本申請(qǐng)要求2014年1月16日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/928,130和2014年10月10日提交的美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?4/511,964的優(yōu)先權(quán)。這些申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用整體并入本文。

背景

慢性B型肝炎病毒(HBV)感染是一種顯著的全球健康問(wèn)題，其感染了超過(guò)5％的世界人口(在全世界范圍內(nèi)超過(guò)3.5億人且在美國(guó)125萬(wàn)名個(gè)體)的重要。

盡管可使用預(yù)防性HBV疫苗，但由于在大部分發(fā)展中世界中次優(yōu)的治療選擇和持續(xù)新發(fā)感染率，慢性HBV感染的負(fù)擔(dān)仍然是重大的未解決的全球醫(yī)學(xué)問(wèn)題。當(dāng)前治療不提供治愈并僅限于兩類試劑(病毒聚合酶的干擾素和核苷類似物/抑制劑)；耐藥性，低功效及抗性問(wèn)題限制了其影響。HBV的低治愈率至少部分由于共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)在受感染的干細(xì)胞核中的存在和持續(xù)性。然而，HBV DNA的持續(xù)遏制減緩了肝病進(jìn)展并且有助于預(yù)防肝細(xì)胞癌。當(dāng)前針對(duì)HBV-感染的患者的治療目標(biāo)涉及減少血清HBV DNA至低或不可檢測(cè)的水平，并且最終減少或預(yù)防硬化和肝細(xì)胞癌的發(fā)展。

本領(lǐng)域需要治療、緩解或預(yù)防HBV感染的治療劑。以單一療法或與其它HBV治療或輔助治療組合施用這些治療劑至HBV感染患者將導(dǎo)致顯著改善的預(yù)后、減退的疾病進(jìn)展及增強(qiáng)的血清轉(zhuǎn)換率。

發(fā)明概述

本文提供了用于治療有需要的受試者中的HBV感染的化合物。在一方面，本文提供了具有式I的化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在一個(gè)實(shí)施方案中，式I化合物具有式II

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，式I化合物具有式III，

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一方面，本文提供了具有式IV的化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一方面，本文提供了具有式V的化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一方面，本文提供了包含與藥學(xué)上可接受的載體一起的式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物。

在一方面，本文提供了在有需要的個(gè)體中治療HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物。

在另一方面，本文提供了在有需要的個(gè)體中根除HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物。

在另一方面，本文提供了在有需要的個(gè)體中減少與HBV感染相關(guān)的病毒載量的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物。

在另一方面，本文提供了一種在有需要的個(gè)體中減少HBV感染復(fù)發(fā)的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物。

在又一方面，本文提供了在有需要的個(gè)體中減少HBV感染的不利生理影響的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物。

本文還提供了在有需要的個(gè)體中誘導(dǎo)緩解由HBV感染引起的肝損傷的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物。

在另一方面，本文提供了在有需要的個(gè)體中減少針對(duì)HBV感染的長(zhǎng)期抗病毒療法的生理影響的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物。

在另一方面，本文提供了在有需要的個(gè)體中預(yù)防性治療HBV感染的方法，其中所述個(gè)體罹患潛伏的HBV感染，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物。

以上方法的任一種還可包括向個(gè)體施用至少一種另外的治療劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述另外的治療劑可選自但不限于由以下組成的組：HBV聚合酶抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、聚乙二醇化干擾素、病毒進(jìn)入抑制劑、病毒成熟抑制劑、衣殼組裝調(diào)節(jié)劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、親環(huán)素/TNF抑制劑、TLR-激動(dòng)劑、HBV疫苗及獨(dú)特或未知機(jī)制的試劑及其組合。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述另外的治療劑選自由以下組成的組：HBV聚合酶抑制劑、干擾素、病毒進(jìn)入抑制劑、病毒成熟抑制劑、衣殼組裝調(diào)節(jié)劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、TLR-激動(dòng)劑、和獨(dú)特或未知機(jī)制的試劑及其組合。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述另外的治療劑是逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑并且是以下的至少一種：齊多夫定、去羥肌苷、扎西他濱、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韋、恩曲他濱、恩替卡韋、阿立他濱、阿替韋拉平、利巴韋林、阿昔洛韋、泛昔洛韋、伐昔洛韋、更昔洛韋、纈更昔洛韋、替諾福韋、阿德福韋、西多福韋、依非韋侖、奈韋拉平、地拉韋啶或依曲韋林。

在組合療法的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述另外的治療劑是TLR激動(dòng)劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述TLR激動(dòng)劑是選自由以下組成的組的TLR-7激動(dòng)劑：SM360320(9-芐基-8-羥基-2-(2-甲氧基-乙氧基)腺嘌呤)和AZD 8848([3-({[3-(6-氨基-2-丁氧基-8-氧代-7,8-二氫-9H-嘌呤-9-基)丙基][3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}甲基)苯基]乙酸甲酯)。

在組合療法的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述另外的治療劑是干擾素，其中所述干擾素是可任選聚乙二醇化的任何干擾素。在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述干擾素是干擾素α(IFN-α)、干擾素β(IFN-β)、干擾素λ(IFN-λ)或干擾素γ(IFN-γ)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述干擾素是干擾素-α-2a、干擾素-α-2b、干擾素-α-n1、聚乙二醇化干擾素-α-2a或聚乙二醇化干擾素-α-2b。

在本文提供的任何方法中，所述方法可另外包括向個(gè)體施用至少一種HBV疫苗、核苷HBV抑制劑或其任何組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述HBV疫苗是以下的至少一種：RECOMBIVAX HB、ENGERIX-B、ELOVAC B、GENEVAC-B或SHANVAC B。

在本文提供的方法的另一個(gè)實(shí)施方案中，與單獨(dú)施用在有需要的個(gè)體中獲得類似的預(yù)防性治療HBV感染結(jié)果所需的至少一種另外的治療劑相比，施用式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物允許以較低的劑量或頻率施用至少一種另外的治療劑。

在本文提供的方法的另一個(gè)實(shí)施方案中，與施用選自由HBV聚合酶抑制劑、干擾素、病毒進(jìn)入抑制劑、病毒成熟抑制劑、獨(dú)特衣殼組裝調(diào)節(jié)劑、獨(dú)特或未知機(jī)制的抗病毒化合物及其任何組合組成的組的化合物相比，施用式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物以更大的程度或更快的速率減少個(gè)體中的病毒載量。

在本文提供的方法的另一個(gè)實(shí)施方案中，與施用選自由HBV聚合酶抑制劑、干擾素、病毒進(jìn)入抑制劑、病毒成熟抑制劑、不同衣殼組裝調(diào)節(jié)劑、獨(dú)特或未知機(jī)制的抗病毒化合物及其組合組成的組的化合物相比，施用式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物引起更低的病毒突變和/或病毒抗性發(fā)生率。

在另一方面，本文提供了在有需要的個(gè)體中治療HBV感染的方法，其包括通過(guò)向所述個(gè)體單獨(dú)施用或與逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑組合施用治療有效量的式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va化合物；和進(jìn)一步向所述個(gè)體施用治療有效量的HBV疫苗而減少HBV病毒載量。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑是以下的至少一種：齊多夫定、去羥肌苷、扎西他濱、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韋、恩曲他濱、恩替卡韋、阿立他濱、阿替韋拉平、利巴韋林、阿昔洛韋、泛昔洛韋、伐昔洛韋、更昔洛韋、纈更昔洛韋、替諾福韋、阿德福韋、西多福韋、依非韋侖、奈韋拉平、地拉韋啶或依曲韋林

在本文提供的方法的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括監(jiān)測(cè)HBV病毒載量，并且其中所述方法進(jìn)行一段時(shí)間使得HBV病毒不可檢測(cè)。

發(fā)明詳述

本文提供了可用于治療和預(yù)防人中的HBV感染的化合物。在非限制性方面，這些化合物可通過(guò)與HBV衣殼相互作用調(diào)節(jié)或破壞產(chǎn)生感染性顆粒所必需的HBV組裝和其它HBV核蛋白功能以得到具有極大減少的病毒性的缺陷型病毒顆粒。本發(fā)明的化合物具有有效的抗病毒活性，呈現(xiàn)有利的代謝、組織分布、安全性和藥學(xué)特性，且適用于人。

HBV衣殼蛋白在病毒生命周期期間起到關(guān)鍵作用。HBV衣殼/核蛋白形成在胞間傳代期間保護(hù)病毒基因組的亞穩(wěn)態(tài)病毒顆?；虻鞍踪|(zhì)殼，并且還在病毒復(fù)制過(guò)程中起到關(guān)鍵作用，該病毒復(fù)制過(guò)程包括基因組衣殼化、基因組復(fù)制及病毒粒子形態(tài)形成和排出。衣殼結(jié)構(gòu)還響應(yīng)于環(huán)境信號(hào)以使得在病毒進(jìn)入后脫殼。自始至終，已發(fā)現(xiàn)適當(dāng)?shù)囊職そM裝和核蛋白的功能對(duì)病毒感染來(lái)說(shuō)是關(guān)鍵的。

HBV衣殼蛋白的至關(guān)重要的功能對(duì)病毒衣殼蛋白序列施加了嚴(yán)格的進(jìn)化限制，從而導(dǎo)致觀察到的低序列可變性和高保守性。自始至終，HBV衣殼中破壞其組裝的突變是致命的，并且干擾衣殼穩(wěn)定性的突變嚴(yán)重減弱病毒復(fù)制。藥物靶標(biāo)越保守，患者所需的復(fù)制-感受態(tài)抗性突變?cè)缴?。?shí)際上，慢性感染患者HBV衣殼中的天然突變?cè)谌L(zhǎng)蛋白質(zhì)中的183個(gè)殘基中僅累積四個(gè)殘基。因此，HBV衣殼組裝和功能抑制劑可相對(duì)于現(xiàn)存的HBV抗病毒引發(fā)了較低的耐藥性發(fā)生率。此外，當(dāng)與靶向傳統(tǒng)的神經(jīng)氨酸苷酶酶活性位點(diǎn)的藥物相比時(shí)，靶向HBV衣殼的藥物療法可能更不傾向于耐藥性突變。描述結(jié)合病毒衣殼和抑制HIV、鼻病毒和HBV的復(fù)制的化合物的報(bào)道為病毒衣殼蛋白作為抗病毒藥物靶提供了強(qiáng)藥理學(xué)概念證明。

在一方面，本發(fā)明的化合物可通過(guò)破壞、加速、減少、延緩和/或抑制不成熟或成熟顆粒的正常病毒衣殼組裝和/或拆卸，從而誘導(dǎo)異常衣殼形態(tài)并導(dǎo)致抗病毒作用諸如破壞病毒粒子組裝和/或拆卸、病毒粒子成熟和/或病毒排出而用于HBV治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，衣殼組裝的干擾劑與成熟或不成熟病毒衣殼相互作用以擾亂衣殼的穩(wěn)定性，從而影響組裝和/或拆卸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，衣殼組裝的干擾劑干擾病毒衣殼的穩(wěn)定性、功能和/或正常形態(tài)所需的蛋白質(zhì)折疊和/或鹽橋，從而破壞和/或加速衣殼組裝和/或拆卸。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物結(jié)合衣殼并改變細(xì)胞多蛋白和前體代謝，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)單體和/或寡聚體和/或異常顆粒的異常累積，這導(dǎo)致細(xì)胞毒性和受感染的細(xì)胞的死亡。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物導(dǎo)致具有最佳穩(wěn)定性的衣殼的形成失敗，從而影響病毒的有效脫殼/或拆卸(如在感染期間)。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物當(dāng)衣殼蛋白不成熟時(shí)破壞和/或加速衣殼組裝和/或拆卸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物當(dāng)衣殼蛋白成熟時(shí)破壞和/或加速衣殼組裝和/或拆卸。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物在病毒感染期間破壞和/或加速衣殼組裝和/或拆卸。在又一個(gè)實(shí)施方案中，破壞和/或加速衣殼組裝和/或拆卸減弱了HBV病毒感染和/或減少病毒載量。在又一個(gè)實(shí)施方案中，破壞、加速、抑制、延緩和/或減少衣殼組裝和/或拆卸從宿主生物體根除了病毒。在又一個(gè)實(shí)施方案中，從宿主根除HBV有利地消除了對(duì)慢性長(zhǎng)期療法的需求和/或縮短了長(zhǎng)期療法的持續(xù)時(shí)間。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所述的化合物適用于單一療法并且有效抵抗天然或自然HBV菌株且抵抗對(duì)當(dāng)前已知藥物耐受的HBV菌株。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文所述的化合物適用于組合療法中。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可用于調(diào)節(jié)(如抑制或破壞)HBV cccDNA的活性、穩(wěn)定性、功能和病毒復(fù)制性質(zhì)的方法中。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可用于減弱或預(yù)防HBV cccDNA形成的方法中。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可用于調(diào)節(jié)(如抑制或破壞)HBV cccDNA活性的方法中。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可用于減弱或預(yù)防HBV cccDNA形成的方法中。

定義

以下列出了用于描述本發(fā)明的各種術(shù)語(yǔ)的定義。這些定義當(dāng)在本說(shuō)明書和權(quán)利要求書全文中單獨(dú)或作為較大組的一部分使用時(shí)，除非在特定情況下另外限制否則適用于術(shù)語(yǔ)。

除非另外定義否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)通常具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。一般來(lái)講，本文所用的命名和細(xì)胞培養(yǎng)、分子遺傳學(xué)、有機(jī)化學(xué)和肽化學(xué)中的實(shí)驗(yàn)室程序是本領(lǐng)域熟知和普遍采用的那些。

如本文所用，冠詞“一個(gè)”和“一種”是指一個(gè)或一個(gè)以上(即至少一個(gè))的物品語(yǔ)法主題。舉例來(lái)說(shuō)，“一種要素”意指一個(gè)要素或一個(gè)以上的要素。此外，使用術(shù)語(yǔ)“包括(including)”以及其它形式諸如“包括(include)”、“包括(includes)”和“包括(included)”不是限制性的。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“約”將由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員理解并且將在使用其的前后文下作出一定程度的變化。如本文所用，當(dāng)指代可測(cè)量的值諸如量、時(shí)持續(xù)時(shí)間等時(shí)，術(shù)語(yǔ)“約”意在涵蓋從指定值變化±20％或±10％，更優(yōu)選±5％，甚至更優(yōu)選±1％，且仍更優(yōu)選±0.1％，使得變化適當(dāng)進(jìn)行公開(kāi)的方法。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“衣殼組裝調(diào)節(jié)劑”是指破壞或加速或抑制或阻礙或延緩或減少或修飾正常衣殼組裝(如在成熟期間)或正常衣殼拆卸(如在感染期間)或干擾衣殼穩(wěn)定性、從而誘導(dǎo)異常衣殼形態(tài)和功能的化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，衣殼組裝調(diào)節(jié)劑加速衣殼組裝或拆卸，從而誘導(dǎo)異常衣殼形態(tài)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，衣殼組裝調(diào)節(jié)劑與主要衣殼組裝蛋白質(zhì)(CA)相互作用(如在活性位點(diǎn)結(jié)合、在變構(gòu)位點(diǎn)結(jié)合、修飾和/或阻礙折疊等)，從而破壞衣殼組裝或拆卸。在又一個(gè)實(shí)施方案中，衣殼組裝調(diào)節(jié)劑導(dǎo)致CA的結(jié)構(gòu)或功能(如CA組裝、拆卸、結(jié)合至底物、折疊成適合的構(gòu)象等的能力)擾動(dòng)，這減弱了病毒感染和/或?qū)Σ《局滤馈?/p>

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“治療(treatment)”或“治療(treating)”被定義為出于治愈、愈合、減輕、緩解、改變、補(bǔ)救、改善、改良或影響HBV感染、HBV感染癥狀或出現(xiàn)HBV感染的潛能的目的，向患者施加或施用治療劑即本發(fā)明的化合物(單獨(dú)或與另一種藥劑組合)或者向患者經(jīng)分離的組織或細(xì)胞系施加或施用治療劑(如用于診斷或離體應(yīng)用)，該患者具有HBV感染、HBV感染癥狀或發(fā)展HBV感染的潛能。此類治療可基于從藥物基因組學(xué)領(lǐng)域獲得的知識(shí)被特別調(diào)整或修改。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“預(yù)防(prevent)”或“預(yù)防(prevention)”意指如果沒(méi)有病癥或疾病發(fā)生，則沒(méi)有病癥或疾病發(fā)展，或如果病癥或疾病已經(jīng)發(fā)展，則沒(méi)有進(jìn)一步病癥或疾病發(fā)展。還考慮了預(yù)防一些或所有與病癥或疾病相關(guān)的癥狀的能力。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“患者”、“個(gè)體”或“受試者”是指人或非人哺乳動(dòng)物。非人哺乳動(dòng)物包括例如家畜和寵物，諸如綿羊、牛科動(dòng)物、豬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物和鼠科動(dòng)物哺乳動(dòng)物。優(yōu)選地，患者、受試者或個(gè)體是人。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“有效量”、“藥學(xué)上有效量”和“治療有效量”是指無(wú)毒但足以得到期望生物結(jié)果的試劑量。此結(jié)果可為疾病的體征、癥狀或病因減少和/或減輕，或生物系統(tǒng)的任何其它期望改變。任一個(gè)體病例中的適當(dāng)?shù)闹委熈靠捎杀绢I(lǐng)域的普通技術(shù)人員使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”是指不消除化合物的生物活性或性質(zhì)并且是相對(duì)無(wú)毒的材料，諸如載體或稀釋劑，即所述材料可施用給個(gè)體而不引起不利的生物作用或以不利方式與含有所述材料的組合物的任何組分相互作用。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指經(jīng)公開(kāi)的化合物的衍生物，其中母體化合物通過(guò)轉(zhuǎn)化現(xiàn)存的酸或堿部分為其鹽形式。藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括但不限于堿性殘基諸如胺的礦物或有機(jī)酸鹽；酸性殘基諸如羧酸的堿或有機(jī)鹽；等。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽包括例如從無(wú)毒無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸形成的母體化合物的常見(jiàn)無(wú)毒性鹽。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可通過(guò)常規(guī)化學(xué)方法從含有堿性或酸性部分的母體化合物合成。通常，此類鹽可通過(guò)使這些化合物的游離酸或堿形式與化學(xué)計(jì)量量的適當(dāng)?shù)膲A或酸在水或有機(jī)溶劑或這兩者的混合物中反應(yīng)制備；通常，非水性媒介如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。適合的鹽的列表見(jiàn)于Remington's Pharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418頁(yè)以及Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)，其各自通過(guò)引用以其整體并入本文。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“組合物”或“藥物組合物”是指至少一種本發(fā)明內(nèi)可使用的化合物與藥學(xué)上可接受的載體的混合物。所述藥物組合物促進(jìn)施用化合物給患者或受試者。多種施用化合物的技術(shù)存在于本領(lǐng)域中，包括但不限于靜脈內(nèi)、經(jīng)口、氣霧劑、胃腸外、眼用、經(jīng)肺和局部施用。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”意指藥學(xué)上可接受的材料、組合物或載體，諸如液體或固體填充劑、穩(wěn)定劑、分散劑、助懸劑、稀釋劑、賦形劑、增稠劑、溶劑或包封材料，其參與運(yùn)載或運(yùn)輸本發(fā)明內(nèi)可使用的化合物到患者體內(nèi)或患者使得其可執(zhí)行其預(yù)期功能。通常，此類構(gòu)建體從身體的一個(gè)器官或一部分運(yùn)載或運(yùn)輸?shù)缴眢w的另一個(gè)器官或部分。每種載體在與制劑的其它成分(包括本發(fā)明內(nèi)可使用的化合物)相容方面必需是“可接受的”，并且不損害患者?？捎米魉帉W(xué)上可接受的載體的材料的一些實(shí)例包括：糖，諸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；粉末化黃芪膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可脂和栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，諸如氫氧化鎂和氫氧化鋁；表面活性劑；藻酸；無(wú)熱原水；等離子鹽水；林格氏溶液(Ringer’s solution)；乙醇；磷酸鹽緩存溶液；和藥物制劑中采用的其它非毒性可相容物質(zhì)。如本文所用，“藥學(xué)上可接受的載體”還包括可與本發(fā)明內(nèi)可使用的化合物的活性相容且對(duì)患者是生理上可接受的任何和所有包衣、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑和吸收延緩劑等。補(bǔ)充性活性化合物還可摻入組合物中?！八帉W(xué)上可接受的載體”還可包括本發(fā)明內(nèi)可使用的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽?？砂诒景l(fā)明實(shí)踐中使用的藥物組合物中的其它另外的成分是本領(lǐng)域已知的，并且描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences(Genaro,Ed.,Mack Publishing Co.,1985,Easton,PA)中，該文獻(xiàn)通過(guò)引用并入本文。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“烷基”自身或作為另一取代基的一部分除非另有說(shuō)明否則意指具有指定數(shù)目的碳原子的直鏈或支鏈烴(即C_1-6意指一至六個(gè)碳原子)，并且包括直鏈、支鏈或環(huán)狀取代基基團(tuán)。實(shí)例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基和環(huán)丙基甲基。最優(yōu)選的是(C_1-6)烷基，特別是乙基、甲基、異丙基、異丁基、正戊基、正己基和環(huán)丙基甲基。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“鹵代”或“鹵素”單獨(dú)或作為另一取代基的一部分除非另有說(shuō)明，否則意指氟、氯、溴或碘原子，優(yōu)選氟、氯或溴，更優(yōu)選氟或氯。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指單環(huán)或多環(huán)非芳族基，其中形成環(huán)的每個(gè)原子(即骨架原子)是碳原子。在一個(gè)實(shí)施方案中，環(huán)烷基基團(tuán)是飽和或部分飽和的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，環(huán)烷基基團(tuán)與芳族環(huán)稠合。環(huán)烷基基團(tuán)包括具有3至10個(gè)環(huán)原子的基團(tuán)(C_3-10環(huán)烷基)，或具有3至7個(gè)環(huán)原子的基團(tuán)(C_3-7環(huán)烷基)。環(huán)烷基基團(tuán)的說(shuō)明性實(shí)例包括但不限于以下部分：

