概括地，本發(fā)明涉及作為組蛋白脫乙酰基酶(HDAC)和激酶的抑制劑的基于稠合嘧啶的異羥肟酸鹽化合物。更特定地，本發(fā)明涉及異羥肟酸鹽取代的嘌呤或5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶衍生物、其制備方法、含有這些化合物的藥物組合物，以及這些化合物于治療涉及具有組蛋白脫乙?；富钚?、非組蛋白脫乙?；富钚院图っ富钚缘拿浮⑴c所述酶相關或有關的病癥/病況/疾病的用途。

背景技術：

人們普遍對設計、合成和開發(fā)雜合藥物或多靶點藥物感興趣，所述藥物可通過作用于兩個或更多個被證實的途徑或已驗證的靶點而增加治療概率或功效。例如，癌細胞的存活依賴于許多關鍵的途徑，因此，一種途徑的阻斷或抑制可能僅具有低的殺死癌細胞或抑制癌細胞生長的概率。癌細胞可以補償或繞過被阻斷的功能或途徑，甚至協(xié)同其功能。這一原理已被驗證，并且已用在例如用于癌癥治療的組合化學療法中，在所述組合化學療法中，一起施用藥物的組合，所述藥物例如組蛋白脫乙酰基酶(HDAC)抑制劑伏林司他以及在臨床試驗中的各種已知的藥物、用于HIV治療的雞尾酒藥物(cocktail drug)和用于抗菌治療的力百汀(augmentin)(阿莫西林和克拉維酸的混合物)。市場上也有成功的多靶點藥物，例如多激酶抑制劑舒尼替尼和索拉非尼。組合療法和多靶點藥物兩者均旨在通過調節(jié)或抑制與疾病進展有關的多個靶點、途徑或網絡來增強功效和/或克服抗藥性。組合療法或多藥療法使用一種以上的藥物，因此，其優(yōu)點在于，存在許多可用于組合的單一藥劑并且可選擇性地測試許多種藥物組合以用于研究和開發(fā)。然而，組合療法具有缺點。例如，一般來說，單一藥劑僅開發(fā)用于單一藥劑療法，并不一定針對組合療法進行了優(yōu)化。此外，并非所有的單一藥劑均適合組合療法或者與組合療法相容。確定組合中的兩種或更多種藥劑的給藥方案是一個非常復雜的過程，需要對劑量水平、施用順序和在臨床環(huán)境中潛在的藥物-藥物相互作用進行考慮。此外，除了須使用多種藥物的代價以外，組合療法可常常導致不希望的不良影響或危險的藥物-藥物相互作用。例如，在I期臨床試驗中將依維莫司與索拉非尼組合用于治療晚期肝細胞癌(HCC)，但其劑量因不良事件不能被升高至生物學有效濃度。

相比之下，作為單一藥劑的多靶點藥物分子作用于至少兩個靶點。多靶點藥物的優(yōu)點在于，單一藥劑可同時實現多個(激酶)靶點的調節(jié)。然而，可以做到這一點的藥物的數量仍然有限。由于多靶點藥物通常包括兩種母體藥物的骨架的化學特征，因此，藥物的分子量或尺寸通常較大，并且這往往導致藥物由于毒性或藥物代謝而不能實現充分暴露?；谀阁w藥物的兩個骨架設計新分子并不是一項簡單的任務。通常不能獲得所需的功效或者存在新的不希望的副作用。因此，如何組合兩個骨架以實現新的多靶點藥物是不可預測的。因此，觀察到良好活性而無不希望的副作用是令人驚訝的發(fā)現。

因此，需要提供克服或至少改善上述缺點中的一個或多個的化合物。也需要提供包含所述化合物的藥物組合物、使用所述化合物治療疾病的方法和合成所述化合物的方法。

技術實現要素：

已設計并合成一系列基于稠合嘧啶的小分子，其靶向組蛋白脫乙?；?HDAC)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-AKT-哺乳動物雷帕霉素(mTOR)靶途徑。這些分子含有抑制組蛋白脫乙?；负推渌撘阴；傅幕钚缘匿\結合基團(異羥肟酸)以及含有取代基修飾的以調節(jié)PI3K-AKT-mTOR途徑的稠合嘧啶核心。每個分子都具有針對每個靶點的獨特的效能分布(potency profile)，并且整個系列涵蓋了對于各種適應癥或應用的每個靶點所需要的廣泛效能范圍的大部分可能組合。這些分子作為多靶點藥物用于癌癥的治療和非腫瘤學應用。

在第一方面中，提供式(I)的化合物：

其中X、Y和Z獨立地選自N、CHR³或CR³，其中X、Y或Z中的至少一個是N；是單鍵或雙鍵，只要化合價允許；R¹和R²獨立地選自由以下組成的組：鍵、鹵素、任選地被取代的烷基、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷氧基、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的芳基和任選地被取代的雜芳基；R³和R⁴獨立地選自由以下組成的組：鍵、氫、鹵素、任選地被取代的烷基、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷氧基、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的芳基和任選地被取代的雜芳基；R¹、R²、R³或R⁴中的至少一個進一步獨立地被異羥肟酸鹽基團-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b取代，其中，R^a和R^b獨立地選自由以下組成的組：鍵、氫、任選地被取代的烷基、任選地被取代的?；腿芜x地被取代的氨基酸殘基；L¹、L²和L³獨立地選自由以下組成的組：鍵、任選地被取代的烷基、任選地被取代的烯基和任選地被取代的炔基；R⁵和R⁶獨立地選自由以下組成的組：鍵、O、S、NR^c、S(O)_n、任選地被取代的酰胺、任選地被取代的脲、任選地被取代的羰基脲、任選地被取代的硫脲、任選地被取代的磺酰胺、任選地被取代的氨基磺酰胺、任選地被取代的磺?；濉⑷芜x地被取代的肟、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的芳基和任選地被取代的雜芳基；其中，R^c獨立地選自由以下組成的組：鍵、氫、任選地被取代的烷基、任選地被取代的烯基、任選地被取代的炔基和任選地被取代的酰基；并且n是0至2的整數；或者其藥學上可接受的形式或前藥。

在第二方面中，提供包含如上文所定義的化合物或者其藥學上可接受的形式或前藥以及藥學上可接受的賦形劑的藥物組合物。

在本公開的其它實施方案中，公開抑制脫乙?；负?或選自由以下組成的組的激酶的方法：脂質激酶/蛋白激酶或其片段或復合物或其功能等效物以及PI3K或Akt激酶或mTOR激酶或其片段或復合物或其功能等效物，所述方法包括使所述蛋白激酶或其片段或復合物或其功能等效物和/或其輔因子暴露于有效量的如上文所定義的化合物。

在一些實施方案中，脫乙酰基酶是組蛋白脫乙?；富蚱淦位驈秃衔锘蚱涔δ艿刃铩Ｔ谝恍嵤┓桨钢?，組蛋白脫乙酰基酶或其片段或復合物是HDAC1或HDAC2或HDAC3或HDAC6或HDAC8或其片段、或其復合物或其功能等效物。在一些實施方案中，HDAC是HDAC1或HDAC6或其片段或復合物或其功能等效物。

在一些實施方案中，脂質激酶/蛋白激酶是PI3K激酶或其片段或其復合物或其功能等效物。在一些實施方案中，PI3K激酶或其片段或其復合物或其功能等效物是I類PI3K或其片段或其復合物或其功能等效物。

在一些實施方案中，蛋白激酶是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶或脂質激酶或其片段或復合物或其功能等效物。在一些實施方案中，絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶或其片段或復合物是mTOR蛋白激酶或其片段、或其復合物或其功能等效物。在一些實施方案中，絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶是mTORC1或其片段或復合物或其功能等效物。

有利的是，所述化合物可含有抑制組蛋白脫乙?；负推渌撘阴；傅幕钚缘匿\結合基團(異羥肟酸)以及有取代基修飾以調節(jié)PI3K-AKT-mTOR途徑的稠合嘧啶核心。有利的是，所述化合物可含有鋅結合基團和稠合嘧啶核心兩者，以便它可以同時抑制組蛋白脫乙?；负推渌撘阴；傅幕钚砸约罢{節(jié)PI3K-AKT-mTOR途徑。進一步有利的是，由于所述化合物含有鋅結合基團，因此，其可以抑制任何在其活性位點含有鋅的酶。更有利的是，所述化合物可以用作組蛋白脫乙酰基酶和其它脫乙?；傅幕钚缘囊种苿?。所述化合物可以用作PI3K-AKT-mTOR途徑的調節(jié)劑。

更有利的是，針對每個靶點，即針對HDAC或激酶的組分在同一分子內，從而使其彼此相容。這克服了不良藥物-藥物相互作用的問題。此外，針對每個靶點的每個組分可以分別在其納入位置和其可具有的取代基方面進行優(yōu)化。這又可實現對藥物的活性和物理化學性質的調節(jié)。進一步有利的是，所述化合物可以通過靶向兩個單獨的靶點以疊加或協(xié)同方式起作用。因此，可將對每個靶點最有效的基團置于同一分子內。另外，對物理化學性質的相容性、結構-活性關系和化合物功效的測試的優(yōu)化可以對單一藥劑進行，而不必測試多種藥劑。

進一步有利的是，所述化合物以每個分子都具有針對每個靶點的獨特的效能分布(從低至高不等)的方式設計和產生。這表明，可對化合物進行微調，以便它可以經調整而對不同靶點具有不同功效以用于各種適應癥或應用。例如，用于HDAC/PI3K抑制的效能組合可以描述為：高/高、高/中、高/低、中/高、中/中、中/低、低/高、低/中和低/低。根據效能組合，可以靶向靶酶的任何組合。此外，通過具有寬范圍的具有各種效能組合的化合物，可模擬用于組合療法的組合文庫。進一步有利的是，對于特定的癌癥或病況，最好的化合物可通過在體外和/或體內對其進行評估來選擇。

更有利的是，所述化合物是小尺寸的。已發(fā)現，這些小尺寸分子的毒性較低并且不良藥物影響的發(fā)生率較低，同時保持高水平的活性。

實際上，通過雜合或合并或從頭設計來設計和合成起作用的多靶點分子并不是一項易于實現的任務。

在一些實施方案中，使所述一種或多種蛋白激酶暴露于所述化合物的方法包括向含有所述一種或多種蛋白激酶的哺乳動物施用所述化合物。

在其它實施方案中，提供治療或預防哺乳動物病況的方法，其中抑制一種或多種選自由絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶或其片段或復合物或其功能等效物以及PI3K激酶或其片段或復合物或其功能等效物組成的組的蛋白激酶預防、抑制或改善所述病況的病狀或癥狀，所述方法包括施用治療有效量的如上文所定義的化合物。

在一些實施方案中，所述病況是癌癥、血管發(fā)生病癥或病理性血管發(fā)生、纖維化、炎性病況、哮喘、神經病癥、神經變性病癥、肌肉變性病癥、自身免疫性病癥、血液病癥或骨髓病癥。在一些實施方案中，癌癥選自由以下組成的組：血液學癌癥和實體瘤，例如骨髓增殖性病癥(特發(fā)性骨髓纖維化、真性紅細胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥、慢性髓樣白血病)、髓樣化生、慢性髓單核細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、急性成紅細胞白血病、霍奇金病和非霍奇金病、B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、急性T細胞白血病、骨髓增生異常綜合征、漿細胞病癥、多毛細胞白血病、卡波西氏肉瘤、淋巴瘤；婦科癌癥，例如乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、陰道和外陰癌、子宮內膜增生；胃腸道癌癥，例如結腸直腸癌、息肉、肝癌、胃癌、胰腺癌、膽囊癌；泌尿道癌，例如前列腺癌、腎癌和腎臟癌、膀胱癌、尿道癌、陰莖癌；皮膚癌，例如黑色素瘤；腦腫瘤，例如膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、星形細胞瘤、室管膜瘤、腦干膠質瘤、髓母細胞瘤、腦膜瘤、星形細胞瘤、少突神經膠質瘤；頭頸癌，例如鼻咽癌、喉癌；呼吸道癌癥，例如肺癌(NSCLC和SCLC)、間皮瘤；眼部疾病，例如視網膜母細胞瘤；肌肉骨骼疾病，例如骨肉瘤、肌肉骨骼腫瘤；鱗狀細胞癌和類纖維瘤。

在其它實施方案中，提供如上文所定義的化合物抑制一種或多種選自由HDAC和非組蛋白脫乙?；富蚱淦位驈秃衔锘蚱涔δ艿刃锝M成的組的脫乙酰基酶的用途。

在甚至其它實施方案中，提供如上文所定義的化合物抑制一種或多種選自由絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶或其片段或復合物或其功能等效物以及Akt或mTOR激酶或其片段或復合物或其功能等效物組成的組的蛋白激酶的用途。

在一些實施方案中，蛋白激酶是PI3K激酶或其片段或其復合物或其功能等效物。在一些實施方案中，PI3K激酶或其片段或其復合物或其功能等效物是I類PI3K或其片段或其復合物或其功能等效物。

在第三方面中，提供抑制細胞中的HDAC和/或PI3K的方法，所述方法包括向細胞施用如上文所定義的化合物或者其藥學上可接受的形式或前藥。

在一些實施方案中，提供預防或治療個體增殖性病況的方法，所述方法包括施用治療有效量的如上文所定義的化合物。

在第四方面中，提供治療HDAC或PI3K相關病癥的方法，所述方法包括向需要治療的個體施用如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物。

在第五方面中，提供治療HDAC和PI3K相關病癥的方法，所述方法包括向需要治療的個體施用如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物。

在第六方面中，提供調節(jié)干細胞的自我更新或分化的方法，所述方法包括向需要治療的個體施用如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物。

在其它實施方案中，提供如上文所定義的化合物于制備用于治療動物病況的藥劑的用途，其中抑制一種或多種選自由HDAC和非組蛋白脫乙?；富蚱淦位驈秃衔锘蚱涔δ艿刃锝M成的組的脫乙?；割A防、抑制或改善所述病況的病狀或癥狀。

在其它實施方案中，提供如上文所定義的化合物于制備用于治療動物病況的藥劑的用途，其中抑制一種或多種選自由絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶或其片段或復合物或其功能等效物以及PI3K激酶或其片段或復合物或其功能等效物組成的組的蛋白激酶預防、抑制或改善所述病況的病狀或癥狀。

在第七方面中，提供如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物于制備用于治療HDAC或PI3K相關病癥的藥劑的用途。

在第八方面中，提供如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物于制備用于治療HDAC和PI3K相關病癥的藥劑的用途。

在第九方面中，提供如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物于制備用于調節(jié)干細胞的自我更新或分化的藥劑的用途。

在其它實施方案中，提供如上文所定義的化合物或其藥學上可接受的鹽、N-氧化物或前藥于治療病況的用途，其中抑制一種或多種選自由絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶或其片段或復合物或其功能等效物以及PI3K激酶或其片段或復合物或其功能等效物組成的組的蛋白激酶預防、抑制或改善所述病況的病狀或癥狀。

在一些實施方案中，蛋白激酶是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶或其片段或復合物或其功能等效物。在一些實施方案中，絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶或其片段或復合物是mTOR蛋白激酶或其片段、或其復合物或其功能等效物。在一些實施方案中，絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶是mTORC1或其片段或復合物或其功能等效物。

在一些實施方案中，蛋白激酶是PI3K激酶或其片段或其復合物或其功能等效物。在一些實施方案中，PI3K激酶或其片段或其復合物或其功能等效物是I類PI3K或其片段或其復合物或其功能等效物。

在一些實施方案中，絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶或其片段或復合物是Akt蛋白激酶或其片段、或其復合物或其功能等效物。

在其它實施方案中，提供將細胞重新編程為誘導性多能干細胞(iPS細胞)的方法。所述方法包括向從個體分離的細胞施用治療有效量的如上文所定義的化合物。

在其它實施方案中，提供如上文所定義的化合物于制備用于治療個體增殖性病況的藥劑的用途。

在一些實施方案中，所述病況是癌癥、血管發(fā)生病癥或病理性血管發(fā)生、纖維化、炎性病況、哮喘、神經病癥、神經變性病癥、肌肉變性病癥、自身免疫性病癥、血液病癥或骨髓病癥。在一些實施方案中，癌癥選自由以下組成的組：血液學癌癥和實體瘤，例如骨髓增殖性病癥(特發(fā)性骨髓纖維化、真性紅細胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥、慢性髓樣白血病)、髓樣化生、慢性髓單核細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、急性成紅細胞白血病、霍奇金病和非霍奇金病、B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、急性T細胞白血病、骨髓增生異常綜合征、漿細胞病癥、多毛細胞白血病、卡波西氏肉瘤、淋巴瘤；婦科癌癥，例如乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、陰道和外陰癌、子宮內膜增生；胃腸道癌癥，例如結腸直腸癌、息肉、肝癌、胃癌、胰腺癌、膽囊癌；泌尿道癌，例如前列腺癌、腎癌和腎臟癌、膀胱癌、尿道癌、陰莖癌；皮膚癌，例如黑色素瘤；腦腫瘤，例如膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、星形細胞瘤、室管膜瘤、腦干膠質瘤、髓母細胞瘤、腦膜瘤、星形細胞瘤、少突神經膠質瘤；頭頸癌，例如鼻咽癌、喉癌；呼吸道癌癥，例如肺癌(NSCLC和SCLC)、間皮瘤；眼部疾病，例如視網膜母細胞瘤；肌肉骨骼疾病，例如骨肉瘤、肌肉骨骼腫瘤；鱗狀細胞癌和類纖維瘤。

有利的是，如上文所定義的化合物對HDAC酶和PI3K激酶表現出抑制活性并且對多種人腫瘤細胞系表現出抗增殖活性。大多數如上文所定義的化合物表現出良好的藥物樣性質，即，體外代謝穩(wěn)定性、溶解性和期望的親脂性。進一步有利的是，所述化合物也對腫瘤細胞中的多個靶點顯示出活性，即，由于抑制HDAC而使組蛋白和α-微管蛋白超乙酰化；PI3K-AKT-mTOR途徑：減少磷酸化Akt(Ser473)或抑制mTORC2的活性，以及減少磷酸化P70S6K(Thr389)/磷酸化P85S6K(Thr412)、磷酸化S6(Ser240/244)和磷酸化4E-BP1(Thr37/46)或抑制mTOCR1的活性。更有利的是，這些化合物也誘導PC-3細胞和MV-4-11細胞的細胞凋亡、MV-4-11細胞的細胞死亡，比PI3k抑制劑GDC-0941更加有效。

有利的是，這些化合物也調節(jié)腫瘤模型中的生物藥物靶點。所述化合物當在荷瘤小鼠中口服給藥時誘導PC-3前列腺腫瘤中的組蛋白超乙酰化，并通過不同的施用途徑誘導MV4-11異種移植物腫瘤中的組蛋白超乙酰化。所述化合物還在HCC模型，例如NCr裸小鼠HepG2異種移植物模型和CB17 scid小鼠HepG2異種移植物模型以及HuH-7 HCC異種移植物模型中表現出優(yōu)良的抗腫瘤活性。所述化合物還被證實當在4T1小鼠轉移性乳腺癌模型、NCI-H460肺癌異種移植物模型和MV4-11白血病異種移植物模型中口服給藥時在許多種異種移植物模型中具有廣泛的抗腫瘤活性。

本公開進一步涉及用于合成式(I)的化合物和其前體的方法。

在第十方面中，提供用于合成式(I)的化合物的方法，所述方法包括以下步驟：(a)提供鹵素二取代的基于嘌呤的化合物或鹵素二取代的基于稠合嘧啶的化合物；(b)使步驟(a)的化合物中的胺(-NH-基團)烷基化；(c)選擇性地或依序地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換步驟(b)的中間化合物的鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(d)選擇性地使步驟(c)的中間化合物與具有結構-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b的被保護的異羥肟酸基團或酯(異羥肟酸前體)偶合；以及(e)將步驟(d)的中間化合物的被保護的異羥肟酸鹽或酯在反應條件下轉化為異羥肟酸以形成式(I)的化合物。

在第十一方面中，提供用于合成式(I)的化合物的方法，所述方法包括以下步驟：(a)提供鹵素二取代的基于嘌呤的化合物或鹵素二取代的基于稠合嘧啶的化合物；(b)選擇性地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換所述化合物的一個鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(c)使步驟(b)的中間化合物中的胺(-NH-基團)烷基化；(d)選擇性地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換步驟(c)的中間化合物的其余鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(e)選擇性地使步驟(d)的中間化合物與具有結構-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b的被保護的異羥肟酸基團或酯(異羥肟酸前體)偶合；以及(f)將步驟(e)的中間化合物的被保護的異羥肟酸鹽或酯在反應條件下轉化為異羥肟酸以形成式(I)的化合物。

在第十二方面中，提供用于合成式(I)的化合物的方法，

所述方法包括以下步驟：(a)提供鹵素二取代的基于嘌呤的化合物或鹵素二取代的基于稠合嘧啶的化合物；(b)使步驟(a)的化合物中的胺烷基化；(c)選擇性地或依序地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換步驟(b)的中間化合物的鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(d)使步驟(c)的中間化合物中的對應于式(I)的Y位置的碳原子烷基化；(e)選擇性地使步驟(d)的中間化合物與具有結構-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b的被保護的異羥肟酸基團或酯(異羥肟酸酯前體)偶合；以及(f)將步驟(e)的中間化合物的被保護的異羥肟酸鹽或酯在反應條件下轉化為異羥肟酸以形成式(I)的化合物。

在第十三方面中，提供用于合成式(I)的化合物的方法，所述方法包括以下步驟：(a)提供鹵素二取代的基于嘌呤的化合物或鹵素二取代的基于稠合嘧啶的化合物；(b)選擇性地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換所述化合物的一個鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(c)使步驟(b)的中間化合物中的胺(-NH-基團)烷基化；(d)使步驟(c)的中間化合物中的對應于式(I)的Y位置的碳原子烷基化；(e)選擇性地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換步驟(d)的中間化合物的其余鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(f)選擇性地使步驟(e)的化合物與具有結構-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b的被保護的異羥肟酸基團或酯(異羥肟酸前體)偶合；以及(g)將步驟(f)的中間化合物的被保護的異羥肟酸鹽或酯在反應條件下轉化為異羥肟酸以形成式(I)的化合物。

