本發(fā)明涉及作為JAK抑制劑的化合物，JAK是在過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病中牽涉的酪氨酸激酶家族。具體而言，本發(fā)明的化合物抑制JAK1和/或TYK2。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)本發(fā)明的化合物的方法、包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物、通過施用本發(fā)明的化合物來預(yù)防和/或治療包括如下的疾病的方法：過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病。發(fā)明背景杰納斯(Janus)激酶(JAKs)是將細胞因子信號從膜受體轉(zhuǎn)導(dǎo)至STAT轉(zhuǎn)錄因子的胞質(zhì)酪氨酸激酶。記載了四種JAK家族成員，JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。在細胞因子與其受體結(jié)合后，JAK家族成員自磷酸化和/或彼此轉(zhuǎn)磷酸化，然后是STAT磷酸化，其隨后遷移至細胞核以調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄。JAK-STAT胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)服務(wù)于干擾素、大部分白介素以及多種細胞因子和內(nèi)分泌因子如EPO、TPO、GH、OSM、LIF、CNTF、GM-CSF和PRL(Vainchenker等人,2008)。遺傳模型和小分子JAK抑制劑研究的聯(lián)合揭示了數(shù)種JAK的治療潛能。JAK3經(jīng)小鼠和人類遺傳學驗證為免疫抑制靶標(O'Shea等人,2004)。JAK3抑制劑被成功地引入臨床開發(fā)，最初用于器官移植排斥，但后來還用于其它免疫-炎性適應(yīng)證如類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、銀屑病和節(jié)段性回腸炎(http://clinicaltrials.gov/)。TYK2是免疫炎性疾病的潛在靶標，經(jīng)人類遺傳學及小鼠基因敲除研究得以驗證(Levy和Loomis,2007)。JAK1是免疫炎性疾病區(qū)域中的靶標。JAK1與其它JAK異二聚化以轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞因子驅(qū)動的促炎信號傳導(dǎo)。因此，JAK1的抑制是具有使用JAK1信號傳導(dǎo)的病理學相關(guān)細胞因子如IL-6、IL-4、IL-5、IL-13或IFNγ的免疫炎性疾病以及由JAK介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)所驅(qū)動的其它疾病所關(guān)注的。軟骨退化是多種疾病的標志，其中類風濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎為最顯著的。類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)發(fā)炎和遭破壞為特征的慢性關(guān)節(jié)退化疾病。當該疾病未被檢查出時，其由于關(guān)節(jié)功能喪失而導(dǎo)致實質(zhì)性失能和疼痛和甚至導(dǎo)致過早死亡。因此，RA療法的目標不僅是減緩疾病，而且還有實現(xiàn)減輕以終止關(guān)節(jié)破壞。除疾病后果的嚴重性外，RA的高發(fā)病率(全世界約0.8％的成年人患病)意味著巨大的社會經(jīng)濟影響。(Choy和Panayi,2001；Firestein,2003；Lee和Weinblatt,2001；O'Dell,2004；Smolen和Steiner,2003)。JAK1和JAK2在多種細胞因子和激素的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中有牽涉。與任意這些細胞因子和激素相關(guān)聯(lián)的病狀可通過JAK1和JAK2抑制劑得以改善。因此，多種過敏性或炎性病癥以及自身免疫疾病可得益于用本發(fā)明所述的化合物進行的治療，包括類風濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡、幼年型特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病COPD、組織纖維化、嗜酸細胞性炎癥、食管炎(eosophagitis)、炎性腸病(例如節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎)、移植、移植物抗宿主病、銀屑病、肌炎、多發(fā)性硬化癥。(Kopf等人,2010)骨關(guān)節(jié)炎(還稱為OA或磨損性關(guān)節(jié)炎)是關(guān)節(jié)炎的最常見形式，其特征為關(guān)節(jié)軟骨喪失，常常伴有骨肥大和疼痛。(Wieland等人,2005)骨關(guān)節(jié)炎是難以治療的。目前，無治愈措施可供使用，并且治療集中于緩解疼痛和預(yù)防患病關(guān)節(jié)變形。常見治療包括使用非類固醇抗炎藥(NSAID)。盡管已經(jīng)提倡諸如軟骨素和硫酸葡糖胺的膳食補充劑作為治療骨關(guān)節(jié)炎的安全有效選項，但是最新臨床試驗揭示這兩種治療未減少與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛。(Clegg等人,2006)刺激合成代謝過程、阻斷分解代謝過程或此兩者的組合可使軟骨穩(wěn)定，甚至可能使損害逆轉(zhuǎn)，因此阻止了疾病的進一步發(fā)展。已經(jīng)開發(fā)了用于矯正在骨關(guān)節(jié)炎疾病期間出現(xiàn)的關(guān)節(jié)軟骨病損的治療方法，但是迄今為止它們中無一者能夠介導(dǎo)關(guān)節(jié)軟骨原位和活體內(nèi)再生?？傊袩o調(diào)節(jié)疾病的骨關(guān)節(jié)炎藥物可供使用。Vandeghinste等人(Vandeghinste等人,2005)發(fā)現(xiàn)JAK1作為靶標，它的抑制可具有對多種疾病、包括OA的治療相關(guān)性。在小鼠中敲除JAK1基因證明JAK1在發(fā)育期間發(fā)揮基礎(chǔ)且非冗余的作用：JAK1-/-小鼠在出生后24小時內(nèi)死亡且淋巴細胞發(fā)育被嚴重損害。而且，JAK1-/-細胞對使用II類細胞因子受體、使用γ-c亞單位用于信號傳導(dǎo)的細胞因子受體和使用gp130亞單位用于信號傳導(dǎo)的細胞因子受體家族的細胞因子無反應(yīng)性或反應(yīng)性較小。(Rodig等人,1998)多個群組已經(jīng)在軟骨細胞生物學中牽涉了JAK-STAT信號傳導(dǎo)。Li等人(Li等人,2001)證明，制瘤素M通過激活JAK/STAT和MAPK信號傳導(dǎo)路徑誘導(dǎo)初級軟骨細胞中的MMP和TIMP3基因表達。Osaki等人(Osaki等人,2003)證明，干擾素γ介導(dǎo)的軟骨細胞中膠原蛋白II的抑制涉及JAK-STAT信號傳導(dǎo)。IL1-β通過減少基質(zhì)組分的表達和通過誘導(dǎo)膠原酶和誘生型一氧化氮合酶(NOS2)(其介導(dǎo)一氧化氮(NO)的產(chǎn)生)的表達來引起軟骨分解代謝。Otero等人(Otero等人,2005)證明，瘦蛋白和IL1-β協(xié)同誘導(dǎo)軟骨細胞中的NO產(chǎn)生或NOS2mRNA表達，并且其被JAK抑制劑所阻斷。Legendre等人(Legendre等人,2003)證明，IL6/IL6受體誘導(dǎo)牛關(guān)節(jié)軟骨細胞中的軟骨特異性基質(zhì)基因膠原蛋白II、聚集蛋白聚糖核心和連接蛋白的下調(diào)，并且其通過JAK/STAT信號傳導(dǎo)所介導(dǎo)。因此，這些觀測結(jié)果表明了JAK激酶活性在軟骨內(nèi)穩(wěn)態(tài)中的作用和JAK激酶抑制劑的治療機會。JAK家族成員已經(jīng)牽涉在另外的病癥、包括骨髓增殖性病癥中(O'Sullivan等人,2007)，其中已鑒別出JAK2中的突變。這指示JAK抑制劑、特別是JAK2抑制劑也可用于治療骨髓增殖性病癥。另外，JAK家族、特別是JAK1、JAK2和JAK3已經(jīng)與癌癥、特別是白血病、例如急性髓性白血病(O'Sullivan等人,2007；Xiang等人,2008)和急性淋巴母細胞白血病(Mullighan等人,2009)或?qū)嶓w腫瘤、例如子宮平滑肌肉瘤(Constantinescu等人,2008)、前列腺癌(Tam等人,2007)相關(guān)聯(lián)。這些結(jié)果指示，JAK抑制劑、特別是JAK1和/或JAK2抑制劑在治療癌癥(白血病和實體腫瘤，例如子宮平滑肌肉瘤、前列腺癌)中具有效用。另外，卡斯爾曼病(Castleman'sdisease)、多發(fā)性骨髓瘤、腎小球膜增生性腎小球腎炎、銀屑病和卡波西肉瘤(Kaposi'ssarcoma)也可能歸因于細胞因子IL-6分泌過多，細胞因子IL-6的生物學作用通過細胞內(nèi)JAK-STAT信號傳導(dǎo)所介導(dǎo)(Naka等人,2002)。該結(jié)果證明，JAK抑制劑還可以在所述疾病的治療中具有效用。現(xiàn)有療法不是令人滿意的，因此仍然需要鑒別出可用于治療過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病的其它化合物。因此，本發(fā)明提供了化合物、它們的制備方法和包含本發(fā)明的化合物連同適宜的藥用載體的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明還提供了本發(fā)明的化合物在制備用于治療過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病的藥劑中的用途。發(fā)明簡述本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn)：本發(fā)明的化合物能夠充當JAK抑制劑，它們可用于治療過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病。在一個特定方面，本發(fā)明的化合物為JAK1和/或TYK2抑制劑。本發(fā)明還提供了這些化合物的生產(chǎn)方法、包含這些化合物的醫(yī)藥組合物和通過施用本發(fā)明的化合物來治療過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病的方法。因此，在本發(fā)明的第一方面，根據(jù)式(I)提供了本發(fā)明的化合物：其中R1為H或Me；L1為-NR2-；-O-；或-CH2-；Cy為苯基或包含1至4個獨立地選自N、O和S的雜原子的5-9元單環(huán)或稠合雙環(huán)雜芳基；R2為H或C1-4烷基；R3為H、鹵素、任選被一個或多個鹵素取代的C1-4烷基或任選被一個或多個鹵素取代的C1-4烷氧基；R4為H或鹵素；R5為-CN、鹵素或為-L2-R6-L2不存在或為-C(＝O)-、-C(＝O)NR7-、-NR7C(＝O)-、-SO2-、-SO2NR7-或-NR7SO2-；R6為H或任選被一個或多個獨立選擇的R8基團取代的C1-6烷基；R7為H或C1-4烷基；R8為OH、CN、鹵素或C1-4烷氧基，La不存在或為-C(＝O)-、-C(＝O)O-或-C(＝O)NH-；Ra為：-H，-任選被一個或多個獨立選擇的Rb取代的C1-4烷基，-任選被一個或多個獨立選擇的Rc取代的C3-7單環(huán)環(huán)烷基，或-包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基，或-包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的5-6元單環(huán)雜芳基；Rb為-鹵素，-CN，-OH，-C1-4烷氧基，-C3-7環(huán)烷基，-包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基(該雜環(huán)烷基任選被一個或多個獨立選擇的鹵素或氧代基取代)，--SO2-C1-4烷基，或--C(＝O)NRb1Rb2Rc為-鹵素，-CN，-OH，-C1-4烷基，--C(＝O)OH，或--C(＝O)NRc1Rc2；且Rb1、Rb2、Rc1和Rc2各自獨立地選自H和C1-4烷基。在一個具體實施方案中，本發(fā)明的化合物為JAK1和/或TYK2抑制劑。現(xiàn)在已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的化合物當與密切相關(guān)的類似物相比時可呈現(xiàn)出改善的體外活性。而且，在具體的方面，本發(fā)明的化合物當與密切相關(guān)的類似物相比時可呈現(xiàn)出改善的體外穩(wěn)定性。這種改善在體內(nèi)可導(dǎo)致所需要的藥物劑量較低，由此可導(dǎo)致毒性和/或藥物-藥物相互作用降低。在另一方面，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的化合物和藥用載體、賦形劑或稀釋劑的醫(yī)藥組合物。而且，可用于本文公開的醫(yī)藥組合物和治療方法的本發(fā)明的化合物在制備和使用時是醫(yī)藥學上可接受的。在本發(fā)明的該方面，醫(yī)藥組合物可另外包含適用于與本發(fā)明的化合物組合的其它活性成分。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用作藥劑。在特定實施方案中，所述醫(yī)藥組合物另外包含其它活性成分。在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了治療易罹患或罹患來自本文所列出的那些病癥的病癥的哺乳動物的方法，特別地，這些病癥可與異常JAK活性相關(guān)，例如過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病，該方法包括施用有效量的如本文所述的醫(yī)藥組合物或本發(fā)明的化合物。在特定實施方案中，該病癥與異常JAK1和/或TYK2活性相關(guān)。在另一方面，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防選自本文所列那些的病癥的本發(fā)明的化合物，特別是可以與異常JAK活性相關(guān)的這類病癥，例如過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病。在治療方面的另一方法中，本發(fā)明提供了用于治療易罹患或罹患如本文所述的與異常JAK活性因果相關(guān)的病癥的哺乳動物的方法，其包括施用有效治療病癥或預(yù)防病癥的量的本文所述的醫(yī)藥組合物或本發(fā)明的化合物。在一個特定方面，該病癥與異常JAK1和/或TYK2活性因果相關(guān)。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用作藥劑。在另一方面，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防與異常JAK活性因果相關(guān)的病癥的本發(fā)明的化合物。在另外方面，本發(fā)明提供了采用本文隨后公開的代表性合成方案和途徑合成本發(fā)明的化合物的方法。因此，本發(fā)明的主要目標是提供新的化合物，其可改變JAK活性，因此可預(yù)防或治療可與之因果相關(guān)的任意病癥。在一個特定方面，本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)JAK1和/或TYK2活性。本發(fā)明的另一目標是提供可治療或緩解可與JAK活性、特別是JAK1和/或TYK2活性因果相關(guān)的病癥或其癥狀的化合物，所述病癥例如為過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病。本發(fā)明的另一目標是提供可用于治療或預(yù)防多種病癥的醫(yī)藥組合物，所述病癥包括與JAK活性相關(guān)的疾病，例如過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病。在特定實施方案中，該疾病與JAK1和/或TYK2活性相關(guān)。其它目標和優(yōu)點對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言考慮隨后的實施方式將變得顯而易見。發(fā)明詳述定義以下術(shù)語意欲具有下文與此有關(guān)所呈現(xiàn)的含義，并且可用于理解本發(fā)明的描述和意欲范疇。當描述可包括化合物、含有該化合物的醫(yī)藥組合物和使用該化合物和組合物的方法的本發(fā)明時，以下術(shù)語如果存在的話具有以下含義，另有指示除外。還應(yīng)理解：當在本文中描述時，下文定義的任意部分可以被各種取代基取代，并且各定義意欲包括下文在其范圍內(nèi)的這類被取代的部分。除非另有說明，否則術(shù)語“被取代”應(yīng)如下文所述進行定義。還應(yīng)當理解，術(shù)語“基團”和“基”在本文中使用時可視為可互換。冠詞“該”和類似術(shù)語以及實體名詞在本文中可用于指一個/種或多于一個/種(即，至少一個/種)該冠詞的語法對象和實體。例如，“類似物”指一種類似物或多于一種類似物?！巴榛敝妇哂兄付ㄌ荚訑?shù)的直鏈或支鏈脂族烴。特定的烷基具有1至8個碳原子。更特定為具有1至6個碳原子的低級烷基。更特定的基團具有1至4個碳原子。示例性直鏈基團包括甲基、乙基、正丙基和正丁基。支鏈指一個或多個低級烷基如甲基、乙基、丙基或丁基與直鏈烷基鏈連接，示例性支鏈基團包括異丙基、異丁基、叔丁基和異戊基?！巴檠趸敝富鶊F-OR26，其中R26為具有指定碳原子數(shù)的烷基。特定的烷氧基有甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基和1,2-二甲基丁氧基。特定的烷氧基基團有低級烷氧基，即具有1至6個碳原子。更特定的烷氧基基團具有1至4個碳原子?！版溝┗敝妇哂兄付ㄌ荚訑?shù)的單價烯烴(不飽和)烴基。特定的鏈烯基具有2至8個碳原子，更特別是2至6個碳原子，其可以是直鏈或支鏈的，具有至少1個、特別是1至2個烯烴不飽和位點。特定的鏈烯基基團包括乙烯基(-CH＝CH2)、正丙烯基(-CH2CH＝CH2)、異丙烯基(-C(CH3)＝CH2)等?！鞍被敝富鶊F-NH2?！胺蓟敝竿ㄟ^從母體芳環(huán)系統(tǒng)的單個碳原子除去一個氫原子而得到的單價芳族烴基。具體而言，芳基指具有指定環(huán)原子數(shù)的單環(huán)或稠合多環(huán)芳環(huán)結(jié)構(gòu)。具體而言，該術(shù)語包括包含6至10個環(huán)成員的基團。當芳基是單環(huán)系統(tǒng)時，其優(yōu)選含有6個碳原子。特別地，芳基包括苯基和萘基。“環(huán)烷基”指具有指定環(huán)原子數(shù)的單環(huán)、稠合多環(huán)、橋聯(lián)多環(huán)或螺環(huán)非芳族烴基環(huán)結(jié)構(gòu)。環(huán)烷基可具有3至12個碳原子、特別是3至10個、更特別是3至7個碳原子。這類環(huán)烷基包括例如單環(huán)結(jié)構(gòu)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。“氰基”指基團-CN。“鹵代”或“鹵素”指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)和碘(I)。特定的鹵素為氟或氯?！半s”當用于描述化合物或化合物上存在的基團時指化合物或基團中的一個或多個碳原子已經(jīng)被氮、氧或硫雜原子所代替。雜可應(yīng)用于具有1至4個、特別是1至3個雜原子、更典型地是1或2個雜原子、例如單個雜原子的任意上述烴基基團如烷基(例如雜烷基)、環(huán)烷基(例如雜環(huán)烷基)、芳基(例如雜芳基)等?！半s芳基”指包括一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子和指定環(huán)原子數(shù)的單環(huán)或稠合多環(huán)芳環(huán)結(jié)構(gòu)。特別地，芳環(huán)結(jié)構(gòu)可具有5至9個環(huán)成員。雜芳基可以例如是5元或6元單環(huán)或由稠合5元和6元環(huán)或兩個稠合6元環(huán)或(作為另一實例)兩個稠合5元環(huán)形成的稠合雙環(huán)結(jié)構(gòu)。各環(huán)可含有至多四個通常選自氮、硫和氧的雜原子。雜芳環(huán)通常將含有至多4個雜原子、更通常至多3個雜原子、更常見至多2個雜原子、例如單個雜原子。在一個實施方案中，雜芳基環(huán)含有至少一個環(huán)氮原子。雜芳基環(huán)中的氮原子可為堿性的，例如在咪唑或吡啶的情況中，或基本上為非堿性的，例如在吲哚或吡咯氮的情況中。通常，存在于雜芳基基團、包括環(huán)的任意氨基取代基中的堿性氮原子的數(shù)目將少于5個。五元單環(huán)雜芳基的實例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、呋咱基、噁唑基、噁二唑基、噁三唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡唑基、三唑基和四唑基基團。六元單環(huán)雜芳基的實例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基和三嗪基。含有五元環(huán)與另一五元環(huán)稠合的雙環(huán)雜芳基的特定實例包括但不限于咪唑并噻唑基和咪唑并咪唑基。含有六元環(huán)與五元環(huán)稠合的雙環(huán)雜芳基的特定實例包括但不限于苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、異苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、異苯并呋喃基、吲哚基、異吲哚基、吲嗪基、嘌呤基(例如腺嘌呤、鳥嘌呤)、吲唑基、吡唑并嘧啶基、三唑并嘧啶基和吡唑并吡啶基。含有兩個稠合的六元環(huán)的雙環(huán)雜芳基的特定實例包括但不限于喹啉基、異喹啉基、吡啶并吡啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、萘啶基和喋啶基基團。特定的雜芳基基團為來自噻吩基、吡咯基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、吡啶基、喹啉基、咪唑基、噁唑基和吡嗪基的那些。代表性雜芳基的實例包括以下：其中Y各自選自>C(＝O)、NH、O和S?！半s環(huán)烷基”指包括一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子和指定環(huán)原子數(shù)的單環(huán)、稠合多環(huán)、螺環(huán)或橋聯(lián)多環(huán)非芳族完全飽和環(huán)結(jié)構(gòu)。雜環(huán)烷基環(huán)結(jié)構(gòu)可具有4至12個環(huán)成員、特別是4至10個環(huán)成員、更特別是4至7個環(huán)成員。各環(huán)可含有至多四個通常選自氮、硫和氧的雜原子。通常，雜環(huán)烷基環(huán)將含有至多4個雜原子、更通常為至多3個雜原子、更常見為至多2個雜原子、例如單個雜原子。雜環(huán)的實例包括但不限于氮雜環(huán)丁基、氧雜環(huán)丁基、硫雜環(huán)丁基、吡咯烷基(例如1-吡咯烷基、2-吡咯烷基和3-吡咯烷基)、嗎啉基、硫嗎啉基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、咪唑啉基、噁唑啉基、噻唑啉基、哌啶基(例如1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基和4-哌啶基)、吡喃基、二噁烷基、四氫吡喃基(例如4-四氫吡喃基)、2-吡唑啉基、吡唑烷基或哌嗪基。單環(huán)雜環(huán)烷基的特定實例顯示在以下說明性實例中：其中W和Y各自獨立地選自CH2、NH、O和S。稠合雙環(huán)雜環(huán)烷基基團的特定實例顯示于以下說明性實例中：其中W和Y各自獨立地選自CH2、NH、O和S。橋聯(lián)雙環(huán)雜環(huán)烷基的特定實例顯示在以下說明性實例中：其中W和Y各自獨立地選自CH2、NH、O和S，且Z為N或CH。螺環(huán)雜環(huán)烷基的特定實例顯示在以下說明性實例中：其中Y各自選自NH、O和S。“羥基”指基團-OH。“氧代基”指基團＝O?！叭〈敝钙渲幸粋€或多個氫原子各自獨立地被相同或不同取代基替換的基團?！盎腔被颉盎撬帷敝咐?SO3H的基團?！傲蛄u”指基團-SH。如本文所用的術(shù)語“被一個或多個……取代”指一至四個取代基。在一個實施方案中，其指一至三個取代基。在進一步的實施方案中，其指一或兩個取代基。在更進一步的實施方案中，其指一個取代基。“烷硫基”指基團-SR26，其中R26具有指定碳原子數(shù)、特別是C1-C8烷基。特定的烷硫基基團有甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、叔丁硫基、仲丁硫基、正戊硫基、正己硫基和1,2-二甲基丁硫基。特定的烷硫基為低級烷硫基，即具有1至6個碳原子。更特定的烷氧基具有1至4個碳原子。有機合成領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將認識到，穩(wěn)定的、化學上可行的雜環(huán)(無論是芳族還是非芳族)中的雜原子的最大數(shù)目由該環(huán)的尺寸、不飽和度和雜原子價數(shù)來決定。通常，雜環(huán)可具有一至四個雜原子，只要該雜芳環(huán)在化學上可行且穩(wěn)定即可?！翱伤幱谩被颉搬t(yī)藥學上可接受”指美國聯(lián)邦或州政府的管理機構(gòu)或美國以外的其它國家的相應(yīng)機構(gòu)所批準或可批準的，或者在美國藥典或其它公認的藥典中被列出用于動物、更特別是人。“可藥用鹽”指在醫(yī)藥學上可接受的并且具有母體化合物的預(yù)期藥理學活性的本發(fā)明的化合物的鹽。特別地，這類鹽是無毒的，可以是無機或有機酸加成鹽和堿加成鹽。具體而言，這類鹽包括：(1)酸加成鹽，與無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成；或與有機酸形成，所述有機酸例如有乙酸、丙酸、己酸、環(huán)戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲?；?苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙環(huán)[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、粘康酸等；或(2)當存在于母體化合物中的酸性質(zhì)子被金屬離子(例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子)替換所形成的鹽；或與有機堿(例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等配位時所形成的鹽。鹽還包括(僅作為舉例)鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽、四烷基銨鹽等；當化合物含有堿性官能團時，還有無毒有機酸或無機酸的鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、草酸鹽等。術(shù)語“可藥用陽離子”指酸性官能基團的可接受的陽離子抗衡離子。這類陽離子例如有鈉、鉀、鈣、鎂、銨、四烷基銨陽離子等。“可藥用媒介物”指與本發(fā)明的化合物一起施用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或載體?！扒八帯敝妇哂锌闪呀獾幕鶊F并且通過溶劑解或在生理條件下變成在體內(nèi)具有藥學活性的本發(fā)明的化合物的化合物、包括本發(fā)明的化合物的衍生物。這類實例包括但不限于膽堿酯衍生物和其類似物、N-烷基嗎啉酯和其類似物?！叭軇┖衔铩敝概c溶劑締合、通常通過溶劑解反應(yīng)與溶劑締合的化合物形式。這種物理締合包括氫鍵合。常規(guī)溶劑包括水、EtOH、乙酸等。本發(fā)明的化合物可以例如以結(jié)晶形式制備，并且可以是被溶劑化或水化。適宜的溶劑合物包括可藥用溶劑合物如水合物，并且進一步包括化學計量溶劑合物與非化學計量溶劑合物兩者。在一些情況下，溶劑合物將能夠分離，例如當一個或多個溶劑分子并入到結(jié)晶固體的晶格中時?！叭軇┖衔铩焙w溶液相和可分離的溶劑合物。代表性溶劑合物包括水合物、乙醇合物和甲醇合物。“個體”包括人。術(shù)語“人”、“患者”和“個體”在本文中可互換使用?！坝行Я俊敝府斒┯糜趥€體治療疾病時足以實現(xiàn)對該疾病的這類治療的本發(fā)明的化合物的量?！坝行Я俊笨筛鶕?jù)化合物、疾病及其嚴重性和待治療個體的年齡、體重等而變化?！邦A(yù)防”或“阻止”指患得或發(fā)展出疾病或病癥的風險降低(即，在可暴露于引起疾病的介質(zhì)或在疾病發(fā)作前易感染疾病的個體中引起疾病的至少一個臨床癥狀不出現(xiàn))。術(shù)語“防預(yù)”與“預(yù)防”相關(guān)，指旨在預(yù)防疾病而非治療或治愈疾病的措施或操作。防預(yù)措施的非限制性實例可包括施用疫苗；給由于例如固定術(shù)而處于血栓形成風險中的住院患者施用低分子量肝素；和在前往瘧疾為地方流行病或感染瘧疾的風險較高的地理區(qū)域之前施用抗瘧疾劑如氯奎?！爸委煛比我饧膊』虿“Y在一個實施方案中指改善該疾病或病癥(即，阻止疾病或降低其至少一個臨床癥狀的表現(xiàn)、程度或嚴重性)。在另一個實施方案中，“治療”指改善至少一個身體參數(shù)，所述身體參數(shù)可能不可被個體辨別。在另一個實施方案中，“治療”指在身體上(例如穩(wěn)定可辨別的癥狀)、生理學上(例如穩(wěn)定身體參數(shù))或在兩者上調(diào)節(jié)疾病或病癥。在另一個實施方案中，“治療”涉及減緩疾病進展。如本文所用的術(shù)語“過敏性疾病”指以免疫系統(tǒng)的過敏病癥為特征的病癥集合，包括過敏性氣道疾病(例如哮喘、鼻炎)、竇炎、濕疹和蕁麻疹以及食物過敏或昆蟲毒液過敏。如本文所用的術(shù)語“哮喘”如本文所用指以與任意病因(內(nèi)源性、外源性或兩者；過敏性或非過敏性)的氣道收縮相關(guān)的肺氣流變化為特征的任意肺病癥。術(shù)語哮喘可以與一個或多個形容詞一起使用以指示病因。