單環(huán)環(huán)烷基包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。二環(huán)環(huán)烷基包括但不限于四氫萘基、二氫茚基和四氫戊搭烯。多環(huán)環(huán)烷基包括金剛硼和降冰片烷。術(shù)語(yǔ)環(huán)烷基包括“不飽和的非芳族碳環(huán)基”或“非芳族不飽和碳環(huán)基”基團(tuán)，這兩者是指如本文所定義的非芳族碳環(huán)，其含有至少一個(gè)碳碳雙鍵或一個(gè)碳碳三鍵。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)烷基”或“雜環(huán)基”是指含有一至四個(gè)各自選自O(shè)、S和N的環(huán)雜原子的雜脂環(huán)族基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)雜環(huán)烷基基團(tuán)在其環(huán)系統(tǒng)中具有4至10個(gè)原子，前提是所述基團(tuán)的環(huán)不含有兩個(gè)相鄰的O或S原子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，雜環(huán)烷基基團(tuán)與芳族環(huán)稠合。在一個(gè)實(shí)施方案中，氮和硫雜原子可任選地被氧化，并且氮原子可任選地被季銨化。除非另有說(shuō)明，否則所述雜環(huán)系統(tǒng)可連接在任何雜原子或碳原子處，這得到了穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。雜環(huán)在性質(zhì)上可為芳族或非芳族。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述雜環(huán)是雜芳基。

3-元雜環(huán)烷基基團(tuán)的實(shí)例包括且不限于氮丙啶。4-元雜環(huán)烷基基團(tuán)的實(shí)例包括且不限于氮雜環(huán)丁烷和β內(nèi)酰胺。5-元雜環(huán)烷基基團(tuán)的實(shí)例包括且不限于吡咯烷、噁唑烷和噻唑烷二酮。6-元雜環(huán)烷基基團(tuán)的實(shí)例包括且不限于哌啶、嗎啉和哌嗪。雜環(huán)烷基基團(tuán)的其它非限制性實(shí)例是：

非芳族雜環(huán)的實(shí)例包括單環(huán)基團(tuán)諸如氮丙啶、環(huán)氧乙烷、環(huán)硫乙烷、氮雜環(huán)丁烷、氧雜環(huán)丁烷、硫雜環(huán)丁烷、吡咯烷、吡咯啉、吡唑烷、咪唑啉、二氧戊環(huán)、環(huán)丁砜、2,3-二氫呋喃、2,5-二氫呋喃、四氫呋喃、噻吩烷、哌啶、1,2,3,6-四氫吡啶、1,4-二氫吡啶、哌嗪、嗎啉、硫代嗎啉、吡喃、2,3-二氫吡喃、四氫吡喃、1,4-二噁烷、1,3-二噁烷、高哌嗪、高哌啶、1,3-二氧庚環(huán)、4,7-二氫-1,3-二氧雜環(huán)庚烷和環(huán)氧己烷。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“芳族”是指具有一個(gè)或多個(gè)多不飽和環(huán)且具有芳族特性的碳環(huán)或雜環(huán)，即具有(4n+2)個(gè)離域π(pi)電子，其中n是整數(shù)。

如本文所用，單獨(dú)或與其它術(shù)語(yǔ)組合使用的術(shù)語(yǔ)“芳基”除非另有說(shuō)明否則意指含有一個(gè)或多個(gè)環(huán)(通常是一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)環(huán))的碳環(huán)芳族系統(tǒng)，其中此類環(huán)可以懸垂方式連接在一起諸如聯(lián)苯基或可稠合諸如萘。芳基基團(tuán)的實(shí)例包括苯基、蒽基和萘基。優(yōu)選的實(shí)例是苯基和萘基，最優(yōu)選的是苯基。在一些實(shí)施方案中，芳基基團(tuán)具有六個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方案中，芳基基團(tuán)具有六至十個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方案中，芳基基團(tuán)具有六至十六個(gè)碳原子。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“雜芳基”或“雜芳族”是指具有芳族特征的雜環(huán)。在一些實(shí)施方案中，雜芳基或雜芳族基團(tuán)具有兩至五個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方案中，雜芳基或雜芳族基團(tuán)具有兩至十個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方案中，雜芳基或雜芳族基團(tuán)具有兩至十六個(gè)碳原子。多環(huán)雜芳基可包括一個(gè)或多個(gè)部分飽和的環(huán)。在一些實(shí)施方案中，多環(huán)雜芳基基團(tuán)具有兩至五個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方案中，多環(huán)雜芳基基團(tuán)具有兩至十個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方案中，多環(huán)雜芳基基團(tuán)具有兩至十六個(gè)碳原子。實(shí)例包括以下部分：

雜芳基基團(tuán)的實(shí)例還包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基(特別是2-和4-嘧啶基)、噠嗪基、噻吩基、呋喃基、吡咯基(特別是2-吡咯基)、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基(特別是3-和5-吡唑基)、異噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,3,4-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,3,4-噻二唑基和1,3,4-噁二唑基。

多環(huán)雜環(huán)和雜芳基的實(shí)例包括吲哚基(特別是3-、4-、5-、6-和7-吲哚基)、吲哚啉基、喹啉基、四氫喹啉基、異喹啉基(特別是1-和5-異喹啉基)、1,2,3,4-四氫異喹啉基、噌啉基、喹喔啉基(特別是2-和5-喹喔啉基)、喹唑啉基、酞嗪基、1,8-萘啶基、1,4-苯丙二噁烷基、香豆素、二氫香豆素、1,5-萘啶基、苯并呋喃基(特別是3-、4-、5-、6-和7-苯并呋喃基)、2,3-二氫苯并呋喃基、1,2-苯并異噁唑基、苯丙噻吩基(特別是3-、4-、5-、6-和7-苯丙噻吩基)、苯丙噁唑基、苯丙噻唑基(特別是2-苯丙噻唑基和5-苯丙噻唑基)、嘌呤基、苯丙咪唑基(特別是2-苯丙咪唑基)、苯丙三唑基、硫代黃嘌呤基、咔唑基、咔啉基、吖啶基、吡咯嗪烷基和喹唑啉基。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“經(jīng)取代的”意指原子或原子基團(tuán)將氫替代為連接至另一基團(tuán)的取代基。術(shù)語(yǔ)“經(jīng)取代的”還指任何的取代水平，即單-、二-、三-、四-或五-取代，其中允許此類取代。所述取代基經(jīng)獨(dú)立地選擇，并且取代可在任何化學(xué)可接近的位置處。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述取代基的數(shù)目在一至四個(gè)之間變化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述取代基的數(shù)目在一至三個(gè)之間變化。在又一個(gè)實(shí)施方案中，數(shù)目在一至兩個(gè)之間變化。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“ddA”是指2’,3’-雙脫氧腺甘。

本發(fā)明的化合物

本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)可用于治療和預(yù)防人中的HBV感染的化合物。在一方面，本發(fā)明的化合物可通過(guò)以下用于HBV治療中：破壞、加速、減少延緩或抑制不成熟或成熟顆粒的正常病毒衣殼組裝或拆卸，從而誘導(dǎo)異常衣殼形態(tài)學(xué)并導(dǎo)致抗病毒作用諸如破壞病毒粒子組裝或拆卸或者病毒粒子成熟或病毒排出。

在另一方面，本發(fā)明的化合物結(jié)合至核蛋白，從而誘導(dǎo)異常病毒粒子并導(dǎo)致抗病毒作用諸如破壞病毒粒子組裝、拆卸、成熟或病毒排出。

本文公開(kāi)的衣殼組裝干擾劑可用作單一療法或用于跨類組合方案中，以用于治療人中的HBV感染。與展現(xiàn)不同作用機(jī)制(MOA)在病毒生命周期的不同步驟起作用的藥物一起的組合療法可由于累加或協(xié)同抗病毒作用而給予更佳的功效。臨床評(píng)估的HIV治療方案顯示了組合療法改善了病毒載量減少的功效并且顯著減少了抗病毒抗性的出現(xiàn)。用于治療丙型肝炎(HCV)病毒感染的組合療法還導(dǎo)致持續(xù)抗病毒響應(yīng)和根除率顯著改善。因此，與例如神經(jīng)氨酸苷酶藥物組合的本發(fā)明的HBV衣殼組裝抑制劑的用途可能比當(dāng)前標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理給予更深刻的抗病毒作用和更高的疾病根除率。

衣殼組裝在HBV基因組復(fù)制中起關(guān)鍵作用。HBV聚合酶結(jié)合前基因組HBV RNA(pgRNA)，并且pgRNA衣殼化必須在HBV DNA合成之前發(fā)生。此外，眾所周知在核苷遏制療法的存在下負(fù)責(zé)維持慢性HBV復(fù)制的cccDNA復(fù)制中間體的核累積需要衣殼梭動(dòng)HBV DNA至核。因此，當(dāng)單獨(dú)使用或與現(xiàn)存核苷藥物組合使用時(shí)，本發(fā)明的HBV衣殼組裝干擾劑具有通過(guò)病毒基因組復(fù)制的協(xié)同或累加遏制提高HBV根除率并進(jìn)一步減少cccDNA累積的的潛力。本發(fā)明的衣殼組裝干擾劑還可改變正常核蛋白功能或降解，從而潛在導(dǎo)致改變MHC-1抗原呈遞，這繼而可通過(guò)免疫刺激活性提高血清轉(zhuǎn)化率/根除率，從而更有效清除感染的細(xì)胞。

在一方面，耐藥性對(duì)針對(duì)慢性HBV感染的當(dāng)前療法產(chǎn)生了主要威脅，并且跨類組合療法是一種證明可用于延緩耐藥性菌株出現(xiàn)的策略。本發(fā)明的衣殼組裝干擾劑當(dāng)單獨(dú)施用或與其它HBV療法組合施用時(shí)可提供增強(qiáng)的耐藥性特性和改善的慢性HBV治療。

本發(fā)明內(nèi)使用的化合物可使用有機(jī)合成領(lǐng)域熟知的技術(shù)合成。合成所需的原料和中間體可從商業(yè)來(lái)源獲得或根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法合成。

在一方面，本發(fā)明的化合物是式I化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽；

其中

R⁴是H或C₁-C₃烷基；

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-O-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、R⁶或OR⁶，其中R⁶在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

Cy是

R⁷和R⁸在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)任選地被C₁-C₃烷基取代；

或者R⁷和R⁸連結(jié)形成3-至10-元環(huán)；

R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-O-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

R¹²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為H或-C₁-C₆烷基；

R¹³和R¹⁴連結(jié)形成CH₂橋；

m是0、1、2、3或4；

n是1、2、3或4；

x是0、1、2、3、4或5；且

y是0、1、2、3或4。

在另一方面，本發(fā)明的化合物是式Ia化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽；

其中

R⁴是H或C₁-C₃烷基；

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-O-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、R⁶或OR⁶，其中R⁶在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

或者兩個(gè)R²基團(tuán)與它們連接的苯基環(huán)連結(jié)形成苯并咪唑；

Cy是

R⁷和R⁸在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)任選地被C₁-C₃烷基取代；

或者R⁷和R⁸連結(jié)形成3-至10-元環(huán)；

R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、＝O、-OC(O)CH₃、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-O-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-O-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

R¹²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為H或-C₁-C₆烷基；

R¹³和R¹⁴連同它們所連接的碳原子一起連結(jié)形成環(huán)丙基環(huán)；

m是0、1、2、3或4；

n是1、2、3或4；

x是0、1、2、3、4或5；且

y是0、1、2、3或4。

在另一方面，本發(fā)明的化合物是式Ib化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽；

其中

R⁴是H或C₁-C₃烷基；

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-O-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、R⁶或OR⁶，其中R⁶在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

或者兩個(gè)R²基團(tuán)和它們所連接的苯基環(huán)連結(jié)形成苯并咪唑；

Cy是

R⁷和R⁸在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)任選地被C₁-C₃烷基取代；

或者R⁷和R⁸連結(jié)形成3-至10-元環(huán)；

R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、＝O、-OC(O)CH₃、-H₂PO₄、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-O-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-O-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

R¹²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為H或-C₁-C₆烷基；

R¹³和R¹⁴連同它們所連接的碳原子一起連結(jié)形成環(huán)丙基環(huán)；

m是0、1、2、3或4；

n是1、2、3或4；

x是0、1、2、3、4或5；且

y是0、1、2、3或4。

在本文提供的式Ib的一個(gè)實(shí)施方案中，x是0、1、2或3。

在本文提供的式Ib的另一個(gè)實(shí)施方案中，x是1、2或3。

在本文提供的式I的一個(gè)實(shí)施方案中，

R⁴是H或C₁-C₃烷基；

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-O-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)或-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-3次；

每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、R⁶或OR⁶，其中R⁶在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)或-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-3次；

Cy是

R⁷和R⁸在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)；

或者R⁷和R⁸連結(jié)形成3-至7-元環(huán)；

R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-O-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)或-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-3次；

R¹²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為H或-C₁-C₆烷基；

m是0、1、2或3；

n是1、2或3；

x是0、1、2或3；且

y是0、1、2或3。

在本文提供的式I的另一個(gè)實(shí)施方案中，

R⁴是H或C₁-C₃烷基；

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基或-O-C₁-C₆雜烷基，其中烷基基團(tuán)任選地被鹵代或-OH取代1-3次；

每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、R⁶或OR⁶，其中R⁶在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)，其中所述烷基和環(huán)烷基基團(tuán)任選地被鹵代或-OH取代1-3次；

Cy是

R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基或-O-C₁-C₆雜烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或-OH取代1-3次；

R¹²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為H或-C₁-C₆烷基；

m是0、1、2或3；

n是1、2或3；

x是0、1、2或3；且

y是0、1、2或3。

在本文提供的式I的一個(gè)實(shí)施方案中，R⁴是H。

在本文提供的式I的另一個(gè)實(shí)施方案中，R⁷和R⁸在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基、苯基、吡啶基、芐基或吡啶基甲基。

在本文提供的式I的另一個(gè)實(shí)施方案中，R⁷和R⁸在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基，其中所述-C₁-C₆烷基基團(tuán)連結(jié)形成3-至7-元環(huán)。

在本文提供的式I的另一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代且x是1、2或3。

在本文提供的式I的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物具有式II：

或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X¹是鹵代。

在本文提供的式I和式II的另一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代、OH、-C₁-C₆烷基或-O-C₁-C₆烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或OH取代1-3次。

在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代或-C₁-C₃烷基-OH且y是1或2。

在本文提供的式I和式II的又一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OR⁶，其中R⁶在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆烷基或-C₃-C₁₀環(huán)烷基，其中所述烷基和環(huán)烷基基團(tuán)任選地被鹵代或OH取代1-2次。

在本文提供的式I和式II的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物具有式III：

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在本文提供的式I-III的另一個(gè)實(shí)施方案中，Cy是

在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，每個(gè)R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代、OH、-C₁-C₆烷基或-O-C₁-C₆烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或OH取代1-3次。

在本文提供的式I-III的又一個(gè)實(shí)施方案中，Cy是

且n是0、1或2。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，R¹¹是-O-C₁-C₃烷基且n是1。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，R¹¹是OH或–C₁-C₃烷基-OH且n是1。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，n是0。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，R¹¹是鹵代且n是1。在又一個(gè)特定的實(shí)施方案中，R¹¹是-C₁-C₃烷基且n是1。

在本文提供的式I-III的另一個(gè)實(shí)施方案中，Cy是

其中X²是鹵代且n是0、1或2。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，n是0。

在本文提供的式I-III的另一個(gè)實(shí)施方案中，Cy是

在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，每個(gè)R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH或–C₁-C₃烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或OH取代1-3次且m是1或2。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，m是0。

在另一方面，本文提供了式IV化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽；

其中

R⁴是H或C₁-C₃烷基；

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-O-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-C₁-C₄烷基-(芳基)或-C₁-C₄烷基-(雜芳基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基,雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

每個(gè)R³在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、-CN、-NO₂、-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆烷氧基、R⁹或OR⁹，其中R⁹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-(CH₂)_1-4-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)、-(CH₂)_1-4-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)、-(CH₂)_1-4-(芳基)或-(CH₂)_1-4-(雜芳基)，其中所述烷基基團(tuán)被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；且所述烷氧基、-(CH₂)_1-4-、雜烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-5次；

x是0、1、2、3、4或5；且

z是1、2、3或4。

在本文提供的式IV的一個(gè)實(shí)施方案中，

R⁴是H或C₁-C₃烷基；

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-CN、-NO₂、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基、-O-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)或-C₁-C₄烷基-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)，其中所述烷基、雜烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-3次；

每個(gè)R³在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、-CN、-NO₂、-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆烷氧基、R⁹或OR⁹，其中R⁹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₁-C₆雜烷基、-C₃-C₁₀環(huán)烷基、-C₃-C₁₀雜環(huán)烷基、-(CH₂)_1-4-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)或-(CH₂)_1-4-(C₃-C₁₀雜環(huán)烷基)，其中所述烷基基團(tuán)被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-3次；且所述烷氧基、-(CH₂)_1-4-、雜烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基基團(tuán)任選地被鹵代、-OH、-CN或–NO₂取代1-3次；

x是0、1、2或3；且

z是1、2或3。

在本文提供的式IV的另一個(gè)實(shí)施方案中，

R⁴是H或C₁-C₃烷基；

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、鹵代、-C₁-C₆烷基、-O-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆雜烷基或-O-C₁-C₆雜烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或-OH取代1-3次；

每個(gè)R³在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH、-C₁-C₆烷基、-C₁-C₆烷氧基、R⁹或OR⁹，其中R⁹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-C₃-C₁₀環(huán)烷基或-(CH₂)_1-4-(C₃-C₁₀環(huán)烷基)，其中所述烷基基團(tuán)被鹵代或-OH取代1-3次；且所述烷氧基、-(CH₂)_1-4-和環(huán)烷基基團(tuán)任選地被鹵代或-OH取代1-3次；

x是0、1、2或3；且

z是1、2或3.

在本文提供的式IV的另一個(gè)實(shí)施方案中，R⁴是H.

在本文提供的式IV的另一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代且x是1、2或3。

在本文提供的式IV的又一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R³在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為OH或-C₁-C₆烷基，其中所述烷基基團(tuán)被鹵代或-OH取代1-3次且z是1、2或3。

在本文提供的式IV的又一個(gè)實(shí)施方案中，R³是-C₁-C₃烷基-OH且z是1。

在本文提供的式I的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物具有式V：

或其藥學(xué)上可接受的鹽；

其中

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代、OH、-C₁-C₆烷基或-O-C₁-C₆烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或OH取代1-3次；

每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代、OH、-C₁-C₆烷基或-O-C₁-C₆烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或OH取代1-3次；

Cy是

R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-OH、鹵代、-C₁-C₆烷基、-OC(O)CH₃或-C₃-C₁₀環(huán)烷基；

R¹³和R¹⁴連同它們所連接的碳原子一起連結(jié)形成環(huán)丙基環(huán)；

m是1、2或3；

n是1、2或3；且

x是2或3。

在本文提供的式I的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物具有式Vx：

或其藥學(xué)上可接受的鹽；

其中

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代、OH、-C₁-C₆烷基或-O-C₁-C₆烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或OH取代1-3次；

每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代、OH、-C₁-C₆烷基或-O-C₁-C₆烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或OH取代1-3次；

Cy是

R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-OH、鹵代、-C₁-C₆烷基、-OC(O)CH₃或-C₃-C₁₀環(huán)烷基；

R¹³和R¹⁴連同它們所連接的碳原子一起連結(jié)形成環(huán)丙基環(huán)；

m是1、2或3；

n是1、2或3；且

x是1、2或3。

在本文提供的式V的一個(gè)特定實(shí)施方案中，每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代。

在本文提供的式V的另一個(gè)特定實(shí)施方案中，每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代或-C₁-C₆烷基，其中所述烷基任選地被鹵代取代1-3次。

在本文提供的式I的又一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物具有式Va：

或其藥學(xué)上可接受的鹽；

其中

每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代、OH、-C₁-C₆烷基或-O-C₁-C₆烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或OH取代1-3次；

每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代、OH、-C₁-C₆烷基或-O-C₁-C₆烷基，其中所述烷基基團(tuán)任選地被鹵代或OH取代1-3次；

Cy是

R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-OH、鹵代、-C₁-C₆烷基、-OC(O)CH₃、-H₂PO₄、或-C₃-C₁₀環(huán)烷基；

R¹³和R¹⁴連同它們所連接的碳原子一起連結(jié)形成環(huán)丙基環(huán)；

m是1、2或3；

n是1、2或3；且

x是1、2或3。

在本文提供的式Va的一個(gè)特定的實(shí)施方案中，x是2或3。

在本文提供的式Va的另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，每個(gè)R¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代。

在本文提供的式Va的又一個(gè)特定的實(shí)施方案中，每個(gè)R²在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為鹵代或-C₁-C₆烷基，其中所述烷基任選地被鹵代取代1-3次。

在本文提供的式Va的又一個(gè)特定的實(shí)施方案中，Cy是

且R¹¹在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為-OH、鹵代、-C₁-C₆烷基、-OC(O)CH₃或-H₂PO₄，其中n和m是1、2或3且至少一個(gè)R¹¹是H₂PO₄。

式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx和Va的某些優(yōu)選的實(shí)施方案(包括其藥學(xué)上可接受的鹽)示于下表表1和表2中。式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx和Va的所有化合物以及其藥學(xué)上可接受的鹽，及表1和表2的化合物以及其藥學(xué)上可接受的鹽被認(rèn)為是“本發(fā)明的化合物”。

合成方法編碼是指在實(shí)驗(yàn)章節(jié)提供的合成方法。例如，“A01B01C01D01”是指對(duì)于區(qū)域A使用中間體A01，對(duì)于區(qū)域B使用中間體B01，對(duì)于區(qū)域C使用中間體C01及對(duì)于區(qū)域D使用中間體D01。

表1.

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在本文提供的式I的又一個(gè)實(shí)施方案中，式V化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽選自：

表2.