本教導的這些和其它特征在本文中闡述。

具體實施方式

定義

在本說明書中使用了許多為本領域技術人員所熟知的術語。然而，出于清楚的目的，將對許多術語進行定義。本文所用的以下詞語和術語應當具有所指示的含義：

在下文許多取代基的定義中，指出“所述基團可以是末端基團或橋連基團”。此舉旨在表明該術語的使用意在包括其中基團是分子的兩個其它部分之間的連接體以及其中基團是末端部分的情況。使用術語烷基作為實例，一些出版物使用術語“亞烷基”用于橋連基團，因此在這些其它出版物中，術語“烷基”(末端基團)與“亞烷基”(橋連基團)之間有所區(qū)別。在本申請中，未作出這樣的區(qū)別，并且大多數基團可以是橋連基團或末端基團。

“?；笔侵窻-C(＝O)-基團，其中R基團可以是如本文所定義的任選地被取代的烷基、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的芳基或任選地被取代的雜芳基。?；膶嵗ㄒ阴；?、苯甲酰基和氨基酸衍生的氨基?；Ｋ龌鶊F可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過羰基碳鍵合到分子的其余部分。

“酰基氨基”是指R-C(＝O)-NH-基團，其中R基團可以是如本文所定義的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氮原子鍵合到分子的其余部分。

作為基團或基團的一部分的“烯基”表示含有至少一個碳-碳雙鍵的在正鏈中優(yōu)選具有2-12個碳原子、更優(yōu)選2-10個碳原子、最優(yōu)選2-6個碳原子的可以是直鏈或支鏈的脂族烴基。所述基團可以在正鏈中含有多個雙鍵，并且每個雙鍵的取向獨立地為E或Z。示例性烯基包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基和壬烯基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

“烯氧基”是指烯基-O-基團，其中烯基如本文所定義。優(yōu)選的烯氧基是C₁-C₆烯氧基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氧原子鍵合到分子的其余部分。

除非另有說明，否則作為基團或基團的一部分的“烷基”是指直鏈或支鏈脂族烴基，優(yōu)選C₁-C₁₂烷基，更優(yōu)選C₁-C₁₀烷基，最優(yōu)選C₁-C₆烷基。合適的直鏈和支鏈C₁-C₆烷基取代基的實例包括甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、己基等。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

除非說明，否則“烷基氨基”包括單烷基氨基和二烷基氨基兩者。“單烷基氨基”是指烷基-NH-基團，其中烷基如本文所定義?！岸榛被笔侵?烷基)₂N-基團，其中每個烷基可相同或不同并且各自如本文對于烷基所定義。烷基優(yōu)選為C₁-C₆烷基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氮原子鍵合到分子的其余部分。

“烷基氨基羰基”是指式(烷基)_x(H)_yNC(＝O)-的基團，其中烷基如本文所定義，x為1或2，并且X+Y的和＝2。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過羰基碳鍵合到分子的其余部分。

“烷氧基”是指烷基-O-基團，其中烷基如本文所定義。優(yōu)選地，烷氧基是C₁-C₆烷氧基。實例包括但不限于甲氧基和乙氧基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

“烷氧基烷基”是指烷氧基-烷基-基團，其中烷氧基和烷基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過烷基鍵合到分子的其余部分。

“烷氧基芳基”是指烷氧基-芳基-基團，其中烷氧基和芳基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過芳基鍵合到分子的其余部分。

“烷氧基羰基”是指烷基-O-C(＝O)-基團，其中烷基如本文所定義。烷基優(yōu)選為C₁-C₆烷基。實例包括但不限于甲氧基羰基和乙氧基羰基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過羰基碳鍵合到分子的其余部分。

“烷氧基環(huán)烷基”是指烷氧基-環(huán)烷基-基團，其中烷氧基和環(huán)烷基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過環(huán)烷基鍵合到分子的其余部分。

“烷氧基雜芳基”是指烷氧基-雜芳基-基團，其中烷氧基和雜芳基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過雜芳基鍵合到分子的其余部分。

“烷氧基雜環(huán)烷基”是指烷氧基-雜環(huán)烷基-基團，其中烷氧基和雜環(huán)烷基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過雜環(huán)烷基鍵合到分子的其余部分。

“烷基亞磺?；笔侵竿榛?S-(＝O)-基團，其中烷基如本文所定義。烷基優(yōu)選為C₁-C₆烷基。示例性烷基亞磺?；ǖ幌抻诩谆鶃喕酋；鸵一鶃喕酋；?。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過硫原子鍵合到分子的其余部分。

“烷基磺?；笔侵竿榛?S(＝O)₂-基團，其中烷基如上文所定義。烷基優(yōu)選為C₁-C₆烷基。實例包括但不限于甲基磺?；鸵一酋；Ｋ龌鶊F可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過硫原子鍵合到分子的其余部分。

作為基團或基團的一部分的“炔基”是指含有碳-碳三鍵的在正鏈中優(yōu)選具有2-12個碳原子、更優(yōu)選2-10個碳原子、更優(yōu)選2-6個碳原子的可以是直鏈或支鏈的脂族烴基。示例性結構包括但不限于乙炔基和丙炔基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

“炔氧基”是指炔基-O-基團，其中炔基如本文所定義。優(yōu)選的炔氧基是C₁-C₆炔氧基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氧原子鍵合到分子的其余部分。

作為基團或基團的一部分的“氨基酸”是指具有至少一個伯氨基、仲氨基、叔氨基或季氨基以及至少一個酸基團，其中所述酸基團可以是羧酸、磺酸或膦酸，或者它們的混合物。相對于酸基團，氨基可以是“α”、“β”、“γ”…至“ω”位。氨基酸可以是天然或合成的，并且可以包括它們的衍生物?！鞍被帷钡闹麈溈梢员灰粋€或多個選自鹵素、羥基、胍基、雜環(huán)基團的基團取代。因此，術語“氨基酸”在其范圍內還包括甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、精氨酸和組氨酸、?；撬?、甜菜堿、N-甲基丙氨酸等。氨基酸的(L)和(D)形式都包括在本公開的范圍內。另外，適合用于本公開的氨基酸可以衍生化，以包括被羥基化、磷酸化、磺酸化、?；吞腔陌被?，此處僅舉幾例。

“氨基酸殘基”是指缺少氨基的氫原子(-NH-CHR-COOH)、或者羧基的羥基部分(NH2-CHR-CO-)、或者兩者(-NH-CHR-CO-)的氨基酸結構。

“氨基”是指形式-NR_aR_b的基團，其中R_a和R_b分別選自包括但不限于以下的組：氫、任選地被取代的烷基、任選地被取代的烯基、任選地被取代的炔基和任選地被取代的芳基。

“氨基烷基”是指NH₂-烷基-基團，其中烷基如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過烷基鍵合到分子的其余部分。

“氨基磺?；笔侵窷H₂-S(＝O)₂-基團。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過硫原子鍵合到分子的其余部分。

作為基團或基團的一部分的“芳基”表示(i)任選地被取代的單環(huán)或稠合多環(huán)芳族碳環(huán)(環(huán)原子全部為碳的環(huán)結構)，優(yōu)選每個環(huán)具有5至12個原子。芳基的實例包括苯基、萘基等；(ii)任選地被取代的部分飽和的二環(huán)芳族碳環(huán)部分，其中苯基和C_5-7環(huán)烷基或C_5-7環(huán)烯基稠合在一起以形成環(huán)狀結構，例如四氫萘基、茚基或茚滿基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。典型地，芳基是C₆-C₁₈芳基。

“芳基烯基”是指芳基-烯基-基團，其中芳基和烯基如本文所定義。示例性芳基烯基包括苯基烯丙基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過烯基鍵合到分子的其余部分。

“芳基烷基”是指芳基-烷基-基團，其中芳基和烷基如本文所定義。優(yōu)選的芳基烷基含有C_1-5烷基部分。示例性芳基烷基包括芐基、苯乙基、1-萘甲基和2-萘甲基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過烷基鍵合到分子的其余部分。

“芳基烷氧基”是指芳基-烷基-O-基團，其中烷基和芳基如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氧原子鍵合到分子的其余部分。

除非說明，否則“芳基氨基”包括單芳基氨基和二芳基氨基兩者。單芳基氨基是指式芳基NH-的基團，其中芳基如本文所定義。二芳基氨基是指式(芳基)₂N-的基團，其中每個芳基可相同或不同并且各自如本文對于芳基所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氮原子鍵合到分子的其余部分。

“芳基雜烷基”是指芳基-雜烷基-基團，其中芳基和雜烷基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過雜烷基鍵合到分子的其余部分。

“芳氧基”是指芳基-O-基團，其中芳基如本文所定義。優(yōu)選地，芳氧基是C₆-C₁₈芳氧基，更優(yōu)選C₆-C₁₀芳氧基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氧原子鍵合到分子的其余部分。

“芳基磺?；笔侵阜蓟?S(＝O)₂-基團，其中芳基如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過硫原子鍵合到分子的其余部分。

“鍵”是化合物或分子中的原子之間的鍵聯(lián)。鍵可以是單鍵、雙鍵或三鍵。

“環(huán)烯基”是指含有至少一個碳-碳雙鍵并且優(yōu)選每個環(huán)具有5至10個碳原子的非芳族單環(huán)或多環(huán)環(huán)系統(tǒng)。示例性單環(huán)環(huán)烯基環(huán)包括環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基或環(huán)庚烯基。環(huán)烯基可被一個或多個取代基取代。典型地，環(huán)烯基是C₃-C₁₂烯基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

除非另有說明，否則“環(huán)烷基”是指優(yōu)選每個環(huán)含有3至9個碳的飽和單環(huán)、或稠合、或螺多環(huán)碳環(huán)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。它包括單環(huán)系統(tǒng)，例如環(huán)丙基和環(huán)己基；雙環(huán)系統(tǒng)，例如萘烷；以及多環(huán)系統(tǒng)，例如金剛烷。典型地，環(huán)烷基是C₃-C₁₂烷基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

“環(huán)烷基烷基”是指環(huán)烷基-烷基-基團，其中環(huán)烷基和烷基部分如本文所定義。示例性單環(huán)烷基烷基包括環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基和環(huán)庚基甲基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過烷基鍵合到分子的其余部分。

“環(huán)烷基烯基”是指環(huán)烷基-烯基-基團，其中環(huán)烷基和烯基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過烯基鍵合到分子的其余部分。

“環(huán)烷基雜烷基”是指環(huán)烷基-雜烷基-基團，其中環(huán)烷基和雜烷基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過雜烷基鍵合到分子的其余部分。

“環(huán)烷氧基”是指環(huán)烷基-O-基團，其中環(huán)烷基如本文所定義。優(yōu)選地，環(huán)烷氧基是C₁-C₆環(huán)烷氧基。實例包括但不限于環(huán)丙氧基和環(huán)丁氧基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氧原子鍵合到分子的其余部分。

“環(huán)烯氧基”是指環(huán)烯基-O-基團，其中環(huán)烯基如本文所定義。優(yōu)選地，環(huán)烯氧基是C₁-C₆環(huán)烯氧基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氧原子鍵合到分子的其余部分。

“環(huán)氨基”是指在至少一個環(huán)中含有至少一個氮的飽和單環(huán)、雙環(huán)或多環(huán)的環(huán)。每個環(huán)優(yōu)選為3至10元，更優(yōu)選為4至7元。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氮原子鍵合到分子的其余部分。

“鹵代烷基”是指其中一個或多個氫原子已被替換為選自由氟、氯、溴和碘組成的組的鹵素原子的如本文所定義的烷基。典型地，鹵代烷基具有式C_nH_(2n+1-m)X_m，其中每個X獨立地選自由F、Cl、Br和I組成的組。在這種類型的基團中，n典型地為1至10，更優(yōu)選1至6，最優(yōu)選1至3。m典型地為1至6，更優(yōu)選1至3。鹵代烷基的實例包括氟甲基、二氟甲基和三氟甲基。

“鹵代烯基”是指其中一個或多個氫原子已被替換為獨立地選自由F、Cl、Br和I組成的組的鹵素原子的如本文所定義的烯基。

“鹵代炔基”是指其中一個或多個氫原子已被替換為獨立地選自由F、Cl、B_r和I組成的組的鹵素原子的如本文所定義的炔基。

“鹵素”表示氯、氟、溴或碘。

“雜烷基”是指優(yōu)選在鏈中具有2至12個碳、更優(yōu)選2至6個碳并且其中一個或多個碳被選自S、O、P和N的雜原子替換的直鏈或支鏈烷基。示例性雜烷基包括烷基醚、仲烷基胺和叔烷基胺、酰胺、烷基硫醚等。雜烷基的實例還包括羥基C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基C₁-C₆烷基、氨基C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基氨基C₁-C₆烷基和二(C₁-C₆烷基)氨基C₁-C₆烷基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

“雜烷氧基”是指雜烷基-O-基團，其中雜烷基如本文所定義。優(yōu)選地，雜烷氧基是C₁-C₆雜烷氧基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

單獨或作為基團的一部分的“雜芳基”是指含有在芳環(huán)中具有一個或多個雜原子作為環(huán)原子且其余環(huán)原子為碳原子的芳環(huán)(優(yōu)選5元或6元芳環(huán))的基團。合適的雜原子包括氮、氧和硫。雜芳基的實例包括噻吩、苯并噻吩、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并唑、苯并噻唑、苯并異噻唑、萘并[2,3-b]噻吩、呋喃、異吲嗪、二苯并哌喃(xantholene)、氧硫雜蒽(phenoxatine)、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、四唑、吲哚、異吲哚、1H-吲唑、嘌呤、喹啉、異喹啉、酞嗪、萘啶、喹喔啉、噌啉、咔唑、菲啶、吖啶、吩嗪、噻唑、異噻唑、吩噻嗪、唑、異唑、呋咱、吩嗪、2-、3-或4-吡啶基、2-、3-、4-、5-或8-喹啉基、1-、3-、4-或5-異喹啉基、1-、2-或3-吲哚基以及2-或3-噻吩基。典型地，雜芳基是C₁-C₁₈雜芳基。雜芳基可以包含3至8個環(huán)原子。雜芳基可以包含1至3個獨立地選自由N、O和S組成的組的雜原子。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

“雜芳基烷基”是指雜芳基-烷基-基團，其中雜芳基和烷基部分如本文所定義。優(yōu)選的雜芳基烷基含有低級烷基部分。示例性雜芳基烷基包括吡啶基甲基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過烷基鍵合到分子的其余部分。

“雜芳基烯基”是指雜芳基-烯基-基團，其中雜芳基和烯基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過烯基鍵合到分子的其余部分。

“雜芳基雜烷基”是指雜芳基-雜烷基-基團，其中雜芳基和雜烷基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過雜烷基鍵合到分子的其余部分。

“雜芳基氨基”是指含有在芳環(huán)中具有至少一個氮和至少另一個雜原子作為環(huán)原子，優(yōu)選在至少一個環(huán)中具有1至3個雜原子的芳環(huán)(優(yōu)選5元或6元芳環(huán))的基團。合適的雜原子包括氮、氧和硫。芳基氨基和芳基如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氮原子鍵合到分子的其余部分。

“雜芳氧基”是指雜芳基-O-基團，其中雜芳基如本文所定義。優(yōu)選地，雜芳氧基是C₁-C₁₈雜芳氧基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氧原子鍵合到分子的其余部分。

“雜環(huán)”是指含有至少一個選自由氮、硫和氧組成的組的雜原子作為環(huán)原子的飽和的、部分不飽和的或完全不飽和的單環(huán)、雙環(huán)或多環(huán)環(huán)系統(tǒng)。雜環(huán)部分的實例包括雜環(huán)烷基、雜環(huán)烯基和雜芳基。

“雜環(huán)烯基”是指如本文所定義但含有至少一個雙鍵的雜環(huán)烷基。典型地，雜環(huán)烯基是C₂-C₁₂雜環(huán)烯基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

“雜環(huán)烷基”是指在至少一個環(huán)中含有至少一個選自氮、硫、氧的雜原子，優(yōu)選1至3個雜原子的飽和單環(huán)、雙環(huán)或多環(huán)的環(huán)。每個環(huán)優(yōu)選為3至10元，更優(yōu)選為4至7元。合適的雜環(huán)烷基取代基的實例包括吡咯烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、哌啶基、哌嗪基、四氫吡喃基、嗎啉基、1,3-二氮雜環(huán)庚烷、1,4-二氮雜環(huán)庚烷、1,4-氧氮雜環(huán)庚烷和1,4-氧硫雜環(huán)庚烷。典型地，雜環(huán)烷基是C₂-C₁₂雜環(huán)烷基。雜環(huán)烷基可以包含3至8個環(huán)原子。雜環(huán)烷基可以包含1至3個獨立地選自由N、O和S組成的組的雜原子。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

“雜環(huán)烷基烷基”是指雜環(huán)烷基-烷基-基團，其中雜環(huán)烷基和烷基部分如本文所定義。示例性雜環(huán)烷基烷基包括(2-四氫呋喃基)甲基、(2-四氫噻吩基)甲基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過烷基鍵合到分子的其余部分。

“雜環(huán)烷基烯基”是指雜環(huán)烷基-烯基-基團，其中雜環(huán)烷基和烯基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過烯基鍵合到分子的其余部分。

“雜環(huán)烷基雜烷基”是指雜環(huán)烷基-雜烷基-基團，其中雜環(huán)烷基和雜烷基部分如本文所定義。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過雜烷基鍵合到分子的其余部分。

“雜環(huán)烷氧基”是指雜環(huán)烷基-O-基團，其中雜環(huán)烷基如本文所定義。優(yōu)選地，雜環(huán)烷氧基是C₁-C₆雜環(huán)烷氧基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氧原子鍵合到分子的其余部分。

“雜環(huán)烯氧基”是指雜環(huán)烯基-O-基團，其中雜環(huán)烯基如本文所定義。優(yōu)選地，雜環(huán)烯氧基是C₁-C₆雜環(huán)烯氧基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氧原子鍵合到分子的其余部分。

“雜環(huán)氨基”是指在至少一個環(huán)中含有至少一個氮以及至少另一個選自氮、硫、氧的雜原子，優(yōu)選1至3個雜原子的飽和單環(huán)、雙環(huán)或多環(huán)的環(huán)。每個環(huán)優(yōu)選為3至10元，更優(yōu)選為4至7元。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氮原子鍵合到分子的其余部分。

“羥基烷基”是指其中一個或多個氫原子已被替換為OH基的如本文所定義的烷基。典型地，羥基烷基具有式C_nH_(2n+1-x)(OH)_x。在這種類型的基團中，n典型地為1至10，更優(yōu)選1至6，最優(yōu)選1至3。x典型地為1至6，更優(yōu)選1至4。

除非另有說明，否則作為基團的“低級烷基”是指在鏈中具有1至6個碳原子、更優(yōu)選1至4個碳的直鏈或支鏈脂族烴基，例如甲基、乙基、丙基(正丙基或異丙基)或丁基(正丁基、異丁基或叔丁基)。所述基團可以是末端基團或橋連基團。

“個體”是指人或動物。

“亞磺?；笔侵窻-S(＝O)-基團，其中R基團可以是如本文所定義的OH、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過硫原子鍵合到分子的其余部分。

“亞磺?；被笔侵窻-S(＝O)-NH-基團，其中R基團可以是如本文所定義的OH、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氮原子鍵合到分子的其余部分。

“磺?；笔侵窻-S(＝O)₂-基團，其中R基團可以是如本文所定義的OH、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過硫原子鍵合到分子的其余部分。

“磺?；被笔侵窻-S(＝O)₂-NH-基團。所述基團可以是末端基團或橋連基團。如果所述基團是末端基團，則它通過氮原子鍵合到分子的其余部分。

應了解，式(I)的化合物家族包括異構體形式，包括非對映異構體、對映異構體、互變異構體以及作為“E”或“Z”構型異構體或E和Z異構體的混合物的幾何異構體。還應了解，諸如非對映異構體、對映異構體和幾何異構體等一些異構體形式可由本領域技術人員通過物理和/或化學方法進行分離。

所公開實施方案的一些化合物可作為單一立體異構體、外消旋體、和/或對映異構體和/或非對映異構體的混合物存在。所有此類單一立體異構體、外消旋體及其混合物擬屬于所描述和主張的主題的范圍內。

另外，若適用，則式(I)擬涵蓋所述化合物的溶劑化以及未溶劑化的形式。因此，各式包括具有所指示結構的化合物，包括水合以及非水合的形式。

此外，可能的是，本發(fā)明的化合物可含有一個以上不對稱碳原子。在這些化合物中，使用實線示出與不對稱碳原子的鍵意欲表示所有可能的立體異構體都意欲包括在內。使用實線示出本發(fā)明的化合物中與一個或多個不對稱碳原子的鍵并且使用實楔形或虛楔形示出相同化合物中與其它不對稱碳原子的鍵意欲表示存在非對映異構體的混合物。

如本文所用的術語“任選地被取代的”是指該術語提及的基團可以是未被取代的，或者可以被一個或多個獨立地選自以下的基團取代：烷基、烯基、炔基、硫代烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、環(huán)烯基、環(huán)烷基烯基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基雜烷基、環(huán)烷氧基、環(huán)烯氧基、環(huán)氨基、鹵代、羧基、鹵代烷基、鹵代炔基、炔氧基、雜烷基、雜烷氧基、羥基、羥基烷基、烷氧基、硫代烷氧基、烯氧基、鹵代烷氧基、鹵代烯基、鹵代炔基、鹵代烯氧基、硝基、氨基、硝基烷基、硝基烯基、硝基炔基、硝基雜環(huán)基、烷基氨基、二烷基氨基、烯基胺、氨基烷基、炔基氨基、?；?、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基芳基、烷氧基羰基、烷氧基環(huán)烷基、烷氧基雜芳基、烷氧基雜環(huán)烷基、烯?；?、炔?；?、?；被?、二?；被?、酰氧基、烷基磺酰基氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烯基、雜環(huán)烷基雜烷基、雜環(huán)烷氧基、雜環(huán)烯氧基、雜環(huán)氧基(heterocycloxy)、雜環(huán)氨基、鹵代雜環(huán)烷基、烷基亞磺?；⑼榛酋；⑼榛蚧?alkylsulfenyl)、烷基羰基氧基、烷基硫代、?；虼?、氨基磺酰基、含磷基團例如膦?；脱蹯⒒喕酋；?、亞磺?；被?、磺?；?、磺?；被⒎蓟?、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基烯基、雜芳基雜烷基、雜芳基氨基、雜芳氧基、芳基烯基、芳基烷基、烷基芳基、烷基雜芳基、芳氧基、芳基磺酰基、氰基、氰酸根、異氰酸根、-C(O)NH(烷基)和-C(O)N(烷基)₂。