如本文所用的術(shù)語“炎性疾病”指包括如下的病癥集合：類風濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、幼年型特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、過敏性氣道疾病(例如哮喘、鼻炎)、慢性阻塞性肺病(COPD)、炎性腸病(例如節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎)、內(nèi)毒素驅(qū)動的疾病狀態(tài)(例如在心臟搭橋手術(shù)后的并發(fā)癥或?qū)е吕缏孕牧λソ叩穆詢?nèi)毒素狀態(tài))和涉及軟骨如關(guān)節(jié)軟骨的相關(guān)疾病。特別地，該術(shù)語指類風濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、過敏性氣道疾病(例如哮喘)、慢性阻塞性肺病(COPD)和炎性腸病。更特別地，該術(shù)語指類風濕性關(guān)節(jié)炎、慢性阻塞性肺病(COPD)和炎性腸病。如本文所用的術(shù)語“自身免疫疾病”指包括如下的疾病集合：阻塞性氣道疾病，包括諸如COPD、哮喘(例如內(nèi)源性哮喘、外源性哮喘、粉塵性哮喘、小兒哮喘)且特別是慢性或頑固性哮喘(例如遲發(fā)型哮喘和氣道過度反應(yīng))的病癥；支氣管炎，包括支氣管哮喘；全身性紅斑狼瘡(SLE)、皮膚型紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、皮肌炎、舍格倫(Sjogren)綜合征、多發(fā)性硬化癥、銀屑病、干眼病、I型糖尿病和與其相關(guān)的并發(fā)癥、特應(yīng)性濕疹(特應(yīng)性皮炎)、甲狀腺炎(橋本(Hashimoto's)甲狀腺炎和自體免疫性甲狀腺炎)、接觸性皮炎和其它濕疹性皮炎、炎性腸病(例如節(jié)段性回腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎)、動脈粥樣硬化和肌萎縮性側(cè)索硬化癥。特別地，該術(shù)語指COPD、哮喘、全身性紅斑狼瘡、I型糖尿病和炎性腸病。如本文所用的術(shù)語“增殖性疾病”指諸如以下的病癥：癌癥(例如子宮平滑肌肉瘤或前列腺癌)、骨髓增殖性病癥(例如真性紅細胞增多癥、原發(fā)性血小板增多和骨髓纖維化)、白血病(例如急性髓性白血病、急性和慢性淋巴母細胞白血病)、多發(fā)性骨髓瘤、銀屑病、再狹窄、硬皮病或纖維化。特別地，該術(shù)語指癌癥、白血病、多發(fā)性骨髓瘤和銀屑病。如本文所用的術(shù)語“癌癥”指皮膚或身體器官中的細胞的惡性或良性生長，所述器官例如是但不限于乳房、前列腺、肺、腎臟、胰臟、胃或腸。癌癥傾向于浸潤至相鄰組織中并擴散(轉(zhuǎn)移)至遠處器官如骨骼、肝臟、肺或腦。如本文所用的術(shù)語癌癥包括轉(zhuǎn)移性腫瘤細胞類型(例如但不限于黑素瘤、淋巴瘤、白血病、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤和肥大細胞瘤)和組織癌類型(例如但不限于結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、小細胞肺癌和非小細胞肺癌、乳癌、胰癌、膀胱癌、腎癌、胃癌、成膠質(zhì)細胞瘤、原發(fā)性肝癌、卵巢癌、前列腺癌和子宮平滑肌肉瘤)。特別地，術(shù)語“癌癥”指急性淋巴母細胞白血病、急性髓性白血病、腎上腺皮質(zhì)癌、肛門癌、闌尾癌、星形細胞瘤、非典型畸胎樣/桿狀瘤、基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌(骨肉瘤和惡性纖維組織細胞瘤)、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦瘤、腦和脊髓腫瘤、乳癌、支氣管腫瘤、Burkitt淋巴瘤、子宮頸癌、慢性淋巴細胞白血病、慢性骨髓性粒細胞白血病、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、顱咽管瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、胚胎瘤、子宮內(nèi)膜癌、室管膜母細胞瘤、室管膜瘤、食道癌、腫瘤的尤因肉瘤家族、眼癌、視網(wǎng)膜母細胞瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸道類癌瘤、胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)、胃腸道基質(zhì)細胞瘤、胚細胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多毛細胞白血病、頭頸癌、肝細胞(肝)癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼內(nèi)黑素瘤、胰島細胞瘤(內(nèi)分泌胰腺)、卡波西(Kaposi)肉瘤、腎癌、朗氏細胞組織細胞增多病(Langerhanscellhistiocytosis)、喉癌、白血病、急性淋巴母細胞白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴細胞白血病、慢性骨髓性粒細胞白血病、多毛細胞白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、Burkitt淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥、成神經(jīng)管細胞瘤、髓上皮瘤、黑素瘤、間皮瘤、口腔癌、慢性骨髓性粒細胞白血病、髓性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、鼻咽癌、成神經(jīng)細胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小細胞肺癌、口癌、口咽癌、骨肉瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖細胞腫瘤、卵巢低度潛在惡性腫瘤、胰癌、乳頭狀瘤病、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、中等分化的松果體實質(zhì)腫瘤、松果體母細胞瘤和幕上原始神經(jīng)外胚層腫瘤、垂體瘤、漿細胞瘤/多發(fā)性骨髓瘤、胸膜肺胚細胞瘤、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、前列腺癌、直腸癌、腎細胞(腎)癌、視網(wǎng)膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、腫瘤的尤因肉瘤家族、肉瘤、卡波西肉瘤、賽澤里綜合征、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、胃癌、幕上原始神經(jīng)外胚層腫瘤、睪丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲狀腺癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉瘤、陰道癌、外陰癌、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥和維爾姆斯瘤。在另一個特定實施方案中，術(shù)語癌癥指胰癌、肝癌、肝細胞癌(HCC)、乳癌或結(jié)腸癌。如本文所用的術(shù)語“白血病”指血液和血液形成器官的贅生性疾病。該疾病可造成骨髓和免疫系統(tǒng)功能障礙，導(dǎo)致主體極易感染和出血。特別地，術(shù)語白血病指急性髓性白血病(AML)和急性淋巴母細胞白血病(ALL)和慢性淋巴母細胞白血病(CLL)。在另一個特定實施方案中，術(shù)語白血病指T細胞急性淋巴母細胞白血病(T-ALL)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)或彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)。如本文所用的術(shù)語“移植排斥”指細胞、組織或?qū)嶓w器官同種異體移植物或異種移植物(例如胰島、干細胞、骨髓、皮膚、肌肉、角膜組織、神經(jīng)元組織、心臟、肺、心肺聯(lián)合、腎臟、肝臟、腸、胰臟、氣管或食管的那些)的急性或慢性排斥，或者移植物抗宿主疾病。如本文所用的術(shù)語“涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病”包括諸如以下的病癥：骨關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、幼年型類風濕性關(guān)節(jié)炎、痛風性關(guān)節(jié)炎、敗血性或感染性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、反射交感性營養(yǎng)不良、痛性營養(yǎng)不良、提策(Tietze)綜合征或肋軟骨炎、纖維肌痛、骨軟骨炎、神經(jīng)性或神經(jīng)病性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)病、地方性形式的關(guān)節(jié)炎如地方性變形性骨關(guān)節(jié)炎、毛瑟來尼病(Mselenidisease)和漢迪勾度病(Handigodudisease)；由纖維肌痛、全身性紅斑狼瘡、硬皮病和強直性脊柱炎引起的退化。如本文所用的術(shù)語“先天性軟骨畸形”包括諸如以下的病癥：遺傳性軟骨溶解、軟骨發(fā)育不全和假性軟骨發(fā)育不全，特別是但不限于小耳畸形、無耳畸形、干骺端軟骨發(fā)育不全和相關(guān)病癥。如本文所用的術(shù)語“與IL6分泌過多相關(guān)的疾病”包括諸如以下的病癥：卡斯爾曼(Castleman)病、多發(fā)性骨髓瘤、銀屑病、卡波西肉瘤和/或腎小球膜增生性腎小球腎炎。如本文所用的術(shù)語“與干擾素分泌過多相關(guān)的疾病”包括諸如以下的病癥：全身性和皮膚型紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、皮肌炎、舍格倫綜合征、銀屑病、類風濕性關(guān)節(jié)炎?！氨景l(fā)明的化合物”和等同表述表示涵蓋如本文所述的通式化合物，該表述當上下文允許時包括可藥用的鹽和溶劑合物如水合物和可藥用鹽的溶劑合物。類似地，對中間體的稱謂(無論是否要求保護它們自身)在上下文允許時表示包括它們的鹽和溶劑合物。當本文提及范圍、例如但不限于C1-8烷基時，范圍的引用應(yīng)視為表示該范圍的各個成員。本發(fā)明的化合物的其它衍生物的酸和酸衍生物形式均具有活性，但是酸敏感形式在哺乳動物生物體中通常提供了溶解度、組織兼容性或延緩釋放的優(yōu)勢(Bundgaard,1985)。前藥包括本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的酸衍生物，例如通過母體酸與適宜的醇反應(yīng)而制備的酯或通過母體酸化合物與取代或未取代的胺反應(yīng)而制備的酰胺或酸酐或混合酸酐。由本發(fā)明的化合物上伸出的酸性基團衍生的簡單脂族或芳族酯、酰胺和酸酐是特別有用的前藥。在一些情況中，期望制備雙酯型前藥，例如(酰氧基)烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。具體的這類前藥有本發(fā)明的化合物的C1-8烷基、C2-8鏈烯基、任選取代的C6-10芳基和(C6-10芳基)-(C1-4烷基)酯。如本文所用的術(shù)語“同位素變體”指化合物在構(gòu)成該化合物的一個或多個原子處含有非天然比例的同位素。例如，化合物的“同位素變體”可含有一個或多個非放射性同位素，例如氘(2H或D)、碳-13(13C)、氮(15N)等。應(yīng)當理解，在進行這類同位素取代的化合物中，以下原子(若存在)可以改變，從而例如任意氫可以是2H/D，任意碳可以是13C，或任意氮可以是15N，并且這類原子的存在和位置可以在本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)確定。同樣，在例如所得化合物可用于藥物和/或底物組織分布研究的情形中，本發(fā)明可以包括具有放射性同位素的同位素變體的制備。放射性同位素氚(即3H)和碳-14(即14C)由于它們易于摻入和現(xiàn)成的檢測手段而尤其可用于此目的。此外，可以制備被正電子發(fā)射同位素如11C、18F、15O和13N取代的化合物，它們將適用于正電子發(fā)射斷層掃描(PET)研究以檢查底物受體占有率。本文提供的化合物的所有同位素變體不論是否具有放射性，均意欲被涵蓋在本發(fā)明的范疇內(nèi)。還應(yīng)理解，具有相同分子式但在原子鍵合性質(zhì)或順序或原子空間排列方面存在不同的化合物稱為“異構(gòu)體”。在原子空間排列方面存在不同的異構(gòu)體稱為“立體異構(gòu)體”。彼此不為鏡像的立體異構(gòu)體稱為“非對映異構(gòu)體”，彼此為不可重疊的鏡像的異構(gòu)體稱為“對映異構(gòu)體”。當化合物具有不對稱中心時，例如，當其與四個不同基團鍵合時，可能存在一對對映異構(gòu)體。對映異構(gòu)體可以通過不對稱中心的絕對組構(gòu)型表征，通過Cahn和Prelog的R-和S-順序規(guī)則來描述，或通過分子旋轉(zhuǎn)偏振光平面的方式來描述，指定為右旋或左旋(即分別為(+)-或(-)-異構(gòu)體)。手性化合物可以作為單個對映異構(gòu)體或其混合物存在。含有相等比例的對映異構(gòu)體的混合物稱為“外消旋混合物”?！盎プ儺悩?gòu)體”指作為特定化合物結(jié)構(gòu)的可互換形式并且氫原子和電子的移位變化的化合物。因此，兩個結(jié)構(gòu)可經(jīng)由π電子和原子(通常為H)的移動保持平衡。例如，烯醇與酮為互變異構(gòu)體，因為它們可通過用酸或堿處理而快速互變。互變異構(gòu)的另一實例為苯基硝基甲烷的酸形式和硝基形式，它們同樣可通過用酸或堿處理來形成。互變異構(gòu)形式可與所關(guān)注化合物的最佳化學反應(yīng)性和生物活性的達成相關(guān)。本發(fā)明的化合物可具有一個或多個不對稱中心；這類化合物因此可以作為單個(R)-或(S)-立體異構(gòu)體或作為其混合物進行制備。除非另有指示，否則本說明書和權(quán)利要求書中的特定化合物的描述或命名意欲包括單獨對映異構(gòu)體及其混合物(外消旋或其它)。用于確定立體化學和分離立體異構(gòu)體的方法是本領(lǐng)域熟知的。應(yīng)理解，本發(fā)明的化合物可代謝產(chǎn)生生物活性代謝物。發(fā)明本發(fā)明基于以下鑒別：本發(fā)明的化合物為JAK抑制劑，它們可用于治療過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病。在特定實施方案中，本發(fā)明的化合物為JAK1和/或TYK2抑制劑。本發(fā)明還提供了本發(fā)明的化合物的生產(chǎn)方法、包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物和通過施用本發(fā)明的化合物來治療過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病的方法。在特定實施方案中，本發(fā)明的化合物為JAK1和/或TYK2抑制劑。因此，在本發(fā)明的第一方面，根據(jù)式(I)提供了本發(fā)明的化合物：其中R1為H或Me；L1為-NR2-；-O-或-CH2-；Cy為苯基或包含1至4個獨立地選自N、O和S的雜原子的5-9元單環(huán)或稠合雙環(huán)雜芳基；R2為H或C1-4烷基；R3為H、鹵素、任選被一個或多個獨立選擇的鹵素取代的C1-4烷基或任選被一個或多個獨立選擇的鹵素取代的C1-4烷氧基；R4為H或鹵素；R5為-CN、鹵素或為-L2-R6；-L2不存在或為-C(＝O)-、-C(＝O)NR7-、-NR7C(＝O)-、-SO2-、-SO2NR7-或-NR7SO2-；R6為H或任選被一個或多個獨立選擇的R8基團取代的C1-6烷基；R7為H或C1-4烷基；R8為OH、CN、鹵素或C1-4烷氧基；La不存在或為-C(＝O)-、-C(＝O)O-或-C(＝O)NH-；Ra為：-H，-任選被一個或多個獨立選擇的Rb取代的C1-4烷基，-任選被一個或多個獨立選擇的Rc取代的C3-7單環(huán)環(huán)烷基，-包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基，或-包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的5-6元單環(huán)雜芳基；Rb為-鹵素，-CN，-OH，-C1-4烷氧基，-C3-7環(huán)烷基，-包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基(該雜環(huán)烷基任選被一個或多個獨立選擇的鹵素或氧代基取代)，--SO2-C1-4烷基，或--C(＝O)NRb1Rb2；Rc為-鹵素，-CN，-OH，-C1-4烷基，--C(＝O)OH，或--C(＝O)NRc1Rc2；和Rb1、Rb2、Rc1和Rc2各自獨立地選自H和C1-4烷基。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中R1為Me。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中Cy為苯基。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中Cy為包含1至4個獨立地選自N、O和S的雜原子的5-9元單環(huán)或稠合雙環(huán)雜芳基。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中Cy為包含1或2個獨立地選自N、O和S的雜原子的5-9元單環(huán)或稠合雙環(huán)雜芳基。在特定實施方案中，Cy為吡唑基、吡咯基、咪唑基、三唑基、噻吩基、噻唑基、呋喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并噁唑基、吲哚基或吲唑基。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中Cy為包含1至4個獨立地選自N、O和S的雜原子的5-6元單環(huán)雜芳基。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中Cy為包含1或2個獨立地選自N、O和S的雜原子的5-6元單環(huán)雜芳基。在特定實施方案中，Cy為吡唑基、吡咯基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、三唑基、四唑基、噻唑基、噁唑基、噻二唑基或噁二唑基。在另一個特定實施方案中，Cy為吡啶基、吡嗪基、嘧啶基或pyridazolyl。在更特定實施方案中，Cy為吡啶基。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式IIa、IIb或IIc：其中L1、R3、R4、La、Ra和R5如以上實施方案任一者中所述。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式IIIa、IIIb或IIIc：其中L1、R3、R4、La、Ra和R5如以上實施方案任一者中所述。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-IIIc中的任一者，其中L1為-CH2-。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-IIIc中的任一者，其中L1為-O-。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-IIIc中的任一者，其中L1為-NR2-且R2如以上實施方案任一者中所述。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-IIIc中的任一者，其中L1為-NR2-，其中R2為H。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-IIIc中的任一者，其中L1為-NR2-，其中R2為C1-4烷基。在特定實施方案中，R2為Me、Et或iPr。在更特定實施方案中，R2為Me。在另一個更特定實施方案中，R2為Et。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式IVa、IVb、IVc、IVd、IVe或IVf：其中R3、R4、R5、La和Ra如以上實施方案任一者中所述。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-IVf中的任一者，其中La不存在。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-IVf中的任一者，其中La為-C(＝O)-、-C(＝O)O-或-C(＝O)NH-。在特定實施方案中，La為-C(＝O)-。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式Va、Vb、Vc、Vd、Ve或Vf：其中R3、R4、R5和Ra如以上實施方案任一者中所述。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R4為H或鹵素。在特定實施方案中，R4為F或Cl。在另一個特定實施方案中，R4為H。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R3為H。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R3為鹵素。在特定實施方案中，R3為F或Cl。在更特定實施方案中，R3為Cl。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R3為C1-4烷基。在特定實施方案中，R3為Me、Et或n-Pr。在更特定實施方案中，R3為Me或Et。在最特定實施方案中，R3為Et。在另一個最特定實施方案中，R3為Me。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R3為被一個或多個獨立選擇的鹵素取代的C1-4烷基。在特定實施方案中，R3為-CHF2、-CF3、-CH2-CHF2或-CH2-CF3。在更特定實施方案中，R3為-CF3或-CH2-CF3。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R3為C1-4烷氧基。在特定實施方案中，R3為-OMe、-OEt或-On-Pr。在更特定實施方案中，R3為-OMe或-OEt。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R3為被一個或多個獨立選擇的鹵素取代的C1-4烷氧基。在特定實施方案中，R3為-OCHF2、-OCF3或-OCH2-CHF2。在更特定實施方案中，R3為-OCHF2。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R5為CN。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R5為鹵素。在特定實施方案中，R5為F或Cl。在更特定實施方案中，R5為F。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R5為-L2-R6，R6如上所述，L2為-C(＝O)NR7-、-NR7C(＝O)-、-SO2NR7-或-NR7SO2-，且R7如前述實施方案任一者中所定義。在特定實施方案中，R7為H。在另一個特定實施方案中，R7為C1-4烷基。在更特定實施方案中，R7為Me或Et。在最特定實施方案中，R7為Me。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R5為-L2-R6，L2如上所述，且R6為H。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R5為-L2-R6，L2如上所述，且R6為C1-6烷基。在特定實施方案中，R6為Me、Et、iPr或tBu。在更特定實施方案中，R6為Me或Et。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R5為-L2-R6，L2如上所述，且R6為被一個或多個獨立選擇的R8基團取代的C1-6烷基。在另一個實施方案中，R6為Me、Et、iPr或tBu，其各自被一個或多個獨立選擇的R8基團取代。在特定實施方案中，R6為被一個、兩個或三個獨立選擇的R8基團取代的C1-6烷基。在另一個特定實施方案中，R6為Me、Et、iPr或tBu，其各自被一個、兩個或三個獨立選擇的R8基團取代。在更特定實施方案中，R6為被一個R8基團取代的C1-6烷基。在另一個特定實施方案中，R6為Me、Et、iPr或tBu，其各自被一個R8基團取代。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R8為OH、CN、鹵素或C1-4烷氧基。在特定實施方案中，R8為OH、CN、F、Cl、-OMe或-OEt。在特定實施方案中，R5為-L2-R6，L2為-C(＝O)-或-SO2-，且R6為C1-6烷基。在更特定實施方案中，R5為-L2-R6，L2為-C(＝O)-或-SO2，且R6為Me、Et、iPr或tBu。在最特定實施方案中，R5為-C(＝O)Me、-C(＝O)Et、-SO2Me或-SO2Et。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中R5為-L2-R6，L2為-C(＝O)NR7-、-NR7C(＝O)-、-SO2NR7-或-NR7SO2-，R6和R7如前述實施方案任一者中所定義。在特定實施方案中，R7為H、Me或Et，且R6如前述實施方案任一者中所定義。在另一個特定實施方案中，R7如前述實施方案任一者中所定義，且R6為H。在另一個特定實施方案中，R7如前述實施方案任一者中所定義，且R6為任選被一個或多個獨立選擇的OH、CN、鹵素或C1-4烷氧基取代的C1-6烷基。在更特定實施方案中，R7為H、Me或Et，且R6為H。在另一個更特定實施方案中，R7為H、Me或Et，且R6為Me、Et、iPr或tBu，其各自任選被一個或多個獨立選擇的OH、CN、鹵素或C1-4烷氧基取代。在另一個更特定實施方案中，R7為H、Me或Et，且R6為Me、Et、iPr或tBu，其各自任選被一個或多個獨立選擇的OH、CN、F、Cl、OMe或OEt取代。在最特定實施方案中，R5為-C(＝O)NH2或-SO2NH2。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Ra為H。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Ra為C1-4烷基。在特定實施方案中，Ra為Me、Et、iPr或tBu。在更特定實施方案中，Ra為Me或Et。在最特定實施方案中，Ra為Me。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Ra為被一個或多個獨立選擇的Rb取代的C1-4烷基。在另一個實施方案中，Ra為Me、Et、iPr或tBu，其各自被一個或多個獨立選擇的Rb取代。在特定實施方案中，Ra為被一個、兩個或三個獨立選擇的Rb取代的C1-4烷基。在另一個特定實施方案中，Ra為Me、Et、iPr或tBu，其各自被一個、兩個或三個獨立選擇的Rb取代。在更特定實施方案中，Ra為被一個Rb取代的C1-4烷基。在另一個更特定實施方案中，Ra為Me、Et、iPr或tBu，其各自被一個Rb取代。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rb為鹵素、CN或OH。在特定實施方案中，Rb為F、Cl、CN或OH。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rb為C1-4烷氧基。在特定實施方案中，Rb為OMe、OEt或OiPr。在更特定實施方案中，Rb為OMe。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rb為C3-7環(huán)烷基。在特定實施方案中，Rb為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。在更特定實施方案中，Rb為環(huán)丙基。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rb為包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基。在特定實施方案中，Rb為氧雜環(huán)丁基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rb為被一個或多個獨立選擇的鹵素或氧代基取代的包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基。在特定實施方案中，Rb為氧雜環(huán)丁基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基，其各自被一個或多個獨立選擇的鹵素或氧代基取代。在另一個特定實施方案中，Rb為被一個或多個獨立選擇的F、Cl或氧代基取代的包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基。在更特定實施方案中，Rb為氧雜環(huán)丁基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基，其各自被一個或多個獨立選擇的F、Cl或氧代基取代。在最特定實施方案中，Rb為被一個、兩個或三個獨立選擇的F、Cl或氧代基取代的包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基。在另一個最特定實施方案中，Rb為氧雜環(huán)丁基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基，其各自被一個、兩個或三個獨立選擇的F、Cl或氧代基取代。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rb為-SO2-C1-4烷基。在特定實施方案中，Rb為-SO2CH3或-SO2CH2CH3。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rb為-C(＝O)NRb1Rb2，其中Rb1或Rb2各自獨立地選自H和C1-4烷基。在特定實施方案中，Rb1或Rb2各自獨立地選自H、-CH3和-CH2CH3。在更特定實施方案中，Rb為-C(＝O)NH2、-C(＝O)NMeH或-C(＝O)NMe2。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Ra為C3-7單環(huán)環(huán)烷基。