本發(fā)明是根據(jù)由美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院（National Institutes of Health）授予的批準(zhǔn)5R01A1072435在政府支持下進(jìn)行。美國(guó)政府享有本發(fā)明的某些權(quán)利。

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求于2014年5月2日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/987,566的優(yōu)先權(quán)，將其通過引用以其全文結(jié)合在此。

背景

免疫性研究指示出在脊椎動(dòng)物中兩種類型的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)（AIS）的出現(xiàn)。人類主要通過Ig V-(D)-J基因區(qū)段和體細(xì)胞高變的組裝產(chǎn)生了龐大組庫(kù)的基于Ig結(jié)構(gòu)域的T和B細(xì)胞抗原受體。七鰓鰻和盲鰻具有基于可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）的可替代的AIS，其多樣性是從富亮氨酸重復(fù)（LRR）盒產(chǎn)生的。組合的VLR組裝可以產(chǎn)生可以與人類免疫球蛋白類多樣性相比較的龐大組庫(kù)受體。參見，韓（Han）等人。通過可變淋巴細(xì)胞受體的抗原識(shí)別，科學(xué)（Science），2008 321:1834-183；希拉諾（Hirano）等人，脊椎動(dòng)物中適應(yīng)性免疫的進(jìn)化（The evolution of adaptive immunity in vertebrates），免疫學(xué)進(jìn)展（Adv Immunol），2011,109:125-57；WO 2013/078425；US 2011/0230374；WO 2010/065407；和WO 2008/016854。郭（Guo）等人報(bào)道了七鰓鰻中的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)。自然（Nature），2009,459(7248):796-80。奈都子（Tasumi）等人報(bào)道了高親和力七鰓鰻VLRA和VLRB單克隆抗體。美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc Natl Acad Sci U S A）2009,106(31):12891-6。中原（Nakahara）等人報(bào)道了用七鰓鰻獨(dú)特位特異性抗體監(jiān)測(cè)的慢性淋巴細(xì)胞白血病。癌癥免疫學(xué)研究（Cancer Immunol Res）2013,1(4):223-228。

賓茲（Binz）等人報(bào)道了來自非免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的工程結(jié)合蛋白。自然生物技術(shù)（Nat Biotechnol.），2005,23(10):1257-68。

李（Lee）等人報(bào)道了通過模塊工程基于無頜類脊椎動(dòng)物的可變淋巴細(xì)胞受體的結(jié)合支架。美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc Natl Acad Sci U S A）2012,109(9):3299-304。

在此引用的參考文獻(xiàn)并非對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的承認(rèn)。

概述

本披露涉及可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）修飾，如包括特異性結(jié)合靶分子的此類序列的人源化序列和多肽，及其相關(guān)用途。在某些實(shí)施例中，本披露涉及本文中所披露的重組多肽VLR及其變體。在某些實(shí)施例中，本披露涉及治療或預(yù)防一種疾病或病癥，其包括將一個(gè)有效量的在本文中所披露的重組多肽或變體給予一名對(duì)其有需要的受試者。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及特異性結(jié)合人細(xì)胞，如漿細(xì)胞、B細(xì)胞、或T細(xì)胞的重組多肽VLR。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及將人抗體Fc序列與可變淋巴細(xì)胞受體軛合，該可變淋巴細(xì)胞受體任選地修飾為包括人源化氨基酸序列。在某些實(shí)施例中，本披露涉及從無頜類脊椎動(dòng)物的可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）嫁接氨基酸位置到包括富亮氨酸重復(fù)（LRR）序列的人類蛋白。在某些實(shí)施例中，本披露涉及創(chuàng)建與可變淋巴細(xì)胞受體序列具有相似性的蛋白展示文庫(kù)，這些可變淋巴細(xì)胞受體序列富含人類樣序列及其中兼容治療應(yīng)用用途的識(shí)別序列。在某些實(shí)施例中，將修飾的人源化序列軛合到由Fc受體識(shí)別的人抗體Fc序列和足以激活人免疫系統(tǒng)效應(yīng)子功能的補(bǔ)體上。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及分離的經(jīng)修飾的人氨基酸序列，這些人氨基酸序列特異性結(jié)合由一種工藝制得的分子，該工藝包括：提供結(jié)合一種分子的無頜類脊椎動(dòng)物的可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）的氨基酸序列；評(píng)估可變淋巴細(xì)胞受體中的哪些氨基酸空間最接近結(jié)合的分子和/或提供了離子相互作用、和/或氫鍵合和/或向提供可變淋巴細(xì)胞受體中的靶氨基酸的結(jié)合的分子提供了范德華力；提供了與可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）氨基酸序列具有大于20%、25%、或30%或更高序列一致性的已知人氨基酸序列；取代在該已知的人氨基酸序列內(nèi)可變淋巴細(xì)胞受體中的靶氨基酸和靶氨基酸周圍的足夠數(shù)量的氨基酸，來提供被構(gòu)造來特異性結(jié)合該分子的修飾的人氨基酸序列；并且從重組核酸表達(dá)修飾的人氨基酸序列。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括核酸的重組載體，這些核酸編碼由本文中所披露的工藝制備的修飾的已知的人氨基酸序列。在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括多個(gè)重組載體的表達(dá)系統(tǒng)，這些重組載體包括多個(gè)核酸，這些核酸編碼由本文中所披露的工藝制備的修飾的已知的人氨基酸序列。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及融合蛋白，這些融合蛋白包括能夠開始適應(yīng)性免疫功能的本文中披露的修飾的人氨基酸序列和人Fc序列或其片段。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括序列XLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXX（SEQ ID NO:38）的重組多肽，其中各位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)，這些野生型Slit2-D2序列選自（SEQ ID NO:16）LLSLYD、和（SEQ ID NO:17）TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，重組多肽進(jìn)一步包括人Fc序列。在某些實(shí)施例中，重組多肽具有以下序列：YLDLNNNKLQTIAKGTFGTFSPLRAIQHMWLY（SEQ ID NO:66）、YLDLNNNKLQTIAKGTFGTFSPLRAIQHMWLYQ（SEQ ID NO:67）、或YLDLNNNKLQTIAKGTFGTFSPLRAIQHMWLYG（SEQ ID NO:68）。在某些實(shí)施例中，重組多肽能夠特異性結(jié)合漿細(xì)胞而不結(jié)合B細(xì)胞。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括MM3序列SEQ ID NO:56或其變體的重組多肽。在某些實(shí)施例中，本披露涉及一種包括編碼該重組多肽的核酸的重組載體。在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括該載體的表達(dá)系統(tǒng)。

附圖簡(jiǎn)要說明

圖1說明了作為VLR人源化支架的人Slit2-D2。已經(jīng)將該Slit2的第二VLR樣RRR結(jié)構(gòu)域（Slit-D2）與其配體Robo1共結(jié)晶，該配體以抗原結(jié)合VLR的相同方式結(jié)合到凹面的β鏈。

圖2說明了VLR和Slit2-D2的比對(duì)，顯示出了大量的重疊。

圖3說明了七鰓鰻VLRB抗體和人LRR受體的三級(jí)結(jié)構(gòu)。（左）特異性針對(duì)炭疽芽孢桿菌（VLR4）和H三糖（RBC36）的七鰓鰻VLRB克隆的三級(jí)結(jié)構(gòu)。（右）人類表達(dá)許多具有類似于七鰓鰻VLRB的三級(jí)結(jié)構(gòu)的富亮氨酸的重復(fù)受體。例如，Slit-D2、CD42b、和Nogo-66受體具有與VLRB相同的月牙形狀，包括由平行β片層構(gòu)成的凹面。

圖4說明了對(duì)人免疫效應(yīng)機(jī)理的VLRB特異性的偶聯(lián)。（左）人IgG1抗體由具有三個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域（CH1-CH3）和一個(gè)可變結(jié)構(gòu)域（VH）的重鏈和具有一個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域（CL）和一個(gè)可變結(jié)構(gòu)域（VL）的輕鏈組成。該可變結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)抗原結(jié)合，同時(shí)該CH2和CH3結(jié)構(gòu)域起將這些抗原與免疫效應(yīng)子功能結(jié)合的作用，這些免疫效應(yīng)子功能包括補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒性（CDC）、抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC）、和通過巨噬細(xì)胞的抗體包被細(xì)胞的吞噬作用（Mφ）。重鏈恒定區(qū)還通過與FcRn的相互作用提高了循環(huán)中抗體半衰期，其從核內(nèi)體再循環(huán)這些抗體。（右）VLRB可變結(jié)構(gòu)域與IgG1的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域的融合將偶聯(lián)對(duì)人免疫清除機(jī)理的VLRB特異性。

圖5說明了哺乳動(dòng)物表達(dá)載體。

圖6示出了指示出人源化RB36結(jié)合至H三糖的數(shù)據(jù)。人Slit2-D2野生型（左）、七鰓鰻RBC36 VLR（中）和SLIT2-RBC36突變體（右）被表達(dá)為從HEK-293T細(xì)胞所分泌的IgG1-Fc融合蛋白，并且被用于染色被工程化以表達(dá)H三糖的CHO細(xì)胞?；疑幱爸甘疚慈旧募?xì)胞，并且線指示用融合蛋白染色。

圖7示出七鰓鰻VLRB單克隆抗體的序列（RBC36）（SEQ ID NO:73）。人Slit2-D2包含四種VLR樣LRR結(jié)構(gòu)域，并且已經(jīng)解決了Slit2（Slit-D2）的第二結(jié)構(gòu)域的晶體結(jié)構(gòu)，這允許了與七鰓鰻VLRB進(jìn)行結(jié)構(gòu)比較。已經(jīng)確定了RBC36在具有其抗原（H三糖）的復(fù)合物中的結(jié)構(gòu)。通過灰色陰影盒指示出接觸該抗原的殘基。Slit2-D2缺乏LRRCT可變插入環(huán)，該LRRCT可變插入環(huán)存在于VLRB中并且形成了部分抗原結(jié)合位點(diǎn)，但是該序列允許人們將灰色盒子中的殘基插入如SEQ ID NO:1中所提供的Slit2-D2中的位置中。

圖8示出SEQ ID NO:1（詢問序列）和Slit2-D2區(qū)段（目標(biāo)序列）、智人（SEQ ID NO:72）的比較。

圖9數(shù)據(jù)指示出VLR Mm3是具有人血漿細(xì)胞特異性的。Mm3結(jié)合至人血漿細(xì)胞，而不是包括生發(fā)中心和記憶B細(xì)胞的其他B系細(xì)胞。

圖10示出在人類骨髓中漿細(xì)胞亞群上觀察到的關(guān)于高密度面染色的數(shù)據(jù)。

圖11示出VLR抗原接觸的氨基酸殘基特征。相對(duì)于全VLR中所發(fā)現(xiàn)的全部氨基酸，接觸殘基中每種氨基酸的過高或過低的使用。

圖12說明了七鰓鰻MM3 VLR mAB的LRRVe和LRRCP結(jié)構(gòu)域（部分序列SEQ ID NO:69）、人Slit2-D2（部分序列SEQ ID NO:70）和合并序列（huMM3-1）（SEQ ID NO:71）的人源化Slit-MM3序列比對(duì)。灰色盒子突出顯示了來自七鰓鰻MM3的可變氨基酸殘基。

圖13說明了LRRCT環(huán)的比較。

發(fā)明詳述

在更詳細(xì)地描述本披露之前，應(yīng)理解的是本披露不限于所描述的具體實(shí)施例，因此這些當(dāng)然可以改變。還應(yīng)理解的是，在此使用的術(shù)語(yǔ)僅是出于描述具體實(shí)施例的目的，并不旨在是限制性的，因?yàn)楸九兜姆秶鷮H由所附權(quán)利要求書限制。

除非另外定義，在此所用的全部技術(shù)術(shù)語(yǔ)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本披露所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解的相同意義。雖然與在此所述的那些方法和材料相似或等同的任意方法和材料也可以用于實(shí)施或測(cè)試本披露中，然而現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法和材料。

在本說明書中引用的所有公開物和專利通過引用結(jié)合于此，就好像每個(gè)單獨(dú)的公開物或?qū)＠淮_切地并單獨(dú)地指示為通過引用結(jié)合，并且通過引用結(jié)合于此從而結(jié)合引用的公開物披露和描述這些方法和/或材料。任何公開物的引用內(nèi)容是針對(duì)在提交日之前的披露，并且不能理解為承認(rèn)因?yàn)橄惹芭抖九恫荒塬@得比這些公開物更早的申請(qǐng)日。此外，所提供的公開日期可能與實(shí)際的公開日期不同，實(shí)際的公開日期可能需要單獨(dú)地確認(rèn)。

如將對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚的是，在閱讀本披露時(shí)，在此描述和展示的單獨(dú)實(shí)施例的每一個(gè)具有離散的組成部分和特征，這些組成部分和特征可以在不偏離本披露的范圍或精神的情況下易于與任何其他一些實(shí)施例的特征分離或組合?？梢园凑账鶖⑹龅氖录捻樞蚧虬凑者壿嬌峡尚械娜魏纹渌樞騺磉M(jìn)行任何敘述的方法。

除非另外說明，本披露的實(shí)施例將采用免疫學(xué)、醫(yī)學(xué)、有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、藥理學(xué)、生理學(xué)等的技術(shù)，這些技術(shù)是在本領(lǐng)域的技術(shù)之內(nèi)。此類技術(shù)在文獻(xiàn)中得到充分解釋。

必須指出，如在說明書和所附權(quán)利要求書中所使用，單數(shù)形式“一個(gè)/一種（a/an）”和“該（the）”包括復(fù)數(shù)指示物，除非上下文另外清楚地規(guī)定。在本說明書和以下權(quán)利要求書中，將參考應(yīng)定義為具有下列含義的大量術(shù)語(yǔ)，除非明顯是相反的意圖。

在描述各種實(shí)施例之前，提供以下定義并且應(yīng)使用這些定義，除非另外指明。

術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)”和“多肽”是指包含經(jīng)由肽鍵連接的氨基酸的化合物并且可互換使用。在某些實(shí)施例中，該N末端可以用一個(gè)或多個(gè)乙酰基或鏈烷?；鶊F(tuán)進(jìn)行取代，并且該C末端可以是酰胺。

當(dāng)關(guān)于多肽使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“變體”和“突變體”是指在一個(gè)或多個(gè)氨基酸上彼此不同的氨基酸序列，通常為相關(guān)多肽。該變體可以具有“保守”變化，其中取代的氨基酸具有相似的結(jié)構(gòu)或化學(xué)特性。一種類型的保守氨基酸取代是指具有相似側(cè)鏈的殘基的可互換性。例如，具有脂族側(cè)鏈的一組氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、以及異亮氨酸；具有脂族-羥基側(cè)鏈的一組氨基酸是絲氨酸和蘇氨酸；具有含酰胺側(cè)鏈的一組氨基酸是天冬酰胺和谷氨酸；具有芳族側(cè)鏈的一組氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸、以及色氨酸；具有堿性側(cè)鏈的一組氨基酸是賴氨酸、精氨酸、以及組氨酸；并且具有含硫側(cè)鏈的一組氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。優(yōu)選的保守氨基酸取代組是：纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、以及天冬酰胺-谷氨酸。更為罕見的是，變體可具有“非保守”變化（例如，用色氨酸替代甘氨酸）。類似微小變異還可以包括氨基酸缺失或插入（換言之，添加）或兩者。可以使用本領(lǐng)域中熟知的計(jì)算機(jī)程序（例如，DNAStar軟件）發(fā)現(xiàn)確定哪些或多少氨基酸殘基可以被取代、插入或缺失而不消除生物活性的指導(dǎo)。可在功能測(cè)定中測(cè)試變體。優(yōu)選的變體具有小于10%、且優(yōu)選地小于5%、且仍然更優(yōu)選地小于2%的變化（取代、缺失等）。

術(shù)語(yǔ)“核酸”是指如上所述的核苷酸的聚合物或多核苷酸。該術(shù)語(yǔ)用于表示一個(gè)單個(gè)分子或多個(gè)分子的集合。核酸可以是單鏈或雙鏈的，并且可以包括編碼區(qū)和各種控制元件的區(qū)域，如以下所述。

術(shù)語(yǔ)指定的多肽“編碼核酸序列”是指包括基因的編碼區(qū)的核酸序列或換言之編碼基因產(chǎn)物的核酸序列。編碼區(qū)可以按cDNA、基因組DNA或RNA形式存在。當(dāng)以DNA形式存在時(shí)，寡核苷酸、多核苷酸或核酸可以是單鏈的（即正義鏈）或雙鏈的。如果需要允許適當(dāng)?shù)貑?dòng)原始RNA轉(zhuǎn)錄物的轉(zhuǎn)錄和/或正確的加工，則可以緊鄰基因的編碼區(qū)放置適合的控制元件，如增強(qiáng)子/啟動(dòng)子、剪接點(diǎn)、多腺苷酸化信號(hào)等?？商娲?，在本披露的表達(dá)載體中使用的編碼區(qū)可以包含內(nèi)源性增強(qiáng)子/啟動(dòng)子、剪接點(diǎn)、間插序列、多腺苷酸化信號(hào)等或內(nèi)源性和外源性的兩種控制元件的組合。

