽和的NH₄Cl(含水的)(20mL)猝滅。將混合物用EtOAc(10mL)稀釋并且分離有機(jī)相。將水相用EtOAc(2x 10mL)萃取并且合并的有機(jī)部分經(jīng)MgSO₄干燥，過濾并且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將殘余物通過硅膠柱色譜法(用包含50-100％二氯甲烷的環(huán)己烷洗脫)純化。將合適的級分合并并且濃縮以給出作為無色固體的1-(苯磺?；?-4-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(798mg,74％)。LCMS方法5：RT＝3.77min,MI+1＝365/367；1H NMR(500MHz,d6-DMSO)10.45(1H,s),8.45(1H,d,J＝5.2Hz),8.24-8.22(2H,m),7.79-7.76(1H,m),7.75(1H,d,J＝5.2Hz),7.68-7.64(2H,m),7.45(1H,s)。

步驟2：1-(苯磺?；?-4-溴-2-(二氟甲基)-吡咯并[2,3-b]吡啶[D063]的合成

制備1-(苯磺?；?-4-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛[D062](3.82g,10.47mmol)在CH₂Cl₂(50mL)中的溶液并且逐滴地添加脫氧氟(deoxyfluor)(R)(13.62mL,31.41mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物小心地傾倒到飽和的NaHCO₃(含水的)中并且將有機(jī)相分離并且用1M HCl洗滌。使有機(jī)相通過相分離器干燥并且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將粗制的殘余物與第二批次的粗制殘余物(遵循相同的程序以0.5g規(guī)模制備的)合并并且通過二氧化硅色譜法(用包含10-50％EtOAc的環(huán)己烷洗脫)純化。將合適的級分合并并且濃縮以給出作為灰白色固體的1-(苯磺?；?-4-溴-2-(二氟甲基)吡咯并[2,3-b]吡啶(2.625g,65％)。LCMS方法5：RT＝4.63min,MI+1＝387/389。

步驟3：4-溴-2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D064]的合成

制備1-(苯磺?；?-4-溴-2-(二氟甲基)吡咯并[2,3-b]吡啶[D063](2.59g,6.7mmol)在THF(50mL)中的溶液并且逐滴地添加TBAF(10.05mL的在THF中的1M溶液,10.05mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮并且殘余物通過二氧化硅色譜法(用包含10-70％EtOAc的環(huán)己烷洗脫)純化。將合適的級分合并并且濃縮以給出作為灰白色固體的4-溴-2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.466g,89％)。LCMS方法5(RT＝5.14min,MI+1＝247/249)。¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)12.82(1H,s),8.21(1H,d,J＝5.0Hz),7.44(1H,d,J＝5.0Hz),7.24(1H,t,J＝54.0Hz),6.77(1H,s)。

步驟4：2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D065]的合成

制備4-溴-2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D064](1.46g,5.91mmol)、氰化鋅(1.04g,8.87mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷加合物(0.24g,0.300mmol)在DMF(20mL)中的溶液。添加活化的鋅粉(0.08g,1.18mmol)并且將微波小瓶密封并且加熱至85℃過夜。LCMS示出完全轉(zhuǎn)化成期望的產(chǎn)物。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并且傾倒到水中。將產(chǎn)生的沉淀過濾并且用CH₂Cl₂和MeOH洗滌。使濾液通過相分離器干燥并且通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。粗質(zhì)量回收是低的(約60％)，因此，將沉淀在EtOAc、CH₂Cl₂和MeOH的混合物中攪拌持續(xù)1小時然后過濾。將合并的濾液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮以給出1.04g(91％)的粗質(zhì)量返回。將粗制殘余物通過二氧化硅色譜法純化，用在環(huán)己烷中的10-100％EtOAc洗脫。將合適的級分合并并且上柱以給出作為米黃色固體的2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈(0.774g,68％)。LCMS方法5(RT＝3.21min,MI+1＝194)。

步驟5：2-(二氟甲基)-N-羥基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D066]的合成

在微波小瓶中制備2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D065](0.77g,4.01mmol)在乙醇(20mL)中的懸浮液。添加在水中的羥胺50％w/w(0.49mL,8.01mmol)并且將小瓶密封并且加熱(熱地)至85℃持續(xù)3h。將反應(yīng)混合物通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮以給出假定包含2-(二氟甲基)-N-羥基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒的粗制固體殘余物(0.906g,99.96％)，所述粗制固體殘余物在下一步中在不純化的情況下被使用。

步驟6：2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒二鹽酸鹽[D067]的合成

制備2-(二氟甲基)-N-羥基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D066](0.91g,4.01mmol)在甲醇(20mL)中的懸浮液。添加乙酸酐(0.45mL,4.81mmol)并且將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌持續(xù)1.5h。添加10％Pd/C(50mg)并且將反應(yīng)混合物在氫氣的氣氛(氣球)下攪拌持續(xù)3h。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，用MeOH洗滌并且濾液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。將殘余物在二氧六環(huán)中的4M HCl中攪拌并且將產(chǎn)生的固體過濾并且在真空下干燥以給出2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒二鹽酸鹽(1.022g,90％)。LCMS方法5(RT＝0.55min,MI+1＝211)。

通式[I-053]的[4-(4-氨基-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]脲衍生物的一般合成 方案D11

通式[I-053]的[4-(4-氨基-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]脲衍生物通過使在方案B4中制備的通式[I-052]的2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物在Buchwald型反應(yīng)中在異氰酸鈉、鈀催化劑例如Pd₂(dba)₃、配體例如t-BuBrettPhos、堿例如Et₃N下在極性溶劑例如EtOH、THF、DMA或二氧六環(huán)中在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器與通式[I-054]的合適的胺反應(yīng)來制備。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理或通過酸性離子交換捕放的純化之后，N-Boc衍生物在酸性條件下用強(qiáng)酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶劑例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脫保護(hù)，并且粗制反應(yīng)產(chǎn)物通過正相色譜法或反相制備型HPLC純化。

方案D11

1-[4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-吡啶基]-3-苯基脲[2420]的合成

步驟1：1-[4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-吡啶基]-3-苯基-脲[2420]的合成

將裝配有磁力攪拌棒并且裝有螺旋蓋隔膜的烘箱干燥的微波小瓶裝載有三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(24.5mg,0.030mmol)和t-BuBrettPhos(25.93mg,0.050mmol)。將小瓶排空并且用氮?dú)饣靥畈⑶译S后經(jīng)由注射器添加1,4-二氧六環(huán)(2.5mL)。將產(chǎn)生的紫色漿料在120℃下加熱持續(xù)3min，此時產(chǎn)生的混合物的顏色變成深橙棕色。將裝配有磁力攪拌棒并且裝有螺旋蓋隔膜的第二烘箱干燥的微波小瓶裝載有異氰酸鈉(69.56mg,1.07mmol)、苯酚(0.09mL,1.07mmol)和4-[2-(2-氯-4-吡啶基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B016，根據(jù)方案B4制備的](0.25g,0.540mmol)并且用氮?dú)饣靥畈⑶医?jīng)由注射器添加三乙胺(0.02mL,0.130mmol)。然后，將預(yù)混合的催化劑溶液經(jīng)由套管在氮?dú)庀罗D(zhuǎn)移至小瓶。將螺旋蓋隔膜在連續(xù)的氮?dú)饬飨掠梦创檀┑母裟ぬ娲⑶覍⑷芤杭訜嶂?20℃持續(xù)16h。然后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，在此之后，將苯胺(0.06mL,0.640mmol)和1,4-二氧六環(huán)在連續(xù)的氮?dú)饬飨绿砑拥叫∑恐校⑶覍a(chǎn)生的混合物在80℃下攪拌持續(xù)15h。然后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并且通過硅藻土的墊過濾。將溶劑在減壓下除去并且將粗產(chǎn)物通過用5-10％二氯甲烷/甲醇洗脫的快速色譜法純化以提供N-boc保護(hù)的期望的產(chǎn)物，將該產(chǎn)物在50％TFA/DCM中在室溫下攪拌持續(xù)1小時以裂解掉Boc基團(tuán)。將化合物通過SCX-2筒洗滌并且通過制備型HPLC純化以提供1-[4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-吡啶基]-3-苯基-脲(15mg,6％)。LCMS方法6：RT:2.95min,MI：467(MH)⁺。¹H NMR(500MHz,d6-DMSO)9.65(1H,s),9.00(1H,s),8.56(1H,s),8.46(1H,dd),8.12(1H,s),7.95(1H,dd),7.56(2H,d),7.33(2H,t),7.04(1H,t),3.78(4H,m),2.92(4H,s),2.63(1H,m),1.23(2H,m),1.03(2H,m)。

通式[I-059]的2-芳基磺酰基氨基-異煙脒衍生物的一般合成 方案D12

通式[I-059]的2-芳基磺?；被?異煙脒衍生物通過通式[I-055]的2-氨基-異煙腈衍生物與通式[I-056]的被取代的苯磺酰氯衍生物在堿性溶劑例如吡啶中在升高的溫度下的反應(yīng)來制備。然后，使通式[I-057]的粗制反應(yīng)中間體與羥胺(50％wt/wt在水中)和極性質(zhì)子溶劑例如EtOH在升高的溫度下反應(yīng)。然后，使中間體通式[I-058]的2-芳基磺酰基氨基-異煙脒酸(2-arylsulfonylamino-isonicotinimidic acid)經(jīng)受與乙酸酐在極性質(zhì)子溶劑例如甲醇中、在鈀催化劑例如活性炭載鈀下在氫氣的氣氛下的氫解反應(yīng)，以產(chǎn)生通式[I-059]的2-芳基磺?；被?異煙脒衍生物。

方案D12

2-(苯磺酰氨基)吡啶-4-甲脒二鹽酸鹽[D081]的合成

步驟1：N-(4-氰基-2-吡啶基)苯磺酰胺[D079]的合成

將裝載有磁力攪拌棒、2-氨基吡啶-4-甲腈(2g,16.79mmol)、苯磺酰氯(2.15mL,16.79mmol)和吡啶(20mL)的圓底燒瓶攪拌并且在回流條件下在140℃下加熱持續(xù)48小時。在反應(yīng)完成之后，允許溶液冷卻下來至室溫并且用水洗滌并且用乙酸乙酯萃取。使分離的有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鎂干燥并且將溶劑在減壓下除去。將二氯甲烷添加至所獲得的油并且形成白色固體沉淀，將該白色固體沉淀用充分量的二氯甲烷、甲醇、和二乙醚洗滌。將固體在抽吸下干燥以提供作為松軟的白色固體的N-(4-氰基-2-吡啶基)苯磺酰胺(2.21g,51％)。LCMS方法6：RT:2.87min,MI：260(MH)⁺。