術語“藥學上可接受的鹽”是指保留以上鑒定的化合物的所需生物活性的鹽，并且包括藥學上可接受的酸加成鹽和堿加成鹽。式(I)的化合物的合適的藥學上可接受的酸加成鹽可從無機酸或有機酸制備。此類無機酸的實例是鹽酸、硫酸和磷酸。適當的有機酸可選自有機酸的脂族、環(huán)脂族、芳族、雜環(huán)羧酸和磺酸類，其實例為甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸、烷基磺酸、芳基磺酸。關于藥學上可接受的鹽的其它信息可參見Remington's Pharmaceutical Sciences，第19版，Mack Publishing公司，Easton,PA 1995。在藥劑為固體的情況下，本領域技術人員應了解，本發(fā)明的化合物、藥劑和鹽可以不同結晶或多晶型形式存在，所有這些均擬屬于本公開和所示式的范圍內。

“前藥”是指通常通過代謝手段(例如通過水解、還原或氧化)在生物系統(tǒng)內轉化為式(I)的化合物的化合物。例如，含有羥基的式(I)的化合物的酯前藥可通過在體內水解轉化為母體分子。含有羥基的式(I)的化合物的合適的酯是例如甲酸酯、乙酸酯、檸檬酸酯、乳酸酯、酒石酸酯、丙二酸酯、草酸酯、水楊酸酯、丙酸酯、琥珀酸酯、富馬酸酯、馬來酸酯、亞甲基-雙-β-羥基萘甲酸酯、龍膽酸酯(gestisate)、羥乙磺酸酯、二-對甲苯?；剖狨?、甲磺酸酯、乙磺酸酯、苯磺酸酯、對甲苯磺酸酯、環(huán)己基氨基磺酸酯和奎尼酸酯。作為另一實例，含有羧基的式(I)的化合物的酯前藥可通過在體內水解轉化為母體分子。(酯前藥的實例是F.J.Leinweber,Drug Metab.Res.,18:379,1987所述的那些)。類似地，含有氨基的式(I)的化合物的?；八幙赏ㄟ^在體內水解轉化為母體分子(這些和其它官能團，包括胺的前藥的許多實例描述于Prodrugs:Challenges and Rewards(第1和2部分)；V.Stella,R.Borchardt,M.Hageman,R.Oliyai,H.Maag和J Tilley編；Springer,2007中)。

術語“治療有效量”或“有效量”是足以實現有益或所需臨床結果的量。可以分一次或多次施用來施用有效量。有效量通常足以使疾病狀態(tài)的進程減輕、改善、穩(wěn)定、逆轉、減緩或延遲。

術語“功能等效物”意欲包括本文所述的具體蛋白激酶種類的變體。應了解，激酶可具有同種型，使得雖然給定激酶同種型的一級、二級、三級或四級結構不同于原型激酶，但該分子保留作為蛋白激酶的生物活性。同種型可從群體內正常等位基因變異產生，并且包括諸如氨基酸取代、缺失、插入、截短或重復等突變。術語“功能等效物”還包括在轉錄水平產生的變體。酶(包括HDAC和PI3K)具有自轉錄變異產生的同種型。其它功能等效物包括具有改變的翻譯后修飾(例如糖基化)的激酶。

術語“重新編程的細胞”意欲包括在哺乳動物發(fā)育期間擦除和重構表觀遺傳標記，例如DNA甲基化。

詞語“基本上”不排除“完全地”，例如“基本上不含”Y的組合物可完全不含Y。必要時，詞語“基本上”可以從本發(fā)明的定義中省略。

除非另有說明，否則術語“包含(comprising和comprise)”和其語法變體意欲表示“開放”或“包括性”用語，使得它們不僅包括所列舉的要素，而且還允許包括其它未列舉的要素。

如本文所用，術語“約”在制劑的組分的濃度的背景下，通常意指所述值的±10％，更通常所述值的±7.5％，更通常所述值的±5％，更通常所述值的±4％，更通常所述值的±3％，更通常所述值的±2％，甚至更通常所述值的±1％，并且甚至更通常所述值的±0.5％。

在本公開通篇內，某些實施方案可以范圍形式公開。應了解，呈范圍形式的描述僅僅是為了方便和簡潔且不應當被解釋為對所公開范圍的范疇的不可改變的限制。因此，對一個范圍的描述應當被認為已經具體地公開了所述范圍內的所有可能的子范圍以及單個數值。例如，范圍諸如從1至6的描述應被認為具體地公開了子范圍，諸如從1至3、從1至4、從1至5、從2至4、從2至6、從3至6等，以及該范圍內的單個數值，例如1、2、3、4、5和6。這無關于范圍的廣度而適用。

某些實施方案在本文中也可以被廣泛地和一般性地進行描述。落在一般性公開范圍內的每個較狹義的物種和亞屬群也構成本公開的一部分。這包括具有附帶條件或否定限制的實施方案的一般性描述，以從類屬中除去任何主題而不管刪除的材料在本文中是否進行了具體敘述。

圖式說明

附圖說明了所公開的實施方案并且用于解釋所公開的實施方案的原理。然而，應了解，附圖設計為僅用于說明的目的，而不是作為本發(fā)明限制的定義。

圖1是示出已知HDAC抑制劑的典型種類的圖解，并且典型的HDAC抑制劑(伏林司他)包含三個部分：鋅結合基團(ZBG)、連接體以及親脂性和表面識別“CAP”基團。CAP位于HDAC酶的結合口袋的外部，因此，CAP基團可以被激酶抑制劑骨架替換，以獲得新穎的HDAC激酶雙重抑制劑。

圖2示出PI3K/mTOR抑制劑的實例。

圖3示出制備關鍵中間體7的典型程序的圖解，所述關鍵中間體7可以進一步衍生化為化合物8、9、11和12。

圖4示出繪示化合物1或3中的兩個氯原子的替代置換順序以及化合物17、19和21的制備的圖解。

圖5示出繪示當R³是氫并且X是氮時如何進一步改變化合物7(方案1，圖3)和化合物18(方案2，圖4)的R³基團的圖解。

圖6示出繪示當R³是氫并且X是氮時改變化合物14(方案2，圖4)的R³基團的替代方法的圖解。

圖7示出繪示進一步衍生化容易得到或商購的原材料(例如，4)的一般合成途徑以及制備受保護或取代的異羥肟酸(38)的程序的圖解。

圖8示出用于合成N-羥基-4-(3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯氧基)丁酰胺的反應方案。

圖9示出用于合成N-羥基-7-(2-(3-(羥基甲基)苯基)-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)庚酰胺的反應方案。

圖10示出用于合成7-(6-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)-N-羥基庚酰胺的反應方案。

圖11示出用于合成N¹-羥基-N⁸-(3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯基)辛二酰胺的反應方案。

圖12示出用于合成(E)-N-羥基-3-(4-(((2-(2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)乙基)氨基)甲基)苯基)丙烯酰胺的反應方案。

圖13示出用于合成6-((6-(2-氨基嘧啶-5-基)-9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)氨基)-N-羥基己酰胺的反應方案。

圖14示出用于合成4-((((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-N-羥基苯甲酰胺(35h)和化合物35a-f的反應方案。

圖15示出在用化合物處理的PC-3細胞中HDAC的抑制和PI3k-Akt-mTOR途徑的調節(jié)。

圖16示出在用化合物處理的MCF7細胞中PI3K-AKT-mTOR途徑的調節(jié)。

圖17示出在用化合物處理的細胞中由HDAC的抑制引起的組蛋白3(Lys 9)的超乙?；?。

圖18示出在用化合物處理的細胞中由HDAC的抑制引起的α-微管蛋白的超乙?；?。

圖19示出在用化合物處理的細胞中PI3K-AKT-(mTOR)途徑:p-Akt(Ser473)水平和mTORC2的活性的調節(jié)。

圖20示出在用化合物處理的細胞中PI3K-AKT-(mTOR)途徑:mTORC1活性的調節(jié)。

圖21示出在用化合物處理的細胞中半胱天冬酶活性的誘導。

圖22示出化合物誘導的MV-4-11細胞的死亡。

圖23示出在用化合物處理的PC-3腫瘤中的組蛋白超乙酰化。

圖24示出在用化合物處理的MV4-11腫瘤中的組蛋白超乙?；?。

圖25示出化合物在NCr裸小鼠HepG2異種移植物模型中的功效。

圖26示出化合物在CB17 scid小鼠HepG2異種移植物模型中的功效。

圖27示出化合物在NCr裸小鼠HuH-7異種移植物模型中的功效。

圖28示出化合物在4T1小鼠轉移性乳腺癌模型中的的功效。

圖29示出化合物在NCI-H460肺癌異種移植物模型中的功效。

圖30示出化合物在MV4-11異種移植物模型中的功效。

具體實施方式

雜合藥物或多靶點藥物可通過作用于兩個或更多個被證實的途徑或已驗證的靶點而增加治療概率或治療功效。例如，癌細胞的存活依賴于許多關鍵的途徑，因此，一種途徑的阻斷或抑制可能僅具有低的殺死靶細胞或抑制靶細胞生長的概率。舉例來說，如果對于每個途徑，成功的概率被認為是0.4或40％，則失敗的概率是1-0.4＝0.6。如果靶向兩種途徑(或靶點)，則失敗的概率會變成0.6×0.6＝0.36，而成功的概率會大幅增加(1-0.36＝0.64)。如果靶向三個途徑，則成功的機會將是0.784，并且如此類推地增加。

生物系統(tǒng)并不簡單，因為它們可以互相補償并且協(xié)同其功能。然而，靶向多個途徑的原理已被驗證，并且已用在例如用于癌癥治療的組合化學療法中。實例包括藥物的組合，所述藥物例如組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑伏林司他以及在臨床試驗中的各種已知的藥物、用于HIV治療的雞尾酒藥物和用于抗菌治療的力百汀(阿莫西林和克拉維酸的混合物)。市場上也有成功的多靶點藥物，例如多激酶抑制劑舒尼替尼和索拉非尼。然而，代替使用兩種或更多種藥物用于組合或偶然發(fā)現一些多靶點藥物，可設計新穎的多靶點藥物分子以靶向已驗證的和/或新的藥物靶點的組合，所述多靶點藥物分子通過納入每個靶點所需要的關鍵化學結構基序以及全局修飾靶點分布和藥物樣性質以疊加或協(xié)同方式起作用。這種類型的藥物的設計和開發(fā)可能更具挑戰(zhàn)性，但其優(yōu)點在于，所述分子是新的化學實體，而不是兩種或更多種藥物的物理混合物或化學結合物，因此它們具有可專利性，并且更重要的是，它們具有新的藥理學性質。

表觀遺傳學可以被認為是對控制基因使用的DNA的化學修飾。組蛋白分子的氨基酸殘基，特別是位于其氨基(N)末端尾巴的那些經歷各種翻譯后修飾，包括甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化、SUMO化、瓜氨酸化和ADP核糖基化。幾種類型的共價修飾(例如乙?；唾嚢彼峒谆?是可逆的，而各種殘基的乙?；徽J為更具結構作用，使得核小體的結構“更松散”并且更易為轉錄因子所接近。組蛋白脫乙?；?HDAC)是已驗證的抗癌藥物靶點(圖1)，并且對HDAC抑制劑的研究正在進行。另外，HDAC抑制劑由于其抑制促炎細胞因子例如TNFα的表達的能力而在自身免疫性病癥和炎性病癥例如類風濕性關節(jié)炎和糖尿病中具有潛在用途。HDAC抑制劑也可具有非腫瘤學適應癥，例如在干細胞的自我更新和分化中。

HDAC抑制劑(HDACi)已被批準與許多化學治療劑和激酶抑制劑以疊加或協(xié)同方式使用。例如，用HDACi帕比司他與索拉非尼組合的治療在肝細胞癌(HCC)模型的治療中展示最高臨床前功效，從而為用該新穎組合的臨床研究提供理論基礎。mTOR抑制劑顯著增強HCC細胞的HDACi誘導的細胞凋亡。mTORC1/2的抑制不僅有效地阻斷mTORC1信號傳導，而且消除了由選擇性mTORC1抑制引起的AKT反饋活化。體內研究表明，mTOR抑制劑AZD8055和HDACi伏林司他的組合幾乎完全抑制腫瘤生長，而無明顯的不良影響，這表明，mTOR抑制劑和HDACi的組合方案可以是用于治療HCC的有效治療策略。此外，已經顯示靶向PI3K/AKT/mTOR和Ras/Raf/MAPK途徑的雙重PI3K/mTOR抑制劑PKI-587(PF-05212384)和索拉非尼協(xié)同抑制HCC細胞增殖。因此，只要適當地選擇HDAC基序和激酶骨架兩者，HDAC激酶抑制劑，特別是多重抑制HDAC/PI3K-Akt-mTOR途徑的抑制劑將達到兩種或三種用于治療HCC和其它適用疾病的單獨藥劑的目的。

伊馬替尼是在科學和銷售兩個領域均取得巨大成功的第一個激酶。自那時以來，激酶抑制劑的研究已成為非常有吸引力的領域，并且許多激酶候選藥物現已在臨床試驗中。磷脂酰肌醇3-激酶-AKT-哺乳動物雷帕霉素靶點(PI3K-Akt-mTOR)信號傳導途徑的廣泛調控各種不同的生理過程，并且對細胞生長和存活的許多方面至關重要，包括細胞周期進展、分化、轉錄、翻譯和細胞凋亡。失調，無論是通過擴增或者作為突變的直接結果，一直與廣泛范圍的癌癥的發(fā)生和發(fā)展緊密聯(lián)系，從而促使對該級聯(lián)中的關鍵蛋白質的小分子調節(jié)劑的開發(fā)產生濃厚興趣。已直接靶向PI3K、Akt和其它激酶，例如3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶-1(PDK1)、mTOR，并且迄今獲得了不同程度的臨床成功(圖2)。

PI3K-mTOR途徑也在細胞遷移和血管發(fā)生中起著重要作用。p110α在調控內皮細胞運動性方面的獨特功能支持這種蛋白質在血管重構和血管發(fā)生中優(yōu)于p110β和p110δ的重要性。II類PI3K同種型PI3K-C2α在血管形成和屏障完整性方面具有至關重要的作用，并且代表血管疾病的新治療靶點。坦羅莫司是被批準用于治療腎細胞癌(RCC)的mTOR抑制劑，其通過mTOR抑制來抑制視網膜色素上皮細胞和內皮細胞的增殖和遷移，并降低VEGF和PDGF的表達。CCI-779通過與靶向mTOR/Hif-1α/VEGF信號傳導相關的抗血管發(fā)生機制來抑制橫紋肌肉瘤異種移植物的生長。HDAC/PI3K-Akt-mTOR途徑多靶點抑制劑將對富血管性腫瘤例如HCC、RCC和甲狀腺癌以及視網膜血管發(fā)生疾病的治療有益。

血管發(fā)生抑制劑已經成功地用于癌癥的治療。HDAC抑制劑被用于靶向腫瘤血管發(fā)生，因為它們可以改變血管內皮細胞生長因子的信號傳導。IIb類HDAC6可以通過皮層肌動蛋白的脫乙?；{控內皮細胞遷移和血管發(fā)生，并以EB1依賴性方式調控細胞遷移。因此，HDAC6是用于抑制內皮細胞遷移和血管發(fā)生的靶點。

肝纖維化和腎纖維化的醫(yī)療需求遠未得到滿足。HDAC抑制劑已在實驗性肝纖維化和腎纖維化中進行了研究。組蛋白脫乙酰基酶2在正常瘢痕和瘢痕疙瘩中上調。II類HDAC抑制通過誘導微RNA-29來阻礙肝星狀細胞活化，并且微RNA-29b通過減弱肝星狀細胞活化和通過靶向PI3K/AKT途徑誘導細胞凋亡來防止肝纖維化。此外，HS-173，一種新的PI3K抑制劑減弱肝纖維化中肝星狀細胞的活化。所有這些不斷增長的證據支持開發(fā)HDAC/PI3K-Akt-mTOR途徑多靶點抑制劑用于治療病理性纖維化。

本發(fā)明提供式(I)的化合物或者其藥學上可接受的形式或前藥：

其中X、Y和Z可獨立地選自N、CHR³或CR³，其中X、Y或Z中的至少一個是N；

可為單鍵或雙鍵，只要化合價允許；

R¹和R²可獨立地選自由以下組成的組：鍵、鹵素、任選地被取代的烷基、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷氧基、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的芳基和任選地被取代的雜芳基；

R³和R⁴可獨立地選自由以下組成的組：鍵、氫、鹵素、任選地被取代的烷基、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷氧基、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的芳基和任選地被取代的雜芳基；

R¹、R²、R³或R⁴中的至少一個可進一步獨立地被異羥肟酸鹽基團-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b取代，其中，

R^a和R^b可獨立地選自由以下組成的組：鍵、氫、任選地被取代的烷基、任選地被取代的?；腿芜x地被取代的氨基酸殘基；

L¹、L²和L³可獨立地選自由以下組成的組：鍵、任選地被取代的烷基、任選地被取代的烯基和任選地被取代的炔基；

R⁵和R⁶可獨立地選自由以下組成的組：鍵、O、S、NR^c、S(O)_n、任選地被取代的酰胺、任選地被取代的脲、任選地被取代的羰基脲、任選地被取代的硫脲、任選地被取代的磺酰胺、任選地被取代的氨基磺酰胺、任選地被取代的磺?；濉⑷芜x地被取代的肟、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的芳基和任選地被取代的雜芳基；其中，

R^c可獨立地選自由以下組成的組：鍵、氫、任選地被取代的烷基、任選地被取代的烯基、任選地被取代的炔基和任選地被取代的酰基；并且

n可為0至2的整數。

X、Y和Z可獨立地選自N、CHR³或CR³，其中X、Y或Z中的至少一個是N。X可為N、CHR³或CR³。Y可為N、CHR³或CR³。Z可為N、CHR³或CR³。X、Y和Z可全部為N。X和Z兩者可為N并且Y可為CR³。X可為CR³，Y可為CR³并且Z可為N。X可為CH，Y可為CR³并且Z可為N。X可為N，Y可為CR³并且Z可為CR³。X可為N，Y可為CR³并且Z可為CH。

X可為CH₂，Y可為CHR³并且Z可為N。X和Z兩者可為N并且Y可為CHR³。X可為CHR³，Y可為CHR³并且Z可為N。X可為CH₂，Y可為CHR³并且Z可為N。X可為N，Y可為CHR³并且Z可為CHR³。X可為N，Y可為CHR³并且Z可為CH₂。

可為單鍵或雙鍵，只要化合價允許。X和Y可通過雙鍵連接。X和Y可通過單鍵連接。

所述化合物可具有以下式(Ib)、(Ic)或(Id)中的任一個：

R¹和R²可獨立地選自由以下組成的組：鍵、鹵素、任選地被取代的烷基、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷氧基、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的芳基和任選地被取代的雜芳基。R¹和R²可獨立地為鍵、鹵素、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷基氨基、任選地被取代的環(huán)氨基、任選地被取代的雜環(huán)氨基、任選地被取代的烷基、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的芳基或任選地被取代的雜芳基。R¹和R²可獨立地為鍵、鹵素、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷基氨基、任選地被取代的環(huán)氨基、任選地被取代的雜環(huán)氨基、任選地被取代的芳基氨基、任選地被取代的雜芳基氨基、任選地被取代的烷基、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的芳基或任選地被取代的雜芳基。R¹可為任選地被取代的雜環(huán)氨基、任選地被取代的雜芳基或任選地被取代的芳基。

R¹可為任選地被取代的苯基、任選地被取代的嘧啶基、任選地被取代的吡啶基、任選地被取代的吡嗪基、任選地被取代的硫代嗎啉基或任選地被取代的嗎啉基。

R²可為鹵素、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷基氨基、任選地被取代的環(huán)氨基、任選地被取代的雜環(huán)氨基、任選地被取代的芳基或任選地被取代的雜芳基。R²可為Cl、Br、F、NH₂、二甲基氨基、二乙基氨基、任選地被取代的吡咯烷基、任選地被取代的哌啶基、任選地被取代的嗎啉基、任選地被取代的苯基、任選地被取代的吡啶基、任選地被取代的嘧啶基、任選地被取代的吡嗪基或任選地被取代的苯并咪唑基。

R³和R⁴可獨立地選自由以下組成的組：鍵、氫、鹵素、任選地被取代的烷基、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷氧基、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的芳基和任選地被取代的雜芳基。R³和R⁴可獨立地為鍵、氫、任選地被取代的烷基、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷基氨基、任選地被取代的環(huán)氨基、任選地被取代的雜環(huán)氨基、任選地被取代的芳基氨基、任選地被取代的雜芳基氨基、任選地被取代的烷氧基、任選地被取代的芳氧基、任選地被取代的雜芳氧基或任選地被取代的環(huán)烷基。R³和R⁴可獨立地為鍵、氫、任選地被取代的烷基、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷基氨基、任選地被取代的環(huán)氨基、芳基氨基、任選地被取代的雜芳基氨基、任選地被取代的烷氧基、任選地被取代的芳氧基、任選地被取代的雜芳氧基或任選地被取代的環(huán)烷基。

R³可為鍵、氫、任選地被取代的烷基、任選地被取代的氨基、任選地被取代的烷基氨基或任選地被取代的環(huán)氨基。R³可為鍵、氫、NH₂、二乙基氨基、任選地被取代的吡咯烷基或任選地被取代的哌啶基。

R⁴可為鍵或任選地被取代的烷基。R⁴可為鍵、乙基、1-丙基、2-丙基、2-丁基、3-戊基或環(huán)戊基。

R¹、R²、R³或R⁴中的至少一個可進一步獨立地被異羥肟酸鹽基團-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b取代。

R^a和R^b可獨立地選自由以下組成的組：鍵、氫、任選地被取代的烷基、任選地被取代的?；腿芜x地被取代的氨基酸殘基。R^a和R^b可為氫。氨基酸殘基可改善前藥的溶解性和生物利用度。