在某些實(shí)施例中，序列“一致性”是指在序列比對(duì)中比對(duì)的兩個(gè)序列之間的精確配對(duì)氨基酸的數(shù)目（表示為百分比），該數(shù)目使用一致位置的數(shù)目除以最短序列中的較大序列或排除突出端的等效位置的數(shù)目來計(jì)算，其中內(nèi)部缺口計(jì)為等效位置。例如，多肽GGGGGG和GGGGT具有五分之四或80%的序列一致性。例如，多肽GGGPPP和GGGAPPP具有七分之六或85%的序列一致性。在某些實(shí)施例中，在此表述的序列一致性的任何引用可以被替代為序列相似性?！跋嗨菩浴卑俜?jǐn)?shù)用來量化比對(duì)的兩個(gè)序列之間的相似性。該方法與測(cè)定一致性相同，不同的是，某些氨基酸不必須是一致的，以具有匹配。氨基酸可被歸為匹配物，如果它們?cè)诟鶕?jù)以下氨基酸組的具有相似特性的一個(gè)組中：芳香族-F Y W；疏水性-A V I L；帶正電荷：R K H；帶負(fù)電荷-D E；Polar-S T N Q。

如在此使用，術(shù)語(yǔ)“共軛”是指通過共價(jià)鍵兩個(gè)分子實(shí)體的接合。這些分子實(shí)體可以直接共價(jià)結(jié)合或者使用標(biāo)準(zhǔn)合成偶聯(lián)程序，通過連接基團(tuán)來結(jié)合。例如，兩個(gè)肽可以通過典型地被稱為融合蛋白或嵌合蛋白的同時(shí)多肽表達(dá)來連接在一起。可以通過摻入對(duì)應(yīng)核酸序列到該表達(dá)載體中，將一個(gè)或多個(gè)氨基酸作為連接基團(tuán)插入到多肽中。其他考慮到的連接基團(tuán)包括末端被氨基或羧酸基團(tuán)取代的聚乙二醇或烴類，以允許酰胺與具有氨基酸側(cè)鏈的蛋白偶聯(lián)，該氨基酸側(cè)鏈分別具有羧酸或氨基基團(tuán)?？商娲兀摪被汪人峄鶊F(tuán)可以被其他結(jié)合配偶體如疊氮化物和炔取代，這些結(jié)合配偶體經(jīng)歷了銅催化的三唑形成。在共軛的另一個(gè)實(shí)例中，將多肽表達(dá)為包含天然存在的或非天然存在的包含硫醇基團(tuán)的氨基酸。在與羧酸的偶聯(lián)反應(yīng)中該硫醇基團(tuán)可以取代為氨基基團(tuán)，或者當(dāng)暴露于氧化條件時(shí)兩個(gè)硫醇基團(tuán)反應(yīng)以形成二硫化物。

當(dāng)就核酸分子而言時(shí)，術(shù)語(yǔ)“重組”是指包含通過分子生物學(xué)技術(shù)而連接在一起的核酸區(qū)段的核酸分子。當(dāng)就蛋白質(zhì)或多肽而言時(shí)，術(shù)語(yǔ)“重組”是指使用重組核酸分子表達(dá)的蛋白質(zhì)分子。

術(shù)語(yǔ)“載體”或“表達(dá)載體”是指包含所希望的編碼序列和用于可操作地連接的編碼序列在具體宿主有機(jī)體或表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)所必須的適當(dāng)核酸序列的重組核酸，例如細(xì)胞的或無細(xì)胞的。在原核生物中的表達(dá)所必須的核酸序列通常包括啟動(dòng)子、操縱子（任選的）、以及核糖體結(jié)合位點(diǎn)，經(jīng)常連同其他序列。已知真核細(xì)胞利用啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和終止以及聚腺苷酸化信號(hào)。

蛋白“表達(dá)系統(tǒng)”是指體內(nèi)和體外（無細(xì)胞）系統(tǒng)。用于重組蛋白表達(dá)的系統(tǒng)典型地利用使用包含模板的DNA表達(dá)型載體的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將這些細(xì)胞在條件下進(jìn)行培養(yǎng)，這樣使得它們翻譯所希望的蛋白質(zhì)。所表達(dá)的蛋白被提取用于后續(xù)純化。使用原核和真核細(xì)胞的體內(nèi)蛋白表達(dá)系統(tǒng)是所熟知的。而且，使用變性劑和蛋白質(zhì)重折疊程序回收一些蛋白。體外（無細(xì)胞）蛋白表達(dá)系統(tǒng)典型地使用全細(xì)胞的翻譯兼容提取物或包含足以轉(zhuǎn)錄、翻譯以及任選地翻譯后修飾的組分的組合物，這些組分如：RNA聚合酶、調(diào)節(jié)蛋白因子、翻譯因子、核糖體、tRNA輔因子、氨基酸和核苷酸。在表達(dá)載體的存在下，這些提取物和組分可以合成感興趣的蛋白。無細(xì)胞系統(tǒng)典型地不包含蛋白酶，并且能夠用修飾的氨基酸標(biāo)記蛋白。一些無細(xì)胞系統(tǒng)摻入用于翻譯的編碼組分到表達(dá)載體中。參見，例如，清水（Shimizu）等人，用純化組分重構(gòu)的無細(xì)胞翻譯（Cell-free translation reconstituted with purified components），2001，自然生物技術(shù)（Nat.Biotechnol.），19,751-755和麻原&宗（Asahara&Chong），核酸研究（Nucleic Acids Research），2010,38(13):e141，通過引用將這二者以其全文結(jié)合在此。

“可選擇標(biāo)記”是引入編碼多肽的重組載體的核酸，該多肽賦予了適用于人工選擇或鑒別的性狀（報(bào)告基因），例如，β-內(nèi)酰胺酶賦予了抗生素抗性，其允許表達(dá)β-內(nèi)酰胺酶的有機(jī)體在生長(zhǎng)介質(zhì)中抗生素的存在下存活。另一個(gè)實(shí)例是胸苷激酶，其使得宿主對(duì)更昔洛韋選擇敏感。它可以是可篩選標(biāo)記，該可篩選標(biāo)記允許人們基于預(yù)期的顏色的存在或不存在，在想要和不想要細(xì)胞之間進(jìn)行區(qū)分。例如，lac-z基因產(chǎn)生β半乳糖苷酶，該β半乳糖苷酶在X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷）的存在下賦予藍(lán)色。如果重組體插入使lac-z基因失活，那么產(chǎn)生的菌落是無色的。可以存在一個(gè)或多個(gè)可選擇標(biāo)記，例如，一種能夠補(bǔ)充表達(dá)有機(jī)體不能合成的其生長(zhǎng)所需的具體化合物（營(yíng)養(yǎng)缺陷型）的酶和一種能夠?qū)⒒衔镛D(zhuǎn)化為對(duì)生長(zhǎng)有毒的另一種化合物的酶。URA3（乳清酸核苷-5’-磷酸脫羧酶）是尿嘧啶生物合成所必須的，并且可以補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)缺陷型的ura3突變體的尿嘧啶。URA3還將5-氟乳清酸轉(zhuǎn)化成有毒化合物5-氟尿嘧啶。另外考慮到的可選擇標(biāo)記包括賦予抗細(xì)菌抗性或者表達(dá)熒光蛋白的任何基因。實(shí)例包括但不限于以下基因：amp^r、cam^r、tet^r、殺稻瘟菌素^r、neo^r、hyg^r、abx^r、霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶II型基因（nptII）、p-葡萄糖醛酸酶（gus）、綠色熒光蛋白（gfp）、egfp、yfp、mCherry、p-半乳糖苷酶（lacZ）、lacZa、lacZAM15、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶（cat）、堿性磷酸酶（phoA）、細(xì)菌熒光素酶（luxAB）、雙丙氨磷抗性基因（bar）、磷酸甘露糖異構(gòu)酶（pmi）、木糖異構(gòu)酶（xylA）、阿拉伯糖醇脫氫酶（atlD）、UDP-葡萄糖:半乳糖-1-磷酸尿苷酰轉(zhuǎn)移酶I（galT）、鄰氨基苯甲酸合酶的反饋不敏感的α亞基（OASA1D）、2-脫氧葡萄糖（2-DOGR）、芐腺嘌呤-N-3-葡糖苷酸、大腸桿菌蘇氨酸脫氨酶、谷氨酸1-半醛氨基轉(zhuǎn)移酶（GSA-AT）、D-氨基酸氧化酶（DAAO）、耐鹽基因（rstB）、鐵氧還蛋白樣蛋白（pflp）、海藻糖-6-P合成酶基因（AtTPS1）、賴氨酸消旋酶（lyr）、二氫二皮考啉酸合酶（dapA）、色氨酸合酶β1（AtTSB1）、脫鹵素酶（dhlA）、甘露糖-6-磷酸還原酶基因（M6PR）、潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPT）、和D-絲氨酸解氨酶（dsdA）。

“標(biāo)記”是指直接或間接與另一種分子（如抗體或蛋白）共軛的可檢測(cè)的化合物或組合物，以有助于該分子的檢測(cè)。標(biāo)記的具體的、非限制性實(shí)例包括熒光標(biāo)簽、酶鍵、和放射性同位素。在一個(gè)實(shí)施例中，“標(biāo)記受體”是指受體中摻入異源多肽。標(biāo)記包括放射性標(biāo)記的氨基酸的摻入或生物素基部分共價(jià)附著于多肽，該多肽可以通過有標(biāo)記的親和素進(jìn)行檢測(cè)（例如，包含熒光標(biāo)記或酶活性的鏈霉抗生物素蛋白，其可以通過光學(xué)法或比色法進(jìn)行檢測(cè)）。標(biāo)記多肽和糖蛋白的各種方法在本領(lǐng)域中是已知的，并且可以使用。多肽的標(biāo)記的實(shí)例包括但不限于以下各項(xiàng)：放射性同位素或放射性核甘酸（如³⁵S或¹³¹I）、熒光標(biāo)記（如異硫氰酸熒光素（FITC）、羅丹明、鑭系磷光體）、酶促標(biāo)記（如辣根過氧化物酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、堿性磷酸酶）、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物素基基團(tuán)、由次級(jí)報(bào)道分子識(shí)別的預(yù)定多肽表位（如亮氨酸拉鏈對(duì)序列、第二抗體的結(jié)合位點(diǎn)、金屬結(jié)合結(jié)構(gòu)域、表位標(biāo)簽）、或磁性試劑，如釓螯合物。在一些實(shí)施例中，通過各種長(zhǎng)度的間隔臂附接標(biāo)記，來減少潛在的空間位阻。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括本文中所披露的序列或其變體或融合體的重組多肽，其中該氨基酸序列的氨基末端或碳末端任選地附接到異源氨基酸序列、標(biāo)記或報(bào)告分子上。在某些實(shí)施例中，本披露涉及一種包括編碼本文中披露的多肽或其嵌合蛋白的核酸的重組載體。

在某些實(shí)施例中，該重組載體任選地包括哺乳動(dòng)物、人、昆蟲、病毒、細(xì)菌、細(xì)菌質(zhì)粒、酵母有關(guān)的復(fù)制原點(diǎn)或基因，如基因或反轉(zhuǎn)錄病毒基因或慢病毒LTR、TAR、RRE、PE、SLIP、CRS和INS核苷酸區(qū)段或基因。

在某些實(shí)施例中，該重組載體任選地包括基因載體元素（核酸）如選擇標(biāo)記區(qū)域、lac操縱子、CMV啟動(dòng)子、雜合雞B-肌動(dòng)蛋白/CMV增強(qiáng)子（CAG）操縱子、tac操縱子、T7RNA聚合酶操縱子、SP6RNA聚合酶操縱子、SV40操縱子、內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)（IRES）序列、順式作用土撥鼠后調(diào)節(jié)元件（WPRE）、支架附著區(qū)（SAR）、反向末端重復(fù)（ITR）、FLAG標(biāo)簽編碼區(qū)、c-myc標(biāo)簽編碼區(qū)、金屬親和標(biāo)簽編碼區(qū)、鏈親和素結(jié)合肽標(biāo)簽編碼區(qū)、聚組氨酸標(biāo)簽編碼區(qū)、HA標(biāo)簽編碼區(qū)、MBP標(biāo)簽編碼區(qū)、GST標(biāo)簽編碼區(qū)、聚腺苷酸化編碼區(qū)、SV40多腺苷酸化信號(hào)、SV40復(fù)制起點(diǎn)、Col E1復(fù)制起點(diǎn)、f1起點(diǎn)、pBR322起點(diǎn)、或pUC起點(diǎn)、TEV蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)、loxP位點(diǎn)、Cre重組酶編碼區(qū)、或多克隆位點(diǎn)，如在小于50或60個(gè)核苷酸的連續(xù)區(qū)段內(nèi)具有5、6、或7或更多個(gè)酶切位點(diǎn)或在小于20或30個(gè)核苷酸的連續(xù)區(qū)段內(nèi)具有3或4或更多個(gè)酶切位點(diǎn)。

可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）

在某些實(shí)施例中，本披露涉及生產(chǎn)分子的特異性結(jié)合試劑的方法，該方法包括：在條件下向無頜類脊椎動(dòng)物給予分子，這樣使得包含可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）的細(xì)胞結(jié)合該分子并且無頜類脊椎動(dòng)物的漿細(xì)胞產(chǎn)生結(jié)合該分子的可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）。提供結(jié)合靶分子的可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）的氨基酸序列可以通過各種方法來完成。于（Yu）等人報(bào)道了來自用人T細(xì)胞免疫的七鰓鰻幼體的單克隆VLR抗體的圖的產(chǎn)生，和重組單克隆VLR抗體用于抗原純化和質(zhì)譜法鑒別的用途。參見免疫學(xué)方法雜志（J Immunol Methods），2012,386(1-2):43-9，“使用七鰓鰻單克隆抗體純化和鑒定細(xì)胞表面抗原（Purification and identification of cell surface antigens using lamprey monoclonal antibodies）”。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括VLR的重組多肽，該VLR具有本文中披露的氨基酸序列、序列或其變體。在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括VLR序列及其他多肽序列（如熒光蛋白、標(biāo)簽、或標(biāo)記）的重組多肽，這樣使得該重組肽不是天然存在的。在某些實(shí)施例中，本披露涉及通過在條件下將無頜類脊椎動(dòng)物暴露于抗原的工藝制得的重組蛋白，這樣使得形成抗體，其中該抗原是這樣，使得無頜類脊椎動(dòng)物不會(huì)自然經(jīng)歷暴露于這種抗原。

在某些實(shí)施例中，變體包括1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸取代或者具有大于50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、或99%的其一致性或相似性。在某些實(shí)施例中，這些變體提供了非天然存在的序列。在某些實(shí)施例中，氨基酸取代是保守的氨基酸取代。在某些實(shí)施例中，這些氨基酸取代不是在VLR內(nèi)的XXLXLXX內(nèi)，該VLR，例如MM3，其中X是任何氨基酸并且L可以是亮氨酸或異亮氨酸。在某些實(shí)施例中，該重組核酸編碼VLR Mm3或其變體。在某些實(shí)施例中，重組載體包括編碼在此披露的VLR或其變體的核酸。在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括本文中披露的重組載體的表達(dá)系統(tǒng)。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及通過在表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)編碼蛋白的核酸或其變體的工藝制得的本文中披露的重組VLR或其變體。

通過嫁接靶序列修飾的來自VLR的人序列

在某些實(shí)施例中，本披露涉及分離的經(jīng)修飾的人氨基酸序列，這些人氨基酸序列特異性結(jié)合由一種工藝制得的分子，該工藝包括：提供結(jié)合一種分子的無頜類脊椎動(dòng)物的可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）的氨基酸序列；評(píng)估可變淋巴細(xì)胞受體中的哪些氨基酸空間最接近結(jié)合的分子和/或提供了離子相互作用、和/或氫鍵合和/或向提供可變淋巴細(xì)胞受體中的靶氨基酸的結(jié)合的分子提供了范德華力；提供了與可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）氨基酸序列具有大于20%、25%、或30%或更高序列一致性的已知人氨基酸序列；取代在該已知的人氨基酸序列內(nèi)可變淋巴細(xì)胞受體中的靶氨基酸和靶氨基酸周圍的足夠數(shù)量的氨基酸，來提供被構(gòu)造來特異性結(jié)合該分子的修飾的人氨基酸序列；并且從重組核酸表達(dá)修飾的人氨基酸序列。