步驟2：2-(苯磺酰氨基)-N-羥基-吡啶-4-甲脒[D080]的合成

向N-(4-氰基-2-吡啶基)苯磺酰胺[D079](2g,7.71mmol)在乙醇(40mL)中的溶液逐滴地添加羥胺(50％w/w在水中,0.94mL,15.43mmol)。然后，將混合物在80℃下攪拌過夜。允許反應(yīng)混合物冷卻下來至室溫并且在減壓下將溶液蒸發(fā)至完全干燥以提供2-(苯磺酰氨基)-N-羥基-吡啶-4-甲脒(2.25g,100％)。LCMS方法5：RT:1.79min,MI：293(MH)⁺。

步驟3：2-(苯磺酰氨基)吡啶-4-甲脒二鹽酸鹽[D081]的合成

將乙酸酐(0.47mL,4.96mmol)添加至2-(苯磺酰氨基)-N-羥基-吡啶-4-甲脒[D080](1.45g,4.96mmol)在甲醇(40mL)中的攪拌的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌持續(xù)2小時。將鈀(5％碳載,263.9mg,2.48mmol)添加至混合物并且將燒瓶排空并且用氫氣回填。將反應(yīng)混合物在室溫下在氫氣的氣氛(氫氣氣球)下攪拌持續(xù)18小時。使混合物經(jīng)硅藻土塞過濾并且在減壓下蒸發(fā)溶劑。將獲得的粗油與甲苯共沸若干次。將獲得的粗制材料溶解在1,4-二氧六環(huán)溶液中的4M HCl(10mL)中并且將溶劑蒸發(fā)至干燥以提供2-(苯磺酰氨基)吡啶-4-甲脒二鹽酸鹽(1.06g,61％)。通過LC-MS在一段時間內(nèi)(典型的24小時)的分析示出該化合物的緩慢的降解。LCMS方法5：RT:1.11min,MI：277(MH)⁺。

通式[I-063]的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒衍生物的一般合成 方案D13

通式[I-063]的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒衍生物通過使通式[I-060]的4-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶衍生物在鈀催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)中與鈀催化劑例如Pd₂(dba)₃、配體例如dppf、氰化物試劑例如Zn(CN)₂、鋅粉，在極性非質(zhì)子溶劑例如DMF中在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器反應(yīng)來制備。將粗產(chǎn)物通過柱色譜法純化。然后，使通式[I-061]的反應(yīng)中間體與羥胺(50％wt/wt在水中)和極性質(zhì)子溶劑例如EtOH在升高的溫度下反應(yīng)。然后，使中間體通式[I-062]的N-羥基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒經(jīng)受與乙酸酐在極性質(zhì)子溶劑例如甲醇中、在鈀催化劑例如活性炭載鈀下在氫氣的氣氛下的氫解反應(yīng)，以產(chǎn)生通式[I-063]的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒衍生物。

方案D13

1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒二鹽酸鹽[D084]的合成

步驟1：1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲腈[D081]的合成

將微波小瓶裝載有4-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(1g,5.05mmol)、Zn(CN)₂(0.71g,6.06mmol)、Zn粉(0.07g,1.01mmol)、Pd₂(dba)₃(0.46g,0.510mmol)、dppf(0.28g,0.510mmol)和DMF(10mL)。將小瓶密封并且在90℃下加熱過夜。將混合物冷卻并且通過硅藻土墊過濾，然后將硅藻土墊用AcOEt洗滌。將濾液在減壓下濃縮。將粗制殘余物溶解在DCM中并且添加二乙醚。將產(chǎn)生的固體收集并且在不進(jìn)一步純化的情況下使用。將濾液通過柱色譜法(用環(huán)己烷/AcOEt 0％至100％洗脫)純化以提供作為白色固體的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲腈(0.500g,69％)。LCMS方法5：RT:2.90min,MI：145(MH)⁺。

步驟2：N-羥基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒[D083]的合成

將1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲腈[D082](1.64g,11.38mmol)、羥胺(50％wt/wt在水中,1.11mL)和EtOH(20mL)的混合物在60℃下攪拌過夜。然后，將溶劑蒸發(fā)并且將混合物用甲苯(x2)在真空下共沸，以提供N-羥基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒(2.00g,99％)。LCMS方法5：RT:0.91min,MI：178(MH)⁺。

步驟3：1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒二鹽酸鹽[D084]的合成

將N-羥基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒[D083](2.0g,11.40mmol)在室溫下在甲醇(30mL)中攪拌并且然后逐滴地添加乙酸酐(1.7mL,17.10mmol)。將混合物在室溫下攪拌持續(xù)30分鐘，并且然后添加5％炭載鈀(0.20mg)。用針出口將氫氣鼓泡通過混合物持續(xù)5min并且然后將混合物在室溫下在氫氣氣氛下攪拌過夜。將混合物通過硅藻土過濾并且在真空中濃縮以提供淺米黃色固體。添加在1,4-二氧六環(huán)(5mL)中的4N HCl并且將固體研磨。將溶劑在減壓下除去并且添加另外的在1,4-二氧六環(huán)(5mL)中的4N HCl，將固體研磨并且將溶劑在減壓下除去以提供作為棕色固體的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒二鹽酸鹽(2.60g,97％)。LCMS方法5：RT:0.52min,MI：162(MH)⁺。

通式[I-065]的2-取代的-磺?；?1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物的一般合成 方案D14

通式[I-065]的2-取代的-磺?；?1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物通過在方案D5中制備的通式[I-064]的2-取代的巰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物與氧化劑例如m-CPBA在鹵化溶劑例如DCM中的反應(yīng)來制備。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將粗制反應(yīng)混合物通過柱色譜法純化。

方案D14

2-(苯磺?；?-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D086]的合成

制備2-苯基巰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D086，根據(jù)方案D5制備的](0.5g,1.99mmol)在CH₂Cl₂(20mL)中的溶液并且冷卻至0℃。添加mCPBA(0.46g,1.99mmol)并且將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌持續(xù)2h。添加另外的部分的mCPBA(0.46g,1.99mmol)并且繼續(xù)攪拌持續(xù)另外的3h。添加另外的5mol％mCPBA并且將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜，隨后添加另外的5mol％mCPBA。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌持續(xù)2h，然后過濾并且將沉淀用CH₂Cl₂洗滌并且在真空下干燥。將沉淀在二乙醚中研磨以給出作為灰白色固體的2-(苯磺?；?-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈(0.445g,75％)。LCMS方法6(RT＝3.67min,MI+1＝284)：¹H NMR(500MHz,d6-DMSO)13.81(1H,s),8.66(1H,d,J＝4.8Hz),8.12-8.10(2H,m),7.76-7.74(2H,m),7.69-7.66(2H,m),7.37(1H,s)。

通式[I068]的5-環(huán)丙基-2-(2-芳基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物的一般合成 方案D15

通式[I-068]的5-環(huán)丙基-2-(2-芳基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通過使在方案B4中制備的通式[I-066]的2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物與異氰酸鈉、鈀催化劑例如Pd₂(dba)₃、配體例如t-BuBrettPhos、堿例如Et₃N在極性質(zhì)子溶劑例如t-BuOH中在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器在Buchwald型反應(yīng)中反應(yīng)來制備。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將粗制反應(yīng)混合物通過柱色譜法純化，并且使中間體與強(qiáng)酸例如TFA在溶劑例如DCM中反應(yīng)以產(chǎn)生通式[I-067]的中間體，使該通式[I-067]的中間體在鈀催化劑例如Pd(OAc)₂、配體例如Xantphos、堿例如Cs₂CO₃下在極性溶劑例如1,4-二氧六環(huán)中與通式[I-069]的鹵代芳香族衍生物在高溫下通過熱地加熱或使用微波反應(yīng)器在Buchwald型反應(yīng)中反應(yīng)。在典型地通過液液萃取的反應(yīng)后處理之后，將粗制反應(yīng)混合物通過柱色譜法純化并且使反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)受在極性質(zhì)子溶劑例如甲醇中與鈀催化劑例如活性炭載鈀在氫氣的氣氛下的氫解反應(yīng)，以產(chǎn)生通式[I-068]的5-環(huán)丙基-2-(2-芳基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物。

方案D15

4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-N-[4-(氧雜環(huán)丁-3-基)苯基]吡啶-2-胺[2454]的合成

步驟1：4-[2-(2-氨基-4-吡啶基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸芐酯[D088]的合成

將裝配有磁力攪拌棒并且裝有可重新密封的螺旋蓋隔膜的烘箱干燥的微波小瓶裝載有異氰酸鈉(0.26g,3.99mmol)、4-[2-(2-氯-4-吡啶基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸芐酯[D087，根據(jù)方案？？制備的](1g,2mmol)、Pd₂(dba)₃(91.4mg,0.10mmol)、以及tBu Brett-phos(96.7mg,0.20mmol)。將管排空并且用氮?dú)饣靥钊尾⑶医?jīng)由注射器添加叔丁醇(5mL)。將可重新密封的螺旋蓋隔膜在連續(xù)的氮?dú)饬飨掠梦创檀┑母裟ぬ娲⑶覍⑷芤杭訜嶂?00℃持續(xù)18小時。允許反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并且然后通過硅藻土墊過濾，用過量的EtOAc洗滌。將粗產(chǎn)物通過快速色譜法純化以提供Boc保護(hù)的氨基衍生物，將該Boc保護(hù)的氨基衍生物在室溫下在50％TFA/DCM溶液中攪拌持續(xù)2小時。將游離的胺通過SCX-2離子交換純化以提供作為淺黃色固體的4-[2-(2-氨基-4-吡啶基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸芐酯(0.821g,85％)。LCMS方法6：RT:2.74min,MI：482(MH)⁺。