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明的化合物可具有一個(gè)或多個(gè)立體中心，并且每個(gè)立體中心可以R或S構(gòu)型獨(dú)立地存在。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所述的化合物以光學(xué)活性或外消旋形式存在。應(yīng)理解本文所述的化合物涵蓋具有本文所述的治療有效性質(zhì)的外消旋、光學(xué)活性、區(qū)域異構(gòu)和立體異構(gòu)形式或其組合。

光學(xué)活性形式的制備以任何適當(dāng)?shù)姆绞綄?shí)現(xiàn)，包括通過(guò)非限制性實(shí)例的方式、通過(guò)用再結(jié)晶技術(shù)拆分外消旋形式、從光學(xué)活性原料合成、手性合成或使用手性固定相的色譜分離。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種異構(gòu)體的混合物用作本文所述的治療性化合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文所述的化合物含有一個(gè)或多個(gè)手性中心。這些化合物通過(guò)任何方式制備，包括立體選擇性合成、對(duì)映選擇性合成和/或分離對(duì)映異構(gòu)體和/或非對(duì)映異構(gòu)體的混合物。拆分化合物及其異構(gòu)體通過(guò)任何方式實(shí)現(xiàn)，借由非限制性實(shí)例包括化學(xué)工藝、酶促工藝、分步結(jié)晶、蒸餾和色譜。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可作為互變異構(gòu)體存在。所有互變異構(gòu)體包含在本文呈現(xiàn)的化合物的范圍內(nèi)。

本文所述的化合物還包括同位素標(biāo)記的化合物，其中一個(gè)或多個(gè)原子被具有相同的原子數(shù)但具有與通常在自然界發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)獨(dú)特原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子替代。適于納入本文所述的化合物的同位素的實(shí)例包括但不限于²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、³⁶Cl、¹⁸F、¹²³I、¹²⁵I、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、³²P和³⁵S。在一個(gè)實(shí)施方案中，同位素標(biāo)記的化合物可用于藥物和/或底物組織分布研究中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用更重的同位素諸如氘取代得到更佳的代謝穩(wěn)定性(例如增加的體內(nèi)半衰期或降低的劑量需要)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，用正電子發(fā)射同位素諸如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N取代可用于正電子發(fā)射斷層成像(PET)研究中以用于檢測(cè)底物受體占位。同位素標(biāo)記的化合物通過(guò)任何適合的方法或通過(guò)工藝使用同位素標(biāo)記的試劑替代另外采用的非標(biāo)記的試劑制備。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所述的化合物通過(guò)其它方式標(biāo)記，包括但不限于使用發(fā)色團(tuán)或熒光部分、生物發(fā)光標(biāo)簽或化學(xué)發(fā)光標(biāo)簽。

本文所述的化合物和具有不同取代基的其它相關(guān)化合物使用本文所述和如例如Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis,第1-17卷(John Wiley和Sons,1991)；Rodd's Chemistry of Carbon Compounds,第1-5卷和副刊(Elsevier Science Publishers,1989)；Organic Reactions,第1-40卷(John Wiley和Sons,1991),Larock's Comprehensive Organic Transformations(VCH Publishers Inc.,1989),March,Advanced Organic Chemistry第4版,(Wiley 1992)；Carey和Sundberg,Advanced Organic Chemistry第4版,第A和B卷(Plenum 2000,2001)及Green和Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis第3版,(Wiley 1999)(其全部通過(guò)引用此類公開(kāi)內(nèi)容并入)所述的技術(shù)和材料合成。用于制備如本文所述的化合物的一般方法通過(guò)使用適當(dāng)?shù)脑噭┖蜅l件修改以用于引入如本文提供的各式中存在的各個(gè)部分。

本文所述的化合物使用任何適合的程序從可從商業(yè)來(lái)源獲得或使用本文所述的程序制備的化合物開(kāi)始合成。

在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)性官能團(tuán)，諸如羥基、氨基、亞氨基、硫代或羧基基團(tuán)，被保護(hù)以避免它們不需要參與反應(yīng)中。保護(hù)基團(tuán)用于阻斷一些或所有反應(yīng)性部分，并且防止此類基團(tuán)參與化學(xué)反應(yīng)直至去除保護(hù)基團(tuán)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)保護(hù)基團(tuán)可通過(guò)獨(dú)特方式去除。在完全獨(dú)特反應(yīng)條件下裂解的保護(hù)基團(tuán)滿足差異去除的需求。

在一個(gè)實(shí)施方案中，保護(hù)基團(tuán)通過(guò)酸、堿、還原條件(諸如，例如氫解)和/或氧化條件去除?；鶊F(tuán)諸如三苯甲基、二甲氧基三苯甲基、縮醛和叔丁基二甲基甲硅烷基是酸不穩(wěn)定的且用于在氨基基團(tuán)的存在下保護(hù)羧基和羥基反應(yīng)性部分，所述氨基基團(tuán)用可通過(guò)氫解去除的Cbz基團(tuán)和堿不穩(wěn)定的Fmoc基團(tuán)保護(hù)。羧酸和羥基反應(yīng)性部分用堿不穩(wěn)定基團(tuán)(諸如但不限于甲基、乙基和乙?；?在用酸不穩(wěn)定性基團(tuán)(諸如氨基甲酸叔丁酯)阻斷的胺的存在下，或者用酸和堿穩(wěn)定但水解可移除的氨基甲酸酯阻斷。

本發(fā)明的方法

本發(fā)明提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的化合物。

本發(fā)明還提供了根除有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的化合物。

本發(fā)明還提供了減少有需要的個(gè)體中與HBV感染相關(guān)的病毒載量的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的化合物。

本發(fā)明還提供了一種減少有需要的個(gè)體中HBV感染復(fù)發(fā)的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的化合物。

本發(fā)明還提供了減少有需要的個(gè)體中的HBV感染的不利生理影響的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的化合物。

本發(fā)明還提供了減少、減緩或抑制有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的化合物。

本發(fā)明還提供了一種在有需要的個(gè)體中誘導(dǎo)緩解由HBV感染引起的肝損傷的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的化合物。

本發(fā)明還提供了減少有需要的個(gè)體中針對(duì)HBV感染的長(zhǎng)期抗病毒療法的生理影響的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的化合物。

本發(fā)明還提供了預(yù)防性治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其中所述個(gè)體罹患潛伏的HBV感染，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的化合物。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所述的方法還包括施用至少一種選自由以下組成的組的另外的治療劑：核苷酸/核苷類似物、進(jìn)入抑制劑、融合抑制劑及這些或其它抗病毒機(jī)制的任何組合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，共配制本發(fā)明的化合物和至少一種另外的治療劑。在又一個(gè)實(shí)施方案中，共施用本發(fā)明的化合物和至少一種另外的治療劑。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述個(gè)體是其它治療類別的HBV藥物(如HBV聚合酶抑制劑、干擾素、病毒進(jìn)入抑制劑、病毒成熟抑制劑、文獻(xiàn)描述的衣殼組裝調(diào)節(jié)劑、獨(dú)特或未知機(jī)制的抗病毒化合物等或其組合)難治的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，與其它治療類別的HBV藥物減少個(gè)體中的病毒載量程度相比，本發(fā)明的方法以更大程度或更快速率減少患有HBV感染的個(gè)體中的病毒載量。

在一個(gè)實(shí)施方案中，與單獨(dú)施用至少一種另外的治療劑相比，施用本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽允許以在有需要的個(gè)體中獲得類似的預(yù)防性治療HBV感染的結(jié)果的更低的劑量或頻率施用至少一種另外的治療劑。

在一個(gè)實(shí)施方案中，與施用選自由HBV聚合酶抑制劑、干擾素、病毒進(jìn)入抑制劑、病毒成熟抑制劑、獨(dú)特衣殼組裝調(diào)節(jié)劑、獨(dú)特或未知機(jī)制的抗病毒化合物及其任何組合組成的組的化合物，施用本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以更大的程度或以更快的速率減少了個(gè)體中的病毒載量。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法減少了患有HBV感染的個(gè)體中的病毒載量，因此允許較低的劑量或改變待使用的組合療法的方案。

在一個(gè)實(shí)施方案中，與其它類別的HBV藥物相比，本發(fā)明的方法引起更低的病毒突變和/或病毒抗性發(fā)生率，從而允許長(zhǎng)期療法并將對(duì)治療方案中的改變的需求最小化。

在一個(gè)實(shí)施方案中，施用本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽比施用選自由HBV聚合酶抑制劑、干擾素、病毒進(jìn)入抑制劑、病毒成熟抑制劑、獨(dú)特衣殼組裝調(diào)節(jié)劑、獨(dú)特或未知機(jī)制的抗病毒化合物及其組合組成的組的化合物引起更低的病毒突變和/或病毒抗性發(fā)生率。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法提高血清轉(zhuǎn)換率超過(guò)當(dāng)前治療方案的血清轉(zhuǎn)換率。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法有需要的個(gè)體中增加和/或正常化和/或恢復(fù)正常健康、引發(fā)正常健康完全康復(fù)、恢復(fù)預(yù)期壽命和/或消除病毒感染。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法從感染了HBV的個(gè)體根除HBV，從而消除對(duì)長(zhǎng)期和/或終生治療的需求或者縮短治療持續(xù)時(shí)間和/或允許其它抗病毒劑的給藥減少。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法還包括監(jiān)測(cè)受試者的HBV病毒載量，并且其中所述方法進(jìn)行一段時(shí)間使得HBV病毒不可檢測(cè)。

因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式II化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式III化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式IV化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的式V化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1763_E1或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1763_E2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1765或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1766_E1或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1766_E2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1768或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1769或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1819或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1820或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1821或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1821_D1,或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1821_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1822_D1或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1822_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1826_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1829_D1或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1829_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1829-2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1890或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1891或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1892或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1893或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1893_E1或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1893_E2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1894或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1895或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1909或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1910,或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1914或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1915或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1916或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1917,或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1919或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1938或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1944或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1975或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1977或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1979或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1980或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1981或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1983或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1986或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1987或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物1989或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2002或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2004或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2007或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2024或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2033或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2114_D1或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2114_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2121或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2123或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2199或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2202或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2205或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2206或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2433_D1或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2433_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2492或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2505或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2547或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2548或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2550或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2617_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2618_D1或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2618_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2619_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2625_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2626_D2或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2632或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括向所述個(gè)體施用治療有效量的化合物2634或其藥學(xué)上可接受的鹽。

組合療法

本發(fā)明的化合物意在與用于治療HBV感染的一種或多種另外的化合物組合使用。這些另外的化合物可包括本發(fā)明的化合物或已知治療、預(yù)防或減少HBV感染的癥狀或作用的化合物。此類化合物包括但不限于HBV聚合酶抑制劑、干擾素、病毒進(jìn)入抑制劑、病毒成熟抑制劑、文獻(xiàn)描述的衣殼組裝調(diào)節(jié)劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、TLR-激動(dòng)劑及影響HBV生命周期和/或影響HBV感染結(jié)果的獨(dú)特或未知的機(jī)制的其它藥劑。

在非限制性實(shí)例中，本發(fā)明的化合物可與選自由以下組成的組的一種或多種藥物(或其鹽)組合使用：

HBV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑及DNA和RNA聚合酶抑制劑，包括但不限于：拉米夫定(3TC、Zeffix、賀普丁、益平維和益平維-HBV)、恩替卡韋(貝樂(lè)克、Entavir)、阿德福韋二吡呋酯(肝適能、普旺、雙-POMPMEA)、富馬酸替諾福韋二吡呋酯(韋瑞德、TDF或PMPA)；

干擾素，包括但不限于干擾素α(IFN-α)、干擾素λ(IFN-λ)和干擾素γ(IFN-γ)；

病毒進(jìn)入抑制劑；

病毒成熟抑制劑；

文獻(xiàn)描述的衣殼組裝調(diào)節(jié)劑，諸如但不限于BAY 41-4109；

逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑；

TLR-激動(dòng)劑；和

獨(dú)特或未知的機(jī)制的試劑，諸如但不限于AT-61((E)-N-(1-氯-3-氧代-1-苯基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺)、AT-130((E)-N-(1-溴-1-(2-甲氧基苯基)-3-氧代-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)-4-硝基苯甲酰胺)及類似類似物.

在一個(gè)實(shí)施方案中，另外的治療劑是干擾素。術(shù)語(yǔ)“干擾素”或“IFN”是指抑制病毒復(fù)制和細(xì)胞增殖并調(diào)節(jié)免疫響應(yīng)的高同源性物種特異性蛋白質(zhì)家族的任何成員。人干擾素分為三類；I型，其包括干擾素-α(IFN-α)、干擾素-β(IFN-β)和干擾素-ω(IFN-ω)，II型，其包括干擾素-γ(IFN-γ)及III型，其包括干擾素-λ(IFN-λ)。已開(kāi)發(fā)且商購(gòu)獲得的干擾素的重組形式由如本文所用的術(shù)語(yǔ)“干擾素”涵蓋。干擾素的亞型，諸如化學(xué)修飾或突變的干擾素也由如本文所用的術(shù)語(yǔ)“干擾素”涵蓋?；瘜W(xué)修飾干擾素包括聚乙二醇化干擾素和糖基化干擾素。干擾素的實(shí)例包括但不限于干擾素-α-2a、干擾素-α-2b、干擾素-α-n1、干擾素-β-1a、干擾素-β-1b、干擾素-λ-1、干擾素-λ-2和干擾素-λ-3。聚乙二醇化干擾素的實(shí)例包括聚乙二醇化干擾素-α-2a和聚乙二醇化干擾素α-2b。

因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，式I、Ia、Ib、II、III、IV、V、Vx或Va的化合物可與選自由干擾素α(IFN-α)、干擾素β(IFN-β)、干擾素λ(IFN-λ)和干擾素γ(IFN-γ)組成的組的干擾素組合施用。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，干擾素是干擾素-α-2a、干擾素-α-2b或干擾素-α-n1。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，干擾素-α-2a或干擾素-α-2b被聚乙二醇化。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，干擾素-α-2a是聚乙二醇化干擾素-α-2a(PEGASYS)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述另外的治療劑選自免疫調(diào)節(jié)劑或免疫刺激器療法，其包括屬于干擾素類別的生物劑。

此外，所述另外的治療劑可為獨(dú)特或未知的機(jī)制的試劑，包括干擾HBV復(fù)制或持續(xù)性所需的其它關(guān)鍵病毒蛋白質(zhì)或宿主蛋白的功能的試劑。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述另外的治療劑是阻斷病毒進(jìn)入或成熟或靶向HBV聚合酶的抗病毒劑，諸如核苷或核苷酸或非核苷(酸)聚合酶抑制劑。在組合療法的另一個(gè)實(shí)施方案中，逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和/或DNA和/或RNA聚合酶抑制劑是齊多夫定、去羥肌苷、扎西他濱、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韋、恩曲他濱、恩替卡韋、阿立他濱、阿替韋拉平、利巴韋林、阿昔洛韋、泛昔洛韋、伐昔洛韋、更昔洛韋、纈更昔洛韋、替諾福韋、阿德福韋、西多福韋、依非韋侖、奈韋拉平、地拉韋啶或依曲韋林.

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述另外的治療劑是TLR調(diào)節(jié)劑或TLR激動(dòng)劑，諸如TLR-7激動(dòng)劑或TLR-9激動(dòng)劑。在組合療法的另一個(gè)實(shí)施方案中，TLR-7激動(dòng)劑選自由SM360320(9-芐基-8-羥基-2-(2-甲氧基-乙氧基)腺嘌呤)和AZD 8848([3-({[3-(6-氨基-2-丁氧基-8-氧代-7,8-二氫-9H-嘌呤-9-基)丙基][3-(4-嗎啉基)丙基]氨基}甲基)苯基]乙酸甲酯)組成的組。

在本文提供的任何方法中，所述方法還可包括向所述個(gè)體施用至少一種HBV疫苗、核苷HBV抑制劑、干擾素或其任何組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，HBV疫苗是RECOMBIVAX HB、ENGERIX-B、ELOVAC B、GENEVAC-B或SHANVAC B的至少一個(gè)。

在另一方面，本文提供了治療有需要的個(gè)體中的HBV感染的方法，其包括通過(guò)向所述個(gè)體單獨(dú)施用或與逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑組合施用治療有效量的本發(fā)明的化合物減少HBV病毒載量；和向個(gè)體另外施用治療有效量的HBV疫苗。逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑可為以下的一者：齊多夫定、去羥肌苷、扎西他濱、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韋、恩曲他濱、恩替卡韋、阿立他濱、阿替韋拉平、利巴韋林、阿昔洛韋、泛昔洛韋、伐昔洛韋、更昔洛韋、纈更昔洛韋、替諾福韋、阿德福韋、西多福韋、依非韋侖、奈韋拉平、地拉韋啶或依曲韋林。

對(duì)于本文所述的任何組合療法，協(xié)同作用可例如使用適合的方法計(jì)算，諸如Sigmoid-E_最大值公式(Holford&Scheiner,19981,Clin.Pharmacokinet.6:429-453)、Loewe相加性公式(Loewe&Muischnek,1926,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.114:313-326)和中效公式(Chou&Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.22:27-55)。以上提及的每個(gè)公式可應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以產(chǎn)生相應(yīng)的圖表以有助于評(píng)估藥物組合的作用。以上提及的與公式相關(guān)的相應(yīng)的圖表分別為濃度-作用曲線、等效曲線和組合指數(shù)曲線。

施用/劑量/制劑

在另一方面，本文提供了藥物組合物，其包含本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽連同藥學(xué)上可接受的載體。

本發(fā)明的藥物組合物中活性成分的實(shí)際劑量水平可變化以獲得有效實(shí)現(xiàn)針對(duì)特定患者、組合物及施用模式所需的治療響應(yīng)而對(duì)患者無(wú)毒。

具體而言，所選的劑量水平將取決于多種因素，包括采用的特定的化合物的活性、施用時(shí)間、化合物排泄速率、治療持續(xù)時(shí)間、與所述化合物組合使用的其它藥物、化合物或材料、待治療的患者的年齡、性別、體重、情況、一般健康狀況和之前醫(yī)療史，及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域熟知的類似因素。

具有本領(lǐng)域一般技術(shù)的醫(yī)師，如醫(yī)生或獸醫(yī)可容易地確定和開(kāi)出所需藥物組合物的有效量的處方。例如，醫(yī)生或獸醫(yī)可從藥物組合物中采用的本發(fā)明的化合物的劑量低于為了獲得所需治療效果所需的劑量開(kāi)始，并逐漸增加劑量直至獲得所需的效果。

在特定的實(shí)施方案中，特別有利的是以劑量單位形式配制化合物以便于施用和劑量均一性。如本文所用的劑量單位形式是指適用作待治療的患者的整體劑量的物理離散單位；每個(gè)單位含有經(jīng)計(jì)算與所需藥物媒介物結(jié)合產(chǎn)生所需療效的預(yù)定量的治療化合物。本發(fā)明的劑量單位形式由以下表示并且直接依賴于以下：(a)治療化合物的獨(dú)特特征和待實(shí)現(xiàn)的特定治療效果，和(b)本領(lǐng)域固有的配混/配制此類治療化合物用于治療患者中的HBV感染的限制。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物使用一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體配制。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含治療有效量的本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。

用于施用的本發(fā)明的化合物可在以下的范圍內(nèi)：約1μg至約10,000mg、約20μg至約9,500mg、約40μg至約9,000mg、約75μg至約8,500mg、約150μg至約7,500mg、約200μg至約7,000mg、約3050μg至約6,000mg、約500μg至約5,000mg、約750μg至約4,000mg、約1mg至約3,000mg、約10mg至約2,500mg、約20mg至約2,000mg、約25mg至約1,500mg、約30mg至約1,000mg、約40mg至約900mg、約50mg至約800mg、約60mg至約750mg、約70mg至約600mg、約80mg至約500mg及任何和所有介于其間的全部或部分增量。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物的劑量為約1mg至約2,500mg。在一些實(shí)施方案中，用于本文所述的組合物中的本發(fā)明的化合物的劑量是小于約10,000mg、或小于約8,000mg、或小于約6,000mg、或小于約5,000mg、或小于約3,000mg、或小于約2,000mg、或小于約1,000mg、或小于約500mg、或小于約200mg或小于約50mg。類似地，在一些實(shí)施方案中，如本文所述的第二化合物(即用于HBV治療的另一種藥物)的劑量是小于約1,000mg、或小于約800mg、或小于約600mg、或小于約500mg、或小于約400mg、或小于約300mg、或小于約200mg、或小于約100mg、或小于約50mg、或小于約40mg、或小于約30mg、或小于約25mg、或小于約20mg、或小于約15mg、或小于約10mg、或小于約5mg、或小于約2mg、或小于約1mg、或小于約0.5mg及其任何和所有全部或部分增量。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)包裝的藥物組合物，其包含保持單獨(dú)或與第二藥劑組合的治療有效量的本發(fā)明的化合物的容器；和用于使用所述化合物治療、預(yù)防或減少患者中的一種或多種HBV感癥狀的說(shuō)明書。

本發(fā)明的任何組合物的施用途徑包括經(jīng)口、經(jīng)鼻、經(jīng)直腸、陰道內(nèi)、胃腸外、經(jīng)頰、舌下或局部。用于本發(fā)明中的化合物可經(jīng)配制以用于通過(guò)任何適當(dāng)?shù)耐緩绞┯茫T如用于經(jīng)口或胃腸外，例如經(jīng)皮、經(jīng)粘膜(如舌下、經(jīng)舌、(經(jīng))頰、(經(jīng))尿道、經(jīng)陰道(如經(jīng)-和陰道周)、鼻(內(nèi))和(經(jīng))直腸)、膀胱內(nèi)、肺內(nèi)、十二指腸內(nèi)、胃內(nèi)、硬膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、皮膚內(nèi)、氣管內(nèi)、靜脈內(nèi)、支氣管內(nèi)、吸入和局部施用。

適合的組合物和劑量形式包括例如片劑、膠囊、囊片、丸劑、凝膠蓋、含片、分散液、混懸液、溶液、糖漿劑、顆粒劑、珠粒、經(jīng)皮貼劑、凝膠劑、粉劑、小丸劑、乳漿劑、錠劑、乳膏劑、糊劑、硬膏劑、洗劑、圓盤、栓劑、用于經(jīng)鼻或經(jīng)口施用的液體噴霧、用于吸入的干粉或霧化制劑、用于膀胱施用的組合物和制劑等。應(yīng)理解將用于本發(fā)明中的制劑和組合物不限于本文所述的特定制劑和組合物。

對(duì)于經(jīng)口施加，特別適合的是片劑、糖衣丸、液體、滴劑、栓劑或膠囊、囊片和囊形片。意在用于經(jīng)口使用的組合物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的任何方法制備，并且此類組合物可含有一種或多種選自由適用于制備片劑的惰性無(wú)毒藥學(xué)賦形劑組成的組的試劑。此類賦形劑包括例如惰性稀釋劑，諸如乳糖；制粒劑和崩解劑諸如玉米淀粉；結(jié)合劑諸如淀粉；和潤(rùn)滑劑諸如硬脂酸鎂。所述片劑可未包衣或它們可由已知技術(shù)包衣以為了精確或或延緩活性成分釋放。用于經(jīng)口使用的制劑還可呈現(xiàn)為硬明膠膠囊，其中活性成分與惰性稀釋劑混合。

對(duì)于胃腸外施用，本發(fā)明的化合物可配制用于注射或輸注，例如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下注射或輸注或以用于以推注劑量施用和/或連續(xù)輸注。可使用任選含有其它配制劑諸如助懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑的于油性或水性媒介物中的混懸液、溶液或乳液。