該無頜類脊椎動(dòng)物（七鰓鰻和盲鰻）具有適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，該適應(yīng)性免疫系統(tǒng)由表達(dá)可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）的克隆多樣性淋巴細(xì)胞組成。該種系VLRB基因是不完全的，由被非編碼插入序列分開的不變的5’和3’恒定區(qū)組成。該5’恒定區(qū)編碼信號(hào)肽和部分N末端LRR（LRR-NT）。該3’恒定區(qū)編碼LRR-CT的一部分和不變的莖區(qū)。該不完全的種系基因兩側(cè)是數(shù)以百計(jì)的部分LRR基因區(qū)段。在發(fā)育的淋巴細(xì)胞中，該側(cè)翼LRR基因區(qū)段是隨機(jī)并順序地復(fù)制到不完全的VLRB基因中。因?yàn)槊總€(gè)LRR基因區(qū)段被復(fù)制到基因座中，它代替插入序列的一部分。該組裝機(jī)理一直繼續(xù)直到所有的插入序列被LRR模塊替代，并且表達(dá)功能性VLRB。VLRB基因組裝發(fā)生在唯一的一個(gè)等位基因上，這樣使得每個(gè)淋巴細(xì)胞表達(dá)一個(gè)VLRB基因。該VLRB基因組裝機(jī)理可以產(chǎn)生超過10¹⁴個(gè)獨(dú)特的抗原受體，這比得上人抗體譜的理論多樣性。

該成熟VLRB基因編碼新月形蛋白，其中氨基酸序列多樣性集中在凹面上。該凹面由平行的β鏈和C末端可變環(huán)組成。每個(gè)LRR亞基促進(jìn)形成一個(gè)β鏈，并且每個(gè)β鏈具有五個(gè)可變氨基酸位置。VLRB抗體還具有可變數(shù)量的LRR亞基。最小VLRB抗體具有4個(gè)LRR亞基并且最大的具有11個(gè)LRR亞基。每個(gè)LRR亞基以約10°增加凹面的曲率，并且以約增加凹面面積。C末端LRR，LRR-CT，編碼可變長(zhǎng)度的環(huán)和投影在凹面上方的序列構(gòu)成。具有顆?？乖ㄈ缣烤覘U菌孢子外壁或人血紅細(xì)胞（RBC））的免疫作用誘導(dǎo)抗原結(jié)合的VLRB+細(xì)胞增殖和分化成漿細(xì)胞。這些漿細(xì)胞分泌在血液中循環(huán)的多價(jià)VLRB抗體。每個(gè)分泌的VLRB抗體是由安置到二聚體的五聚體或四聚體中的相同VLRB多肽鏈組成，這些二聚體通過在可彎曲的、不變的莖區(qū)的C末端處的二硫鍵連在一起。由于這種多價(jià)，VLRB抗體以高親和力結(jié)合至其抗原。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞系（HEK-293T和CHO細(xì)胞）中所表達(dá)的VLRB cDNA作為二硫鍵連接的多價(jià)抗體被分泌到組織培養(yǎng)上清液中，像體內(nèi)VLRB。重組VLRB抗體是非常穩(wěn)定的。在暴露于極端pH（<1.5和>12）和溫度（在55℃下36小時(shí)）后，它們?nèi)员Ａ袅似淇乖Y(jié)合能力。為了分離抗原特異性VLRB克隆，從免疫的七鰓鰻的淋巴細(xì)胞制備VLRB cDNA文庫(kù)。將這些VLRB cDNA轉(zhuǎn)染到HEK-293T中，并且針對(duì)抗原結(jié)合篩選包含VLRB的組織培養(yǎng)上清液。這些單克隆VLRB抗體高度特異性針對(duì)免疫抗原。盡管具有90%的氨基酸序列一致性，特異性針對(duì)炭疽桿菌的BclA孢子包被蛋白的VLRB抗體忠實(shí)地（7分之7）區(qū)分了炭疽桿菌和蠟樣芽孢桿菌的BclA。

與人紅細(xì)胞H三糖抗原復(fù)合的VLRB抗體（RBC-36）的X線衍射晶體分析法確認(rèn)，該凹面是抗原結(jié)合位點(diǎn)。通過氫鍵穩(wěn)定了該H三糖相互作用，并且范德華力與凹VLRB面上的七個(gè)β鏈的六個(gè)中的氨基酸接觸。該RBC-36的LRR-CT形成了一個(gè)擴(kuò)展環(huán)，該擴(kuò)展環(huán)經(jīng)由在該環(huán)尖端附近的色氨酸（TRP204）殘基有助于與H三糖的半乳糖環(huán)的關(guān)鍵相互作用。

在實(shí)驗(yàn)中，在重復(fù)免疫后的小鼠中VLRB蛋白是免疫原性的。VLRB抗體的免疫原性限制了其在人類中作為治療試劑的潛能。結(jié)構(gòu)上類似于VLRB的富亮氨酸重復(fù)受體發(fā)現(xiàn)于脊椎動(dòng)物、無脊椎動(dòng)物、植物、和原核生物中。若干人富亮氨酸重復(fù)受體，如Slit家族蛋白（Slit 1、2、和3）、CD42b、和Nogo-66，具有與VLRB的結(jié)構(gòu)重疊。負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的VLRB抗體（RBC36）的序列可以嫁接到結(jié)構(gòu)相似的人LRR受體（Slit2-D2）上，來“人源化”該VLRB。在實(shí)踐中，不是凹面的β片層上的所有的氨基酸將必須取代，因?yàn)檫x擇的氨基酸可能參與抗原結(jié)合。此外，主要以體內(nèi)抗原結(jié)合狀態(tài)存在的高親和性VLRB將主要使完全人源化的凸面暴露于體液免疫系統(tǒng)。Slit2-D2和CD42b二者都是人類中的分泌性蛋白，并且分別結(jié)合至凹面上的其天然配體，Robo1和血管性血友病因子（vWF）。VLRB序列嫁接到這些人類LRR受體上將添加VLRB抗體的抗原結(jié)合表位，同時(shí)廢除結(jié)合至其天然配體。

具體參考韓（Han）等人，科學(xué)（Science），2008，321:1834-183，其報(bào)道了用于評(píng)估VLR內(nèi)的哪些氨基酸與結(jié)合的分子相互作用的詳細(xì)方法。評(píng)估可變淋巴細(xì)胞受體中的2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)氨基酸，該可變淋巴細(xì)胞受體空間最接近結(jié)合的分子和/或提供了離子相互作用、和/或氫鍵合和/或提供與可變淋巴細(xì)胞受體中的提供靶氨基酸的感性趣分子一起的范德華力可以通過各種方法來完成。范德華力是指分子之間的吸引力或排斥力，而不是由于共價(jià)鍵、氫鍵、或離子彼此之間或離子與中性分子或帶電分子的靜電作用產(chǎn)生的那些。該術(shù)語(yǔ)包括兩個(gè)永久偶極之間的力（科梭姆力）、永久偶極和對(duì)應(yīng)誘導(dǎo)偶極之間的力（德拜力）、兩個(gè)瞬時(shí)誘導(dǎo)偶極之間的力（倫敦色散力）。這些力典型地通過計(jì)算機(jī)模擬來評(píng)估。參見歐惠（Ohue）等人，MEGADOCK：使用三級(jí)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)的多對(duì)多蛋白質(zhì)相互作用預(yù)測(cè)系統(tǒng)，（An All-to-all Protein-protein Interaction Prediction System Using Tertiary Structure Data），蛋白質(zhì)和肽快報(bào)（Protein Pept Lett），2013；松崎（Matsuzaki）等人，MEGADOCK 3.0：使用針對(duì)千萬億次級(jí)超級(jí)計(jì)算環(huán)境的雜合并行計(jì)算的高性能蛋白質(zhì)相互作用預(yù)測(cè)軟件（a high-performance protein-protein interaction prediction software using hybrid parallel computing for petascale supercomputing environments），生物學(xué)和醫(yī)學(xué)源代碼（Source Code Biol Med），2013,8(1):18；圖恩拜戈（Tuncbag）等人，通過在界面處使用PRISM匹配進(jìn)化和結(jié)構(gòu)相似性預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)組規(guī)模上的蛋白質(zhì)相互作用（Predicting protein-protein interactions on a proteome scale by matching evolutionary and structural similarities at interfaces using PRISM）。自然協(xié)議（Nat Protoc），2011,6(9):1341-54。王（Wang）等人，通過構(gòu)象和相互誘導(dǎo)擬合的蛋白質(zhì)識(shí)別和選擇（Protein recognition and selection through conformational and mutually induced fit），美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc Natl Acad Sci U S A），2013,110(51):20545-50；佐勒諾和費(fèi)爾南德斯-雷西奧（Solernou&Fernandez-Recio），pyDockCG：用于蛋白蛋白對(duì)接的新粗?；瘽撃埽╪ew coarse-grained potential for protein-protein docking），物理化學(xué)期刊B（J Phys Chem B），2011,115(19):6032-9；安特斯（Antes），DynaDock：針對(duì)包括受體的靈活性的蛋白-肽對(duì)接的新基于分子動(dòng)力學(xué)的算法（A new molecular dynamics-based algorithm for protein-peptide docking including receptor flexibility），蛋白質(zhì)（Proteins），2010,78(5):1084-104；塞爾凱拉（Cerqueira）等人，MADAMM：多級(jí)對(duì)接與自動(dòng)化制作分子模型方案（a multistaged docking with an automated molecular modeling protocol），蛋白質(zhì)（Proteins），2009,74(1):192-206；克勞森（Claussen）等人，F(xiàn)lexE：考慮到蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化的有效分子對(duì)接（efficient molecular docking considering protein structure variations）。分子生物學(xué)雜志（J Mol Biol），2001,308(2):377-95。

在其他實(shí)施例中，人們利用計(jì)算機(jī)模擬和X線衍射晶體分析法、NMR光譜術(shù)或冷凍電子顯微術(shù)實(shí)驗(yàn)的組合。典型地，可變淋巴細(xì)胞受體和感興趣的結(jié)合分子的結(jié)構(gòu)形成了結(jié)晶復(fù)合物。即使該復(fù)合物未能結(jié)晶，人們可以嘗試其他方法。在一些情況下，二維核磁共振技術(shù)，任選地與計(jì)算方法相結(jié)合，可以用來評(píng)估分子間相互作用和空間關(guān)系。參見西田和島田（Nishida&Shimada），一種研究蛋白質(zhì)相互作用的NMR方法（An NMR method to study protein-protein interactions），分子生物學(xué)方法（Methods Mol Biol），2012,757:129-37和奧康奈爾（O’Connell）等人，通過NMR光譜術(shù)的蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)構(gòu)分析（The structural analysis of protein-protein interactions by NMR spectroscopy），蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics），2009,9(23):5224-32。

提供與可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）氨基酸序列具有大于20%、25%、30%、35%、或40%或更高序列一致性的已知人氨基酸序列可以使用公開獲得的數(shù)據(jù)庫(kù)如BLAST來完成。在某些實(shí)施例中，跨100個(gè)、150個(gè)、200個(gè)、或250個(gè)氨基酸制成序列一致性或相似性的比較窗口。

取代在位置相關(guān)的已知人氨基酸序列內(nèi)可變淋巴細(xì)胞受體中，如有不同，在已知人氨基酸序列中的靶氨基酸，典型地通過進(jìn)行序列比對(duì)隨后進(jìn)行取代來完成。除靶氨基酸之外，還可以取代靶氨基酸的N-或C-側(cè)上的一個(gè)、兩個(gè)、或更多個(gè)氨基酸（如有不同）。在一些實(shí)施例中，人們?nèi)〈勺兞馨图?xì)胞受體中鄰近每個(gè)靶氨基酸的至少一個(gè)氨基酸，該可變淋巴細(xì)胞受體在位置與人氨基酸序列相關(guān)的已知的人氨基酸序列內(nèi)。在某些實(shí)施例中，取代在各靶氨基酸的N側(cè)上的兩個(gè)和C側(cè)上的一個(gè)，C側(cè)上的兩個(gè)和N側(cè)上的一個(gè)，或N側(cè)上的兩個(gè)和C側(cè)上的兩個(gè)。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及分離的經(jīng)修飾的人氨基酸序列，這些人氨基酸序列特異性結(jié)合一種分子，包括：提供結(jié)合一種分子的無頜類脊椎動(dòng)物的可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）的氨基酸序列；確定、選擇或評(píng)估在可變淋巴細(xì)胞受體中的2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)氨基酸，氫鍵合該分子和/或具有與結(jié)合的分子的離子相互作用和/或與在可變淋巴細(xì)胞受體中提供靶氨基酸的結(jié)合的分子空間最接近；提供了與可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）氨基酸序列具有大于20%、25%、30%、或40%或更高序列一致性的已知人氨基酸序列；取代在位置相關(guān)的已知人氨基酸序列內(nèi)可變淋巴細(xì)胞受體中，如有不同，在已知人氨基酸序列中的靶氨基酸；當(dāng)產(chǎn)生提供特異性結(jié)合該分子的多肽時(shí)，在條件下用位置相關(guān)的已知人氨基酸序列取代可變淋巴細(xì)胞受體中鄰近每個(gè)靶氨基酸的至少一個(gè)氨基酸，來提供修飾的人氨基酸序列和修飾的人氨基酸序列；并且通過從重組核酸表達(dá)修飾的人氨基酸序列，生產(chǎn)特異性結(jié)合結(jié)合該分子的多肽。

在某些實(shí)施例中，該分子包括多肽序列或多糖。

在某些實(shí)施例中，該無頜類脊椎動(dòng)物是七鰓鰻或盲鰻。在某些實(shí)施例中，該可變淋巴細(xì)胞受體是七鰓鰻可變淋巴細(xì)胞受體B（VLRB）。

在某些實(shí)施例中，氫鍵合該分子和/或與該分子空間最接近的可變淋巴細(xì)胞受體中的2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多氨基酸選自β鏈的可變氨基酸位置和新月形VLR的凹面的C末端可變環(huán)內(nèi)。

在某些實(shí)施例中，該分子是病毒的或微生物的相關(guān)分子。

在某些實(shí)施例中，該病毒的或微生物的相關(guān)分子是炭疽桿菌、流感、或HIV-1抗原。

在某些實(shí)施例中，該分子是與具體正常或惡性人細(xì)胞有關(guān)的分子。在某些實(shí)施例中，該正?；驉盒匀思?xì)胞是一種O型血紅細(xì)胞、B細(xì)胞白血病細(xì)胞、B淋巴瘤細(xì)胞系。在某些實(shí)施例中，該已知的人氨基酸序列是人富亮氨酸重復(fù)受體。在某些實(shí)施例中，該已知的人氨基酸序列是Slit家族蛋白（Slit1、2、和3）、CD42b、或Nogo-66。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括核酸的重組載體，這些核酸編碼由本文中所披露的工藝制備的分離的經(jīng)修飾的人氨基酸序列。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括多個(gè)重組載體的表達(dá)系統(tǒng)，這些重組載體包括多個(gè)核酸，這些核酸編碼由本文中所披露的工藝制備的分離的經(jīng)修飾的人氨基酸序列。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及生產(chǎn)分子的特異性結(jié)合試劑的方法，該方法包括：在條件下向無頜類脊椎動(dòng)物給予分子，這樣使得包含可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）的細(xì)胞結(jié)合該分子并且無頜類脊椎動(dòng)物的漿細(xì)胞產(chǎn)生結(jié)合該分子的可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）；提供結(jié)合該分子的可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）的氨基酸序列；評(píng)估可變淋巴細(xì)胞受體中的2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)氨基酸，該可變淋巴細(xì)胞受體空間最接近該分子和/或氫鍵合可變淋巴細(xì)胞受體中提供靶氨基酸的分子；提供了與可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）氨基酸序列具有大于20%、25%、30%、35%、或40%或更高序列一致性的已知人氨基酸序列；將VLR序列和該已知人氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)；取代在位置相關(guān)的已知人氨基酸序列內(nèi)可變淋巴細(xì)胞受體中，如有不同，在已知人氨基酸序列中的靶氨基酸；在條件下用位置相關(guān)的已知人氨基酸序列中的氨基酸取代可變淋巴細(xì)胞受體中鄰近每個(gè)靶氨基酸的至少一個(gè)氨基酸，這樣使得修飾的人氨基酸序列被構(gòu)造來特異性結(jié)合該分子；并且從重組核酸通過表達(dá)修飾的人氨基酸序列生產(chǎn)特異性結(jié)合試劑。