步驟2：4-[5-環(huán)丙基-2-[2-[4-(氧雜環(huán)丁-3-基)苯胺基]-4-吡啶基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸芐酯[D089]的合成

將4-[2-(2-氨基-4-吡啶基)-5-環(huán)丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸芐酯[D088](0.25g,0.520mmol)、3-(4-溴苯基)氧雜環(huán)丁烷(0.22g,1.04mmol)、Pd(OAc)₂(5.83mg,0.030mmol)、xantphos(30.04mg,0.050mmol)和碳酸銫(0.34g,1.04mmol)全部合并到2.5mL biotage微波小瓶中，將該biotage微波小瓶用氮?dú)鉀_洗并且用螺旋蓋隔膜緊密地蓋上。添加1,4-二氧六環(huán)(1.25mL)并且將混合物在95℃下攪拌持續(xù)18小時。將反應(yīng)混合物攝取在二氯甲烷中并且用鹽水洗滌。分離層并且有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并且在減壓下濃縮。將獲得的粗油通過用5-10％二氯甲烷/甲醇洗脫的色譜法純化，以提供4-[5-環(huán)丙基-2-[2-[4-(氧雜環(huán)丁-3-基)苯胺基]-4-吡啶基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸芐酯(0.221g,69％)。LCMS方法6：RT:4.31min,MI：614(MH)⁺。

步驟3：4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-N-[4-(氧雜環(huán)丁-3-基)苯基]吡啶-2-胺[2454]的合成

使4-[5-環(huán)丙基-2-[2-[4-(氧雜環(huán)丁-3-基)苯胺基]-4-吡啶基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸芐酯[D089](0.22g,0.360mmol)溶解在甲醇(20mL)中的溶液在50℃、80巴下通過H-Cube氫化反應(yīng)器持續(xù)2小時(連續(xù)的流)。將溶劑通過減壓除去并且將獲得的油通過色譜法純化以提供4-(5-環(huán)丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-N-[4-(氧雜環(huán)丁-3-基)苯基]吡啶-2-胺(0.051g,29.7％)。LCMS方法6：RT:2.02min,MI：480(MH)⁺。¹H NMR(500MHz,DMSO)9.34(1H,s),8.96(1H,s),8.31(1H,d),8.09(1H,s),7.91(1H,s),7.76(2H,d),7.67(1H,dd),7.33(2H,m),4.92(2H,m),4.61(2H,m),4.19(1H,m),3.17(4H,m),2.86(4H,s),2.62(1H,m),1.26(2H,m),1.03(2H,m)。

包含2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚部分的類似物的合成可以在方案D17中找到。式[J001]的化合物可以被芐基化并且還原以給出式[J003]的化合物。與溴化氰的環(huán)化產(chǎn)生式[J004]的化合物。與溴丙酮的另一種環(huán)化提供式[J005]的化合物。與在方案D4中描述的順序類似的順序提供腈[J006]和脒[J007]。并且與在方案D3中描述的順序類似的順序提供可以被脫保護(hù)以給出實施例3的[J010]。實施例3的合成在下文詳細(xì)地被描述。

方案[D17]

4-氯-3-硝基-吡啶-2-基)-(2,4-二甲氧基-芐胺[J002]：

向在200mL的甲醇中的2,4-二氯-3-硝基吡啶(8.2g,42mmol)添加碳酸鈉(9.01g,85.0mmol)，隨后是2,4-二甲氧基芐胺(7.81g,46.7mmol)并且在室溫下攪拌持續(xù)18h。將反應(yīng)混合物濃縮并且將粗品用EtOAc萃取。將乙酸乙酯層用水、鹽水洗滌，并且經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并且濃縮。將粗品在330g ISCO硅膠柱上使用己烷:EtOAc(0-30％)的梯度進(jìn)行色譜分析以給出9.9g的化合物[J002](72％收率)。

4-氯-N(2)-(2,4-二甲氧基-芐基)-吡啶-2,3-二胺[J003]

向在100mL的甲醇中的[J002](4-氯-3-硝基-吡啶-2-基)-(2,4-二甲氧基-芐基)-胺(9.9g,30.6mmol)添加氯化亞錫二水合物(14.0g,61mmol)并且在80℃下加熱持續(xù)5h。將甲醇在減壓下除去并且將殘余物懸浮在乙酸乙酯中。將反應(yīng)用飽和的碳酸氫鹽猝滅，并且分離有機(jī)層。將EtOAc層用水、鹽水洗滌，并且經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾并且濃縮。將粗品在Isco 220g柱上使用10:1DCM:MeOH梯度進(jìn)行色譜分析，以給出41％收率的3.7g的純的材料[J003]。

7-氯-3-(2,4-二甲氧基-芐基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺[J004]

向在200mL的乙醇中的[J003]4-氯-N(2)-(2,4-二甲氧基-芐基)-吡啶-2,3-二胺(3.2g,5.8mmol)添加碳酸氫鈉(3.29g,19.8mmol)并且冷卻至0℃。向此添加溴化氰(2.08g,19.8mmol)在5.0mL的無水DCM中的溶液，并且將反應(yīng)在室溫下攪拌持續(xù)8h并且然后在80℃下加熱持續(xù)8h。在8h加熱之后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并且添加在5mL的DCM中的另一等份的碳酸氫鈉(19.8mmol)和溴化氰(19.8mmol)。將反應(yīng)在80℃下加熱持續(xù)另外的14h。將反應(yīng)混合物濃縮并且粗品用DCM萃取，用水、鹽水洗滌并且經(jīng)無水硫酸鈉干燥。將有機(jī)層過濾，濃縮并且將粗品用DCM研磨，以給出41％收率的1.42g的固體[J004]。¹H NMR(CDCl₃):δ8.01(d,J＝5.36Hz,1H),7.17-7.12(m,2H),6.49-6.21(m,2H),5.02(s,2H),3.862(s,3H),3.79(s,3H)。

4-氯-8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚[J005]

向在80mL的丙酮中的[J004]7-氯-3-(2,4-二甲氧基-芐基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺(0.80g,2.0mmol)添加溴丙酮(2.4g,18mmol)并且將溶液在65℃下加熱持續(xù)16h。將反應(yīng)混合物濃縮并且將粗品在40g ISCO硅膠柱上使用10:1DCM:MeOH進(jìn)行色譜分析以給出0.39g的產(chǎn)物[J005]。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 8.12(1H,d,J＝5.5Hz)7.38(1H,d,J＝1.3Hz)7.29(1H,d,J＝8.3Hz)7.18(1H,d,J＝5.5Hz)6.44(2H,d,J＝1.8Hz)3.73-3.81(4H,m)3.80(9H,d,J＝18.1Hz)2.41(3H,d,J＝1.0Hz)。

8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚-4-甲腈[J006]

向[J005]4-氯-8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚(0.25g,0.70mmol)、氰化鋅(0.14g,1.2mmol)、鋅(0.018g,0.28mmol)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(0.019g,0.021mmol)和1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵(0.012g,0.021mmol)添加10mL的無水DMF。將反應(yīng)混合物用氬氣噴灑并且在110℃下加熱持續(xù)3h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用100mL的EtOAc稀釋，并且用水、鹽水洗滌并且干燥。將粗品在40g硅膠Isco柱上使用10:1DCM:MeOH進(jìn)行色譜分析以給出110mg的純的產(chǎn)物[J006]。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝5.52Hz,1H),7.46(d,J＝1.12Hz,1H),7.40(d,J＝5.52Hz,1H),7.35(d,J＝8.96Hz,1H),6.46-6.44(m,2H),5.32(s,2H),3.81(s,3H),3.78(s,3H),2.42(d,J＝1.04Hz,3H)。

8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚-4-甲脒[J007]

向在10mL的無水THF中的[J006]8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚-4-甲腈(0.13g,0.37mmol)添加六甲基硅氮烷鋰鹽在THF(1.5mL,1.5mmol)中的1.0M溶液。將反應(yīng)在50℃下加熱持續(xù)8h，并且然后冷卻至室溫并且攪拌過夜。將反應(yīng)用水猝滅，用EtOAc萃取，干燥，過濾并且在不進(jìn)一步純化的情況下使用。

3-環(huán)丁基-N-{[8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚-4-基]-亞氨基-甲基}-5-氟-異煙酰胺[J008]

向3-環(huán)丁基-5-氟-異煙酸(0.07g,0.36mmol)在6mL的無水DMF中的混合物添加DIEA(0.14g,1.1mmol)，隨后是HATU(0.14g,0.36mmol)并且在室溫下攪拌持續(xù)1小時。向反應(yīng)混合物添加[J007]8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚-4-甲脒(0.13g,0.36mmol)并且攪拌持續(xù)18小時。將反應(yīng)混合物用水(10mL)稀釋，并且然后用DCM萃取，將有機(jī)層分離，用水、鹽水洗滌并且經(jīng)無水硫酸鈉干燥。將DCM層過濾，濃縮并且將粗品在硅膠上使用10:1DCM:MeOH進(jìn)行色譜分析，以給出62％收率的0.12g的純的酰胺[J008]。1H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 10.46(1H,br.s.)9.07(1H,br.s.)8.48(3H,d,J＝19.3Hz)8.37(1H,d,J＝5.3Hz)7.58(1H,d,J＝1.3Hz)7.35-7.36(1H,m)7.43(2H,d,J＝5.3Hz)6.31-6.48(3H,m)5.26-5.29(1H,m)5.35(3H,s)3.70-3.89(10H,m)2.19-2.35(6H,m)2.07(4H,d,J＝1.3Hz)1.15-1.36(3H,m)。

5-環(huán)丁基-2-[8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚-4-基]-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[J009]

向[J008]3-環(huán)丁基-N-{[8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚-4-基]-亞氨基-甲基}-5-氟-異煙酰胺(0.12g,0.22mmol)在4mL的DMF中的溶液添加碳酸銫(0.076g,0.23mmol)并且將混合物在90℃下加熱持續(xù)6h。將混合物冷卻至室溫并且添加飽和的含水氯化銨10mL。將反應(yīng)混合物用DCM萃取，用水、鹽水洗滌并且經(jīng)無水硫酸鈉干燥。將DCM層過濾，濃縮并且將粗品在12g Isco柱上使用10:1DCM:MeOH進(jìn)行色譜分析，以給出70％收率的80mg的產(chǎn)物[J009]。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 11.15(1H,br.s.)9.24(1H,s)8.72(1H,s)8.48(1H,d,J＝1.0Hz)8.40(2H,d,J＝5.3Hz)7.44(1H,d,J＝5.5Hz)7.30(4H,d,J＝8.5Hz)6.34-6.50(3H,m)3.72-3.89(10H,m)1.77-2.65(15H,m)1.17-1.35(4H,m)。