本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到或能夠僅使用本文所述的常規(guī)實(shí)驗(yàn)、特定程序的多種等效物、實(shí)施方案、權(quán)利要求和實(shí)施例確定。此類等效物被認(rèn)為在本發(fā)明的范圍內(nèi)并且由其隨附的權(quán)利要求覆蓋。例如，應(yīng)理解用領(lǐng)域內(nèi)公認(rèn)的替代物和僅使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)對(duì)包括但不限于反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)尺寸/體積及實(shí)驗(yàn)溶劑諸如溶劑、催化劑、壓力、大氣條件如氮?dú)夥占斑€原/氧化劑的反應(yīng)條件的修改在本申請(qǐng)的范圍內(nèi)。

應(yīng)理解，無(wú)論本文提供了什么值和范圍，這些值和范圍所涵蓋的所有值和范圍意在涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。此外，本申請(qǐng)也考慮了落入這些范圍內(nèi)的所有值以及值范圍的上限或下限。

以下實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明了本發(fā)明的各方面。然而，它們不以任何方式限制如本文所闡述的本發(fā)明的教導(dǎo)內(nèi)容或公開(kāi)內(nèi)容。

實(shí)施例

本發(fā)明現(xiàn)在參考以下實(shí)施例描述。提供這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明目的，并且本發(fā)明不限于這些實(shí)施例，而是涵蓋由于本文提供的教導(dǎo)內(nèi)容而顯著的所有變化。

材料：

除非另外說(shuō)明，否則所有原料和樹(shù)脂從商業(yè)來(lái)源獲得并且不經(jīng)純化使用。

文庫(kù)一般設(shè)計(jì)

區(qū)域A：

區(qū)域B：

區(qū)域C：

部分I中間體合成(區(qū)域A、B&C)

1區(qū)域A中間體的制備

1.1 A01/02的制備

1.1.1化合物2和3的制備

向化合物1(5.0g,21.5mmol)和2-重氮基乙酸乙酯(3.2g,28.1mmol)于THF(100mL)中的溶液在-78℃下在N₂下添加BF₃–Et₂O(2.7mL,21.5mmol)。將反應(yīng)混合物在–78℃下攪拌1.5小時(shí)，然后緩慢升溫至28℃并攪拌1.5小時(shí)。將所得混合物用NaHCO₃(飽和)猝滅且用EA(300mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥且真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物2和3的混合物(3.4g,50％)。LCMS:320.0[M+1]。

1.1.2化合物4和5的制備

向化合物2和3(1g,3.1mmol)溶解于MeOH/H₂O(10mL/2mL)的混合物添加KOH(0.53g,9.3mmol)，并加熱至55℃持續(xù)2小時(shí)。將混合物用EA(80mL)稀釋并用鹽水(60mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物4(0.32g,42％)和化合物5(0.22g,29％)。LCMS:248.0[M+1]。化合物4 ¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-7.40(m,5H),5.16-5.21(m,2H),4.06-4.11(m,2H),3.46-3.49(m,2H),2.51-2.55(m,2H),1.63-1.78(m,4H)?；衔?¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-7.39(m,5H),5.14(s,2H),3.62-3.69(m,4H),2.62-2.71(m,4H),2.75-2.81(m,2H)。

1.1.3化合物6的制備

向化合物4(0.32g,1.3mmol)于EtOH(20mL)中的溶液在0℃下添加NaBH₄(74.2mg,1.9mmol)，并將混合物在25℃下攪拌2小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EA(80mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(0.24g,74％)。LCMS:250.0[M+1]。

1.1.4化合物A01的制備

向化合物6(0.25g,1.0mmol)于MeOH(25mL)中的溶液添加Pd(OH)₂/C(50mg)。將混合物在25℃下在25Psi壓力下氫化16小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(0.1g,87％)。

1.1.5化合物7的制備

向化合物5(0.32g,1.3mmol)于EtOH(20mL)中的溶液在0℃下添加NaBH₄(74.2mg,1.9mmol)，并將混合物在25℃下攪拌2小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EA(80mL)萃取。將有機(jī)層干燥并濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(0.24g,74％)。LCMS:250.0[M+1]。

1.1.6化合物A02的制備

向化合物5(0.25g,1.0mmol)于MeOH(25mL)中的溶液添加Pd(OH)₂/C(50mg)。將混合物在25℃下在25psi壓力下氫化16小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(0.1g,87％)。

1.2 A03/04的制備

1.2.1化合物2的制備

向化合物1(0.8g,3.2mmol)于DCM(30mL)中的溶液在-78℃下在N₂下添加DAST(1.1g,6.5mmol)。將反應(yīng)混合物在–78℃下攪拌2小時(shí)，然后升溫至28℃持續(xù)2小時(shí)。將所得混合物用NaHCO₃(飽和)猝滅并用DCM(30mL)萃取。將有機(jī)層干燥并濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜PE:EA(30:1)純化以得到所需產(chǎn)物(0.6g,74％)。LCMS:252.0[M+1]。

1.2.2化合物A03的制備

向化合物2(0.6g,2.4mmol)于MeOH(25mL)中的溶液添加Pd(OH)₂/C(100mg)。將混合物在25℃下在H₂氣氛下氫化16小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到粗產(chǎn)物(0.3g)，其直接用于下一步。

胺A04通過(guò)與胺A03相同的程序從4-羥基氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸芐酯制備。

1.3 A05/06的制備

1.3.1化合物2的制備

向CH₃MgBr(14.2mmol)于THF(10mL)中的溶液在0℃下在N₂下添加于THF(20mL)中的化合物1(0.7g,2.8mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌2小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EtOAc(30mL)萃取。將有機(jī)層干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜PE:EA(10:1)純化以得到所需產(chǎn)物(0.2g,27％)。LCMS:264[M+1]。

1.3.2化合物A05的制備

向化合物2(0.34g,1.3mmol)于MeOH(25mL)中的溶液添加Pd(OH)₂/C(50mg)。將混合物在25℃下在H₂氣氛下氫化16小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(0.16g,94％)。

胺A06通過(guò)與胺A03相同的程序從4-氧代氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸芐酯制備。

1.4 A07/08的制備

1.4.1.1化合物3和3’的制備

將化合物3和3′的混合物用與1.1.1相同的程序制備。

1.4.1.2化合物4和化合物4′的制備

向NaH(338mg,8.5mmol)于THF(30mL)中的混懸液在0℃下在N₂下添加化合物3和化合物3′(2.7g,8.5mmol)的混合物于THF(30mL)中的溶液，并在室溫下攪拌0.5小時(shí)。滴加選擇物F(2.7g,8.5mmol)于DMF(15mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl猝滅并用EA(200mL)萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌、經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物4(1.0g,35％)和化合物4′(0.9g,32％)?；衔?：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ＝7.28–7.39(m,5H),5.18(s,2H),4.40–4.68(m,1H),4.11–4.39(m,3H),3.45–3.63(m,1H),3.21–3.38(m,1H),1.85–2.45(m,4H),1.26–1.30(m,3H)。化合物4′:¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ＝7.28–7.40(m,5H),5.14-5.18(m,2H),4.24–4.47(m,4H),3.88–4.00(m,1H),3.09–3.25(m,1H),2.85–2.91(m,2H),1.92–1.95(m,2H),1.27–1.35(m,3H)。

1.4.1.3化合物5的制備

將化合物4(0.72g,2.1mmol)和KOH(0.18g,3.2mmol)于MeOH/H₂O(10mL/2mL)中的混合物加熱至55℃持續(xù)2小時(shí)。將混合物用EA(80mL)萃取并用鹽水(60mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(0.54g，粗)。LCMS:266.0[M+1]。

1.4.1.4化合物6的制備

向化合物5(0.54g,2.1mmol)于EtOH(8mL)中的溶液在0℃下添加NaBH₄(0.12g,3.1mmol)，并將混合物在25℃下攪拌2小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EA(80mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(0.22g,41％)。LCMS:268.0[M+1]。

1.4.1.5化合物A07的制備

向化合物6(0.22g,0.8mmol)于MeOH(25mL)中的溶液添加Pd(OH)₂/C(45mg)。將混合物在25℃下在25Psi氣壓下氫化16小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(0.1g,91％)。

1.4.1.6化合物5'的制備

將化合物4′(0.89g,2.6mmol)和KOH(0.22g,3.9mmol)于MeOH/H₂O(10mL/2mL)中的混合物加熱至55℃持續(xù)2小時(shí)。將混合物用EA(80mL)稀釋并用鹽水(60mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(0.65g，粗)。LCMS:266.0[M+1]。

1.4.1.7化合物6′的制備

向化合物5′(0.65g,2.6mmol)于EtOH(10mL)中的溶液在0℃下添加NaBH₄(0.15g,3.9mmol)，并將混合物在25℃下攪拌2小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EA(80mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(0.33g,50％)。LCMS:268.0[M+1]。

1.4.1.8化合物A08的制備

向化合物6′(0.33g,1.2mmol)于MeOH(30mL)中的溶液添加Pd(OH)₂/C(60mg)。將混合物在25℃下在25Psi壓力下氫化16小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(0.15g,91％)。

非對(duì)映異構(gòu)體的合成：

1.4.2.1化合物3的制備

向化合物1(5.0g,33.7mmol)的溶液添加丙-2-烯-1-胺(6.0g,101.3mmol)，然后將溶液在80℃下攪拌16小時(shí)。將混合物真空濃縮以得到粗化合物3(6.6g)直接用于下一步。

1.4.2.2化合物4的制備

向化合物3(6.6g,52.71mmol)于DCM(80mL)中的溶液在0℃下添加TEA(10.67g,105.4mmol)和CbzCl(13.49g,79.1mmol)，將溶液在25℃下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)物用水(100mL)洗滌并用DCM(100mL)萃取，將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠上的柱色譜(PE:EA＝10:1)純化以得到化合物4(5.0g,36.6％)。

¹H NMR(400MHz,MeOD):δppm:7.25-7.47(m,5H),5.67-5.96(m,2H),5.08-5.23(m,3H),4.91-5.08(m,2H),3.86-3.96(m,2H),3.27(t,J＝7.5Hz,2H),1.95-2.11(m,2H),1.53-1.72(m,2H)。

1.4.2.3化合物5的制備

向化合物4(3.0g,11.57mmol)于DCM(300mL)中的溶液添加第一代格拉布催化劑(290mg,0.35mmol)，然后將溶液在55℃下在N₂氣氛下攪拌16小時(shí)。將混合物真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠上的柱色譜(PE:EA＝20:1)純化以得到呈暗色液體的化合物5(1.9g,71％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:7.30-7.43(m,5H),5.69-5.89(m,2H),5.09-5.24(m,2H),3.90-4.08(m,2H),3.47-3.72(m,3H),2.16-2.43(m,3H),1.76-1.94(m,2H)。

1.4.2.41化合物6的制備

向化合物5(1.0g,4.3mmol)于DCM(15mL)中的溶液添加m-CPBA(1.49g,8.65mmol)，然后將溶液在23℃下攪拌16小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。將溶液用水性Na₂SO₃洗滌并用DCM(20mL)萃取，將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠上的柱色譜(PE:EA＝3:1)純化以得到呈無(wú)色液體的化合物6(420mg,40％)。

1.4.2.4化合物7A和7B的制備

將化合物6(800.00mg,3.24mmol)溶解于50mL單頸圓底燒瓶的HF/Et3N(522.32mg,6.48mmol)中。將混合物在100℃下在N₂下攪拌14小時(shí)。冷卻至20℃后，LCMS顯示原料耗盡。將殘余物用水性NaHCO₃(80mL)洗滌，并用EA(70mL*2)萃取，將有機(jī)層干燥、真空濃縮以得到粗產(chǎn)物。將粗混合物通過(guò)柱色譜(PE/EA＝4:1)進(jìn)一步純化以得到呈黃色油狀物的化合物7A(320.00mg,37.04％)和7B(70mg,8％)。

7A ¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:7.30-7.45(m,5H),5.11-5.27(m,2H),4.28-4.64(m,1H),3.21-4.05(m,5H),1.60-2.20(m,4H)。

7B ¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:7.30-7.48(m,5H),5.12-5.28(m,2H),4.21-4.55(m,1H),3.17-4.16(m,5H),1.41-2.12(m,4H)

1.4.2.5化合物A07_反式的制備

向化合物7A(460mg,1.72mmol)于CH₃OH(40mL)中的溶液添加Pd(OH)₂/C(85mg)。將形成的混合物在H₂氣氛下氫化2.5小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到所需產(chǎn)物A07_反式(220mg,96％)。

A08_反式通過(guò)相同程序從7B制備。

1.4.2.6化合物8的制備

向PPh₃(471.00mg,1.80mmol)于THF(2mL)和DEAD(312.73mg,1.80mmol)中的混合物在0℃下滴加于THF(15mL)中的4-硝基苯甲酸(300.10mg,1.80mmol,)，然后滴加化合物7A(400.00mg,1.50mmol)于THF(2mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在25℃下攪拌12小時(shí)。TLC顯示原料耗盡。添加水(50mL)。將反應(yīng)混合物通過(guò)EA(35ml*3)萃取。干燥有機(jī)層，真空濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜(PE/EA＝6/1,4/1)純化以得到所需產(chǎn)物化合物8(200.00mg,32.10％)。LCMS[M+1]:417

1.4.2.7化合物9的制備

向化合物8(150.00mg,0.36mmol)于MeOH(10mL)中的混合物添加K₂CO₃(74.68mg,0.54mmol)。將混合物在25℃下攪拌1.5小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物直接通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝6/1,4/1)純化以得到呈黃色油狀物的化合物9(70.00mg,72.70％)。

1.4.2.8化合物A07_順式的制備

向化合物9(70mg,0.26mmol)于CH₃OH(20mL)中的溶液添加Pd(OH)₂(20mg)。將形成的混合物在H₂氣氛下氫化2小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到所需產(chǎn)物C(34mg,97％)。

A08_順式通過(guò)相同的程序從7B制備。

1.5 A09的制備

1.5.1.1化合物3的制備

向化合物1(8.0g,34.3mmol)和2-重氮基乙酸乙酯(5.1g,44.7mmol)于THF(160mL)中的溶液在-78℃下在N₂下添加BF₃–Et₂O(4.3mL,34.3mmol)。將反應(yīng)混合物在–78℃下攪拌1.5小時(shí)，然后緩慢升溫至28℃，并且繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)。將所得混合物用NaHCO₃猝滅并用EA(500mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(7.3g,67％)。LCMS:320.0[M+1]。

1.5.1.2化合物4的制備

向NaH(464mg,11.6mmol)于THF(40mL)中的懸浮液在0℃下在N₂下添加化合物3(3.7g,11.6mmol)于THF(40mL)中的溶液，然后0.5后添加選擇物F(4.4g,11.6mmol)于DMF(20mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EA(300mL)萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌、經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(2.5g,64％)。LCMS:338.0[M+1]。

1.5.1.3化合物5的制備

將化合物4(2.5g,7.4mmol)和KOH(0.62g,11.1mmol)于MeOH/H₂O(20mL/4mL)中的混合物加熱至55℃持續(xù)2小時(shí)。將混合物用EA(100mL)稀釋并用鹽水(80mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(1.8g，粗)。LCMS:266.0[M+1]。

1.5.1.4化合物6的制備

向化合物5(1.8g,6.8mmol)于EtOH(30mL)中的溶液在0℃下添加NaBH₄(0.39g,10.3mmol)，并將混合物在25℃下攪拌2小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EA(150mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(1.2g,66％)。LCMS:268.0[M+1]。

1.5.1.5化合物A09的制備

向化合物6(1.2g,4.5mmol)于MeOH(50mL)中的溶液添加Pd(OH)₂/C(0.24g)。將混合物在25℃下在25Psi壓力下氫化16小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(0.59g,98％)。

非對(duì)映異構(gòu)體的合成：

5.1.2.1化合物2的制備

向芐基化合物1(5.00g,21.62mmol)于CH₂Cl₂(100mL)中的混合物一次性添加m-CPBA(9.33g,54.05mmol)。將混合物在25℃下攪拌1小時(shí)。將混合物濃縮并將殘基通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈黃色油狀物的化合物2(2.70g,10.92mmol,50.50％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.41-7.30(m,5H),5.18-5.07(m,2H),4.00-3.79(m,2H),3.20(t,J＝4.5Hz,2H),2.91-2.71(m,2H),2.34-2.18(m,3H),2.15-2.03(m,1H)。

5.1.2.2化合物3的制備

將化合物2(2.20g,8.90mmol,1.00當(dāng)量)和HF-Et₃N(2.15g,13.35mmol)充入100mL單頸圓底燒瓶。將混合物在100℃下在N₂下攪拌16小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。然后將其用DCM(100mL)稀釋、用鹽水(100mL×2)洗滌、經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮。將殘余物用硅膠上的柱色譜純化(PE:EA＝1:1)以得到呈無(wú)色油狀物的化合物3(1.5g,5.61mmol)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.42-7.28(m,5H),5.14(s,2H),4.51-4.29(m,1H),3.90-3.58(m,3H),3.48-3.25(m,2H),2.29-2.07(m,2H),1.99-1.84(m,1H),1.72(dt,J＝5.0,10.2Hz,1H)

5.1.2.3 A09_反式的制備

向化合物3(100.0mg,374.11umol,1.00當(dāng)量)于MeOH(5mL)中的溶液在N₂下添加Pd(OH)₂(0.02g)。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂(50psi)下在25℃下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾并將濾液濃縮以得到呈黃色固體的A09_反式(40.00mg,300.39umol,80.29％產(chǎn)率)。

5.1.2.4化合物5的制備

向化合物3(400mg,1.5mmol)、化合物4(0.3g,1.8mmol)和PPh3(0.47g,1.8mmol)于THF(10mL)中的溶液在0℃下添加于無(wú)水THF(10mL)中的DEAD(0.312g,1.8mmol)。將反應(yīng)混合物在25℃下攪拌16小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。蒸發(fā)混合物并將殘余物用硅膠上的柱色譜純化(PE:EA＝10:1)以得到呈白色固體的化合物4(0.5g,80％)。

5.1.2.5化合物6的制備

向化合物5(500mg,1.2mmol)于MeOH(10mL)中的溶液添加K₂CO₃(165mg,1.2mmol)。將反應(yīng)混合物在25℃下攪拌1小時(shí)。TLC顯示其完成。將混合物濃縮以得到呈黃色油狀物的化合物6(300mg,粗)。

5.1.2.6 A09_順式的制備

向化合物6(100.00mg,374.11umol,1.00當(dāng)量)于MeOH(5mL)中的溶液在N₂下添加Pd/C(0.02g)。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂(50psi)下在25℃下攪拌16小時(shí)。TLC(PE:EtOAc＝1:1)顯示原料完全耗盡。過(guò)濾反應(yīng)混合物并將濾液濃縮以得到呈無(wú)色油狀物的A09_順式(40.00mg,300.39umol,80.29％產(chǎn)率)。

1.6 A10的制備

1.6.1化合物3的制備

向化合物1(12.37g,56.5mmol)和化合物2(13.56g,56.5mmol)于甲苯(800mL)中的攪拌溶液添加Et₃N(17.17g,170mmol)。將混合物加熱至120℃并攪拌48小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。將混合物用飽和NH₄Cl(100mL)洗滌并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝2:1)純化以得到呈黃色固體的化合物3(6.9g,產(chǎn)率:41.2％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.47-7.21(m,10H),3.87-3.61(m,5H),2.97-2.41(m,8H)。

LCMS:297[M+1]。

1.6.2化合物4的制備

將化合物3(2.2g,7.5mmol)溶解于MeOH(80mL)中，然后添加Pd(OH)₂/C(500mg)。將所得的混合物在H₂氣氛下氫化過(guò)夜。TLC顯示原料完全耗盡。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到呈無(wú)色油狀物的所需化合物4(0.8g,100％)。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ3.89-3.71(m,1H),2.97-2.63(m,8H)。

1.6.3化合物5的制備

將化合物4(522mg,4.5mmol)溶解于MeOH(30mL)中，然后添加Boc₂O(972mg,4.5mmol)和Et₃N(546mg,5.4mmol)。將混合物在15℃下攪拌12小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。將混合物真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的所需化合物5(860mg,92％)。

1.6.4化合物6的制備

向化合物5(972mg,4.5mmol)于EtOH(20mL)中的溶液在室溫下添加NaBH₃CN(837mg,13.5mmol)和HCHO(1.5g,18mmol)，然后將混合物在15℃下攪拌4小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。將混合物真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠柱(DCM:MeOH＝20:1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物6(610mg,59％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.99-3.85(m,1H),3.73-3.27(m,4H),2.97-2.51(m,4H),2.46-2.31(m,4H),1.51(s,9H)。

1.6.5化合物A10的制備

將化合物6(300mg,1.3mmol)溶解于DCM(20mL)中，然后添加TFA(20mL)。將所得的混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。將溶液濃縮以得到呈TFA鹽的粗化合物A10(420mg，粗)。

1.7 A11/12的制備

1.7.1化合物3的制備

向化合物1(10g,80.0mmol)和NaOH(3.6g,90.0mmol)于H₂O(160mL)中的溶液在0℃下添加化合物2(5.0g,100mmol)。將反應(yīng)混合物加熱至75℃持續(xù)3小時(shí)，然后冷卻至25℃。添加(Boc)₂O(21g,100mmol)并混合物持續(xù)攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水稀釋并用EA(200mL*2)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(11.2g,57％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:4.03(s,2H),3.78–3.77(m,3H),3.60–3.57(m,2H),2.72–2.67(m,2H),1.51–1.45(m,9H)。

1.7.2化合物4的制備

向化合物3(11.2g,46mmol)于EtOH-CHCl₃(200mL/10mL)中的溶液添加PtO2(1.0g)。將混合物在25℃下在50Psi的H2氣壓下氫化16小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(11.3g,99％)。1H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:8.45–8.43(m,2H),3.91–3.89(m,2H),3.76–3.73(m,3H),3.51–3.48(m,2H),3.21–3.19(m,2H),2.10–1.99(m,2H),1.50–1.44(m,9H)。

1.7.3化合物5的制備

將化合物4(2.3g,9.3mmol)于MeOH(20mL)和NaOH(3N,4mL)中的溶液在25℃下攪拌2小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成。將混合物用EA(150mL)稀釋并用鹽水(100mL)洗滌。將有機(jī)層干燥并濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(1.25g,63％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:4.10–4.05(m,2H),3.60–3.58(m,2H),3.31–3.28(m,2H),1.91–1.85(m,2H),1.63–1.45(m,9H)。

1.7.4化合物A11的制備

向化合物5(0.5g,2.3mmol)于DCM(5mL)中的溶液添加TFA(5mL)，并在25℃下攪拌2小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成。將混合物濃縮以得到粗產(chǎn)物(780mg,粗)。