可變淋巴細(xì)胞受體典型地包含N末端LRR序列、C末端LRR序列、和約12-25個(gè)氨基酸的多個(gè)內(nèi)部LRR模塊。該C末端LRR序列典型地包含可變環(huán)（高度可變插入片段）。在內(nèi)部LRR模塊內(nèi)，七個(gè)氨基酸典型地包含一個(gè)或兩個(gè)亮氨酸或異亮氨酸，如果兩個(gè)，由單個(gè)氨基酸分開，例如，（SEQ ID NO:21）XXLXLXX，其通常位于凹面上，其中X可以是任何氨基酸并且L可以是亮氨酸或異亮氨酸。在一些情況下，一個(gè)L（亮氨酸或異亮氨酸）可以被任何氨基酸取代。在某些實(shí)施例中，用于嫁接到人序列中的靶氨基酸是在針對(duì)至少1、2、3、或所有LRR模塊中相關(guān)的7個(gè)殘基內(nèi)的2、3、4、5、6、或7個(gè)氨基酸并且任選地是C末端高度可變插入片段中所有的或一部分的氨基酸。在某些實(shí)施例中，該可變淋巴細(xì)胞受體具有序列VXCXXXXLXSVPAXIPTTTXXLXXXXNXITKXXPGVFDXLXXLXXXXLXXNXLXXXPXGXFD（SEQ ID NO:25），其中X可以是任何氨基酸。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括多肽的組合物，該多肽包括SEQ ID NO:1或10或其具有大于83%、85%、90%、95%、97%、98%、或99%序列一致性或大于85％、90％、95％、97％、98％、或99％序列相似性的變體。在某些實(shí)施例中，該變體包括一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)、或十個(gè)個(gè)氨基酸取代。在某些實(shí)施例中，這些氨基酸取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，該變體包括氨基酸取代，這些氨基酸取代不在以下各項(xiàng)之內(nèi)：SEQ ID NO：3(IIYLHD)、SEQ ID NO：4(EIYLGS)、SEQ ID NO：5(VLDLGT)、SEQ ID NO：6(ELFLCC)、SEQ ID NO：7(HLALDQ)、SEQ ID NO：8(HMYLFG)、SEQ ID NO：9(IAMRWDGKAVNDPDS)。

在某些實(shí)施例中，該變體包括以下序列中的兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、或六個(gè)：SEQ ID NO：3(IIYLHD)、SEQ ID NO：4(EIYLGS)、SEQ ID NO：5(VLDLGT)、SEQ ID NO：6(ELFLCC)、SEQ ID NO：7(HLALDQ)、SEQ ID NO：8(HMYLFG)、SEQ ID NO：9(IAMRWDGKAVNDPDS)。

在某些實(shí)施例中，該變體任選地包括在以下序列中每一個(gè)內(nèi)的一個(gè)保守氨基酸取代：SEQ ID NO：3(IIYLHD)、SEQ ID NO：4(EIYLGS)、SEQ ID NO：5(VLDLGT)、SEQ ID NO：6(ELFLCC)、SEQ ID NO：7(HLALDQ)、SEQ ID NO：8(HMYLFG)、SEQ ID NO：9(IAMRWDGKAVNDPDS)。

在某些實(shí)施例中，該多肽包括SEQ ID NO：9(IAMRWDGKAVNDPDS)或具有一、二、或三個(gè)氨基酸取代的變體。

人源化Slit2-VLR

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：10)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNXXXCXXKGLTEIPTNLPETITXIXXXXNTIKVIPPGAFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYLH[X]nARCTSPRRLANKRIGQIKSKKFRC

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：11)IVDCRG、(SEQ ID NO：12)EIRLEQ、(SEQ ID NO：13)RIDLSN、(SEQ ID NO：14)SLVLYG、(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代，條件是這些氨基酸取代不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：26)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNXXXCXXKGLTEIPTNLPETITXIXXXXNTIKVIPPGAFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLANKRIGQIKSKKFRC

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：11)IVDCRG、(SEQ ID NO：12)EIRLEQ、(SEQ ID NO：13)RIDLSN、(SEQ ID NO：14)SLVLYG、(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。

在某些實(shí)施例中，針對(duì)本文中所披露的任何序列，[X]n是[X]_m-[VLR或MM3的環(huán)序列]或[X]_m-[VLR或MM3的環(huán)序列]A，其中[X]_m任選地是X¹、X¹X²、X¹X²X³、X¹X²X³X⁴，其中X¹是H，X²是T，X³是N，并且X⁴是P。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：27)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITXIXXXXNTIKVIPPGAFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：12)EIRLEQ、(SEQ ID NO：13)RIDLSN、(SEQ ID NO：14)SLVLYG、(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：28)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：13)RIDLSN、(SEQ ID NO：14)SLVLYG、(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：29)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：14)SLVLYG、(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：30)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLXLXGNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：14)SLVLYG、(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：31)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLVLYGNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：32)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLVLYGNKITELPKSLFEGLFSLQLLLLNANKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXIXXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：33)或其變體的分離重組多肽，

GLTEIPTNLPETITXIXXXXNTIKVIPPGAFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYL[X]nARCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：12)EIRLEQ、(SEQ ID NO：13)RIDLSN、(SEQ ID NO：14)SLVLYG、(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：34)或其變體的分離重組多肽，

AFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：13)RIDLSN、(SEQ ID NO：14)SLVLYG、(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：35)或其變體的分離重組多肽，

AFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：14)SLVLYG、(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：36)或其變體的分離重組多肽，

XLXGNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXX

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：14)SLVLYG、(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：37)或其變體的分離重組多肽，

XLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXX

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)、或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：38)或其變體的分離重組多肽，

XLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXX

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n是在5和20之間或n是在10和18之間，或者n是14、15、或16，任選地其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)或所有，這些序列選自以下各項(xiàng)：(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：23)或其變體的分離重組多肽，

XLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYLH

其中各位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)，這些野生型Slit2-D2序列選自(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代，條件是這些氨基酸取代不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：65)或其變體的分離重組多肽，

XLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNXLXLXXNKLQTIAKGTFSPLRAIQXMXLXXNPFICDCHLKWLADYLH

其中各位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，其條件是該多肽不包含以下野生型Slit2-D2序列中的至少一個(gè)、兩個(gè)或所有，這些野生型Slit2-D2序列選自(SEQ ID NO：15)LLLLNA、(SEQ ID NO：16)LLSLYD、和(SEQ ID NO：17)TMHLAQ。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代，條件是這些氨基酸取代不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

人源化的Slit2-MM3序列

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：39)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNXXXCXXKGLTEIPTNLPETITXIXXXXNTIKVIPPGAFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLANKRIGQIKSKKFRC

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n在5和20之間，或者n在10和18之間，或者n是14、15、或16。在某些實(shí)施例中，針對(duì)本文中所披露的任何序列，[X]n是[X]m-[VLR或MM3的環(huán)序列]或[X]_m-[VLR或MM3的環(huán)序列]A，其中[X]_m任選地是X¹、X¹X²、X¹X²X³、X¹X²X³X⁴，其中X¹是H，X²是T，X³是N，并且X⁴是P。

在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：40)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITXIXXXXNTIKVIPPGAFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n在5和20之間，或者n在10和18之間，或者n是14、15、或16。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：41)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLN YLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n在5和20之間，或者n在10和18之間，或者n是14、15、或16。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：42)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLN YLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n在5和20之間，或者n在10和18之間，或者n是14、15、或16。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：43)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLXLXGNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLN YLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n在5和20之間，或者n在10和18之間，或者n是14、15、或16。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：44)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLVLYGNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n在5和20之間，或者n在10和18之間，或者n是14、15、或16。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：45)或其變體的分離重組多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLVLYGNKITELPKSLFEGLFSLQLLLLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n在5和20之間，或者n在10和18之間，或者n是14、15、或16。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：46)或其變體的分離重組多肽，

GLTEIPTNLPETITXIXXXXNTIKVIPPGAFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n在5和20之間，或者n在10和18之間，或者n是14、15、或16。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：47)或其變體的分離重組多肽，

AFSPYKKLRXIXXXXNQISELAPDAFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n在5和20之間，或者n在10和18之間，或者n是14、15、或16。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：48)或其變體的分離重組多肽，

AFQGLRSLNXLXLXXNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL[X]nRCTSPRRLAN

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地且獨(dú)立地是任何氨基酸，并且n在5和20之間，或者n在10和18之間，或者n是14、15、或16。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：49)或其變體的分離重組多肽，

LXLXGNKITELPKSLFEGLFSLQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地或獨(dú)立地是任何氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：50)或其變體的分離重組多肽，

LQXLXLXXNKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKIQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地或獨(dú)立地是任何氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：51)或其變體的分離重組多肽，

AFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMWLYXNPFICDCHLKWLADYL

其中每個(gè)位置處的X單獨(dú)地或獨(dú)立地是任何氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入，條件是這些氨基酸取代、缺失或插入不是X氨基酸。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括(SEQ ID NO：58-63)或其變體的融合體或Slit2-MM3多肽，

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLVLYGNKITELPKSLFEGLFSLQLLYLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHIWLYQNPFICDCHLKWLADYLHASIVNPHPYGGVDNARCTSPRRLAN(SEQ ID NO：58)

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLVLYGNKITELPKSLFEGLFSLQLLYLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHIWLYQNPFICDCHLKWLADYLSIVNPHPYGGVDARCTSPRRLAN(SEQ ID NO：59)

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLVLYGNKITELPKSLFEGLFSLQLLYLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHIWLYQNPFICDCHLKWLADYLIVQHASIVNPHPYGGVDARCTSPRRLAN(SEQ ID NO：60)

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLVLYGNKITELPKSLFEGLFSLQLLLLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHIWLYQNPFICDCHLKWLADYLHASIVNPHPYGGVDNARCTSPRRLAN(SEQ ID NO：61)

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLVLYGNKITELPKSLFEGLFSLQLLLLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHIWLYQNPFICDCHLKWLADYLSIVNPHPYGGVDARCTSPRRLAN(SEQ ID NO：62)

CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETTTEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLRRIDLSNNQISELAPDAFQGLRSLNSLVLYGNKITELPKSLFEGLFSLQLLLLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQHIWLYQNPFICDCHLKWLADYLIVQHASIVNPHPVGGVDARCTSPRRLAN(SEQ ID NO：63)

通過從蛋白質(zhì)展示文庫(kù)的選擇，來自VLR的修飾的人序列

使用蛋白質(zhì)展示技術(shù)，例如，噬菌體展示、酵母表面展示、細(xì)菌展示、或無細(xì)胞系統(tǒng)，可以將人源化特異性結(jié)合試劑從變體蛋白的組合文庫(kù)中分離出來。參見芬利(Finlay)等人，分子生物學(xué)方法(Methods Mol.Biol.)，2011，681：87-101；多爾蒂(Daugherty)，現(xiàn)代結(jié)構(gòu)生物學(xué)評(píng)論(Curr.Opin.Struct.Biol.)，2007，17：474-480；蓋和維特羅浦(Gai&Wittrup)，現(xiàn)代結(jié)構(gòu)生物學(xué)評(píng)論(Curr.Opin.Struct.Biol.)，2007，17：467-473；周(Zhou)等人，MAbs.，2010，2：508-518；沈(Shen)等人，美國(guó)科學(xué)院院刊(Proc.Nat.Acad.Sci.USA)，2005，102：5969-5974。典型地，獨(dú)特的變體蛋白的集合是經(jīng)展示平臺(tái)通過從對(duì)應(yīng)的突變核酸表達(dá)進(jìn)行連接的。在將展示平臺(tái)上所表達(dá)的變體蛋白與該靶分子暴露/混合后，將分子結(jié)合的變體進(jìn)行鑒定和/或分離用于分析。典型地，通過將展示平臺(tái)中有關(guān)的核酸測(cè)序來確定該蛋白質(zhì)序列。例如，在酵母表面展示中，重組酵母細(xì)胞表達(dá)變體蛋白，其中該酵母細(xì)胞表達(dá)與細(xì)胞壁蛋白共軛的變體蛋白。該酵母細(xì)胞可以包含編碼變體蛋白的質(zhì)粒DNA，該變體蛋白在酵母細(xì)胞的表面上進(jìn)行表達(dá)，并且將該質(zhì)粒DNA測(cè)序提供變體蛋白的蛋白質(zhì)序列。參見格拉（Gera）等人，使用酵母表面展示的蛋白質(zhì)選擇（Protein selection using yeast surface display），方法（Methods），2013,60(1):15-26。在噬菌體展示中，變體蛋白質(zhì)典型地共軛到噬菌體外殼蛋白?；诩?xì)胞的系統(tǒng)也典型地依賴于與細(xì)胞表面蛋白共軛的變體蛋白的表達(dá)，例如，在細(xì)菌、酵母、和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，并且該宿主細(xì)胞攜帶編碼這些變體蛋白的質(zhì)粒載體。還已經(jīng)研發(fā)出了無細(xì)胞系統(tǒng)，其中該變體蛋白直接共軛到其編碼mRNA上，稱為核糖體展示或mRNA展示。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了生產(chǎn)人源化特異性結(jié)合試劑的方法，該方法包括以下步驟中的一個(gè)或多個(gè)，

a)提供特異性結(jié)合靶分子的七鰓鰻抗體序列，

b)鑒別富亮氨酸重復(fù)序列的文庫(kù)，其由包括以下步驟的工藝進(jìn)行：

1)將七鰓鰻抗體序列與人富亮氨酸重復(fù)序列進(jìn)行比較，并且在比較窗口內(nèi)鑒別重疊的氨基酸位置、包含保守性取代的非重疊的氨基酸位置、和包含非保守性取代的非重疊的氨基酸位置；

2)指定重疊的氨基酸位置為那些各自位置的氨基酸；

3)向包含那些各自位置的保守取代的非重疊的氨基酸位置，指定人富含重復(fù)序列的氨基酸；

4)指定在人富亮氨酸重復(fù)序列或七鰓鰻的氨基酸序列的氨基酸之間隨機(jī)選擇，以提供那些各自位置的變體富亮氨酸重復(fù)序列的文庫(kù)；

b)制備包含各自位置的指定氨基酸的變體富亮氨酸重復(fù)序列的展示文庫(kù)，并且與該靶分子混合來結(jié)合；

c)鑒別結(jié)合靶分子的變體富亮氨酸重復(fù)序列中的一個(gè)或多個(gè)，該靶分子提供人源化特異性結(jié)合試劑；并且

d)表達(dá)包括重組載體的表達(dá)系統(tǒng)中人源化的特異性結(jié)合試劑，該重組載體編碼該人源化特異性結(jié)合試劑。

在某些實(shí)施例中，該比較窗口長(zhǎng)度是或是至少或大于50、100、250、500、或1000個(gè)氨基酸。在某些實(shí)施例中，該比較窗口是跨一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、或更多/所有以下結(jié)構(gòu)域：LRRNT、LRR1、LRRV1、LRRV2、LRRV3、(LRRVX)_n、LRRVe、LRRCP、和LRRCT，其中X和n是指整數(shù)，例如，0、1、2、3、4、5、或6。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了識(shí)別多種人源化特異性結(jié)合試劑，并且人們通過平衡多個(gè)因素，例如將結(jié)合親和力最大化和將重疊人氨基酸位置的數(shù)目最大化，來選擇所希望的候選物。

在某些實(shí)施例中，如果氨基酸在具有根據(jù)以下氨基酸基團(tuán)的類似特性的基團(tuán)中，則這些氨基酸是保守取代：芳香族的-F Y W；疏水的-A V I L；帶正電的-R K H；帶負(fù)電的-D E；極性的-S T N Q。

在某些實(shí)施例中，如果在人富亮氨酸序列中存在一個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失，那么人們指定那些各自位置的七鰓鰻的氨基酸。

在某些實(shí)施例中，該人富亮氨酸重復(fù)序列是Slit-D2。例如，多肽文庫(kù)可以在各自位置處指定氨基酸用于鑒定人源化結(jié)合劑，其中該文庫(kù)表達(dá)包括以下序列的LRRNT結(jié)構(gòu)域：CPX¹X²CTCSX³NX⁴VDCRGKX⁵X⁶（SEQ ID NO:22），其中X¹至X⁶是任何氨基酸。在某些實(shí)施例中，X¹是A或S，X²是A或Q，X³是N或G，X⁴是I或T，X⁵是G或R，X⁶是L或H。

在某些實(shí)施例中，該人富亮氨酸重復(fù)序列包括以下結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、或更多個(gè)：LRRNT、LRR1、LRRV1、LRRV2、LRRV3、LRRV4、LRRV5、LRRV6、LRRV7、LRRV8、LRRV9、LRRVe、LRRCP、和LRRCT。

在某些實(shí)施例中，該人富亮氨酸重復(fù)序列包括以下結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、或所有：LRRNT、LRR1、LRRV1、LRRV2、LRRV3、LRRVe、LRRCP、和LRRCT。

在某些實(shí)施例中，該人富亮氨酸重復(fù)序列包括以下結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、或所有：LRRV1、LRRV2、LRRV3、LRRVe、LRRCP、和LRRCT。

在某些實(shí)施例中，該人富亮氨酸重復(fù)序列包括以下結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、或所有：LRRV2、LRRV3、LRRVe、LRRCP、和LRRCT。