4-(5-環(huán)丁基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚[J010]

向在2.0mL的DMF中的[J009]5-環(huán)丁基-2-[8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚-4-基]-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮(0.05g,0.1mmol)添加DMAP(1mg,0.009mmol)、TEA(0.036mL,0.26mmol)和2,4,6-三異丙基苯磺酰氯(0.029g,0.0961mmol)并且在室溫下攪拌持續(xù)1h。向反應(yīng)混合物添加1-N-Boc哌嗪[A](0.018g,0.096mmol)并且在室溫下攪拌持續(xù)3h。LC/MS示出產(chǎn)物的形成，允許反應(yīng)在室溫下攪拌持續(xù)18h。將反應(yīng)混合物用30mL的DCM稀釋，用水、鹽水洗滌并且經(jīng)無水硫酸鈉干燥。將DCM層過濾，濃縮并且將粗品在硅膠上使用10:1DCM:MeOH進(jìn)行色譜分析以給出0.02g的產(chǎn)物[J010]。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 9.32(s,1H)8.74(s,1H)8.53(d,J＝5.52Hz,1H)7.58(d,J＝1.00Hz,1H)7.34(d,J＝5.52Hz,1H)7.22-7.30(m,3H)6.37-6.50(m,2H)5.38(s,2H)3.86(s,3H)3.78(bs,5H)3.58(br.s,5H)2.46-2.60(m,2H)2.40(s,3H)1.94-2.34(m,5H)1.82-1.59(m,3H)1.49(s,9H)1.19-1.33(m,3H)。

4-(5-環(huán)丁基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚[實施例3]

在0℃下向在2mL的DCM和1mL的二甲基硫醚中的[J010]4-{5-環(huán)丁基-2-[8-(2,4-二甲氧基-芐基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]茚-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.02g,0.03mmol)逐滴地添加三氟化硼醚合物(0.02mL)并且攪拌持續(xù)18h。將反應(yīng)混合物在真空下濃縮并且將粗品在C-18反相HPLC柱上使用在水中的10-50％乙腈以50mL/min進(jìn)行色譜分析以給出5mg的標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δppm 9.50(1H,s)8.90(1H,s)8.78(1H,d,J＝1.3Hz)8.56(1H,d,J＝6.8Hz)8.03(1H,d,J＝6.8Hz)4.36(3H,t,J＝8.3Hz)4.01-4.18(2H,m)3.45-3.59(3H,m)2.53-2.72(5H,m)2.21-2.41(3H,m)2.07(1H,t,J＝7.5Hz)。

包含9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯部分的類似物的合成可以在方案D18中被找到。式[J012]的化合物可以從式[J011]的化合物和氨基吡啶經(jīng)由Pd催化的胺化/環(huán)化來合成。與在方案D4中描述的順序類似的順序提供[J016]，使用與在方案[D3]中描述的順序類似的順序可以將[J016]用于給出實施例145(及其他)。實施例145的合成在下文詳細(xì)地被描述。

方案[D18]

實施例145.5-(5-環(huán)丁基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯。

145a)向2,3-二氯吡啶(0.5g,3.38mmol)和2-氨基-5-氟吡啶(0.45g,4.0mmol)在二甲苯中的溶液添加NaOtBu(0.38g,4.0mmol)、PPh3(0.088g,0.3mmol)并且將混合物用氬氣脫氣。將乙酸鈀(0.037g,0.16mmol)添加至反應(yīng)混合物，然后將反應(yīng)混合物在120℃下加熱持續(xù)4h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并且將DMF添加至反應(yīng)混合物，隨后是DBU(1.0g,6.7mmol)和Cy3P.HBF4(0.12g,0.3mmol)并且將混合物用氬氣脫氣。將乙酸鈀(0.037g,0.16mmol)添加至反應(yīng)混合物，將反應(yīng)混合物在150℃下加熱持續(xù)15h。將反應(yīng)用水猝滅并且用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用水并且然后鹽水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并且濃縮。將殘余物通過硅膠柱色譜法純化以提供3-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯(0.2g)。

145b)在0℃下向3-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯(0.1g,0.53mmol)在EtOAc(100mL)中的攪拌的溶液添加mCPBA(0.135g,0.79mmol)并且將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌持續(xù)6h。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)并且將殘余物用醚并且然后用戊烷研磨以提供3-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯8-氧化物(60mg)。

145c)將3-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯8-氧化物(60mg,0.29mmol)、甲磺酰氯(0.1mL,1.4mmol)在DMF(1mL)中的混合物在60℃下加熱持續(xù)4h。在起始材料完全消耗之后，將反應(yīng)冷卻并且用冰水猝滅。將形成的沉淀過濾，干燥，并且用二乙醚研磨以提供作為白色固體的5-氯-3-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯(25mg)。

145d)向5-氯-3-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯(0.2g,0.9mmol)在無水DMA(5mL)中的溶液添加氰化鋅(63mg,0.54mmol)、活化的鋅粉(5.8mg,0.09mmol)并且將反應(yīng)混合物通過氬氣脫氣持續(xù)20min。將[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)二氯甲烷加合物(19mg,0.02mmol)和Pd2(dba)3(16mg,0.018mmol)添加至反應(yīng)混合物，然后將反應(yīng)混合物加熱至120℃持續(xù)2h。將混合物冷卻至rt，添加水并且將形成的沉淀過濾并且干燥。將粗制固體溶解在乙酸乙酯中。將溶劑蒸發(fā)并且將殘余物用二乙醚研磨以提供6-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯-4-甲腈(110mg)。

145e)將6-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯-4-甲腈(0.9092g,4.285mmol)在四氫呋喃中的1.0M的六甲基二硅氮烷鈉(18.0mL,18.0mmol)中的攪拌的懸浮液在氮?dú)獾臍夥障略?0℃下加熱。將反應(yīng)混合物加熱經(jīng)過周末，然后冷卻至室溫。將揮發(fā)物蒸發(fā)并且將殘余物懸浮在水(50mL)中并且攪拌。將固體過濾并且用水洗滌。將含水濾液在減壓下蒸發(fā)至干燥。將6-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯-4-甲脒分離為橙棕色泡沫(0.98g)并且在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):8.43(s,1H),8.29(d,J＝4.8Hz,1H),8.24-8.18(m,2H),8.10(dd,J＝10.0,3.0Hz,1H),6.69(d,J＝4.8Hz,1H),6.43(br s,2H)。LC/MS＝229.95(MH)+。

145f)中間體3-環(huán)丁基-5-氟-N-[(6-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯-4-基)-亞氨基-甲基]-異煙酰胺從3-環(huán)丁基-5-氟-異煙酸(0.58g,3.0mmol)和6-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯-4-甲脒(0.98g,4.3mmol)以先前描述的類似的方式來制備。將產(chǎn)物分離為淡灰色固體(0.809g)，該淡灰色固體在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):10.23(br s,1H),8.65(d,J＝5.0Hz,1H),8.53-8.46(m,3H),8.36-8.31(m,1H),7.52-7.48(m,1H),3.73-3.63(m,1H),2.27-2.13(m,3H),1.99-1.72(m,2H)。LC/MS＝407.04(MH)+。

5-環(huán)丁基-2-(6-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯-4-基)-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮從3-環(huán)丁基-5-氟-N-[(6-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯-4-基)-亞氨基-甲基]異煙酰胺和碳酸銫(2.0g,6.0mmol)以先前描述的類似的方式來制備。將產(chǎn)物分離為棕色固體(1.2g)并且在不進(jìn)一步純化的情況下使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.84(br s,1H),8.98(s,1H),8.74-8.67(m,2H),8.57(s,1H),8.52-8.45(m,1H),7.67-7.20(m,2H),4.70-4.60(m,1H),2.52-2.42(m,2H),2.36-2.20(m,2H),2.10-2.00(m,1H),1.90-1.80(m,1H)。LC/MS＝387.04(MH)+。

145g)5-(5-環(huán)丁基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯從5-環(huán)丁基-2-(6-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯-4-基)-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮(100.0mg,0.2588mmol)、2,4,6-三異丙基苯磺酰氯(71.0mg,0.234mmol)和1-哌嗪羧酸叔丁酯(48.0mg,0.258mmol)、然后三氟乙酸(1mL,10mmol)以先前描述的類似的方式來制備。5-(5-環(huán)丁基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟-9H-聯(lián)吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯(0.0129g,8％)作為三氟乙酸鹽被分離為黃色凍干物(lyophilate)。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.81(s,1H),9.27(s,1H),9.23(dd,J＝10.3,2.8Hz,1H),8.95-8.80(m,2H),8.72(d,J＝5.1Hz,1H),8.58(dd,J＝2.8,1.1Hz,1H),8.12(d,J＝5.1Hz,1H),4.35-4.25(m,1H),3.95-3.77(m,4H),3.40-3.20(m,4H),2.55-2.45(m,2H),2.33-2.22(m,2H),2.20-2.07(m,1H),2.00-1.90(m,1H)。LC/MS＝455.15(MH)+。

包含(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基結(jié)構(gòu)的類似物的合成可以在方案D19中被找到。式[J017]的化合物經(jīng)由3-溴-5-氟-異煙酸叔丁酯的Suzuki偶聯(lián)形成。還原給出式[J018]的化合物并且酸解給出式[J019]的化合物，使用與在方案[D3]中描述的順序類似的順序可以將式[J019]的化合物用于給出實施例146(及其他)。實施例146的合成在下文詳細(xì)地被描述。

方案[D19]