L¹、L²和L³可獨立地選自由以下組成的組：鍵、任選地被取代的烷基、任選地被取代的烯基和任選地被取代的炔基。L¹、L²和L³可獨立地具有C₁至C₁₀的碳鏈長度。

R⁵和R⁶可獨立地選自由以下組成的組：鍵、O、S、NR^c、S(O)_n、任選地被取代的酰胺、任選地被取代的脲、任選地被取代的羰基脲、任選地被取代的硫脲、任選地被取代的磺酰胺、任選地被取代的氨基磺酰胺、任選地被取代的磺酰基脲、任選地被取代的肟、任選地被取代的環(huán)烷基、任選地被取代的雜環(huán)烷基、任選地被取代的芳基和任選地被取代的雜芳基。R⁵和R⁶可獨立地為鍵、-O-、-S-、-NH-、-N(Me)-、-N(Ac)-、-S(O)-、-S(O)₂-、-CONH-、-NHCO-、-NHCONH-、-S(O)₂NH-、NHS(O)₂-、-NHS(O)₂NH-、任選地被取代的雜環(huán)烷基或任選地被取代的芳基。R⁵和R⁶可獨立地為鍵、-O-、-NH-、-N(Me)-、-NHCO-、1,3-亞哌啶基、1,4-亞哌啶基、2,4-亞嘧啶基、2,5-亞嘧啶基、1,2-亞苯基、1,3-亞苯基或1,4-亞苯基。

R^c可獨立地選自由以下組成的組：鍵、氫、任選地被取代的烷基、任選地被取代的烯基、任選地被取代的炔基和任選地被取代的酰基。

n可為0至2的整數。

任選地被取代的烷基可為任選地被取代的C₁-C₁₂烷基、任選地被取代的C₁-C₂烷基、任選地被取代的C₁-C₄烷基、任選地被取代的C₂-C₅烷基、任選地被取代的C₁-C₆烷基、任選地被取代的C₁-C₈烷基、任選地被取代的C₁-C₁₀烷基、任選地被取代的C₂-C₄烷基、任選地被取代的C₂-C₆烷基、任選地被取代的C₂-C₈烷基、任選地被取代的C₂-C₁₀烷基、任選地被取代的C₁-C₁₂烷基、被取代的C₄-C₆烷基、任選地被取代的C₄-C₈烷基、任選地被取代的C₄-C₁₀烷基、任選地被取代的C₄-C₁₂烷基、任選地被取代的C₆-C₈烷基、任選地被取代的C₆-C₁₀烷基、任選地被取代的C₆-C₁₂烷基、任選地被取代的C₈-C₁₀烷基、任選地被取代的C₈-C₁₂烷基或任選地被取代的C₁₀-C₁₂烷基。任選地被取代的烷基可為任選地被取代的C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁或C₁₂烷基。

任選地被取代的烷氧基可為任選地被取代的C₁-C₁₆烷氧基、任選地被取代的C₁-C₂烷氧基、任選地被取代的C₁-C₄烷氧基、任選地被取代的C₁-C₆烷氧基、任選地被取代的C₁-C₈烷氧基、任選地被取代的C₁-C₁₀烷氧基、任選地被取代的C₁-C₁₂烷氧基、任選地被取代的C₁-C₁₄烷氧基、任選地被取代的C₂-C₄烷氧基、任選地被取代的C₂-C₆烷氧基、任選地被取代的C₂-C₈烷氧基、任選地被取代的C₂-C₁₀烷氧基、任選地被取代的C₂-C₁₂烷氧基、任選地被取代的C₂-C₁₄烷氧基、任選地被取代的C₂-C₁₆烷氧基、任選地被取代的C₄-C₆烷氧基、任選地被取代的C₄-C₈烷氧基、任選地被取代的C₄-C₁₀烷氧基、任選地被取代的C₄-C₁₂烷氧基、任選地被取代的C₄-C₁₄烷氧基、任選地被取代的C₄-C₁₆烷氧基、任選地被取代的C₆-C₈烷氧基、任選地被取代的C₆-C₁₀烷氧基、任選地被取代的C₆-C₁₂烷氧基、任選地被取代的C₆-C₁₄烷氧基、任選地被取代的C₆-C₁₆烷氧基、任選地被取代的C₈-C₁₀烷氧基、任選地被取代的C₈-C₁₂烷氧基、任選地被取代的C₈-C₁₄烷氧基、任選地被取代的C₈-C₁₆烷氧基、任選地被取代的C₁₀-C₁₂烷氧基、任選地被取代的C₁₀-C₁₄烷氧基、任選地被取代的C₁₀-C₁₆烷氧基、任選地被取代的C₁₂-C₁₄烷氧基、任選地被取代的C₁₂-C₁₆烷氧基或任選地被取代的C₁₄-C₁₆烷氧基。任選地被取代的烷氧基可為任選地被取代的C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁、C₁₂、C₁₃、C₁₄、C₁₅或C₁₆烷氧基。

任選地被取代的環(huán)烷基可為任選地被取代的C₃-C₉環(huán)烷基、任選地被取代的C₃-C₆環(huán)烷基或任選地被取代的C₃-C₉環(huán)烷基。任選地被取代的環(huán)烷基可為任選地被取代的C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈或C₉環(huán)烷基。

任選地被取代的雜環(huán)烷基可為任選地被取代的環(huán)原子數為3至8的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為3至4的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為3至5的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為3至6的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為3至7的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為4至5的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為4至6的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為4至7的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為4至8的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為5至6的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為5至7的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為5至8的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為6至7的雜環(huán)烷基、任選地被取代的環(huán)原子數為6至8的雜環(huán)烷基或任選地被取代的環(huán)原子數為7至8的雜環(huán)烷基。任選地被取代的雜環(huán)烷基可為具有環(huán)原子數為3、4、5、6、7或8的任選地被取代的雜環(huán)烷基。任選地被取代的雜環(huán)烷基可具有1至3個獨立地選自由N、O和S組成的組的雜原子。任選地被取代的雜環(huán)烷基可具有1至2個獨立地選自由N、O和S組成的組的雜原子。任選地被取代的雜環(huán)烷基可具有2至3個獨立地選自由N、O和S組成的組的雜原子。

任選地被取代的芳基可為任選地被取代的C₆-C₁₈芳基、任選地被取代的C₆-C₁₀芳基、任選地被取代的C₆-C₁₂芳基、任選地被取代的C₆-C₁₄芳基、任選地被取代的C₆-C₁₆芳基、被取代的C₈-C₁₀芳基、任選地被取代的C₈-C₁₂芳基、任選地被取代的C₈-C₁₄芳基、任選地被取代的C₈-C₁₆芳基、任選地被取代的C₈-C₁₈芳基、任選地被取代的C₁₀-C₁₂芳基、任選地被取代的C₁₀-C₁₄芳基、任選地被取代的C₁₀-C₁₆芳基、任選地被取代的C₁₀-C₁₈芳基、任選地被取代的C₁₂-C₁₄芳基、任選地被取代的C₁₂-C₁₆芳基、任選地被取代的C₁₂-C₁₈芳基、任選地被取代的C₁₄-C₁₆芳基、任選地被取代的C₁₄-C₁₈芳基或任選地被取代的C₁₄-C₁₈芳基。任選地被取代的芳基可為任選地被取代的C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁、C₁₂、C₁₃、C₁₄、C₁₅、C₁₆、C₁₇或C₁₈芳基。

任選地被取代的雜芳基可為環(huán)原子數為3至8的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為3至4的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為3至5的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為3至6的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為3至7的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為4至5的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為4至6的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為4至7的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為4至8的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為5至6的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為5至7的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為5至8的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為6至7的雜芳基、任選地被取代的環(huán)原子數為6至8的雜芳基或任選地被取代的環(huán)原子數為7至8的雜芳基。任選地被取代的雜芳基可為具有環(huán)原子數為3、4、5、6、7或8的任選地被取代的雜芳基。任選地被取代的雜芳基可具有1至3個獨立地選自由N、O和S組成的組的雜原子。任選地被取代的雜芳基可具有1至2個獨立地選自由N、O和S組成的組的雜原子。任選地被取代的雜芳基可具有2至3個獨立地選自由N、O和S組成的組的雜原子。

任選地被取代的烯基可為任選地被取代的C₂-C₁₂烯基、任選地被取代的C₂-C₄烯基、任選地被取代的C₂-C₆烯基、任選地被取代的C₂-C₈烯基、任選地被取代的C₂-C₁₀烯基、任選地被取代的C₁-C₁₂烯基、被取代的C₄-C₆烯基、任選地被取代的C₄-C₈烯基、任選地被取代的C₄-C₁₀烯基、任選地被取代的C₄-C₁₂烯基、任選地被取代的C₆-C₈烯基、任選地被取代的C₆-C₁₀烯基、任選地被取代的C₆-C₁₂烯基、任選地被取代的C₈-C₁₀烯基、任選地被取代的C₈-C₁₂烯基或任選地被取代的C₁₀-C₁₂烯基。任選地被取代的烯基可為任選地被取代的C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁或C₁₂烯基。

任選地被取代的炔基是任選地被取代的C₂-C₁₂炔基、任選地被取代的C₂-C₄炔基、任選地被取代的C₂-C₆炔基、任選地被取代的C₂-C₈炔基、任選地被取代的C₂-C₁₀炔基、任選地被取代的C₁-C₁₂炔基、被取代的C₄-C₆炔基、任選地被取代的C₄-C₈炔基、任選地被取代的C₄-C₁₀炔基、任選地被取代的C₄-C₁₂炔基、任選地被取代的C₆-C₈炔基、任選地被取代的C₆-C₁₀炔基、任選地被取代的C₆-C₁₂炔基、任選地被取代的C₈-C₁₀炔基、任選地被取代的C₈-C₁₂炔基或任選地被取代的C₁₀-C₁₂炔基。任選地被取代的炔基可為任選地被取代的C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁或C₁₂炔基。

異羥肟酸鹽基團-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b可選自以下結構中的任一個：

R⁷可選自由以下組成的組：鍵、任選地被取代的烷基、任選地被取代的芳基、任選地被取代的雜芳基、O、S、任選地被取代的氨基、-CH₂O-、-OCH₂-、-CH₂S(O)_n-、-S(O)_nCH₂-、-S(O)_n-、-CH₂N(R^c)-、-N(R^c)CH₂-、-N(R^c)-、-CO-、-C(＝NOR^a)-、-CON(R^a)-、-N(R^c)CO-、-N(R^c)CON(R^c)CO-、-CON(R^c)CONH-、-N(R^c)CON(R^b)-、-S(O)₂N(R^c)-、-S(O)₂N(R^a)CON(R^c)-、-N(R^c)CON(R^a)S(O)₂-、-N(R^c)S(O)₂N(R^a)-和-N(R^c)S(O)₂-；并且

m可為0至10的整數。

R²或R⁴可含有異羥肟酸鹽基團-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b。

當R²或R³含有異羥肟酸鹽基團時，R¹可不為嗎啉。

當R²或R³含有異羥肟酸鹽基團時，R¹可為被取代的氨基。所述被取代的氨基可為嗎啉。

所述化合物可具有下式(Ib)：

其中R¹可為任選地被取代的苯基、任選地被取代的嘧啶基、任選地被取代的吡啶基、任選地被取代的吡嗪基、任選地被取代的硫代嗎啉基或任選地被取代的嗎啉基；

R²可為Cl、Br、F、NH₂、二甲基氨基、二乙基氨基、任選地被取代的吡咯烷基、任選地被取代的哌啶基、任選地被取代的嗎啉基、任選地被取代的苯基、任選地被取代的吡啶基、任選地被取代的嘧啶基、任選地被取代的吡嗪基或任選地被取代的苯并咪唑基；

R³可為鍵、氫、NH₂、二乙基氨基、任選地被取代的吡咯烷基或任選地被取代的哌啶基；并且

R⁴可為鍵、乙基、1-丙基、2-丙基、2-丁基、3-戊基或環(huán)戊基。

本公開的具體化合物包括以下：

或者其藥學上可接受的鹽或前藥。

當R²或R³含有異羥肟酸鹽基團，R¹不為嗎啉時的具體化合物可包括以下：

或者其藥學上可接受的鹽或前藥。

其中當R²或R³含有異羥肟酸鹽基團時，R¹是被取代的氨基并且所述被取代的氨基是嗎啉的具體化合物可包括以下：

或者其藥學上可接受的鹽或前藥。

如上文所定義的化合物可為酶抑制劑。如上文所定義的化合物可具有抑制某些脫乙?；负偷鞍准っ傅幕钚缘哪芰?。脫乙?；缚蔀榻M蛋白脫乙?；?。抑制脫乙酰基酶活性的能力可為化合物直接和單獨作用于組蛋白脫乙?；负?或非組蛋白脫乙?；阜肿右砸种粕锘钚缘慕Y果。激酶可為脂質激酶或蛋白激酶。激酶可為脂質激酶和蛋白激酶。激酶可為磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)。抑制激酶活性的能力可為化合物直接和單獨作用于激酶分子以抑制生物活性的結果。然而，應了解，所述化合物也可至少部分作用于所討論激酶的參與磷酸化過程的輔因子。

本文所公開的化合物可直接和單獨作用于脫乙?；阜肿踊蛘咂鋸秃衔锘蚱我砸种粕锘钚浴Ｈ欢?，應了解，所述化合物也可至少部分作用于參與脫乙?；^程的輔因子。已知的激酶輔因子包括離子物質(例如鋅)。

本文所公開的化合物可直接和單獨作用于激酶分子或者其復合物或片段以抑制生物活性。然而，應了解，所述化合物也可至少部分作用于參與磷酸化過程的輔因子。已知的激酶輔因子包括離子物質(例如鋅和鈣)、脂質(例如磷脂酰絲氨酸)和二酰甘油。

如上文所定義的化合物可對HDAC和/或PI3K激酶或者其片段或復合物或功能等效物具有活性。如上文所定義的化合物可為組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑或磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑。如上文所定義的化合物可為組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑。如上文所定義的化合物可為PI3K-AKT-mTOR途徑的抑制劑。如上文所定義的化合物可為多靶點抑制劑。如上文所定義的化合物可同時抑制組蛋白脫乙?；?HDAC)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)。

如上文所定義的化合物可對某些絲氨酸/蘇氨酸激酶，例如mTOR或Akt或者其片段或復合物或功能等效物具有活性。

脂質激酶和蛋白激酶的抑制可以本領域熟知的許多種方式中的任一種進行。例如，如果希望體外蛋白激酶抑制，則可將適當量的所述化合物添加至含有激酶的溶液中。在其中希望抑制哺乳動物中的激酶活性的情況下，激酶的抑制通常可涉及將化合物施用至含有激酶的哺乳動物。

抑制細胞中的HDAC和/或PI3K的方法可包括向細胞施用如上文所定義的化合物或者其藥學上可接受的形式或前藥。HDAC和/或PI3K的抑制可進一步包括細胞增殖的抑制。HDAC和/或PI3K的抑制可進一步包括將細胞重新編程為誘導性多能干細胞(iPS細胞)。

所述細胞可在體外。所述細胞可來自細胞系。細胞系可為永生化細胞系、遺傳修飾的細胞系或原代細胞系。細胞系可選自由以下組成的組：MV4-11、MOLT-4、PC-3、MCF7、SUP-B15、HL-60、K-562、RPMI-8226、Daudi、Raji、Ramos、Pfeiffer、A431、ACHN、A549、COLO 205、HCT116、HEL92.1.7、NCI-H522、A375、NCI-H460、BxPC-3、PANC-1、SK-OV-3、U87MG、U138MG、HpeG2、SK-HEP1、HuH-7、HCCLM3、PLC/PRF/5、HeLa、BT 474、MDA-MB-231、MDA-MB-436和MDA-MB-468。

所述細胞可來自個體的組織。所述細胞可在個體中。

這些如上文所定義的化合物可用作用于腫瘤學適應癥以及非腫瘤學適應癥和應用例如自身免疫性病癥和炎性病癥、干細胞的自我更新和分化的調節(jié)劑或抑制劑。

因此，如上文所定義的化合物可適用于其中可利用其抑制上述類型的脂質激酶和蛋白激酶的能力的諸多種應用。例如，如上文所定義的化合物可用于抑制絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。所述化合物也可用于治療或預防哺乳動物病況，其中抑制蛋白激酶和/或其輔因子預防、抑制或改善所述病況的病狀或癥狀。

如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物可用于治療。

治療HDAC或PI3K相關病癥的方法可包括向需要治療的個體施用如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物。治療HDAC和PI3K相關病癥的方法可包括向需要治療的個體施用如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物。

所述方法可進一步包括在所述個體中施用另外的治療劑的步驟。調節(jié)干細胞的自我更新或分化的方法可包括向需要治療的個體施用如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物。

如上文所定義的化合物也可用于制備用于治療動物病況的藥劑，其中蛋白激酶的抑制可預防、抑制或改善所述病況的病狀或癥狀。如上文所定義的化合物也可用于制備用于治療或預防激酶相關病癥的藥劑。

如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物可用于制備用于治療HDAC或PI3K相關病癥的藥劑。如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物可用于制備用于治療HDAC和PI3K相關病癥的藥劑。

如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、或者如上文所定義的組合物可用于制備用于調節(jié)干細胞的自我更新或分化的藥劑。

所述用途可進一步包括與另外的治療劑一起施用所述藥劑，其中所述藥劑可與所述另外的治療劑組合或交替施用。

所述病況或病癥可選自由以下組成的組：癌癥、血管發(fā)生病癥或病理性血管發(fā)生、纖維化、炎性病況、哮喘、神經病癥、神經變性病癥、肌肉變性病癥、自身免疫性病癥、血液病癥或骨髓病癥。所述病況或病癥可為淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤或霍奇金淋巴瘤、宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、結腸直腸癌、肉瘤、肝細胞癌、白血病或骨髓瘤、視網膜血管發(fā)生病、肝纖維化、腎纖維化、阿爾茨海默氏病或亨廷頓氏病、脊髓性肌萎縮、HIV/AIDS、真性紅細胞增多癥或原發(fā)性血小板增多癥或骨髓纖維化。

預計如上文所定義的化合物可用于治療各種癌癥，包括但不限于骨癌、腦和CNS腫瘤、乳腺癌、結腸直腸癌、內分泌癌，包括腎上腺皮質癌、胰腺癌、垂體癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、胸腺癌、胃腸癌、肝癌、肝外膽管癌、胃腸類癌腫瘤、膽囊癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌癥、婦科癌癥、頭頸癌、白血病、骨髓瘤、血液病癥、肺癌、淋巴瘤、眼癌、皮膚癌、軟組織肉瘤、成人軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、泌尿系統(tǒng)癌癥。

可用如上文所定義的化合物治療的例示性癌癥包括血液學癌癥和實體瘤，例如骨髓增殖性病癥(特發(fā)性骨髓纖維化、真性紅細胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥、慢性髓樣白血病)、髓樣化生、慢性髓單核細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、急性成紅細胞白血病、霍奇金病和非霍奇金病、B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、急性T細胞白血病、骨髓增生異常綜合征、漿細胞病癥、多毛細胞白血病、卡波西氏肉瘤、淋巴瘤；婦科癌癥，例如乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、陰道和外陰癌、子宮內膜增生；胃腸道癌癥，例如結腸直腸癌、息肉、肝癌、胃癌、胰腺癌、膽囊癌；泌尿道癌，例如前列腺癌、腎癌和腎臟癌、膀胱癌、尿道癌、陰莖癌；皮膚癌，例如黑色素瘤；腦腫瘤，例如膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、星形細胞瘤、室管膜瘤、腦干膠質瘤、髓母細胞瘤、腦膜瘤、星形細胞瘤、少突神經膠質瘤；頭頸癌，例如鼻咽癌、喉癌；呼吸道癌癥，例如肺癌(NSCLC和SCLC)、間皮瘤；眼部疾病，例如視網膜母細胞瘤；肌肉骨骼疾病，例如骨肉瘤、肌肉骨骼腫瘤；鱗狀細胞癌和類纖維瘤。

施用至人類如上文所定義的化合物可通過用于經腸施用的任何可接受的方式(例如口服或經直腸)，或者通過胃腸外施用，例如皮下、肌肉內、靜脈內和真皮內途徑來進行。注射可為推注或者經由持續(xù)或間歇輸注。如上文所定義的活性化合物通?？梢宰阋韵蚧颊哌f送治療有效劑量的量包含于藥學上可接受的載體或稀釋劑中。在各種實施方案中，與正常細胞相比，所述抑制劑化合物對例如癌性腫瘤的快速增殖細胞可具有選擇性毒性或更具毒性。

如上文所定義的化合物在使用時可以使得所述化合物生物可利用的任何形式或方式施用。制備制劑領域的技術人員可根據所選化合物的特定特征、待治療的病況、待治療病況的階段和其它相關狀況容易地選擇適當的施用形式和方式。

如上文所定義的化合物可單獨施用或者以與藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑組合成藥物組合物的形式施用。雖然所述化合物本身是有效的，但通常以其藥學上可接受的鹽形式配制和施用，因為這些形式通常更穩(wěn)定、更容易結晶并且具有更高的溶解度。

然而，如上文所定義的化合物通常以根據所需施用方式而配制的藥物組合物的形式使用。藥物組合物可包含如上文所定義的化合物、或者其藥學上可接受的形式或前藥、以及藥學上可接受的賦形劑。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明提供包含式(I)的化合物以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。所述組合物可以本領域熟知的方式來制備。

在其它實施方案中，本發(fā)明提供包含一個或多個容器的藥物包裝或試劑盒，所述容器填充有藥物組合物的一種或多種成分。在這種包裝或試劑盒中，可發(fā)現具有單位劑量的藥劑的容器。所述試劑盒可裝有包含有效藥劑的組合物，所述組合物可以是濃縮物(包括凍干組合物)，其可先作進一步稀釋再使用，或者可提供使用濃度的組合物，其中小瓶可裝有一份或多份劑量。為便利起見，在試劑盒中，可在無菌小瓶中提供單一劑量，從而使得醫(yī)師可直接利用這些小瓶，其中這些小瓶裝有所需量和濃度的藥劑。這些容器可貼有各種書面材料，例如使用說明書或者管理藥物或生物產品的生產、使用或銷售的政府機構規(guī)定形式的公告，該公告反映該機構批準生產、使用或銷售用于人類施用。

所述化合物可與一種或多種其他藥物組合使用或施用，以治療所述病癥/疾病?？捎猛恢苿┗蛴貌煌苿┦┯弥T組分。如果用不同制劑施用，則所述化合物可與其它藥物依序或同時施用。

除了能夠與一種或多種其它藥物組合施用外，所述化合物還可用于組合療法中。此時，通常彼此組合施用這些化合物。因此，可同時(作為組合制劑)或依序施用一種或多種所述化合物以實現所需效果。如果各化合物的治療特性不同，尤其需要這樣，以使該兩種藥物的組合效果提供改善的治療結果。