1.7.5化合物6的制備

向化合物4(800mg,3.7mmol)于THF(20mL)中的溶液添加NaH(224mg,5.6mmol)并在25℃下攪拌0.5小時(shí)。然后，添加MeI(795mg,5.6mmol)。將混合物在室溫下攪拌直至TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成。將混合物用水猝滅，用EA(50mL)稀釋并用鹽水(30mL)洗滌。將有機(jī)層干燥并濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(720mg,63％)。

1.7.6化合物A12的制備

向化合物6(720mg,2.3mmol)于DCM(5mL)中的溶液添加TFA(5mL)，并在25℃下攪拌2小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成。濃縮混合物以得到粗產(chǎn)物(960mg,粗)。

1.8 A13的制備

1.8.1化合物3的制備

向化合物1(1.32g,10.5mmol)于DMF(20mL)中的溶液在0℃下添加NaH(960mg,24mmol)，將混合物在0℃下攪拌30分鐘。然后于0℃添加化合物2(1.61g,10mmol)。將混合物在15℃下攪拌2小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。添加飽和NH₄Cl(100mL)以猝滅反應(yīng)。真空去除溶劑并將殘余物用EA(100mL*2)萃取。將有機(jī)層濃縮并通過(guò)硅膠柱(PE:EA＝4:1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物3(1.1g,產(chǎn)率:51％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ:5.12-4.91(m,2H),4.29-4.03(m,4H),3.76-3.45(m,4H),1.47(s,9H)。

1.8.2化合物4的制備

向化合物3(212mg,1mmol)于THF/H₂O(3mL/3mL)中的溶液在室溫下添加K₂OsO₄·2H₂O(18mg,0.05mmol)和NaIO₄(491mg,2.3mmol)，然后將混合物在15℃下攪拌4小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。將混合物真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠柱(PE:EA＝5:1)純化以得到呈黃色油狀物的化合物4(170mg,77％)。LCMS:216[M+1]。

1.8.3化合物5的制備

向化合物4(425mg,2mmol)于EtOH(10mL)中的溶液添加NaBH₄(150mg,4mmol)。將混合物在15℃下攪拌4小時(shí)。TLC顯示原料耗盡。添加飽和NH₄Cl(20mL)以猝滅反應(yīng)。將混合物真空濃縮。將殘余物用EA(50mL)萃取、經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到呈無(wú)色油狀物的所需化合物5(370mg,87％)。

1.8.4化合物A13的制備

將化合物5(420mg,2mmol)溶解于DCM(20mL)中，然后添加TFA(20mL)。將所得的混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。濃縮溶液以得到直接用于下一步的呈TFA鹽的所需粗化合物5(620mg,100％)。

1.9 A15的制備

1.9.1化合物3的制備

將化合物1(8.7g,65.7mmol)、化合物2(3.5g,32.7mmol)和K₂CO₃(9.06g,65.7mmol)于DMF(120mL)中的混合物在100℃下加熱16小時(shí)。將混合物用EA(100mL)稀釋，并用H₂O(100mL*3)洗滌。將有機(jī)相經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的所需產(chǎn)物3(5.1g,72.5％)。LCMS:256[M+1]。

1.9.2化合物4的制備

向化合物3(1.5g,6.97mmol)于甲苯(15mL)中的溶液添加CbzCl(1.42g,8.37mmol)。將混合物加熱至110℃持續(xù)16小時(shí)。將混合物真空濃縮。將殘余物用水和EA溶解。將有機(jī)層用水性Na₂CO₃洗滌、經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的所需產(chǎn)物4(1.24g,產(chǎn)率：68.9％)。LCMS:260[M+1]。

1.9.3化合物5的制備

向化合物4(1.0g,3.86mmol)于DCM(60mL)中的溶液添加二氯化物Zhan催化劑1B(150mg,CAS:918870-76-5)。將混合物用N₂吹掃10分子并在20℃下攪拌16小時(shí)。將混合物真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的所需產(chǎn)物5(800mg,產(chǎn)率:89.7％)。LCMS:232[M+1]。

1.9.4化合物6的制備

向化合物5(800mg,3.46mmol)于DCM(30mL)中的溶液添加m-CPBA(774mg,4.5mmol)。將混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。將溶液通過(guò)水性Na₂SO₃猝滅并用DCM(60mL*2)萃取。將有機(jī)合并相經(jīng)Na₂SO₄干燥，并濃縮以得到呈無(wú)色油狀物的所需化合物7(812mg，產(chǎn)率：95.9％)。LCMS:248[M+1]。

1.9.5化合物7的制備

將化合物6(812mg,3.31mmol)溶解于MeOH(10mL)中，然后添加濃H₂SO₄(200mg)。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。將溶液用水性Na₂CO₃中和至pH＝7。將所得的混合物真空濃縮。將殘余物用EA(60mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的所需產(chǎn)物8(778mg，產(chǎn)率：84.9％)。LCMS:280[M+1]。

1.9.6化合物A15的制備

向化合物7(778mg,2.8mmol)于MeOH(70mL)中的溶液在N₂下添加Pd(OH)₂/C(100mg)。將混合物在H₂氣球下于23℃攪拌2小時(shí)。過(guò)濾混合物。將濾液濃縮以得到所需產(chǎn)物8(310mg，產(chǎn)率：78％)。

1.10 A16/17/18的制備

1.10.1化合物3的制備

將化合物1(5.0g,33.7mmol)和化合物2(6.0g,101.3mmol)的混合物加熱至80℃持續(xù)16小時(shí)。將混合物真空濃縮。將殘余物用DCM(100mL)溶解。在0℃下Et₃N(7.6g,75.6mmol)，然后是CbzCl(12.8g,75.6mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。將混合物用DCM(100mL)稀釋并用水(100mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠上的柱色譜(PE:EA＝10:1)純化以得到化合物4(4.4g,34％)。LCMS:260[M+1]。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ7.49-7.22(m,5H),5.95-5.67(m,2H),5.13(s,4H),5.08-4.91(m,2H),3.91(d,J＝5.6Hz,2H),3.31-3.23(m,2H),2.02(s,2H),1.74-1.57(m,2H)。

1.10.3化合物4的制備

向化合物3(2.0g,7.7mmol)于DCM(100mL)中的溶液添加二氯化物Zhan催化劑1B(236mg,CAS:918870-76-5)。將反應(yīng)混合物在室溫下在N₂氣氛下攪拌16小時(shí)。將混合物真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠上的柱色譜(PE:EA＝10:1)純化以得到呈深色液體的化合物4(1.28g,72％)。LCMS:232[M+1]。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ7.40-7.27(m,5H),5.95-5.62(m,2H),5.13(d,J＝3.5Hz,2H),3.99(d,J＝2.8Hz,2H),3.63(d,J＝6.1Hz,2H),2.28-2.19(m,3H),1.89-1.75(m,2H)。

1.10.4化合物5的制備

向化合物5(900mg,3.9mmol)于DCM(40mL)中的溶液添加m-CPBA(1.34g,7.8mmol)，并在室溫下攪拌16小時(shí)。TLC顯示材料完全消耗。將反應(yīng)混合物用Na₂SO₃溶液猝滅并用DCM(20mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠上的柱色譜(PE:EA＝30:1)純化以得到呈無(wú)色液體的化合物6(900mg,83％)。LCMS:248[M+1]。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ7.37(s,6H),5.19-5.08(m,2H),4.32-4.18(m,1H),3.86-3.74(m,1H),3.56-3.38(m,1H),3.19-3.08(m,2H),2.80-2.66(m,1H),2.31-2.17(m,1H),2.02-1.94(m,1H),1.79-1.51(m,2H)。

1.10.5化合物6和6’的制備

向化合物6(700mg,2.83mmol)于MeOH(40mL)中的溶液在室溫下添加濃H₂SO₄(0.1mL)，并將溶液攪拌1小時(shí)。TLC顯示材料完全消耗。添加NaHCO₃的水性溶液(1mL)以中和反應(yīng)混合物。真空濃縮所得混合物，然后添加EtOAc(40mL)和水(20mL)以溶解殘余物。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠上的柱色譜(PE:EA＝10:1)純化以得到呈無(wú)色液體的化合物7B和7C的混合物(700mg，產(chǎn)率88.6％)。

1.10.6 A16和A17的制備

向化合物7B和7C(800mg,2.86mmol)的混合物于MeOH(20mL)中的溶液添加Pd(OH)₂/C(200mg)，并將混合物在H₂氣球下攪拌4小時(shí)。TLC小時(shí)材料完全耗盡。過(guò)濾溶液并將濾液真空濃縮以得到呈液體的化合物C和D的混合物(370mg，產(chǎn)率88％)。

1.10.7化合物7制備

向化合物4(260mg,1.12mmol)于THF(5mL)和水(2mL)中的溶液添加OsO₄(60mg)，然后添加NMO(131mg)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌3小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。將混合物用水稀釋并用EtOAc(30mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到呈無(wú)色液體的粗產(chǎn)物化合物8(186mg,62％)。LCMS:266[M+1]。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ7.43-7.29(m,5H),5.21-5.07(m,2H),3.88-3.81(m,1H),3.81-3.65(m,3H),3.32-3.17(m,2H),2.02-1.87(m,2H),1.74-1.45(m,2H)。

1.10.8化合物A18的制備

向化合物7(186mg,0.77mmol)于MeOH(20mL)中的溶液在室溫下添加Pd(OH)₂/C(40mg)并在H₂氣球下攪拌4小時(shí)。將混合物過(guò)濾并真空濃縮濾液以得到呈液體的粗產(chǎn)物化合物E(101mg,100％)。

1.11 A22的制備

1.11.1化合物2的制備

向化合物1(0.5g,2.0mmol)于THF(30mL)中的溶液在-78℃下在N₂下添加LiHMDS(4.0mL,4.0mmol)。將反應(yīng)混合物在–78℃下攪拌2小時(shí)。將MeI(0.86g,6.0mmol)在–78℃下添加至混合物，然后緩慢升溫至28℃并攪拌1.5小時(shí)。將所得混合物用H₂O猝滅并用EA(50mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物2(0.4g,75％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ7.29-7.41(m,1H),5.03-5.23(m,1H),3.84-4.22(m,1H),2.60-3.23(m,2H),2.46-2.59(m,1H),1.69-1.90(m,2H),1.09(dd,J＝6.84,15.12Hz,3H),LCMS:262.0[M+1]。

1.11.3化合物3的制備

向化合物2(1.2g,4.6mmol)于EtOH(20mL)中的溶液在0℃下添加NaBH₄(259mg,6.8mmol)，并將混合物在25℃下攪拌2小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EA(80mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(650mg,54％)。LCMS:264.0[M+1]。

1.11.4化合物A22的制備

向化合物3(0.26g,1.0mmol)于MeOH(25mL)中的溶液添加Pd(OH)₂(50mg)。將混合物在25℃下在25Psi壓力下氫化16小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(0.1g,77％)。

1.12 A23的制備

1.12.1化合物2的制備

向化合物1(2.0g,7.0mmol)于THF(50mL)中的溶液在0℃下在N₂下添加NaH(336mg,8.4mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌0.5小時(shí)。在0℃下添加MeI(1.5g,10.5mmol)至混合物，然后緩慢升溫至28℃并攪拌16小時(shí)。將所得混合物用H₂O猝滅并用EA(50mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物2(1.5g,71.4％)。

1.12.2化合物3的制備

將化合物2(1.5g,5mmol)和KOH(0.5g,9.0mmol)于MeOH/H₂O(20mL/4mL)中的混合物加熱至55℃持續(xù)2小時(shí)。將混合物用EA(80mL)稀釋并用鹽水(60mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)干燥Na₂SO₄并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物,其直接用于下一步(1.5g,94％).

1.12.3化合物4的制備

向化合物3(1.3g,5.7mmol)于EtOH(20mL)中的溶液在0℃下添加NaBH₄(260mg,6.9mmol)，并將混合物在25℃下攪拌2小時(shí)。將形成的混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EA(80mL)萃取。將有機(jī)層干燥經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(821mg,63％)。

1.12.4化合物A23的制備

向化合物4(0.82g,3.6mmol)于MeOH(10mL)中的溶液添加HCl/MeOH(4mL,4M)。將混合物在25℃下攪拌2小時(shí)。將混合物濃縮以得到粗HCl鹽，其直接用于下一步(760mg，粗HCl鹽)。

1.13 A24的制備

1.13.1化合物2的制備

向化合物1(1g,6.4mmol)于THF(30mL)中的溶液在-78℃下在N₂下添加LiHMDS(12.8mL,12.8mmol)。將反應(yīng)混合物在–78℃下攪拌2小時(shí)。將MeI(2.7g,19.2mmol)在–78℃下添加至混合物，然后緩慢升溫至28℃并攪拌15小時(shí)。將所得混合物用H₂O猝滅并用EA(50mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物2(0.62g,57％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ3.92-4.17(m,4H),2.55-2.83(m,2H),2.31-2.43(m,1H),1.87-2.13(m,3H),1.69-1.81(m,1H),1.04(d,J＝6.65Hz,3H).LCMS:171.0[M+1]。

1.13.2化合物3的制備

向化合物2(0.5g,2.9mmol)于EtOH/H₂O(20/1mL)中的溶液添加NH₂OH.HCl(1.0g,14.7mmol)和NaOAc(0.7g,8.8mmol)。將混合物在25℃下攪拌16小時(shí)。將所得的混合物用EA(80mL)稀釋并用鹽水(60mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物3(0.4g,73％)。LCMS:186.0[M+1]。

1.13.3化合物4的制備

向化合物3(1.0g,5.4mmol)于丙酮(20mL)中的溶液添加TosCl(1.5g,8.1mmol)。將于H₂O(30mL)中的NaOAc(1.7g,16.2mmol)添加至混合物。將混合物在16℃下攪拌2小時(shí)，然后緩慢升溫至40℃并攪拌16小時(shí)。將所得的混合物用DCM(200mL)稀釋并用鹽水(60mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物4(0.9g,83％)。

1.13.4化合物5的制備

向化合物4(0.9g,4.8mmol)于THF(15mL)中的溶液在16℃下添加LiAlH₄(0.27g,7.2mmol)。將混合物在16℃下攪拌5小時(shí)。將混合物用水猝滅并過(guò)濾，然后添加CbzCl(1.2g,7.2mmol)至所述溶液。將混合物在40℃下過(guò)濾12小時(shí)。將所得的混合物用EA(20mL)稀釋并用鹽水(20mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物5(0.75g,60％)。

1.13.4化合物5的制備

向化合物4(0.9g,4.8mmol)于THF(15mL)中的溶液在16℃下添加LiAlH₄(0.27g,7.2mmol)。將混合物在16℃下攪拌5小時(shí)。將混合物用水猝滅并過(guò)濾。將t CbzCl(1.2g,7.2mmol)添加至濾液。將混合物在40℃下攪拌12小時(shí)。將所得混合物用EA(20mL)稀釋并用鹽水(20mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物5(0.75g,60％)。

1.13.5化合物6的制備

向化合物5(0.75g,2.3mmol)于丙酮(15mL)和水(5mL)中的溶液在16℃下添加TosOH(0.6g,3.4mmol)。將混合物在40℃下攪拌12小時(shí)。將所得的混合物用EA(20mL)稀釋并用鹽水(20mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物6(0.3g,50％)。

1.13.6化合物7的制備

向化合物6(0.30g,1.1mmol)于THF(15mL)中的溶液在16℃下添加NaBH₄(50mg,1.3mmol)。將混合物在16℃下攪拌3小時(shí)。將所得的混合物用EA(20mL)稀釋并用鹽水(20mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到化合物7(0.30g,98％)。

1.13.8化合物A24的制備

向化合物7(0.30g,1.1mmol)于MeOH(25mL)中的溶液添加Pd/C(50mg)。將混合物在25℃下在H₂氣氛下氫化16小時(shí)。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(0.14g,98％)。

1.14 A25的制備

1.14.1化合物3的制備

向銦(19.75g,172.03mmol,1.30當(dāng)量)和3-溴丙-1-烯(20.81g,172.03mmol,1.30當(dāng)量)于H2O(400mL)中的混合物在25℃下在N₂下一次性添加2-氯乙醛(25.97g,132.33mmol,1.00當(dāng)量)。將混合物在25℃下攪拌16小時(shí)。然后過(guò)濾混合物，將濾液用EtOAc萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥，濃縮以得到呈黃色油狀物的1-氯戊-4-烯-2-醇(13.00g,107.81mmol,81.47％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.79-5.89(m,1H),5.13-5.25(m,2H),3.86-3.97(m,1H),3.62-3.70(m,1H),3.50-3.59(m,1H),2.32-2.46(m,2H),2.24(brs,1H)。

1.14.2化合物5的制備

將1-氯戊-4-烯-2-醇(23.40g,194.06mmol,1.00當(dāng)量)和丙-2-烯-1-胺(33.00g,578.03mmol,2.98當(dāng)量)的混合物在90℃下攪拌16小時(shí)。將混合物冷卻至25℃并在60℃下減壓濃縮。將殘余物傾倒至冰水(w/w＝1/1)(150mL)內(nèi)并攪拌20分子。將水相用EA萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(200mL*2)洗滌、經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(DCM:MeOH＝30/1至10/1)純化以得到呈黃色油狀物的1-(烯丙基氨基)戊-4-烯-2-醇(16.00g,113.31mmol,58.39％產(chǎn)率)。

1.14.3化合物6的制備

向1-(烯丙基氨基)戊-4-烯-2-醇(4.23g,29.96mmol,1.00當(dāng)量)于DCM(50mL)中的溶液添加CbzCl(6.13g,35.95mmol,1.20當(dāng)量)和TEA(6.06g,59.92mmol,2.00當(dāng)量)。將混合物在25℃下攪拌4小時(shí)。TLC檢測(cè)到材料完全耗盡，將混合物用水洗滌，將水層用DCM萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、濃縮并通過(guò)硅膠色譜(用PE:EA＝10:1洗脫)純化以得到呈黃色油狀物的所需產(chǎn)物N-烯丙基-N-(2-羥基戊-4-烯基)氨基甲酸芐酯(6.10g,22.15mmol,73.95％產(chǎn)率)。LCMS:276.0[M+1]。

1.14.4化合物7的制備

向N-烯丙基-N-(2-羥基戊-4-烯基)氨基甲酸芐酯(6.10g,22.15mmol,1.00當(dāng)量)于DCM(400mL)中的溶液在N₂保護(hù)下添加Zhan催化劑1B(812.63mg,1.11mmol,0.05當(dāng)量)。將混合物在25℃下在N₂保護(hù)下攪拌16小時(shí)。然后TLC檢測(cè)到反應(yīng)完成，蒸發(fā)溶劑，將殘余物用色譜(硅膠，用PE:EA＝2:1洗脫)純化以得到呈黃色油狀物的3-羥基-2,3,4,7-四氫氮雜-1-甲酸芐酯(2.60g,10.51mmol,47.47％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30-7.46(m,5H),5.63-5.89(m,2H),5.19(s,2H),3.96-4.13(m,2H),3.74-3.90(m,2H),3.54-3.70(m,1H),2.43(m,2H)。

1.14.5化合物8的制備

向3-羥基-2,3,4,7-四氫氮雜-1-甲酸芐酯(300.00mg,1.21mmol,1.00當(dāng)量)于DCM(10mL)中的溶液在0℃下在N₂保護(hù)下添加ZnEt₂(2M,1.21mL,2.00當(dāng)量)。然后將混合物在0℃下攪拌30秒且添加ClCH₂I(533.55mg,3.03mmol,2.50當(dāng)量)。將所得的混合物在25℃下攪拌16小時(shí)。LCMS檢測(cè)到75％的所需產(chǎn)物和15％材料剩下。將混合物傾倒至NH₄Cl溶液中，并用EA萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮，將殘余物于THF(3mL)和H₂O(3mL)中稀釋，添加NaIO₄(258.81mg,1.21mmol,1.00當(dāng)量)和K₂OsO₄(230.21mg,1.21mmol,1.00當(dāng)量)，將混合物在25℃下攪拌30分鐘，然后將反應(yīng)物用飽和Na₂SO₃猝滅，用EA提取，將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮，將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝3:1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的3-羥基-5-氮雜雙環(huán)[5.1.0]辛烷-5-甲酸芐酯(110.00mg,420.94umol,34.79％產(chǎn)率)。LCMS:262.0[M+1]。

1.14.6化合物A25的制備

向3-羥基-5-氮雜雙環(huán)[5.1.0]辛烷-5-甲酸芐酯(110.00mg,420.94umol,1.00當(dāng)量)于MeOH(10mL)中的溶液在N₂下添加Pd-C。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂下在25℃下攪拌4小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。將反應(yīng)混合物過(guò)濾并濃縮濾液以得到呈無(wú)色油狀物的5-氮雜雙環(huán)[5.1.0]辛-3-醇(37.00mg,290.93umol,69.11％產(chǎn)率)。

1.15 A26/A27的制備

1.15.1化合物2A和2B的制備

在冰浴處，向化合物1(9.0g,23.2mmol))于THF(135mL)中的溶液添加BH₃-Me₂S(7.0mL,70.0mmol)。在室溫下攪拌溶液過(guò)夜后，輪流添加3M NaOH(9.3mL,27.8mmol)和H₂O₂(14.7g,116.0mmol)在冰浴處，并在室溫下攪拌2小時(shí)。將混合物用Na₂SO₃溶液猝滅、用EtOAc(200mL*2)萃取并將有機(jī)層濃縮以得到粗混合產(chǎn)物，其直接用于下一步(9.36g,99.6％)。

1.15.2化合物3A和3B的制備

將化合物2A和2B(9.36g,23.0mmol)及戴斯馬丁試劑(11.72g,27.6mmol)在DCM(160mL)中的混合物在室溫下在N₂下攪拌過(guò)夜。將混合物用Na₂SO₃溶液猝滅，用DCM(150mL*2)猝滅并濃縮有機(jī)層以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)Biotage色譜純化以得到化合物3A(4.6g)和化合物3B(2.2g)。LCMS:427[M+23]

化合物10A ¹H NMR(400MHz,CDCl₃,10A):δppm:8.27-8.30(m,2H),7.93-7.96(m,2H),7.36-7.43(m,5H),4.60-4.67(m,2H),4.05(d,J＝18.2Hz,1H),3.82-3.87(m,1H),3.75(d,J＝18.2Hz,1H),3.62-3.66(dd,J＝14.6Hz,3.0Hz,1H),3.32-3.37(dd,J＝14.6Hz,7.0Hz,1H),2.63-2.67(m,2H),2.06-2.09(m,1H),1.82-1.86(m,1H)。