在特定實施方案中，Ra為環(huán)丙基、環(huán)丁基或環(huán)戊基。在更特定實施方案中，Ra為環(huán)丙基。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Ra為被一個或多個獨立選擇的Rc基團取代的C3-7單環(huán)環(huán)烷基。在另一個實施方案中，Ra為環(huán)丙基、環(huán)丁基或環(huán)戊基，其各自被一個或多個獨立選擇的Rc基團取代。在特定實施方案中，Ra為被一個、兩個或三個獨立選擇的Rc基團取代的C3-7單環(huán)環(huán)烷基。在另一個特定實施方案中，Ra為環(huán)丙基、環(huán)丁基或環(huán)戊基，其各自被一個、兩個或三個獨立選擇的Rc基團取代。在更特定實施方案中，Ra為被一個Rc基團取代的C3-7單環(huán)環(huán)烷基。在另一個特定實施方案中，Ra為環(huán)丙基、環(huán)丁基或環(huán)戊基，其各自被一個Rc基團取代。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rc為鹵素、CN或OH。在特定實施方案中，Rc為F、Cl、CN或OH。在更特定實施方案中，Rc為F。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rc為C1-4烷基。在特定實施方案中，Rc為-Me、-Et或-iPr。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rc為-C(＝O)OH。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Rc為-C(＝O)NRc1Rc2，其中Rc1或Rc2各自獨立地選自H和C1-4烷基。在特定實施方案中，Rc1或Rc2各自獨立地選自H、-CH3和-CH2CH3。在更特定實施方案中，Rc為-C(＝O)NH2、-C(＝O)NMeH或-C(＝O)NMe2。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Ra為：在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Ra為：在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Ra為包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基。在特定實施方案中，Ra為氧雜環(huán)丁基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I-Vf中的任一者，其中Ra為包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的5-6元單環(huán)雜芳基。在特定實施方案中，Ra為呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、噁二唑基、四唑、吡啶基、吡嗪基或嘧啶基。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中所述化合物選自：N-(6-((6-氰基-4-乙基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)環(huán)丙烷甲酰胺，N-(6-(4-氰基-2-乙基-6-氟苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)環(huán)丙烷甲酰胺，N-(6-((4-氰基-2-乙基-6-氟苯基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)環(huán)丙烷甲酰胺，6-((6-氰基-4-乙基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基氨甲酸甲酯，6-((4-氰基-2-乙基-6-氟苯基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基氨甲酸甲酯，(1R,2R)-N-[6-[(6-氰基-4-乙基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，N-(6-((4-氰基-2-乙基-6-氟苯基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2-氟環(huán)丙烷甲酰胺(1S,2S)/(1R,2R)外消旋混合物，(1R,2R)-N-(6-((6-氰基-4-乙基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2-氟環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-N-(6-((6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2-氟環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-N-[6-(4-氰基-2-乙基-苯氧基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-N-[6-(2-氯-4-氰基-6-氟-N-甲基-苯胺基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-2-氟-N-[6-[(6-氟-4-甲基-3-吡啶基)-甲基-氨基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-N-[6-[(2,6-二氟-3-吡啶基)-甲基-氨基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-N-[6-[(6-氰基-2-氟-3-吡啶基)-甲基-氨基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-N-[6-(4-氰基-2-氟-N-甲基-苯胺基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-2-氟-N-[6-(2-氟-N,6-二甲基-4-甲基磺酰基-苯胺基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-2-氟-N-[6-(2-氟-N-甲基-4-甲基磺酰基-苯胺基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]環(huán)丙烷甲酰胺，N-[6-[(4-乙基-6-甲基磺酰基-3-吡啶基)-甲基-氨基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]環(huán)丙烷甲酰胺，N-[6-(2-氟-N,6-二甲基-4-甲基磺酰基-苯胺基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-N-[6-[(6-氰基-2-氟-4-甲基-3-吡啶基)-甲基-氨基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-N-[6-[(2-氰基-3-氟-5-甲基-4-吡啶基)-甲基-氨基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]環(huán)丙烷甲酰胺，5-((4-(環(huán)丙烷甲酰氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)(甲基)氨基)-4-乙基吡啶酰胺，4-乙基-5-((4-((1R,2R)-2-氟環(huán)丙烷甲酰氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)(甲基)氨基)吡啶酰胺，(1R,2R)-N-[6-(N,2-二甲基-4-甲基磺?；?苯胺基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，(1R,2R)-N-[6-(4-乙磺?；?N,2-二甲基-苯胺基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺，5-(7-氨基-3-甲基-苯并咪唑-5-基)氧基-4-甲基-吡啶-2-甲腈，N-[6-[(4-乙基-6-甲基磺酰基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]環(huán)丙烷甲酰胺，N-[6-[4-(氰基甲基)苯胺基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]環(huán)丙烷甲酰胺，N-[6-(2,3-二氫-1,4-苯并二噁烯-6-基氨基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]環(huán)丙烷甲酰胺，和5-[7-[[(1R,2R)-2-氟環(huán)丙烷甲?；鵠氨基]-3-甲基-苯并咪唑-5-基]氧基-4-甲基-吡啶-2-甲酰胺。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中所述化合物選自：1-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-3-異丙基-脲，4-甲基-5-[3-甲基-7-(甲基氨基)苯并咪唑-5-基]氧基-吡啶-2-甲腈，5-[7-(二甲基氨基)-3-甲基-苯并咪唑-5-基]氧基-4-甲基-吡啶-2-甲腈，N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-3-羥基-氮雜環(huán)丁烷-1-甲酰胺，N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]嗎啉-4-甲酰胺，和1-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-3-異丙基-脲。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中所述化合物為N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺。在更特定實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中所述化合物為(1R,2R)-N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中所述化合物不為N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺。在更特定實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中所述化合物不為(1R,2R)-N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中所述化合物為N-(6-((6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2-氟環(huán)丙烷甲酰胺。在更特定實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中所述化合物為(1R,2R)-N-(6-((6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2-氟環(huán)丙烷甲酰胺。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中所述化合物不為N-(6-((6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2-氟環(huán)丙烷甲酰胺。在更特定實施方案中，本發(fā)明的化合物符合式I，其中所述化合物不為(1R,2R)-N-(6-((6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2-氟環(huán)丙烷甲酰胺。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物不為同位素變體。在一個方面，根據(jù)本文所述的實施方案任一者的本發(fā)明的化合物以游離堿形式存在。在一個方面，根據(jù)本文所述的實施方案任一者的本發(fā)明的化合物為可藥用鹽。在一個方面，根據(jù)本文所述的實施方案任一者的本發(fā)明的化合物為化合物的溶劑合物。在一個方面，根據(jù)本文所述的實施方案任一者的本發(fā)明的化合物為化合物的可藥用鹽的溶劑合物。雖然在上文已經(jīng)單獨地大體列出了各實施方案的特定基團，但是本發(fā)明的化合物包括其中上述式以及本文給出的其它式中的多個或每個實施方案選自針對每個變量分別指定的特定成員或基團中的一者或多者的化合物。因此，本發(fā)明在其范圍內(nèi)意欲包括這類實施方案的所有組合。雖然在上文已經(jīng)單獨地大體列出了各實施方案的特定基團，但是本發(fā)明的化合物可以是其中一個或多個變量(例如R基團)選自上文列出的任意式的一個或多個實施方案的化合物。因此，本發(fā)明在其范圍內(nèi)意欲包括來自任一個所公開實施方案的變量的所有組合?；蛘撸景l(fā)明還涵蓋了從集合或?qū)嵤┓桨钢信懦粋€或多個指定變量或其組合。在某些方面，本發(fā)明提供了上述式的化合物的前藥和衍生物。前藥為如下的本發(fā)明的化合物的衍生物：其具有可代謝裂解的基團，并且通過溶劑解或在生理條件下變成在體內(nèi)具有藥學活性的本發(fā)明的化合物。這類實例包括但不限于膽堿酯衍生物及其類似物、N-烷基嗎啉酯及其類似物。本發(fā)明的化合物的其它衍生物的酸和酸衍生物形式均具有活性，但是酸敏感形式在哺乳動物生物體中通常提供了溶解度、組織兼容性或延緩釋放的優(yōu)勢(Bundgard,H,1985)。前藥包括本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的酸衍生物，例如通過母體酸與適宜的醇反應(yīng)而制備的酯或通過母體酸化合物與取代或未取代的胺反應(yīng)而制備的酰胺或酸酐或混合酸酐。由本發(fā)明的化合物上伸出的酸性基團衍生的簡單脂族或芳族酯、酰胺和酸酐是優(yōu)選的前藥。在一些情況中，期望制備雙酯型前藥，例如(酰氧基)烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。特別有用的有本發(fā)明的化合物的C1-8烷基、C2-8鏈烯基、芳基、取代的C7-C12芳基和C7-C12芳基烷基酯。條款1)式I化合物：其中R1為H或Me；L1為-NR2-；-O-；或-CH2-；Cy為苯基或包含1至4個獨立地選自N、O和S的雜原子的5-9元單環(huán)或稠合雙環(huán)雜芳基；R2為H或C1-4烷基；R3為H、鹵素、任選被一個或多個獨立選擇的鹵素取代的C1-4烷基或任選被一個或多個獨立選擇的鹵素取代的C1-4烷氧基；R4為H或鹵素；R5為-CN、鹵素或為-L2-R6；-L2不存在或為-C(＝O)-、-C(＝O)NR7-、-NR7C(＝O)-、-SO2-、-SO2NR7-或-NR7SO2-；R6為H或任選被一個或多個獨立選擇的R8基團取代的C1-6烷基；R7為H或C1-4烷基；R8為OH、CN、鹵素或C1-4烷氧基；La不存在或為-C(＝O)-、-C(＝O)O-或-C(＝O)NH-；Ra為：-H，-任選被一個或多個獨立選擇的Rb取代的C1-4烷基，-任選被一個或多個獨立選擇的Rc取代的C3-7單環(huán)環(huán)烷基，-包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基，或-包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的5-6元單環(huán)雜芳基；Rb為-鹵素，-CN，-OH，-C1-4烷氧基，-C3-7環(huán)烷基，-包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基(該雜環(huán)烷基任選被一個或多個獨立選擇的鹵素或氧代基取代)，--SO2-C1-4烷基，或--C(＝O)NRb1Rb2；Rc為-鹵素，-CN，-OH，-C1-4烷基，--C(＝O)OH，或--C(＝O)NRc1Rc2；和Rb1、Rb2、Rc1和Rc2各自獨立地選自H和C1-4烷基；或可藥用鹽或溶劑合物或可藥用鹽的溶劑合物。2)如條款1的化合物或可藥用鹽，其中R1為Me。3)如條款1-2中任一項的化合物或可藥用鹽，其中Cy為苯基。4)如條款1-2中任一項的化合物或其可藥用鹽，其中Cy為包含1至4個獨立地選自N、O和S的雜原子的5-9元單環(huán)或稠合雙環(huán)雜芳基。5)如條款1-2中任一項的化合物或其可藥用鹽，其中5-6元單環(huán)雜芳基包含1至4個獨立地選自N、O和S的雜原子。6)如條款1-2中任一項的化合物或可藥用鹽，其中Cy為吡啶基。7)如條款1中任一項的化合物或可藥用鹽，其中所述化合物符合式IIa、IIb或IIc：其中L1、R3、R4、La、Ra和R5如條款1中所述。8)如條款1中任一項的化合物或可藥用鹽，其中所述化合物符合式IIIa、IIIb或IIIc：其中L1、R3、R4、La、Ra和R5如條款1中所述。9)如條款1-8中任一項的化合物或可藥用鹽，其中L1為-CH2-。10)如條款1-8中任一項的化合物或可藥用鹽，其中L1為O。11)如條款1-8中任一項的化合物或可藥用鹽，其中L1為-NR2-。12)如條款11的化合物或可藥用鹽，其中R2為H。13)如條款11的化合物或可藥用鹽，其中R2為C1-4烷基。14)如條款11的化合物或可藥用鹽，其中R2為Me。15)如條款1中任一項的化合物或可藥用鹽，其中所述化合物符合式IVa、IVb、IVc、IVd、IVe或IVf：其中R3、R4、R5、La和Ra如條款1中所述。16)如條款1-15中任一項的化合物或可藥用鹽，其中La不存在。17)如條款1-15中任一項的化合物或可藥用鹽，其中La為-C(＝O)-。18)如條款1中任一項的化合物或可藥用鹽，其中所述化合物符合式Va、Vb、Vc、Vd、Ve或Vf：其中R3、R4、R5、La和Ra如條款1中所述。19)如條款1-18中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R4為H。20)如條款1-18中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R4為F或Cl。21)如條款1-18中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R3為H。22)如條款1-18中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R3為C1-4烷基。23)如條款22的化合物或可藥用鹽，其中R3為Me或Et。24)如條款1-23中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R5為CN。25)如條款1-23中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R5為鹵素。26)如條款25的化合物或可藥用鹽，其中R5為F或Cl。27)如條款1-23中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R5為-L2-R6，R6如條款1中所述，且L2為-C(＝O)NR7-、-NR7C(＝O)-、-SO2NR7-或-NR7SO2-。28)如條款27的化合物或可藥用鹽，其中R7為H。29)如條款1-23中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R5為-L2-R6，L2如條款1中所述，且R6為H。30)如條款1-26中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R5為-L2-R6，L2如條款1中所述，且R6為C1-6烷基。31)如條款30的化合物或可藥用鹽，其中R6為Me。32)如條款1-23中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R5為-L2-R6，L2如條款1中所述，且R6為被一個或多個獨立選擇的R8基團取代的C1-6烷基。33)如條款32的化合物或可藥用鹽，其中R6為Me、Et、iPr或tBu，其各自被一個或多個獨立選擇的R8基團取代。34)如條款33的化合物或可藥用鹽，其中R8為OH、CN、F、Cl、-OMe或-OEt。35)如條款1-23中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R5為-L2-R6，其中L2為-C(＝O)-或-SO2-，且R6為C1-6烷基。36)如條款35的化合物或可藥用鹽，其中R5為-C(＝O)Me、-C(＝O)Et、-SO2Me或-SO2Et。37)如條款1-23中任一項的化合物或可藥用鹽，其中R5為-L2-R6，其中L2為-C(＝O)NR7-、-NR7C(＝O)-、-SO2NR7-或-NR7SO2-，其中R7為H、Me或Et，且R6為Me、Et、iPr或tBu，其各自任選被一個或多個獨立選擇的OH、CN、鹵素或C1-4烷氧基取代。38)如條款37的化合物或可藥用鹽，其中R5為-C(＝O)NH2或-SO2NH2。39)如條款1-38中任一項的化合物或可藥用鹽，其中Ra為C1-4烷基。40)如條款39的化合物或可藥用鹽，其中Ra為Me或Et。41)如條款1-38中任一項的化合物或可藥用鹽，其中Ra為被一個或多個獨立選擇的Rb取代的C1-4烷基。42)如條款41的化合物或可藥用鹽，其中Ra為Me、Et、iPr或tBu。43)如條款41或42的化合物或可藥用鹽，其中Rb為F、Cl、CN或OH。44)如條款41或42的化合物或可藥用鹽，其中Rb為OMe、OEt或OiPr。45)如條款41或42的化合物或可藥用鹽，其中Rb為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。46)如條款41或42的化合物或可藥用鹽，其中Rb為氧雜環(huán)丁基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基。47)如條款41或42的化合物或可藥用鹽，其中Rb為氧雜環(huán)丁基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基，其各自被一個或多個獨立選擇的鹵素或氧代基取代。48)如條款41或42的化合物或可藥用鹽，其中Rb為-SO2CH3或-SO2CH2CH3。49)如條款41或42的化合物或可藥用鹽，其中Rb為-C(＝O)NH2、-C(＝O)NMeH或-C(＝O)NMe2。50)如條款1-38中任一項的化合物或可藥用鹽，其中Ra為C3-7單環(huán)環(huán)烷基。51)如條款1-38中任一項的化合物或可藥用鹽，其中Ra為被一個或多個獨立選擇的Rc基團取代的C3-7單環(huán)環(huán)烷基。52)如條款50或51的化合物或可藥用鹽，其中Ra為環(huán)丙基、環(huán)丁基或環(huán)戊基。53)如條款51的化合物或可藥用鹽，其中Rc為F、Cl、CN或OH。54)如條款51的化合物或可藥用鹽，其中Rc為-Me、-Et或-iPr。55)如條款51的化合物或可藥用鹽，其中Rc為-C(＝O)OH。56)如條款51的化合物或可藥用鹽，其中Rc為-C(＝O)NH2、-C(＝O)NMeH或-C(＝O)NMe2。57)如條款1-38中任一項的化合物或可藥用鹽，其中Ra為：58)如條款1-38中任一項的化合物或可藥用鹽，其中Ra為：59)如條款1-38中任一項的化合物或可藥用鹽，其中Ra為包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的4-7元單環(huán)雜環(huán)烷基。60)如條款59的化合物或可藥用鹽，其中Ra為氧雜環(huán)丁基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、氮雜環(huán)丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或硫嗎啉基。61)如條款1-38中任一項的化合物或可藥用鹽，其中Ra為包含一個或多個獨立地選自O(shè)、N和S的雜原子的5-6元單環(huán)雜芳基。62)如條款61的化合物或可藥用鹽，其中Ra為呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、噁二唑基、四唑、吡啶基、吡嗪基或嘧啶基。63)如條款1的化合物或其可藥用鹽，其中所述化合物選自表I。64)如條款1的化合物或其可藥用鹽，其中所述化合物為(1R,2R)-N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺。65)如條款1的化合物或其可藥用鹽，其中所述化合物不為(1R,2R)-N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺。66)如條款1的化合物或其可藥用鹽，其中所述化合物為(1R,2R)-N-(6-((6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2-氟環(huán)丙烷甲酰胺。67)如條款1的化合物或其可藥用鹽，其中所述化合物不為(1R,2R)-N-(6-((6-氰基-4-甲基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-2-氟環(huán)丙烷甲酰胺。68)醫(yī)藥組合物，包含可藥用載體和藥物有效量的如條款1-67中任一項的化合物。69)如條款68的醫(yī)藥組合物，包含另外的治療劑。70)如條款1-67中任一項的化合物或其可藥用鹽或如條款68-69中任一項的醫(yī)藥組合物，用于藥劑中。71)如條款1-67中任一項的化合物或如條款68-69中任一項的醫(yī)藥組合物，其用于治療或預(yù)防過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病。72)如條款1-67中任一項的化合物或如條款68-69中任一項的醫(yī)藥組合物，其用于治療或預(yù)防增殖性疾病。73)如條款72的化合物，其中所述增殖性疾病選自骨髓纖維化、T細胞急性淋巴母細胞白血病(T-ALL)、多發(fā)性骨髓瘤、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、胰癌、肝癌、肝細胞癌(HCC)、肺癌、乳癌和結(jié)腸癌。74)過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病的治療或預(yù)防方法，該方法包括施用足以實現(xiàn)所述治療或預(yù)防的量的如條款1-67中任一項的化合物或如條款68-69中任一項的醫(yī)藥組合物。75)增殖性疾病的治療或預(yù)防方法，該方法包括施用足以實現(xiàn)所述治療或預(yù)防的量的如條款1-67中任一項的化合物或如條款68-69中任一項的醫(yī)藥組合物。76)如條款76的治療方法，其中所述增殖性疾病選自骨髓纖維化、T細胞急性淋巴母細胞白血病(T-ALL)、多發(fā)性骨髓瘤、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、胰癌、肝癌、肝細胞癌(HCC)、肺癌、乳癌和結(jié)腸癌。77)如條款75-77中任一項的方法，其中如條款1-67中任一項的化合物或如條款68-69中任一項的醫(yī)藥組合物是與其它治療劑組合施用的。78)如條款69的醫(yī)藥組合物或如條款78的方法，其中所述其它治療劑是用于治療或預(yù)防過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病的物質(zhì)。79)如條款69的醫(yī)藥組合物或如條款78的方法，其中所述其它治療劑是用于治療或預(yù)防骨髓纖維化、T細胞急性淋巴母細胞白血病(T-ALL)、多發(fā)性骨髓瘤、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、胰癌、肝癌、肝細胞癌(HCC)、肺癌、乳癌和結(jié)腸癌的物質(zhì)。醫(yī)藥組合物當用作藥物時，本發(fā)明的化合物通常以醫(yī)藥組合物的形式施用。這類組合物可以以醫(yī)藥領(lǐng)域熟知的方式進行制備，其包含至少一種式I的本發(fā)明的活性化合物。通常，本發(fā)明的化合物以藥物有效量進行施用。本發(fā)明的化合物的實際施用量通常將由醫(yī)師根據(jù)相關(guān)情況、包括待治療病癥、所選的施用途徑、所施用的實際的本發(fā)明的化合物、個體患者的年齡、體重和響應(yīng)以及患者癥狀的嚴重性等來確定。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可通過多種途徑來施用，包括口服、經(jīng)直腸、經(jīng)皮、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)和鼻內(nèi)。根據(jù)預(yù)期的遞送途徑，本發(fā)明的化合物優(yōu)選配制成可注射或口服組合物，或配制成均用于經(jīng)皮施用的藥膏、乳液或貼劑?？诜┯玫慕M合物可采取散裝液體溶液或混懸液或散裝散劑的形式。然而，更通常地，所述組合物以單位劑量形式呈現(xiàn)以便于精確給藥。術(shù)語“單位劑量形式”指適宜作為用于人個體和其它哺乳動物的單位劑量的物理離散單位，各單位含有經(jīng)計算產(chǎn)生預(yù)期治療作用的預(yù)定量的活性物質(zhì)以及適宜的藥用賦形劑、媒介物或載體。典型單位劑量形式包括液體組合物的預(yù)填充、預(yù)測量安瓿劑或注射器或者在固體組合物的情況中的丸劑、片劑、膠囊劑等。在這類組合物中，式I的本發(fā)明的化合物通常是較少的組分(約0.1至約50重量％或優(yōu)選約1至約40重量％)，其余為各種媒介物或載體和有助于形成預(yù)期給藥形式的加工助劑。適于口服施用的液體形式可以包括適宜的水性或非水性媒介物以及緩沖劑、助懸劑和分散劑、著色劑、矯味劑等。固體形式可以包括例如以下成分中的任一者或具有類似性質(zhì)的本發(fā)明的化合物：粘合劑，例如微晶纖維素、西黃蓍膠或明膠；賦形劑，例如淀粉或乳糖；崩解劑，例如海藻酸、Primogel)或玉米淀粉；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；助流劑，例如膠體二氧化硅；甜味劑，例如蔗糖或糖精；或矯味劑，例如薄荷或柑橘矯味劑。可注射組合物通?；诳勺⑸錈o菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖生理鹽水或本領(lǐng)域已知的其它可注射載體。如前所述，這類組合物中的式I的本發(fā)明的活性化合物通常為較少的組分，通常為約0.05至10重量％，其余為可注射載體等。經(jīng)皮組合物通常配制成含有活性成分的局部用軟膏或乳膏，所述活性成分的量通常為約0.01至約20重量％、優(yōu)選約0.1至約20重量％、優(yōu)選約0.1至約10重量％、更優(yōu)選約0.5至約15重量％。