用于胃腸外注射的藥物組合物可包含藥學上可接受的無菌水性或非水性溶液、分散劑、混懸劑或乳劑以及用于臨用前重構成無菌可注射溶液或分散劑的無菌粉末。合適的水性和非水性載體、稀釋劑、溶劑或媒介物的實例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其合適的混合物、植物油(例如橄欖油)以及可注射有機酯例如油酸乙酯?？杀３诌m當的流動性，例如，通過使用包衣材料例如卵磷脂、在分散劑的情況下通過保持所要求的粒度、以及通過使用表面活性劑。

這些組合物還可含有佐劑，例如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑?？赏ㄟ^包含各種抗菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等來確保防止微生物的作用。也可能希望包含等滲劑，例如糖、氯化鈉等?？勺⑸渌幬镄问降难娱L吸收可通過包含延遲吸收的試劑例如單硬脂酸鋁和明膠來實現。

如果需要，并且出于更有效分布的目的，可將化合物摻入諸如聚合物基質、脂質體和微球體等緩釋或靶向遞送系統(tǒng)中。

可以例如通過經細菌截留過濾器過濾，或通過摻入呈無菌固體組合物形式的滅菌劑來對可注射制劑進行滅菌，可以在臨用之前將所述無菌固體組合物溶解或分散于無菌水或其它無菌可注射介質中。

用于經口施用的固體劑型可包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這樣的固體劑型中，可將活性化合物與以下物質混合：至少一種惰性的、藥學上可接受的賦形劑或載體，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，和/或a)填充劑或增量劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合劑，例如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠，c)保濕劑，例如甘油，d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉，e)溶液阻滯劑，例如石蠟，f)吸收促進劑，例如季銨化合物，g)潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯，h)吸收劑，例如高嶺土和膨潤土粘土，以及i)潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉，以及其混合物。在膠囊劑、片劑和丸劑的情況下，劑型還可包含緩沖劑。

在使用諸如乳糖(lactose sugar或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等賦形劑的軟填充和硬填充明膠膠囊劑中也可使用類似類型的固體組合物作為填充劑。

用包衣劑和殼例如腸溶包衣劑和藥物配制領域眾所周知的其它包衣劑，可以制備片劑、糖衣丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑的固體劑型。它們可以任選地含有遮光劑，并且可以是如下的組合物：它們僅或者優(yōu)先在腸道的某一部分中，任選地以延遲的方式釋放活性成分?？梢允褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物質和蠟。

如果適當，活性化合物也可以呈與一種或多種上述賦形劑的微膠囊形式。

用于經口施用的液體劑型可包括藥學上可接受的乳劑、溶液、混懸劑、糖漿劑和酏劑。除活性化合物以外，液體劑型還可含有本領域中常用的惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑；增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、油(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、 HS 15、Cremophor EL、聚乙二醇以及脫水山梨醇的脂肪酸酯，以及其混合物。

除惰性稀釋劑以外，口服組合物還可包含佐劑，例如潤濕劑、乳化劑和助懸劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑。

除活性化合物以外，混懸劑還可含有助懸劑，例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂和黃蓍膠，以及它們的混合物。

用于直腸或陰道施用的組合物優(yōu)選為栓劑，所述栓劑可通過以下方式制備：將化合物與合適的非刺激性賦形劑或載體混合，所述賦形劑或載體是例如可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟，它們在室溫下為固體而在體溫下為液體，并且因此在直腸或陰道腔內熔化并釋放活性化合物。

用于化合物的局部施用的劑型包括粉劑、貼劑、噴霧劑、軟膏劑和吸入劑?；钚曰衔锟梢栽跓o菌條件下與藥學上可接受的載體以及可能需要的任何防腐劑、緩沖劑或推進劑混合。

化合物的施用量優(yōu)選可治療和減輕或緩解病況。治療有效量可以通過使用常規(guī)技術并且通過觀察在類似情況下獲得的結果由主治診斷醫(yī)生容易地確定。在確定治療有效量時，許多因素要考慮，包括但不限于動物的種類、其體格、年齡和總體健康狀況、所涉及的具體病況、病況嚴重程度、患者對治療的反應、所施用的特定化合物、施用方式、所施用制劑的生物利用度、所選劑量方案、其它藥劑的使用和其它相關情況。

優(yōu)選的劑量可在每天每公斤體重約0.01至400mg的范圍內。更優(yōu)選的劑量可在每天每公斤體重0.1至200mg的范圍內，更優(yōu)選在每天每公斤體重0.2至100mg的范圍內，甚至更優(yōu)選在每天每公斤體重0.2至50mg的范圍內。合適的劑量可每天分多個亞劑量施用。

用于合成式(I)的化合物的方法可包括以下步驟：(a)提供鹵素二取代的基于嘌呤的化合物或鹵素二取代的基于稠合嘧啶的化合物；(b)使步驟(a)的化合物中的胺(-NH-基團)烷基化；(c)選擇性地或依序地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換步驟(b)的中間化合物的鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(d)選擇性地使步驟(c)的中間化合物與具有結構-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b的被保護的異羥肟酸基團或酯(異羥肟酸前體)偶合；以及(e)將步驟(d)的中間化合物的被保護的異羥肟酸鹽或酯在反應條件下轉化為異羥肟酸以形成式(I)的化合物。

用于合成式(I)的化合物的方法可包括以下步驟：(a)提供鹵素二取代的基于嘌呤的化合物或鹵素二取代的基于稠合嘧啶的化合物；(b)選擇性地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換所述化合物的一個鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(c)使步驟(b)的中間化合物中的胺(-NH-基團)烷基化；(d)選擇性地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換步驟(c)的中間化合物的其余鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(e)選擇性地使步驟(d)的中間化合物與具有結構-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b的被保護的異羥肟酸基團或酯(異羥肟酸前體)偶合；以及(f)將步驟(e)的中間化合物的被保護的異羥肟酸鹽或酯在反應條件下轉化為異羥肟酸以形成式(I)的化合物。

用于合成式(I)的化合物的方法

可包括以下步驟：(a)提供鹵素二取代的基于嘌呤的化合物或鹵素二取代的基于稠合嘧啶的化合物；(b)使步驟(a)的化合物中的胺烷基化；(c)選擇性地或依序地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換步驟(b)的中間化合物的鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(d)使步驟(c)的中間化合物中的對應于式(I)的Y位置的碳原子烷基化；(e)選擇性地使步驟(d)的中間化合物與具有結構-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b的被保護的異羥肟酸基團或酯(異羥肟酸酯前體)偶合；以及(f)將步驟(e)的中間化合物的被保護的異羥肟酸鹽或酯在反應條件下轉化為異羥肟酸以形成式(I)的化合物。

用于合成式(I)的化合物的方法可包括以下步驟：(a)提供鹵素二取代的基于嘌呤的化合物或鹵素二取代的基于稠合嘧啶的化合物；(b)選擇性地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換所述化合物的一個鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(c)使步驟(b)的中間化合物中的胺(-NH-基團)烷基化；(d)使步驟(c)的中間化合物中的對應于式(I)的Y位置的碳原子烷基化；(e)選擇性地分別用任選地被取代的硼酸酯或任選地被取代的胺置換步驟(d)的中間化合物的其余鹵化物原子以形成取代的芳族化合物或取代的胺；(f)選擇性地使步驟(e)的化合物與具有結構-L¹-R⁵-L²-R⁶-L³-CON(R^a)OR^b的被保護的異羥肟酸基團或酯(異羥肟酸前體)偶合；以及(g)將步驟(f)的中間化合物的被保護的異羥肟酸鹽或酯在反應條件下轉化為異羥肟酸以形成式(I)的化合物。

實施例

將進一步參照具體實施例更詳細地描述本公開的非限制性實施例和比較實施例，其不應被解釋為以任何方式來限制本發(fā)明的范圍。

所用縮寫的列表

名稱/術語 縮寫 名稱/術語 縮寫

二氯乙烷(1,2-) DCE N-溴琥珀酰亞胺 NBS

二氯甲烷 DCM N-甲基-2-吡咯烷酮 NMP

二甲基甲酰胺(N,N-) DMF 核磁共振 NMR

二甲亞砜 DMSO 三氟乙酸 TFA

當量 equiv 四氫呋喃 THF

高效液相色譜法或高壓

HPLC

液相色譜法

高分辨率質譜法 HRMS

實施例1：材料和方法

在下文所述的實施例中，除非另外指出，否則以下描述中的所有溫度均按攝氏度計，并且除非另外指出，否則所有份和百分數均按重量計。可用于合成化合物的試劑可從商業(yè)供應商購得，例如Sigma-Aldrich Pte有限公司(Singapore 117528,Singapore)、Boron Molecular公司(Raleigh,NC 27616,USA)或Combi-Blocks公司(San Diego,CA 92126,USA)，并且除非另外指出，否則未經進一步純化即使用，或者根據本領域已知的技術來獲得或制備。

下文所述的反應在氮氣、氬氣的正壓力下或采用干燥管在環(huán)境溫度下(除非另外說明)在無水溶劑中進行，并且反應燒瓶配備有橡膠隔墊，用于經由注射器引入基質和試劑。玻璃器皿為烘箱干燥和/或加熱干燥的。分析型薄層色譜法(TLC)在玻璃布底的硅膠60F 254板(E Merck(0.25mm))上進行，并用適當的溶劑比(v/v)洗脫，并通過UV吸收可視化。反應通過TLC和/或LC-MS進行測定，并且如通過起始材料的消耗或期望產物的形成所判斷予以終止。

通常通過用反應溶劑或萃取溶劑使反應體積加倍，接著使用以體積計25％萃取體積(除非另外指出)的所示水性溶液洗滌進行后處理。產物溶液用無水硫酸鈉(Na₂SO₄)或硫酸鎂(MgSO₄)干燥，然后過濾，并在減壓下在旋轉蒸發(fā)器上蒸發(fā)溶劑，并記錄為在真空中移除溶劑?？焖僦V法使用硅膠60(Merck KGaA,0.040-0.063mm,230-400目ASTM)進行。

反相制備型高效液相色譜法(RPHPLC)在Gilson HPLC系統(tǒng)(331/332泵，GX-271液體處理器，172二極管陣列檢測器(DAD)，Trilution LC軟件)上使用Phenomenex柱(Luna,5μm,C18 100A,150mm×21.2mm)以可調節(jié)的溶劑梯度，通常為在15min或20min梯度內在水+0.05％TFA中的5-95％乙腈以20mL/min的流速進行，并且用于常規(guī)純化。所有化合物的初步純度和身份在Waters 2795分離模塊上分離后在純化后通過LC-MS分析在Waters Micromass ZQ質譜儀上以電噴霧電離(ESI)正模式進行評估。HPLC分離在Phenomenex柱(Luna,5μm,C18 100A,50mm×2.00mm)上以0.8mL/min的流速和在水+0.05％TFA中的X-95％(X＝5、30或50)乙腈的4min梯度，使用Waters 2996光電二極管陣列檢測器進行。純度和身份在集成UV色譜圖(220-400nm)和質譜上進行評估。最終純度使用Shimadzu LC-20AD UFLC系統(tǒng)在Phenomenex柱(Luna,5μm,C18 100A,50mm×2.00mm)上以0.8mL/min的流速和6min內在水+0.05％TFA中的5-95％乙腈的梯度進行測定。所有最終產物均具有大于90％的純度(在220nm和254nm的波長下通過HPLC測定)。

關于¹H(400.13MHz)、¹³C(100.61MHz)、¹⁵N(40.55MHz)和¹⁹F(376.47MHz)原子核的所有1D和2D NMR實驗均在Bruker AVANCE-400數字NMR光譜儀上進行。NMR譜參照內部四甲基硅烷標準(對于¹H和¹³C，0.00ppm)或者CDCl₃(7.26ppm和77.1ppm)、CD₃OD(3.31ppm和49.0ppm)或DMSO-d₆(2.50ppm和39.5ppm)的溶劑峰以ppm報告。根據需要使用其它NMR溶劑。當報告峰多重性時，使用以下縮寫：s＝單峰，d＝雙峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，br＝寬峰，dd＝雙重雙峰，dt＝雙重三重峰，bs＝寬單峰。當給出時，偶合常數以赫茲報告。

CHN的元素分析在Perkin-Elmer 2400 CHN/CHNS元素分析儀上進行。HRMS結果在直接注射純化的化合物下從Bruker micrOTOF-Q II(ESI，正模式)獲得。

各種實施方案的試劑可使用如下文所述的反應途徑和合成方案，采用本領域中可用的技術使用容易得到的原材料來制備。實施方案的特定化合物的制備在下面的實施例中詳細說明，但技術人員應認識到，所述化學反應可容易地進行調整以制備各種實施方案的許多其它試劑。例如，非例示性化合物的合成可以通過本領域技術人員顯而易見的修改，例如通過適當地保護干擾基團、通過改變?yōu)楸绢I域已知的其它合適的試劑或者通過對反應條件進行常規(guī)修改成功地進行。有機合成中合適的保護基團的列表可參見T.W.Greene和P.G.Wuts的Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley&Sons,New York,1991以及P.J.Kocienski的Protecting Groups，第3版，Georg Thieme Verlag,New York,2005?；蛘?，本文所公開或者本領域已知的其它反應會被認為適用于制備各種實施方案的其它化合物。

實施例2：一般反應方案

實際上，通過雜合、合并或從頭設計來設計和合成起作用的多靶點分子并不是一項易于實現的任務。第一步是實現HDAC和激酶的雙重抑制。將HDAC抑制劑部分引入各種位置以探索結構活性關系(SAR)，并通過針對效能和同種型選擇性探索各種基團組合對PI3K抑制進行同樣的操作。具有各種性質的取代基基團，包括芳族和非芳族的、環(huán)狀和無環(huán)的、極性和親脂性的、酸性、堿性和中性的基團用于闡明SAR。由于沒有已知的最好的HDAC/PI3K組合分布可用，因此分子被設計為具有廣泛的效能，以在體外和體內評價中實現最好的結果。

方案1

各種取代的嘌呤和吡咯并[2,3-d]嘧啶可以簡單的四步或五步程序從可自許多來源商購的2,6-二氯嘌呤或2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶開始制備。如圖3中所示，典型的程序使用烷基鹵化物在合適的堿例如碳酸鉀存在下使化合物1的NH基烷基化?；蛘?，在Mitsunobu反應條件下，可使醇與1在膦和活化劑例如偶氮二甲酸二乙酯存在下反應，以獲得類似的烷基化產物2。兩個氯原子可在最佳反應條件下選擇性地或依序地置換。在Suzuki反應條件下，使用硼酸酯(4)來替換更具活性的氯原子并形成單氯化合物5。第2個氯原子可在升高的溫度下在合適的溶劑例如1,4-二烷、DMF、NMP或THF中用胺(6)例如嗎啉置換，以得到所需的化合物7。7的官能團P²或R^2b或P³可含有酯，即異羥肟酸的前體，或者受保護的異羥肟酸鹽，其可容易地轉化為異羥肟酸8或9或12。如果7的P³基團含有羥基(酚或醇)或醛，則化合物7可通過用鹵化物(例如，P⁵-P¹，P¹＝Br)使羥基烷基化或用胺(例如，P⁵-P¹，P¹＝-NH₂或-NH-)使醛還原胺化而進一步改變，以獲得11，其隨后則轉化為異羥肟酸12。

在圖3中，所用的試劑和條件如下：(a)對于P¹＝Br，NaI/K₂CO₃；(b)對于P¹＝OH，Mitsunobu反應，Ph₃P/DEAD；(c)Suzuki偶合，Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂，K₂CO₃/二烷，微波輻照或加熱；(d)置換；(e)NH₂OH·HCl(10當量)/NaOMe(20當量)/MeOH，0℃至室溫；(f)5-50％TFA/二氯甲烷；(g)還原胺化，P⁵-P¹(10)，P¹＝-NH-或-NH₂并且P³含有-CHO，NaBH(OAc)₃，DCE，室溫。

方案2

圖4繪示化合物1或3中的兩個氯原子的替代置換順序。首先用胺6置換更具活性的氯原子以經由1得到13或經由3得到14。稍后使13的NH基烷基化以形成14。在14的P²基團是腈的情況下，將腈基還原成胺，后者然后通過用鹵化物烷基化或者用醛還原胺化而轉化為進一步取代的胺15。胺15通過Suzuki偶合反應進一步改變以獲得16，其隨后被轉化為異羥肟酸17。對同樣衍生自單氯化合物14的化合物18有兩個選擇：如果P²或P³基團含有酯或受保護的異羥肟酸鹽，則將其轉化為異羥肟酸19或21；如果P³基團含有羥基(酚或醇)或醛，則以與方案1中的化合物7類似的方式對其進行處理，即羥基的烷基化或醛的還原胺化以形成20，其隨后被轉化為異羥肟酸21。

在圖4中，所用的試劑和條件如下：(a)置換，胺(6)，純態(tài)或在二烷中，加熱；(b)對于P¹＝鹵化物，K₂CO₃/DMF；c)對于P¹＝OH，Mitsunobu反應，Ph₃P/DEAD；(d)P²含有末端腈基：還原，NaBH₄/NiCl₂，THF-MeOH(1:2)，室溫；(e)用P²CH₂P¹烷基化，P¹是鹵化物或離去基團；(f)用P⁷CHO還原胺化，NaBH(OAc)₃，DCE，室溫；(g)Suzuki偶合，Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂，K₂CO₃/二烷，微波或加熱；(h)NH₂OH·HCl(10當量)/NaOMe(20當量)/MeOH，-20℃至室溫；(i)5-50％TFA/二氯甲烷。

方案3

圖5繪示當R³是氫并且X是氮時如何進一步改變化合物7(方案1)和化合物18(方案2)的R³基團。嘌呤7和18均用NBS溴化以分別獲得溴化物22和26。然后，用胺置換8位的溴原子。酯或受保護的異羥肟酸可存在于23和27的P²或R^3b基團中，從而可在后續(xù)轉化后形成四種類型的異羥肟酸24、25、27和28。

在圖5中，所用的試劑和條件如下：(a)NBS，CHCl₃；(b)NMP或DMSO，130℃，12h；(c)NH₂OH·HCl(10當量)/NaOMe(20當量)/MeOH，-20℃至室溫。

方案4

圖6繪示當R³是氫并且X是氮時改變化合物14(方案2)的R³基團的替代方法。首先，在嘌呤14的8位引入醛29，然后將后者轉化為胺30。如果30的R^f基團含有酯或受保護的異羥肟酸鹽，則經由Suzuki產物31將其轉化為異羥肟酸32。當30是仲胺(R^f＝H)時，則其可通過用鹵化物烷基化或用醛還原胺化進一步改變以獲得胺33。單氯胺33經由Suzuki反應產物34最終被轉化為異羥肟酸35。

在圖6中，所用的試劑和條件如下：(a)DMF，n-BuLi；b)用胺R^dNH₂還原胺化，NaBH₄，DCE-MeOH；(c)Suzuki偶合，Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂，K₂CO₃/二烷，微波或加熱；(d)NH₂OH·HCl(10當量)/NaOMe(20當量)/MeOH，0℃至室溫；(e)5-50％TFA/DCM；(f)用P¹²CH₂P¹烷基化，P¹是鹵化物或離去基團，Et₃N；(g)用P¹²CHO還原胺化，NaBH(OAc)₃，DCE，室溫。

方案5

圖7繪示進一步衍生化容易得到或商購的原材料(例如，4)的一般合成途徑以及制備受保護或取代的異羥肟酸(38)的程序。硼酸酯(4)是用于方案1和2所用的Suzuki偶合反應的關鍵材料，它可在經歷Suzuki反應之前進行改性。例如，使硼酸酯(4a)的氨基與酸偶合以形成酰胺(4b)，其具有酯基并且是異羥肟酸的前體。異羥肟酸可通過用過量的羥胺[即，NH₂OH·HCl(10當量)，NaOMe(20當量)，在MeOH中]處理相應的甲基酯或乙基酯容易地產生。制備受保護或取代的羥胺的其它方法描述于方案5中。酸(37)可通過以下方法轉化為異羥肟酸(36)。(i)將酸在更溫和的條件下通過用ClCOCOCl、或SOCl₂、或其它試劑在中性條件下(例如含有CBr₄的Ph₃P、或2,4,6-三氯-[1,3,5]三嗪)處理而轉化為酰氯；或者(ii)將酸通過使其與氯甲酸異丁酯反應而轉化為活性酯；(iii)使酰氯或活性酯與羥胺或受保護的羥胺R^gNHOR^h[例如，O-芐基羥胺、O-(2,4-二甲氧基-芐基)-羥胺、O,N-雙-(2,4-二甲氧基-芐基)-羥胺、O-(四氫吡喃-2-基)-羥胺、O-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基)-羥胺]反應，以得到異羥肟酸或受保護的異羥肟酸；iv)使酸與羥胺或受保護的羥胺R^gNHOR^h在偶合試劑存在下偶合。保護基可通過文獻中已知的方法來移除，例如氫解以移除(取代的)芐基或酸性裂解(例如，在有或無陽離子清除劑下，在DCM中的TFA)以裂解酸性不穩(wěn)定的保護基。

在圖7中，所用的試劑和條件如下：(a)EDCI-HOBT/DCM；b)i)酰氯形成，ii)羥胺RⁱNHOR^j；c)EDCI-HOBt，RⁱNHOR^j。

實施例3：N-羥基-4-(3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯氧基)丁酰胺(圖3，化合物12a)的合成

用于合成N-羥基-4-(3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯氧基)丁酰胺的反應方案示于圖8中。

步驟1：3-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)苯酚(5a)的合成

向2,6-二氯-9-異丙基-9H-嘌呤3a(230mg,1.0mmol)、(3-羥基苯基)硼酸4c(152mg,1.1mmol)在二烷(10mL)中的預攪拌溶液中添加K₂CO₃(345mg,2.5mmol)在去離子水(1.0mL)中的溶液。將混合物脫氣30min，然后添加Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂(41mg)，并將所得混合物在70℃下加熱5小時。LC-MS顯示反應完成。在簡單后處理后，通過快速色譜法(二氧化硅，在己烷中的20％至50％乙酸乙酯)獲得產物5a(215mg,75％)。

步驟2：3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯酚(7a)的合成

將3-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)苯酚5a(300mg,1.04mmol)溶解于嗎啉(5mL)中。將所得混合物在80℃下加熱10小時。LC-MS顯示反應完成。在簡單后處理后，通過快速色譜法(二氧化硅，乙酸乙酯/己烷＝1:2)對粗物質進行純化以獲得7a(290mg,82％)。