實施例146.4-[4-哌嗪-1-基-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚。

146a)向3-溴-5-氟-異煙酸叔丁酯(0.5g,1.8mmol)和4,4,6-三甲基-2-(1-三氟甲基-乙烯基)-[1,3,2]二氧雜硼雜環(huán)己烷(0.486g,2.1mmol)在1,2-二甲氧基乙烷:水(2:1)中的溶液添加碳酸鉀(1g,7.2mmol)。將混合物用氬氣脫氣持續(xù)10min，隨后添加Pd(PPh3)4(0.104g,0.09mmol)，然后將反應(yīng)混合物在80℃下加熱持續(xù)8h。將反應(yīng)混合物冷卻至rt并且通過硅藻土過濾。將水添加至濾液并且將混合物用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌，并且經(jīng)硫酸鈉干燥并且濃縮。將殘余物通過硅膠柱色譜法純化以提供3-氟-5-(1-三氟甲基-乙烯基)-異煙酸叔丁酯(50mg)。

146b)向3-氟-5-(1-三氟甲基-乙烯基)-異煙酸叔丁酯(0.1g,0.34mmol)在甲醇(10mL)中的攪拌的溶液添加Pd/C并且將反應(yīng)在氫氣(1個大氣壓)下在室溫下攪拌持續(xù)3h。將混合物通過硅藻土過濾，用甲醇洗滌，并且將濾液濃縮以提供3-氟-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-異煙酸叔丁酯(80mg)。

146c)向3-氟-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-異煙酸叔丁酯(0.08g,0.27mmol)在DCM(1mL)中的攪拌的溶液添加TFA(1mL)并且將反應(yīng)在室溫下攪拌持續(xù)12h。將反應(yīng)混合物濃縮并且用DCM共沸以提供固體，該固體用醚和正戊烷研磨以提供3-氟-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-異煙酸(45mg)。

146d)將3-氟-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-異煙酸(0.65g,2.7mmol)、N,N-二異丙基乙胺(2.1mL,12mmol)和N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸酯(1.1g,3.0mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液在室溫下攪拌持續(xù)1小時。添加9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-甲脒(0.52g,2.5mmol)并且將混合物攪拌過夜。反應(yīng)通過LC/MS是完全的。添加水(25mL)。將混合物攪拌持續(xù)30分鐘并且在冰水浴中冷卻。將產(chǎn)生的懸浮液過濾，用水沖洗并且通過抽吸然后在高真空下干燥持續(xù)4小時?；厥盏淖厣腆w與期望的中間體一致并且在不進(jìn)一步純化的情況下使用。LC/MS＝430.02(MH)+。

將在N,N-二甲基乙酰胺(10mL)中的棕色固體和碳酸銫(1.6g,4.9mmol)在90℃下加熱過夜。將混合物冷卻至室溫，然后在冰水浴中。添加水(10mL)和飽和的含水氯化銨(10mL)。將混合物攪拌持續(xù)30分鐘。將產(chǎn)生的固體過濾，用水沖洗并且通過抽吸干燥。將固體用乙醇(25mL)研磨，然后過濾，用乙醇沖洗。將乙醇濾液蒸發(fā)至干燥。將粗制的2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮(0.59g)分離為棕色樹脂并且在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。LC/MS＝410.03(MH)+。

146e)向粗制的2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮(100.0mg,0.2443mmol)、4-二甲基氨基吡啶(1.0mg,0.0082mmol)和N,N-二異丙基乙胺(135.0μL,0.7750mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL,10mmol)中的攪拌的懸浮液添加2,4,6-三異丙基苯磺酰氯(60.0mg,0.198mmol)。將混合物攪拌持續(xù)2小時。將反應(yīng)混合物經(jīng)由硅膠色譜法(12g,0％→10％甲醇:二氯甲烷)純化。將期望的級分合并并且蒸發(fā)?；厥盏牟牧吓c作為棕色樹脂的期望的中間體一致。

將棕色樹脂溶解在二氯甲烷(1mL,20mmol)中并且添加三氟乙酸(1mL,10mmol)。將混合物在室溫下攪拌持續(xù)30分鐘。將揮發(fā)物蒸發(fā)。將殘余物經(jīng)由反相色譜法(以0.1％TFA作為改性劑的5％→50％乙腈:水)純化。將期望的級分合并，冷凍并且凍干。4-[4-哌嗪-1-基-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚(0.0546g,37％)作為三氟乙酸鹽被分離為黃色凍干物。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.12(s,1H),9.48(s,1H),8.94(s,1H),8.93-8.70(m,2H),8.62-8.57(m,2H),7.92(d,J＝5.2Hz,1H),7.56(d,J＝8.2Hz,1H),7.52-7.47(m,1H),7.21-7.16(m,1H),4.81-4.71(m,1H),4.20-3.08(m,8H),1.86(d,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS＝478.14(MH)+。

在與方案[D19]類似的方案[D20]中示出的式[J023]的化合物可以被合成并且進(jìn)行至實施例215.

方案[D20]

包含1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸酰胺結(jié)構(gòu)的類似物的合成可以在方案D21中被找到。式[J024]的化合物可以根據(jù)在Adams,Nicholas D.等人；J.Med.Chem.2010,53,3973-4001中發(fā)現(xiàn)的程序來合成。氧化、氯化和氰化給出[J027]的化合物；類似的程序已經(jīng)在其中被描述。堿介導(dǎo)的水解給出式[J028]的化合物并且酰胺形成可以在標(biāo)準(zhǔn)HATU條件下實現(xiàn)以給出式[J029]的化合物，使用與在方案[D4]和[D3]中描述的順序類似的順序可以將式[J029]的化合物用于給出實施例162(及其他)。

方案[D21]

包含1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-(雜)芳基結(jié)構(gòu)的類似物的一般合成在方案D22中描述。通式[J030]的2-碘代化合物可以通過與通式[J032]的試劑的Stille偶聯(lián)被轉(zhuǎn)化成通式[J031]的化合物。[J031]可以使用與在方案[5]和[3]中描述的順序類似的順序轉(zhuǎn)化以給出實施例356(以及類似地實施例362、實施例364、實施例365、實施例367、實施例369-372、實施例385、實施例395)。

方案[D22]

實施例356.5-環(huán)丙基-4-(八氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基)-2-(2-吡啶-3-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶。

將1-苯磺?；?2-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈(2.002g,4.892mmol)、三丁基(3-吡啶基)錫烷(6.878g,18.69mmol)、雙(三苯基膦)氯化鈀(II)(0.647g,0.9218mmol)和無水DMF(80mL)在烘箱干燥的燒瓶中合并。將反應(yīng)用氬氣吹掃并且在130℃下在氮?dú)庀录訜岢掷m(xù)3小時。將熱反應(yīng)通過硅藻土過濾，濃縮并且通過用乙酸乙酯/庚烷洗脫的正相色譜法純化以產(chǎn)生1.07g(61％)的1-(苯磺?；?-2-(3-吡啶基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈：LC/MS 361.08[M+H]；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(m,1H),8.72(m,1H),8.61(d,1H,J＝5.0Hz),8.10(m,1H),7.85(m,3H),7.72(m,1H),7.59(m,3H),7.22(s,1H)。遵循在方案[D5]和[D3]中描述的一般程序，將1-(苯磺?；?-2-(3-吡啶基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈轉(zhuǎn)化成目標(biāo)化合物，作為與三氟乙酸的鹽:凍干物的5-環(huán)丙基-4-(八氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基)-2-(2-吡啶-3-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶，LC/MS 489.3[M+H],1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.58(s,1H),9.33(d,1H,J＝1.4Hz),9.24(s,1H),8.65(m,3H),8.54(m,1H),8.46(d,1H,J＝5.0Hz),8.22(s,1H),8.11(d,1H,J＝5.0Hz),8.08(d,1H,J＝2.1Hz),7.68-7.64(m,1H),4.64(m,1H),4.44-4.37(m,2H),3.44-3.26(m,3H),2.99(m,2H),2.82-2.73(m,2H),2.24-2.21(m,1H),1.94-1.91(m,1H),1.79-1.76(m,1H),1.48-1.44(m,1H),1.22-1.15(m,1H),1.12-1.06(m,1H),0.96-0.90(m,1H)。

胺構(gòu)件的合成在下文方案[E1]-[E5]被示出。式[K008]的胺可以從式[K001]的化合物經(jīng)由保護(hù)(BOC₂O)和吡啶芐基化合成以給出式[K003]的化合物。用NaBH₄還原給出式[K004]的化合物，將式[K004]的化合物環(huán)丙烷化并且然后操作保護(hù)基以給出式[K008]的化合物。這可以利用與在方案[D3]中發(fā)現(xiàn)的程序類似的程序來進(jìn)行以給出實施例198(及其他)。實施例198的合成的詳述在下文被示出。

方案[E1]

實施例198.(3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚-6-基)-[5-環(huán)丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-胺。

198a)在0℃下向(3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚-6-基)-氨基甲酸叔丁酯(0.65g,3.1mmol)[如在Miller,W.H.等人,WO2006/010040中所描述制備的]在THF(5mL)中的溶液添加K₂CO₃(1.28g,9.3mmol)，隨后添加Cbz-Cl(0.63g,3.72mmol)并且在室溫下攪拌持續(xù)12h。將反應(yīng)混合物濃縮并且將殘余物用水稀釋并且用DCM萃取。將有機(jī)層用含水飽和的碳酸氫鈉洗滌，干燥(Na₂SO₄)并且濃縮以提供作為澄清的油的6-叔丁氧羰基氨基-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸芐酯(0.55g,55％)?；衔锿ㄟ^MS和1H-NMR來表征。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):7.41–7.27(m,5H),5.05(s,2H),3.61(d,J＝8.3Hz,2H),3.19(d,J＝11.9Hz,2H),1.89(q,J＝5.8Hz,1H),1.98-1.95(m,2H)1.37(s,9H),1.12(s,1H),0.76(dd,J＝9.5,5.4Hz,1H),0.45-0.43(m,1H)。LC/MS＝303(M+H)+。

198b)在0℃下向6-叔丁氧羰基氨基-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸芐酯(0.55g,1.59mmol)在THF(5mL)中的溶液添加TFA(1mL)并且在室溫下攪拌持續(xù)5h。將反應(yīng)混合物濃縮并且將殘余物用二乙醚研磨以提供作為澄清的油的6-氨基-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸芐酯(0.35g,90％)?；衔锿ㄟ^MS和1H-NMR來表征。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):8.23(s,2H),7.37-7.35(m,5H),5.06(d,J＝1.4Hz,2H),3.53–3.33(m,2H),3.12(s,1H),1.97(p,J＝7.2,6.6Hz,2H),1.56–1.46(m,1H),1.12–1.00(m,1H),0.76–0.68(m,2H)。LC/MS＝247(M+H)+。