在某些實(shí)施例中，該人富亮氨酸重復(fù)序列包括以下結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、或所有：LRRV3、LRRVe、LRRCP、和LRRCT。

在某些實(shí)施例中，該人富亮氨酸重復(fù)序列包括以下結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)、兩個(gè)、或所有：LRRVe、LRRCP、和LRRCT。

在某些實(shí)施例中，該人富亮氨酸重復(fù)序列包括以下結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)或兩個(gè)：LRRCP和LRRCT。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了人富亮氨酸重復(fù)序列的文庫(kù)可以包含結(jié)構(gòu)域（如LRRNT、LRR1、LRRV1、LRRV2、LRRV3、LRRVe、LRRCP、和LRRCT）的組合，這些結(jié)構(gòu)域被所希望的序列取代以允許在肽文庫(kù)表達(dá)系統(tǒng)中的高水平的表達(dá)。例如，李（Lee）等人，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc NatlAcad Sci U S A），2009,106(31):12891-6，報(bào)道了內(nèi)化蛋白B的LRRNT、LRR1、和LRRV1的取代允許在細(xì)菌中高水平表達(dá)。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了文庫(kù)，這些文庫(kù)包含與如本文中所產(chǎn)生的人富亮氨酸重復(fù)文庫(kù)的結(jié)構(gòu)域(LRRVX)_n、LRRVe、LRRCP、和LRRCT共軛的內(nèi)化蛋白B的LRRNT、LRR1、和LRRV1，其中X和n是指整數(shù)，例如，其中X和n是指整數(shù)，例如，3、4、5、6、7、或8。

融合蛋白

在某些實(shí)施例中，本披露涉及可變淋巴細(xì)胞受體，該可變淋巴細(xì)胞受體任選地被修飾為包括如本文中所披露的人源化氨基酸序列（其與由Fc受體所識(shí)別的人抗體恒定區(qū)共軛）和足以用于人免疫系統(tǒng)的效應(yīng)子功能的補(bǔ)體。在某些實(shí)施例中，本披露涉及融合蛋白，該融合蛋白包括本文中所披露的修飾人氨基酸序列和能夠提供效應(yīng)子功能，例如，引發(fā)體內(nèi)或體外抗體依賴性細(xì)胞毒性，以及任選地與野生型人抗體可比較的半衰期的Fc序列或其片段。治療抗體典型地采用完整的IgG分子。IgG1Fc可以與激發(fā)效應(yīng)子功能的Fcγ受體相互作用。Fc包含補(bǔ)體活化劑C1q的結(jié)合位點(diǎn)。新生兒Fc受體（FcRn）的結(jié)合位點(diǎn)影響半衰期。

天然產(chǎn)生的抗體包含附接到Fc區(qū)域上的Fab抗原結(jié)合位點(diǎn)臂。該IgG Fc區(qū)域是包含CH3結(jié)構(gòu)域和CH2結(jié)構(gòu)域的同源二聚體。這些CH2結(jié)構(gòu)域典型地被糖基化直至在Asn297。IgG Fc Ch2結(jié)構(gòu)域包含F(xiàn)cgammaRI、FcgammaRII、FcgammaRIII和C1q效應(yīng)子配體的相互作用位點(diǎn)，這些相互作用位點(diǎn)負(fù)責(zé)效應(yīng)機(jī)理如抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC）。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋Fc融合蛋白，其中該Fc序列能夠引發(fā)抗體依賴性細(xì)胞毒性并且包含F(xiàn)cgammaRI、FcgammaRII、FcgammaRIII、補(bǔ)體活化劑C1q、新生兒Fc受體（FcRn）、及其組合的結(jié)合位點(diǎn)。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了該融合蛋白是修飾的人序列和Fc序列的單鏈融合體。鮑爾斯（Powers）等人報(bào)道了單鏈Fv-Fc融合體，這些單鏈Fv-Fc融合體能夠使用人外周血單核細(xì)胞作為效應(yīng)子介導(dǎo)對(duì)腫瘤靶細(xì)胞的抗體依賴性細(xì)胞毒性。免疫法雜志（J Immunol Methods），2001,251(1-2):123-35。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了Fc序列可以包含某些缺失和突變，例如，CH3結(jié)構(gòu)域。沃茲尼亞克-諾普（Wozniak-Knopp）等人報(bào)道了制備人IgG1Fc區(qū)域，其中將CH3結(jié)構(gòu)域的C末端處的環(huán)序列進(jìn)行隨機(jī)化。這些蛋白能夠提供類似于野生型抗體的抗原結(jié)合、效應(yīng)子功能和體內(nèi)半衰期。蛋白質(zhì)工程（Protein Engineering），設(shè)計(jì)和選擇（Design and Selection），2010,23(4):289-297。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋包括本文中所披露的融合蛋白的重組載體和包括這些載體的表達(dá)系統(tǒng)。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括多肽的組合物，該多肽包括SEQ ID NO:19、20、24或其具有大于83%、85%、90%、95%、97%、98%、或99%序列一致性或大于85%、90%、95%、97%、98%、或99%序列相似性的變體。在某些實(shí)施例中，該變體包括一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)、或十個(gè)個(gè)氨基酸取代。在某些實(shí)施例中，這些氨基酸取代是保守取代。

在某些實(shí)施例中，VLR或修飾的VLR或片段可以與T細(xì)胞抗原受體（如CD3-ζ）的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分融合。在某些實(shí)施例中，該T細(xì)胞抗原受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分是具有免疫受體酪氨酸基活化基序的肽，該基序具有共有序列YXXLXXXXXXXXYXXL（SEQ ID NO:52），其中X是任何氨基酸，L是亮氨酸或異亮氨酸，其中SEQ ID NO:15任選地在中間區(qū)段XXXXXXXX（SEQ ID NO:53）內(nèi)具有一個(gè)或兩個(gè)X氨基酸缺失。該免疫受體酪氨酸基活化基序（已加下劃線的）是在部分CD3-ζ序列DPKLCYLLDGILFIYGVILTALFLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ（SEQ ID NO:54）或片段或變體中，例如，這些變體具有1個(gè)、2個(gè)、或3個(gè)氨基酸缺失、添加，或取代變體，或與其具有大于50%、60%、70%、80%、90%、95%或更大一致性的序列。

在某些實(shí)施例中，該T細(xì)胞抗原受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分是具有免疫受體酪氨酸基活化基序（已加下劃線的）的肽，該肽具有免疫球蛋白ε受體亞基γ前體EPQLCYILDAILFLYGIVLTLLYCRLKIQVRKAAITSYEKSDGVYTGLSTRNQETYETLKHE（SEQ ID NO:55）片段或其變體的序列或具有與其大于50%、60%、70%、80%、90%、95%或更大一致性的序列。

使用方法

B細(xì)胞呈遞抗原給T細(xì)胞，典型刺激B細(xì)胞分化成更特化的細(xì)胞，如未成熟和成熟的漿細(xì)胞。漿細(xì)胞生產(chǎn)大量的抗體。多發(fā)性骨髓瘤是在漿細(xì)胞中形成的癌癥。B細(xì)胞癌變通過特異性針對(duì)CD20表面抗原的治療性抗體來有效治療，其導(dǎo)致正常和惡性B細(xì)胞的耗盡。盡管在治療B細(xì)胞淋巴瘤和白血病中成功，但是抗CD20抗體在治療多發(fā)性骨髓瘤中不是有效的，因?yàn)楫?dāng)成熟B細(xì)胞分化成漿細(xì)胞時(shí)失去了CD20表面表達(dá)。還通過許多其他細(xì)胞類型和組織表達(dá)在當(dāng)前研究下用于靶向多發(fā)性骨髓瘤漿細(xì)胞的其他漿細(xì)胞表面抗原，因?yàn)椴豢山邮艿母弊饔玫目赡苄裕@使得漿細(xì)胞尋靶復(fù)雜化。目前，還沒有單克隆抗體基治療可用于患有多發(fā)性骨髓瘤的患者。用化療藥物和自身造血干細(xì)胞移植的治療延長(zhǎng)了總體存活期，但是有時(shí)并不能治愈受試者。因此，需要鑒定改進(jìn)的治療方法。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了通過向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呓o予一個(gè)有效量的本文中所披露的融合蛋白或多肽或其片段，治療漿細(xì)胞惡性腫瘤，如多發(fā)性骨髓瘤。在某些實(shí)施例中，該融合蛋白包括MM3序列或人源化MM3序列和T細(xì)胞抗原受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分，如人類Fc序列。在某些實(shí)施例中，將該融合蛋白與來那度胺和地塞米松、硼替佐米、或其組合結(jié)合給予。在某些實(shí)施例中，將該治療與自體或異體干細(xì)胞移植結(jié)合。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋治療或預(yù)防癌癥，包括向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呋谟行Я康腣LR基融合蛋白，該融合蛋白包括結(jié)合至腫瘤相關(guān)抗原的本文中所披露的修飾的人序列。該融合蛋白可以包括VLR或修飾的VLR序列或人源化VLR序列、Slit2-VLR序列，該融合蛋白使用本文中報(bào)道的方法產(chǎn)生。

在某些實(shí)施例中，該VLR基融合蛋白結(jié)合選自以下的與腫瘤相關(guān)抗原：CD20、CD20、CD30、CD33、CD52、EpCAM、上皮細(xì)胞粘附分子、gpA33、糖蛋白A33、黏蛋白、TAG-72、腫瘤相關(guān)糖蛋白72、葉酸結(jié)合蛋白、VEGF、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、整合素αVβ3、整合素α5β1、FAP、成纖維細(xì)胞活化蛋白、CEA、癌胚抗原、腱生蛋白、Le^y、Lewis Y抗原、CAIX、碳酸酐酶IX、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR；又稱為ERBB1）、ERBB2（又稱為HER2）、ERBB3、MET（又稱為HGFR）、胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體（IGF1R）、肝配蛋白受體A3（EPHA3）、腫瘤壞死因子（TNF）-相關(guān)的誘導(dǎo)凋亡的配體受體1（TRAILR1；又稱為TNFRSF10A）、TRAILR2（又稱為TNFRSF10B）和核因子κB配體的受體活化因子（RANKL；又稱為TNFSF11）及其片段。

在某些實(shí)施例中，受試者是處于以下各項(xiàng)的風(fēng)險(xiǎn)，表現(xiàn)出以下各項(xiàng)癥狀，或診斷患有以下各項(xiàng)：淋巴瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、乳癌、前列腺癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌、肺癌、皮膚癌、膀胱癌、腦癌、腎癌、子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌、和甲狀腺癌。

在某些實(shí)施例中，考慮到的方法包括進(jìn)一步給予第二抗癌劑如貝伐單抗、如吉非替尼、厄洛替尼、替莫唑胺、多西他賽、順鉑、5-氟尿嘧啶、吉西他濱、替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、羥基脲、阿霉素、博萊霉素、多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、伊達(dá)比星、絲裂霉素C、放線菌素D、光輝霉素、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春瑞濱紫杉醇、泰索帝、依托泊苷、替尼泊苷、安吖啶、拓?fù)涮婵?、喜樹堿、硼替佐米、阿那格雷、他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、吲哚昔芬（iodoxyfene）、氟維司群、比卡魯胺、氟他胺、尼魯米特、環(huán)丙孕酮、戈舍瑞林、亮丙瑞林、布舍瑞林、甲地孕酮、阿那曲唑、來曲唑、伏氯唑（vorazole）、依西美坦、非那雄胺、馬立馬司他、曲妥珠單抗、西妥昔單抗、達(dá)沙替尼、伊馬替尼、考布他汀、沙利度胺和/或來那度胺（enalidomide）或其組合。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和一種或多種其他抗癌劑來治療或預(yù)防乳癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和曲妥珠單抗和/或拉帕替尼來治療或預(yù)防乳癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和多西他賽和環(huán)磷酰胺來治療或預(yù)防乳癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和多西他賽、卡鉑、和曲妥珠單抗來治療或預(yù)防乳癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和環(huán)磷酰胺、多柔比星、和5-氟尿嘧啶（5-FU）來治療或預(yù)防乳癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和多西他賽、多柔比星、和環(huán)磷酰胺來治療或預(yù)防乳癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和多柔比星和環(huán)磷酰胺，隨后紫杉醇或多西他賽，來治療或預(yù)防乳癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和5-FU、表柔比星、和環(huán)磷酰胺，隨后多西他賽或紫杉醇，來治療或預(yù)防乳癌。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和一種或多種其他抗癌劑來治療或預(yù)防前列腺癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和亮丙瑞林、戈舍瑞林、或布舍瑞林來治療或預(yù)防前列腺癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和氟他胺、比卡魯胺、恩雜魯胺、或尼魯米特來治療或預(yù)防前列腺癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和酮康唑或氨魯米特來治療或預(yù)防前列腺癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和、比卡魯胺、卡巴他塞、比卡魯胺、地加瑞克、地舒單抗、多西他賽、恩雜魯胺、卡巴他塞、亮丙瑞林、強(qiáng)的松、地舒單抗、西普魯塞T、或二氯鐳223及其組合來治療或預(yù)防前列腺癌。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和一種或多種其他抗癌劑來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和5-FU、亞葉酸、或卡培他濱或其組合來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和卡培他濱和奧沙利鉑來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和5-FU、亞葉酸、和奧沙利鉑來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和亞葉酸、5-FU、和伊立替康來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和亞葉酸、5-FU、奧沙利鉑、和伊立替康來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和貝伐單抗或西妥昔單抗來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和5-FU和亞葉酸任選地用貝伐單抗來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和卡培他濱任選地用貝伐單抗來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和伊立替康任選地用西妥昔單抗來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和西妥昔單抗來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和帕木單抗來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和瑞格菲尼來治療或預(yù)防結(jié)腸癌。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和選自以下各項(xiàng)的化學(xué)治療劑來治療或預(yù)防肺癌：長(zhǎng)春瑞濱、依托泊苷、絲裂霉素C、吉西他濱、伊立替康、培美曲塞、吉非替尼、埃羅替尼、拉帕替尼、克唑替尼、和長(zhǎng)春花生物堿或其組合。在某些實(shí)施例中，該長(zhǎng)春花生物堿是長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛、或長(zhǎng)春瑞濱。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和化學(xué)治療劑來治療或預(yù)防肺癌，該化學(xué)治療劑是貝伐單抗、帕木單抗、扎蘆木單抗、尼妥珠單抗、馬妥珠單抗、或西妥昔單抗。在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了使用本文中所披露的融合蛋白和鉑基試劑和/或紫杉烷（例如，紫杉醇和多西他賽或其組合）來治療或預(yù)防肺癌。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了治療或預(yù)防腦癌、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、原始神經(jīng)外胚葉瘤、室管膜瘤、或神經(jīng)膠質(zhì)瘤。在某些實(shí)施例中，任選地將該融合蛋白與替莫唑胺、甲基芐肼、卡莫司?。˙CNU）、洛莫司?。–CNU）、長(zhǎng)春新堿、及其組合結(jié)合給予。在某些實(shí)施例中，結(jié)合甲基芐肼、洛莫司汀（CCNU）和長(zhǎng)春新堿。在某些實(shí)施例中，任選地將融合蛋白與伊立替康、順鉑、卡鉑、甲氨蝶呤、依托泊苷、博來霉素、長(zhǎng)春堿、放線菌素（放線菌素D）、環(huán)磷酰胺、或異環(huán)磷酰胺結(jié)合給予。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了給予本文中披露的融合蛋白與替莫唑胺的組合。成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的治療包括在放射治療期間和之后進(jìn)行化療。平均來說，外科手術(shù)和放射治療后化療可以最初減小腫瘤尺寸。在放射治療期間和放射治療后六個(gè)月使用替莫唑胺導(dǎo)致中位存活期的顯著增加，伴隨最小的額外毒性。目前這種治療方案針對(duì)成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的大部分案例是標(biāo)準(zhǔn)的，其中該患者沒有在臨床試驗(yàn)中登記。替莫唑胺似乎是通過使腫瘤細(xì)胞對(duì)輻射過敏來工作的。美國(guó)食品藥物管理局批準(zhǔn)阿瓦斯?。ㄘ惙慰梗﹣碇委熢跇?biāo)準(zhǔn)治療后處于進(jìn)展中的患有成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的患者。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及通過增強(qiáng)對(duì)流遞送（CED）給予本文中所披露的組合物用于管理腦中的癌癥或腫瘤。CED是在導(dǎo)管放置后利用流體壓力梯度通過直接輸注到腦胞間隙中來給予組合物的方法。