步驟3：4-(3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯氧基)丁酸乙酯(11a)的合成

向7a(80mg,0.24mmol)、6-溴丁酸乙酯(69mg,0.35mmol)在DMF(2mL)中的預攪拌溶液中添加無水碳酸鉀(98mg,0.79mmol)。將所得混合物在100℃下加熱過夜(16h)。在后處理后，通過快速色譜法(二氧化硅，在己烷中的17％至25％乙酸乙酯)對粗物質進行純化以獲得11a(86mg,80％)。LC-MS m/z 454.2([M+H]⁺)。¹HNMR(CDCl₃)δ8.32(d,J＝7.6Hz,1H),8.20(s,1H),7.96(s,1H),7.43(t,J＝8.0Hz,1H),7.02(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),4.80(septet,J＝6.8Hz,1H),4.14(m,4H),3.93(t,J＝4.8Hz,4H),3.84(t,J＝4.8Hz,4H),2.56(t,J＝7.4Hz,2H),2.15(quintet,J＝6.8Hz,2H),1.61(d,J＝6.8Hz,6H),1.25(t,J＝7.2Hz,3H)。¹³C NMR(CDCl₃)δ173.3,159.0,158.7,154.4,153.9,139.2,137.6,129.5,124.3,122.3,117.0,115.0,67.0,66.7,60.4,46.8,45.1,30.8,24.6,23.4,14.3。

步驟4：N-羥基-4-(3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯氧基)丁酰胺(12a)的合成

向11a(55mg,0.12mmol)、羥胺鹽酸鹽(85mg,1.2mmol)在無水MeOH(1.5mL)中的在干冰上預冷卻的預攪拌溶液中緩慢添加甲醇鈉(0.7mL,3.0mmol)。將所得混合物在-20℃下攪拌1小時，然后使其升溫至室溫。2小時后，LC-MS顯示反應完成。在后處理后，通過RPHPLC對混合物進行純化，以在凍干HPLC流份后獲得作為白色固體的12a(25mg，作為TFA鹽計算為49％)。LC-MS m/z 441.1([M+H]⁺)。HPLC純度(254nm)：94.7％。

12a的游離堿的制備。將TFA鹽溶解于乙腈和水中，然后使用飽和NaHCO₃水溶液堿化至pH約為8。在減壓下移除乙腈后，用乙酸乙酯(×3)萃取水溶液。將合并的有機層干燥并蒸發(fā)以獲得粗游離堿，通過在MeOH中重結晶對其進行進一步純化。LC-MS m/z 441.2([M+H]⁺)。HPLC純度(254nm)：99.8％。¹H NMR(DMSO-d₆)δ10.44(s,1H),8.72(s,1H),8.38(d,J＝2.4Hz,1H),8.36(d,J＝8.0Hz,1H),8.36(s,1H),7.46(t,J＝8.0Hz,1H),7.10(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),4.75(septet,J＝6.6Hz,1H),4.05(t,J＝6.2Hz,2H),3.81(t,J＝4.8Hz,4H),3.74(t,J＝4.8Hz,4H),2.18(t,J＝7.0Hz,2H),1.99(quintet,J＝7.0Hz,2H),1.55(d,J＝6.8Hz,6H)。¹³C NMR(DMSO-d₆)δ169.1,159.0,158.4,154.3,152.9,142.1,137.9,130.0,125.2,121.9,116.9,115.8,67.8,66.5,45.7,45.2,29.3,25.3,22.3。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺C₂₂H₂₈N₆O₄的計算值為441.2245；實驗值為441.2256。

實施例4：N-羥基-7-(2-(3-(羥基甲基)苯基)-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)庚酰胺(圖4，化合物19f)的合成

用于合成N-羥基-7-(2-(3-(羥基甲基)苯基)-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)庚酰胺的反應方案示于圖9中。

步驟1：7-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)庚酸乙酯(3d)的合成

向2,6-二氯-9H-嘌呤1a(376mg,2.0mmol)、7-溴庚酸乙酯(521mg,2.2mmol)在DMF(15mL)中的預攪拌溶液中添加無水碳酸鉀(552mg,4.0mmol)和NaI(64mg,0.4mmol)。將所得混合物在40℃下攪拌12小時。LC-MS顯示反應完成。在后處理后，通過快速色譜法(二氧化硅，乙酸乙酯/己烷為1:3至1:2)對粗物質進行純化以獲得3d(480mg,69％)。

步驟2：7-(2-氯-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)庚酸乙酯(14b)的合成

向3d(344mg,1.0mmol)在二烷(10mL)中的預攪拌溶液中添加嗎啉(435mg,5.0mmol)。將所得混合物在60℃下攪拌3小時。LC-MS顯示反應完成。在簡單后處理后，獲得14b的粗產物(404mg,100％)，并且未經進一步純化即用于下一反應步驟。LC-MS m/z 397.2([M+H]⁺)。¹HNMR(CDCl₃)δ7.70(s,1H),4.00-5.60(m,8H),3.82(t,J＝4.6Hz,4H),2.27(t,J＝7.2Hz,2H),1.85(m,2H),1.60(quintet,J＝7.0Hz,2H),1.34(m,4H),1.24(t,J＝7.0Hz,3H)。¹³C NMR(CDCl₃)δ173.6,153.94,153.93,152.2,118.6,66.9,60.3,45.7(br),43.8,34.1,29.8,28.5,26.3,24.7,14.3。

步驟3：7-(2-(3-(羥基甲基)苯基)-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)庚酸乙酯(18f)的合成

向粗14b(100mg,0.254mmol)、硼酸4c(76mg,0.5mmol)在二烷(5.0mL)中的預攪拌溶液中添加碳酸鉀(86mg,0.62mmol)和Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂(10mg)。將所得混合物在150℃下在微波輻照下攪拌1小時。1小時后，LC-MS顯示反應完成。移除溶劑后，將粗物質懸浮于DCM中，并通過快速色譜法(二氧化硅，在DCM中的1％至2％MeOH)進行純化，以獲得18f(30mg,52.6％)。LC-MS m/z 468.3([M+H]⁺)。¹HNMR(DMSO-d₆)δ8.34(s,1H),8.27(dt-like,J＝7.2Hz,1H),8.22(s,1H),7.44-7.37(m,2H),5.28(t,J＝5.0Hz,1H),4.58(d,J＝4.4Hz,2H),4.30(br s,4H),4.23(t,J＝6.8Hz,2H),4.01(q,J＝7.2Hz,2H),3.77(t,J＝4.8Hz,4H),2.24(t,J＝7.2Hz,2H),1.86(quintet,J＝7.2Hz,2H),1.49(quintet,J＝7.4Hz,2H),1.22-1.38(m,4H),1.14(t,J＝7.0Hz,3H)。¹³C NMR(DMSO-d₆)δ173.3,157.3,153.5,152.3,142.9,141.1,138.6,128.4,128.3,126.7,126.2,118.7,66.7,63.5,60.1,45.6,43.2,33.8,29.5,28.2,26.1,24.7,14.5。

步驟4：N-羥基-7-(2-(3-(羥基甲基)苯基)-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)庚酰胺(19f)的合成

向18f(30mg,0.064mmol)、羥胺鹽酸鹽(67mg,0.96mmol)在無水MeOH(1.0mL)中的在干冰上預冷卻的預攪拌溶液中緩慢添加甲醇鈉(0.37mL,1.6mmol)。將所得混合物在-20℃下攪拌1小時，然后使其升溫至室溫。2小時后，LC-MS顯示反應完成。在簡單后處理后，通過RPHPLC對混合物進行純化，以獲得作為白色固體的N-羥基-7-(2-(3-(羥基甲基)苯基)-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)庚酰胺19f(8mg，作為TFA鹽計算為22％)。將TFA鹽溶解于乙腈和水中，然后使用飽和NaHCO₃水溶液堿化至pH約為8。在減壓下移除乙腈后，用乙酸乙酯(×3)萃取水溶液。將合并的有機層干燥并蒸發(fā)以獲得粗游離堿，通過在MeOH中重結晶對其進行進一步純化。19f的游離堿：LC-MS m/z 455.1([M+H]⁺)。HPLC純度(254nm)：97.4％。¹H NMR(DMSO-d₆)δ10.33(s,1H),8.66(s,1H),8.35(s,1H),8.27(dt-like,J＝7.6Hz,1H),8.23(s,1H),7.44(t,J＝7.6Hz,1H),7.40(dt-like,J＝7.6Hz,1H),5.29(t,J＝7.6Hz,1H),4.59(d,J＝5.6Hz,2H),4.31(m,4H),4.23(t,J＝7.0Hz,2H),3.78(t,4H),1.93(t,J＝7.4Hz,2H),1.87(quintet,2H),1.48(quintet,2H),1.29(m,4H)；¹³C NMR(DMSO-d₆)δ169.0,156.9,153.0,151.8,142.5,140.6,138.2,128.0,127.9,126.2,125.8,118.2,66.3,63.0,45.1,42.8,32.2,29.1,28.0,25.7,25.0。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺C₂₃H₃₀N₆O₄的計算值為455.2402；實驗值為455.2405。

實施例5：7-(6-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)-N-羥基庚酰胺(圖3，化合物8a)的合成

用于合成7-(6-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)-N-羥基庚酰胺的反應方案示于圖10中。

步驟1：7-(6-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)庚酸乙酯(5d)的合成

向3d(來自實施例2，步驟1)(344mg,1.0mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)嘧啶-2-胺4d(240mg,1.1mmol)在二烷(15mL)中的預攪拌溶液中添加K₂CO₃(345mg,2.5mmol)在DI水(2.0mL)中的溶液。將混合物脫氣30min，然后向其中添加Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂(41mg,0.05當量)。將所得混合物在82℃下加熱6小時。LC-MS顯示反應完成。在后處理后，通過快速色譜法(二氧化硅，在己烷中的33％至50％至100％乙酸乙酯)對粗物質進行純化以獲得5d(150mg,37％)。

步驟2：7-(6-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)庚酸乙酯(7b)的合成

向5d(150mg,0.37mmol)在DMF(5mL)中的預攪拌溶液中添加嗎啉(0.70mL,3.0mmol)。將所得混合物在80℃下加熱12小時。LC-MS顯示反應完成。在后處理后，通過將粗物質在DCM中的10％MeOH中重結晶獲得7b(120mg,72％)。

步驟3：7-(6-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)-N-羥基庚酰胺(8a)的合成

向7b(70mg,0.155mmol)、羥胺鹽酸鹽(108mg,15.5mmol)在無水MeOH(1.5mL)中的在干冰上預冷卻的預攪拌溶液中緩慢添加甲醇鈉(901uL,3.9mmol)。將所得混合物在-20℃下攪拌1小時，然后使其升溫至室溫。3小時后，LC-MS顯示反應完成。在后處理后，通過RPHPLC對粗物質進行純化，以獲得7-(6-(2-氨基嘧啶-5-基)-2-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)-N-羥基庚酰胺8a(15mg，作為TFA鹽計算為21％)。LC-MS m/z 442.1([M+H]⁺)。HPLC純度(254nm)：96.6％。¹H NMR(DMSO-d₆)δ10.34(s,1H),9.54(s,2H),8.25(s,1H),7.45(s,2H),4.12(t,J＝6.8Hz,2H),3.78(m,4H),3.72(m,4H),1.93(t,J＝7.2Hz,2H),1.85(m,2H),1.48(m,2H),1.26(m,4H)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺C₂₀H₂₇N₉O₃的計算值為442.2310；實驗值為442.2308。

實施例6：N¹-羥基-N⁸-(3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯基)辛二酰胺(圖3，化合物12f)的合成

用于合成N¹-羥基-N⁸-(3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯基)辛二酰胺的反應方案示于圖11中。

步驟1：8-氧代-8-((3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基)氨基)辛酸甲酯(方案5，4b)的合成

向(3-氨基苯基)硼酸酯(164mg,0.75mmol)、辛二酸單甲酯(155mg,0.83mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)(159mg,0.83mmol)在無水DCM(15mL)中的預攪拌溶液中添加羥基苯并三唑(HOBT,112mg)。將混合物在室溫下攪拌4小時。LC-MS顯示反應完成。在后處理后，通過快速色譜法(二氧化硅，在己烷中的20％至25％乙酸乙酯)對粗物質進行純化以獲得產物4b(149mg,46％)。

步驟2：8-((3-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基)苯基)氨基)-8-氧代辛酸甲酯(5c)的合成

向2,6-二氯-9-異丙基-9H-嘌呤3a(59mg,0.26mmol)、4b(100mg,0.26mmol)在二烷(10mL)中的預攪拌溶液中添加K₂CO₃(88mg,0.64mmol)在DI水(1.0mL)中的溶液。將混合物脫氣30min，然后向其中添加Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂(10mg,0.05當量)。將所得混合物在82℃下加熱6小時。LC-MS顯示反應完成。在后處理后，通過快速色譜法(二氧化硅，在己烷中的25％至33％乙酸乙酯)對粗物質進行純化以獲得5c(100mg,85％)。

步驟3：8-((3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯基)氨基)-8-氧代辛酸甲酯(7c)的合成

向5c(75mg,0.16mmol)在DMF(2mL)中的預攪拌溶液中添加嗎啉(140mg,1.6mmol)。將所得混合物在80℃下加熱16小時。在后處理后，通過快速色譜法(二氧化硅，在己烷中的33％至50％乙酸乙酯)對粗物質進行純化以獲得7c(46mg,55％)。

步驟4：N¹-羥基-N⁸-(3-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)苯基)辛二酰胺(12f)的合成

向7c(46mg,0.09mmol)、羥胺鹽酸鹽(70mg,0.9mmol)在無水MeOH(1mL)中的在干冰上預冷卻的預攪拌溶液中緩慢添加甲醇鈉(520μL,2.2mmol)。將所得混合物在-20℃下攪拌1小時，然后使其升溫至室溫。2小時后，LC-MS顯示反應完成。在后處理后，通過RPHPLC對粗物質進行純化，以獲得12f(20mg，作為TFA鹽計算為35％)。LC-MS m/z 510.2([M+H]⁺)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ10.34(s,1H),10.07(s,1H),8.75(s,1H),8.51(d,J＝8.0Hz,1H),8.37(s,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.45(t,J＝8.0Hz,1H),4.75(m,J＝6.4Hz,1H),3.81(m,4H),3.74(m,4H),2.34(t,J＝7.2Hz,2H),1.94(t,J＝7.2Hz,2H),1.61(m,2H),1.54(d,J＝6.8Hz,6H),1.50(m,2H),1.29(m,4H)。HPLC純度(254nm)：98.4％；HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺C₂₆H₃₅N₇O₄的計算值為510.2824；實驗值為510.2835。

實施例7：(E)-N-羥基-3-(4-(((2-(2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)乙基)氨基)甲基)苯基)丙烯酰胺(圖4，化合物17a)的合成

用于合成(E)-N-羥基-3-(4-(((2-(2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)乙基)氨基)甲基)苯基)丙烯酰胺的反應方案示于圖12中。

步驟1：4-(2-氯-9H-嘌呤-6-基)嗎啉(13a)的合成

將嗎啉(1.39mL,15.87mmol)添加至1a(1.0g,5.29mmol)在THF(26mL)中的溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。在添加嗎啉后立即觀察到白色沉淀。將白色沉淀過濾出來，并用水(×2)和甲醇(×2)洗滌以獲得13a(1.13g,90％)。

步驟2：2-(2-氯-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)乙腈(14c)的合成

向13a(1.18g,4.94mmol)在乙腈/DMSO(19:1)中的溶液中添加2-碘乙腈(0.71mL,9.87mmol)和K₂CO₃(1.36g,9.87mmol)。將所得混合物在60℃下加熱3小時。然后，在真空中移除溶劑并添加水。用DCM(×2)萃取水層，并將合并的有機層用鹽水(×1)洗滌，用MgSO₄干燥，并在真空中蒸發(fā)。通過快速色譜法(二氧化硅，在己烷中的50％乙酸乙酯)對粗油狀物進行純化，以獲得作為淡褐色固體的14c(1.31g,95％)。

步驟3：2-(2-氯-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)乙胺(14d)的合成。

向14c(1.23g,4.42mmol)和NiCl₂·6H₂O(105mg,0.44mmol)在MeOH/THF(2:1)中的攪拌溶液中分份添加硼氫化鈉(1.17g,30.97mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1小時。然后，在真空中移除溶劑并添加飽和碳酸氫鈉溶液。用DCM(×2)萃取水層，并將合并的有機層用鹽水(×1)洗滌，用MgSO₄干燥，并在真空中蒸發(fā)。通過快速色譜法(二氧化硅，在DCM中的10％甲醇)對粗物質進行純化，以獲得作為無色油狀物的14d(577mg,46％)。

步驟4：(E)-3-(4-(((2-(2-氯-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)乙基)氨基)甲基)苯基)丙烯酸甲酯(15a)的合成

向14d(576mg,2.04mmol)在DCE(10mL)中的攪拌溶液中依序添加(E)-3-(4-甲?；交?丙烯酸甲酯(466mg,2.45mmol)、乙酸(0.12mL,2.04mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(649mg,3.06mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌5小時。添加飽和碳酸氫鈉溶液以猝滅反應，并用二氯甲烷(×2)萃取水層。將合并的有機層用鹽水(×1)洗滌，用MgSO₄干燥，并在真空中蒸發(fā)。通過快速色譜法(二氧化硅，在DCM中的4％甲醇)對粗物質進行純化，以獲得作為灰白色固體的15a(414mg,44％)。

步驟5和6：通過遵循與實施例4，步驟3和4類似的程序獲得作為TFA鹽的標題化合物(E)-N-羥基-3-(4-(((2-(2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-6-嗎啉基-9H-嘌呤-9-基)乙基)氨基)甲基)苯基)丙烯酰胺(17a)。LC-MS m/z 531([M+H]⁺)。¹HNMR(DMSO-d₆)δ10.82(br s,1H),9.16(d,J＝2.4Hz,1H),9.07(br s,2H),8.54(dd,J＝2.4Hz,8.8Hz,1H),8.20(s,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,2H),7.46(d,J＝8.0Hz,2H),7.42(重疊,1H),6.88(d,J＝8.8Hz,1H),6.50(d,J＝16Hz,1H),4.60(t,J＝5.2Hz,2H),4.34-4.28(m,6H),3.92(s,3H),3.77(t,J＝4.8Hz,4H),3.60(t-like,2H)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺C₂₇H₃₁N₈O₄的計算值為531.2463；實驗值為531.2473。

實施例8：6-((6-(2-氨基嘧啶-5-基)-9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)氨基)-N-羥基己酰胺(圖5，化合物24a)的合成

用于合成6-((6-(2-氨基嘧啶-5-基)-9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)氨基)-N-羥基己酰胺的反應方案示于圖13中。

步驟1：5-(8-溴-9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)嘧啶-2-胺(22a)的合成

在冰水浴中，向5-(9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-6-基)嘧啶-2-胺7d(400mg,1.13mmol)在CHCl₃(15mL)中的預攪拌溶液中緩慢添加NBS(362mg,2.03mmol)。將所得混合物升溫至室溫，保持2小時。在后處理后，通過快速色譜法(二氧化硅，在DCM中的25％至33％乙酸乙酯)對粗物質進行純化以獲得22a(225mg,44％)。

步驟2：6-((6-(2-氨基嘧啶-5-基)-9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)氨基)己酸甲酯(23a)的合成

向22a(52mg,0.12mmol)在NMP(1mL)中的預攪拌溶液中添加6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽(380mg,1.88mmol)。將所得混合物在130℃下加熱12小時。在后處理后，通過快速色譜法(二氧化硅，在己烷中的20％至80％乙酸乙酯)對粗物質進行純化以獲得23a(44mg,73％)。

步驟3：6-((6-(2-氨基嘧啶-5-基)-9-異丙基-2-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)氨基)-N-羥基己酰胺(24a)的合成

向23a(35mg,0.072mmol)、羥胺鹽酸鹽(51mg,0.72mmol)在無水MeOH(1.0mL)中的在干冰上預冷卻的預攪拌溶液中緩慢添加甲醇鈉(334μL,1.44mmol)。將所得混合物在-20℃下攪拌1小時，然后使其升溫至室溫。2小時后，LC-MS顯示反應完成。在后處理后，通過RPHPLC對粗物質進行純化，以獲得24a(30mg，以TFA鹽計算為69％)。LC-MS m/z 485.3([M+H]⁺)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ10.40(s,1H),9.21(s,2H),7.78(s,1H),7.41(s,2H),4.65(m,J＝6.8Hz,1H),3.43(m,4H),1.98(m,2H),1.65(m,2H),1.58(d,J＝6.8Hz,6H),1.33(m,2H)。HPLC純度(254nm)：99.2％。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺C₂₂H₃₂N₁₀O₃的計算值為485.2732；實驗值為485.2749。

實施例9：4-((((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-N-羥基苯甲酰胺(圖6，化合物35h)的合成

用于合成4-((((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-N-羥基苯甲酰胺的反應方案示于圖14中。

步驟1：2-氯-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-甲醛(29a)的合成

在-78℃下，向4-(2-氯-9-乙基-9H-嘌呤-6-基)嗎啉14a(600mg,2.25mmol)在THF(11mL)中的溶液中添加n-BuLi在己烷中的溶液(2.5M,1.08ml,2.7mmol)。將所得混合物在-78℃下攪拌1小時，然后歷時10min逐滴添加DMF(0.26mL,3.37mmol)。然后，將反應混合物在室溫下再攪拌2小時，然后用冰猝滅反應混合物。將水層用乙酸乙酯(×2)萃取，并用鹽水(×1)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在真空中濃縮，以獲得粗黃色油狀物。通過用己烷/乙酸乙酯(7:3)洗脫的快速色譜法對粗物質進行純化，以獲得作為灰白色固體的29a(398mg,60％)。LC-MS m/z 296([M+H]⁺)。¹HNMR(CDCl₃)δ9.88(s,1H),4.70(br s,2H),4.59(q,J＝7.1Hz,2H),4.06(br s,2H),3.86(s,4H),1.41(t,J＝7.1Hz,3H)。

步驟2：1-(2-氯-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)-N-甲基甲胺(30a)的合成

向2-氯-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-甲醛29a(300mg,1.02mmol)在DCE/MeOH(2:1)中的溶液中添加甲胺在甲醇中的溶液(9.8M,0.83mL,8.14mmol)。在室溫下攪拌30min后觀察到白色沉淀。隨后，將所得混合物再攪拌5小時，并在真空中移除溶劑以獲得灰白色固體。隨后，將粗固體溶解于DCM/MeOH(4:1)的溶液中，并分份添加硼氫化鈉(115mg,3.05mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌15小時。將反應混合物在真空中蒸發(fā)，并添加水。將水層用二氯甲烷(×2)萃取，用鹽水(×1)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在真空中濃縮，以獲得粗灰白色固體。通過用二氯甲烷/甲醇(24:1)洗脫的快速色譜法對粗物質進行純化，以獲得作為白色固體的30a(256mg,82％)。