當配制成軟膏時，通常將活性成分與石蠟或水可混溶性軟膏基質(zhì)合并。或者，可以將活性成分與例如水包油型乳膏基質(zhì)一起配制成乳膏。這類經(jīng)皮制劑是本領(lǐng)域熟知的，通常包括增強活性成分或制劑的穩(wěn)定性的經(jīng)皮穿透的另外成分。所有這類已知的經(jīng)皮制劑和成分包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的化合物還可以通過經(jīng)皮裝置施用。因此，經(jīng)皮施用可以采用貯庫或多孔膜型或固體骨架類貼劑來實現(xiàn)。上述用于可口服施用、可注射或可局部施用的組合物的組分僅僅是代表性的。其它物質(zhì)以及加工技術(shù)等在Remington'sPharmaceuticalSciences,第17版,1985,Mack出版公司,伊斯頓,賓夕法尼亞州的第8部分中給出，該文獻引入本文作為參考。本發(fā)明的化合物還可以以持續(xù)釋放形式或從持續(xù)釋放藥物遞送系統(tǒng)中進行施用。代表性持續(xù)釋放材料的描述可見于Remington'sPharmaceuticalSciences。以下制劑實施例說明了可以按照本發(fā)明制備的代表性醫(yī)藥組合物。然而，本發(fā)明不限于以下的醫(yī)藥組合物。制劑1-片劑可以將式I的本發(fā)明的化合物與干明膠粘合劑以約1:2重量比混合成干燥粉末?？商砑由倭坑仓徭V作為潤滑劑。可以在壓片機中使混合物形成240-270mg片劑(每片片劑含有80-90mg式I的本發(fā)明的活性化合物)。制劑2-膠囊劑可以將式I的本發(fā)明的化合物與淀粉稀釋劑以約1:1重量比混合成干燥粉末?？梢詫⒒旌衔锾畛渲?50mg膠囊中(每粒膠囊劑含有125mg式I的本發(fā)明活性化合物)。制劑3-液體可以將式I的本發(fā)明的化合物(125mg)與蔗糖(1.75g)和西黃耆膠(4mg)混合，將所得混合物摻合，通過10號網(wǎng)眼U.S.篩過篩，隨后與先前制備的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉(11:89，50mg)在水中的溶液混合?？梢詫⒈郊姿徕c(10mg)、矯味劑和著色劑用水稀釋并在攪拌下添加。然后可以在攪拌下添加足夠的水。然后可以添加更多足夠的水以產(chǎn)生5mL的總體積。制劑4-片劑可以將式I的本發(fā)明的化合物與干明膠粘合劑以約1:2重量比混合成干燥粉末?？梢蕴砑由倭坑仓徭V作為潤滑劑。可以在壓片機中使混合物形成450-900mg片劑(每片片劑含有150-300mg式I的本發(fā)明的活性化合物)制劑5-注射劑可以將式I的本發(fā)明的化合物溶于或混懸于緩沖無菌生理鹽水可注射水性介質(zhì)中，達到約5mg/mL的濃度。制劑6-局部用可以將硬脂醇(250g)和白凡士林(250g)在約75℃熔融，然后可以添加式I的本發(fā)明的化合物(50g)、尼泊金甲酯(0.25g)、尼泊金丙酯(0.15g)、月桂硫酸鈉(10g)和丙二醇(120g)溶于水(約370g)中的混合物，可以將所得混合物攪拌直至其凝結(jié)。治療方法本發(fā)明的化合物可用作用于治療哺乳動物的與JAK異?；钚砸蚬嚓P(guān)或可歸因于JAK異?；钚缘牟“Y的治療劑。具體而言，病癥與JAK1和/或TYK2的異?；钚韵嚓P(guān)。因此，本發(fā)明的化合物和醫(yī)藥組合物可用作預(yù)防和/或治療哺乳動物、包括人的過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病的治療劑。在一個方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用作藥劑。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用于制備藥劑。在另一方面，本發(fā)明提供了治療患有本文公開的疾病或處于患有本文公開的疾病的風險中的哺乳動物的方法，所述方法包括施用有效治療病癥或預(yù)防病癥的量的一種或多種本文所述的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或化合物。在特定方面，本發(fā)明提供了治療患有以下疾病或處于患有以下疾病的風險中的哺乳動物的方法：過敏性疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病、先天性軟骨畸形和/或與IL6分泌過多或干擾素分泌過多相關(guān)的疾病。在治療方法方面，本發(fā)明提供了易罹患或罹患過敏性反應(yīng)的哺乳動物的治療和/或預(yù)防方法，所述方法包括施用有效治療病癥或預(yù)防病癥的量的一種或多種如本文所述的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或化合物。在特定實施方案中，過敏性反應(yīng)選自過敏性氣道疾病、竇炎、濕疹和蕁麻疹、食物過敏和昆蟲毒液過敏。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防過敏性反應(yīng)。在特定實施方案中，過敏性反應(yīng)選自過敏性氣道疾病、竇炎、濕疹和蕁麻疹、食物過敏和昆蟲毒液過敏。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用于制備治療或預(yù)防過敏性反應(yīng)的藥劑。在特定實施方案中，過敏性反應(yīng)選自過敏性氣道疾病、竇炎、濕疹和蕁麻疹、食物過敏和昆蟲毒液過敏。在另外的治療方法方面，本發(fā)明提供了易罹患或罹患炎性病癥的哺乳動物的治療和/或預(yù)防方法。所述方法包括施用有效治療病癥或預(yù)防病癥的量的一種或多種如本文所述的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或化合物。在特定實施方案中，炎性病癥選自類風濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、過敏性氣道疾病(例如哮喘)和炎性腸病。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防炎性病癥。在特定實施方案中，炎性病癥選自類風濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、過敏性氣道疾病(例如哮喘)和炎性腸病。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用于制備治療和/或預(yù)防炎性病癥的藥劑。在特定實施方案中，炎性病癥選自類風濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、過敏性氣道疾病(例如哮喘)和炎性腸病。在另外的治療方法方面，本發(fā)明提供了易罹患或罹患自身免疫疾病的哺乳動物的治療和/或預(yù)防方法。所述方法包括施用有效治療病癥或預(yù)防病癥的量的一種或多種本文所述的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或化合物。在特定實施方案中，自身免疫疾病選自COPD、哮喘、全身性紅斑狼瘡、I型糖尿病和炎性腸病。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防自身免疫疾病。在特定實施方案中，自身免疫疾病選自COPD、哮喘、全身性紅斑狼瘡、I型糖尿病和炎性腸病。在更特定實施方案中，自身免疫疾病為全身性紅斑狼瘡。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用于制備治療和/或預(yù)防自身免疫疾病的藥劑。在特定實施方案中，自身免疫疾病選自COPD、哮喘、全身性紅斑狼瘡、I型糖尿病和炎性腸病。在其它治療方法方面，本發(fā)明提供了易罹患或罹患增殖性疾病的哺乳動物的治療和/或預(yù)防方法，所述方法包括施用有效治療病癥或預(yù)防病癥的量的一種或多種本文所述的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或化合物。在特定實施方案中，增殖性疾病選自癌癥(例如實體腫瘤，例如子宮平滑肌肉瘤或前列腺癌)、白血病(例如AML、ALL或CLL)、多發(fā)性骨髓瘤和銀屑病。在更特定實施方案中，增殖性疾病選自骨髓纖維化、T細胞急性淋巴母細胞白血病(T-ALL)、多發(fā)性骨髓瘤、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、胰癌、肝癌、肝細胞癌(HCC)、肺癌、乳癌和結(jié)腸癌。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防增殖性疾病。在特定實施方案中，增殖性疾病選自癌癥(例如實體腫瘤，例如子宮平滑肌肉瘤或前列腺癌)、白血病(例如AML、ALL或CLL)、多發(fā)性骨髓瘤和銀屑病。在更特定實施方案中，增殖性疾病選自骨髓纖維化、T細胞急性淋巴母細胞白血病(T-ALL)、多發(fā)性骨髓瘤、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、胰癌、肝癌、肝細胞癌(HCC)、肺癌、乳癌和結(jié)腸癌。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用于制備治療和/或預(yù)防增殖性疾病的藥劑。在特定實施方案中，增殖性疾病選自癌癥(例如實體腫瘤，例如子宮平滑肌肉瘤或前列腺癌)、白血病(例如AML、ALL或CLL)、多發(fā)性骨髓瘤和銀屑病。在更特定實施方案中，增殖性疾病選自骨髓纖維化、T細胞急性淋巴母細胞白血病(T-ALL)、多發(fā)性骨髓瘤、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、胰癌、肝癌、肝細胞癌(HCC)、肺癌、乳癌和結(jié)腸癌。在其它治療方法方面，本發(fā)明提供了易罹患或罹患移植排斥的哺乳動物的治療和/或預(yù)防方法，所述方法包括施用有效治療病癥或預(yù)防病癥的量的一種或多種本文所述的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或化合物。在特定實施方案中，移植排斥為器官移植排斥。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防移植排斥。在特定實施方案中，移植排斥為器官移植排斥。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用于制備治療和/或預(yù)防移植排斥的藥劑。在特定實施方案中，移植排斥為器官移植排斥。在治療方法方面，本發(fā)明提供了易罹患或罹患涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病的哺乳動物的治療和/或預(yù)防方法，所述方法包括施用治療有效量的本文所述的本發(fā)明的化合物或一種或多種醫(yī)藥組合物。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用于制備治療和/或預(yù)防涉及軟骨轉(zhuǎn)換受損的疾病的藥劑。本發(fā)明還提供了治療和/或預(yù)防先天性軟骨畸形的方法，所述方法包括施用有效量的一種或多種本文所述的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或化合物。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防先天性軟骨畸形。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用于制備治療和/或預(yù)防先天性軟骨畸形的藥劑。在其它治療方法方面，本發(fā)明提供了易罹患或罹患與IL6分泌過多相關(guān)的疾病的哺乳動物的治療和/或預(yù)防方法，所述方法包括施用有效治療病癥或預(yù)防病癥的量的一種或多種本文所述的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或化合物。在特定實施方案中，與IL6分泌過多相關(guān)的疾病選自卡斯爾曼病和腎小球膜增生性腎小球腎炎。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防與IL6分泌過多相關(guān)的疾病。在特定實施方案中，與IL6分泌過多相關(guān)的疾病選自卡斯爾曼病和腎小球膜增生性腎小球腎炎。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用于制備治療和/或預(yù)防與IL6分泌過多相關(guān)的疾病的藥劑。在特定實施方案中，與IL6分泌過多相關(guān)的疾病選自卡斯爾曼病和腎小球膜增生性腎小球腎炎。在其它治療方法方面，本發(fā)明提供了易罹患或罹患與干擾素分泌過多相關(guān)的疾病的哺乳動物的治療和/或預(yù)防方法，所述方法包括施用有效治療病癥或預(yù)防病癥的量的一種或多種本文所述的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物或化合物。在特定實施方案中，與干擾素分泌過多相關(guān)的疾病選自全身性和皮膚型紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、皮肌炎、舍格倫綜合征、銀屑病和類風濕性關(guān)節(jié)炎。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防與干擾素分泌過多相關(guān)的疾病。在特定實施方案中，與干擾素分泌過多相關(guān)的疾病選自全身性和皮膚型紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、皮肌炎、舍格倫綜合征、銀屑病和類風濕性關(guān)節(jié)炎。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物用于制備治療和/或預(yù)防與干擾素分泌過多相關(guān)的疾病的藥劑。在特定實施方案中，與干擾素分泌過多相關(guān)的疾病選自全身性和皮膚型紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、皮肌炎、舍格倫綜合征、銀屑病和類風濕性關(guān)節(jié)炎。作為本發(fā)明的另一方面，提供了用作藥物、尤其是用于治療和/或預(yù)防上述病癥和疾病的本發(fā)明的化合物。本文還提供了本發(fā)明的化合物在制備治療和/或預(yù)防上述病癥和疾病之一的藥劑中的用途。本發(fā)明的方法的特定方案包括向罹患涉及炎癥的疾病的個體施用有效量的本發(fā)明的化合物達到足以降低該個體的炎癥水平、優(yōu)選終止引起所述炎癥的過程的時間期。所述方法的特定實施方案包括向罹患或易罹患發(fā)生類風濕性關(guān)節(jié)炎的個體患者施用有效量的本發(fā)明的化合物達到足以分別降低或預(yù)防所述患者的關(guān)節(jié)炎癥、優(yōu)選終止引起所述炎癥的過程的時間期。本發(fā)明的方法的其它特定方案包括向罹患以軟骨或關(guān)節(jié)退化為特征的疾病病癥(例如類風濕性關(guān)節(jié)炎和/或骨關(guān)節(jié)炎)的個體施用有效量的本發(fā)明的化合物達到足以降低、優(yōu)選終止引起所述退化的自身延續(xù)過程的時間期。該方法的特定實施方案包括向罹患或易罹患發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎的個體患者施用有效量的本發(fā)明的化合物達到足以分別降低或阻止所述患者的關(guān)節(jié)軟骨退化、優(yōu)選終止引起所述退化的自身延續(xù)過程的時間期。在特定實施方案中，所述化合物可呈現(xiàn)出軟骨合成代謝和/或抗分解代謝性質(zhì)。注射劑量水平介于約0.1mg/kg/h至至少10mg/kg/h，均持續(xù)約1至約120小時、尤其是24至96小時。還可以施用約0.1mg/kg至約10mg/kg或更多的預(yù)裝快速濃注以達到充分穩(wěn)態(tài)水平。對于40至80kg人患者，最大總劑量預(yù)期不超過約2g/天。對于長期病癥如退化性病癥的預(yù)防和/或治療，治療方案通常延續(xù)歷經(jīng)多個月或多年，因此口服給藥就患者便利性和耐受性而言是優(yōu)選的。在口服給藥時，每天一至五次、尤其是二至四次、通常是三次口服給藥是代表性方案。采用這種給藥模式，各劑量提供了約0.01至約20mg/kg本發(fā)明的化合物，其中特定劑量各自提供了約0.1至約10mg/kg、尤其是約1至約5mg/kg。通常選擇經(jīng)皮劑量以提供與采用注射劑量所實現(xiàn)的血液水平相比類似或較低的血液含量。當用于預(yù)防病癥發(fā)作時，本發(fā)明的化合物將以上述劑量水平施用于處于發(fā)生該病癥的風險中的患者，通常是在醫(yī)師的建議和監(jiān)督下進行。處于發(fā)生特定病癥的風險中的患者通常包括具有該病癥的家族史的患者或已經(jīng)通過遺傳測試或篩查被鑒別為特別易罹患該病癥的患者。本發(fā)明的化合物可以作為唯一活性劑施用，或者其可以與其它治療劑、包括展示出相同或相似治療活性并且被確定對于這種組合施用而言安全有效的其它化合物組合施用。在特定實施方案中，兩種(或更多種)物質(zhì)的共同施用允許顯著降低各物質(zhì)的使用劑量，由此減少觀察到的副作用。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物或包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物作為藥劑施用。在特定實施方案中，所述醫(yī)藥組合物另外包含其它活性成分。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物與其它治療劑共同施用以用于治療和/或預(yù)防涉及炎癥的疾病；特定的治療劑包括但不限于免疫調(diào)節(jié)劑(例如硫唑嘌呤(azathioprine))、皮質(zhì)類固醇(例如潑尼松龍(prednisolone)或地塞米松(dexamethasone))、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、環(huán)孢素A(cyclosporinA)、他克莫司(tacrolimus)、麥考酚酸嗎乙酯(MycophenolateMofetil)、莫羅單抗-CD3(muromonab-CD3)(OKT3，例如)、ATG、阿司匹林(aspirin)、對乙酰氨基酚(acetaminophen)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)和吡羅昔康(piroxicam)。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物與其它治療劑共同施用以用于治療和/或預(yù)防關(guān)節(jié)炎(例如類風濕性關(guān)節(jié)炎)；特定的治療劑包括但不限于鎮(zhèn)痛劑、非類固醇抗炎藥(NSAIDS)、類固醇、合成DMARDS(例如但不限于甲氨喋呤(methotrexate)、來氟米特(leflunomide)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、金諾芬(auranofin)、金硫丁二鈉(sodiumaurothiomalate)、青霉胺(penicillamine)、氯喹、羥基氯喹、硫唑嘌呤和環(huán)孢素(ciclosporin))和生物DMARDS(例如但不限于英夫利昔單抗(Infliximab)、依那西普(Etanercept)、阿達木單抗(Adalimumab)、利妥昔單抗(Rituximab)和阿巴西普(Abatacept))。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物與其它治療劑共同施用以用于治療和/或預(yù)防增殖性病癥；特定的治療劑包括但不限于：甲氨喋呤、亞葉酸(leukovorin)、亞德利亞霉素(adriamycin)、潑尼松(prenisone)、博來霉素(bleomycin)、環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、紫杉醇(paclitaxel)、多西他賽(docetaxel)、長春花新堿(vincristine)、長春花堿(vinblastine)、長春瑞濱(vinorelbine)、多柔比星(doxorubicin)、他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)、阿那曲唑(anastrozole)、戈舍瑞林(goserelin)、抗HER2單克隆抗體(例如HerceptinTM)、卡培他濱(capecitabine)、雷諾昔酚鹽酸鹽(raloxifenehydrochloride)、EGFR抑制劑(例如TarcevaTM、ErbituxTM)、VEGF抑制劑(例如AvastinTM)、蛋白酶體抑制劑(例如VelcadeTM)、和hsp90抑制劑(例如17-AAG)。另外，本發(fā)明的化合物可以與其它療法、包括但不限于放射療法或手術(shù)組合施用。在特定實施方案中，增殖性病癥選自癌癥、骨髓增殖性疾病和白血病。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物與其它治療劑共同施用以用于治療和/或預(yù)防自身免疫疾病，特定的治療劑包括但不限于：糖皮質(zhì)激素、細胞生長抑制劑(例如嘌呤類似物)、烷化劑(例如氮芥(環(huán)磷酰胺)、亞硝基脲、鉑化合物等)、抗代謝物(例如甲氨喋呤、硫唑嘌呤和巰基嘌呤)、細胞毒性抗生素(例如放線菌素D蒽環(huán)霉素(dactinomycinanthracycline)、絲裂霉素C(mitomycinC)、博來霉素和光神霉素(mithramycin))、抗體(例如抗CD20、抗CD25或抗CD3(OTK3)單克隆抗體、和)、環(huán)孢素、他克莫司、雷帕霉素(rapamycin)(西羅莫司(sirolimus))、干擾素(例如IFN-β)、TNF結(jié)合蛋白(例如英夫利昔單抗(RemicadeTM)、依那西普(EnbrelTM)或阿達木單抗(HumiraTM))、麥考酚酯、芬戈莫德(Fingolimod)和多球殼菌素(Myriocin)。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物與其它治療劑共同施用以用于治療和/或預(yù)防移植排斥，特定的治療劑包括但不限于：鈣調(diào)磷酸酶抑制劑(例如環(huán)孢素或他克莫司(FK506))、mTOR抑制劑(例如西羅莫司、依維莫司(everolimus))、抗增殖劑(例如硫唑嘌呤、麥考酚酸(mycophenolicacid))、皮質(zhì)類固醇(例如潑尼松龍、氫化可的松(hydrocortisone))、抗體(例如單克隆抗IL-2Rα受體抗體、巴利昔單抗(basiliximab)、達珠單抗(daclizumab))、多克隆抗T細胞抗體(例如抗胸腺細胞球蛋白(ATG)、抗淋巴細胞球蛋白(ALG))。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物與其它治療劑共同施用以用于治療和/或預(yù)防哮喘和/或鼻炎和/或COPD，特定的治療劑包括但不限于：β2腎上腺素受體激動劑(例如沙丁胺醇(salbutamol)、左沙丁胺醇(levalbuterol)、特布他林(terbutaline)和比托特羅(bitolterol))、腎上腺素(吸入或片劑)、抗膽堿能藥(例如異丙托溴銨(ipratropiumbromide))、糖皮質(zhì)激素(口服或吸入)長效β2激動劑(例如沙美特羅(salmeterol)、福莫特羅(formoterol)、班布特羅(bambuterol)和持續(xù)釋放口服阿布叔醇)、吸入類固醇和長效支氣管擴張劑的組合(例如氟替卡松(fluticasone)/沙美特羅、布地奈德(budesonide)/福莫特羅)、白三烯拮抗劑和合成抑制劑(例如孟魯司特(montelukast)、扎魯司特(zafirlukast)和齊留通(zileuton))、介體釋放抑制劑(例如色甘酸鹽(cromoglycate)和酮替芬(ketotifen))、IgE反應(yīng)生物調(diào)節(jié)劑(例如奧馬珠單抗(omalizumab))、抗組胺藥(例如西替利嗪(ceterizine)、桂利嗪(cinnarizine)、非索非那定(fexofenadine))和血管收縮劑(例如羥甲唑啉(oxymethazoline)、賽洛唑啉(xylomethazoline)、萘甲唑林(nafazoline)和曲馬唑啉(tramazoline))。另外，本發(fā)明的化合物可以與用于哮喘和/或COPD的緊急療法組合施用，這類療法包括氧氣或氦氧混合氣施用、霧化沙丁胺醇或特布他林(任選與抗膽堿能藥(例如異丙托銨)組合)、全身性類固醇(口服或靜脈內(nèi)，例如潑尼松、潑尼松龍、甲潑尼龍、地塞米松或氫化可的松)、靜脈內(nèi)沙丁胺醇、非特異性β激動劑、注射或吸入劑(例如腎上腺素、異他林(isoetharine)、異丙腎上腺素、奧西那林)、抗膽堿能藥(IV或霧化，例如格隆銨(glycopyrrolate)、阿托品(atropine)、異丙托銨)、甲基黃嘌呤(茶堿、氨茶堿、芐胺茶堿(bamiphylline))、具有支氣管擴張作用的吸入麻醉劑(例如異氟烷(isoflurane)、氟烷(halothane)、恩氟醚(enflurane))、氯胺酮(ketamine)和靜脈內(nèi)硫酸鎂。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物與其它治療劑共同施用以用于治療和/或預(yù)防炎性腸病(IBD)，特定的治療劑包括但不限于：糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松、布地奈德)；改善疾病的合成免疫調(diào)節(jié)劑(例如甲氨喋呤、來氟米特、柳氮磺吡啶、美沙拉嗪(mesalazine)、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤和環(huán)孢素)和改善疾病的生物免疫調(diào)節(jié)劑(英夫利昔單抗、阿達木單抗、利妥昔單抗和阿巴西普)。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物與其它治療劑共同施用以用于治療和/或預(yù)防SLE，特定的治療劑包括但不限于：改善疾病的抗風濕藥物(DMARD)，例如抗瘧疾藥(例如plaquenil、羥基氯喹)、免疫抑制劑(例如甲氨喋呤和硫唑嘌呤)、環(huán)磷酰胺和麥考酚酸；免疫抑制藥物和鎮(zhèn)痛劑，例如非類固醇抗炎藥、鴉片制劑(例如右丙氧芬(dextropropoxyphene)和co-codamol)、阿片樣物質(zhì)(例如氫可酮(hydrocodone)、羥考酮(oxycodone)、美施康定(MSContin)或美沙酮(methadone))和芬太尼多瑞吉(fentanylduragesic)經(jīng)皮貼劑。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物與其它治療劑共同施用以用于治療和/或預(yù)防銀屑病，特定的治療劑包括但不限于：局部治療，例如浴液、增濕劑、含煤焦油的含藥乳膏和軟膏、地蒽酚(dithranol)(蒽三酚(anthralin))；類皮質(zhì)類固醇，如去羥米松(desoximetasone)(TopicortTM)、醋酸氟輕松(fluocinonide)、維生素D3類似物(例如鈣泊三醇(calcipotriol))、摩洛哥堅果油(arganoil)和類視色素(retinoid)(依曲替酯(etretinate)、阿維A(acitretin)、他扎羅汀(tazarotene))；全身性治療，例如甲氨喋呤、環(huán)胞菌素、類視色素、硫鳥嘌呤、羥基脲(hydroxyurea)、柳氮磺吡啶、麥考酚酸嗎乙酯、硫唑嘌呤、他克莫司、富馬酸酯或生物制劑如AmeviveTM、EnbrelTM、HumiraTM、RemicadeTM、RaptivaTM和優(yōu)西努單抗(ustekinumab)(一種IL-12和IL-23阻斷劑)。另外，本發(fā)明的化合物可以與其它療法、包括但不限于光療法或光化學療法(例如補骨脂素(psoralen)和紫外線A光療法(PUVA))組合施用。在一個實施方案中，本發(fā)明的化合物與其它治療劑共同施用以用于治療和/或預(yù)防過敏性反應(yīng)，特定的治療劑包括但不限于：抗組胺藥(例如西替利嗪、苯海拉明(diphenhydramine)、非索非那定、左西替利嗪(levocetirizine))、糖皮質(zhì)激素(例如潑尼松、倍他米松(betamethasone)、倍氯米松(beclomethasone)、地塞米松)、腎上腺素、茶堿或抗白三烯劑(例如孟魯司特或扎魯司特)、抗膽堿能藥和減充血劑。如對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，共同施用包括將兩種或更多種治療劑作為相同治療方案的一部分遞送給患者的任意手段。雖然兩種或更多種治療劑可以在單一制劑中同時施用，但這不是必需的。治療劑可以在不同的制劑中在不同時間施用?；瘜W合成操作通用本發(fā)明的化合物可采用以下通用方法和操作由容易獲得的起始物質(zhì)來制備。應(yīng)理解，在給出典型或優(yōu)選方法條件(即反應(yīng)溫度、時間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等)的情況中，其它方法條件也是可以使用的，另有指出除外。最佳的反應(yīng)條件可以根據(jù)所用的具體反應(yīng)物或溶劑而變，但是這類條件可由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)優(yōu)化操作來確定。另外，如本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的那樣，常規(guī)保護基可以是阻止某些官能基發(fā)生不期望的反應(yīng)所必需的。針對特定官能團選擇適宜的保護基以及是的保護和脫保護條件是本領(lǐng)域熟知的(Greene,TW；Wuts,PGM；,1991)。關(guān)于制備如上文定義的本發(fā)明的化合物和比較實施例，詳細給出了下述方法。本發(fā)明的化合物可以由有機合成領(lǐng)域的技術(shù)人員由已知或市售起始物質(zhì)和試劑來制備。所有試劑均為商品級，并且未經(jīng)進一步純化原樣使用，另有指示除外。將市售無水溶劑用于在惰性氛圍下進行的反應(yīng)。在所有其它情況中使用試劑級溶劑，另有指示除外。在硅膠60(35-70μm)上進行柱色譜法。采用預(yù)涂布硅膠F-254板(厚度為0.25mm)進行薄層色譜法。在BrukerDPX400NMR光譜儀(400MHz)或BrukerAdvance300NMR光譜儀(300MHz)上記錄1HNMR光譜。