化合物10B ¹H NMR(400MHz,CDCl₃,10B):δppm:8.18-8.21(m,2H),7.94-7.97(m,2H),7.27-7.37(m,5H),4.62(d,J＝11.2Hz,1H),4.51(d,J＝11.2Hz,1H),3.75-3.93(m,3H),3.49-3.56(m,2H),3.02-3.08(m,1H),2.91-2.95(m,1H),2.56-2.71(m,2H)。

1.15.3化合物4A的制備

將化合物3A(4.6g,11.4mmol)和NaBH₄(0.43g,11.4mmol)于MeOH(40mL)和THF(20mL)中的溶液在室溫下攪拌30分鐘。將混合物用NH₄Cl溶液猝滅，蒸發(fā)溶劑，用EA(150mL*2)萃取并濃縮有機(jī)層以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)Biotage色譜純化以得到呈白色固體的所需產(chǎn)物(4.21g,91％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:8.28-8.34(m,2H),7.98-8.00(m,2H),7.28-7.38(m,5H),4.48-4.58(m,2H),4.00-4.04(m,1H),3.77-3.84(m,1.4H),3.54-3.57(m,1.6H),3.28-3.38(m,1H),3.17-3.23(m,0.6H),3.03-3.09(m,0.4H),2.42-2.67(m,1H),1.60-2.14(m,4H)。

1.15.4化合物5A的制備

向化合物5A(1.8g,4.4mmol)于DCM(20mL)中的溶液在-60℃下在N₂下添加DAST(1.78g,11mmol)。將溶液在冰浴處攪拌2小時(shí)。用NaHCO3溶液猝滅，用DCM(100mL*2)萃取并濃縮有機(jī)層以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)Biotage色譜純化以得到呈白色固體的所需產(chǎn)物(480mg,26.7％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:8.25(d,J＝8.8Hz,2H),7.99(d,J＝8.8Hz,2H),7.31-7.40(m,5H),4.80-4.93(m,1H),4.50-4.57(m,2H),3.40-3.75(m,5H),1.78-2.07(m,4H)。

1.15.5化合物6A的制備

在冰浴處，向化合物5A(480mg,1.17mmol)于DMF(8mL)中的溶液添加LiOH(296mg,7.06mmol)，然后在N₂下添加HSCH₂CO₂H(216mg,2.35mmol)。將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。添加Boc₂O(279mg,1.29mmol)并在室溫下再攪拌30分鐘。將混合物用NaClO溶液猝滅，用EA(50mL*2)猝滅并濃縮有機(jī)層以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈油狀物的所需產(chǎn)物(300mg,79.3％)。LCMS:346[M+23]

1.15.6化合物7A的制備

向化合物6A(300mg,0.9mmol)于CH₃OH(50mL)中的溶液添加Pd(OH)₂/C(300mg)。將混合物在60℃下在50Psi氫氣壓下氫化過(guò)夜。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到呈油狀物的所需產(chǎn)物(160mg,73.7％)。

1.15.6化合物26A的制備

將4M HCl-MeOH(10mL)添加至化合物13A(160mg,0.68mmol)。然后將溶液在室溫下攪拌10分鐘。蒸發(fā)溶劑并將殘余物用Et₃N堿化。其直接用于下一步。

1.15.7化合物4B的制備

將化合物3B(2.2g,5.4mmol)和NaBH₄(0.20g,5.4mmol)于MeOH(20mL)和THF(10mL)中的溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。將混合物用NH₄Cl溶液猝滅，蒸發(fā)溶劑，用EA(50mL*2)萃取并濃縮有機(jī)層以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)Biotage色譜純化以得到呈油狀物的所需產(chǎn)物(1.79g,81％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃,9B):δppm:8.27-8.33(m,2H),7.94-7.97(m,2H),7.27-7.35(m,5H),4.52-4.58(m,2H),4.11-4.17(m,1H),3.92-3.95(m,1H),3.54-3.72(m,2H),3.17-3.41(m,2H),1.84-2.21(m,4H)。

1.15.8化合物5B的制備

向化合物4B(2.16g,5.3mmol)于DCM(30mL)中的溶液在-60℃下在N₂下添加DAST(2.14g,13.3mmol)。將溶液在室溫下攪拌3小時(shí)。將混合物用NaHCO₃溶液猝滅，用DCM(100mL*2)猝滅并將有機(jī)層濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈淺黃色固體的所需產(chǎn)物(1.48g,68％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:8.30-8.33(m,2H),7.94-7.99(m,2H),7.31-7.40(m,5H),4.75-5.04(m,1H),4.51-4.66(m,2H),3.11-3.96(m,5H),2.01-2.27(m,4H)。

1.15.9化合物6B的制備

在冰浴處，向化合物5B(560mg,1.37mmol)于DMF(8mL)中的溶液添加LiOH(346mg,8.23mmol)，然后在N₂下添加2-巰基乙酸(252mg,2.74mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。添加Boc₂O(444mg,2.06mmol)并在室溫下再攪拌30分鐘。用NaClO溶液萃取，用EA(50mL*2)萃取并將有機(jī)層濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈油狀物的所需產(chǎn)物(300mg,67.8％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:7.30-7.40(m,5H),4.94-5.05(m,1H),4.57-4.65(m,2H),3.59-4.09(m,3H),2.95-3.32(m,2H),1.99-2.40(m,4H),1.43-1.49(m,9H)。

1.15.10化合物7B的制備

向化合物6B(300mg,0.9mmol)于CH₃OH(20mL)中的溶液添加Pd(OH)₂(200mg)。將混合物在60℃下在50Psi氫氣壓下氫化過(guò)夜。過(guò)濾催化劑并將濾液濃縮以得到呈油狀物的所需產(chǎn)物(200mg,91.7％)。

1.15.11化合物A27的制備

將4M HCl-MeOH(10mL)添加至化合物7B(190mg,0.81mmol)。然后將溶液在室溫下攪拌10分鐘。蒸發(fā)溶劑并將殘余物用Et₃N堿化。其直接用于下一步。

1.16 A28的制備

1.16.1化合物2的制備

向1,3-二氯丙-2-酮(20.00g,157.52mmol,1.00當(dāng)量)于THF(94mL)中的混合物在14℃下一次性添加PPh₃(37.18g,141.77mmol,0.90當(dāng)量)。將混合物在80℃下攪拌18小時(shí)。將因此形成的氯化單鏻通過(guò)過(guò)濾分離，然后在14℃下用Na₂CO₃(20.03g,189.02mmol,1.20當(dāng)量)/MeOH(250mL)–H2O(250mL)的溶液處理。在18小時(shí)后，沉淀出現(xiàn)，并從所述溶液過(guò)濾以得到呈白色固體的化合物2(55.57g,82.78％)。

1.16.2化合物4的制備

向N-丁-3-烯基氨基甲酸叔丁酯(3.16g,18.42mmol,1.30當(dāng)量)于THF(20mL)中的混合物在-78℃下在N₂下添加n-BuLi(2.5M,14.74mL,2.60當(dāng)量)。將混合物在-20℃下攪拌1小時(shí)。然后將于THF(20mL)中的1-氯-3-(三苯基膦烯)丙-2-酮(5.00g,14.17mmol,1.00當(dāng)量)在-78℃下在N₂下添加至混合物。將混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)。將所得混合物傾倒至水(30mL)中并攪拌20分鐘。將水相用EA(10mL)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(20mL*2)洗滌，用無(wú)水Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝1/1)純化以得到呈黃色固體的丁-3-烯-1-基(2-氧代-3-(三苯基膦烯)丙基)氨基甲酸叔丁酯(5.80g,11.90mmol,83.98％產(chǎn)率)。

1.16.3化合物5的制備

向N-丁-3-烯基-N-[2-氧代-3-(三苯基-膦烯)丙基]氨基甲酸叔丁酯(5.80g,11.90mmol,1.00當(dāng)量)于THF(30mL)中的混合物在18℃下一次性添加HCHO(96.58g,1.19mol,100.00當(dāng)量)。將混合物在18℃下攪拌15小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物用PE(100mL*3)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(200mL*2)洗滌，經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝50/1,40/1)純化以得到呈黃色固體的N-丁-3-烯基-N-(2-氧代丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯(1.40g,5.85mmol,49.16％產(chǎn)率)。

1.16.4化合物6的制備

向N-丁-3-烯基-N-(2-氧代丁-3-烯基)氨基甲酸叔丁酯(1.50g,6.27mmol,1.00當(dāng)量)于DCM(250mL)中的混合物在18℃下在N₂下一次性添加Zhan催化劑1B(150.00mg,204.43umol,0.03當(dāng)量)。將混合物在18℃下攪拌10小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝30/1,20/1)純化以得到呈黃色固體的6-氧代-3,7-二氫-2H-氮雜-1-甲酸叔丁酯(850.00mg,4.02mmol,64.17％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)6.36-6.64(m,1H),5.88-6.14(m,1H),4.23-4.35(m,1H),4.16(s,1H),3.51-3.68(m,2H),2.62-2.78(m,2H),1.46(d,J＝17.32Hz,1H)

1.16.5化合物7的制備

向6-氧代-3,7-二氫-2H-氮雜-1-甲酸叔丁酯(540.00mg,2.56mmol,1.00當(dāng)量)于BnOH(2.76g,25.56mmol,10.00當(dāng)量)中的混合物在N₂下一次性添加t-BuOK(28.68mg,255.61umol,0.10當(dāng)量)。將混合物在20℃下攪拌12小時(shí)。LCMS顯示反應(yīng)完成。將混合物傾倒至水(100mL)中并攪拌20分鐘。將水相用EA(40mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(20mL*3)洗滌，用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮以得到呈黃色油狀物的5-芐基氧基-3-氧代-氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸叔丁酯(1.50g,粗)。

1.16.6化合物8的制備

向叔丁基5-芐基氧基-3-氧代-氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸叔丁酯(700.00mg,2.19mmol,1.00當(dāng)量)于EtOH(30mL)中的混合物在N₂下一次性添加NaBH₄(99.49mg,2.63mmol,1.20當(dāng)量)。將混合物在18℃下攪拌6小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物傾倒水(150mL)并攪拌20分鐘。將水相用EA(90mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(80mL*2)洗滌、用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝10/1,2/1)純化以得到呈黃色油狀物的5-芐基氧基-3-羥基-氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸叔丁酯(510.00mg,1.59mmol,72.55％產(chǎn)率)，其通過(guò)制備-HPLC(FA)純化以得到193mg(D1)和190mg(D2)。

1.16.7化合物9的制備

向5-芐基氧基-3-羥基-氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸叔丁酯(200.00mg,622.26umol,1.00當(dāng)量,D2)于DCM(20mL)中的混合物在78℃下在N₂下添加DAST(200.60mg,1.24mmol,2.00當(dāng)量)。將混合物在-78℃下攪拌1小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物傾倒至飽和NaHCO₃(10mL)中并攪拌5分鐘。將水相用DCM(10mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用NaClO₄(5mL)洗滌，用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(石油醚/乙酸乙酯＝15/1)純化以得到呈黃色油狀物的5-芐基氧基-3-氟-氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸叔丁酯(163.00mg,504.02umol,81.00％產(chǎn)率,D2)。

1.16.8化合物10的制備

向5-芐基氧基-3-氟-氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸叔丁酯(163.00mg,504.02umol,1.00當(dāng)量,D2)于MeOH(20mL)中的溶液在N₂下添加Pd(OH)₂(30.00mg,N/A)。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂(15psi)下在20℃下攪拌12小時(shí)。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3:1)顯示原料完全耗盡。將反應(yīng)混合物過(guò)濾并將濾液濃縮以得到呈黃色油狀物的3-氟-5-羥基-氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸叔丁酯(115.00mg,492.97umol,97.81％產(chǎn)率,D2)。

1.16.9 A28的制備

向3-氟-5-羥基-氮雜環(huán)庚烷-1-甲酸叔丁酯(115.00mg,492.97umol,1.00當(dāng)量,D2)于DCM(3mL)中的混合物在25℃下在N₂下添加TFA(1mL)。將混合物在25℃下攪拌2小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物真空濃縮以得到呈黃色油狀物的6-氟氮雜環(huán)庚-4-醇(240.00mg,粗,D2)。

1.17 A29的制備

1.17.1化合物3的制備

向化合物1(8.7g,65.7mmol)于DMF(120mL)中的溶液添加化合物2(3.5g,32.7mmol)，然后添加K₂CO₃(9.06g,65.7mmol)。將混合物加熱至100℃持續(xù)16小時(shí)。將混合物用EA(100mL)稀釋，并用H₂O(100mLx 3)洗滌。將有機(jī)相經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的所需產(chǎn)物3(5.1g,72.5％)。LCMS:256[M+1]。

1.17.2化合物4的制備

向化合物3(1.5g,6.97mmol)于甲苯(15mL)中的溶液添加CbzCl(1.42g,8.37mmol)。將混合物加熱至110℃持續(xù)16小時(shí)。將混合物真空濃縮。將殘余物用水和EA溶解。將有機(jī)層用水性Na₂CO₃洗滌、經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的所需產(chǎn)物4(1.24g，產(chǎn)率：68.9％)。LCMS:260[M+1]。

1.17.3化合物5的制備

向化合物4(1.0g,3.86mmol)于DCM(60mL)中的溶液添加二氯化物Zhan催化劑1B(150mg,CAS:918870-76-5)。將混合物用N₂吹掃10分鐘并在20℃下攪拌16小時(shí)。將混合物真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的所需產(chǎn)物5(800mg,產(chǎn)率:89.7％)。LCMS:232[M+1]。

1.17.4化合物6的制備

向化合物5(800mg,3.46mmol)于DCM(30mL)中的溶液添加m-CPBA(774mg,4.5mmol)。將混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。將溶液用水性Na₂SO₃猝滅并用DCM(60mL*2)萃取。將有機(jī)合并相經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮以得到呈無(wú)色油狀物的所需化合物7(812mg，產(chǎn)率：95.9％)。LCMS:248[M+1]。

1.17.5化合物7的制備

將化合物7(812mg,3.31mmol)溶解于MeOH(10mL)中讓，然后添加濃H₂SO₄(200mg)。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。將溶液用水性Na₂CO₃中和至pH＝7。將所得混合物真空濃縮。將殘余物用EA(60mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的所需產(chǎn)物8(778mg，產(chǎn)率：84.9％)。LCMS:280[M+1]。

1.17.6 A29的制備

向化合物7(778mg,2.8mmol)于MeOH(70mL)中的溶液在N₂下添加Pd(OH)₂/C(100mg)。將混合物在H₂氣球下在23℃下攪拌2小時(shí)。將混合物過(guò)濾，濃縮濾液以得到所需產(chǎn)物8(310mg，產(chǎn)率：78％)。

1.18 A20/A21的制備

1.18.1化合物2/2′的制備

向化合物1(1.8g,5.8mmol)于THF(40mL)中的溶液在0℃下添加BH₃.Me₂S(1.2mL,10M)，并將混合物在16℃下攪拌12小時(shí)。在0℃下向反應(yīng)混合物添加NaOH(2.3mL,3M)和H₂O₂(3.3g,29.0mmol)，并將混合物在16℃下攪拌12小時(shí)。將所得混合物用Na₂SO₃(飽和)猝滅并用EA(150mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到化合物2和化合物2′(1.8g，粗)，其直接用于下一步。

1.18.2化合物3/3′的制備

向化合物2和化合物2′(1.8g,粗)于DCM(40mL)中的溶液在0℃下添加戴斯馬丁(3.5g,8.2mmol)，并將混合物在16℃下攪拌16小時(shí)。將所得混合物用Na₂SO₃(飽和)猝滅并用DCM(100mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到化合物3(0.58g,32％)¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ＝8.39–8.42(m,2H),8.02–8.05(m,2H),3.73–3.78(m,1H),3.60–3.65(m,2H),3.51–3.56(m,2H),3.38(s,3H),2.90–2.97(m,2H),2.67–2.70(m,2H)和化合物3′(0.86g,48％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ＝8.39–8.43(m,2H),8.02–8.05(m,2H),4.04–4.09(m,1H),3.72–3.77(m,1H),3.64–3.68(m,2H),3.38(s,3H),3.20–3.30(m,1H),2.63–2.69(m,2H),2.09–2.19(m,1H),1.76–1.79(m,1H)。

1.18.3化合物4′的制備

向化合物3′(0.86g,2.6mmol)于EtOH(15mL)中的溶液在0℃下添加NaBH₄(0.15g,3.9mmol)，并將混合物在18℃下攪拌1小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EA(100mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到化合物4′(0.86g,粗)，其直接用于下一步。

1.18.4化合物5′的制備

向化合物4′(0.86g,2.6mmol)于DMF(10mL)中的溶液在0℃下添加LiOH.H₂O(0.64g,15.6mmol)和HSCH₂COOH(0.48g,5.3mmol)，并將混合物在16℃下攪拌2小時(shí)。然后添加Boc₂O(0.85g,5.3mmol)，并將混合物再攪拌1小時(shí)。將所得混合物用NaClO(水性)猝滅并用EA(100mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(0.39g,61％)。

1.18.5 A20的制備

向化合物5′(390mg,1.6mmol)于DCM(5mL)中的溶液添加TFA(3mL)并在16℃下攪拌0.5小時(shí)。真空濃縮反應(yīng)混合物以得到粗產(chǎn)物(360mg，含有TFA)。

1.18.6化合物4的制備

向化合物3(0.58g,1.8mmol)于EtOH(10mL)中的溶液在0℃下添加NaBH₄(0.10g,2.7mmol)，并將混合物在18℃下攪拌1小時(shí)。將所得混合物用NH₄Cl(飽和)猝滅并用EA(100mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮為粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(0.47g,81％)。

1.18.7化合物5的制備

向化合物4(0.47g,1.4mmol)于DMF(10mL)中的溶液在0℃下添加LiOH.H₂O(0.35g,8.5mmol)和HSCH₂COOH(0.26g,2.8mmol)，并將混合物在16℃下攪拌2小時(shí)。然后添加Boc₂O(0.47g,2.1mmol)，并將混合物再攪拌1小時(shí)。將所得混合物用NaClO(水性)猝滅并用EA(100mL)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(0.20g,57％)。

1.18.8 A21的制備

向化合物5(201mg,0.82mmol)于DCM(3mL)中的溶液添加TFA(3mL)并在16℃下攪拌0.5小時(shí)。真空濃縮反應(yīng)混合物以得到粗產(chǎn)物(182mg,TFA)。

1.19化合物A34的制備

1.19.1化合物3的制備

向化合物1(50.00g,310.17mmol,1.00當(dāng)量)于DMF(500mL)中的溶液，將混合物冷卻至-10℃，然后添加NaH(27.29g,682.37mmol,2.20當(dāng)量)，將混合物在0℃下攪拌40分鐘，并在-5～0℃下滴加化合物2(38.77g,310.17mmol,1.00當(dāng)量)，將混合物在18℃下攪拌3小時(shí)，TLC(PE:EA＝3:1)顯示反應(yīng)完成，將反應(yīng)溶液傾倒至冰水中，用EA(200mL)萃取并用更多的水(300*3)洗滌有機(jī)相、經(jīng)NaSO4干燥、濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝5/1)純化以得到呈黃色固體的化合物3(30.00g,140.67mmol,45.35％產(chǎn)率)。

1.19.2化合物4的制備

向化合物3(1.00g,4.69mmol,1.00當(dāng)量)于DCM(10mL)中的溶液添加m-CPBA(1.21g,7.04mmol,1.50當(dāng)量)，將混合物在18℃下攪拌2小時(shí)，TLC(PE:EA＝3:1)顯示反應(yīng)完成，將混合物用NaSO₃(30mL*5)洗滌，將有機(jī)相干燥并濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝10/1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物4(700.00mg,3.05mmol,65.10％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.91-3.54(m,8H),2.78-2.73(m,2H),1.48(s,9H)。

1.19.3化合物5的制備

將化合物4(600.00mg,2.62mmol,1.00當(dāng)量)添加至HF-Et3N(15mL)中，將混合物在18℃下攪拌12小時(shí)，TLC(PE:EA＝3:1)顯示反應(yīng)幾乎完成，將混合物傾倒至冰飽和NaHCO₃(80mL)中，用EA(80mL*2)萃取，用鹽水洗滌。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝7/1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物5(190.00mg,762.20umol,29.09％產(chǎn)率)。

1.19.4化合物A34的制備

將化合物5(190.00mg,762.20umol,1.00當(dāng)量)添加HCl-二噁烷(5mL)并在17℃下攪拌30分鐘，TLC(PE:EA＝1:1)顯示反應(yīng)完成，將混合物濃縮以得到化合物B(100.00mg,670.42umol,87.96％產(chǎn)率)。

1.20化合物A35/36的制備

1.20.1化合物2的制備

向甲基溴化鎂(2.5M,4.46mL,3.00當(dāng)量)于THF(30mL)中的溶液在N₂下在0℃下添加化合物1(800.00mg,3.72mmol,1.00當(dāng)量)，并且將溫度保持在0-5℃，將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，TLC(PE:EA＝3:1)顯示反應(yīng)幾乎完成，將所述溶液傾倒至冰飽和NH₄Cl(50mL)中，用EA萃取并濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝5/1純化，以得到呈無(wú)色油狀物的化合物2(560.00mg,2.42mmol,65.09％產(chǎn)率)。

1.20.2化合物A35的制備

向化合物2(560.00mg,2.42mmol,1.00當(dāng)量)于MeOH(10mL)中的溶液添加HCl-MeOH(10mL)，將混合物在室溫下攪拌30分鐘，TLC(PE:EA＝1:1)顯示反應(yīng)完成，將混合物濃縮以得到呈淺黃色固體的化合物A(530.00mg，粗)。

1.21 A62的制備

1.21.1化合物3的制備

向乙烯基溴化鎂(9.15g,69.69mmol)于THF(20mL)中的溶液在N₂下在-10℃下添加化合物1(3.0g,13.94mmol)。然后將混合物在25℃下攪拌3小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成。將混合物傾倒至水性NH₄Cl(300mL)中并攪拌20分鐘。將水相用EA(100mL*3)萃取。將合并的有機(jī)相經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥，過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝6/1,5/1)純化以得到呈黃色油狀物的所需產(chǎn)物化合物3(2.05g,8.43mmol,60.44％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:5.93(dd,J＝17.1,10.7Hz,1H),5.39-5.56(m,1H),5.19(d,J＝10.8Hz,1H),3.63-3.97(m,5H),3.08-3.59(m,3H),1.41-1.60(m,9H)。