除治療癌癥和漿細(xì)胞惡性腫瘤之外，分泌抗體的漿細(xì)胞的耗盡還可以用來治療抗體介導(dǎo)的自體免疫（例如，紅斑狼瘡）和過敏性疾病，如通過B細(xì)胞耗盡用抗CD20單克隆抗體未能緩解的那些，因?yàn)橥ㄟ^缺乏CD20抗原的長(zhǎng)壽命漿細(xì)胞產(chǎn)生有害的自身抗體和過敏原反應(yīng)性的抗體。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及治療自身免疫性疾病，包括向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呓o予一個(gè)有效量的MM3融合體或人源化Slit2-MM3融合體。在某些實(shí)施例中，該自身免疫性疾病是紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、肌萎縮性側(cè)索硬化、自身免疫性肝炎、自身免疫性胰腺炎、貝切特氏病、乳糜瀉、1型糖尿病、格林-巴利綜合征、銀屑病關(guān)節(jié)炎、和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。

實(shí)驗(yàn)

具有獨(dú)特的結(jié)合特異性的單克隆VLR抗體

結(jié)合大進(jìn)化距離的從根本上不同的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)表明VLR抗體可以檢測(cè)因結(jié)構(gòu)或耐受性的原因不能通過常規(guī)抗體來檢測(cè)的抗原(即，宿主防止產(chǎn)生識(shí)別“自身”并且由此導(dǎo)致自身免疫性并發(fā)癥的抗體的需要)。七鰓鰻的進(jìn)化距離和VLR抗體的完全不同的蛋白結(jié)構(gòu)使其成為用于發(fā)現(xiàn)生物標(biāo)記的理想試劑，該生物標(biāo)記因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)和耐受性的原因不能使用常規(guī)抗體進(jìn)行檢測(cè)。VLR抗體MM3的結(jié)合特征不對(duì)應(yīng)于任何已知的細(xì)胞表面抗原，從而支持VLR抗體的獨(dú)特的抗原識(shí)特性。已經(jīng)鑒定為了結(jié)合具體的人造血細(xì)胞群的單克隆七鰓鰻VLR抗體。若干這些VLR抗體的結(jié)合特異性的分析指示出它們識(shí)別抗原結(jié)構(gòu)，針對(duì)這些抗原結(jié)構(gòu)未產(chǎn)生常規(guī)哺乳動(dòng)物單克隆抗體。

通過將編碼抗體的cDNA轉(zhuǎn)染到人類HEK293細(xì)胞中，來產(chǎn)生重組VLR抗體。這些重組VLR抗體被分泌到細(xì)胞上清液中，并且隨后用于確定細(xì)胞特異性。這些VLR序列的重組版本包括摻入的具有編碼組氨酸殘基的6個(gè)密碼子的片段，用于有效純化單克隆VLR抗體連同用于流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)合的VLR抗體。

使用人類Slit2-D2作為支架的人源化VLRB克隆RBC36

韓(Han)等人報(bào)道了，2008，科學(xué)(Science)321：1834-183，通過使用我們七鰓鰻VLR2913晶體結(jié)構(gòu)的分子置換，在分辨率下，在具有源自人類O型紅細(xì)胞的H抗原的H三糖的復(fù)合物中VLR RBC36胞外結(jié)構(gòu)域(ECD)的晶體結(jié)構(gòu)。II型H抗原三糖是α-l-Fucp-(1→2)-β-d-Galp-(1→4)-β-d-GlcNacp-OH。

為了使用Slit2-D2支架產(chǎn)生人源化VLRB抗體，將來自RBC36的可變氨基酸位置嫁接到Slit-D2(參見圖7)上的對(duì)應(yīng)位置上，產(chǎn)生以下序列(SEQ ID NO：1)，

CPAACTCSNNTVDCRSKGLTEIPTNLPETITIIYLHDNTIKVIPPGAFSPYKKLREIYIGSNQISELAPDAFQGLRSLNVLDLGTNKITELPKSLFEGLFSLQELFLCCNKINCLRVDAFQDLHNLNHLALDQNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMYLFGNPFICDCHLKWLADYLHIAMRWDGKAVNDPDSARCTSPRRLANKRIGQIKSKKFRC.

野生型Slit-D2（參見圖7，上，SEQ ID NO:2）由206個(gè)已加下劃線的氨基酸組成，一些氨基酸從LRRCT區(qū)域中去除。GSLHCPAACTCSNNIVDCRG KGLTEIPTNL PETITEIRLE QNTIKVIPPG AFSPYKKLRRIDLSNNQISE LAPDAFQGLR SLNSLVLYGN KITELPKSLF EGLFSLQLLLLNANKINXLR VDAFQDLHNL NLLSLYDNKL QTIAKGTFSP LRAIQTMHLAQNPFICDCHL KWLADYLHTN PIETSGARCT SPRRLANKRI GQIKSKKFRCSAAAHHHHHH。

將來自VLRB克隆RBC36的41個(gè)氨基酸嫁接到Slit-D2支架的剩余196個(gè)氨基酸上，這196個(gè)氨基酸包括在LRRNT、LRR1、LRRV（紅色與灰色背景）中的26個(gè)氨基酸的取代、和15個(gè)氨基酸到編碼可變插入環(huán)的LRRCT區(qū)域的插入（紅色與灰色背景并且已加下劃線）。在最終的213個(gè)氨基酸人源化序列中，41個(gè)源自七鰓鰻VLR，并且172個(gè)源自人Slit2-D2。（人類的%=172/213=80.8%；七鰓鰻VLR%=41/213=19.2%）?？勺兾恢弥械囊恍┎慌cRBC36-H三糖晶體結(jié)構(gòu)中的抗原接觸。例如，LRRNT中沒有氨基酸并且LRR1中只有一個(gè)殘基與H三糖接觸。因此，它可能只對(duì)取代接觸殘基以及可能一些鄰近殘基的抗原是必要的。然而，當(dāng)VLR抗原晶體結(jié)構(gòu)或突變結(jié)合位點(diǎn)數(shù)據(jù)不可得時(shí)，所有可變氨基酸位置的取代可以用作將VLRB單克隆抗體人源化的一般方法。例如，SEQ ID NO:24包含RBC38的環(huán)和嫁接到Slit2-D2中的三個(gè)氨基酸，命名“Slit-M4”。Slit-M4結(jié)合至II型H抗原三糖，該II型H抗原三糖是α-l-Fucp-(1→2)-β-d-Galp-(1→4)-β-d-GlcNacp-OH，

CPAACT CSNNIVDCRG KGLTEIPTNL PETITEIRLE QNTIKVIPPGAFSPYKKLRR IDLSNNQISE LAPDAFQGLR SLNSLDLGGN KITELPKSLFEGLFSLQLLL LNANKINXLR VDAFQDLHNL NLLSLDDNKL QTIAKGTFSPLRAIQTMHLA QNPFICDCHL KWLADYLSIAMRWDGKAVNDPDSARCTSPRRLANKRI GQIKSKKFRC（SEQ ID NO:24）。在Slit-M4中，214個(gè)氨基酸位置中的195個(gè)是人類的（91%）。

VLR凹面上的每個(gè)β鏈（通過LRRNT、LRR1、LRRV、LRRVe和LRRCP所編碼的）具有4個(gè)可變位置，其由xLxLxx基序所定義的，其中x是任何氨基酸（注意此基序中的亮氨酸殘基偶爾被其他疏水性氨基酸替換，這些疏水性氨基酸包括異亮氨酸、纈氨酸和甲硫氨酸）?；蛑械牧涟彼岵皇箍乖佑|，而是面對(duì)蛋白內(nèi)部，通過對(duì)位于凸面上的保守苯丙氨酸殘基包裝，以形成LRR螺線管的疏水核，該凸面還面對(duì)該內(nèi)部。在凹面上，該可變氨基酸位置朝外，并且連同LRRCT中的可變插入環(huán)一起，共同形成抗原結(jié)合表面。由于可變氨基酸位于形成剛性二級(jí)結(jié)構(gòu)的β鏈上，并且它們一直位于xLxLxx基序中的四個(gè)位置之一，因此來自VLR至Slit2-D2支架的殘基的對(duì)應(yīng)位置可以從初級(jí)氨基酸序列，甚至沒有結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)的情況下確定。

使用RBC36作為實(shí)例，Asp153位于LRRVe LRR基序（HLALDQ）的第三個(gè)可變位置中。該Slit2-D2的LRRVe中的LRR基序序列是LLSLYD，這樣使得將Asp153從RBC36嫁接到Slit2-D2支架上，它僅需要交換LRRVexLxLXx基序的第三位置處的對(duì)應(yīng)氨基酸。在這種情況下，取代將是RBC36的天冬氨酸對(duì)Slit2-D2的酪氨酸（例如，來自Slit2-D2的LRRVe，從LLSLYD變?yōu)長(zhǎng)LSLDD）。盡管原則上，任何氨基酸可以用于可變位置上，但是氨基酸使用偏向氨基酸子集。酪氨酸（Tyr）是最常用的氨基酸，接著是其他芳香族氨基酸（苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）和組氨酸（His））、天冬酰胺（Asn）和天冬胺酸（Asp）。此外，在四個(gè)可用VLR：抗原晶體結(jié)構(gòu)中，大部分抗原接觸是通過此氨基酸子集形成的（圖11）。在具有接觸H三糖的12個(gè)氨基酸的RBC36中，存在2個(gè)Tyr、2個(gè)Phe、1個(gè)Trp、2個(gè)Asp、和1個(gè)His，這樣使得12個(gè)抗原結(jié)合氨基酸中的9個(gè)來自此殘基子集。在其他三個(gè)VLR結(jié)構(gòu)中觀察到了類似模式。同時(shí)，在所有四個(gè)VLR：抗原晶體結(jié)構(gòu)中，更多個(gè)C末端LRR模塊（LRRVe、LRRCP和LRRCT，圖7）使得大部分抗原接觸，并且LRRNT只使得與結(jié)構(gòu)之一（VLR4-BclA）中的抗原接觸，并且即使如此，這只是一個(gè)單一的氨基酸。因此，即使在沒有VLR抗原晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)的情況下，這些觀察可以用于指導(dǎo)選擇殘基嫁接到Slit2-D2支架上。

在SLIT2支架上的VLRB LRRCT環(huán)的融合可以適于變體。VLR和SLIT結(jié)構(gòu)二者中LRRCT環(huán)在α螺旋之前（圖13中所示）。具體考慮的變體可以添加或缺失1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、或4個(gè)氨基酸，其中SLIT2序列端和VLR環(huán)序列在α螺旋后開始。VLR的LRRCT環(huán)長(zhǎng)度和序列組成可以變化，因此人們可以添加氨基酸和實(shí)驗(yàn)確定的最佳序列-在α螺旋：環(huán)接合點(diǎn)處的另外的殘基，來得到了在用于結(jié)合的正確方向的環(huán)。在該環(huán)的另一側(cè)，其中它融合回SLIT2支架，在定義LRRCT環(huán)末端的VLR和SLIT2二者中，在R或K殘基前存在保守的半胱氨酸（圖13）。在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括在LRRCT環(huán)末端處添加或缺失1、2、3、或4個(gè)氨基酸的變體。

因此，在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了本文中Slit2-D2序列的變體，其中該人源化Slit2VLR序列或人源化Slit2-MM3序列包括片段（SEQ ID NO:78）CDCH-[X]_m-[VLR或MM3的環(huán)序列]-X⁵C或CDCH-[X]_m-[VLR或MM3的環(huán)序列]-AX⁵C，其中粗體的是α螺旋，[X]_m任選地是X¹、X¹X²、X¹X²X³、X¹X²X³X⁴，其中X¹是H，X²是T，X³是N，X⁴是P，并且X⁵是R或K。

VLR的人源化將不限于Slit家族蛋白。存在許多具有與七鰓鰻VLR的結(jié)構(gòu)相似性（例如，大于30%-40%序列一致性）的其他人LRR基受體，該七鰓鰻VLR也可以用作支架。此實(shí)例僅用來說明一般人源化概念。除可變氨基酸位置的取代以外，對(duì)遠(yuǎn)離抗原結(jié)合位點(diǎn)的氨基酸做小改變也可以是必須的，以便優(yōu)化人源化VLR的構(gòu)象和表面互補(bǔ)性。

人源化VLRB融合體

通過許多治療用抗體的體內(nèi)腫瘤細(xì)胞清除是由抗體的恒定區(qū)(Fc)介導(dǎo)的。人IgG1的恒定區(qū)經(jīng)由CH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合至補(bǔ)體和Fcγ受體(FcγR)，這有利于經(jīng)由補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒性(CDC)、抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)、和通過FcγR承載巨噬細(xì)胞的抗體調(diào)理的細(xì)胞的吞噬細(xì)胞吞噬殺死靶細(xì)胞。由VLR的抗原結(jié)合域和人抗體的恒定區(qū)(如IgG1)組成的融合蛋白將使VLR抗體的獨(dú)特的抗原檢測(cè)與免疫清除的人類機(jī)制偶聯(lián)。人IgG抗體的恒定區(qū)還增加了人血漿中抗體的半衰期。FcRn結(jié)合至IgG恒定區(qū)的CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，并且有利于抗體從胞吞區(qū)室中再循環(huán)，這延長(zhǎng)其在循環(huán)中存在并且增加其作為治療的功效。

制備載體用于表達(dá)與以下各項(xiàng)的Fc區(qū)融合的VLR：(1)獼猴IgG1、(2)人IgG1和(3)小鼠IgG2a(圖5)。在延長(zhǎng)因子1α(EF1α)啟動(dòng)子的控制下，表達(dá)構(gòu)建體在慢病毒基載體中，該啟動(dòng)子允許通過在包裝細(xì)胞系中的構(gòu)建體的轉(zhuǎn)染后的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)來表達(dá)。在HEK-293和CHO細(xì)胞中，兩種方法都用于表達(dá)VLR。該表達(dá)載體還包含用于分選具有高度表達(dá)的細(xì)胞的IRES-GFP序列。使用靜置培養(yǎng)CELLine生物反應(yīng)器燒瓶(INTEGRA生物科學(xué)公司)獲得MM3 VLR-IgG1-Fc蛋白。

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋將修飾的人氨基酸序列、人源化VLRB序列，與人類Fc序列，典型地共有序列共軛，以在大腸桿菌中作為與人IgG1Fc的融合體表達(dá)它們。某些具體化的Fc融合蛋白的人IgG1 Fc序列部分的氨基酸序列如下：

DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：18)

人源化VLRB序列-Fc序列融合蛋白的某些實(shí)施例的完整氨基酸序列如下M-Fc序列-人源化VLRB序列MDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKCPAACTCSNNTVDCRSKGLTEIPTNLPETITIIYLHDNTIKVIPPGAFSPYKKLREIYLGSNQISELAPDAFQGLRSLNVLDLGTNKITELPKSLFEGLFSLQELFLCCNKINCLRVDAFQDLHNLNHLALDQNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMYLFGNPFICDCHLKWLADYLHIAMRWDGKAVNDPDSARCTSPRRLANKRIGQIKSKKFRC(SEQ ID NO：19)

M-人源化VLRB序列-Fc序列

MCPAACTCSNNTVDCRSKGLTEIPTNLPETITIIYLHDNTIKVIPPGAFSPYKKLREIYLGSNQISELAPDAFQGLRSLNVLDLGTNKITELPKSLFEGLFSLQELFLCCNKINCLRVDAFQDLHNLNHLALDQNKLQTIAKGTFSPLRAIQHMYLFGNPFICDCHLKWLADYLHIAMRWDGKAVNDPDSARCTSPRRLANKRIGQIKSKKFRCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS(SEQ ID NO：20)

人們可以使用高壓勻漿，和包涵體，來裂解表達(dá)人源化VLRB序列和Fc序列融合蛋白的大腸桿菌細(xì)胞。在后續(xù)蛋白質(zhì)折疊，選擇性沉淀，和過濾后，人們可以采用色譜純化步驟(例如離子交換色譜、蛋白A、或羥磷灰石層析)。

在某些實(shí)施例中，VLR或修飾的VLR或片段可以與T細(xì)胞抗原受體(如CD3-ζ)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分融合。在某些實(shí)施例中，該T細(xì)胞抗原受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分是具有免疫受體酪氨酸基活化基序的肽，該基序具有共有序列YXXLXXXXXXXXYXXL(SEQ ID NO：52)，其中X是任何氨基酸，L是亮氨酸或異亮氨酸，其中SEQ ID NO：52任選地在中間區(qū)段XXXXXXXX(SEQ ID NO：53)內(nèi)具有一個(gè)或兩個(gè)X氨基酸缺失。該免疫受體酪氨酸基活化基序(已加下劃線的)是在部分CD3-ζ序列AQLPITEAQSFGLLDPKLCYLLDGILFIYGVILTALFLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO：54)或片段或變體中，例如，這些變體具有1個(gè)、2個(gè)、或3個(gè)氨基酸缺失、添加，或取代變體，或與其具有大于50％、60％、70％、80％、90％、95％或更大一致性的序列。