198c)向2,4,6-三異丙基苯磺酸5-環(huán)丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯(150.0mg,0.2367mmol)和N,N-二異丙基乙胺(125.0μL,0.7176mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合物添加6-叔丁氧羰基氨基-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸芐酯(140.0mg,0.56mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液。將混合物在室溫下攪拌經(jīng)過周末。將反應(yīng)傾倒到水(20mL)中并且用乙酸乙酯(15mL)萃取。將有機(jī)物用水(2x 10mL)和飽和的含水氯化鈉(10mL)洗滌。將有機(jī)物經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且將濾液蒸發(fā)成與期望的中間體一致的棕色樹脂。

將棕色樹脂溶解在二氯甲烷(5mL)中并且在室溫下攪拌。添加二甲基硫醚(1mL)，隨后是三氟化硼醚合物(200.0μL,1.578mmol)并且將黃色懸浮液在室溫下攪拌過夜。將揮發(fā)物蒸發(fā)成黃色固體。添加甲醇(10mL)并且然后蒸發(fā)。將殘余物經(jīng)由反相色譜法(以0.1％TFA作為改性劑的5％→50％乙腈:水)純化。將期望的級分合并，冷凍并且凍干。(±)-(3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚-6-基)-[5-環(huán)丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-胺(0.0614g,45％)作為三氟乙酸鹽作為黃色凍干物被回收。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.06(s,1H),9.12(s,1H),8.58(d,J＝5.0Hz,1H),8.53-8.41(m,3H),8.05(br s,1H),7.81(s,1H),7.76(d,J＝5.1Hz,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,1H),7.50-7.45(m,1H),7.18-7.12(m,1H),4.54-4.44(m,1H),3.27-3.13(m,2H),2.90-2.72(m,2H),2.57-2.47(m,2H),2.38-2.04(m,6H),1.90-1.80(m,1H),1.62-1.54(m,1H),1.36-1.30(m,1H),1.13-1.08(m,1H)。LC/MS＝462.16(MH)+。

式[K016]的胺可以從式[K009]的化合物來合成，如在方案[E2]中發(fā)現(xiàn)的。保護(hù)(TBDMSCl)和吡啶芐基化、隨后用NaBH₄還原給出式[K010]的化合物，式[K010]的化合物可以經(jīng)由苯甲?；⑷ゼ坠柰榛童B氮化物形成被轉(zhuǎn)化以給出式[K013]的化合物。這可以被環(huán)氧化并且疊氮化物被還原，之后伴隨環(huán)化以給出式[K016]的化合物。利用與在方案[D3]中發(fā)現(xiàn)的程序類似的程序，[K016]可以被用于給出實施例76(及其他)。實施例76的合成的詳述在下文被概述。

方案[E2]

實施例76.(±)-(3aS,7aS)-1-[5-環(huán)丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-八氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-3a-醇

76a)經(jīng)由添加漏斗向1-芐基-5-[2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基氧基)-乙基]-1,2,3,6-四氫-吡啶(4.0g,12mmol)[如在Marazano,C.等人,J.Org.Chem.,2002,67,1890-1897中描述制備的]在甲苯(100mL)中的攪拌的溶液逐滴地添加在甲苯(100mL)中的氯甲酸芐酯(2.1mL,14mmol)。將混合物在室溫下攪拌直到添加完成。將反應(yīng)混合物加溫至65℃并且在氮?dú)獾臍夥障录訜徇^夜。將揮發(fā)物蒸發(fā)，將殘余物用己烷(150mL)研磨，通過硅藻土塞過濾并且將濾液蒸發(fā)。將殘余物經(jīng)由硅膠色譜法(40g,0％→25％乙酸乙酯:己烷)純化。用碘使產(chǎn)物在TLC上可視化。5-[2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基氧基)-乙基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸芐酯(3.66g)作為澄清的油被分離。¹HNMR(400MHz,CDCl3,δ):7.39-7.28(m,5H),5.58(br s,1H),5.15(s,2H),3.91-3.88(m,2H),3.68(t,J＝6.6Hz,2H),3.51(t,J＝5.7Hz,2H),2.23-2.07(m,4H),0.88(s,9H),0.03(s,6H)。LC/MS＝346.06(MH)+和398.09(M+Na)+。

76b)向5-[2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基氧基)-乙基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸芐酯(3.16g,8.41mmol)在四氫呋喃(6mL)中的攪拌的溶液添加在四氫呋喃中的1.0M的四正丁基氟化銨(9.5mL,9.5mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)通過TLC(碘染色法，3:2乙酸乙酯:己烷)是完全的。將混合物用水(15mL)稀釋并且攪拌持續(xù)15分鐘。將混合物用醚(2x 50mL)萃取。將合并的醚層用水(2x 15mL)、飽和的含水氯化鈉(15mL)洗滌并且然后經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且將濾液蒸發(fā)。將殘余物經(jīng)由硅膠色譜法(12g,25％→75％乙酸乙酯:己烷)純化。用碘和LC/MS使產(chǎn)物在TLC上可視化。5-(2-羥基-乙基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸芐酯(1.84g)作為澄清的油(1.84g)被回收。¹HNMR(400MHz,CDCl3,δ):7.39-7.28(m,5H),5.66(br s,1H),5.15(s,2H),3.90(br s,2H),3.71(t,J＝6.0Hz,2H),3.54(t,J＝5.8Hz,2H),2.25(br s,2H),2.15(br s,2H)。LC/MS＝283.95(M+Na)+。

76c)在-5℃下在鹽冰浴中向5-(2-羥基-乙基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸芐酯(1.84g,7.04mmol)和三乙胺(1974μL,14.16mmol)在二氯甲烷(60mL)中的冷卻的攪拌的混合物逐滴地添加甲磺酰氯(819.8μL,10.59mmol；供應(yīng)商＝Aldrich)。將混合物在-5℃下攪拌持續(xù)1小時，然后允許加溫至室溫并且攪拌持續(xù)1小時。使混合物在醚(100mL)和水(50mL)之間分配。將層分離。使有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過濾并且將濾液蒸發(fā)。將混合物用醚(25mL)研磨，通過硅藻土塞過濾并且將濾液蒸發(fā)。中間體5-(2-甲磺?；趸?乙基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸芐酯作為淺黃色油被分離并且在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。¹HNMR(400MHz,CDCl3,δ):7.38-7.29(m,5H),5.69(br s,1H),5.15(s,2H),4.29(t,J＝6.4Hz,2H),3.90(br s,2H),3.53(t,J＝5.8Hz,2H),3.04-2.90(m,3H),2.42(br s,2H),2.15(br s,2H)。LC/MS＝361.95(M+Na)+。

向5-(2-甲磺?；趸?乙基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸芐酯在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的攪拌的溶液添加疊氮化鈉(0.911g,14.0mmol)。將混合物攪拌并且在氮?dú)獾臍夥障录訙刂?0℃持續(xù)6小時，然后冷卻并且在室溫下攪拌過夜。使混合物在醚(50mL)和水(50mL)之間分配。水層用醚(2x50mL)萃取。將合并的有機(jī)層用水(2x 50mL)、飽和的含水氯化鈉(25mL)洗滌，然后經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且將濾液蒸發(fā)，然后在高真空下放置持續(xù)30分鐘。5-(2-疊氮基-乙基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸芐酯(1.84g)作為淺黃色油被分離。¹HNMR(400MHz,CDCl3,δ):7.38-7.29(m,5H),5.67(br s,1H),5.16(s,2H),3.89(br s,2H),3.53(t,J＝5.7Hz,2H),3.36(t,J＝6.7Hz,2H),2.27(br s,2H),2.15(br s,2H)。LC/MS＝308.95(M+Na)+。

76d)在冰水浴中在5℃下向5-(2-疊氮基-乙基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸芐酯(1.84g,6.43mmol)在二氯甲烷(50mL)中的冷卻的溶液添加m-CPBA 70-75％(70:30,間氯過氧苯甲酸:3-氯苯甲酸,3.0g,12mmol)。將混合物在5℃下攪拌持續(xù)30分鐘，然后在30分鐘內(nèi)加溫至室溫并且在室溫下攪拌過夜。將混合物用二氯甲烷(50mL)和水(25mL)稀釋，然后添加飽和的含水硫代硫酸鈉(15mL)并且攪拌持續(xù)15分鐘。將層分離。將有機(jī)層用飽和的含水碳酸氫鈉(50mL)洗滌，然后經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且將濾液蒸發(fā)。(±)-1-(2-疊氮基-乙基)-7-氧雜-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸芐酯(2.03g)作為淺黃色油被分離并且在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。

76e)將具有攪拌棒、回流冷凝器和氣體入口接頭的圓底燒瓶裝載有(±)-1-(2-疊氮基-乙基)-7-氧雜-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸芐酯(2.02g,6.68mmol)、水(4mL,200mmol)和四氫呋喃(75mL)，隨后是三苯基膦(1.93g,7.35mmol)。將混合物攪拌并且在60℃下在氮?dú)獾臍夥障录訜岢掷m(xù)2小時。觀察到氣體放出。反應(yīng)通過LC/MS和TLC(碘染色法，5:95MeOH:DCM)是完全的。將混合物冷卻至室溫并且將揮發(fā)物在減壓下蒸發(fā)。粗制的1-(2-氨基-乙基)-7-氧雜-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸芐酯被分離成淺黃色油并且在215nm處是UV可見的。