1HNMR光譜的化學位移(δ)以相對于四甲基硅烷(δ0.00)或適當殘余溶劑峰(即CHCl3,δ7.27)(作為內(nèi)標)的百萬分率(ppm)報導(dǎo)。峰裂數(shù)以單峰(s)、二重峰(d)、三重峰(t)、四重峰(q)、五重峰(quin)、多重峰(m)和寬峰(br)給出。電噴霧MS譜在Waters平臺LC/MS光譜儀上或采用與Waters質(zhì)量檢測儀3100光譜儀偶聯(lián)的WatersAcquityH-ClassUPLC獲得。所用柱子：WatersAcquityUPLCBEHC181.7μm,2.1mmID×50mML、WatersAcquityUPLCBEHC181.7μm,2.1mmID×30mmL或WatersXterraMS5μmC18,100×4.6mm。所述方法采用MeCN/H2O梯度(含0.1％TFA或0.1％NH3的H2O)或MeOH/H2O梯度(含0.05％TFA的H2O)。使用BiotageInitiator進行微波加熱。使用與ZQ單四極質(zhì)譜儀偶聯(lián)的質(zhì)量指向的自動純化系統(tǒng)進行制備型HPLC純化。使用H2O(不同pH)/MeCN梯度進行所有的HPLC純化。通常使用BEHXBrigdeC18(5μm，19×5mm)前置柱和BEHXBrigdeC18(5μm，19×100mm)進行堿性條件下的制備型HPLC分離。通常使用CSHSelectC18(5μm，19×5mm)前置柱和CSHSelectC18(5μm，19×100mm)進行酸性條件下的分離。集中梯度為在5分鐘內(nèi)由x％至x+25％的乙腈水溶液，循環(huán)時間為10分鐘。柱流速為20mL/min。進樣體積介于200至750μL。毛細管分流器用于在柱分離后分流至質(zhì)譜儀，經(jīng)1mL/min補充流稀釋。補充流為含0.1％甲酸的甲醇。所有樣品通過Waters質(zhì)量指向級分收集進行純化。表I.實驗部分中所用的縮略語名單：本發(fā)明的化合物的合成制備實施例1.本發(fā)明的中間化合物的合成1.1.雙-(4-甲氧基-芐基)-胺(Int.1)的合成將茴香醛(411mmol)、4-甲氧基芐基胺(411mmol)和甲苯(500mL)在裝備有冷凝器和Dean-Stark分離器的圓底燒瓶中合并。使反應(yīng)物回流1小時，在此期間水從反應(yīng)混合物中除去。冷卻反應(yīng)物并濃縮。將殘余物溶于MeOH(120mL)中。將混合物冷卻至5℃，歷經(jīng)45分鐘分批添加NaBH4(205mmol)。將反應(yīng)物緩慢加熱至回流?；亓?小時后，將反應(yīng)物冷卻至室溫并濃縮。將殘余物溶于EtOAc中。洗滌(3×H2O和鹽水)有機層，干燥(Na2SO4)并濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.2.(6-溴-1-甲基-1H-苯并咪唑-4-基)-雙-(4-甲氧基-芐基)-胺(Int.2)的合成1.2.1.步驟i：5-溴-1,3-二氟-2-硝基-苯于70℃歷經(jīng)30分鐘向NaBO3.4H2O(325mmol)在AcOH(450mL)中的混懸液中滴加4-溴-2,6-二氟苯胺(240mmol)在AcOH(150mL)中的溶液。歷經(jīng)5小時向混合物中添加另外2080mmolNaBO3.4H2O。在此期間將混合物于70℃攪拌。將混合物倒入水中，用Et2O萃取。使用與上文所述相同的條件，將有機層與獲自另一反應(yīng)的其它Et2O溶液合并。濃縮混合物。形成沉淀，通過過濾分離。將濾液濃縮，進行快速柱色譜法(SiO2，石油醚)后得到預(yù)期產(chǎn)物。1.2.2.步驟ii：(5-溴-3-氟-2-硝基-苯基)-甲基-胺向5-溴-1,3-二氟-2-硝基苯(164mmol)和Cs2CO3(197mmol)在THF(1L)中的溶液中滴加2MMeNH2的THF溶液(82mL)。反應(yīng)混合物于0℃攪拌1小時，隨后于室溫攪拌1小時。減壓除去溶劑。將殘余物分配于EtOAc與H2O之間。分離兩相，干燥(Na2SO4)有機層，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.2.3.步驟iii：5-溴-N,N-雙-(4-甲氧基-芐基)-N'-甲基-2-硝基-苯-1,3-二胺于120℃攪拌雙-(4-甲氧基-芐基)-胺(346mmol)、5-溴-3-氟-N-甲基-2-硝基苯胺(297mmol)和Et3N(891mmol)的混合物16小時。接著冷卻混合物。將粗物質(zhì)與按照與上文所述相同的操作程序獲得的其它粗物質(zhì)合并。將所得混合物稀釋于EtOAc中，洗滌(2×0.2MHCl、H2O和飽和NaHCO3)。干燥(Na2SO4)有機相，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.2.4.步驟iv：5-溴-N,N-雙-(4-甲氧基-芐基)-N”-甲基-苯-1,2,3-三胺于室溫攪拌5-溴-N,N-雙-(4-甲氧基-芐基)-N'-甲基-2-硝基-苯-1,3-二胺(170mmol)、NH4Cl(2038mmol)和Zn(2034mmol)在1:1MeOH/THF(1L)中的混合物1小時。將混合物冷卻至0℃，緩慢添加HCOOH(20mL)。使混合物達至室溫并攪拌1小時。過濾混合物，與按照上文所述的程序獲得的其它混合物合并。濃縮所得混合物。將殘余物溶于DCM中。洗滌(飽和NH4Cl)有機混合物，干燥(Na2SO4)，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.2.5.步驟v：(6-溴-1-甲基-1H-苯并咪唑-4-基)-雙-(4-甲氧基-芐基)-胺將5-溴-N,N-雙-(4-甲氧基-芐基)-N”-甲基-苯-1,2,3-三胺(170mmol)溶于HC(OEt)3(100mol)與MeCN(500mL)的混合物中?；旌衔镉?5℃攪拌0.5小時，隨后于室溫攪拌約16小時。將混合物與按照與上文所述相同的程序獲得的其它混合物合并。濃縮所得混合物，通過快速柱色譜法(SiO2，15:85至60:40EtOAc/石油醚)純化殘余物，獲得預(yù)期產(chǎn)物。1.3.5-{7-[雙-(4-甲氧基-芐基)-氨基]-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基氧基}-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Int.3)的合成.1.3.1.步驟i：雙-(4-甲氧基-芐基)-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-苯并咪唑-4-基]-胺(6-溴-1-甲基-1H-苯并咪唑-4-基)-雙-(4-甲氧基-芐基)-胺(54mmol)、聯(lián)硼酸頻那醇酯(81mmol)、PdCl2(dppf).DCM(2.71mmol)和KOAc(162.5mmol)在DMF(150mL)中的混合物在氮氣流下超聲處理5分鐘。混合物然后于110℃在配備有冷凝器的圓底燒瓶中攪拌1小時。經(jīng)由硅藻土墊過濾混合物，濃縮濾液。將殘余物溶于EtOAc中，洗滌(H2O)有機層，干燥(Na2SO4)，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.3.2.步驟ii：5-{7-[雙-(4-甲氧基-芐基)-氨基]-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基氧基}-4-甲基-吡啶-2-甲腈將30重量％H2O2的H2O溶液(20mL)添加至N,N-雙(4-甲氧基芐基)-1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環(huán)戊烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-胺(58.5mmol)在DMF(600mL)中的溶液中，于室溫攪拌混合物約16小時。用5％Na2SO3水溶液淬滅反應(yīng)。用EtOAc萃取混合物。洗滌(H2O)有機層，干燥(Na2SO4)，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.4.通用方法：鄰位定向的碘化其中W可為：-N＝、-CH＝、-C(Cl)＝；Y可為：-N＝、-C(CN)＝1.4.1.方法A1將氨基芳族或雜芳族起始物質(zhì)(1當量)、Ag2SO4(1當量)和I2(1當量)在EtOH中的混合物在室溫至50℃的溫度下攪拌一段時間，該時間可以在1小時至約16小時內(nèi)變化。過濾混合物，濃縮，稀釋于有機溶劑中。對有機混合物進行水性后處理。減壓除去溶劑，通過快速柱色譜法純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.4.2.方法A1的說明性實施例：4-氨基-3-氟-5-碘-芐腈(Int.4)的合成.于室溫攪拌4-氨基-3-氟芐腈(147mmol)、I2(147mmol)和Ag2SO4(147mmol)在EtOH(700mL)中的混合物1.5小時。過濾混合物，濃縮。將殘余物溶于EtOAc中，洗滌(飽和Na2S2O3×3)。干燥(Na2SO4)有機層，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，95:5至70:30環(huán)己烷/EtOAc)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.4.3.方法A2于70℃攪拌氨基芳族或雜芳族起始物質(zhì)(1當量)、Ag2SO4(3至4當量)和I2(3至4當量)在EtOH中的混合物16小時。可添加更多當量的I2和Ag2SO4以增加轉(zhuǎn)化。過濾混合物，濃縮。通過快速柱色譜法純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.5.方法A2的說明性實施例：5-氨基-6-氟-4-碘-吡啶-2-甲腈(Int.5)的合成.于70℃攪拌Int.11(3.62mmol)、I2(14.5mmol)和Ag2SO4(14.5mmol)在EtOH(200mL)中的混合物16小時。再添加5當量的I2和Ag2SO4，將反應(yīng)物于70℃攪拌另外72小時。過濾混合物，濃縮，通過快速柱色譜法(SiO2，20:80至40:60EtOAc/環(huán)己烷)純化，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.6.通用方法：通過根岸(Negishi)反應(yīng)引入腈基其中RA可為芳基或雜芳基；且X可為Cl、Br或I。1.6.1.方法B將芳基/雜芳基鹵化物(1當量)、氰化鋅(1至3當量)、Pd(PPh3)4(0.1至0.2當量)在DMF中的混合物于微波設(shè)備中在150℃加熱5分鐘至0.5小時。過濾混合物，濃縮。用有機溶劑稀釋殘余物。對有機混合物進行后處理，減壓除去溶劑。將殘余物研磨或通過快速柱色譜法純化，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.6.2.方法B的說明性實施例：5-氟-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Int.7)的合成.向微波管中加入在DMF(20mL)中的2-氯-5-氟-4-甲基吡啶(5.5mmol)、Zn(CN)2(16.6mmol)、Pd(PPh3)4(1.1mmol)。在微波反應(yīng)器中，在150℃攪拌混合物5分鐘?；旌衔锱c按照上文所述的程序獲得的其它粗物質(zhì)合并。過濾所得混合物。減壓濃縮濾液。用EtOAc稀釋殘余物，洗滌(飽和NH4Cl)，干燥(Na2SO4)，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，5:95至15:85EtOAc/石油醚)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.7.通用方法：使用甲基硼酸進行的鈴木(Suzuki)反應(yīng)其中W可為：-N＝、-CH＝、-C(Cl)＝；且Y可為：-N＝、-C(CN)＝；且X可為-I或-Br1.7.1.方法C在100℃攪拌芳族/雜芳族鹵化物(1當量)、甲基硼酸(1.3至3當量)、Pd(dppf)Cl2.DCM(0.11至0.2當量)和Cs2CO3(3至5當量)在1,4-二噁烷中的混合物。用有機溶劑稀釋混合物。對有機混合物進行水性后處理，減壓除去溶劑。通過快速柱色譜法純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.7.2.方法C的說明性實施例：5-氨基-6-氟-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Int.12)的合成.在105℃攪拌Int.5(3mmol)、甲基硼酸(9.1mmol)、Pd(dppf)Cl2.DCM(0.32mmol)和Cs2CO3(15.2mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物5小時。稀釋(EtOAc)混合物，洗滌(飽和NaHCO3)，干燥(Na2SO4)，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，10:90至50:50EtOAc/石油醚)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.8.6-溴-2-氟-吡啶-3-基胺(Int.15)的合成于室溫攪拌2-氟吡啶-3-胺(44.6mmol)和KOAc(44.6mmol)在AcOH中的混合物1小時。將混合物冷卻至0℃，滴加Br2(44.6mmol)。于0℃攪拌混合物15分鐘。濃縮混合物，將殘余物溶于EtOAc/MeOH中。洗滌(飽和NaHCO3、飽和Na2S2O3)有機溶液，干燥(Na2SO4)，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至80:20石油醚/EtOAc)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.9.2-溴-6-氟-4-甲磺?；?苯基胺(Int.16)的合成.于室溫攪拌2-氟-4-甲基磺?；?苯胺(22.76mmol)和KOAc(22.7mmol)在AcOH中的混合物。將混合物冷卻至0℃，滴加Br2(22.7mmol)。于0℃攪拌混合物30分鐘。濃縮混合物，將殘余物溶于EtOAc中。洗滌(飽和NaHCO3、飽和Na2S2O3)有機混合物，干燥(Na2SO4)，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.10.4-氨基-3-乙基-5-氟-芐腈(Int.17)的合成.將Cs2CO3(46mmol)和Pd(dppf)Cl2.DCM(0.76mmol)的混合物混懸于DMF(35mL)中，用氮氣脫氣。向混合物中添加H2O(400μL)、1MEt3B的THF溶液(11.5mL)和Int.4(7.63mmol)在DMF(5mL)中的溶液，在60℃攪拌反應(yīng)物30分鐘。濃縮混合物，將殘余物溶于EtOAc中，洗滌(飽和NaHCO3、H2O)，干燥(Na2SO4)，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至95:5石油醚/EtOAc)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.11.通用方法：NH2轉(zhuǎn)化成碘其中R10可為Me或Et。1.11.1.方法D于0℃向氨基芳族/雜芳族化合物(1當量)在H2O中的混合物中滴加濃HCl(6當量)。滴加NaNO2(1.05當量)在H2O中的溶液。于0℃攪拌所得混合物15分鐘。滴加KI(1.05當量)在H2O中的溶液?；旌衔镉?℃攪拌15分鐘，于室溫攪拌1小時。用有機溶劑萃取混合物。在水性處理和減壓除去溶劑后，可對殘余物進行研磨或色譜法，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.11.2.方法D的說明性實施例：5-碘-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Int.18)的合成.于0℃向Int.8(1.88mmol)在H2O(10mL)中的混合物中滴加濃HCl(0.9mL)，隨后滴加NaNO2(1.97mmol)在H2O(0.5mL)中的溶液。于0℃攪拌所得混合物15分鐘。滴加KI(1.97mmol)在H2O(1mL)中的溶液。所得混合物于0℃攪拌15分鐘，于室溫攪拌1小時。用EtOAc萃取混合物。洗滌(H2O)有機層，干燥，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至75:25環(huán)己烷/EtOAc)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.12.6-溴-4-甲基-吡啶-3-基胺(Int.20)的合成在90℃攪拌NH4Cl(14.9mmol)和鐵粉(18.4mmol)在H2O(5mL)中的混合物。分批添加2-溴-4-甲基-5-硝基吡啶(2.3mmol)。在90℃攪拌混合物1小時15分鐘。停止反應(yīng)，用EtOAc萃取。干燥(Na2SO4)有機層，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.13.4-氨基-3-氯-5-氟-芐腈(Int.21)的合成于70℃攪拌4-氨基-3-氟芐腈(184mmol)和NCS(276mmol)在AcOH(300mL)中的混合物約16小時。濃縮混合物。向殘余物中添加H2O，過濾出固體產(chǎn)物并洗滌(飽和NaHCO3和H2O)。為除去H2O，添加THF并減壓除去，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.14.3-乙基-4-羥基-芐腈(Int.22)的合成于0℃向4-氨基-3-乙基芐腈(6.84mmol)在H2O(12mL)中的溶液中滴加濃H2SO4(3.4mL)。于0℃向所得混合物中滴加NaNO2(7.52mmol)在H2O(5mL)中的溶液。反應(yīng)物于0℃攪拌30分鐘且在100℃攪拌2小時。將混合物冷卻至室溫，用EtOAc萃取。洗滌(H2O)有機層，干燥，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.15.2-氯-3-氟-吡啶-4-基胺(Int.23)的合成1.15.1.步驟i：N-(2-氯-3-氟-4-吡啶基)氨甲酸叔丁酯將二苯基磷?；B氮化物(DPPA)(129mmol)添加至2-氯-3-氟-吡啶-4-甲酸(85.7mmol)、Et3N(257mmol)在1:1t-BuOH/甲苯(200mL)中的混合物中。在110℃加熱混合物4小時。用H2O稀釋混合物，用DCM萃取。干燥(Na2SO4)有機層，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至80:20DCM/EtOAc)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物N-(2-氯-3-氟-4-吡啶基)氨甲酸叔丁酯。1.15.2.步驟ii：2-氯-3-氟-吡啶-4-基胺于室溫攪拌N-(2-氯-3-氟-4-吡啶基)氨甲酸叔丁酯(20.2mmol)在1:2TFA/DCM(45mL)中的溶液6小時。濃縮反應(yīng)混合物，通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至90:10DCM/7NNH3的MeOH溶液)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.16.通用方法：與(6-溴-1-甲基-1H-苯并咪唑-4-基)-雙-(4-甲氧基-芐基)-胺(Int.2)的布赫瓦爾德(Buchwald)偶聯(lián).其中RA可為任選取代的芳基或雜芳基。1.16.1.方法E1用惰性氣體凈化Int.2(1當量)、相應(yīng)的苯胺(1.1當量)、Cs2CO3(2當量)和XPhos(0.3當量)在無水甲苯中的混合物，隨后添加Pd(OAc)2(0.1至0.15當量)。在110℃攪拌混合物約16小時?；旌衔锟煞峙溆谟袡C溶劑與水相之間。分離兩層，干燥有機層，濃縮。或者，可過濾反應(yīng)混合物，濃縮。殘余物可保持原樣或通過色譜法純化，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.16.2.方法E1的說明性實施例：5-{7-[雙-(4-甲氧基-芐基)-氨基]-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基氨基}-4-乙基-吡啶-2-甲腈(Int.24)的合成.用氬氣凈化Int.2(0.75mmol)、Int.10(0.79mmol)、Cs2CO3(1.5mmol)和XPhos(0.225mmol)在無水甲苯(6.3mL)中的混合物，隨后添加Pd(OAc)2(0.075mmol)。在110℃攪拌混合物約16小時。用H2O稀釋混合物，用DCM萃取。洗滌(鹽水)有機層，干燥(Na2SO4)，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至50:50環(huán)己烷/EtOAc)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.16.3.方法E2用惰性氣體凈化Int.2(1當量)、相應(yīng)的苯胺(1.1當量)、Cs2CO3(4至5當量)和XPhos(0.4當量)在無水甲苯中的混合物，隨后添加Pd(OAc)2(0.2至0.3當量)。在110℃攪拌混合物1小時至24小時?；旌衔锟煞峙溆谟袡C溶劑與水相之間。分離兩層，干燥有機層，濃縮?；蛘?，可過濾反應(yīng)混合物，濃縮。殘余物可保持原樣或通過色譜法純化，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.16.4.方法E2的說明性實施例：5-{7-[雙-(4-甲氧基-芐基)-氨基]-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基氨基}-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Int.27)的合成.用氬氣凈化Int.2(4mmol)、Int.8(4.3mmol)、Cs2CO3(20mmol)和XPhos(1.6mmol)在無水甲苯(35mL)中的混合物10分鐘，隨后添加Pd(OAc)2(1.2mmol)。在110℃攪拌混合物約16小時。經(jīng)由硅藻土墊過濾混合物，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，98:2至25:75環(huán)己烷/EtOAc)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.16.5.方法E3Int.2(1當量)、苯胺(1.1當量)、BINAP(0.3當量)、Cs2CO3(4當量)和Pd(OAc)2(0.2當量)在無水1,4-二噁烷中的混合物用惰性氣體脫氣。在100-110℃攪拌反應(yīng)物4小時至約16小時。混合物可分配于有機溶劑與水相之間。分離兩層，干燥有機層，濃縮?；蛘?，可過濾反應(yīng)混合物，濃縮。殘余物可保持原樣或通過色譜法純化，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.16.6.方法E3的說明性實施例：N6-(2-氟-4-甲磺?；?苯基)-N4,N4-雙-(4-甲氧基-芐基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-4,6-二胺(Int.34)的合成.Int.2(1.48mmol)、2-氟-4-甲基磺?；?苯胺(1.58mmol)、BINAP(0.47mmol)、Cs2CO3(6.32mmol)和Pd(OAc)2(0.32mmol)在無水1,4-二噁烷(15mL)中的混合物用氮氣脫氣。在100℃攪拌反應(yīng)物約16小時。用EtOAc稀釋混合物，洗滌(H2O)有機層，干燥(Na2SO4)，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.16.7.方法E4Int.2(1當量)、苯胺(1.1當量)、Brettphos(0.1當量)、Cs2CO3(5當量)和Pd(OAc)2(0.05當量)在無水1,4-二噁烷中的混合物用惰性氣體脫氣。在85-95℃攪拌反應(yīng)物2小時至約8小時?；旌衔锟煞峙溆谟袡C溶劑與水相之間。分離兩層，干燥有機層，濃縮?；蛘?，可過濾反應(yīng)混合物，濃縮。殘余物可保持原樣或通過色譜法純化，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.16.8.方法E4的說明性實施例：N6-(2,3-二氫-1,4-苯并二噁烯-6-基)-N4,N4-雙[(4-甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-苯并咪唑-4,6-二胺(Int.78)的合成.Int.2(1.17mmol)、2,3-二氫-1,4-苯并二噁烯-6-胺(1.29mmol)、Brettphos(0.117mmol)、Cs2CO3(6.32mmol)和Pd(OAc)2(0.058mmol)在無水1,4-二噁烷(15mL)中的混合物用氮氣脫氣。在90℃攪拌反應(yīng)物約5小時。用EtOAc稀釋混合物，洗滌(H2O)有機層，干燥(Na2SO4)，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.17.通用方法：布赫瓦爾德(Buchwald)產(chǎn)物的甲基化其中RA可為任選取代的芳基或雜芳基。1.17.1.方法F于0℃將NaH(60％于礦物油中，1.1至3當量)添加至獲自布赫瓦爾德偶聯(lián)的中間體(1當量)在THF或DMF中的溶液中。于0℃攪拌混合物30分鐘。添加MeI(1.1至3當量)，于室溫攪拌混合物1小時至約16小時?；旌衔锓峙溆谟袡C溶劑與水相之間。分離兩層，干燥有機層，濃縮。殘余物通過二氧化硅色譜法純化或未經(jīng)進一步純化按原樣使用。1.17.2.方法F的說明性實施例：N6-(2-氟-4-甲磺?；?6-甲基-苯基)-N4,N4-雙-(4-甲氧基-芐基)-1,N6-二甲基-1H-苯并咪唑-4,6-二胺(Int.37)的合成.于0℃將NaH(60％于礦物油中，6.76mmol)添加至Int.35(2.25mmol)在THF(10mL)中的溶液中。于0℃攪拌混合物30分鐘。添加MeI(6.76mmol)，于室溫攪拌混合物約16小時。用EtOAc稀釋混合物，用H2O洗滌。干燥(Na2SO4)有機層，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，20:80至80:20EtOAc/石油醚)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.17.3.方法F的說明性實施例：N4,N4-雙[(4-甲氧基苯基)甲基]-N6,1-二甲基-N6-(2-甲基-4-甲磺酰基-苯基)苯并咪唑-4,6-二胺(Int.49A)和N6-(4-乙磺?；?2-甲基-苯基)-N4,N4-雙[(4-甲氧基苯基)甲基]-N6,1-二甲基-苯并咪唑-4,6-二胺(Int.49B)的合成.于0℃將NaH(60％于礦物油中，4.86mmol)添加至Int.36(1.62mmol)在THF(10mL)中的溶液中。于0℃攪拌混合物30分鐘。添加MeI(4.86mmol)，于室溫攪拌混合物1小時。用EtOAc稀釋混合物，用H2O洗滌。干燥(Na2SO4)有機層，濃縮?？焖僦V法(SiO2，20:80至80:20EtOAc/石油醚)產(chǎn)生預(yù)期產(chǎn)物(Int.49A，主要產(chǎn)物)連同副產(chǎn)物(Int.49B，次要產(chǎn)物)的混合物。1.18.4-{7-[雙-(4-甲氧基-芐基)-氨基]-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基氧基}-3-乙基-芐腈(Int.50)的合成.用氬氣沖洗Int.2(0.4mmol)、Int.22(0.4mmol)、CuI(0.06mmol)和Cs2CO3(1mmol)在吡啶(2mL)中的混合物，密封，在微波反應(yīng)器中在200℃加熱3小時。用H2O稀釋混合物，用EtOAc萃取。干燥有機層，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.19.通用方法：5-{7-[雙-(4-甲氧基-芐基)-氨基]-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基氧基}-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Int.3)與芳族或雜芳族鹵化物之間的烏爾曼偶聯(lián)(Ullmanncoupling)其中RA可為任選取代的芳基或雜芳基。1.19.1.方法G用惰性氣體沖洗Int.3(1當量)、芳基鹵化物(1.2至1.3當量)、CuI(0.1至0.2當量)、N,N-二甲基甘氨酸(0.3至0.5當量)和Cs2CO3(3當量)在1:1DMF/1,4-二噁烷中的混合物，在110℃攪拌4.5小時至16小時。過濾混合物，分配于有機溶劑與水相之間。分離兩層，干燥有機層，濃縮。通過二氧化硅色譜法純化殘余物。1.19.2.方法G的說明性實施例：5-{7-[雙-(4-甲氧基-芐基)-氨基]-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基氧基}-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Int.51)的合成.用氬氣沖洗Int.3(0.39mmol)、Int.18(0.47mmol)、CuI(0.08mmol)、N,N-二甲基甘氨酸(0.2mmol)和Cs2CO3(1.17mmol)在1:1DMF/1,4-二噁烷(4mL)中的混合物，在110℃于密封管中攪拌約16小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，經(jīng)硅藻土墊過濾。濃縮濾液。添加水，用EtOAc萃取混合物。用水洗滌有機層，干燥，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至40:60環(huán)己烷/EtOAc)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.20.通用方法：5-{7-[雙-(4-甲氧基-芐基)-氨基]-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基氧基}-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Int.3)與芳族或雜芳族鹵化物之間的SNAr偶聯(lián)其中RA可為任選取代的芳基或雜芳基。1.20.1.方法H在100℃攪拌Int.3(1當量)、芳基/雜芳基鹵化物(1.2至1.5當量)和K2CO3(2當量)在DMF中的混合物3小時至約16小時。