步驟3A：(E)-3-(4-((((2-氯-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)苯基)丙烯酸甲酯(33a)的合成

向30a(242mg,0.78mmol)在DCE(4.0mL)中的攪拌溶液中依序添加(E)-3-(4-甲酰基苯基)丙烯酸甲酯(163mg,0.86mmol)、乙酸(47μL,0.78mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(248mg,1.17mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌5小時。添加飽和碳酸氫鈉溶液以猝滅反應，并用二氯甲烷(×2)萃取水層。將合并的有機層用鹽水(×1)洗滌，用MgSO₄干燥，并在真空中蒸發(fā)。通過用己烷/乙酸乙酯(3:2)洗脫的快速色譜法對粗物質進行純化，以獲得作為白色固體的33a(328mg,87％)。LC-MS m/z 485([M+H]⁺)。¹HNMR(CDCl₃)δ7.68(d,J＝16Hz,1H),7.49(d,J＝8.0Hz,2H),7.33(d,J＝8.0Hz,2H),6.43(d,J＝16Hz,1H),4.27(q,J＝7.2Hz,2H),4.27(掩蔽峰,4H),3.81(s,3H),3.83-3.80(掩蔽峰,4H),3.70(s,2H),3.59(s,2H),2.23(s,3H),1.34(t,J＝7.2Hz,3H)。

步驟3B：4-((((2-氯-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(33b)的合成

向1-(2-氯-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)-N-甲基甲胺30a(485mg,1.57mmol)在THF(7.8mL)中的溶液中添加4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(466mg,2.03mmol)和三乙胺(0.28mL,2.03mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌16小時，并在真空中移除溶劑。隨后添加飽和碳酸氫鈉，并將水層用乙酸乙酯(×2)萃取，并用鹽水(×1)洗滌，用MgSO₄干燥，過濾并在真空中濃縮，以獲得粗黃色油狀物。通過用己烷/乙酸乙酯(3:2)洗脫的快速色譜法對粗物質進行純化，以獲得作為無色油狀物的33b(703mg,98％)。

步驟4：4-((((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(34h)的合成

向33b(203mg,0.44mmol)在二烷(0.9mL)中的溶液中添加K₂CO₃(122mg,0.89mmol)的水溶液，隨后添加5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)嘧啶-2-胺4a(147mg,0.66mmol)和Pd(dppf)Cl₂·CH₂Cl₂(18mg,0.02mmol)。隨后，將反應混合物在微波反應器中在150℃下加熱20min的時間。移除二烷，并用乙酸乙酯(×3)萃取水層。將合并的有機萃取物用MgSO₄干燥，并在真空中蒸發(fā)。通過用己烷/乙酸乙酯(2:3)至DCM/MeOH(24:1)洗脫的快速色譜法對褐色殘渣進行純化，以獲得作為淡褐色固體的34h(168mg,70％)。LC-MS m/z 518([M+H]⁺)。¹HNMR(CDCl₃)δ9.26(s,2H),7.99(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(d,J＝8.0Hz,2H),5.25(s,2H),4.37-4.32(m,6H),3.91(s,3H),3.86(t,J＝4.8Hz,4H),3.75(s,2H),3.65(s,2H),2.25(s,3H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H)。

步驟5：4-((((2-(2-氨基嘧啶-5-基)-9-乙基-6-嗎啉基-9H-嘌呤-8-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)-N-羥基苯甲酰胺(35h)的合成

在-78℃下，將NaOMe(1.23mL,5.36mmol)逐滴添加至34h(79mg,0.15mmol)和羥胺鹽酸鹽(106mg,1.53mmol)在DCM/MeOH(4.2mL,2:3v/v)中的溶液中。隨后，將反應混合物升溫至室溫，并攪拌30min。然后，將反應混合物用水稀釋以獲得澄清溶液，并用6N HCl中和。通過RPHPLC對粗混合物進行純化，以提供標題化合物35h(60mg,53％，作為雙TFA鹽)?；蛘?，在真空中移除RPHPLC流份的溶劑，并向純化的化合物中添加飽和碳酸氫鈉溶液并用乙酸乙酯(×3)萃取。將合并的有機層用鹽水(×1)洗滌，用MgSO₄干燥，并在真空中濃縮以獲得作為白色固體的35h(17mg,22％，作為游離堿)。35h的TFA鹽：LC-MS m/z 519([M+H]⁺)。¹HNMR(DMSO-d₆)δ11.32(br s,1H),9.14(s,2H),7.84(d,J＝8.0Hz,2H),7.58(d,J＝7.6Hz,2H),7.20(br s,2H),4.63(br s,2H),4.30-4.27(m,8H),3.79(t,J＝4.4Hz,4H),2.78(br s,3H),1.35(t,J＝7.2Hz,3H)。35h的游離堿：LC-MS m/z 519([M+H]⁺)。¹HNMR(DMSO-d₆)δ11.20(s,1H),9.10(s,2H),9.03(s,1H),7.73(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝8.0Hz,2H),7.07(s,2H),4.34-4.25(m,6H),3,79(s,2H),3.76-3.74(m,4H),3.64(s,2H),2.11(s,3H),1.36(t,J＝6.8Hz,3H)。HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺C₂₅H₃₁N₁₀O₃的計算值為519.2575；實驗值為519.2593。

以下表1中的化合物通過使用方案1至5中所述的合成途徑以及與實施例3至9中的程序類似的程序而制備。

表1：顯示所選化合物的表

以下異羥肟酸鹽通過使用方案1至5中所述的合成途徑以及與實施例3至9中的程序類似的程序而制備。所述化合物已被指定任意標識號(由EX表示)，并且實施例2中的方案中所見的對應化合物以及其結構和分析數據顯示于下表2中。

表2：顯示所選異羥肟酸鹽化合物的表

實施例10：酶測定法

HDAC酶測定法

HeLa細胞核提取物被用作常規(guī)HDAC抑制測定法中的HDAC源。重組HDAC酶，即HDAC1(Cat#5005)、HDAC3/NcoR2(Cat#50003)、HDAC4(Cat#50004)、HDAC6(Cat#50006)、HDAC8(Cat#50008)購自BPS Bioscience公司，United States。HDAC4(#H86-31G-10)、HDAC5(Cat#H87-31G)、HDAC9(Cat#H91-31G)、HDAC10(Cat#H92-31G)和HDAC11(Cat#H93-30G)購自SignalChem,Canada。所述測定法以96孔格式(黑色NBS半區(qū)96孔板，Corning#3993)使用基于熒光的HDAC活性測定法進行。用于HeLa細胞核提取物HDAC 1、2、3、6和10的底物Boc-Lys(Ac)-AMC(Cat#I-1875)、用于HDAC 4、5、7、8、9和11的Boc-Lys(Tfa)-AMC(Cat#I-1985)購自Bachem AG,Switzerland。反應混合物(50μL/孔)由測定緩沖液、測試化合物、適當濃度的酶和50μM底物組成，并在室溫下孵育2h，所述測定緩沖液含有25mM Tris pH 8.0、137mM NaCl、2.7mM KCl、1mM MgCl₂、0.1mg/mL BSA。通過添加顯影劑[50μL/孔，含有2mg/mL胰蛋白酶(Cat#T4799,Sigma-Aldrich)、50mM tris pH 8.0和4.5μM LAQ824(CAS404951-53-7)]終止反應，并在37℃下孵育30min。熒光在360nm的激發(fā)波長和460nm的發(fā)射波長下使用BioTek Synergy H4混合多模式酶標儀來檢測，并且原始數據使用BioTek的Gen5(v2.03.01)軟件進行處理。IC₅₀報告于表1中，伏林司他(SAHA)用作陽性對照，其如我們先前所報道的來制備(Wang等人，J.Med.Chem.2011,54,4694-4720)。

激酶酶測定法。

脂質激酶PI3Kα：在ADP-Glo^TM激酶測定法(Promega)中使用來自Invitrogen的Cat#PV4788、或來自BPS Bioscience公司，United States的Cat#40620或者來自SignalChem,Canada的Cat#P27-18H；來自BPS的p110α(H1047R)/p85α(Cat#40641)、來自SignalChem的p110α(E545K)/p85α(Cat#P27-15H)；PI3Kβ：Cat#P28-10H(SignalChem)、Cat#40622(BPS)；PI3Kδ：Cat#P30-10H(SignalChem)。PI3K抑制劑GDC-0941和渥曼青霉素作為粉劑購自LC Laboratories(165New Boston Street Woburn,MA 01801,United States)，并且隨后在DMSO中制備為10mM原液。PI3k和mTOR的雙重抑制劑GDC-0980作為在DMSO中的10mM原液購自Selleck Chemicals(2626S Loop W#225,Houston,TX 77054,United States)。將連續(xù)稀釋的化合物溶液(5μL/孔，3倍，8個濃度)添加至白色NBS半區(qū)96孔板(Corning#3992)中。將在脂質稀釋緩沖液(25mM HEPES,pH 7.5,0.5mM EGTA)中的脂質PIP2:PS(1:3)混合物(0.167mg/mL:0.5mg/mL)用反應緩沖液(3.33×)(159mM HEPES,pH7.5,87mM NaCl,9.5mM MgCl₂,0.08mg/mL BSA)稀釋(1:1)以制備1.67×工作溶液，將PI3K酶用1.67×工作溶液稀釋，并使用15μL/孔進行反應。添加在DI水中的ATP(125μM,5μL/孔)以引發(fā)反應。在室溫下反應1小時后，通過添加ADP-Glo溶液(25μL/孔)終止反應，并在室溫下孵育40min，隨后添加激酶檢測溶液(50μL/孔)，并孵育40min，發(fā)光在Biotek Synergy H4混合多模式酶標儀上讀取，并且原始數據使用BioTek的Gen5(v2.03.01)軟件進行處理。IC₅₀報告于表1中，GDC-0941、GDC-0980和渥曼青霉素用作陽性對照。

IC₅₀定義為酶活性的50％抑制所需的化合物濃度。效能的定義：“I”：1μM<IC₅₀≤10μM?！癐I”：0.1μM<IC₅₀≤1μM?！癐II”：0.01μM<IC₅₀≤0.1μM。“IV”：IC₅₀≤0.01μM。

表3.體外酶促IC₅₀(μM)

實施例11：細胞培養(yǎng)和抗增殖測定法(細胞IC₅₀)

細胞測定法中使用的代表性人類腫瘤細胞系是乳腺癌(BT-474、MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-436和MDA-MB-468)、結腸癌(COLO 205和HCT116)、膠質母細胞瘤(U87MG)、白血病(HL-60、K-562、MOLT-4、MV-4-11、RPMI-8226、SUP-B15)、肺癌(A549、NCI-H460和NCI-H522)、黑色素瘤(A-375)、卵巢癌(SK-OV-3)、胰腺癌(BxPC-3和PANC-1)、前列腺癌(PC-3和DU145)以及腎癌(A-498和ACHN)細胞系。細胞系COLO 205、HCT 116、MOLT-4、MV-4-11、K-562、RPMI8226、SUP-B15、U87MG、SK-OV-3、PC-3、DU-145、NCI-H460、NCI-H522、A375、HepG2、SK-HEP1、BxPC-3和PANC-1購自ATCC，并使用ATCC推薦的培養(yǎng)基進行擴增。細胞系MCF7、TB474、T-47D、MDA-MB-231、MDA-MB-468、MDA-MB-436、A549、A-498、AHCN和HeLa也來自ATCC。將細胞在37℃、5％CO₂下在含有10％FBS和2mM谷氨酰胺的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。細胞用MycoAlert^TMPLUS支原體檢測試劑盒(Lonza Walkersville公司)進行常規(guī)監(jiān)測，以確保它們不含支原體?？股?100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素)僅添加至用于化合物稀釋的培養(yǎng)基和96孔測定板中的細胞中。DMEM(4.5g/L葡萄糖)和RPMI1640從Biopolis Shared Facilities(BSF),Singapore獲得。對于細胞測定法，BxPC-3、PC-3、HCT 116、COLO 205、MV-4-11、RPMI8226、HL-60、SUP-B15、T-47D在RPMI1640中進行培養(yǎng)；A-498、ACHN、DU145、MCF7、PANC-1、U-87MG、NCI-H460、NCI-H522、HeLa和A-375在DMEM中進行培養(yǎng)；BT-474、MDA-MB-231、MDA-MB-468、MDA-MB-436在DMEM/F12(1:1)中進行培養(yǎng)。

對于典型的篩選實驗，取決于各細胞系的倍增時間和測定線性度，將細胞(100μL/孔)以2,000至30,000個細胞/孔的鋪板密度接種至96孔微量滴定板中。透明的96孔組織培養(yǎng)板(Corning#3596或Nunc 167008)用于比色測定法和監(jiān)測細胞的生長狀態(tài)，而白色96孔組織培養(yǎng)板(Corning#3917)用于發(fā)光和熒光測定法。對于粘附細胞，在細胞接種后，將微量滴定板在37℃、5％CO₂、95％空氣和100％相對濕度下孵育過夜(直至24小時)，隨后添加化合物。懸浮細胞在細胞接種后立即用測試化合物進行處理。

將測試化合物使用相同的培養(yǎng)基連續(xù)稀釋(3倍或4倍，8個濃度)，并添加至板中(15至25μL/孔)。培養(yǎng)72小時后，通過使用以下兩種方法針對細胞的細胞毒性/生存力對板進行測定。對于所選化合物，也測定了藥物處理24小時和48小時后的IC₅₀。

磺酰羅丹明B(SRB)方法

將板中的細胞用冷的三氯乙酸(TCA)(50％w/v，在DI水中，每個孔中1/4體積的培養(yǎng)基)固定，并在4℃下孵育1小時(粘附細胞)或2小時(懸浮細胞)。將板洗滌5次(自來水×3，DI水×2)，并風干。將在1％乙酸中的0.4％(w/v)SRB溶液添加至每個孔中(60μL/孔)，并將板在室溫下孵育30min，然后用1％乙酸溶液洗滌4次，并風干。通過添加Tris堿溶液(10mM,100μL/孔)使結合的染料溶解，并在515nm的波長下在BioTek Synergy H4混合多模式酶標儀上讀取吸光度。

發(fā)光細胞生存力測定法

向板中添加試劑(95μL/孔)，并在BioTek H4酶標儀上按照制造商的方案讀取發(fā)光。

原始數據使用BioTek的軟件Gen5(v2.03.01)進行處理以生成抑制IC₅₀值。伏林司他和GDC-0941用作陽性對照。

IC₅₀定義為與未經處理的細胞相比細胞的50％抑制所需的化合物濃度。IC₅₀數據示于下面的表4和表5中。

效能的定義如下：

“I”：IC₅₀>10μM?！癐I”：2μM<IC₅₀≤10μM?！癐II”：0.5μM<IC₅₀≤2μM?！癐V”：IC₅₀≤0.5μM。

表4.體外細胞IC₅₀(μM)

實施例12：蛋白質印跡分析

培養(yǎng)細胞，并如上文細胞培養(yǎng)和抗增殖測定法部分(實施例11)中所述用測試化合物進行處理。將細胞用冷的DPBS洗滌兩次并在冰上冷卻，并用裂解緩沖液[50mM Tris(pH7.4)、2.5mMβ-甘油磷酸酯、150mM NaCl、1％Np-40、0.5％脫氧膽酸鈉、0.1％SDS、2mM原釩酸鈉、10mM氟化鈉、1mM EDTA以及新添加的蛋白酶抑制劑PMSF(0.1mM)和蛋白酶抑制劑混合物((Cat#03969,Nacalai Tesque公司或Cat.#539134,Calbiochem)進行處理。在20,000×g下使裂解物澄清20×2min，并使用BCA蛋白質測定法K(Cat#71285-3,Novagen,USA)測定蛋白質的濃度。通過SDS-PAGE對細胞裂解物中的蛋白質進行解析，并轉移至PVDF，并用適當的一級抗體和二級抗體進行探測。組蛋白H3(乙?；鵎9)(Cat#9649)、組蛋白H3(Cat#9715)、乙?；?α-微管蛋白(Lys40)(Cat#5335)、α-微管蛋白(Cat#2125)、pAkt(Ser473)(Cat#4060)、pAkt(Thr308)(Cat#4056、#2965)、抗-Akt(pan)(Cat#4685)、pS6核糖體蛋白(Ser240/244)(Cat#5364)、S6核糖體蛋白(Cat#2217)、pS6核糖體蛋白(S240/244)、磷酸化PRAS40(Thr246)(Cat#2997)、p-mTOR(S2448)(Cat#5536)、pErk1/2(T202/y204)(Cat#4376)、磷酸化4E-BP1(Thr37/46)(Cat#2855)、p70S6激酶(Cat#2708)、磷酸化p70S6激酶(Thr389)(Cat#9234)、磷酸化p70S6激酶(Thr421/Ser424)(Cat#9204)、磷酸化p70S6激酶(Ser371)(Cat#9208)、pPDK1(Ser241)(Cat#3438)和HRP連接的抗兔IgG(Cat#7074)抗體購自Cell Signaling Technology公司，USA?？功?肌動蛋白(Cat#ab8227)來自Abcam，并且抗GAPDH-HRP(Cat#sc-25778-HRP)來自Santa Cruz Biotechnology公司。蛋白質帶使用Pierce ECL蛋白質印跡法底物(Cat#3229)檢測，并使用FUJI Super RX-N膠片捕獲，隨后掃描并使用ImageJ(1.47V)軟件進行分析。代表性蛋白質印跡圖像示于圖15中，并且分析結果由圖17至20呈現。

在圖15中，示出了PC-3細胞中的HDAC和PI3k-Akt-mTOR途徑的抑制。將PC-3細胞用以下濃度的測試化合物(均含有0.1％DMSO)在37℃下處理24小時，并隨后根據蛋白質印跡分析部分進行處理。

對于所測試的化合物實例，觀察到組蛋白3(Lys 9)和α-微管蛋白的超乙?；?圖15A、15B、15C和15D)，并且如EX1和EX2(圖15A)所展示，超乙酰化效果是劑量依賴性的。所測試的實例也以廣泛范圍的活性抑制PI3K-Akt-mTOR途徑。除了EX40和EX41以外，它們全部抑制Akt(Ser473)的磷酸化或mTORC2的活性(圖15A和15B)。它們也抑制S6(Ser240/244)的磷酸化或mTORC1的活性(EX2、EX40和EX41除外，圖15C和15D)。DMSO(0.1％)用作蛋白磷酸化的空白對照，并在通過ImageJ進行分析時標準化為100％。PC-3細胞也用胰島素(100μg/mL)處理30min，并且pAkt和pS6磷酸化均顯著增強。將凝膠數字化，并通過ImageJ進行分析，詳細信息參見圖17至20。

在圖16中，示出了MCF7細胞中的PI3K-AKT-mTOR途徑的調節(jié)。將MCF7細胞血清饑餓過夜，并用測試化合物處理2小時，包括30min的胰島素刺激(20μg/mL)。V＝作為空白對照的媒介物DMSO(0.1％)，并且在ImageJ分析中將其磷酸化水平標準化為100％。將凝膠數字化，并通過ImageJ進行分析；詳細信息參見圖17至20。

在圖17中，示出了由于HDAC的抑制而引起的組蛋白3(Lys 9)的超乙?；?。圖17A示出了用上文所示濃度的測試化合物處理24小時的PC-3細胞(圖15)。該圖表示來自兩個蛋白質印跡分析的結果。伏林司他(10μM)用作陽性對照，并且在ImageJ分析中將其乙?；綐藴驶癁?00％。圖17B示出了血清饑餓過夜并用測試化合物處理2小時，包括對于所有樣品在最后30分鐘胰島素(20μg/mL)刺激的MCF7細胞。媒介物DMSO(0.1％)用作空白對照，并且將其acH3水平標準化為1。如果適用，Y軸表示為平均值±SD。

在圖18中，示出了由于HDAC6的抑制而引起的α-微管蛋白的超乙?；D18A示出了用上文所示濃度的測試化合物處理24小時的PC-3細胞(圖15)，該圖表示來自兩個蛋白質印跡分析的結果。伏林司他(10μM)用作陽性對照，并且在ImageJ分析中將其乙酰化水平標準化為100％。圖17B示出了血清饑餓過夜并用測試化合物處理2小時，包括對于所有樣品在最后30分鐘胰島素(20μg/mL)刺激的MCF7細胞。媒介物DMSO(0.1％)用作空白對照，并且將其乙?；綐藴驶癁?。如果適用，Y軸表示為平均值±SD。

在圖19中，示出了PI3K-AKT-(mTOR)途徑：p-Akt(Ser473)水平和mTORC2的活性的調節(jié)。圖19A示出了用上文所示濃度的測試化合物處理24小時的PC-3細胞(圖15)，該圖表示來自兩個蛋白質印跡分析的結果。媒介物DMSO(0.1％)用作空白對照，并且在ImageJ分析中將其磷酸化水平標準化為100％。在胰島素(100μg/mL,30min)處理的細胞中，pAkt水平顯著增強。圖19B示出了血清饑餓過夜并用測試化合物處理2小時，包括對于所有樣品在最后30分鐘胰島素刺激(20μg/mL)的MCF7細胞。媒介物DMSO(0.1％)用作空白對照，將其磷酸化水平標準化為100％。如果適用，Y軸表示為平均值±SD。

在圖20中，示出了PI3K-AKT-(mTOR)途徑：mTORC1活性的調節(jié)。將MCF7細胞血清饑餓過夜并用測試化合物處理2小時，包括對于所有樣品在最后30分鐘胰島素刺激(20μg/mL)。媒介物DMSO(0.1％)用作空白對照，將其磷酸化水平標準化為100％。在圖20A中，示出了MCF7細胞中的p-P70S6K(Thr389)/p-P85S6K(Thr412)水平。在圖20B中，示出了MCF7細胞中的p-S6(Ser240/244)水平。在圖20C中，示出了MCF細胞中的p-4E-BP1(Thr37/46)水平。在圖20D中，將PC-3細胞用上文所示濃度的測試化合物處理24小時(圖15)。在胰島素(100μg/mL,30min)處理的細胞中，pS6水平增強。如果適用，Y軸表示為平均值±SD。