將淺黃色油溶解在異丙醇(75mL)中并且在85℃下加熱過夜。反應(yīng)通過LC/MS和HPLC(在215nm處的UV)以及TLC(碘染色法，15:85MeOH:DCM)是完全的。將混合物冷卻至室溫并且將揮發(fā)物蒸發(fā)。將淺黃色油經(jīng)由硅膠色譜法(40g,5％→25％[在MeOH中的10％NH4OH]:二氯甲烷)純化。(±)-(3,4-反式)-4-{[5-環(huán)丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基}-3-甲基哌啶-3-醇(1.23g)作為淺黃色粘稠的油被分離。結(jié)構(gòu)通過在298K和368K下的可變的溫度的¹H NMR、¹³C NMR、COSY和HMQC來確證。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ,298K):7.40-7.28(m,5H),5.10-5.00(m,2H),4.78(br s,1H),3.55-3.10(m,10H),2.91-2.73(m,3H),1.76-1.66(m,1H),1.60-1.54(m,2H),1.39-1.27(m,1H)。LC/MS＝277.00(MH)+。

76f)將具有攪拌棒的管裝載有4-(4-氯-5-環(huán)丁基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚(100.0mg,0.2592mmol)、(±)-(3,4-反式)-4-{[5-環(huán)丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基}-3-甲基哌啶-3-醇(100.0mg,0.3619mmol)、N,N-二異丙基乙胺(136.0μL,0.7808mmol)、4-二甲基氨基吡啶(3mg,0.02mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)。將管密封并且將混合物在室溫下攪拌過夜。將DMF在減壓下蒸發(fā)。將殘余物經(jīng)由硅膠色譜法(12g,0％→5％甲醇:二氯甲烷)純化。將期望的級分合并并且蒸發(fā)成紅棕色樹脂(0.124g)，該紅棕色樹脂與期望的中間體一致并且在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.02(s,1H),9.08(s,1H),8.74-8.67(m,2H),8.56(d,J＝5.1Hz,1H),7.88(d,J＝5.1Hz,1H),7.53(d,J＝7.9Hz,1H),7.49-7.44(m,1H),7.41-7.29(m,5H),7.18-7.13(m,1H),5.30-5.05(m,3H),4.65-4.45(m,1H),4.33-4.15(m,1H),4.05-3.95(m,1H),3.88-3.58(m,3H),3.50-3.10(m,2H),2.72-2.62(m,1H),2.48-2.34(m,2H),2.20-1.70(m,7H)。LC/MS＝626.28(MH)+。

將紅棕色樹脂溶解在二氯甲烷(1mL)和二甲基硫醚(1mL)中并且冷卻至0℃，然后逐滴地添加三氟化硼醚合物(320.0μL,2.50mmol)。攪拌的混合物立即形成懸浮液，加溫至室溫并且攪拌過夜。將混合物蒸發(fā)成黃色固體。將固體溶解在甲醇(10mL)中并且在減壓下蒸發(fā)。將殘余物經(jīng)由反相色譜法(以0.1％TFA作為改性劑的5％→50％乙腈:水)純化。將期望的級分合并，冷凍并且凍干。外消旋的、相對-(3aS,7aS)-1-[5-環(huán)丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-八氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-3a-醇(0.0759g,48％)作為三氟乙酸鹽被分離為黃色凍干物。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.07(s,1H),9.15(s,1H),8.80-8.70(m,4H),8.58(d,J＝5.1Hz,1H),7.86(d,J＝5.1Hz,1H),7.54(d,J＝7.9Hz,1H),7.51-7.46(m,1H),7.21-7.16(m,1H),5.80(br s,1H),4.33-4.22(m,3H),4.05-3.95(m,1H),3.35-2.94(m,5H),2.79-2.69(m,1H),2.52-2.38(m,2H),2.30-1.80(m,6H)。LC/MS＝492.18(MH)+。

式[K023]的胺可以從式[K017]的化合物來合成，如在方案[E4]中發(fā)現(xiàn)的。吡啶芐基化、隨后用NaBH₄還原并且然后苯甲?；o出式[K021]的化合物，式[K021]的化合物可以經(jīng)由環(huán)氧化和甲胺環(huán)氧化物開環(huán)(methylamine eposide opening)被轉(zhuǎn)化以給出式[K023]的化合物。利用與在方案[D3]中發(fā)現(xiàn)的程序類似的程序，[K023]可以被用于給出實施例77(及其他)。實施例77的合成的詳述在下文被概述。

方案[E3]

實施例77.(±)-(3,4-反式)-4-{[5-環(huán)丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基}-3-甲基哌啶-3-醇

77a)將3-甲基-吡啶(5.0mL,51mmol)和芐溴(6.1mL,51mmol)在甲苯(10mL,90mmol)中的溶液在50℃下加熱持續(xù)3小時。將兩相混合物冷卻并且將甲苯在減壓下蒸發(fā)。在不進(jìn)一步純化的情況下使用粗制的1-芐基-3-甲基-吡啶-1-鎓溴化物(16g)。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):9.15(s,1H),9.04(d,J＝6.1Hz,1H),8.47(d,J＝8.0Hz,1H),8.08(dd,J＝7.9,6.1Hz,1H),7.56-7.40(m,5H),5.80(s,2H),2.51(s,3H)。LC/MS＝183.98(M)+。

77b)具有攪拌棒、回流冷凝器和氣體入口接頭的500mL圓底燒瓶在氮?dú)獾臍夥障卤惶砑佑?-芐基-3-甲基-吡啶-1-鎓溴化物(14g,53mmol)在甲醇(100mL)中的溶液。將混合物在冰水浴中冷卻至5℃。將硼氫化鈉(6.0g,160mmol)分批地(0.50g x 12)添加至劇烈地攪拌的溶液。在每次添加期間注意到劇烈的氣體放出。將黃色溶液在室溫下攪拌過夜，然后蒸發(fā)至干燥。添加水(300mL)并且將混合物在室溫下攪拌持續(xù)30分鐘。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗并且用二氯甲烷(3x 100mL)萃取。使合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且將濾液蒸發(fā)。粗制的1-芐基-5-甲基-1,2,3,6-四氫-吡啶(10.3g)作為橙色油被分離并且在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):7.40-7.15(m,5H),5.41-5.36(m,1H),3.52(s,2H),2.74-2.71(m,2H),2.42(t,J＝5.7Hz,2H),2.05-1.99(m,2H),1.57-1.55(m,3H)。LC/MS＝188.01(MH)+。

77c)在室溫下經(jīng)由添加漏斗向1-芐基-5-甲基-1,2,3,6-四氫-吡啶(6.78g,36.2mmol)在甲苯(100mL)中的溶液逐滴地添加氯甲酸芐酯(7.8mL,54mmol)在甲苯(100mL)中的溶液。在添加完成之后，將混合物在100℃下在干燥的氮?dú)庀录訜岢掷m(xù)18小時。將混合物冷卻至室溫并且將揮發(fā)物蒸發(fā)。將殘余物經(jīng)由硅膠色譜法(24g,0％→20％乙酸乙酯:己烷)純化。將期望的級分合并并且蒸發(fā)。5-甲基-3,6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸芐酯(6.46g)作為黃色油被回收。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):7.40-7.28(m,5H),5.52(br s,1H),5.09(s,2H),3.76(br s,2H),3.42(br s,2H),2.07-2.00(m,2H),1.64(s,3H)。LC/MS＝231.96(MH)+和253.95(M+Na)+。

77d)在0℃下在冰水浴中向5-甲基-3,6-二氫-2H-吡啶-1-羧酸芐酯(1.0g,4.3mmol)在二氯甲烷(10mL)中的攪拌的冷卻的溶液添加m-CPBA70-75％(70:30,間氯過氧苯甲酸:3-氯苯甲酸,1.5g,6.0mmol)。將混合物攪拌并且加溫至室溫。在30分鐘之后，使混合物在二氯甲烷(50mL)和水(25mL)之間分配。將有機(jī)物用水(25mL)、然后飽和的含水碳酸氫鈉(2x 25mL)、然后飽和的含水氯化鈉(10mL)洗滌。使有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并且將濾液蒸發(fā)。(±)-1-甲基-7-氧雜-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸芐酯(1.0g)作為黃色油(1.083g)被回收并且在不進(jìn)一步純化的情況下被使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):7.40-7.28(m,5H),5.06(s,2H),3.84-3.76(m,1H),3.52-3.34(m,2H),3.16-3.02(m,2H),1.89-1.81(m,2H),1.26(s,3H)。LC/MS＝247.96(MH)+和269.95(M+Na)+。

77e)向具有壓力計和攪拌棒的厚壁壓力容器添加(±)-1-甲基-7-氧雜-3-氮雜-雙環(huán)[4.1.0]庚烷-3-羧酸芐酯(0.63g,2.5mmol)和在甲醇中的2.0M的甲胺(10mL,20mmol)。將容器密封并且將混合物加溫至50℃在防爆盾后面過夜。在加熱期間，壓力增加5psi。將混合物冷卻至室溫，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶并且將揮發(fā)物蒸發(fā)。將混合物加載至Phenomenex SX-C筒(2x 2g)上，用甲醇(2x 10mL，每次)沖洗并且將產(chǎn)物用在甲醇中的2N氨(2x 10mL，每次)釋放。將含氨的濾液合并并且在減壓下蒸發(fā)。反-(±)-3-羥基-3-甲基-4-甲基氨基-哌啶-1-羧酸芐酯(0.38g)作為黃色粘稠的油被回收，黃色粘稠的油在室溫下靜置若干天之后固化。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):7.40-7.28(m,5H),5.10-4.98(m,2H),4.67(s,1H),3.90-3.82(m,1H),3.65(dd,J＝12.7,1.3Hz,1H),3.00-2.62(m,2H),2.31-2.25(m,4H),1.79(dddd,J＝16.7,3.6,3.6,3.6Hz,1H),1.65(br s,1H),1.13-1.01(m,1H),0.97(s,3H)。LC/MS＝278.96(MH)+。