用EtOAc稀釋混合物，用H2O洗滌若干次，干燥，濃縮。通過快速柱色譜法純化殘余物。1.20.2.方法H的說明性實施例：5-{7-[雙-(4-甲氧基-芐基)-氨基]-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基氧基}-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Int.51)的合成.在100℃攪拌Int.3(58mmol)、Int.7(70mmol)和K2CO3(116mmol)在DMF(160mL)中的混合物。在3小時后，再添加7.35mMolInt.7至反應(yīng)物中，再在100℃攪拌混合物1小時。用EtOAc稀釋所得混合物，用H2O洗滌若干次，干燥(Na2SO4)，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，15:85至35:75EtOAc/石油醚)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.21.通用方法：雙-PMB脫保護其中RA可為任選取代的芳基或雜芳基；且-L-可為：-NH-、-NMe-或-O-。1.21.1.方法I1于室溫攪拌受保護的雙-PMB胺(1當量)在TFA中的混合物30分鐘至約16小時。使溫度升高至50或60℃，進一步攪拌混合物0.5至3小時。使用堿性水溶液和有機溶劑對混合物進行后處理。分離兩相，干燥有機層，濃縮?；蛘?，可首先濃縮反應(yīng)混合物，隨后對殘余物進行上述后處理。獲自后處理的殘余物可通過二氧化硅色譜法或通過SCX-3(Biotage)離子交換樹脂純化或保持原樣。1.21.2.方法I1的說明性實施例：N6-(2-氟-4-甲磺?；?6-甲基-苯基)-1,N6-二甲基-1H-苯并咪唑-4,6-二胺(Int.53)的合成.Int.37(0.33mmol)在TFA(5mL)中的混合物于室溫攪拌1小時，在50℃攪拌0.5小時。濃縮混合物。殘余物分配于飽和NaHCO3與DCM之間。分離兩相，干燥(Na2SO4)有機層，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，20:80至100:0EtOAc/石油醚)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.21.3.方法I1的說明性實施例：N6,1-二甲基-N6-(2-甲基-4-甲磺?；?苯基)苯并咪唑-4,6-二胺(Int.56A)和N6-(4-乙磺?；?2-甲基-苯基)-N6,1-二甲基-苯并咪唑-4,6-二胺(Int.56B)的合成.Int.49A和49B(總計約0.61mmol)在TFA(5mL)中的混合物于室溫攪拌約16小時，在50℃攪拌3小時。濃縮混合物。殘余物分配于飽和NaHCO3與DCM之間。分離兩相，干燥(Na2SO4)有機層，濃縮?？焖僦V法(SiO2，20:80至100:0EtOAc/石油醚)產(chǎn)生預(yù)期產(chǎn)物(Int.56A，主要產(chǎn)物)連同衍生自Int.49B脫保護的副產(chǎn)物(Int.56B，次要產(chǎn)物)的混合物。1.21.4.方法I2于室溫攪拌受保護的雙-PMB胺(1當量)在DCM/TFA(3:1至1:1比率)中的混合物20分鐘至3小時。使用堿性水溶液和有機溶劑對混合物進行后處理。分離兩相，干燥有機層，濃縮。或者，可首先濃縮反應(yīng)混合物且隨后對殘余物進行上述后處理。獲自后處理的殘余物可通過二氧化硅色譜法或通過SCX-3(Biotage)離子交換樹脂純化或保持原樣。1.21.5.方法I2的說明性實施例：5-(7-氨基-3-甲基-苯并咪唑-5-基)氧基-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Cpd28)的合成.于0℃將TFA(55mL)添加至Int.51(23.1mmol)在DCM(55mL)中的溶液中。于室溫攪拌混合物20分鐘。添加甲苯，濃縮混合物。殘余物分配于DCM與飽和NaHCO3之間。分離兩相，干燥(Na2SO4)有機層，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至95:5EtOAc/MeOH)純化殘余物。用THF洗滌從柱子獲得的產(chǎn)物，得到預(yù)期產(chǎn)物(Int79)。1.21.6.方法I3于室溫攪拌受保護的雙-PMB胺(1當量)在TFA中的混合物30分鐘至約16小時。將混合物稀釋于有機溶劑中，用堿性水溶液洗滌。分離兩相，干燥有機層，濃縮?；蛘?，在洗滌之前，可首先濃縮反應(yīng)混合物。然后濃縮有機層，殘余物可通過二氧化硅色譜法或通過SCX-3(Biotage)離子交換樹脂純化或未經(jīng)任何進一步純化原樣使用。1.21.7.方法I3的說明性實施例：5-[(7-氨基-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-甲基-氨基]-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Int.62)的合成.于室溫攪拌Int.41(2.4mmol)在TFA(10mL)中的溶液3小時。稀釋(DCM)混合物，用飽和NaHCO3且隨后用5NNaOH洗滌。分離兩層，進一步用DCM萃取水層。合并有機層，干燥(經(jīng)由相分離器過濾)，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至90:10EtOAc/MeOH)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.22.4-乙基-6-甲磺?；?吡啶-3-基胺(Int.70)的合成.1.22.1.步驟i：4-乙基-2-甲磺?；?5-硝基-吡啶于室溫攪拌2-溴-4-乙基-5-硝基-吡啶(4.35mmol)和甲烷亞磺酸鈉(4.35mmol)在DMSO(10mL)中的混合物1.5小時。將混合物倒入冰-水中，攪拌直至冰已融化。過濾混合物，收集固體(預(yù)期產(chǎn)物)。1.22.2.步驟ii：4-乙基-6-甲磺酰基-吡啶-3-胺在90℃攪拌4-乙基-2-甲基磺?；?5-硝基-吡啶(4.1mmol)、NH4Cl(26.65mmol)和鐵粉(33mmol)在H2O(10mL)中的混合物1小時。停止反應(yīng)，過濾，用EtOAc萃取。干燥(Na2SO4)有機層，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物。1.23.4-乙基-5-碘-2-甲基磺?；?吡啶(Int.74)的合成.將KI(15mmol)和NaNO2(12mmol)在H2O(1.8mL)中的溶液滴加至Int.70(6mmol)和p-TsOH·H2O(18mmol)在MeCN(12mL)中的混合物中，保持溫度在10至15℃?；旌衔镌?0至15℃攪拌10分鐘，隨后于室溫攪拌1小時。將混合物冷卻至0℃，中和(飽和NaHCO3)并萃取(DCM)。干燥(Na2SO4)有機層，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，70:30石油醚/EtOAc)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。實施例2.本發(fā)明的化合物的合成2.1.通用方法：用碳酰氯衍生物?；分虚g體以獲得最終化合物其中RA可為任選取代的芳基或雜芳基；L可為NH、NMe或O；且RB可為環(huán)烷基、OMe。2.1.1.方法J1于0℃將RBCOCl(1當量)添加至中間體胺(1當量)在DCM/吡啶(2:1至5:1比率)中的溶液中。攪拌混合物40分鐘至2小時。混合物分配于有機溶劑與水溶液之間。分離兩相，干燥有機層，濃縮?；蛘?，反應(yīng)混合物可未進行后處理而濃縮。殘余物可通過二氧化硅色譜法或通過制備型HPLC或通過使用適當溶劑混合物進行沉淀來純化。2.1.2.方法J1的說明性實施例：N-(6-((6-氰基-4-乙基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基)環(huán)丙烷甲酰胺(Cpd1)的合成.于0℃將環(huán)丙烷碳酰氯(0.39mmol)添加至Int.63(0.39mmol)在1:2吡啶/DCM(2.55mL)中的溶液中。于室溫攪拌混合物40分鐘。濃縮反應(yīng)混合物，通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至97:3DCM/MeOH)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。2.1.3.方法J2將RBC(＝O)Cl(1.5至3當量)添加至中間體胺(1當量)在DCM中的溶液中，隨后添加吡啶(1.5至3當量)。攪拌混合物2小時至約16小時。混合物分配于有機溶劑與水溶液之間。分離兩相，干燥有機層，濃縮。殘余物可通過二氧化硅色譜法、通過制備型HPLC或通過使用適當溶劑混合物進行沉淀來純化。2.1.4.方法J2的說明性實施例：6-((6-氰基-4-乙基吡啶-3-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-4-基氨甲酸甲酯(Cpd4)的合成.將氯甲酸甲酯(0.33mmol)添加至Int.63(0.22mmol)在無水DCM(2.2mL)中的溶液中，隨后添加吡啶(0.33mmol)。于室溫攪拌混合物2小時?；旌衔锓峙溆贖2O與DCM之間。分離兩相，洗滌(飽和NaHCO3)有機層，干燥(Na2SO4)，濃縮。通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至95:5DCM/MeOH)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。2.2.通用方法：用羧酸衍生物?；分虚g體以獲得最終化合物其中RA可為任選取代的芳基或雜芳基；L可為：NH、NMe或O；且RC可為：環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基。2.2.1.方法K1于0℃將(COCl)2(1.4至2當量)添加至羧酸(1.5至2當量)在DCM中的溶液中。添加催化性量的DMF，于0℃攪拌反應(yīng)物30分鐘至1小時。將中間體胺(1當量)和吡啶(2至4當量)在DCM中的溶液添加至混合物中。于室溫攪拌所得混合物30分鐘至2小時?；旌衔锓峙溆谟袡C溶劑與水溶液之間。分離兩相，干燥有機層，濃縮。殘余物可通過二氧化硅色譜法、通過制備型HPLC或通過使用適當溶劑混合物進行沉淀來純化。2.2.2.方法K1的說明性實施例：(1R,2R)-N-[6-[(6-氰基-4-乙基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺(Cpd6)的合成.將(COCl)2(0.186mmol)添加至((1R,2R)-(-)-順-2-氟-環(huán)丙烷甲酸(ChemCollect，批次號1241399，0.186mmol)在DCM(1mL)中的溶液中，隨后添加DMF(2滴)。使反應(yīng)混合物于0℃攪拌1小時。將Int.65(0.093mmol)和吡啶(0.186mmol)在DCM(1mL)中的溶液添加至混合物，于室溫攪拌反應(yīng)物2小時。添加飽和NaHCO3，分離兩相。濃縮有機層。通過快速柱色譜法(SiO2，100:0至95:5DCM/MeOH)純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。2.2.3.方法K1的說明性實施例：(1R,2R)-N-[6-(N,2-二甲基-4-甲基磺?；?苯胺基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺(Cpd26)和(1R,2R)-N-[6-(4-乙基磺酰基-N,2-二甲基-苯胺基)-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺(Cpd27)的合成.將(COCl)2(0.82mmol)添加至((1R,2R)-(-)-順-2-氟-環(huán)丙烷甲酸(ABCR，批次號1242863，0.92mmol)在DCM(1mL)中的溶液中，隨后添加DMF(1滴)。使反應(yīng)混合物于0℃攪拌45分鐘。將Int.56A和Int.56B(總計約0.46mmol)與吡啶(1.85mmol)的混合物在DCM(1mL)中的溶液添加至混合物中，于室溫攪拌反應(yīng)物2小時。用DCM稀釋混合物，洗滌(H2O)，分離兩相。干燥(Na2SO4)有機層，濃縮?？焖僦V法(SiO2，20:80EtOAc/石油醚至90:10EtOAc/MeOH)產(chǎn)生化合物26和化合物27的混合物。通過制備型HPLC分離兩個組分。2.2.4.方法K2于0℃將(COCl)2(1.35至2.5當量)添加至羧酸(1.4至3當量)在DCM中的溶液中。添加催化性量的DMF，于0℃攪拌反應(yīng)物30分鐘至1小時。單獨制備中間體胺(1當量)和吡啶(1.7至4當量)在NMP或NMP/DCM中的溶液，確保中間體胺充分溶解。為有助于溶解，可加熱(溫度至多70℃)。于0℃將后一溶液滴加至含有新形成的?；然锏娜芤褐?。使所得混合物于室溫攪拌1至2小時?；旌衔锓峙溆谟袡C溶劑與水溶液之間。分離兩相，干燥有機層，濃縮。殘余物可通過二氧化硅色譜法、通過制備型HPLC或通過使用適當溶劑混合物進行沉淀來純化。2.2.5.方法K2的說明性實施例：(1R,2R)-N-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-2-氟-環(huán)丙烷甲酰胺(Cpd20)的合成.將(COCl)2(16.6mmol)添加至((1R,2R)-(-)-順-2-氟-環(huán)丙烷甲酸(ABCR，批次號1242863，17.5mmol)在DCM(70mL)中的溶液中，隨后添加DMF(200μL)。使反應(yīng)混合物于0℃攪拌45分鐘。為有助于溶解，在65℃加熱化合物28(12.5mmol)和吡啶(21.3mmol)在NMP(15mL)中的溶液，使其冷卻至室溫。于0℃將含有化合物28和吡啶的溶液添加至含有活化羧基衍生物的混合物中，于室溫攪拌反應(yīng)物45分鐘?；旌衔锓峙溆贓tOAc與飽和NaHCO3之間。分離兩相，進一步洗滌(飽和NaHCO3、NH4Cl、H2O)有機層，干燥(Na2SO4)，濃縮。通過從DCM/iPrOH中沉淀來純化粗物質(zhì)，所得固體用Et2O洗滌并真空干燥，得到預(yù)期產(chǎn)物。2.3.通用方法：水解腈基團以獲得最終化合物其中L為NH、NMe或O；RC為環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基；Z為N或CH；且R10為Me或Et。2.3.1.方法L將腈起始物質(zhì)的溶液(1當量)溶于4:1EtOH/DMSO混合物中。所得有機溶液以如下比例10:2:1有機溶液/H2O2/1NNaOH與30％H2O2/H2O和1NNaOH混合。在50℃攪拌混合物1小時?；旌衔锓峙溆谟袡C溶劑與水溶液之間。分離兩相，干燥有機層，濃縮。殘余物可通過二氧化硅色譜法、通過制備型HPLC或通過使用適當溶劑混合物進行沉淀來純化。2.3.2.方法L的說明性實施例：5-((4-(環(huán)丙烷甲酰氨基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)(甲基)氨基)-4-乙基吡啶酰胺(Cpd24)的合成.將化合物1的溶液(0.19mmol)溶于4:1EtOH/DMSO混合物(2.3mL)中。所得有機溶液與30％H2O2/H2O(0.4mL)和1NNaOH(0.23mL)混合。在50℃攪拌混合物1小時。反應(yīng)混合物分配于二氯甲烷與水之間。分離各層，經(jīng)由相分離器過濾有機層，濃縮。通過制備型HPLC純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物。2.3.3.方法M：脲合成的通用方法將羰基二(三唑)(1.5當量)添加至Cpd28(1.0當量)和吡啶(5當量)在DCM中的混合物中。然后在50℃攪拌混合物1小時。未經(jīng)任何其它處理，在50℃將所需胺RaNH2添加至溶液中，使其再攪拌1小時。通過UPLC確認反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用DCM稀釋，然后將混合物分配于水中。分離兩相，用0.25MHCl溶液、碳酸氫鈉溶液洗滌有機層，干燥，濃縮。殘余物可通過二氧化硅色譜法、通過制備型HPLC或通過使用適當溶劑混合物進行沉淀來純化。2.3.4.方法M的說明性實施例：1-[6-[(6-氰基-4-甲基-3-吡啶基)氧基]-1-甲基-苯并咪唑-4-基]-3-異丙基-脲(Cpd33)的合成將羰基(三唑)(1.07mmol)添加至Cpd28(0.71mmol)和吡啶(3.55mmol)在DCM(3mL)中的混合物中，在50℃攪拌所得混合物。2分鐘后形成沉淀,再攪拌混合物1小時。然后在50℃將甲胺(于THF中的2M溶液)(2.84mmol)添加至溶液中，使其再攪拌1小時。通過UPLC確認反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用DCM稀釋，分配于水中。分離兩相，用0.25MHCl溶液、碳酸氫鈉溶液洗滌有機層，干燥，濃縮。殘余物不經(jīng)任何進一步純化進行使用。2.4.5-[7-[[(1R,2R)-2-氟環(huán)丙烷甲?；鵠氨基]-3-甲基-苯并咪唑-5-基]氧基-4-甲基-吡啶-2-甲酰胺(Cpd32)的合成.在50℃攪拌化合物20(0.27mmol)和DMSO(0.5mL)在H2O(pH13，10mL)中的混合物72小時。過濾混合物。收集固體，通過制備型HPLC純化，得到預(yù)期產(chǎn)物。2.5.4-甲基-5-[3-甲基-7-(甲基氨基)苯并咪唑-5-基]氧基-吡啶-2-甲腈(Cpd34)和5-[7-(二甲基氨基)-3-甲基-苯并咪唑-5-基]氧基-4-甲基-吡啶-2-甲腈(Cpd35)的合成于0℃將NaH添加至Cpd28(0.36mmol)在THF(10mL)中的混合物中。30分鐘后添加MeI(0.36mmol)，使反應(yīng)混合物溫至室溫并攪拌直至完成。通過UPLC監(jiān)測完成后，將反應(yīng)物稀釋于乙酸乙酯中，用水洗滌。有機層經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并蒸發(fā)。通過制備型HPLC分離Cpd34和Cpd35。已經(jīng)按照本文所述的合成方法、采用表II中列出的中間體制備了下表III中列出的說明性的本發(fā)明的化合物和比較實施例。表IV中給出了本發(fā)明的化合物和一些比較實施例的NMR光譜數(shù)據(jù)。表II.本發(fā)明的化合物的說明性中間體表III.說明性的本發(fā)明的化合物表IV.說明性的本發(fā)明的化合物的NMR數(shù)據(jù)實施例3.比較化合物3.1.化合物A2-[4-[(3-甲基苯并咪唑-5-基)氨基]苯基]乙腈將Pd2(dba)3(0.01mmol)和Xantphos(0.01mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的混合物超聲處理，在氮氣下添加至6-溴-1-甲基-苯并咪唑(0.45mmol)、2-(4-氨基苯基)乙腈(0.58mmol)和Cs2CO3(0.62mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物中。在110℃攪拌混合物12小時。稀釋(DCM)混合物，洗滌(H2O)，干燥(相分離器，濃縮。通過制備型HPLC純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物(化合物A)。MW：262.3。MSMs'd：263.2。NMR:1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.13(1H,s),7.68(1H,dd),7.60(1H,dd),7.54(1H,d),7.32(1H,d),7.24(1H,t),6.91(1H,dd),3.77(3H,s),3.39(3H,s)。3.2.化合物B將Pd2(dba)3(0.01mmol)和Xantphos(0.01mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的混合物超聲處理，在氮氣下添加至6-溴-1-甲基-苯并咪唑(0.45mmol)、2,3-二氫-1,4-苯并二噁烯-6-胺(0.58mmol)和Cs2CO3(0.62mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的混合物中。在110℃攪拌混合物12小時。稀釋(DCM)混合物，洗滌(H2O)，干燥(相分離器，濃縮。通過制備型HPLC純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物(化合物B)。MW：281.3。MSMs'd：282.1。NMR:1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝7.94(1H,s),7.80(1H,brs),7.45(1H,d),7.05(1H,d),6.86(1H,dd),6.73(1H,dd),6.61-6.57(2H,m),4.22-4.16(4H,m),3.71(3H,s)。3.3.化合物C3-氟-4-[甲基-(3-甲基苯并咪唑-5-基)氨基]芐腈3.3.1.步驟i：3-氟-4-[(3-甲基苯并咪唑-5-基)氨基]芐腈于110℃攪拌含有6-溴-1-甲基-苯并咪唑(2.38mmol)、4-氨基-3-氟-芐腈(3.57mmol)、XPhos(0.95mmol)、Cs2CO3(7.14mmol)和Pd(OAc)2(0.71mmol)在無水甲苯(8mL)中的混合物約16小時。稀釋(EtOAc)混合物，洗滌(H2O)，干燥(Na2SO4)，濃縮，得到預(yù)期產(chǎn)物3-氟-4-[(3-甲基苯并咪唑-5-基)氨基]芐腈。3.3.2.步驟ii：3-氟-4-[甲基-(3-甲基苯并咪唑-5-基)氨基]芐腈(化合物C)于0℃將NaH(7.14mmol)添加至3-氟-4-[(3-甲基苯并咪唑-5-基)氨基]芐腈(2.38mmol)在THF(10mL)中的溶液中。攪拌混合物30分鐘。添加MeI(4.76mmol)，在3小時期間于室溫攪拌混合物。稀釋(DCM)混合物，洗滌(H2O)，濃縮。通過制備型HPLC純化殘余物，得到預(yù)期產(chǎn)物(化合物C)。MW：280.1。MSMs'd：281.0。NMR:1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.13(1H,s),7.68(1H,dd),7.60(1H,dd),7.54(1H,d),7.32(1H,d),7.24(1H,t),6.91(1H,dd),3.77(3H,s),3.39(3H,s)。3.4.化合物D該化合物的合成描述于PCT國際申請(2013)WO2013117645中。(Menet等人,2013)生物學實施例實施例4.體外分析4.1.JAK1抑制分析4.1.1.JAK1分析聚GT底物重組人JAK1催化結(jié)構(gòu)域(氨基酸850-1154；目錄號08-144)購自CarnaBiosciences。將10ngJAK1與12.5μg聚GT底物(Sigma目錄號P0275)一起在聚丙烯96孔板(Greiner，V型底)中在總體積為25μL的含或不含5μL測試化合物或媒介物(DMSO，1％終濃度)的激酶反應(yīng)緩沖液(15mMTris-HClpH7.5、1mMDTT、0.01％Tween-20、10mMMgCl2、2μM非放射性ATP、0.25μCi33P-γ-ATP(GEHealthcare，目錄號AH9968)終濃度)中培養(yǎng)。于30℃45分鐘后，通過添加25μL/孔的150mM磷酸停止反應(yīng)。使用細胞收集器(PerkinElmer)將終止的激酶反應(yīng)物全部轉(zhuǎn)移至預(yù)洗滌(75mM磷酸)的96孔過濾板(PerkinElmer目錄號6005177)。板用300μL/孔的75mM磷酸溶液洗滌6次，密封板底部。添加40μL/孔Microscint-20，密封板頂部，使用Topcount(PerkinElmer)進行讀數(shù)。通過從在媒介物存在下獲得的每分鐘計數(shù)(cpm)中減去在陽性對照抑制劑(10μM星孢素)存在下獲得的cpm計算了激酶活性。測試化合物抑制該活性的能力如下確定：RFU測試化合物＝在測試化合物存在下的樣品所測定的RFURFU對照＝具有陽性對照抑制劑的樣品所測定的RFURFU媒介物＝在媒介物存在下所測定的RFU制備化合物的劑量稀釋系列，其能夠在JAK1分析中測試劑量-響應(yīng)作用和計算各化合物的IC50。各化合物常規(guī)地在20μM濃度下、隨后1/3系列稀釋、8個點(20μM-6.67μM-2.22μM-740nM-247nM-82nM-27nM-9nM)進行測試，DMSO終濃度為1％。當化合物系列的效能增加時，制備更多的稀釋液和/或降低最高濃度(例如5μM、1μM)。4.1.2.JAK1Ulight-JAK1肽分析重組人JAK1(催化結(jié)構(gòu)域，氨基酸866-1154；目錄號PV4774)購自Invitrogen。將1ngJAK1與20nMUlight-JAK1(tyr1023)肽(PerkinElmer目錄號TRF0121)一起在白色384Opti板(PerkinElmer，目錄號6007290)中以20μL的總體積在含或不含4μL測試化合物或媒介物(DMSO，1％終濃度)的激酶反應(yīng)緩沖液(25mMMOPSpH6.8、0.01％Brij-35、5mMMgCl2、2mMDTT、7μMATP)中培養(yǎng)。于室溫60分鐘后，通過添加20μL/孔檢測混合物(1×檢測緩沖液(PerkinElmer，目錄號CR97-100C)、0.5nM銪抗磷酸酪氨酸(PT66)(PerkinElmer，目錄號AD0068)、10mMEDTA)停止反應(yīng)。使用Envision進行讀數(shù)，激發(fā)波長為320nm，在615nm處測量發(fā)射(PerkinElmer)。通過從在媒介物存在下獲得的相對熒光單位(RFU)中減去在陽性對照抑制劑(10μM星孢素)存在下獲得的RFU計算了激酶活性。測試化合物抑制該活性的能力如下確定：抑制百分數(shù)＝((在測試化合物存在下的樣品所測定的RFU-具有陽性對照抑制劑的樣品所測定的RFU)除以(在媒介物存在下所測定的RFU-具有陽性對照抑制劑的樣品所測定的RFU))×100。制備化合物的劑量稀釋系列，其能夠在JAK1分析中測試劑量-響應(yīng)作用和計算化合物的IC50。各化合物常規(guī)地在20μM濃度下、隨后1/5系列稀釋、10個點進行測試，DMSO終濃度為1％。當化合物系列的效能增加時，制備更多的稀釋液和/或降低最高濃度(例如5μM、1μM)。數(shù)據(jù)表示為來自分析的平均IC50值±平均值的標準誤差。表V.說明性的本發(fā)明的化合物的JAK1IC50值*＞500nM**＞100-500nM***＞50-100nM****0.1-50nM表VI.比較化合物的JAK1IC50值Cpd#JAK1IC50A*B*C*D*4.1.3.JAK1Ki測定分析對于測定Ki，將不同量的化合物與酶混合，隨ATP濃度變化追蹤酶促反應(yīng)。通過Km相對于化合物濃度的雙倒數(shù)繪圖(Lineweaver-Burk繪圖)測得Ki。將1ngJAK1(Invitrogen，PV4774)用于該分析。底物為50nMUlight-JAK-1(Tyr1023)肽(PerkinElmer，TRF0121)。反應(yīng)在25mMMOPS(pH6.8，0.01％)、2mMDTT、5mMMgCl2Brij-35與不同濃度的ATP和化合物中進行。如1.1.2中所述，使用Eu標記的抗磷酸酪氨酸抗體PT66(PerkinElmer，AD0068)測量磷酸化底物。在envision(PerkinElmer)上進行讀數(shù)，激發(fā)波長為320nm，隨后在615nm和665nm處發(fā)射。4.2.JAK2抑制分析4.2.1.JAK2分析聚GT底物重組人JAK2催化結(jié)構(gòu)域(氨基酸808-1132；目錄號PV4210)購自Invitrogen。將0.025mUJAK2與2.5μg聚GT底物(Sigma目錄號P0275)一起在聚丙烯96孔板(Greiner，V型底)中在總體積為25μL的含或不含5μL測試化合物或媒介物(DMSO，1％終濃度)的激酶反應(yīng)緩沖液(5mMMOPSpH7.5、9mMMgAc、0.3mMEDTA、0.06％Brij和0.6mMDTT、1μM非放射性ATP、0.25μCi33P-γ-ATP(GEHealthcare，目錄號AH9968)終濃度)中培養(yǎng)。于30℃90分鐘后，通過添加25μL/孔的150mM磷酸停止反應(yīng)。使用細胞收集器(PerkinElmer)將終止的激酶反應(yīng)物全部轉(zhuǎn)移至預(yù)洗滌(75mM磷酸)的96孔過濾板(PerkinElmer目錄號6005177)。板用300μL/孔的75mM磷酸溶液洗滌6次，密封板底部。添加40μL/孔Microscint-20，密封板頂部，使用Topcount(PerkinElmer)進行讀數(shù)。通過從在媒介物存在下獲得的每分鐘計數(shù)(cpm)中減去在陽性對照抑制劑(10μM星孢素)存在下獲得的cpm計算了激酶活性。測試化合物抑制該活性的能力如下確定：RFU測試化合物＝在測試化合物存在下的樣品所測定的RFURFU對照＝具有陽性對照抑制劑的樣品所測定的RFURFU媒介物＝在媒介物存在下所測定的RFU制備化合物的劑量稀釋系列，其能夠在JAK2分析中測試劑量-響應(yīng)作用和計算各化合物的IC50。各化合物常規(guī)地在20μM濃度下、隨后1/3系列稀釋、8個點(20μM-6.67μM-2.22μM-740nM-247nM-82nM-27nM-9nM)進行測試，DMSO終濃度為1％。當化合物系列的效能增加時，制備更多的稀釋液和/或降低最高濃度(例如5μM、1μM)。4.2.2.JAK2Ulight-JAK1肽分析重組人JAK2(催化結(jié)構(gòu)域，氨基酸866-1154；目錄號PV4210)購自Invitrogen。將0.0125mUJAK2與25nMUlight-JAK1(tyr1023)肽(PerkinElmer目錄號TRF0121)一起在白色384Opti板(PerkinElmer，目錄號6007290)中以20μL的總體積在含或不含4μL測試化合物或媒介物(DMSO，1％終濃度)的激酶反應(yīng)緩沖液(25mMHEPESpH7.0、0.01％TritonX-100、7.5mMMgCl2、2mMDTT、7.5μMATP)中培養(yǎng)。于室溫60分鐘后，通過添加20μL/孔檢測混合物(1×檢測緩沖液(PerkinElmer，目錄號CR97-100C)、0.5nM銪抗磷酸酪氨酸(PT66)(PerkinElmer，目錄號AD0068)、10mMEDTA)停止反應(yīng)。使用Envision進行讀數(shù)，激發(fā)波長為320nm，在615nm處測量發(fā)射(PerkinElmer)。