1.21.2化合物4的制備

向化合物3(500mg,2.06mmol)于THF(10mL)中的溶液在0℃下添加BH₃/Me₂S(0.5mL,5.14mmol,10M)，然后緩慢升溫至25℃，并將反應(yīng)混合物在25℃下攪拌12小時(shí)。在0℃下將溶液傾倒至水性NaOH(3.0mL,10.3mmol,3M)中，然后是H₂O₂(1.17g,10.3mmol,30％)。將混合物在25℃下攪拌1小時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物用水性Na₂SO₃(50mL*2)洗滌，通過(guò)EA(80mL*3)萃取。將有機(jī)層濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)柱色譜(PE:EA＝5:1,2:1)純化以得到所需產(chǎn)物(210mg,39％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:3.31-4.02(m,9H),3.06-3.29(m,2H),1.69-1.93(m,2H),1.46-1.54(m,9H)

1.21.3化合物5的制備

向化合物4(210mg,0.8mmol)于THF(8mL)中的溶液在0℃下添加NaH(48mg,1.2mmol,60％)。在攪拌30分鐘后，滴加MeI(0.8mmol)于THF(2mL)中的溶液，并在25℃下攪拌2小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)到反應(yīng)完成。將混合物傾倒至水中并用EA萃取。將合并的有機(jī)相經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜(PE/EA＝5/1,3/1)純化以得到所需產(chǎn)物化合物5(90mg,41％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:3.25-3.94(m,14H),1.75-1.89(m,3H),1.43-1.56(m,9H)

1.21.4 A62的制備

向化合物5(350mg,1.27mmol)于DCM(2mL)中的溶液添加TFA(2mL)。將形成的混合物攪拌2小時(shí)，并濃縮以得到可直接用于下一步的所需產(chǎn)物(210mg,94％)。

1.22 A37的制備

1.22.1化合物2的制備

向化合物1(400mg,1.84mmol)于DCM(4mL)中的溶液添加TEA(557.5mg,5.52mmol)、Ac₂O(376mg,3.69mmol)，然后添加DMAP(44.9mg,0.33mmol)。將混合物在12℃下攪拌2小時(shí)。將混合物用EA(50mL*2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥，濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠上的色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物2(450mg,94.4％)。

1.22.2 A37的制備

將化合物2用HCl/二噁烷(4M)處理以得到化合物3。

1.23 A38-41的制備

1.23.1化合物2的制備

向化合物1(2.36g,10.95mmol)于DMF(23mL)中的溶液在0℃下分批添加NaH(1.26g,31.5mmol)。將混合物在0℃下攪拌40分鐘。在0℃下滴加RX(219mmol)。將混合物在19℃下攪拌1小時(shí)。經(jīng)混合物傾倒至冰水中，用EA稀釋。將合并的有機(jī)層用H₂O洗滌，經(jīng)Na₂SO₄干燥，且在真空中濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜純化以得到化合物2。

1.23.2 A38-41的制備

向化合物2(7.73mmol)于二噁烷(2mL)中的溶液添加HCl/二噁烷(4M)(2mL)。將混合物在19℃下攪拌1小時(shí)。將混合物真空濃縮以得到化合物A38-41。

1.24用于制備A42的程序

1.24.1化合物2的制備

向化合物1(3.0g,13.9mmol)于甲苯(30mL)中的溶液添加Na₂CO₃(736.7mg,69.5mmol)，然后添加[Ir(COD)Cl]₂(189mg,0.28mmol)。將混合物真空脫氣并用N₂吹掃數(shù)次。通過(guò)注射器添加乙酸乙烯酯(4.78g,55.5mmol)。將反應(yīng)混合物加熱至110℃持續(xù)16小時(shí)。將混合物冷卻至11℃并用EA萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物1(1.0g,29.8％)。

1.24.2化合物3的制備

向化合物2(1.0g,4.2mmol)于THF(5.0mL)中的溶液添加Pd(OAc)₂(189.8mg,0.84mmol)，然后添加CH₂N₂/Et₂O(100mL)。將混合物在8℃下攪拌16小時(shí)。將混合物用水性HCl(10mL)(3N)猝滅。將混合物用EA萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮。將殘余物溶解于THF/H₂O(10mL/10mL)中并添加NaIO₄(1.8g,8.4mmol)和KOsO₄.2H₂O(66.2mg,0.21mmol)。將混合物在8℃下攪拌40分鐘。將混合物用EA萃取。將有機(jī)層用水性Na₂SO₃洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮。將殘余物通過(guò)柱色譜PE:EA＝15:1純化以得到呈褐色油狀物的化合物3(240mg,22.4％)

1.24.3 A42的制備

向化合物3(100mg,0.39mmol)于DCM(2mL)中的溶液添加TFA(2mL)。將混合物在8℃下攪拌2小時(shí)。將混合物真空濃縮以得到呈褐色油狀物的化合物3(91mg，粗)。

1.25 A43的制備

1.25.1化合物2的制備

向化合物1(10g,129.8mmol)于DCM(150mL)中的溶液添加Boc₂O(28g,129.8mmol)，然后添加TEA(19.7g,194.7mmol)。將混合物在12℃下攪拌16小時(shí)。將混合物濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠PE:EA(10:1)上的色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物2(18.3g,79.9％)。

1.25.2化合物4的制備

將于EtOH(12mL)中的化合物2(1.0g,6.2mmol)和化合物3(960.8mg,10.5mmol)冷卻至0℃并用K₂CO₃(960.8mg,6.96mmol)處理。將混合物在12℃下攪拌16小時(shí)。將混合物用EA(100mL)稀釋并通過(guò)硅藻土過(guò)濾。將揮發(fā)物減壓去除以得到呈無(wú)色油狀物的化合物4(1.4g,83.8％)。

1.25.3化合物5的制備

向化合物4(500mg,2.14mmol)于DMF(6mL)中的溶液在-5℃下分批添加NaH(246.7mg,6.4mmol)。在0℃下攪拌30分鐘后，使得混合物在16℃下攪拌2小時(shí)。將混合物攪拌傾倒至冰水中，用EA(30mL*2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠PE:EA(15:1)上的色譜純化以得到呈核酸油狀物的化合物5(140mg，粗)。

1.25.4 A42的制備

將化合物5用HCl/MeOH(4M)處理以得到化合物D。

1.26用于A44的程序

1.26.1化合物3的制備

將化合物1(4.0g,37.3mmol)和化合物2(10g,74.7mmol)、K₂CO₃(12.9g,93.4mmol)于DMF(100mL)中的混合物在120℃下加熱16小時(shí)。將混合物傾倒至水(200mL)中，用EA(100mL x 3)萃取，并將有機(jī)層用鹽水(150mL)洗滌、經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮至干燥。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝1:1至PE:EA＝1:0)純化以得到呈褐色油狀物的所需化合物3(5.1g,63.5％)。

1.26.2化合物4的制備

將化合物3(5.1g,23.7mmol)和CbzCl(4.4g,26.1mmol)于甲苯(100mL)中的溶液在110℃下加熱16小時(shí)。任何將混合物濃縮至干，將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝5:1至PE:EA＝2:1)純化以得到呈褐色油狀物的所需化合物4(4.5g,72.5％)。

1.26.3化合物5的制備

向化合物4(4.5g,17.3mmol)于DCM(350mL)中的溶液添加Zhan催化劑(22.1mg,0.86mmol)，將混合物在25℃-30℃下攪拌16小時(shí)。將混合物濃縮至干。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝20:1至PE:EA＝10:1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的所需化合物5(2.7g,71.5％)。

1.26.4化合物6的制備

將NaHCO₃(2.43g,29.1mmol)和RuCl₃(200mg,1.08mmol)于EA/MECN/H2O(72ml/72ml/12ml)中的混合物添加過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽(35.3g,58.0mmol)，然后將化合物5(2.7g,11.6mmol)添加至以上混合物中。并且將反應(yīng)物在40℃下攪拌10分鐘，將混合物過(guò)濾并將濾液用Na₂SO₃(100ml)洗滌，將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮至干。將殘余物用硅膠上的柱色譜純化(PE:EA＝5:1至1:1)以得到呈無(wú)色油狀物的化合物6(1.7g,54.5％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.41-7.28(m,5H),5.21-5.06(m,2H),4.45(t,J＝10.0Hz,1H),4.32-4.16(m,1H),4.16-4.00(m,2H),3.84(d,J＝15.1Hz,1H),3.34-3.10(m,2H),3.00-2.55(m,2H),2.18-2.07(m,1H),1.81-1.62(m,1H)

1.26.5化合物7的制備

向化合物6(1.7g,6.50mmol)于DCM(20mL)中的混合物一次性添加DMAP(1.2g,9.7mmol)，然后添加Ac₂O(0.8g,7.8mmol)。將混合物在40℃下攪拌16小時(shí)。將混合物濃縮至干燥。將殘余物用硅膠上的柱色譜(PE:EA＝5:1至3:1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物7(1.5g,79.5％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.43-7.30(m,5H),5.30-5.23(m,1H),5.18-5.07(m,2H),4.10-3.89(m,2H),3.75(t,J＝6.5Hz,1H),3.53-3.30(m,2H),2.89-2.61(m,2H),2.04-1.90(m,2H),1.86(td,J＝3.3,6.5Hz,1H)

1.26.6化合物8的制備

向化合物7(1.7g,4.9mmol)于DCM(15mL)中的溶液在-60℃下經(jīng)過(guò)30分鐘的時(shí)間在N₂下滴加DAST(3.18g,19.6mmol)于DCM(5mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在40℃下再攪拌12小時(shí)。TLC(PE:EtOAc＝1:1)顯示原料完全耗盡。將反應(yīng)物傾倒至水中，然后用DCM(50mL*3)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(50mL*2)洗滌、經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜硅膠(PE/EA＝3/1,1/1)純化以得到呈黃色油狀物(soil)的化合物8(0.71g,44.31％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝7.42-7.30(m,5H),5.25-5.14(m,3H),3.75-3.58(m,2H),3.52-3.33(m,2H),2.50-2.29(m,1H),2.28-1.98(m,6H)

1.26.7化合物9的制備

向化合物8(770mg,2.35mmol)于MeOH(10mL)中的混合物一次性添加K₂CO₃(260mg,1.8mmol)，將混合物在40℃下攪拌1小時(shí)。將混合物傾倒至水(20ml)中、用EtOAc(20ml)萃取，將合并的有機(jī)層用鹽水(20ml)洗滌并濃縮至干燥以得到化合物9(560mg,83.3％)。

1.26.8 A44的制備

向化合物9(560mg,1.96mmol)于MeOH(10mL)中的溶液在N₂下添加Pd(OH)₂/C(10％,56mg)。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂(50psi)下在40℃下攪拌16小時(shí)。TLC(PE:EtOAc＝1:1)顯示原料完全耗盡。過(guò)濾反應(yīng)混合物并將濾液濃縮以得到呈黃色固體的化合物B(280mg,95.53％產(chǎn)率)。

1.27 A45的制備

1.27.1化合物3的制備

向化合物1(20.00g,119.31mmol,HCl鹽)于MeOH(200mL)中的混合物在16℃下一次性添加TEA(12.07g,119.31mmol)和化合物2(12.66g,119.31mmol,1.00當(dāng)量)。將混合物在16℃下攪拌16小時(shí)。在0℃下向混合物分批添加NaBH₄(2.71g,71.59mmol)。將混合物在16℃下攪拌1小時(shí)。將混合物用H₂O(50mL)猝滅。將混合物濃縮并通過(guò)快速色譜純化以得到呈白色固體的化合物3(15.60g,50.73％產(chǎn)率)。

1.27.2化合物5的制備

向化合物3(9.00g,31.27mmol,)和化合物4(3.73g,31.27mmol)于MeOH(90mL)/H₂O(10mL)中的混合物添加Na₂CO₃(3.98g,37.53mmol)，然后在16℃下在N₂下一次性添加福爾馬林(3.30g,40.66mmol)。將混合物在16℃下攪拌16小時(shí)。將混合物用EA(400mL*3)萃取。將合并的有機(jī)相用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮以得到呈褐色油狀物的化合物5(8.90g,74.42％)。

1.27.3化合物7的制備

向Zn(3.08g,47.06mmol)于THF(90mL)中的混合物在低于30℃下在N₂下緩慢添加TMSCl(2.68g,24.71mmol,1.05當(dāng)量)。將混合物在20℃下攪拌10分鐘。在低于30℃下在N₂下緩慢添加化合物6(5.25g,25.89mmol,1.10當(dāng)量)。將混合物在20℃下再攪拌10分鐘。緩慢添加化合物5(9.00g,23.53mmol,1.00當(dāng)量)于THF(10mL)中的溶液。同時(shí)保持內(nèi)部溫度低于30℃。將混合物在20℃下再攪拌16小時(shí)。將混合物用水性NaHCO₃(5mL)猝滅。將沉淀物通過(guò)過(guò)濾去除。將濾液用EA(100mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用1M HCl(10mL*2)洗滌、經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物7(4.00g,44％)。

1.27.4化合物8的制備

向化合物7(4.00g,10.32mmol)于THF(80mL)中的溶液在15℃下一次性添加t-BuOK(1.74g,15.49mmol)。將混合物在15℃下攪拌3小時(shí)。將混合物傾倒至水性NH₄Cl中并用EA(10mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(200mL*2)洗滌、用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈黃色油狀物的化合物8(2.50g,70.97％)。

1.27.5化合物9的制備

將化合物8(2.50g,7.32mmol)溶解于HCl(50mL)中。將混合物加熱至100℃并攪拌16小時(shí)。將混合物冷卻至25℃并真空濃縮以得到呈褐色油狀物的化合物9(1.52g,72％)。

1.27.6化合物10的制備

向化合物9(1.52g,5.29mmol)于MeOH(5mL)中的溶液在0℃下分批添加NaBH₄(200.14mg,5.29mmol)。將混合物在15℃下攪拌16小時(shí)。然后將混合物傾倒至水性NH₄Cl中并用EA(10mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮以得到呈黃色油狀物的化合物10(1.39g,96.85％)。

1.27.7化合物A45的制備

向化合物10(1.39g,5.12mmol)于MeOH(60mL)中的溶液在N₂下添加Pd(OH)₂/C(10％,0.2g)。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂(15psi)下在15℃下攪拌3小時(shí)。TLC(PE:EtOAc＝3:1)顯示原料完全耗盡。過(guò)濾反應(yīng)混合物并濃縮濾液。將粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物A(511.00mg,66.03％)。

1.27 A46的制備

用于制備胺B的程序與胺A類似。LDA用于從化合物5至化合物6的環(huán)化步驟。

1.28 A47的制備

1.28.1化合物2的制備

向化合物1(5.00g,17.52mmol,)于DMF(50mL)中的溶液添加K₂CO₃(4.84g,35.04mmol)，然后在0℃下添加分批MeI(3.73g,26.28mmol)。將混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物冷卻至室溫并在60℃下減壓濃縮。將殘余物傾倒至冰水(w/w＝1/1)(150mL)中并攪拌20分鐘。將水相用EA(400mL*3)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(200mL*2)洗滌、用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈黃色固體的化合物2(3.60g,68.64％)。

1.28.2化合物3的制備

向化合物2(15.00g,50.11mmol,1.00當(dāng)量)于MeOH(100mL)中的溶液添加于H₂O(35mL)中的KOH(5.62g,100.21mmol,2.00當(dāng)量)。將混合物加熱至60℃持續(xù)3小時(shí)。將混合物冷卻至室溫并傾倒至水性NH₄Cl中。將混合物用EA(50mL*3)萃取。將合并的有機(jī)相用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空干燥以得到呈褐色油狀物的化合物3(9.00g,79.02％)。

1.28.3化合物4的制備

向化合物3(10.00g,43.99mmol)于甲苯(100mL)中的溶液在0℃下添加t-BuOK(7.40g,65.99mmol。將混合物在15℃下攪拌16小時(shí)。將混合物用EA萃取。將EA層用10％水性NaOH(50mL*3)洗滌。合并水層并調(diào)節(jié)PH＝4且用EA(100mL*3)萃取。將EA層經(jīng)Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮以得到呈黃色油狀物的化合物4(10.00g,89.04％)。

1.28.4化合物6的制備

向化合物4(9.00g,35.25mmol)于丙酮(100mL)中的溶液添加K2CO3(9.74g,70.50mmol)，然后添加化合物5(8.99g,52.88mmol)。將混合物在60℃下回流16小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物用EA(100mL*3)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并濃縮以得到殘余物產(chǎn)物，其通過(guò)快速色譜純化以得到呈黃色油狀物的化合物6(7.80g,74.41％)。

1.28.5化合物7的制備

向二異丙基胺(6.18g,61.03mmol)于THF(80mL)中的溶液在-70℃下滴加n-BuLi(2.5M,22.19mL)。將混合物在-10℃下在N2下攪拌30分鐘。在-70℃下滴加于THF(80mL)中的化合物6(5.50g,18.49mmol)。當(dāng)完全添加時(shí)，將混合物在-30--20℃下攪拌30分鐘。然后在-70℃下滴加CH₃I(7.88g,55.48mmol,3.00當(dāng)量)。使混合物在20℃下攪拌3小時(shí)。TLC顯示原料近乎耗盡。將混合物傾倒至水性NH4Cl中并用EA(40mL*3)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(20mL*2)洗滌、用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮至粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速色譜純化以得到呈黃色油狀物的化合物7(1.50g,26.07％)。

1.28.6化合物8的制備

向化合物7(800.00mg,2.6mmol)于EtOH(10mL)中的溶液添加于H₂O(0.8mL)中的NaOH(205.69mg,5.22mmol,)。將混合物在90℃下攪拌16小時(shí)。TLC顯示原料耗盡。將混合物調(diào)節(jié)至pH＝7且用DCM萃取。將有機(jī)層真空濃縮以得到化合物8(900.00mg，粗)。

1.28.7化合物9的制備

向化合物8(900.00mg,3.73mmol)于THF(10mL)中溶液在0℃下一次性添加LiBH4(243.72mg,11.19mmol)。將混合物在20℃下攪拌1小時(shí)。然后將混合物用水性NH4Cl猝滅并用EA(50mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈黃色油狀物的化合物9(570.00mg,62.80％)。

1.28.8 A47的制備

將化合物5用HCl/二噁烷(4M)處理以得到化合物B。

1.29 A48/49的制備：

1.29.1化合物2的制備

向Mg(31.20g,1.30mol)和I₂(10mmol)于THF(700mL)中的混合物在40℃下滴加于THF(700mL)中的化合物1(130.00g,963mmol)。當(dāng)在1.5小時(shí)后完全添加時(shí)。將混合物在50℃下攪拌1小時(shí)。在-10℃下滴加于THF(700mL)中的丙酮(75.50g,1.30mol)。然后將混合物在20℃下再攪拌2小時(shí)。將混合物用水性NH4Cl猝滅并用DCM(200mL)萃取。將混合物在常壓(190℃)下蒸餾以得到呈無(wú)色油狀物的化合物2(60.00g,52.55％)。

1.29.2化合物3的制備

向化合物2(7.00g,61.30mmol)于TFA(104.84g,919.50mmol,15.00當(dāng)量)中的溶液一次性添加2-氯乙腈(13.88g,183.90mmol)。將混合物加熱至70℃持續(xù)16小時(shí)。將混合物用水性Na₂CO₃調(diào)節(jié)pH＝7并用EA萃取。將有機(jī)層濃縮并通過(guò)快速色譜純化以得到呈黃色油狀物的化合物3(4.20g,36％)。

1.29.3化合物4的制備

向化合物3(4.20g,22.14mmol)于EtOH(40mL)中的溶液添加硫脲(2.02g,26.57mmol)。將混合物在100℃下攪拌2小時(shí)。然后將混合物通過(guò)TLC檢測(cè)。TLC顯示SM耗盡。向混合物添加HOAc(8mL)并加熱至90℃持續(xù)16小時(shí)。將混合物用水性Na₂CO₃調(diào)節(jié)PH＝12并添加CbzCl(7.55g,44.28mmol)。將混合物在25℃下攪拌2小時(shí)。將混合物通過(guò)TLC)檢測(cè)。TLC顯示具有DP。將混合物用EA(500mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈黃色油狀物的化合物4(5.10g,93.14％)。

1.29.4化合物6的制備

向化合物4(5.00g,20.22mmol)于DMF(50mL)中的溶液在0℃下在N₂下分批添加NaH(1.37g,34.37mmol)。當(dāng)完全添加是。將混合物在5℃下攪拌30分鐘。在0℃下滴加化合物5(4.89g,40.44mmol,2.00當(dāng)量)。將混合物在27℃下攪拌4小時(shí)。將混合物通過(guò)TLC檢測(cè)。TLC顯示SM不完全耗盡。將混合物在27℃下持續(xù)攪拌2小時(shí)。將混合物傾倒至冰水中并用EA(200mL*2)萃取。將合并的有機(jī)層用水(100mL*3)洗滌、用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈黃色固體的化合物6(3.20g,55.07％)。

1.29.5化合物7的制備

向化合物6(3.20g,11.13mmol)于DCM(60mL)中的溶液在N₂下添加第二代格拉布(Grubb’s 2st)(320.00mg,388.85umol)。將混合物在28℃下在N2下攪拌16小時(shí)。將混合物通過(guò)TLC檢測(cè)。TLC顯示SM完全耗盡。過(guò)濾混合物。將濾液真空濃縮以得到殘余物，其通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈黃色油狀物的化合物7(2.70g,93.54％)。

1.29.6化合物8A、8B的制備

向化合物7(2.70g,10.41mmol)于THF(30mL)中的溶液在0℃下在N₂下滴加BH3-Me2S(10M,3.12mL)。將混合物在29℃下攪拌16小時(shí)。然后將混合物在0℃下滴加至于H₂O(4mL)中的水性NaOH(2.08g,52.05mmol,5.00當(dāng)量)中。將H2O2(N/A,52.05mmol,5.00當(dāng)量)緩慢添加至混合物中。然后將混合物在29℃下攪拌3小時(shí)。將混合物通過(guò)TLC檢測(cè)。TLC顯示SM完全耗盡。將混合物用水性Na₂SO₃猝滅并用EA(60mL*2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物產(chǎn)物通過(guò)柱色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物8A(700.00mg,24.24％)和呈無(wú)色油狀物的化合物8B(1.20g,41.56％)。

1.29.7化合物A48的制備

向f化合物8A(700.00mg,2.52mmol)于MeOH(40mL)中的溶液在N₂下添加Pd/C(10％,80mg)。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂(15psi)下在27℃下攪拌2小時(shí)。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)顯示原料完全耗盡。過(guò)濾反應(yīng)混合物并將濾液濃縮以得到呈黃色油狀物的化合物A48(320.00mg,88.66％)。

化合物A49was氫化from 8B.