77f)將具有攪拌棒的管裝載有4-(4-氯-5-環(huán)丁基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚(100.0mg,0.2592mmol)、反-(±)-3-羥基-3-甲基-4-甲基氨基-哌啶-1-羧酸芐酯(100.0mg,0.3593mmol)、N,N-二異丙基乙胺(135.0μL,0.7750mmol)、4-二甲基氨基吡啶(3.0mg,0.024mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)。將管密封并且將混合物在室溫下攪拌過夜。將DMF在減壓下蒸發(fā)。將殘余物經(jīng)由硅膠色譜法(12g,0％→5％甲醇:二氯甲烷)純化。將期望的級分合并并且蒸發(fā)。回收的紅棕色樹脂(0.096g)通過LC/MS與期望的中間體一致。將回收的紅棕色樹脂溶解在二氯甲烷(1mL,20mmol)中，然后添加二甲基硫醚(1mL,10mmol)、隨后三氟化硼醚合物(98.53μL,0.7775mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將揮發(fā)物蒸發(fā)。將回收的黃色固體溶解在甲醇(10mL)中并且在減壓下蒸發(fā)成油。將殘余物經(jīng)由反相色譜法(以0.1％TFA作為改性劑的5％→50％乙腈:水)純化。將期望的級分合并，冷凍并且凍干。(±)-(3,4-反式)-4-{[5-環(huán)丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基}-3-甲基哌啶-3-醇(0.06652g,42％)作為三氟乙酸鹽作為黃色凍干物被回收?；厥盏漠a(chǎn)物示出非常復(fù)雜的1H NMR，這最可能是由于旋轉(zhuǎn)對映異構(gòu)(atropisomerism)。分離的材料在HPLC中是單峰。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.19-12.03(m,1H),9.50-8.20(m,6H),7.85-7.75(m,1H),7.60-7.45(m,2H),7.23-7.12(m,1H),5.62-1.12(m,21H)。LC/MS＝494.20(MH)+。

以下胺使用在指示的參考文獻(xiàn)中發(fā)現(xiàn)的程序來合成。胺[K024]使用與在US2013/0079321中發(fā)現(xiàn)的程序類似的程序來合成。[K024]用于使用與在方案D3中概述的程序類似的程序來合成實施例230、231(及其他)。胺[K025]使用與在2006/081178中發(fā)現(xiàn)的程序類似的程序來合成。[K025]用于使用與在方案D3中概述的程序類似的程序來合成實施例135(及其他)。胺[K026]使用與在J.AM.CHEM.SOC.2010,132,13111-13113中發(fā)現(xiàn)的程序類似的程序來合成。[K024]用于使用與在方案D3中概述的程序類似的程序來合成實施例207(及其他)。

中間體胺[K032]、[K034]和[K038]如在以下方案[E4]中描述的、以S或Rα-甲基芐胺開始、通過根據(jù)W.Qian等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.2012(22),1061-1067的修改的程序來制備。第一步，縮合成亞胺在甲苯中在回流下在分子篩和硫酸鎂作為脫水劑的存在下進(jìn)行以給出[K030]，[K030]被還原以給出[K031]，[K031]被氫化以給出[K032]，[K032]經(jīng)由方案D3進(jìn)行至實施例153(及其他)。中間體[K034]從中間體1經(jīng)由2步，烷基化/氫解程序來制備并且經(jīng)由方案D3進(jìn)行至實施例212(及其他)。其他對映異構(gòu)體[K038]以相同的方式利用[K035]來制備并且進(jìn)行至實施例154(及其他)。

方案[E4]

在方案[E5]中的中間體[K042]根據(jù)以下方案以2-步程序：Boc保護(hù)/芐基氫解來制備，并且經(jīng)由方案[D3]進(jìn)行至實施例155(及其他)。

方案[E5]

表A中的以下化合物根據(jù)在方案中示出的一般合成使用與在其中描述的程序和中間體類似的程序和中間體來合成。

表A

VI.生物學(xué)

PKCιIC₅₀測定

測定基于PKCι在體外使可商購的肽底物磷酸化的能力。肽底物是FAM-PKCε擬肽衍生的肽，并且包括氨基酸序列5FAM-ERMRPRKRQGSVRRRV-NH₂。在Sf21昆蟲細(xì)胞中表達(dá)的重組的、全長人類PKCι也是可商購的。內(nèi)部(in-house)表達(dá)并且純化重組的、激酶域人類PKCι。

以下程序解釋如何獲得PKCι的抑制劑的劑量應(yīng)答曲線。描述的篩選是對于384孔格式但測定可以根據(jù)需要改編為1536格式或其他格式。

將待被測試的化合物溶解在100％DMSO中。將化合物根據(jù)需要稀釋以給出在測定中的4％DMSO(v/v)的最終濃度。將1μl平鋪到立即使用的384孔黑色低結(jié)合平底測定板中。使用Matrix和MatrixPlus液體操作系統(tǒng)進(jìn)行化合物至測定板的稀釋和添加。

在篩選當(dāng)天，在包含20mM tris-HCl pH7.5、10mM MgCl₂、0.01％Triton X100、250μM EGTA以及1mM DTT的緩沖劑中制備PKCι/底物工作溶液和ATP工作溶液。使用的PKCι的最終濃度取決于蛋白質(zhì)的批次而變化，但典型地是15pM。肽底物在測定中的最終濃度是100nM。ATP在包含全長或激酶域PKCι的測定中分別以150μM或25μM的最終濃度被使用，所述濃度分別對應(yīng)于ATP對每種酶的K_M^表觀的五倍或等于ATP對每種酶的K_M^表觀。在測定中的最終緩沖劑濃度是18mM tris-HCl pH7.5、9mM MgCl₂、0.009％Triton X100、225μM EGTA以及0.9mM DTT。包括有關(guān)的對照，即沒有化合物并且沒有酶。對于全長或激酶域PKCι，使用16通道Matrix移液器分別將在30pM和200nM下的5μl PKCι/底物工作溶液添加至孔，隨后是分別在375μM或62.5μM下的4μl ATP工作溶液。允許反應(yīng)在室溫下溫育持續(xù)60分鐘，之后停止反應(yīng)并且通過20μl IMAP^TM顯影劑(Molecular Devices)的添加顯影。IMAP顯影劑由0.25％(v/v)IMAP逐步結(jié)合試劑(progressive binding reagent)、17％(v/v)IMAP逐步結(jié)合緩沖劑A以及3％(v/v)IMAP逐步結(jié)合緩沖劑B組成。然后將板在室溫下溫育持續(xù)2小時，之后使用合適的板讀數(shù)器例如Molecular Devices HT Analyst或BMG Pherastar讀數(shù)。使用在485nm的激發(fā)下和在530nm的發(fā)射下，以及在505nm下的二向色鏡的熒光偏振操作讀取板。

使用沒有化合物和沒有酶的對照值分別作為0％抑制和100％抑制來從熒光偏振值計算百分?jǐn)?shù)抑制值。IC50確定用ExcelFit軟件(IDBS)使用曲線擬合205進(jìn)行。對于每個測試板，確定Z′因數(shù)并且全部高于0.5。

可選擇地，使用固定金屬離子親和顆粒熒光偏振檢測系統(tǒng)(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)測試化合物抑制重組人類桿狀病毒表達(dá)的PKCι的激酶活性的能力。在包含1mM DTT的1X IMAP測定緩沖劑(Molecular Devices)中制備底物混合物(2X)，使得最終測定濃度是15pM PKCι(EMD Millipore,Billerica,MA)和100nM 5-熒光素-氨基磷酸酯(FAM)-PKC€-擬底物(5-FAM-ERMRPRKRQGSVRRRV-NH2)(Molecular Devices)。將2X工作溶液以5μL/孔添加到384孔黑色、非結(jié)合、平底測定板(Corning,Corning,NY)中。在100％DMSO中進(jìn)行化合物連續(xù)稀釋，然后使用BioMek NX針工具(Beckman Coulter,Indianapolis,IN)，將100nL轉(zhuǎn)移至包含5μL的2X酶/底物溶液的測定板中。通過5μL 2X ATP的添加開始酶反應(yīng)，使得最終測定濃度是150μM。將測定板在25℃溫育器中溫育持續(xù)1小時，之后是20μL檢測試劑的添加。檢測試劑包含85％1X緩沖劑A和15％1X緩沖劑B以及1:400稀釋的結(jié)合試劑。然后，將測定板在25℃溫育器中溫育持續(xù)2小時。溫育之后，使用PerkinElmer Envision^TM 2102板讀數(shù)器(PerkinElmer,Waltham,MA)在480nm的激發(fā)波長和535nm的發(fā)射波長下測量熒光偏振。

結(jié)果

實施例化合物的生物學(xué)數(shù)據(jù)在以下表中被呈現(xiàn)?；钚员魂U述如下：

IMAP測定中在150μM ATP下針對全長PKCi的IC50：

++++＝<100nM

+++＝100nM至1,000nM

++＝1,000nM至10,000nM

+＝10,000nM至40,000nM

優(yōu)選地，本申請的化合物(即式(I)的化合物和/或其鹽)在IMAP測定中在150μM ATP下針對全長PKCι具有<40μM的IC₅₀。在一個實施方案中，本申請的化合物在IMAP測定中在150μM ATP下針對全長PKCι具有40μM–10μM的IC₅₀。更優(yōu)選地，本申請的化合物在IMAP測定中在150μM ATP下針對全長PKCι具有10μM–1μM的IC₅₀。在一個實施方案中，本申請的化合物在IMAP測定中在150μM ATP下針對全長PKCι具有1μM–0.1μM的IC₅₀。更優(yōu)選地，本申請的化合物在IMAP測定中在150μM ATP下針對全長PKCι具有<0.1μM的IC₅₀。

優(yōu)選地，本申請的化合物(即式(I)的化合物或其鹽)在IMAP測定中在25μM ATP下針對激酶域PKCι具有<40μM的IC₅₀。在一個實施方案中，本申請的化合物在IMAP測定中在25μM ATP下針對激酶域PKCι具有40μM–10μM的IC₅₀。更優(yōu)選地，本申請的化合物在IMAP測定中在25μM ATP下針對激酶域PKCι具有10μM–1μM的IC₅₀。在一個實施方案中，本申請的化合物在IMAP測定中在25μM ATP下針對激酶域PKCι具有1μM–0.1μM的IC₅₀。更優(yōu)選地，本申請的化合物在IMAP測定中在25μM ATP下針對激酶域PKCι具有<0.1μM的IC₅₀。

如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，鑒于上文教導(dǎo)，本文提供的主題的許多修改和變型是可能的。因此，應(yīng)理解，在所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)，本申請的主題除了如本文具體地描述的可以以其他方式被實踐，并且本申請的范圍和權(quán)利要求意圖涵蓋所有這樣的變型。

本文參考的每個出版物通過引用以其整體并入以用于全部目的。