通過從在媒介物存在下獲得的相對熒光單位(RFU)中減去在陽性對照抑制劑(10μM星孢素)存在下獲得的RFU計算了激酶活性。測試化合物抑制該活性的能力如下確定：抑制百分數(shù)＝((在測試化合物存在下的樣品所測定的RFU–具有陽性對照抑制劑的樣品所測定的RFU)除以(在媒介物存在下所測定的RFU–具有陽性對照抑制劑的樣品所測定的RFU))×100。制備化合物的劑量稀釋系列，其能夠在JAK2分析中測試劑量-響應(yīng)作用和計算化合物的IC50。各化合物常規(guī)地在20μM濃度下、隨后1/5系列稀釋、10個點進行測試，DMSO終濃度為1％。當化合物系列的效能增加時，制備更多的稀釋液和/或降低最高濃度(例如5μM、1μM)。數(shù)據(jù)表示為來自分析的平均IC50值±平均值的標準誤差。已經(jīng)測試了如下化合物對抗JAK2的活性，如采用本文所述的分析測定的IC50值在下表VII中給出。表VII.說明性的本發(fā)明的化合物的JAK2IC50值*＞500nM**＞100-500nM***＞50-100nM****0.1-50nM表VIII.比較化合物的JAK2IC50值Cpd#JAK2IC50A＊B＊C＊D＊4.2.3.JAK2Kd測定分析JAK2(Invitrogen，PV4210)以5nM的終濃度進行使用。在50mMHepespH7.5、0.01％Brij-35、10mMMgCl2、1mMEGTA中采用25nM激酶示蹤劑236(Invitrogen，PV5592)和2nMEu-抗-GST(Invitrogen，PV5594)在不同化合物濃度下進行結(jié)合實驗。根據(jù)制造商的操作進行示蹤劑檢測。4.3.JAK3抑制分析4.3.1.JAK3Ulight-JAK1肽分析重組人JAK3催化結(jié)構(gòu)域(氨基酸781-1124；目錄號PV3855)購自Invitrogen。將0.5ngJAK3蛋白質(zhì)與2.5μg聚GT底物(Sigma目錄號P0275)一起在聚丙烯96孔板(Greiner，V型底)中以25μL的總體積在含或不含5μL測試化合物或媒介物(DMSO，1％終濃度)的激酶反應(yīng)緩沖液(25mMTrispH7.5、0.5mMEGTA、10mMMgCl2、2.5mMDTT、0.5mMNa3VO4、5mMb-甘油磷酸、0.01％TritonX-100、1μM非放射性ATP、0.25μCi33P-γ-ATP(GEHealthcare，目錄號AH9968)終濃度)中培養(yǎng)。于30℃45分鐘后，通過添加25μL/孔的150mM磷酸停止反應(yīng)。使用細胞收集器(PerkinElmer)將終止的激酶反應(yīng)物全部轉(zhuǎn)移至預(yù)洗滌(75mM磷酸)的96孔過濾板(PerkinElmer目錄號6005177)。板用300μL/孔的75mM磷酸溶液洗滌6次，密封板底部。添加40μL/孔Microscint-20，密封板頂部，使用Topcount(PerkinElmer)進行讀數(shù)。通過從在媒介物存在下獲得的每分鐘計數(shù)(cpm)中減去在陽性對照抑制劑(10μM星孢素)存在下獲得的cpm計算了激酶活性。測試化合物抑制該活性的能力如下確定：RFU測試化合物＝在測試化合物存在下的樣品所測定的RFURFU對照＝具有陽性對照抑制劑的樣品所測定的RFURFU媒介物＝在媒介物存在下所測定的RFU制備化合物的劑量稀釋系列，其能夠在JAK3分析中測試劑量-響應(yīng)作用和計算各化合物的IC50。各化合物常規(guī)地在20μM濃度下、隨后1/5系列稀釋、10個點進行測試，DMSO終濃度為1％。當化合物系列的效能增加時，制備更多的稀釋液和/或降低最高濃度(例如5μM、1μM)。已經(jīng)測試了如下化合物對抗JAK3的活性，如采用本文所述的分析測定的IC50值在下表IX中給出。表IX.說明性的本發(fā)明的化合物的JAK3IC50值*＞500nM**＞100-500nM***＞50-100nM****0.1-50nM表X.比較化合物的JAK3IC50值Cpd#JAK3IC50C*D*4.3.2.JAK3Ki測定分析對于測定Ki，將不同量的化合物與酶混合，隨ATP濃度變化追蹤酶促反應(yīng)。通過Km相對于化合物濃度的雙倒數(shù)繪圖(Lineweaver-Burk繪圖)測得Ki。將JAK3(CarnaBiosciences，09CBS-0625B)以10ng/mL的終濃度進行使用。底物為聚(Glu,Tyr)鈉鹽(4:1),MW20000-50000(Sigma，P0275)。反應(yīng)在25mMTrispH7.5、0.01％TritonX-100、0.5mMEGTA、2.5mMDTT、0.5mMNa3VO4、5mMb-甘油磷酸、10mMMgCl2與不同濃度的ATP和化合物中進行，通過添加150mM磷酸停止。通過將樣品裝載到過濾板(使用收集器，PerkinElmer)上和隨后洗滌測定摻入到底物聚GT中的磷酸鹽。在添加閃爍液至過濾板(PerkinElmer)后，在Topcount閃爍計數(shù)器中測量聚GT中摻入的33P。4.4.TYK2抑制分析4.4.1.TYK2Ulight-JAK1肽分析重組人TYK2催化結(jié)構(gòu)域(氨基酸871-1187；目錄號08-147)購自Carnabiosciences。將5ngTYK2與12.5μg聚GT底物(Sigma目錄號P0275)一起在聚丙烯96孔板(Greiner，V型底)中以25μL的總體積在含或不含5μL測試化合物或媒介物(DMSO，1％終濃度)的激酶反應(yīng)緩沖液(25mMHepespH7.2、50mMNaCl、0.5mMEDTA、1mMDTT、5mMMnCl2、10mMMgCl2、0.1％Brij-35、0.1μM非放射性ATP、0.125μCi33P-γ-ATP(GEHealthcare，目錄號AH9968)終濃度)中培養(yǎng)。于30℃90分鐘后，通過添加25μL/孔的150mM磷酸停止反應(yīng)。使用細胞收集器(PerkinElmer)將終止的激酶反應(yīng)物全部轉(zhuǎn)移至預(yù)洗滌(75mM磷酸)的96孔過濾板(PerkinElmer目錄號6005177)。板用300μL/孔的75mM磷酸溶液洗滌6次，密封板底部。添加40μL/孔Microscint-20，密封板頂部，使用Topcount(PerkinElmer)進行讀數(shù)。通過從在媒介物存在下獲得的每分鐘計數(shù)(cpm)中減去在陽性對照抑制劑(10μM星孢素)存在下獲得的cpm計算了激酶活性。測試化合物抑制該活性的能力如下確定：抑制百分數(shù)＝((在測試化合物存在下的樣品所測定的cpm–具有陽性對照抑制劑的樣品所測定的cpm)除以(在媒介物存在下所測定的cpm–具有陽性對照抑制劑的樣品所測定的cpm))×100。制備化合物的劑量稀釋系列，其能夠在TYK2分析中測試劑量-響應(yīng)作用和計算各化合物的IC50。各化合物常規(guī)地在20μM濃度下、隨后1/3系列稀釋、8個點(20μM-6.67μM-2.22μM-740nM-247nM-82nM-27nM-9nM)進行測試，DMSO終濃度為1％。當化合物系列的效能增加時，制備更多的稀釋液和/或降低最高濃度(例如5μM、1μM)。已經(jīng)測試了如下化合物對抗TYK2的活性；如采用本文所述的分析測定的IC50值在下表XI中給出。表XI.說明性的本發(fā)明的化合物的TYK2IC50值*＞500nM**＞100-500nM***＞50-100nM****0.1-50nM表XII.比較化合物的TYK2IC50值Cpd#TYK2IC50C＊D＊4.4.2.TYK2Kd測定分析TYK2(CarnaBiosciences，09CBS-0983D)以5nM的終濃度進行使用。在50mMHepespH7.5、0.01％Brij-35、10mMMgCl2、1mMEGTA中采用50nM激酶示蹤劑236(Invitrogen，PV5592)和2nMEu-抗-GST(Invitrogen，PV5594)在不同化合物濃度下進行結(jié)合實驗。根據(jù)制造商的操作進行示蹤劑檢測。實施例5.細胞分析：5.1.JAK1、JAK2和TYK2選擇性細胞分析5.1.1.選擇性JAK1細胞分析，通過PMBC中的IFNα激活STAT1在無菌條件下通過采用LymphoPrepTM培養(yǎng)基(Axis-Shield)的密度梯度離心從血沉棕黃層中分離出外周血單核細胞(PBMC)，然后在不含Ca++Mg++的PBS中進行3個后續(xù)洗滌步驟。將PBMC再混懸于含10％(v/v)熱滅活FBS、1％Pen-Strep(100U/mL青霉素(Penicilium)和100μg/mL鏈霉素)的普通RPMI1640培養(yǎng)基中，在增濕培育箱中于37℃5％CO2下另外培養(yǎng)。在24孔板中，將PBMC以5.01006個細胞/孔接種于200μL體積的含10％(v/v)FBS和1％Pen-Strep(Invitrogen)的RPMI1640(Invitrogen)中。將PBMC于37℃5％CO2下用測試化合物處理30分鐘。將25μL10x濃縮化合物稀釋液添加至培養(yǎng)基。在測試化合物/媒介物預(yù)處理30分鐘后，通過添加25μL(10x濃縮)細胞因子觸發(fā)劑將PBMC于37℃5％CO2用終濃度為100ng/mL的重組人IFNα(PeproTech)刺激30分鐘，獲得250μL/孔的終體積。所有化合物從20μM開始、隨后1/3連續(xù)稀釋、總計8個劑量(20μM、6.6μM、2.2μM、0.74μM、0.25μM、0.082μM、0.027μM和0.009μM)單個進行測試，DMSO的終濃度為0.2％。在細胞因子刺激30分鐘后，將250μL細胞混懸液轉(zhuǎn)移至96孔V型底板，在1000rpm離心5分鐘以使細胞沉淀，隨后移除上清液。細胞沉淀物在補充有不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合液(RocheAppliedSciences，產(chǎn)品號11836170001)的100μL1×裂解緩沖液中重構(gòu)，隨后凍結(jié)樣品并在-80℃儲存。1×裂解緩沖液配備有磷酸基-STAT1Elisa試劑盒并含有磷酸酶抑制劑。使用96孔磷酸基-STAT1(Tyr701)夾心ELISA試劑盒(CellSignaling，產(chǎn)品號#7234)根據(jù)制造商說明書對磷酸化STAT1的內(nèi)源性水平進行定量。HRP活性(HRP與二級抗體結(jié)合)通過添加100μL新鮮制備的魯米諾底物(BM化學發(fā)光ELISA底物(POD)，Roche，產(chǎn)品號11582950001)、于室溫在暗處培育5分鐘來測量，在ThermoScientificLuminoskanAscent微量板發(fā)光計(200msec整合時間)中進行測量。5.1.2.選擇性JAK2細胞分析，通過PMBC中的GM-CSF激活STAT5在無菌條件下通過采用LymphoPrepTM培養(yǎng)基(Axis-Shield)的密度梯度離心從血沉棕黃層中分離出外周血單核細胞(PBMC)，然后在不含Ca++Mg++的PBS中進行3個后續(xù)洗滌步驟。將PBMC再混懸于含10％(v/v)熱滅活FBS、1％Pen-Strep(100U/mL青霉素(Penicilium)和100μg/mL鏈霉素)的普通RPMI1640培養(yǎng)基中，在增濕培育箱中于37℃5％CO2下另外培養(yǎng)。在24孔板中，將PBMC以5.0E06個細胞/孔接種于200μL體積的含10％(v/v)FBS和1％Pen-Strep(Invitrogen)的RPMI1640(Invitrogen)中。將PBMC于37℃5％CO2下用測試化合物通過向培養(yǎng)基添加25μL10x濃縮化合物稀釋液和于37℃5％CO2培養(yǎng)30分鐘進行處理。隨后，通過添加25μL/孔(10x濃縮)細胞因子觸發(fā)劑將PBMC用終濃度為0.5ng/mL的重組人GM-CSF(PeproTech)進行刺激，獲得250μL的終體積。細胞于37℃5％CO2下觸發(fā)30分鐘。所有化合物從20μM開始、隨后1/3連續(xù)稀釋、總計8個劑量(20μM、6.6μM、2.2μM、0.74μM、0.25μM、0.082μM、0.027μM和0.009μM)單個進行測試，DMSO的終濃度為0.2％。在細胞因子刺激30分鐘后，將250μL細胞混懸液轉(zhuǎn)移至96孔V型底板，在1000rpm離心5分鐘以使細胞沉淀。移除上清液。細胞沉淀物在補充有不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合液(RocheAppliedSciences，產(chǎn)品號11836170001)的100μL1×裂解緩沖液中重構(gòu)，隨后凍結(jié)樣品并在-80℃儲存。1×裂解緩沖液配備有磷酸基-STAT1Elisa試劑盒并含有磷酸酶抑制劑。使用96孔磷酸基-STAT5(Tyr694)夾心ELISA試劑盒(CellSignaling，產(chǎn)品號#7113)根據(jù)制造商說明書對磷酸化STAT5的內(nèi)源性水平進行定量。HRP活性(HRP與二級抗體結(jié)合)通過添加100μL新鮮制備的魯米諾底物(BM化學發(fā)光ELISA底物(POD)，Roche，產(chǎn)品號11582950001)、于室溫在暗處培育5分鐘來測量，在ThermoScientificLuminoskanAscent微量板發(fā)光計(200msec整合時間)中進行測量。5.1.3.選擇性TYK2細胞分析，通過NK-92細胞中的IL-12激活STAT4NK-92細胞(人惡性非霍奇金淋巴瘤，白介素-2(IL-2)依賴性天然殺傷細胞系，ATCC#CRL-2407)。NK-92細胞維持于最低必需培養(yǎng)基(MEM)α培養(yǎng)基w/o核糖核苷和脫氧核糖核苷、2mML-谷氨酰胺、2.2g/L碳酸氫鈉(Invitrogen，產(chǎn)品號22561-021)，其含有0.2mM肌醇、0.1mM2-巰基-EtOH、0.1mM葉酸、12.5％熱滅活馬血清(Invitrogen，產(chǎn)品號26050-088)、12.5％熱滅活FBS、1％Pen-Strep(100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素)和10ng/mL重組人IL-2(R&DSystems)。IL-2在各培養(yǎng)基更新步驟中新鮮添加至培養(yǎng)基中。細胞于增濕培育箱中于37℃5％CO2下培養(yǎng)。NK-92細胞的傳代培養(yǎng)部分在不含rhIL-2的普通培養(yǎng)基中洗滌一次，在24孔板中以0.5E06個細胞/孔接種于400μL體積的普通αMEM培養(yǎng)基w/orhIL-2，其含有0.2mM肌醇、0.1mM2-巰基乙醇、0.1mM葉酸、12.5％熱滅活馬血清(Invitrogen，產(chǎn)品號26050-088)、12.5％熱滅活FBS、1％Pen-Strep(Invitrogen)。NK-92細胞用測試化合物處理30分鐘，隨后通過添加50μL10x濃縮化合物稀釋液刺激rhIL-12和于37℃5％CO2下培育。在化合物/媒介物預(yù)處理30分鐘后，通過添加50μL(10x濃縮)細胞因子觸發(fā)劑將細胞于用終濃度為25ng/mL的重組人IL-12(R&DSystems，產(chǎn)品號219-IL)進行刺激，獲得500μL/孔的終體積。NK-92細胞于37℃5％CO2下用rhIL-12觸發(fā)30分鐘。所有化合物從20μM開始、隨后1/3連續(xù)稀釋、總計8個劑量(20μM、6.6μM、2.2μM、0.74μM、0.25μM、0.082μM、0.027μM和0.009μM)單個進行測試，DMSO的終濃度為0.2％。在GalliosTM流式細胞儀(BeckmanCoulter)上用流式細胞分析對rhIL-12刺激的NK-92細胞中的磷酸基-STAT4水平進行定量。在細胞因子刺激30分鐘后，通過立即向孔中添加500μL預(yù)溫熱的BDCytofix固定緩沖液(BDPhosflowTM，產(chǎn)品號554655)將細胞進行固定(立即固定細胞是為了維持磷酸化狀態(tài)，而不是使細胞離心出，推薦通過向細胞混懸液添加相同體積的預(yù)溫熱BDCytofix緩沖液來固定細胞)。細胞于37℃培育10分鐘。將固定細胞部分再混懸(1mL)，轉(zhuǎn)移至FACS管，隨后進行離心步驟(300×g，10分鐘)和移除上清液。將細胞沉淀物混合(渦旋)，通過添加1mLBDPhosflowPerm緩沖液III(BDPhosflowTM，產(chǎn)品號558050)、隨后在冰上培育30分鐘來滲透細胞。在滲透步驟后，細胞用BDPharmingenTM染色緩沖液(BDPharmingen，產(chǎn)品號554656)洗滌兩次，于300×g中間離心10分鐘和移除上清液。將沉淀物(0.5E06個細胞)再混懸于100μLBDPharmingenTM染色緩沖液中，通過將20μLPE小鼠抗STAT4(pY693)混合至細胞(BDPhosflowTM，PE小鼠抗STAT4(pY693)，產(chǎn)品號558249)進行染色，然后于室溫在暗處培育30分鐘。染色細胞用2mLBDPharmingenTM染色緩沖液洗滌一次，再混懸于500μLBDPharmingenTM染色緩沖液中，在GalliosTM流式細胞儀(BeckmanCoulter)上分析。對于所有分析，死細胞和碎片通過前向散射(FSC)和側(cè)向散射(SSC)排除。細胞因子刺激后STAT4蛋白質(zhì)磷酸化的變化通過對全部細胞因子刺激的、測試化合物和未僅刺激的樣品的100％門控部分計算X-中位或X-平均熒光強度(MFI)/孔來粗略估計。5.1.4.結(jié)果JAK1、JAK2和TYK2分析：未僅刺激樣品(無觸發(fā)劑/媒介物(0.2％DMSO)用作陽性對照(100％抑制)。僅刺激樣品(觸發(fā)劑/媒介物(0.2％DMSO))用作陰性對照(0％抑制)。使用陽性和陰性對照計算Z'和'抑制百分數(shù)(PIN)'值。抑制百分數(shù)以下計算得出：其中RCLU(觸發(fā)劑/媒介物)：在媒介物和觸發(fā)劑存在下測定的相對化學發(fā)光信號RCLU(測試化合物)：在測試化合物存在下測定的相對化學發(fā)光信號)RCLU(無觸發(fā)劑/媒介物)：在媒介物存在下不具有觸發(fā)劑所測定的相對化學發(fā)光信號。當讀數(shù)信號表示為X-平均值(細胞因子刺激的NK-92細胞中pSTAT4水平的流式細胞分析)時，則RCLU由X-平均值替換。在劑量-響應(yīng)中針對測試的化合物對PIN值繪圖，使用GraphPadPrism軟件、應(yīng)用非線形回歸(S形)曲線擬合推導(dǎo)出EC50值。5.2.肺癌和肝細胞癌細胞系分析中的JAK1突變.5.2.1.JAK1突變誘發(fā)的組成性信號傳導(dǎo)將有和無JAK1突變的癌細胞系(表I-肺癌細胞系)在存在或不存在血清的情況下培養(yǎng)4-6小時，用或不用細胞因子混合液(INFγ、IL2、IL4和IL6)刺激5、10、30和45分鐘。通過免疫印跡(細胞信號傳導(dǎo)抗體)評估JAK1、STAT1、STAT3和STAT5的磷酸化。5.2.2.使用JAK抑制劑靶向于JAK1突變體5.2.2.1.JAK-STAT路徑磷酸化：將有和無JAK1突變的癌細胞系在有或無不同濃度的JAK抑制劑的存在下進行培養(yǎng)。通過免疫印跡法在24和48小時分析細胞的有效JAK-STAT路徑抑制。表XIII.表I：說明性的肺癌細胞系*：截斷5.2.2.2.細胞存活2D分析：將有和無JAK1突變的癌細胞系在存在或不存在增加濃度的JAK抑制劑的情況下培養(yǎng)。48-72小時后，使用CellTiter-Glo發(fā)光細胞存活分析(Promega)或MTT分析測量細胞存活?；蛘?，使用CellTiter-Glo發(fā)光細胞存活分析(Promega)或MTT分析對在不同培養(yǎng)時間點和在固定濃度的JAK抑制劑下的癌細胞系的細胞存活進行分析。3D分析：將有和無JAK1突變的癌細胞系接種于半固體瓊脂培養(yǎng)基中。通過使用熒光染料在不同培養(yǎng)時間點測定細胞存活來測定多細胞集落的形成。在細胞接種后添加潛在抑制劑以分析抗致瘤作用。5.2.3.在鼠Ba/F3細胞中研究人JAK1突變(如Kan等人,2013；Staerk等人,2005；Zenatti等人,2011中所述)JAK1表達載體的構(gòu)筑：將野生型和突變體人JAK1序列定植于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中，通過定序驗證克隆。Ba/F3細胞的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染：Ba/F3細胞用293T細胞中產(chǎn)生的逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液感染。將表達人WT或突變JAK1的Ba/F3細胞在有或無IL-3的情況下培養(yǎng)4小時，通過免疫印跡評估JAK-STAT路徑的磷酸化。JAK1突變的轉(zhuǎn)化潛能通過測定當在細胞因子依賴性Ba/F3細胞中表達時各突變誘導(dǎo)自主生長的能力來評估。細胞生長在不存在細胞因子IL-3的情況下進行評估。突變體JAK1轉(zhuǎn)導(dǎo)的Ba/F3細胞系通過將它們在有或無增加濃度的JAK抑制劑的情況下培養(yǎng)來評估它們對JAK抑制劑的敏感性。48-72小時后，使用CellTiter-Glo發(fā)光細胞存活分析(Promega)或MTT分析測量細胞存活。或者，使用CellTiter-Glo發(fā)光細胞存活分析(Promega)或MTT分析在不同培養(yǎng)時間點、在固定濃度的JAK抑制劑下分析癌細胞系的細胞存活。5.2.4.JAK1突變的體內(nèi)致瘤潛能5.2.4.1.異種移植物模型：將突變體JAK1表達細胞皮下注射于CD1nu/nu小鼠或Rag1-/-小鼠中，評估腫瘤發(fā)展。建立皮下腫瘤體積生長曲線。測定原發(fā)性腫瘤向繼發(fā)性受體動物中的可移植性。5.2.4.2.PDX模型.來源于患者的異種移植物(PDX)基于直接來自患者的原發(fā)性腫瘤(含JAK1突變)向免疫缺陷小鼠中的轉(zhuǎn)移。為實現(xiàn)此舉，患者腫瘤必須從手術(shù)中新鮮獲得，此時它們被機械或化學消化，將其中小部分作為原始儲備液保存和建立于NOD-SCID小鼠中。一旦腫瘤負擔變得過高，則通過使細胞直接從小鼠繼代至小鼠來維持PDX模型。腫瘤可異位(將腫瘤植入小鼠皮下側(cè)腹)或正位(直接植入所選小鼠器官)移植。原發(fā)性和繼發(fā)性腫瘤中JAK1、STAT1、STAT3和STAT5的磷酸化通過免疫印跡進行評估。5.3.PBL增殖分析用IL-2刺激人外周血淋巴細胞(PBL)，使用BrdU并入分析測量增殖。PBL首先用PHA刺激72小時以誘發(fā)IL-2受體，隨后禁食24小時以停止細胞增殖，隨后再進行IL-2刺激72小時(包括24小時BrdU標記)。在IL-2添加之前用測試化合物預(yù)培育細胞1小時。細胞在含有10％(v/v)FBS的RPMI1640中培養(yǎng)。5.4.人全血分析(hWBA)5.4.1.方案15.4.1.1.IL-6刺激方案使用人全血進行流式細胞術(shù)分析以離體確定JAK1相對于JAK2的化合物選擇性。因此，從簽署了知情同意書的人志愿者取血。血液然后于37℃在溫和搖蕩下平衡30分鐘，然后等分在Eppendorf管中。添加不同濃度的化合物，于37℃在溫和搖蕩下培育30分鐘，隨后于37℃在溫和搖蕩下用白介素6(IL-6)(對于JAK1依賴性路徑刺激)或GM-CSF(對于JAK2依賴性路徑刺激)刺激20分鐘。然后使用FACS分析評估磷酸基-STAT1和磷酸基-STAT5。5.4.1.2.磷酸基-STAT1分析5.4.1.2.1.試劑制備將5×裂解/固定緩沖液(BDPhosFlow，目錄號558049)用蒸餾水稀釋5倍，于37℃預(yù)溫熱。棄去剩余的經(jīng)稀釋的裂解/固定緩沖液。將10μgrhIL-6(R&DSystems，目錄號206-IL)溶于1mLPBS0.1％BSA中以獲得10μg/mL儲備液。將儲備液等分，于-80℃儲存。在DMSO中制備化合物的3倍稀釋系列(10mM儲備液)。經(jīng)對照處理的樣品接受DMSO而非化合物。所有樣品用1％DMSO終濃度進行培育。5.4.1.2.2.用化合物培育血液和用IL-6刺激將人血液收集于肝素化管中。將血液分成148.5μL的等分試樣。然后，向各血液等分試樣中添加1.5μL測試化合物稀釋液，于37℃在溫和搖蕩下培育血液樣品30分鐘。向血液樣品中添加1.5微升10倍稀釋的IL-6儲備液(終濃度10ng/mL)，于37℃在溫和搖蕩下培育樣品20分鐘。5.4.1.2.3.白血球制備在刺激期結(jié)束時，立即向血液樣品中添加3mL1×預(yù)溫熱裂解/固定緩沖液，簡單渦旋，于37℃于水浴中培育15分鐘以裂解紅血球和固定白血球。將管在400×g于4℃離心5分鐘。將細胞沉淀物用3mL冷的1×PBS洗滌，離心后，將細胞沉淀物再混懸于100μL冰冷的1×PBS中，添加900μL冰冷的100％MeOH。細胞然后在4℃培育30分鐘以便滲透。然后將經(jīng)滲透的細胞用含3％BSA的1×PBS洗滌，最后再混懸于80μL含3％BSA的1×PBX中。5.4.1.2.4.用抗磷酸基-STAT1和抗CD4抗體標記細胞添加20μLPE小鼠抗STAT1(pY701)或PE小鼠IgG2aκ同型對照抗體(BDBiosciences，目錄號分別為612564和559319)和FITC結(jié)合的抗CD4抗體或?qū)φ誇ITC結(jié)合的同型抗體并混合，然后在4℃在暗處培育30分鐘。細胞然后用1×PBS洗滌一次，在FACSCantoII流式細胞儀(BDBiosciences)上進行分析。5.4.1.2.5.FACSCantoII上的熒光分析計數(shù)總共50,000個事件，在淋巴細胞門控中門控CD4+細胞后測量磷酸基-STAT1陽性細胞。使用FACSDiva軟件分析數(shù)據(jù)，由CD4+細胞上的磷酸基-STAT1陽性細胞的百分數(shù)計算IL-6刺激的抑制百分數(shù)。5.4.1.3.磷酸基-STAT5分析試劑制備將5×裂解/固定緩沖液(BDPhosFlow，目錄號558049)用蒸餾水稀釋5倍，于37℃預(yù)溫熱。棄去剩余的經(jīng)稀釋的裂解/固定緩沖液。將10μgrhGM-CSF(AbCysS.A.，目錄號P300-03)溶于100μLPBS0.1％BSA中以獲得100μg/mL儲備液。將儲備液等分儲存在-80℃。在DMSO中制備化合物的3倍稀釋系列(10mM儲備液)。經(jīng)對照處理的樣品接受DMSO而非化合物。所有樣品用1％DMSO終濃度進行培育。5.4.1.3.1.用化合物培育血液和用GM-CSF刺激將人血液收集于肝素化管中。將血液分成148.5μL的等分試樣。然后，向各等分試樣中添加1.5μL化合物稀釋液，于37℃在溫和搖蕩下培育血液樣品30分鐘。向血液樣品中添加5000倍稀釋的GM-CSF儲備液(1.5μL)(終濃度20pg/mL)，于37℃在溫和搖蕩下培育樣品20分鐘。5.4.1.3.2.白血球制備在刺激期結(jié)束時，立即向血液樣品中添加3mL1×預(yù)溫熱裂解/固定緩沖液，簡單渦旋，于37℃于水浴中培育15分鐘以裂解紅血球和固定白血球。將管在400×g于4℃離心5分鐘。將細胞沉淀物用3mL冷的1×PBS洗滌，離心后，將細胞沉淀物再混懸于100μL冰冷的1×PBS中，添加900μL冰冷的100％MeOH。細胞然后在4℃培育30分鐘以便滲透。5.4.1.3.3.用抗磷酸基-STAT5和抗CD33抗體標記細胞添加20μLPE小鼠抗STAT5(pY694)或PE小鼠IgG1κ同型對照抗體(BDBiosciences，目錄號分別為612567和554680)和APC小鼠抗CD33抗體(BDBiosciences#345800)或?qū)φ誂PC小鼠IgG1同型抗體(BDBiosciences#345818)，混合，然后在4℃在暗處培育30分鐘。細胞然后用1×PBS洗滌一次，在FACSCantoII流式細胞儀(BDBiosciences)上進行分析。5.4.1.3.4.FACSCantoII上的熒光分析計數(shù)總共50,000個事件，在CD33+細胞上門控后測量磷酸基-STAT5陽性細胞。使用FACSDiva軟件分析數(shù)據(jù)，其對應(yīng)于由CD33+細胞上的磷酸基-STAT5陽性細胞百分數(shù)計算的GM-CSF刺激的抑制百分數(shù)。5.5.方案25.5.1.刺激方案使用人全血進行流式細胞術(shù)分析以離體確定JAK1相對于JAK2的化合物選擇性。因此，從簽署了知情同意書的人志愿者取血。血液然后于37℃在溫和搖蕩下平衡30分鐘，然后等分在Eppendorf管中。添加不同濃度的化合物，于37℃在溫和搖蕩下培育30分鐘，隨后于37℃在溫和搖蕩下用白介素6(IL-6)(對于JAK1依賴性路徑刺激)、干擾素α(IFNα)(對于JAK1/TYK2路徑刺激)、白介素2(IL-2)(對于JAK1/JAK3路徑刺激)或GM-CSF(對于JAK2依賴性路徑刺激)刺激20分鐘。然后使用FACS分析評估磷酸基-STAT1(對于IL-6和IFNα刺激的細胞)和磷酸基-STAT5(對于IL-2和GM-CSF刺激的細胞)水平。5.5.2.磷酸基-STAT分析5.5.2.1.試劑制備將5×裂解/固定緩沖液(BDPhosFlow，目錄號558049)用蒸餾水稀釋5倍，于37℃預(yù)溫熱。棄去剩余的經(jīng)稀釋的裂解/固定緩沖液。將10μgrhIL-6(R&DSystems，目錄號206-IL)溶于1mLPBS+0.1％BSA中以獲得10μg/mL儲備液。將儲備液等分，于-80℃儲存。將10μgrhIL-2(R&DSystems，目錄號202-IL)溶于1mLPBS+0.1％BSA中以獲得10μg/mL儲備液。將儲備液等分，于-80℃儲存。將5μgrhGM-CSF(AbCysS.A.，目錄號P300-03)溶于12.5mLPBS+0.1％BSA中以獲得40ng/mL儲備液。將儲備液等分，于-80℃儲存。在DMSO中制備化合物的3倍稀釋系列(10mM儲備液)。經(jīng)對照處理的樣品接受DMSO而非化合物。所有樣品用1％DMSO終濃度進行培育。5.5.2.2.用化合物培育血液和用觸發(fā)劑刺激將人血液收集于肝素化管中。將血液分成148.5μL的等分試樣。然后，向各血液等分試樣中添加1.5μL測試化合物稀釋液，于37℃在溫和搖蕩下培育血液樣品30分鐘。向血液樣品中添加1.5微升10倍稀釋的IL-6儲備液、1.5μLuIFNα(PBLBiomedical，目錄號11200-1)儲備液、1.5μL25倍稀釋的IL-2儲備液或1.5μL200倍稀釋的GM-CSF儲備液，于37℃在溫和搖蕩下培育樣品20分鐘。5.5.2.3.白血球制備在刺激期結(jié)束時，立即向血液樣品中添加3mL1×預(yù)溫熱裂解/固定緩沖液，簡單渦旋，于37℃于水浴中培育15分鐘以裂解紅血球和固定白血球。將管在400×g于4℃離心5分鐘。將細胞沉淀物用3mL冷的1×PBS洗滌，離心后，將細胞沉淀物再混懸于100μL冰冷的1×PBS中，添加900μL冰冷的100％MeOH。細胞然后在4℃培育30分鐘以便滲透。然后將經(jīng)滲透的細胞用含3％BSA的1×PBS洗滌，最后再混懸于80μL含3％BSA的1×PBX中。5.5.2.4.