在某些實(shí)施例中，該T細(xì)胞抗原受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分是具有基于免疫受體酪氨酸的活化基序(已加下劃線的)的多肽，該多肽具有免疫球蛋白ε受體亞基γ前體IPAVVLLLLLLVEQAAALGEPQLCYILDAILFLYGIVLTLLYCRLKIQVRKAAITSYEKSDGVYTGLSTRNQETYETLKHEKPPQ(SEQ ID NO：55)片段或其變體的序列或具有與其大于50％、60％、70％、80％、90％、95％或更大一致性的序列。

人源化RBC36與H三糖的結(jié)合

將Slit2-D2突變體克隆到包含IgG1-Fc的慢病毒表達(dá)載體中，并且通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染在HEK-293T細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。Slit2-D2突變體的表達(dá)是通過用抗IgG-HRP共軛的第二抗體對(duì)上清液進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡來證實(shí)的。這些上清液用來染色CHO-H細(xì)胞系，并且通過流式細(xì)胞術(shù)用抗IgG-PE共軛的第二Ab檢測(cè)結(jié)合。作為陽(yáng)性對(duì)照，還將CHO-H細(xì)胞用野生型RBC36-IgG-Fc融合蛋白進(jìn)行染色。Slit-M4-IgG-Fc蛋白染色這些CHO-H細(xì)胞，證實(shí)H三糖特異性可以轉(zhuǎn)染到Slit2-D2支架(圖6)。

人漿細(xì)胞特異性VLR mAb(MM3)

通過用人類多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞免疫七鰓鰻來產(chǎn)生漿細(xì)胞特異性VLR mAb(MM3)。之前已經(jīng)制備了針對(duì)人漿細(xì)胞抗原的小鼠抗體，但是沒有是漿細(xì)胞特異性的。MM3 VLR mAb結(jié)合至正常(25個(gè)所測(cè)試供體樣本中的25個(gè))和惡性人漿細(xì)胞(32個(gè)骨髓瘤患者中的27個(gè))，但是并沒有結(jié)合至其他B或造血系細(xì)胞(圖9)。Mm3還識(shí)別非人類靈長(zhǎng)動(dòng)物中(獼猴和烏白眉猴(sooty mangabes))的漿細(xì)胞，但它并不結(jié)合至小鼠漿細(xì)胞。為了證實(shí)來自獼猴骨髓的MM3⁺細(xì)胞是漿細(xì)胞，將它們通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分選，并且通過透射電子顯微術(shù)進(jìn)行分析。這些MM3⁺細(xì)胞具有小而密的偏心核和具有大大擴(kuò)展的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的大細(xì)胞質(zhì)容積，這些是漿細(xì)胞的特征。非人類靈長(zhǎng)動(dòng)物中漿細(xì)胞上的MM3抗原的保守性提供了用于評(píng)估VLR抗體靶向并消耗體內(nèi)漿細(xì)胞的能力的模型系統(tǒng)?；贑D19和CDl38的表達(dá)，使用多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)來分析來自健康人類供體的人骨髓源漿細(xì)胞亞群上的MM3的表達(dá)(圖10)。該MM3 VLR mAb染色所有四種CD38hi漿細(xì)胞亞群，包括長(zhǎng)壽命漿細(xì)胞群(CD19-、CD27+、CD138+、CD38hi)。它還染色不表達(dá)CD138(最廣泛使用的漿細(xì)胞標(biāo)記)的人類骨髓中的Ab分泌細(xì)胞的亞群。

在某些實(shí)施例中，本披露涉及包括MM3抗原結(jié)合域序列(SEQ ID NO：56)的多肽或融合體

ACPSQCSCPGTDVNCHERRLASVPAEIPTTTKILRLYINQITKLEPGVFDRLTQLTQLGLWDNQLQALPEGVFDRLVNLQKLYLNQNQLLALPVGVFDKLTQLTYLDLNNNQLKSIPRGAFDNLKSLTHIWLYGNPWDCECSDILYLKNWIVQHASIVNPHPYGGVDNVKCSGTNTPVRAVTEASTSPSKCPG或其變體。

在某些實(shí)施例中，這些變體是與其具有大于80％、85％、90％、95％、97％、98％百分比一致性或相似性的那些。在某些實(shí)施例中，這些變體包含一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)氨基酸取代、缺失或插入。在某些實(shí)施例中，這些取代是保守取代。

MM3全序列，包括信號(hào)肽和莖(已加下劃線的)(SEQ ID NO：57)MWIKWIATLVAFGALVQSAVACPSQCSCPGTDVNCHERRLASVPAEIPTTTKILRLYINQITKLEPGVFDRLTQLTQLGLWDNQLQALPEGVFDRLVNLQKLYLNQNQLLALPVGVFDKLTQLTYLDLNNNQLKSIPRGAFDNLKSLTHIWLYGNPWDCECSDILYLKNWIVQHASIVNPHPYGGVDNVKCSGTNTPVRAVTEASTSPSKCPGYVATTTTPTTTTPEFIPETTTSPQPVITTQKPKPLWNFNCTSIQERKNDGGDCGKPACTTLLNCANFLSCLCSTCALCRKR

MM3 VLR mAb的人源化

在某些實(shí)施例中，本披露涵蓋了包括(SEQ ID NO：64)或其變體的Slit2-MM3多肽，CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLR ILRLYINQISELAPDAFQGLRSLNQLVLWDNKITELPKSLFEGLFSLQ LLYLNA NKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNNNKLQTIAKGTFSPLRAIQ HIWLYG NPFICDCHLKWLADYLHASIVNPHPYGGVDN ARCTSPRRLAN；

（SEQ ID NO:74）或其變體，CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLR ILRLYI NQISELAPDAFQGLRSLNQLVLWDNKITELPKSLFEGLFSLQ LLYLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNN NKLQTIAKGTFSPLRAIQ HIWLYG NPFICDCHLKWLADYLHHASIVNPHPYGGVDN ARCTSPRRLAN；

（SEQ ID NO:75）或其變體，CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLR ILRLYI NQISELAPDAFQGLRSLNQLVLWDNKITELPKSLFEGLFSLQ LLYLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNN NKLQTIAKGTFSPLRAIQ HIWLYGNPFICDCHLKWLADYLHTHASIVNPHPYGGVDN RCTSPRRLAN；

（SEQ ID NO:76）或其變體，CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLR ILRLYI NQISELAPDAFQGLRSLNQLVLWDNKITELPKSLFEGLFSLQ LLYLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNN NKLQTIAKGTFSPLRAIQ HIWLYGNPFICDCHLKWLADYLHTNHASIVNPHPYGGVDN ARCTSPRRLAN；或

（SEQ ID NO:77）或其變體，CPAACTCSNNIVDCRGKGLTEIPTNLPETITEIRLEQNTIKVIPPGAFSPYKKLR ILRLYI NQISELAPDAFQGLRSLNQLVLWDNKITELPKSLFEGLFSLQ LLYLNANKINCLRVDAFQDLHNLNYLDLNN NKLQTIAKGTFSPLRAIQ HIWLYG NPFICDCHLKWLADYLHTNPHASIVNPHPYGGVDN RCTSPRRLAN。

如圖11所描述，VLR可變位置中的氨基酸子集使大部分抗原接觸。在MM3 VLR mAb的凹面上的β鏈包含總計(jì)這些氨基酸殘基中的13個(gè)（4個(gè)Tyr、2個(gè)Trp、4個(gè)Asn、2個(gè)Asp和1個(gè)His）。人源化MM3（huMM3-1）將包含被取代到Slit2-D2支架上的對(duì)應(yīng)位置中的這些殘基和在與RBC36 LRRCT相同的位置處所嫁接的MM3 LRRCT插入片段。圖12示出這種方法將如何應(yīng)用于MM3的兩個(gè)最C末端LRR模塊（LRRVe和LRRCP）。該圖示出針對(duì)于這些模塊和VLR，MM3和人Slit2-D2支架的比對(duì)，可變氨基位置為灰色陰影。在此實(shí)例中，將來自MM3 LRRVe的Tyr、Asp和兩個(gè)Asn殘基和來自MM3 LRRCP的His、Trp和Tyr取代到Slit2-D2支架上。在初始構(gòu)建體中，MM3 LRRCP中的Gln殘基將不被取代，因?yàn)樗绰湓谧罱?jīng)常接觸抗原的VLR氨基酸的子集中，但是可以添加它。將這種方法應(yīng)用于其他LRR模塊（LRRV、LRR1和LRRNT）。

人們表示HuMM3-1二者都作為可溶的IgG-Fc融合蛋白并且在酵母表面展示型式中來評(píng)估抗原結(jié)合。在酵母展示格式中，將通過用來自MM3+細(xì)胞的生物素酰化的裂解物將表達(dá)huMM3的酵母染色并且使用用于檢測(cè)的鏈親和素-PE確定抗原結(jié)合。遵循類似于用于RBC36人源化的方法的方法，人們可以反復(fù)將來自MM3的可變位置的另外的殘基摻入到huMM3-1支架上。

序列表

<110> 愛默蕾大學(xué)

布蘭特利·R·赫林（Herrin, Brantley R.）

馬克斯·戴爾·庫(kù)珀（Cooper, Max Dale）

魯?shù)婪颉ぐ柟兀‥hrhardt, Rudolf）

<120> 人源化可變淋巴細(xì)胞受體（VLR）及其相關(guān)組合物和用途

<130> 13203 PCT

<150> US 61/987,566

<151> 2014-05-02

<160> 78

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 213

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Thr Val Asp Cys Arg Ser

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Ile

20 25 30

Ile Tyr Leu His Asp Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Glu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Val

65 70 75 80

Leu Asp Leu Gly Thr Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Glu Leu Phe Leu Cys Cys Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn His

115 120 125

Leu Ala Leu Asp Gln Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Tyr Leu Phe Gly Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His Ile Ala

165 170 175

Met Arg Trp Asp Gly Lys Ala Val Asn Asp Pro Asp Ser Ala Arg Cys

180 185 190

Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser

195 200 205

Lys Lys Phe Arg Cys

210

<210> 2

<211> 220

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (118)..(118)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 2

Gly Ser Leu His Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val

1 5 10 15

Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu

20 25 30

Thr Ile Thr Glu Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro

35 40 45

Pro Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser

50 55 60

Asn Asn Gln Ile Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Leu Asn Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro

85 90 95

Lys Ser Leu Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu Leu Asn

100 105 110

Ala Asn Lys Ile Asn Xaa Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His

115 120 125

Asn Leu Asn Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala

130 135 140

Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met His Leu Ala

145 150 155 160

Gln Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr

165 170 175

Leu His Thr Asn Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala Arg Cys Thr Ser Pro

180 185 190

Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe

195 200 205

Arg Cys Ser Ala Ala Ala His His His His His His

210 215 220

<210> 3

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

Ile Ile Tyr Leu His Asp

1 5

<210> 4

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 4

Glu Ile Tyr Leu Gly Ser

1 5

<210> 5

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 5

Val Leu Asp Leu Gly Thr

1 5

<210> 6

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 6

Glu Leu Phe Leu Cys Cys

1 5

<210> 7

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 7

His Leu Ala Leu Asp Gln

1 5

<210> 8

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 8

His Met Tyr Leu Phe Gly

1 5

<210> 9

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人

<400> 9

Ile Ala Met Arg Trp Asp Gly Lys Ala Val Asn Asp Pro Asp Ser

1 5 10 15

<210> 10

<211> 213

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (11)..(13)

<223> 其中X是任何氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (15)..(16)

<223> 其中X是任何氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (32)..(32)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (34)..(37)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (56)..(56)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(61)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (80)..(80)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(85)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (128)..(128)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (130)..(130)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (132)..(133)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (152)..(152)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (154)..(154)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (156)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (175)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 10

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Xaa

20 25 30

Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa

65 70 75 80

Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Xaa

115 120 125

Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His Xaa Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Arg Cys

180 185 190

Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser

195 200 205

Lys Lys Phe Arg Cys

210

<210> 11

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 11

Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5

<210> 12

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 12

Glu Ile Arg Leu Glu Gln

1 5

<210> 13

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 13

Arg Ile Asp Leu Ser Asn

1 5

<210> 14

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 14

Ser Leu Val Leu Tyr Gly

1 5

<210> 15

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 15

Leu Leu Leu Leu Asn Ala

1 5

<210> 16

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 16

Leu Leu Ser Leu Tyr Asp

1 5

<210> 17

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 17

Thr Met His Leu Ala Gln

1 5

<210> 18

<211> 227

<212> PRT

<213> 智人

<400> 18

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

1 5 10 15

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

20 25 30

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

35 40 45

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

50 55 60

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

85 90 95

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

100 105 110

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

115 120 125

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

130 135 140

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

145 150 155 160

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

210 215 220

Pro Gly Lys

225

<210> 19

<211> 441

<212> PRT

<213> 智人

<400> 19

Met Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

1 5 10 15

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

20 25 30

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

35 40 45

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

50 55 60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

65 70 75 80

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

85 90 95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

100 105 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

115 120 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

130 135 140

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145 150 155 160

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

165 170 175

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

180 185 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

195 200 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

210 215 220

Ser Pro Gly Lys Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Thr Val

225 230 235 240

Asp Cys Arg Ser Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu

245 250 255

Thr Ile Thr Ile Ile Tyr Leu His Asp Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro

260 265 270

Pro Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Glu Ile Tyr Leu Gly

275 280 285

Ser Asn Gln Ile Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg

290 295 300

Ser Leu Asn Val Leu Asp Leu Gly Thr Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro

305 310 315 320

Lys Ser Leu Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Glu Leu Phe Leu Cys

325 330 335

Cys Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His

340 345 350

Asn Leu Asn His Leu Ala Leu Asp Gln Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala

355 360 365

Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Tyr Leu Phe

370 375 380

Gly Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr

385 390 395 400

Leu His Ile Ala Met Arg Trp Asp Gly Lys Ala Val Asn Asp Pro Asp

405 410 415

Ser Ala Arg Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly

420 425 430

Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys

435 440

<210> 20

<211> 436

<212> PRT

<213> 智人

<400> 20

Met Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Thr Val Asp Cys Arg

1 5 10 15

Ser Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr

20 25 30

Ile Ile Tyr Leu His Asp Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala

35 40 45

Phe Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Glu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Gln

50 55 60

Ile Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn

65 70 75 80

Val Leu Asp Leu Gly Thr Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu

85 90 95

Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Glu Leu Phe Leu Cys Cys Asn Lys

100 105 110

Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn

115 120 125

His Leu Ala Leu Asp Gln Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr

130 135 140

Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Tyr Leu Phe Gly Asn Pro

145 150 155 160

Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His Ile

165 170 175

Ala Met Arg Trp Asp Gly Lys Ala Val Asn Asp Pro Asp Ser Ala Arg

180 185 190

Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys

195 200 205

Ser Lys Lys Phe Arg Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

210 215 220

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

225 230 235 240

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

245 250 255

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

260 265 270

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

275 280 285

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

290 295 300

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

305 310 315 320

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

325 330 335

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

340 345 350

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

355 360 365

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

370 375 380

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

385 390 395 400

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

405 410 415

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

420 425 430

Lys Ser Leu Ser

435

<210> 21

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (1)..(2)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (6)..(7)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 21

Xaa Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa

1 5

<210> 22

<211> 19

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (3)..(4)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (11)..(11)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (18)..(19)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 22

Cys Pro Xaa Xaa Cys Thr Cys Ser Xaa Asn Xaa Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Xaa Xaa

<210> 23

<211> 47

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (5)..(6)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (25)..(25)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (27)..(27)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (29)..(30)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 23

Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr

1 5 10 15

Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa Asn Pro

20 25 30

Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His

35 40 45

<210> 24

<211> 213

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (114)..(114)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 24

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser

65 70 75 80

Leu Asp Leu Gly Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Xaa Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Leu

115 120 125

Leu Ser Leu Asp Asp Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met His Leu Ala Gln Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Ser Ile Ala

165 170 175

Met Arg Trp Asp Gly Lys Ala Val Asn Asp Pro Asp Ser Ala Arg Cys

180 185 190

Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser

195 200 205

Lys Lys Phe Arg Cys

210

<210> 25

<211> 62

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (4)..(7)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (9)..(9)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (14)..(14)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (20)..(21)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (23)..(26)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (28)..(28)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (32)..(33)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (39)..(39)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (41)..(42)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (44)..(47)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (49)..(50)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (52)..(52)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (54)..(56)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(58)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (60)..(60)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 25

Val Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Ser Val Pro Ala Xaa Ile Pro

1 5 10 15

Thr Thr Thr Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Xaa Ile Thr Lys Xaa

20 25 30

Xaa Pro Gly Val Phe Asp Xaa Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Leu

35 40 45

Xaa Xaa Asn Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Gly Xaa Phe Asp

50 55 60

<210> 26

<211> 212

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (11)..(13)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (15)..(16)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (32)..(32)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (34)..(37)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (56)..(56)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(61)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (80)..(80)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(85)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (128)..(128)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (130)..(130)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (132)..(133)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (152)..(152)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (154)..(154)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (156)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 26