實施例13：半胱天冬酶活性測定法

培養(yǎng)細胞，并如上文細胞培養(yǎng)和抗增殖測定法部分中所述在96孔板中用測試化合物進行處理。將半胱天冬酶測定緩沖液[100mM HEPES(pH7.5)、200mM NaCl、4mM EDTA、0.1％CHAPS以及新添加的5mM DTT和50μM半胱天冬酶底物Z-DEVD-R110或(Z-Asp-Glu-Val-Asp)₂-羅丹明110(Cat#M-2615,Bachem,Switzerland)]添加至細胞中(100μL/孔)，并將板在室溫下孵育，并針對半胱天冬酶活性在BioTek Synergy H4酶標儀(激發(fā)：496/9nm，發(fā)射：521/9nm)上進行監(jiān)測。如果半胱天冬酶活性低，孵育時間可以延長至過夜(18小時)。星形孢菌素用作陽性對照。代表性結果示于圖21中。

圖21示出了測試實例的半胱天冬酶活性。將細胞用EX1、EX2、GDC-0941、伏林司他和星形孢菌素(作為陽性對照)處理，并在不同時間點監(jiān)測半胱天冬酶活性。圖21A示出了MV-4-11細胞，在6、24、48和72小時監(jiān)測半胱天冬酶活性，并且在24小時觀察到最大活性。EX2和EX1與伏林司他相比在半胱天冬酶活性誘導方面更有效。GDC0941顯示非常弱的活性和效能。分別地，對于EX1、EX2、伏林司他和GDC-0941，EC₅₀＝0.52、0.50、1.16和12.7μM。圖21B示出了在24、48和72小時時間點監(jiān)測的PC-3細胞。在48小時觀察到最大半胱天冬酶活性。EX1和EX2與伏林司他相比在半胱天冬酶活性誘導方面更有效。GDC-0941在兩種腫瘤細胞中均顯示非常弱的活性。如果適用，Y軸表示為平均值±SD。

實施例14：細胞生存力/細胞毒性測定法

培養(yǎng)細胞，并如上文細胞培養(yǎng)和抗增殖測定法部分中所述在96孔板中用測試化合物進行處理，使用CytoTox-Glo^TM細胞毒性測定試劑盒(Promega)按照制造商的方案測量死細胞和活細胞的含量。簡言之，將CytoTox-Glo^TM細胞毒性測定試劑(48μL/孔)添加至96孔板中的細胞中，并使用BioTek Synergy H4酶標儀記錄發(fā)光信號，然后添加裂解試劑(48μL/孔)，并記錄由死細胞和活細胞產生的發(fā)光信號。生存力可通過從總發(fā)光值減去由實驗性細胞死亡造成的發(fā)光信號來計算。星形孢菌素用作陽性對照。代表性結果示于圖22中。

圖22示出化合物誘導的MV-4-11細胞的死亡。將細胞用EX1、EX2、GDC-0941、伏林司他和星形孢菌素(作為陽性對照)進行處理，并使用CytoTox-Glo^TM細胞毒性測定試劑盒來評估細胞死亡。在不同時間點監(jiān)測經處理對未經處理細胞死亡的倍數。最大細胞死亡發(fā)生在添加測試化合物后48小時時。圖22A示出了EX1，即化合物實例1。圖22B示出了EX2，即化合物實例2。圖22C示出了GDC-0941。圖22D示出了對于EX1、EX2、GDC-0941和伏林司他48小時時的細胞死亡。分別地，對于EX1、EX2、伏林司他和GDC-0941，細胞死亡效能EC₅₀估計為0.19、0.069、0.58和2.75μM。如果適用，Y軸表示為平均值±SD。

實施例15：微粒體穩(wěn)定性

GIBIO合并的人肝微粒體(HLM)(Cat#HMMCPL)、小鼠肝微粒體(MLM)(Cat#BCMCPL)和大鼠肝微粒體(RLM)(Cat#RTMCPL)購自Life Technologies。孵育由測試化合物(5μM)或對照化合物(維拉帕米和右美沙芬)、0.5mg/mL微粒體、3.3mM MgCl₂、1.3mMβ-NADPH和100mM磷酸鉀緩沖液(pH 7.4)組成。將樣品孵育30min、45min或60min。用含有0.3％甲酸的冰冷乙腈終止反應。隨后，將樣品在4℃下在20,000×g下離心15min。上清液通過LC-MS進行分析。代表性結果示于表6中。

表6.微粒體穩(wěn)定性

化合物的體外代謝穩(wěn)定性使用肝微粒體(LM)在0.5mg/mL的蛋白質下孵育30min(小鼠，MLM)、45min(大鼠，RLM)、30min或45min(人類，HLM)進行評估。使用LC-MS來測量剩余母體化合物的百分比。維拉帕米和右美沙芬用作陽性對照。

實施例16：藥物代謝動力學(PK)

所有動物研究按照機構動物護理和使用委員會批準的方案在新加坡在生物資源中心(BRC)進行。給BALB/c小鼠(8-12周齡，BRC，Biopolis，新加坡)經i.v.、p.o.和i.p.給藥化合物實例的各種配制溶液或混懸液。在連續(xù)放血后采集血液并離心，并將血漿冷凍在-80℃下。將組織(例如，肝、肺和腎)快速冷凍在干冰或液氮中，并保持在-80℃下，直至分析。向血漿樣品中添加內標卡馬西平(CBZ)，并如先前所述(Jayaraman等人，Drug Metab.Dispos.2011,39,2219-2232)進行處理。定量分析在裝備有Waters2996光電二極管陣列(PDA)檢測器和micromass Quattro微質譜儀的Waters 2795分離模塊上進行。將樣品在具有SecurityGuard芯柱(C18 4×2.0mm)的Phenomenex Luna C18(2),2.0×50mm柱上以0.5mL/min的流速以6-min梯度(x％至95％B，溶劑A：具有0.1％甲酸(FA)的超純水，溶劑B：具有0.1％FA的甲醇，x選自5至50)進行解析，并且數據使用多反應監(jiān)測獲取并通過MasLynx軟件(V 4.1,Waters公司)中的QuanLynx來量化。PK參數使用Microsoft Excel 2010基于由Summit PK網站(http://www.summitpk.com/equations/equations.htm)定義的PK公式來估計。使用曲線下面積計算和多指數曲線剝離。所述方法可為先前的數據提供與WinNonlin(Pharsight,Mountain View,CA)相當的結果。

實施例17：體內藥效學(PD)和功效研究

所有動物研究按照機構動物護理和使用委員會批準的方案在新加坡在生物資源中心(BRC)進行。給雌性BALB/c裸小鼠(7周齡和10周齡，BRC，Biopolis，新加坡)或雌性NCr裸小鼠(5-6周齡和7-9周齡，InVivos Pte Ltd，新加坡)在右脅腹中接種約5×10⁶個腫瘤細胞，所述腫瘤細胞懸浮于無血清的DMEM或RPMI1640生長培養(yǎng)基和Matrigel(Cat.No:354234,Corning Discovery Labware)(1:1)中，并以100μL至150μL的總體積注射。腫瘤使用數字卡尺來測量，并且腫瘤體積通過使用下式來估計：腫瘤體積＝長度×寬度²×0.5。腫瘤生長抑制(TGI％)＝[1-(T_t-T₀)/(C_t-C₀)×100，C₀和C_t分別為在第0天和第t天對照組(媒介物)的平均腫瘤體積；T₀和T_t分別為在第0天和第t天治療組的平均腫瘤體積。進行的所有統(tǒng)計均使用GraphPad Prism(v4.00或v6.04，GraphPad Software公司)進行，使用雙尾非配對t檢驗來比較兩個組，并且使用單因素方差分析隨后Dunnett多重比較檢驗來比較三個和更多個組。

實施例18：靶點調節(jié)

在PC-3前列腺癌異種移植物中

給PC-3荷瘤BALB/c裸小鼠口服給藥媒介物、伏林司他(200mg/kg)、EX1(150mg/kg)和EX78(100mg/kg)。在指定的時間點(每個時間點兩只小鼠)采集血液樣品、腫瘤和其它組織用于PK/PD研究。PC-3腫瘤中的H3的超乙酰化通過EX1和EX78治療小鼠中的腫瘤的蛋白質印跡分析來證實，伏林司他用作陽性對照(圖23)。

圖23示出在PC-3腫瘤中的組蛋白超乙?；D23A示出腫瘤組織的蛋白質印跡分析。泳道和所使用的濃度如下：

在治療的小鼠中觀察到PC-3腫瘤中的顯著組蛋白超乙酰化。圖23B示出了數字化和標準化的蛋白質印跡分析結果。如果適用，Y軸表示為平均值±SEM。

在MV4-11急性髓樣白血病異種移植物中

MV4-11荷瘤小鼠也經由靜脈內(IV)(50mg/kg)、腹膜內(IP)(100mg/kg)和口服(PO)(150mg/kg)途徑用EX2、經由IV(25mg/kg)和PO(100mg/kg)兩種途徑用EX78進行處理，以用于藥效學(PD)評估。EX2的所有三種給藥途徑均導致MV4-11腫瘤中的H3的超乙?；?圖24)。EX78也經由兩種給藥途徑誘導H3的超乙?；?。

圖24示出在MV4-11腫瘤中的組蛋白超乙?；?。給MV4-11荷瘤BALB/c裸小鼠給藥媒介物[DMSO/PEG400/無菌水(10:40:50)]、EX2和EX78。在指定的時間點采集腫瘤。圖24A示出腫瘤組織的蛋白質印跡分析。

泳道和所使用的濃度如下：

在治療的小鼠中觀察到MV4-11腫瘤中的顯著組蛋白超乙酰化。圖24B示出了數字化和標準化的蛋白質印跡分析結果。如果適用，Y軸表示為平均值±SEM。

實施例19：功效

在NCr裸小鼠HepG2異種移植物模型中

給雌性NCr裸小鼠(CrTac:NCr-Foxn1^nu，5周齡，InVivos Pte Ltd,Singapore)在右脅腹中接種6×10⁶個HepG2細胞。當HepG2腫瘤大小平均為275mm³時(植入后13天)，將小鼠隨機分組，并口服給藥媒介物、EX2(150mg/kg)和甲苯磺酸索拉非尼(98mg/kg)，持續(xù)4周(每周QD×5)。媒介物組的小鼠由于腫瘤負荷在第3個周期的最后一次給藥后在第18天安樂死。EX2展示顯著的腫瘤抑制，在第18天(最后一次給藥后)TGI＝96％(圖25)。參照物甲苯磺酸索拉非尼(98mg/kg)同樣有效，但TGI＝71％(第18天)。

圖25示出在NCr裸小鼠HepG2異種移植物模型中的功效。HepG2荷瘤雌性NCr裸小鼠從第0天(平均腫瘤體積約為275mm³)用媒介物或EX2(150mg/kg)進行治療，持續(xù)4個周期：給藥5天停藥2天(每周或每個周期QD×5)。圖25A示出從第4天達成顯著的腫瘤生長抑制(TGI)。在第3個周期的最后一次給藥后在第18天，TGI＝96％，p＝0.0034。治療持續(xù)至第4個周期，而媒介物組的小鼠由于腫瘤負荷在第18天安樂死。圖25B示出EX2在NCr裸小鼠中耐受良好，在這個劑量水平下未觀察到顯著毒性。如果適用，Y軸表示為平均值±SEM。

在CB17 scid小鼠HepG2異種移植物模型中

由于EX2在HepG2荷瘤NCr裸小鼠中顯示優(yōu)良的抗腫瘤活性，因此在CB17 scid小鼠中進一步評價劑量反應。給雌性C.B-17 scid小鼠(C.B-Igh-1^b/IcrTac-Prkdc^scid，5周齡，InVivos Pte Ltd,Singapore)在右脅腹中接種5×10⁶個HepG2細胞。當HepG2腫瘤大小平均為約240mm³時，將荷瘤小鼠隨機分組(每組5只小鼠)，并在第0天口服給藥媒介物、EX2(150mg/kg、75mg/kg和37.5mg/kg)和甲苯磺酸索拉非尼，持續(xù)4周(每周QD×5)。EX2展示劑量依賴性方式的顯著腫瘤抑制。所有劑量水平均耐受良好并達成顯著的腫瘤生長延遲(圖26)。

在圖26中，示出了在CB17 scid小鼠HepG2異種移植物模型中的功效。HepG2荷瘤CB17 scid小鼠從第0天(平均腫瘤體積約為240mm³)用媒介物、EX2(150mg/kg、75mg/kg和37.5mg/kg)和甲苯磺酸索拉非尼(100mg/kg QD×5×2，隨后80mg/kg,QD×5×2)進行治療，持續(xù)4周(每周QD×5)。圖26A示出從第4天達成顯著的腫瘤生長抑制(TGI)。在第4個周期的最后一次給藥后，在第26天，分別地，對于EX2(150mg/kg、75mg/kg和37.5mg/kg)和甲苯磺酸索拉非尼，TGI＝117％、82％、38％和98％。圖26B示出，在第26天，治療組的腫瘤大小顯著小于媒介物組，對于EX2 150mg/kg和75mg/kg組以及索拉非尼組，p<0.01，但對于37.5mg/kg組，p>0.05。圖26C示出EX2在所有劑量水平下均耐受良好，沒有顯著體重(BW)損失。媒介物組由于增加的腫瘤負荷而具有BW損失。甲苯磺酸索拉非尼(100mg/kg)耐受性不佳；在第3個周期和第4個周期中，將其劑量降低至80mg/kg。圖26D示出將腫瘤大小針對初始值(作為100％)標準化。在最后一次給藥(第25天)后，腫瘤在長時間的生長延遲之后開始再生長，但150mg/kg的EX2似乎比索拉菲尼更有效。如果適用，Y軸表示為平均值±SEM。

在NCr裸小鼠HuH-7異種移植物模型中

給雌性NCr裸小鼠(CrTac:NCr-Foxn1^nu，8周齡，InVivos Pte Ltd,Singapore)在右脅腹中接種6.2×10⁶個HuH-7細胞。當HuH-7腫瘤大小平均為約103mm³時，將小鼠隨機分組，并分別口服給藥媒介物[ HS15/無菌水(10:36:54)]和EX2(150mg/kg)，持續(xù)兩周(每周QD×5，每組5只小鼠)。EX2展示良好的腫瘤生長抑制，在第12天(最后一次給藥后)，TGI＝102％，并且再次，EX2在這個劑量水平下耐受良好(相對于媒介物組，最大體重損失小于5％)。用大的良好建立的腫瘤重復實驗。當HuH-7腫瘤大小平均為約363mm³時，將小鼠隨機分組(每組5只小鼠)，并口服給藥媒介物[ HS15/無菌水(10:36:54)]和EX2(150mg/kg)。EX2展示良好的腫瘤生長抑制，在一個治療周期(每周QD×5)后在第6天，TGI＝88％(p＝0.0016)，并且在兩個治療周期(QD×5×2)后在第12天，TGI＝67％(p＝0.0082)(圖27)。

在圖27中，示出了在NCr裸小鼠HuH-7異種移植物模型中的功效。HuH-7荷瘤NCr裸小鼠從第0天用媒介物或EX2(150mg/kg)進行治療(每周或每個周期，QD×5，或者給藥5天停藥2天)。圖27A示出良好的腫瘤生長抑制，在用EX2(QD×5×2)治療小鼠(在第0天，平均腫瘤體積為103mm³)后，在第12天，TGI＝102％。圖27B示出EX2對良好建立的腫瘤(在第0天，平均腫瘤大小為363mm³)同樣有效，在一個治療周期后，TGI＝88％(p＝0.0016)并且在第12天，TGI＝67％(p＝0.0082)。在圖27B中，將腫瘤大小針對初始體積(第0天作為100％)標準化。如果適用，Y軸表示為平均值±SEM。

在4T1小鼠轉移性乳腺癌模型中

給雌性NCr裸小鼠(CrTac:NCr-Foxn1^nu，13周齡，InVivos Pte Ltd,Singapore)在第四乳腺脂肪墊中植入1.1×10⁶個4T1( CRL-2539^TM)細胞。當4T1腫瘤大小平均為70-74mm³時(腫瘤植入后5天)，將荷瘤小鼠隨機分組(每組n＝5)，并在第0天口服給藥媒介物和EX2(150mg/kg)，持續(xù)3個周期(QD×5，每個周期給藥5天停藥1天)，第16天是3個周期的最后一次給藥。EX2展示顯著的腫瘤抑制，在第17天，TGI＝53％，p＝0.0063(圖28)。

在圖28中，示出了在4T1小鼠轉移性乳腺癌模型中的功效。4T1荷瘤雌性NCr裸小鼠用媒介物和EX2治療3個周期(QD×5，每個周期給藥5天停藥1天，每組5只小鼠)。在圖28A中，示出了腫瘤生長曲線。在圖28B中，示出了第17天的腫瘤大小，p＝0.0063。如果適用，Y軸表示為平均值±SEM。

在NCI-H460肺癌異種移植物模型中

給雌性C.B-17 scid小鼠(C.B-Igh-1^b/IcrTac-Prkdc^scid，7周齡，InVivos Pte Ltd,Singapore)在右脅腹中接種6.8×10⁶個NCI-H460細胞。當腫瘤大小平均介于150mm³和160mm³之間時，將小鼠隨機分組，并在第0天口服給藥媒介物和EX2(150mg/kg)，持續(xù)兩周(每周QD×5)。EX2展示顯著的腫瘤生長抑制，在兩個治療周期后，在第12天，TGI＝46％(p＝0.0292)。EX2在這個劑量水平下也耐受良好(圖29)。

在圖29中，示出了在NCI-H460肺癌異種移植物模型中的功效。給雌性NCI-H460荷瘤CB17 scid小鼠口服給藥媒介物和EX2(150mg/kg)，持續(xù)兩周(每周QD×5)。圖29A示出EX2展示顯著的腫瘤生長抑制，在兩個治療周期后，在第12天，TGI＝46％(p＝0.0292)。圖29B示出EX2在這個劑量水平下也耐受良好。如果適用，Y軸表示為平均值±SEM。

在MV4-11異種移植物模型中

給雌性BALB/c裸小鼠(C.Cg/AnNTac-Foxn1^nu[cc]NE9，5周齡，InVivos Pte Ltd,Singapore)在右脅腹中接種11×10⁶個MV4-11細胞。當腫瘤大小平均為173mm³時，將小鼠隨機分組(每組6只小鼠)，并在第0天口服給藥媒介物和EX2(150mg/kg和75mg/kg)，持續(xù)3周(每周QD××5)。從第12天至第20天，對于150mg/kg組(兩組，在第6天，一例非治療相關性死亡，最終n＝11)，EX2展示平均TGI＝52％(p<0.05)，但對于75mg/kg組，TGI＝23％(p>0.05)(圖30)。

在圖30中，示出了在MV4-11異種移植物模型中的功效。給荷瘤雌性BALB/c裸小鼠口服給藥媒介物和EX2(150mg/kg和75mg/kg)，持續(xù)3周(每周QD×5)。圖30A示出了腫瘤生長曲線：將腫瘤大小針對初始值(第0天作為100％)標準化，EX2展示顯著腫瘤抑制，在第12天與第20天之間，對于150mg/kg組，平均TGI＝51％(p<0.05)，但75mg/kg不顯著有效。圖30B示出了第20天的腫瘤大小，分別地，對于150mg/kg和75mg/kg，TGI＝51％(p<0.05)和TGI＝20％(p>0.05)。如果適用，Y軸表示為平均值±SEM。

實施例19：總結

如上文所定義的化合物對HDAC酶和PI3K激酶表現出抑制活性(表3)并且對多種人腫瘤細胞系表現出抗增殖活性(表4和表5)。大多數如上文所定義的化合物表現出良好的藥物樣性質，即，體外代謝穩(wěn)定性、溶解性和期望的親脂性(表6)。所選化合物也對腫瘤細胞中的多個靶點顯示出活性(圖15和圖16)，即，由于抑制HDAC而使組蛋白(圖17)和α-微管蛋白(圖18)超乙?；?；PI3K-AKT-mTOR途徑：減少磷酸化Akt(Ser473)或抑制mTORC2的活性(圖19)，以及減少磷酸化P70S6K(Thr389)/磷酸化P85S6K(Thr412)、磷酸化S6(Ser240/244)和磷酸化4E-BP1(Thr37/46)或抑制mTOCR1的活性(圖20)。這些化合物也誘導PC-3細胞和MV-4-11細胞的細胞凋亡(圖21)、MV-4-11細胞的細胞死亡(圖22)，比PI3k抑制劑GDC-0941或HDAC抑制劑伏林司他更加有效。

這些化合物也調節(jié)腫瘤模型中的生物藥物靶點。例如，EX1和EX78當在荷瘤小鼠中口服給藥時誘導PC-3前列腺腫瘤中的組蛋白超乙?；?圖23)，EX2和EX78通過不同的施用途徑誘導MV4-11異種移植物腫瘤中的組蛋白超乙?；?圖24)。EX2還在HCC模型，例如NCr裸小鼠HepG2異種移植物模型(圖25)和CB17 scid小鼠HepG2異種移植物模型(圖26)以及HuH-7 HCC異種移植物模型(圖27)中表現出優(yōu)良的抗腫瘤活性?；衔顴X2還被證實當口服給藥時在許多種異種移植物模型中具有廣泛的抗腫瘤活性：4T1小鼠轉移性乳腺癌模型(圖28)、NCI-H460肺癌異種移植物模型(圖29)和MV4-11白血病異種移植物模型(圖30)。

工業(yè)實用性

如上文所定義的化合物可適用于其中可利用其抑制上述類型的脫乙?；浮⒅|激酶和蛋白激酶的能力的諸多種應用。例如，如上文所定義的化合物可用于單獨地或同時抑制脫乙?；负图っ浮Ｋ龌衔镆部捎糜谥委熁蝾A防哺乳動物病況或病癥，其中抑制脫乙?；负?或蛋白激酶和/或其輔因子和/或經由非特定的機制預防、抑制或改善所述病況的病狀或癥狀。所述病況或病癥是癌癥、血管發(fā)生病癥或病理性血管發(fā)生、纖維化、炎性病況、哮喘、神經病癥、神經變性病癥、肌肉變性病癥、自身免疫性病癥、血液病癥或骨髓病癥。所述化合物特別可用于治療癌癥，例如白血病或骨髓瘤、淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、肝細胞癌和其它富血管性腫瘤以及視網膜血管發(fā)生疾病。如上文所定義的化合物也可應用于誘導細胞重新編程以產生iPS細胞。

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