細胞標記向IL-6和IFNα刺激管中添加20μLPE小鼠抗STAT1(pY701)或PE小鼠IgG2aκ同型對照抗體(BDBiosciences，目錄號分別為612564和559319)和APC結(jié)合的抗CD4抗體或?qū)φ誂PC結(jié)合的同型抗體(BDBiosciences，目錄號分別為555349和555751)并混合，然后在4℃在暗處培育20分鐘。向IL-2刺激管中添加20μLPE小鼠抗STAT5(pY694)或PE小鼠IgG1κ同型對照抗體(BDBiosciences，目錄號分別為612567和554680)和APC結(jié)合的抗CD4抗體或?qū)φ誂PC結(jié)合的同型抗體(BDBiosciences，目錄號分別為555349和555751)，混合，然后在4℃在暗處培育20分鐘。向GM-CSF刺激管中添加20μLPE小鼠抗STAT5(pY694)或PE小鼠IgG1κ同型對照抗體(BDBiosciences，目錄號分別為612567和554680)和APC小鼠抗CD33抗體(BDBiosciences#345800)或?qū)φ誂PC小鼠IgG1同型抗體(BDBiosciences目錄號345818)，混合，然后在4℃在暗處培育20分鐘。細胞然后用1×PBS洗滌一次，在FACSCantoII流式細胞儀(BDBiosciences)上進行分析。5.5.2.5.FACSCantoII上的熒光分析計數(shù)總共50,000個事件，在用于IL-6和IFNα刺激的細胞的淋巴細胞門控中，在CD4+細胞上門控后測量磷酸基-STAT1陽性細胞。在用于IL-2刺激的細胞的淋巴細胞門控中，在CD4+細胞上門控后測量磷酸基-STAT5陽性細胞。在CD33+細胞上門控后測量磷酸基-STAT5陽性細胞。使用FACSDiva軟件分析數(shù)據(jù)，由CD4+細胞上的磷酸基-STAT1陽性細胞的百分數(shù)計算IL-6或IFNα刺激的抑制百分數(shù)。對于IL-2刺激的細胞，使用FACSDiva軟件分析數(shù)據(jù)，由CD4+細胞上的磷酸基-STAT1陽性細胞的百分數(shù)計算IL-2刺激的抑制百分數(shù)。對于GM-CSF刺激的細胞，由CD33+細胞上的磷酸基-STAT5陽性細胞的百分數(shù)計算GM-CSF刺激的抑制百分數(shù)。實施例6.體內(nèi)模型6.1.CIA模型6.1.1.材料完全弗氏佐劑(CFA)和不完全弗氏佐劑(IFA)購自Difco。牛II型膠原蛋白(CII)、脂多醣(LPS)和Enbrel分別獲自Chondrex(Isled'Abeau,法國)；Sigma(P4252,L'Isled'Abeau,法國)、Whyett(25mg可注射注射器，法國)AcrosOrganics(PaloAlto,CA)。所用其它全部試劑為試劑級，全部溶劑為分析級。6.1.2.動物深刺豚大鼠(darkAgoutirats,雄性，7-8周齡)獲自Harlan實驗室(Maison-Alfort,法國)。大鼠保持在12小時光/暗循環(huán)(0700-1900)中。溫度維持在22℃，自由取食和飲水。6.1.3.膠原蛋白誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎(CIA)在實驗前一天，用0.05M乙酸制備CII溶液(2mg/mL)，于4℃儲存。臨免疫前，在冰水浴中在預(yù)先冷卻的玻璃瓶中通過均質(zhì)機混合相同體積的佐劑(IFA)和CII。若未形成乳液，可能需要額外佐劑和延長均質(zhì)化。在第1天給每只大鼠的尾根部皮內(nèi)注射0.2mL乳液，在第9天進行第二次加強皮內(nèi)注射(2mg/mLCII溶液在CFA0.1mL生理鹽水中)。該免疫方法由已公開的方法(Jou等人,2005；Sims等人,2004)修改而得。6.1.4.研究設(shè)計在大鼠CIA模型中測試化合物的治療作用。將大鼠隨機分成相同組，每組含有10只大鼠。所有大鼠在第1天免疫和在第9天加強。治療劑量從第16天持續(xù)至第30天。陰性對照組用媒介物(MC0.5％)處理，陽性對照組用Enbrel(10mg/kg，3×周,皮下)處理。所關(guān)注的化合物通常在3個口服劑量(例如3、10、30mg/kg)下進行測試。6.1.5.關(guān)節(jié)炎的臨床評估根據(jù)(Khachigian,2006；Lin等人,2007；Nishida等人,2004)的方法對關(guān)節(jié)炎進行評分。四個腳爪中每只的腫脹用如下的關(guān)節(jié)炎評分進行分級：0-無癥狀；1-一種類型的關(guān)節(jié)如踝或腕輕微、但明確地發(fā)紅和腫脹，或限于個體足趾的明顯發(fā)紅和腫脹，與受累足趾的數(shù)目無關(guān)；2-兩種或更多種類型的關(guān)節(jié)中度發(fā)紅和腫脹；3-整個腳爪、包括足趾重度發(fā)紅和腫脹；4-涉及多個關(guān)節(jié)的最大限度的發(fā)炎肢體(每只動物最大累積臨床關(guān)節(jié)炎評分為16)(Nishida等人,2004)。為允許對多個研究進行薈萃分析，臨床評分值如下進行標準化：臨床評分的AUC(AUC評分)：計算每只個體大鼠從第1天至第14天的曲線下面積(AUC)。各動物的AUC除以對于在獲得該動物數(shù)據(jù)的研究中的媒介物獲得的平均AUC再乘以100(即AUC表示為每個研究的平均媒介物AUC的百分數(shù))。第1天至第14天的臨床評分增加(端點評分)：各動物的臨床評分差除以對于在獲得該動物數(shù)據(jù)的研究中的媒介物獲得的平均臨床評分差再乘以100(即差表示為每個研究的媒介物的平均臨床評分差的百分數(shù))。6.1.6.關(guān)節(jié)炎發(fā)作后的體重變化(％)臨床上，體重喪失與關(guān)節(jié)炎相關(guān)(Rall和Roubenoff,2004；Shelton等人,2005；Walsmith等人,2004)。因此，關(guān)節(jié)炎發(fā)作后的體重變化可用作非特異性端點以評估治療劑在大鼠模型中的作用。關(guān)節(jié)炎發(fā)作后的體重變化(％)計算如下：6.1.7.放射學從每個個體動物的后腳爪獲取X射線像片。將隨機致盲標識號分配給每張照片，骨侵蝕的嚴重性由兩個獨立的評分者使用如下放射學拉爾森評分系統(tǒng)(Larsen'sscoresystem)進行分級：0-正常，具有完整骨輪廓和正常關(guān)節(jié)空間；1-略微異常，其中任意一個或兩個外跖骨展示出略微骨侵蝕；2-明確的早期異常，其中任意3至5個外跖骨展示出骨侵蝕；3-中度破壞性異常，其中全部外跖骨以及任意一個或兩個內(nèi)跖骨展示出確定的骨侵蝕；4-重度破壞性異常，其中全部跖骨展示出確定的骨侵蝕，并且至少一個內(nèi)跖骨關(guān)節(jié)完全侵蝕，留下一些部分被保留的骨關(guān)節(jié)輪廓；5-殘肢性異常，無骨輪廓。該評分系統(tǒng)是對(Bush等人,2002；Jou等人,2005；Salvemini等人,2001；Sims等人,2004)的修改。6.1.8.組織學在放射學分析后，將小鼠后腳爪固定于10％磷酸鹽緩沖的福爾馬林(pH7.4)中，采用用于精細組織學的快速骨脫鈣劑(LaboratoriesEurobio)脫鈣并包埋于石蠟中。為確保關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)的評估全面，切割至少四個連續(xù)切片(5μm厚)，每個連續(xù)切片之間間隔100μm。切片用蘇木精(hematoxylin)和伊紅(H&E)染色。對滑液炎癥以及骨骼與軟骨損傷進行雙盲組織學檢查。在每只腳爪中，采用四點標尺評估四個參數(shù)。參數(shù)為細胞浸潤、關(guān)節(jié)翳嚴重性、軟骨侵蝕和骨骼侵蝕。如下進行評分：1-正常、2-輕度、3-中度、4-顯著。這四個評分合計在一起，表示為另一評分，即“RA總評分”。6.1.9.跟骨的微電腦斷層掃描(μCT)分析：RA中觀察到的骨退化尤其出現(xiàn)在皮質(zhì)骨，可通過μCT分析揭示(Oste等人,2007；Sims等人,2004)。在跟骨掃描和3D容積重構(gòu)后，骨退化測定為每次滑動時存在的離散物體的數(shù)目，在垂直于骨骼縱軸上電腦模擬分離。越多的骨骼退化，就測量到越多的離散物體。分析了沿跟骨均勻分布(間隔約10.8μm)的1000片切片。6.1.10.穩(wěn)態(tài)PK在第7或11天，使用肝素鋰作為抗凝劑在如下時間點在眶后竇處取血樣：給藥前、1、3和6小時。離心全血樣品，所得血漿樣品儲存在-20℃以待分析。各測試化合物的血漿濃度通過LC-MS/MS方法進行測定，其中質(zhì)譜儀以正電噴射模式運行。使用(美國)計算藥物動力學參數(shù)，假定給藥前血漿水平等于24小時血漿水平。6.2.腫瘤學模型描述了驗證小分子對JAK2驅(qū)動的脊髓增生病的功效的體內(nèi)模型(Geron等人,2008；Wernig等人,2008)。6.3.小鼠IBD模型描述了驗證小分子對IBD的功效的體外和體內(nèi)模型(Wirtz和Neurath,2007)。6.4.小鼠哮喘模型描述了驗證小分子對哮喘的功效的體外和體內(nèi)模型(Ip等人,2006；Kudlacz等人,2008；Nials和Uddin,2008；Pernis和Rothman,2002)。6.5.通過皮內(nèi)注射IL22或IL23誘發(fā)的銀屑病樣表皮增生的鼠類模型6.5.1.材料由R&Dsystems提供了不含載體的小鼠重組IL22(582-ML-CF)。由e-Bioscience提供了不含載體的小鼠重組IL23(14-8231,CF)。6.5.2.動物Balb/c小鼠(雌性，18-20g體重)獲自CERJ(法國)。小鼠保持在12小時光/暗循環(huán)(07:00-19:00)。溫度維持在22℃，隨意取食和飲水。6.5.3.研究設(shè)計研究設(shè)計改編自Rizzo等人,2011。在第一天(D1)，將小鼠在兩個耳朵周圍刮毛。對于連續(xù)四天(D1至D4)，小鼠在通過吸入異氟烷誘發(fā)的麻醉下在右耳廓接受每日皮內(nèi)劑量的小鼠重組IL22或IL23(1μg/20μL于PBS中/0.1％BSA)，在左耳廓接受20μLPBS/0.1％BSA。從D1至D5，在IL23/IL22注射前1小時給小鼠施用測試化合物(10、30或100mg/kg，口服，qd，于MC0.5％中)或媒介物。6.5.4.疾病評估使用自動卡鉗每日測量兩只耳朵的厚度。在開始和處死時評估體重。在第五天最后給藥后2小時，處死小鼠。切下耳廓，排除軟骨。將耳廓稱重，隨后置放于含有1mLRNAlater溶液的小瓶中或甲醛中。在D4，同樣在臨給藥(T0)前和給藥后1小時、3小時、6小時，從眶后竇處采集血液樣品用于PK性質(zhì)。每組有8只小鼠。結(jié)果表示為平均值±標準誤差，使用單向方差分析、隨后相較于IL22或IL23媒介物組的Dunnett'spost-hoc檢驗進行統(tǒng)計學分析。6.5.5.組織學處死后，收集耳朵并固定于3.7％甲醛中，隨后包埋于石蠟中。進行2μm厚的切片，用蘇木精和伊紅染色。通過成像分析(Sis'Ncom軟件)測量耳表皮厚度，其中在放大率×20下每只耳取6個影像。數(shù)據(jù)表示為平均值±標準誤差，使用單向方差分析、隨后相較于IL22或IL23媒介物組的Dunnett'spost-hoc檢驗進行統(tǒng)計學分析。6.5.6.RNA提取、RT-PCR和實時PCR使用實時定量PCR測定耳組織中IL-17a、IL-22、IL-1β、LCN2和S100A9轉(zhuǎn)錄物水平。實施例7.藥物動力學、ADME和毒性分析7.1.熱力學溶解性將測試化合物以1mg/mL的濃度添加至玻璃瓶中的0.2M磷酸鹽緩沖液pH7.4或0.1M檸檬酸鹽緩沖液pH3.0。于室溫在RotatordriveSTR4(StuartScientific,Bibby)中在速度3.0下旋轉(zhuǎn)樣品24小時。在24小時后，將800μL樣品轉(zhuǎn)移至eppendorf管，在14000rpm下離心5分鐘。然后將200μL樣品上清液轉(zhuǎn)移至MultiscreenR溶解度板(Millipore,MSSLBPC50)，藉助真空歧管將上清液過濾(10-12"Hg)至干凈的Greiner聚丙烯V型底96孔板(目錄號651201)中。將5μL濾液稀釋至95μL(F20)相同緩沖液中，用于在含有標準曲線的板(Greiner，目錄號651201)中培育。從在DMSO中以因子2稀釋的10mMDMSO儲備液開始(5000μM)，然后進一步在DMSO中稀釋直至19.5μM，在DMSO中新鮮制備化合物的標準曲線。然后將自5000μM開始的3μL稀釋液系列轉(zhuǎn)移至97μL乙腈-緩沖液混合物(50/50)。終濃度范圍為2.5至150μM。板用密封墊(MA96RD-04S,www.kinesis.co.uk)密封，樣品于室溫在LC-MS(ZQ1525，來自Waters)上最佳條件下采用Quanoptimize進行測定，以測定適當?shù)姆肿淤|(zhì)量。樣品在LC-MS上以1mL/min的流速進行分析。溶劑A為15mM氨，溶劑B為乙腈。樣品在正離子噴霧下、在來自Waters的XBridgeC183.5μM(2.1×30mM)柱上運行。溶劑梯度的總運行時間為2分鐘，范圍為5％B至95％B。藉助Masslynx軟件包分析峰面積，針對標準曲線繪制樣品的峰面積以獲得化合物的溶解度。溶解度值以μM或μg/mL報道。7.2.水溶解度以DMSO中的10mM儲備液開始，在DMSO中制備化合物的連續(xù)稀釋液。將稀釋液系列轉(zhuǎn)移至F-底的96NUNCMaxisorb板(目錄號442404)，于室溫添加0.1M磷酸鹽緩沖液pH7.4或0.1M檸檬酸鹽緩沖液pH3.0。在5個相同稀釋步驟中，終濃度范圍為300μM至18.75μM。DMSO終濃度不超過3％。向各96孔板的角落點添加200μM芘，在顯微鏡上用作參照點來校正Z軸。將分析板密封，于37℃培育1小時，同時于230rpm震蕩。然后在白光顯微鏡下對板進行掃描，產(chǎn)生每種濃度的沉淀物的個體圖像。使用軟件工具分析沉淀物并轉(zhuǎn)化成可標繪在圖上的數(shù)字?；衔镲@示完全溶解的第一個濃度為所報道的濃度；然而，真實濃度位于該濃度與較高的一個稀釋步驟之間的某處。根據(jù)此方案測量的溶解度值以μg/mL報道。7.3.血漿蛋白質(zhì)結(jié)合(平衡透析)化合物于DMSO中的10mM儲備液在DMSO中以因子5稀釋。此溶液在新鮮解凍的人、大鼠、小鼠或犬血漿(BioReclamationINC)中進一步稀釋，終濃度為5μM，DMSO終濃度為0.5％(PP-Masterblock96孔(Greiner，目錄號780285)中，5.5μL于1094.5μL血漿中)。制備具有插入物的PierceRedDevice板(ThermoScientific，目錄號89809)，緩沖液室填充750μLPBS，血漿室填充500μL加標血漿。板于37℃培育4小時，同時在230rpm震蕩。在培育后，從兩室取120μL轉(zhuǎn)移至96孔圓底PP深孔板(Nunc，目錄號278743)中的360μL乙腈中，用鋁箔蓋密封。將樣品混合，置于冰上30分鐘。此板然后在1200rcf在4℃離心30分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移至96孔V型底PP板(Greiner,651201)中用于在LC-MS上分析。板用www.kinesis.co.uk的密封墊(MA96RD-04S)密封，樣品于室溫在LC-MS(ZQ1525，來自Waters)上最佳條件下采用Quanoptimize進行測定，以測定適當?shù)姆肿淤|(zhì)量。樣品在LC-MS上以1mL/min的流速進行分析。溶劑A為15mM氨，溶劑B為乙腈。樣品在正離子噴霧下、在來自Waters的XBridgeC183.5μM(2.1×30mM)柱上運行。溶劑梯度的總運行時間為2分鐘，范圍為5％B至95％B。緩沖液室和血漿室中的化合物的峰面積視為100％化合物。由這些結(jié)果推導(dǎo)出結(jié)合于血漿的百分數(shù)，報道為結(jié)合于血漿的百分數(shù)。通過指示是否觀察到沉淀的顯微鏡對最終測試濃度的化合物于PBS中的溶解度進行檢測。7.4.醛氧化酶穩(wěn)定性首先用水稀釋(5倍)測試化合物于DMSO中的10mM儲備液以獲得50μM工作溶液。醛氧化酶的選擇性抑制劑(肼屈嗪)在水中制備為5mM溶液。通過于37℃向86μL50mM磷酸鉀緩沖液pH7.4添加10μL肝S9混懸液(人和大鼠，BDBioscienceGentest，20mg/mL)來制備培育混合物。添加2μL5mM肼屈嗪(用于在添加選擇性抑制劑的情況下培育)或2μL水(用于在未添加抑制劑的情況下培育)。在5分鐘預(yù)溫熱后，通過向培育混合物中添加2μL50μM測試化合物開始反應(yīng)。在0、3、6、12、18和30分鐘培育后，用300μLMeCN:MeOH(2:1)終止反應(yīng)(100μL)，其中含10ng/mL華法林的1％乙酸混合物作為分析內(nèi)標物。混合樣品，離心，通過LC-MS分析上清液。若通過S9進行的清除被肼屈嗪抑制，則測試化合物被視為醛氧化酶的底物。測試化合物的種屬特異性清除還可指示通過醛氧化酶代謝。酞嗪(phtalazine)被包括在內(nèi)作為陽性對照。儀器反應(yīng)(測試化合物與內(nèi)標物的峰面積比率)參考零時間點樣品(視為100％)以測定剩余化合物的百分數(shù)。使用GraphPadPrism軟件，使用剩余測試化合物的百分數(shù)的曲線圖測定S9培育中的半衰期(T1/2)和內(nèi)源性清除率。為了計算體外內(nèi)源性清除率(CLint(μL/min/mg)，使用下式：7.5.肝微粒體穩(wěn)定性化合物于DMSO中的10mM儲備液在96深孔板(Greiner，目錄號780285)中在105mM磷酸鹽緩沖液pH7.4中稀釋至6μM，于37℃預(yù)溫熱。700U/mL的葡萄糖-6-磷酸去氫酶(G6PDH,Roche,10127671001)工作儲備液用因子1:700在105mM磷酸鹽緩沖液pH7.4中稀釋。含0.528MMgCl2.6H2O(Sigma,M2670)、0.528M葡萄糖-6-磷酸鹽(Sigma,G-7879)和0.208MNADP+(Sigma,N-0505)的輔因子混合物用因子1:8在105mM磷酸鹽緩沖液pH7.4中稀釋。制備含有1mg/mL所關(guān)注種屬(人、小鼠、大鼠、犬……)的肝微粒體(Xenotech)、0.8U/mLG6PDH和輔因子混合物(6.6mMMgCl2、6.6mM葡萄糖-6-磷酸鹽、2.6mMNADP+)的工作溶液。此混合物于室溫預(yù)先培育15分鐘，但從不超過20分鐘。在預(yù)培育后，化合物稀釋液和含有微粒體的混合物以等量添加至一起，在300rpm培育30分鐘。對于0分鐘的時間點，向化合物稀釋液添加兩體積的MeOH，隨后添加微粒體混合物。培育期間的終濃度為：3μM測試化合物或?qū)φ栈衔铩?.5mg/mL微粒體、0.4U/mLG6PDH、3.3mMMgCl2、3.3mM葡萄糖-6-磷酸鹽和1.3mMNaDP+。培育30分鐘后，用2體積的MeOH停止反應(yīng)。對于兩個時間點，混合、離心樣品并采集上清液用于在LC-MS/MS上分析。儀器響應(yīng)(即峰高度)參考零時間點樣品(作為100％)以測定剩余化合物的百分數(shù)。在分析法設(shè)計中包括標準化合物普萘洛爾(Propanolol)和維拉帕米(Verapamil)。微粒體穩(wěn)定性的數(shù)據(jù)表示為30分鐘后剩余化合物總量的百分數(shù)。7.6.肝細胞穩(wěn)定性評估肝細胞中代謝清除率的模型由McGinnity等人,DrugMetabolismandDisposition2008,32,11,1247進行描述。7.7.Caco2滲透性如下所述進行雙向Caco-2分析。Caco-2細胞獲自歐洲細胞培養(yǎng)物保藏中心(EuropeanCollectionofCellCultures，ECACC，目錄86010202)，在21天細胞培養(yǎng)后用于24孔Transwell板(FisherTKT-545-020B)中。在由DMEM+GlutaMAXI+1％NEAA+10％FBS(FetalCloneII)+1％Pen/Strep組成的平板培養(yǎng)基中每孔接種2×105個細胞。每2-3天更換培養(yǎng)基。在含有25mMHEPES的Hanks'平衡鹽溶液(pH7.4)中制備測試和參考化合物(普萘洛爾和若丹明123或長春花堿，均購自Sigma)，在10μM濃度下添加至Transwell集成板的頂部(125μL)或底外側(cè)(600μL)室中，DMSO終濃度為0.25％。向所有孔中的供體緩沖液中添加50μM熒光黃(Sigma)以通過監(jiān)測熒光黃滲透評定細胞層的完整性。因為熒光黃(LY)不能自由滲透親脂性屏障，所以高LY運輸度表明細胞層的完整性不佳。于37℃在定軌震蕩器以150rpm震蕩培育1小時后，從頂部(A)和基底(B)室取70μL等分試樣，添加至96孔板中100μLl含分析內(nèi)標物(0.5μM卡馬西平)的50:50乙腈:水溶液中。在含150μL來自底外側(cè)和頂側(cè)的液體的潔凈96孔板中，使用SpectramaxGeminiXS(Ex426nm和Em538nm)測量熒光黃。通過高效液體色譜法/質(zhì)譜(LC-MS/MS)測量樣品中的化合物濃度。由以下關(guān)系計算表觀滲透率(Papp)值：Papp＝[化合物]接受室最終×V接受室/([化合物]供給室初始×V供給室)/Tinc×V供給室/表面積×60×10-6cm/sV＝室容積Tinc＝培育時間表面積＝0.33cm2流出比(為來自頂部細胞表面的活性流出物的指示)使用PappB>A/PappA>B的比率計算。使用以下分析接受準則：普萘洛爾：Papp(A>B)值≥20(×10-6cm/s)若丹明123或長春花堿：Papp(A>B)值<5(×10-6cm/s)，其中流出比≥5。熒光黃滲透率：≤100nm/s7.8.MDCKII-MDR1滲透性MDCKII-MDR1細胞為Madin-Darby犬腎上皮細胞，其過表達人多藥耐藥性(MDR1)基因，編碼P-糖蛋白(P-gp)。細胞獲自荷蘭癌癥研究所(NetherlandsCancerInstitute)，在24孔Millicell細胞培養(yǎng)插入式板(Millipore,PSRP010R5)中細胞培養(yǎng)3-4天后使用。如下所述進行雙向MDCKII-MDR1滲透率分析。將3×105個細胞/毫升(1.2×105個細胞/孔)接種于由DMEM+1％Glutamax-100+1％抗生素/抗霉菌素+10％FBS(Biowest,S1810)組成的平板培養(yǎng)基中。細胞置于CO2培育箱中3-4天。接種后24小時和實驗當天更換培養(yǎng)基。在Dulbecco's磷酸鹽緩沖液生理鹽水(D-PBS，pH7.4)中制備測試和參考化合物(安潑那韋和普萘洛爾)，以10μM的終濃度(安潑那韋為0.5μM)添加至Millicell細胞培養(yǎng)插入式板集成的頂部(400μL)或底外側(cè)(800μL)室中，DMSO終濃度為1％。向所有供給緩沖液溶液添加100μM熒光黃(Sigma)以通過監(jiān)測熒光黃滲透來評定細胞單層的完整性。熒光黃為細胞旁路徑的熒光標記，其用作每個單層的內(nèi)部對照以驗證分析期間的緊密接合完整性。于37℃在定軌振蕩器以150rpm震蕩培育1小時后，從頂部(A)和基底(B)室取75μL等分試樣，添加至96孔板中225μL含有分析內(nèi)標物(10ng/mL華法林)的乙腈:水溶液(2:1)中。還在實驗開始時從供給溶液進行等分以獲得初始(Co)濃度。通過高效液體色譜法/質(zhì)譜(LC-MS/MS)測量樣品中的化合物濃度。使用FluoroscanAscentFLThermoScientific(Ex485nm和Em530nm)在含150μL液體的96孔板中從所有接受孔(底外側(cè)或頂側(cè))測量熒光黃。7.9.嚙齒動物中的藥物動力學研究7.9.1.動物Sprague-Dawley大鼠(雄性，5-6周齡)獲自Janvier(法國)。大鼠在處理前適應(yīng)至少7天，保持在12小時光/暗循環(huán)(0700-1900)。溫度維持在約22℃，隨意取食和飲水。施用測試化合物的前兩天，將大鼠在異氟烷麻醉下進行手術(shù)以在頸靜脈放置套管。手術(shù)后，將大鼠單獨圈養(yǎng)。大鼠在口服給藥前至少16小時和之后6小時禁食。隨意飲水。7.9.2.藥物動力學研究化合物配制于PEG200/生理鹽水(60/40)中用于靜脈內(nèi)途徑，配制于0.5％甲基纖維素和10％羥基丙基-β-環(huán)糊精pH3中用于口服途徑。測試化合物作為單次食道管飼形式以5mg/kg和以5mL/kg的給藥體積進行口服給藥，作為經(jīng)尾靜脈的快速濃注以1mg/kg和以5mL/kg的給藥體積進行靜脈內(nèi)給藥。每組由3只大鼠組成。在以下時間點使用肝素鋰作為抗凝劑經(jīng)由頸靜脈采集血樣：0.05、0.25、0.5、1、3、5和8小時(靜脈內(nèi)途徑)和0.25、0.5、1、3、5、8和24小時(口服途徑)?；蛘?，在以下時間點使用肝素鋰作為抗凝劑在眶后竇處采集血樣：0.25、1、3和6小時(口服途徑)。在5000rpm下離心全血樣品10分鐘，所得血漿樣品在-20℃儲存以待分析。7.9.3.血漿中化合物水平的定量各測試化合物的血漿濃度通過LC-MS/MS方法進行測定，其中質(zhì)譜儀以正電噴霧模式進行操作。7.9.4.藥物動力學參數(shù)的測定使用(美國)計算了藥物動力學參數(shù)。7.10.7天大鼠毒性研究在Sprague-Dawley雄性大鼠中以100、300和500mg/kg/天的日劑量通過管飼以5mL/kg/天的恒定劑量體積進行7天口服毒性研究以評價它們的毒性潛能和毒物動力學。測試化合物配制于HPβCD在純水中的30％(v/v)溶液中。各組包括5只主要雄性大鼠和3只衛(wèi)星動物用于毒物動力學。第四組僅以相同頻率、劑量體積和通過相同施用途徑給予HPβCD在水中的30％(v/v)溶液，其充當媒介物對照組。研究目標是確定不引起所鑒別的副反應(yīng)事件的最低劑量(無可觀察到的副作用的水平-NOAEL)。7.11.QT延長的傾向在hERG膜片鉗分析中評估了QT延長的潛能。使用通過Pulsev8.77軟件(HEKA)控制的EPC10放大器進行全細胞膜片鉗記錄。串聯(lián)電阻通常小于10MΩ，并且被補償超過60％，記錄未漏減。電極由GC150TF玻璃吸管(Harvard)制造。外浴溶液含有：135mMNaCl、5mMKCl、1.8mMCaCl2、5mM葡萄糖、10mMHEPESpH7.4。內(nèi)部膜片吸管溶液含有：100mMKgluconate、20mMKCl、1mMCaCl2、1mMMgCl2、5mMNa2ATP、2mM谷胱甘肽、11mMEGTA、10mMHEPESpH7.2。使用BiologicMEV-9/EVH-9快速灌注系統(tǒng)灌注藥物。對穩(wěn)定表達hERG通道的HEK293細胞進行全部記錄。細胞在使用兩個鉑桿(Goodfellow)錨定于記錄室中的12mM圓形蓋玻片(Germanglass,Bellco)上培養(yǎng)。hERG電流使用活化脈沖誘發(fā)至+40mV持續(xù)1000ms，隨后使用尾電流脈沖誘發(fā)至-50mV持續(xù)2000ms，保持電位為-80mV。每20s施加脈波，所有實驗于室溫進行。最終批注本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，上述描述的本質(zhì)是示例性和說明性的，其意欲解釋說明本發(fā)明及其優(yōu)選實施方案。通過常規(guī)實驗，技術(shù)人員將認識到可以在不脫離本發(fā)明宗旨的情況下作出的顯而易見的修改和變化。在所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)進行的所有這類修改意欲被囊括在其中。因此，本發(fā)明意欲不通過上述描述進行限定，而是通過以下的權(quán)利要求及其等同物進行限定。本說明書中引用的所有出版物、包括但不限于專利和專利申請引入本文作為參考，如同每篇單獨出版物被具體和單獨地指示如同全文給出那樣引入本文作為參考那樣。應(yīng)理解，各種化合物的諸如不同細胞穿透能力的因素可以導(dǎo)致體外生物化學和細胞分析中的化合物活性的差異。如本申請中給出和闡述的本發(fā)明的化合物的化學命名中至少有一些可以通過使用市售化學命名軟件程序而自動產(chǎn)生，尚未單獨進行驗證。執(zhí)行該功能的代表性程序包括由OpenEyeSoftware,Inc.出售的Lexichem命名工具和由MDL,Inc.出售的Autonom軟件工具。在指定化學名稱與描繪結(jié)構(gòu)相異的情形中，應(yīng)以描繪結(jié)構(gòu)為準。參考文獻Bundgaard，H.，1985.Designofprodrugs.Elsevier.Bush，K.A.，F(xiàn)armer，K.M.，Walker，J.S.，Kirkham，B.W.，2002.Reductionofjointinflammationandboneerosioninratadjuvantarthritisbytreatmentwithinterleukin-17receptorIgG1Fcfusionprotein.ArthritisRheum.46，802-805.doi：10.1002/art.10173Choy，E.H.S.，Panayi，G.S.，2001.CytokinePathwaysandJointInflammationinRheumatoidArthritis.N.Engl.J.Med.344，907-916.doi：10.1056/NEJM200103223441207Clegg，D.O.，Reda，D.J.，Harris，C.L.，Klein，M.A.，O’Dell，J.R.，Hooper，M.M.，Bradley，J.D.，Bingham，C.O.，Weisman，M.H.，Jackson，C.G.，Lane，N.E.，Cush，J.J.，Moreland，L.W.，Schumacher，H.R.，Oddis，C.V.，Wolfe，F(xiàn).，Molitor，J.A.，Yocum，D.E.，Schnitzer，T.J.，F(xiàn)urst，D.E.，Sawitzke，A.D.，Shi，H.，Brandt，K.D.，Moskowitz，R.W.，Williams，H.J.，2006.Glucosamine，ChondroitinSulfate，andtheTwoinCombinationforPainfulKneeOsteoarthritis.N.Eng1.J.Med.354，795-808.doi：10.1056/NEJMoa052771Constantinescu，S.N.，Girardot，M.，Pecquet，C.，2008.MiningforJAK-STATmutationsincancer.TrendsBiochem.Sci.33，122-131.doi：10.1016/j.tibs.2007.12.002Firestein，G.S.，2003.Evolvingconceptsofrheumatoidarthritis.Nature423，356-361.doi：10.1038/nature01661Geron，I.，Abrahamsson，A.E.，Barroga，C.F.，Kavalerchik，E.，Gotlib，J.，Hood，J.D.，Durocher，J.，Mak，C.C.，Noronha，G.，Soll，R.M.，Tefferi，A.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