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Xaa

20 25 30

Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa

65 70 75 80

Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Xaa

115 120 125

Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr

180 185 190

Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys

195 200 205

Lys Phe Arg Cys

210

<210> 27

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (32)..(32)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (34)..(37)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (56)..(56)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(61)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (80)..(80)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(85)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (128)..(128)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (130)..(130)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (132)..(133)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (152)..(152)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (154)..(154)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (156)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 27

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Xaa

20 25 30

Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa

65 70 75 80

Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

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Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile

100 105 110

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115 120 125

Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

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Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa Asn Pro Phe

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Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr

180 185 190

Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 28

<211> 197

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (56)..(56)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(61)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (80)..(80)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(85)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (128)..(128)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (130)..(130)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (132)..(133)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (152)..(152)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (154)..(154)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (156)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(187)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 28

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

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65 70 75 80

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100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Xaa

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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr Ser Pro

180 185 190

Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 29

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (80)..(80)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(85)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (128)..(128)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (130)..(130)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (132)..(133)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (152)..(152)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (154)..(154)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (156)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 29

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

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Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 30

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(84)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (128)..(128)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (130)..(130)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (132)..(133)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (152)..(152)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (154)..(154)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (156)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 30

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

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Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

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180 185 190

Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 31

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (128)..(128)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (130)..(130)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (132)..(133)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (152)..(152)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (154)..(154)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (156)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 31

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

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<211> 199

<212> PRT

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<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (128)..(128)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (130)..(130)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (132)..(133)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (152)..(152)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (154)..(154)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (156)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 32

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile

50 55 60

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65 70 75 80

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100 105 110

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<212> PRT

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<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (15)..(15)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (17)..(20)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (39)..(39)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (41)..(44)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (63)..(63)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (65)..(65)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (67)..(68)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (87)..(87)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (89)..(89)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (91)..(92)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (111)..(111)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (113)..(113)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (115)..(116)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (135)..(135)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (137)..(137)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (139)..(140)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (157)..(172)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 33

Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Xaa Ile

1 5 10 15

Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe Ser

20 25 30

Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Gln Ile Ser

35 40 45

Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa Leu

50 55 60

Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe Glu

65 70 75 80

Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Asn

85 90 95

Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Xaa Leu

100 105 110

Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser

115 120 125

Pro Leu Arg Ala Ile Gln Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa Asn Pro Phe Ile

130 135 140

Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa

145 150 155 160

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr Ser

165 170 175

Pro Arg Arg Leu Ala Asn

180

<210> 34

<211> 153

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (12)..(15)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (34)..(34)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (36)..(36)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (38)..(39)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(58)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (60)..(60)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (62)..(63)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(84)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (86)..(87)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(108)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (110)..(111)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (128)..(143)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 34

Ala Phe Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn

1 5 10 15

Gln Ile Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu

20 25 30

Asn Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser

35 40 45

Leu Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn

50 55 60

Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu

65 70 75 80

Asn Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly

85 90 95

Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa Asn

100 105 110

Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa

115 120 125

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg

130 135 140

Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

145 150

<210> 35

<211> 129

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (12)..(12)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (14)..(15)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (34)..(34)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (36)..(36)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (38)..(39)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(58)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (60)..(60)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (62)..(63)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(84)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (86)..(87)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(119)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 35

Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn

1 5 10 15

Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu

20 25 30

Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp

35 40 45

Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn

50 55 60

Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile

65 70 75 80

Gln Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu

85 90 95

Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

100 105 110

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala

115 120 125

Asn

<210> 36

<211> 76

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (23)..(23)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (25)..(25)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (27)..(28)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (47)..(47)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (49)..(49)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (51)..(52)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (71)..(71)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (73)..(73)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (75)..(76)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 36

Xaa Leu Xaa Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe Glu

1 5 10 15

Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Asn

20 25 30

Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Xaa Leu

35 40 45

Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser

50 55 60

Pro Leu Arg Ala Ile Gln Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa

65 70 75

<210> 37

<211> 54

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (5)..(6)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (25)..(25)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (27)..(27)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (29)..(30)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (49)..(49)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (51)..(51)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (53)..(54)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 37

Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala

1 5 10 15

Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys

20 25 30

Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln

35 40 45

Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa

50

<210> 38

<211> 30

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (5)..(6)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (25)..(25)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (27)..(27)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (29)..(30)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 38

Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr

1 5 10 15

Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa

20 25 30

<210> 39

<211> 212

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (11)..(13)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (15)..(16)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (32)..(32)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (34)..(37)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (56)..(56)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(61)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (80)..(80)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(85)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (157)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 39

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Xaa

20 25 30

Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa

65 70 75 80

Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

115 120 125

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr

180 185 190

Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys

195 200 205

Lys Phe Arg Cys

210

<210> 40

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (32)..(32)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (34)..(37)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (56)..(56)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(61)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (80)..(80)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(85)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (157)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 40

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Xaa

20 25 30

Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa

65 70 75 80

Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

115 120 125

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr

180 185 190

Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 41

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (56)..(56)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(61)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (80)..(80)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(85)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (157)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 41

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa

65 70 75 80

Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

115 120 125

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr

180 185 190

Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 42

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (80)..(80)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(85)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (157)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 42

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa

65 70 75 80

Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

115 120 125

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr

180 185 190

Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 43

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (82)..(82)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (84)..(84)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (157)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 43

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser

65 70 75 80

Leu Xaa Leu Xaa Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

115 120 125

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr

180 185 190

Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 44

<211> 198

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(104)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (106)..(106)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (108)..(109)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (157)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(188)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 44

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser

65 70 75 80

Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

115 120 125

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr Ser

180 185 190

Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 45

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (157)..(157)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (174)..(189)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 45

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser

65 70 75 80

Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

115 120 125

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa

165 170 175

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr

180 185 190

Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 46

<211> 182

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (15)..(15)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (17)..(20)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (39)..(39)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (41)..(44)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (63)..(63)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (65)..(65)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (67)..(68)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (87)..(87)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (89)..(89)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (91)..(92)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (140)..(140)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (157)..(172)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 46

Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Xaa Ile

1 5 10 15

Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe Ser

20 25 30

Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn Gln Ile Ser

35 40 45

Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa Leu

50 55 60

Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe Glu

65 70 75 80

Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Asn

85 90 95

Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr Leu

100 105 110

Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser

115 120 125

Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe Ile

130 135 140

Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa

145 150 155 160

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr Ser

165 170 175

Pro Arg Arg Leu Ala Asn

180

<210> 47

<211> 153

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (12)..(15)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (34)..(34)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (36)..(36)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (38)..(39)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (58)..(58)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (60)..(60)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (62)..(63)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (111)..(111)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (128)..(143)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 47

Ala Phe Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Asn

1 5 10 15

Gln Ile Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu

20 25 30

Asn Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser

35 40 45

Leu Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn

50 55 60

Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu

65 70 75 80

Asn Tyr Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly

85 90 95

Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn

100 105 110

Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa

115 120 125

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg

130 135 140

Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

145 150

<210> 48

<211> 129

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (10)..(10)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (12)..(12)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (14)..(15)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (34)..(34)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (36)..(36)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (38)..(39)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (87)..(87)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (104)..(119)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 48

Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn

1 5 10 15

Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu

20 25 30

Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp

35 40 45

Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr Leu Asp Leu Asn Asn Asn

50 55 60

Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile

65 70 75 80

Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu

85 90 95

Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

100 105 110

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala

115 120 125

Asn

<210> 49

<211> 93

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (24)..(24)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (26)..(26)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (28)..(29)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (77)..(77)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 49

Leu Xaa Leu Xaa Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

1 5 10 15

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile

20 25 30

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

35 40 45

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

50 55 60

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe

65 70 75 80

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu

85 90

<210> 50

<211> 72

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (7)..(8)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (56)..(56)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 50

Leu Gln Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val

1 5 10 15

Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr Leu Asp Leu Asn Asn

20 25 30

Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala

35 40 45

Ile Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His

50 55 60

Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu

65 70

<210> 51

<211> 55

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (39)..(39)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 51

Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr Leu Asp Leu Asn Asn Asn

1 5 10 15

Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile

20 25 30

Gln His Met Trp Leu Tyr Xaa Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu

35 40 45

Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu

50 55

<210> 52

<211> 16

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (2)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (5)..(12)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (14)..(15)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 52

Tyr Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Leu

1 5 10 15

<210> 53

<211> 8

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (1)..(8)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 53

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 54

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人

<400> 54

Asp Pro Lys Leu Cys Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly

1 5 10 15

Val Ile Leu Thr Ala Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

20 25 30

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

35 40 45

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

50 55 60

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln

65 70 75 80

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

85 90 95

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

100 105 110

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

115 120 125

Leu His Met Gln

130

<210> 55

<211> 62

<212> PRT

<213> 智人

<400> 55

Glu Pro Gln Leu Cys Tyr Ile Leu Asp Ala Ile Leu Phe Leu Tyr Gly

1 5 10 15

Ile Val Leu Thr Leu Leu Tyr Cys Arg Leu Lys Ile Gln Val Arg Lys

20 25 30

Ala Ala Ile Thr Ser Tyr Glu Lys Ser Asp Gly Val Tyr Thr Gly Leu

35 40 45

Ser Thr Arg Asn Gln Glu Thr Tyr Glu Thr Leu Lys His Glu

50 55 60

<210> 56

<211> 193

<212> PRT

<213> 智人

<400> 56

Ala Cys Pro Ser Gln Cys Ser Cys Pro Gly Thr Asp Val Asn Cys His

1 5 10 15

Glu Arg Arg Leu Ala Ser Val Pro Ala Glu Ile Pro Thr Thr Thr Lys

20 25 30

Ile Leu Arg Leu Tyr Ile Asn Gln Ile Thr Lys Leu Glu Pro Gly Val

35 40 45

Phe Asp Arg Leu Thr Gln Leu Thr Gln Leu Gly Leu Trp Asp Asn Gln

50 55 60

Leu Gln Ala Leu Pro Glu Gly Val Phe Asp Arg Leu Val Asn Leu Gln

65 70 75 80

Lys Leu Tyr Leu Asn Gln Asn Gln Leu Leu Ala Leu Pro Val Gly Val

85 90 95

Phe Asp Lys Leu Thr Gln Leu Thr Tyr Leu Asp Leu Asn Asn Asn Gln

100 105 110

Leu Lys Ser Ile Pro Arg Gly Ala Phe Asp Asn Leu Lys Ser Leu Thr

115 120 125

His Ile Trp Leu Tyr Gly Asn Pro Trp Asp Cys Glu Cys Ser Asp Ile

130 135 140

Leu Tyr Leu Lys Asn Trp Ile Val Gln His Ala Ser Ile Val Asn Pro

145 150 155 160

His Pro Tyr Gly Gly Val Asp Asn Val Lys Cys Ser Gly Thr Asn Thr

165 170 175

Pro Val Arg Ala Val Thr Glu Ala Ser Thr Ser Pro Ser Lys Cys Pro

180 185 190

Gly

<210> 57

<211> 294

<212> PRT

<213> 智人

<400> 57

Met Trp Ile Lys Trp Ile Ala Thr Leu Val Ala Phe Gly Ala Leu Val

1 5 10 15

Gln Ser Ala Val Ala Cys Pro Ser Gln Cys Ser Cys Pro Gly Thr Asp

20 25 30

Val Asn Cys His Glu Arg Arg Leu Ala Ser Val Pro Ala Glu Ile Pro

35 40 45

Thr Thr Thr Lys Ile Leu Arg Leu Tyr Ile Asn Gln Ile Thr Lys Leu

50 55 60

Glu Pro Gly Val Phe Asp Arg Leu Thr Gln Leu Thr Gln Leu Gly Leu

65 70 75 80

Trp Asp Asn Gln Leu Gln Ala Leu Pro Glu Gly Val Phe Asp Arg Leu

85 90 95

Val Asn Leu Gln Lys Leu Tyr Leu Asn Gln Asn Gln Leu Leu Ala Leu

100 105 110

Pro Val Gly Val Phe Asp Lys Leu Thr Gln Leu Thr Tyr Leu Asp Leu

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Asn Asn Asn Gln Leu Lys Ser Ile Pro Arg Gly Ala Phe Asp Asn Leu

130 135 140

Lys Ser Leu Thr His Ile Trp Leu Tyr Gly Asn Pro Trp Asp Cys Glu

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Cys Ser Asp Ile Leu Tyr Leu Lys Asn Trp Ile Val Gln His Ala Ser

165 170 175

Ile Val Asn Pro His Pro Tyr Gly Gly Val Asp Asn Val Lys Cys Ser

180 185 190

Gly Thr Asn Thr Pro Val Arg Ala Val Thr Glu Ala Ser Thr Ser Pro

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210 215 220

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Thr Leu Leu Asn Cys Ala Asn Phe Leu Ser Cys Leu Cys Ser Thr Cys

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Ala Leu Cys Arg Lys Arg

290

<210> 58

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<400> 58

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1 5 10 15

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Tyr Leu Asn Ala Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

115 120 125

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165 170 175

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195

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<212> PRT

<213> 智人

<400> 59

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1 5 10 15

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65 70 75 80

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100 105 110

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Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Ser Ile Val

165 170 175

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180 185 190

Arg Leu Ala Asn

195

<210> 60

<211> 201

<212> PRT

<213> 智人

<400> 60

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50 55 60

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65 70 75 80

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165 170 175

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Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195 200

<210> 61

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<400> 61

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65 70 75 80

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Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

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Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 62

<211> 196

<212> PRT

<213> 智人

<400> 62

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

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165 170 175

Asn Pro His Pro Tyr Gly Gly Val Asp Ala Arg Cys Thr Ser Pro Arg

180 185 190

Arg Leu Ala Asn

195

<210> 63

<211> 201

<212> PRT

<213> 智人

<400> 63

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

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35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser

65 70 75 80

Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile

100 105 110

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Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195 200

<210> 64

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<400> 64

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180 185 190

Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195

<210> 65

<211> 71

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (3)..(3)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (5)..(6)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (25)..(25)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (27)..(27)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (29)..(30)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (49)..(49)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (51)..(51)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 尚未歸類的特征

<222> (53)..(54)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 65

Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala

1 5 10 15

Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa Asn Lys

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Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln

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Xaa Met Xaa Leu Xaa Xaa Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys

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Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His

65 70

<210> 66

<211> 32

<212> PRT

<213> 智人

<400> 66

Tyr Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr

1 5 10 15

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<212> PRT

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Tyr Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr

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Gln

<210> 68

<211> 33

<212> PRT

<213> 智人

<400> 68

Tyr Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr

1 5 10 15

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20 25 30

Gly

<210> 69

<211> 43

<212> PRT

<213> 智人

<400> 69

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20 25 30

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<210> 70

<211> 43

<212> PRT

<213> 智人

<400> 70

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Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met

20 25 30

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35 40

<210> 71

<211> 43

<212> PRT

<213> 智人

<400> 71

Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln

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35 40

<210> 72

<211> 206

<212> PRT

<213> 智人

<400> 72

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

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195 200 205

<210> 73

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<400> 73

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195

<210> 74

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<212> PRT

<213> 智人

<400> 74

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

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50 55 60

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Leu Val Leu Trp Asp Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

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100 105 110

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130 135 140

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165 170 175

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195 200

<210> 75

<211> 200

<212> PRT

<213> 智人

<400> 75

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

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Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

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50 55 60

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65 70 75 80

Leu Val Leu Trp Asp Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

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Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Tyr Leu Asn Ala Asn Lys Ile

100 105 110

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115 120 125

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Ile Trp Leu Tyr Gly Asn Pro Phe

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Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His Thr His

165 170 175

Ala Ser Ile Val Asn Pro His Pro Tyr Gly Gly Val Asp Asn Arg Cys

180 185 190

Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195 200

<210> 76

<211> 202

<212> PRT

<213> 智人

<400> 76

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Ile Leu Arg Leu Tyr Ile Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Gln

65 70 75 80

Leu Val Leu Trp Asp Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Tyr Leu Asn Ala Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

115 120 125

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Ile Trp Leu Tyr Gly Asn Pro Phe

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Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His Thr Asn

165 170 175

His Ala Ser Ile Val Asn Pro His Pro Tyr Gly Gly Val Asp Asn Ala

180 185 190

Arg Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195 200

<210> 77

<211> 202

<212> PRT

<213> 智人

<400> 77

Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly

1 5 10 15

Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu

20 25 30

Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe

35 40 45

Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Ile Leu Arg Leu Tyr Ile Asn Gln Ile

50 55 60

Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Gln

65 70 75 80

Leu Val Leu Trp Asp Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe

85 90 95

Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Tyr Leu Asn Ala Asn Lys Ile

100 105 110

Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Tyr

115 120 125

Leu Asp Leu Asn Asn Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe

130 135 140

Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln His Ile Trp Leu Tyr Gly Asn Pro Phe

145 150 155 160

Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His Thr Asn

165 170 175

Pro His Ala Ser Ile Val Asn Pro His Pro Tyr Gly Gly Val Asp Asn

180 185 190

Arg Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn

195 200

<210> 78

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<400> 78

Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu

1 5 10