1.30 A50的制備

1.30.1化合物2的制備

向化合物1(5.0g,44.2mmol)于THF(100mL)中的溶液在-5℃下分批添加NaH(2.6g,66.3mmol)，同時(shí)保持內(nèi)部溫度在-5～0℃之間。在0℃下攪拌30分鐘后，滴加BnBr(6.8mL)。將混合物在16℃下攪拌16小時(shí)。將混合物攪拌傾倒至冰水中，用EA(100mL*2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠PE:EA(10:1)上的色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物2(6.3g,70.8％)。

1.30.2化合物3的制備

向化合物2(2.03g,10.0mmol)于THF(50mL)中的溶液在-78℃下在N₂氣氛下滴加LDA(10mL)。在-78℃下攪拌1小時(shí)后，在-78℃下滴加碳酸二甲酯(1.8g,20.0mmol)。將混合物在16℃下攪拌2小時(shí)。將混合物用水性NH₄Cl猝滅并用EA(100mL*2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠PE:EA(1:1)上的色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物4(800mg,30.6％)。

1.30.3化合物5的制備

向LiAlH₄(340mg,9.2mmol)于THF(10mL)中的溶液在-5℃下添加化合物4(800mg,3.06mmol)于THF(10mL)中的溶液，同時(shí)保持內(nèi)部溫度在-5～10℃之間。將混合物在0℃下攪拌3小時(shí)。緩慢添加H₂O(0.5mL)，然后添加NaOH(15％,0.5mL)和H₂O(1.5mL)。將所得的混合物過(guò)濾。用EA(50mL*2)萃取濾液。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮以得到呈無(wú)色油狀物的化合物4(488mg,72.5％)。

1.30.4化合物A50的制備

向化合物4(488mg,2.23mmol)于MeOH(60mL)中的溶液在N₂下添加Pd(OH)₂(10％,50mg)。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂(15Psi)下在12℃下攪拌16小時(shí)。過(guò)濾混合物、濃縮濾液以得到化合物A(220mg,76.6％)。

1.31 A51的制備

1.31.1化合物4的制備

向化合物1(250mg,2.0mmol)于DCM(5mL)中的溶液添加TEA(0.3mL)，然后添加Boc₂O(426mg,2.0mmol)。將混合物在12℃下攪拌2小時(shí)。將混合物濃縮并通過(guò)快速色譜純化以得到化合物2(350mg,76.6％)。

1.31.2化合物5的制備

向化合物3(350mg,1.5mmol)于DCM(5mL)中的溶液添加戴斯馬丁試劑(190mg,1.95mmol)。將混合物在12℃下攪拌2小時(shí)。將混合物用DCM(50mL)萃取并用水性NaHSO3洗滌數(shù)次并濃縮以得到化合物5(410mg，粗)。

1.31.3化合物4的制備

向MeMgBr(1.8mL,3M)于THF(3mL)中的溶液在0℃下滴加化合物3(410mg,粗)于THF(3mL)中的溶液。將混合物在12℃下攪拌2小時(shí)。將混合物用水性NH4Cl猝滅并用DCM(50mL)萃取、經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮以得到化合物6(340mg，粗)。

1.31.4化合物B的制備

將化合物2用TFA/DCM(1:1)處理以得到化合物B

1.32 A52的制備

向化合物1(2.60g,8.69mmol)于THF(30mL)中的溶液在0℃下一次性添加LiBH4(756.65mg,34.74mmol)。將混合物在15℃下攪拌16小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物用水性NH₄Cl猝滅并用EA(50mL*3)萃取。將合并的有機(jī)相經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物2(2.10g,93.18％)。將所得的固體用HCl/二噁烷處理以得到HCl鹽。

1.33 A64的制備

1.33.1化合物2的制備

向1-氨基丙-2-醇(10.00g,133.14mmol,1.00當(dāng)量)于DCM中的混合物在30℃下在N₂下一次性添加Boc2O(29.06g,133.14mmol,1.00當(dāng)量)。將混合物在30℃下攪拌5小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物濃縮以得到呈黃色油狀物的N-(2-羥基丙基)氨基甲酸叔丁酯(23.00g,131.26mmol,98.59％產(chǎn)率)。

1.33.2化合物4的制備

向N-(2-羥基丙基)氨基甲酸叔丁酯(5.00g,28.54mmol,1.00當(dāng)量)于DMF(100.00mL)中的混合物在0℃下在N₂下一次性添加NaH(2.51g,62.79mmol,2.20當(dāng)量)。將混合物在0℃下攪拌1小時(shí)，然后添加3-氯-2-(氯甲基)丙-1-烯(3.57g,28.54mmol,1.00當(dāng)量)至混合物，將混合物在0℃下攪拌4小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物傾倒至水(100mL)中并攪拌5分鐘。將水相用乙酸乙酯(100mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(100mL*2)洗滌、用無(wú)水Na₂SO₄干燥、濃縮并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)純化以得到呈黃色油狀物的2-甲基-6-亞甲基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-甲酸叔丁酯(2.20g,9.68mmol,33.91％產(chǎn)率)。

1.33.3化合物5的制備

向2-甲基-6-亞甲基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-甲酸叔丁酯(2.40g,10.56mmol,1.00當(dāng)量)于THF(50.00mL)中的混合物在at 30℃下在N₂下一次性添加NaIO4(4.97g,23.23mmol,2.20當(dāng)量)和K2OSO4(401.83mg,2.11mmol,0.20當(dāng)量)。將混合物在30℃下攪拌5小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物傾倒至飽和NaSO₃(100mL)中并攪拌5分鐘。將水相用乙酸乙酯(30mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(30mL*2)洗滌、用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(石油醚/乙酸乙酯＝8/1)純化以得到呈黃色油狀物的2-甲基-6-氧代-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-甲酸叔丁酯(1.90g,8.29mmol,78.48％產(chǎn)率)。

1.33.4化合物6的制備

向2-甲基-6-氧代-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-甲酸叔丁酯(1.90g,8.29mmol,1.00當(dāng)量)于EtOH(20.00mL)中的混合物在30℃下在N₂下一次性添加NaBH4(376.33mg,9.95mmol,1.20當(dāng)量)。將混合物在30℃下攪拌5小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完全。將混合物傾倒至飽和水(100mL)中并攪拌5分鐘。將水相用乙酸乙酯(30mL*2)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水(30mL*2)洗滌、用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)純化以得到兩點(diǎn)，第一點(diǎn)D1:494mg；第二點(diǎn)D2:656mg。

1.33.5 A64的制備

向6-羥基-2-甲基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-甲酸叔丁酯(D1,494.00mg,2.14mmol,1.00當(dāng)量)于MeOH(5.00mL)中的混合物在30℃下在N₂下一次性添加HCl/MeOH(15.00mL)。將混合物在30℃下攪拌5小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物真空濃縮以得到呈黃色油狀物的2-甲基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-6-醇(385.00mg，粗)。

1.34 A65的制備

1.34.1用于制備化合物2的程序

在冰浴處，向化合物1(18g,0.24mol)和Et3N(29g,0.28mol)于DCM(180mL)中的溶液添加Boc₂O(65g,0.28mol)。然后將混合物在室溫下攪拌30分鐘、用水洗滌并濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈白色固體的所需產(chǎn)物(38.1g,90.7％)。

1.34.2用于制備化合物4的程序

在冰浴處，將化合物2(3.5g,20mmol)于DMF(30mL)中的溶液添加至NaH(1.76g,44mmol)于DMF(20mL)中的混合物內(nèi)。在攪拌混合物30分鐘后，將化合物3(2.5g,20mmol)添加并在室溫下攪拌2小時(shí)、用NH4Cl溶液猝滅、用EA萃取、用水洗滌并濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈油狀物的純產(chǎn)物(780mg,17.2％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:4.94-5.10(m,2H),4.29-4.53(m,3H),4.07(d,J＝10.0Hz,1H),3.66-3.71(m,3H),1.43(m,9H),1.21(d,J＝7.1Hz,3H)。

1.34.3用于制備化合物5的程序

將化合物4(780mg,3.43mmol)、K2OsO₄(54mg,0.20mmol)和NaIO4(1.69mg,7.90mmol)于THF-H₂O(1:1,20mL)中的混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將混合物用EtOAc(50mL*2)萃取并將有機(jī)層濃縮以得到呈無(wú)油狀物的粗產(chǎn)物(790mg)。

1.34.4用于制備化合物6的程序

將化合物5(787mg,3.43mmol)和NaBH4(130mg,3.43mmol)于MeOH(15mL)中的溶液在室溫下攪拌30分鐘、用NH₄Cl溶液猝滅、蒸發(fā)溶劑、用EA(50mL*2)萃取并將有機(jī)層濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠色譜純化以得到呈油狀物的所需產(chǎn)物(517mg,65.2％)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:3.92-4.23(m,5H),3.02-3.47.53(m,3H),1.50(d,J＝6.4Hz,9H),1.01-1.04(m,3H)。

1.34.5 A65的制備

將4M HCl-二噁烷(10mL)添加至化合物6(500mg,2.16mmol)。然后將溶液在室溫下攪拌30分鐘。真空蒸發(fā)溶劑以得到HCl鹽，其直接用于下一步中。

1.35 A66的制備

1.35.1化合物2的制備

向化合物1(10.00g,112.18mmol,1.00當(dāng)量)于DCM(200mL)中的溶液添加Et₃N(23.00g,227.30mmol,2.03當(dāng)量)。將混合物冷卻至0℃并添加Boc₂O(38.40g,175.95mmol,1.57當(dāng)量)，將混合物在20℃下攪拌1小時(shí)。將混合物用EA稀釋并用水洗滌。將有機(jī)相真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(石油醚/乙酸乙酯＝15/1)純化以得到呈白色固體的化合物2(16.00g,84.54mmol,75.36％產(chǎn)率)。

1.35.2化合物4的制備

向化合物2(2.00g,10.57mmol,1.00當(dāng)量)于DMF(60mL)中的溶液，將混合物冷卻至-10℃。然后添加NaH(930.16mg,23.25mmol,2.20當(dāng)量)，將混合物在0℃下攪拌40分鐘，并在-5-0℃下滴加化合物3(1.59g,12.68mmol,1.20當(dāng)量)。將混合物在20℃下攪拌3小時(shí)。TLC(PE:EA＝5:1)顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)溶液傾倒至冰水中，用EA萃取并將有機(jī)相用更多的水洗滌、經(jīng)Na₂SO4干燥并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE/EA＝15/1)純化以得到呈黃色固體的化合物4(1.00g,4.14mmol,39.20％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.02-4.98(d,2H),4.15-4.08(d,4H),3.64(s,2H),1.47(s,9H),1.40(s,6H)。

1.35.3化合物5的制備

向化合物4(1.00g,4.14mmol,1.00當(dāng)量)于THF(5mL)和H₂O(5mL)中的混合物添加NaIO₄(2.04g,9.52mmol,2.30當(dāng)量)，然后添加K₂OsO₄.2H₂O(76.18mg,207.00umol,0.05當(dāng)量)。將混合物在20℃下攪拌1小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)溶液用EA稀釋，用Na₂SO₃和鹽水洗滌，將有機(jī)相濃縮以得到呈黃色油狀物的產(chǎn)物化合物5(1.10g,粗)。

1.35.4化合物6的制備

向化合物5(1.10g,4.52mmol,1.00當(dāng)量)于MeOH(10mL)中的溶液在0℃下添加NaBH₄(512.97mg,13.56mmol,3.00當(dāng)量)。將混合物在20℃下攪拌1小時(shí)，TLC顯示反應(yīng)完成，將反應(yīng)混合物傾倒至冰飽和NH₄Cl中并用EA萃取，將有機(jī)相濃縮，將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝6:1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的產(chǎn)物化合物6(700.00mg,2.85mmol,63.13％產(chǎn)率)。

1.35.5 A66的制備

向化合物6(700.00mg,2.85mmol,1.00當(dāng)量)于二噁烷(5mL)中的溶液添加HCl/二噁烷(5mL)，將混合物在23℃下攪拌1小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成，將混合物濃縮以得到呈淺黃色固體的產(chǎn)物化合物D(600.00mg,粗)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.45(s,1H),3.93-3.92(m,2H),3.88-3.87(m,1H),3.77-3.74(m,2H),3.52-3.48(m,1H),1.53-1.49(m,6H)。

1.36 A52的制備：

1.36.1化合物2的制備

將化合物1(1.0g,8.6mmol)和NH₂OH.HCl(3.0g,43mmol)、AcONa(2.1g,25.8mmol)于EtOH/H₂O(20mL/20mL)中的混合物在25℃下攪拌1小時(shí)。然后將混合物用EA(150mL x 3)萃取、將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮以得到化合物2(1.0g,89.2％)。

1.36.2化合物3的制備

向化合物2(1.0g,7.6mmol)于丙酮/H₂O(20mL/20mL)中的溶液添加TsCl(2.16g,11.4mmol)和Na₂CO₃(1.2g,23.2mmol)。將所得的混合物在60℃下攪拌16小時(shí)。將混合物濃縮以去除溶劑。將殘余物用EA(20mL x 3)萃取。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、過(guò)濾，將濾液濃縮以得到呈白色固體的化合物3(740mg,74％)。

1.36.3 A52的制備

向LiAlH₄(200mg,5.2mmol)于THF(5mL)中的混懸液添加化合物3(370mg,2.8mmol)。將混合物在60℃下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)物用H₂O(0.2mL)猝滅、經(jīng)Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并將濾液濃縮以得到呈黃色油狀物的所需化合物4(250mg,75.7％)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)□δ＝3.08-3.02(m,1H),2.99-2.92(m,1H),2.89-2.82(m,1H),2.81-2.66(m,5H),2.00-1.85(m,2H)

1.37 A68的制備：

1.37.2.1化合物2的制備

向化合物1(45.00g,265.93mmol,1.00當(dāng)量)于THF(225mL)和H₂O(450mL)中的溶液添加NMO(71.65g,611.64mmol,2.30當(dāng)量)和OsO₄(500.00mg,1.97mmol,0.01當(dāng)量)，將混合物在28℃下攪拌16小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)溶液用EA稀釋、用飽和Na₂SO₃和鹽水洗滌。將有機(jī)相真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝3:1)純化以得到化合物2(33.00g,162.38mmol,61.06％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)ppm 4.23(d,J＝2.38Hz,2H),3.52-3.63(m,2H),3.34(t,J＝12.11Hz,2H),3.13(br,1H),2.97(br,1H),1.45(s,9H)。

1.37.2.2化合物4的制備

向化合物2(33.00g,162.38mmol,1.00當(dāng)量)于DCM(330mL)中的溶液在0℃下添加[乙酰氧基(苯基)-碘烷基]乙酸酯(78.45g,243.57mmol,1.50當(dāng)量)，將混合物從0℃至28℃攪拌1小時(shí)。然后將混合物冷卻至-60℃并添加于THF中的溴(乙烯基)鎂(1M,974.28mL,6.00當(dāng)量)，將混合物從-60℃至28℃攪拌2小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成，將混合物用EA稀釋并用飽和NH4Cl和鹽水洗滌。將有機(jī)相濃縮，將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝10:1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物4(17.00g,66.06mmol,40.68％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)ppm 5.73-5.92(m,2H),5.25-5.40(m,2H),5.16(dd,J＝10.48,1.19Hz,2H),4.22-4.50(m,2H),3.56-3.75(m,1H),3.38(d,J＝11.17Hz,2H),2.82-2.98(m,1H),1.42-1.53(m,9H)。

1.37.2.3化合物5_反式和5_順式的制備

向化合物4(13.00g,50.52mmol,1.00當(dāng)量)于DCM(1.80L)中的溶液在N₂下添加Zhan催化劑1B(1.20g,1.64mmol,0.03當(dāng)量)，將混合物在30℃下攪拌30小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成，濃縮反應(yīng)混合物，并將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝2:1)純化以得到具有較低極性的順式異構(gòu)體5_順式(2.80g,12.22mmol,24.22％產(chǎn)率)和具有較高極性的反式異構(gòu)體5_反式(2.80g,12.22mmol,24.22％產(chǎn)率)兩者。

5_順式:¹HNMR(400MHz,氯仿-d)ppm 5.83(d,J＝1.63Hz,2H)4.26-4.43(m,2H)3.67(d,J＝13.55Hz,2H)3.38(dd,J＝13.68,8.28Hz,2H)1.48(s,9H)。

5_反式:¹H NMR(400MHz,氯仿-d)ppm 5.82(s,2H)4.46(br.s.,2H)3.53-3.79(m,3H)3.34-3.46(m,1H)1.48(s,9H)。

1.37.2.4 6_順式的制備

向化合物5_順式(2.80g,12.21mmol,1.00當(dāng)量)于MeOH(100.00mL)中的溶液在Ar下添加Pd/C(300.00mg)。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂(50psi)下在30℃下攪拌16小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。過(guò)濾混合物并濃縮濾液，將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝1:1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的化合物6_順式(1.50g,6.49mmol,53.12％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)ppm 3.95-4.08(m,2H)3.68-3.85(m,2H)3.25(ddd,J＝14.56,9.98,4.08Hz,2H)3.10(br,1H)2.02(br,1H)1.84-1.98(m,2H)1.66-1.76(m,2H)1.49(s,9H)。

1.37.2.5 A68_順式的制備

向化合物6_順式(500.00mg,2.16mmol,1.00當(dāng)量)于二噁烷(10.00mL)中的溶液添加HCl/二噁烷(20.00mL)，將混合物在30℃下攪拌2小時(shí)，TLC顯示反應(yīng)完成，將混合物濃縮以得到呈黃色固體的A68_順式(250.00mg,1.91mmol,88.24％產(chǎn)率)。

A68_反式通過(guò)相同的程序從化合物5_反式制備。

部分II用于靶標(biāo)的一般程序

一般程序A

1.1用于制備化合物2的一般程序

將化合物1(4.53mmol)于SOCl₂(10mL)中的混合物加熱至回流過(guò)夜。濃縮混合物以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步。

1.2用于制備化合物3的一般程序

向化合物2(1.08g,4.52mmol)于甲苯(10mL)中的煮沸溶液添加苯胺(4.52mmol)，并回流2小時(shí)。將混合物真空濃縮以得到固體，其直接用于下一步。

1.3用于制備iii的一般程序

向化合物3(0.3mmol)于MeCN(3mL)中的溶液在室溫下添加胺(0.3mmol)和Et₃N(30mg,0.33mmol)，并將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。將混合物用CH₂Cl₂(20mL)稀釋并用水洗滌。將有機(jī)相真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)制備-HPLC純化以得到所需產(chǎn)物。

一般程序B

1.1化合物2的制備

將化合物1(9.5g,0.04mol)、NBS(8.3g,0.044mol)和(PhCO)₂O(1.9g,8mmol)于CCl₄(100mL)中的混合物加熱至回流持續(xù)5小時(shí)。然后將混合物真空濃縮，并將殘余物通過(guò)柱色譜(PE:AcOEt＝20:1)純化以得到化合物2(4g,31％)。

1.2化合物3的制備

將化合物2(1g,3.24mmol)和AcOK(3.18g,32.4mmol)于丙酮(20mL)中的混合物攪拌18小時(shí)。然后將混合物過(guò)濾并用丙酮洗滌。真空濃縮濾液以得到化合物3(0.7g,78％)。1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.26(d,J＝1.6Hz,1H),7.99-8.01(m,1H),7.48-7.50(d,J＝8Hz,1H),5.24(s,2H),3.95(s,3H),2.19(s,3H)。

1.3化合物4的制備

將化合物3(7.5g,0.026mol)、PMBSH(5.25g,0.034mol)、Pd₂(dba)₃(3.65g,5.2mmol)、Xantphos(3g,5.2mmol)和DIPEA(6.7g,5.2mmol)于1,4-二噁烷(80mL)中的混合物加熱至100℃持續(xù)18小時(shí)。然后將混合物真空濃縮，并通過(guò)柱色譜(PE:AcOEt＝10:1)純化以得到化合物4(6.9g,73％)。1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.08(d,J＝1.6Hz,1H),7.86-7.89(m,1H),7.42-7.44(d,J＝8Hz,1H),7.19-7.21(m,2H),6.81-6.84(m,2H),5.17(s,2H),4.13(s,2H),3.94(s,3H),3.80(s,3H),2.13(s,3H)。

1.4化合物5的制備

將化合物4(3.60g,10mmol)和LiOH(4.20g,100mmol)于THF/H₂O(50mL/10mL)中的混合物加熱至60℃持續(xù)14小時(shí)。將反應(yīng)混合物用HCl(1N)調(diào)節(jié)至pH＝6.0、用AcOEt萃取。將有機(jī)相經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮以得到化合物5(2.40g,80％)。1H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.02(d,J＝1.2Hz,1H),7.87-7.89(m,1H),7.56-7.58(d,J＝8Hz,1H),7.17-7.20(m,2H),6.81-6.83(m,2H),4.65(s,2H),4.12(s,2H),3.74(s,3H)。

1.5化合物6的制備

向化合物5(1.0g,3.4mmol)于THF(20mL)中溶液在0℃下添加TEA(1.0mg,10mmol)和AcCl(540mg,6.8mmol)。將所得的混合物在室溫下攪拌14小時(shí)。將混合物用水稀釋并用AcOEt萃取。將有機(jī)相經(jīng)Na₂SO₄干燥、真空濃縮以得到直接用于下一步的粗產(chǎn)物。

1.6化合物7的制備

將化合物6(100mg,0.28mmol)、HATU(126mg,0.33mmol)、DIPEA(164g,0.43mmol)、3-氯-4-氟胺(63mg,0.43mmol)于DMF(5mL)中的混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。將混合物用AcOEt和水稀釋，并將合并的有機(jī)層分離、經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮。然后將殘余物通過(guò)柱色譜(PE:AcOEt＝5:1)純化以得到化合物5(110mg,74％)。

1H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.96-7.99(m,2H),7.79(d,J＝1.6Hz,1H),7.49-7.51(d,J＝8Hz,1H),7.16-7.28(m,3H),6.80-6.82(m,2H),5.16(s,2H),4.17(s,2H),3.74(s,3H),2.11(s,3H)。

1.7化合物8的制備

向化合物7(150mg,0.32mmol)于MeCN(8mL)、AcOH(0.1mL)和H₂O(0.2mL)中的溶液在-15℃下添加1,3-二氯-5,5-二甲基咪唑啉啶-2,4-二酮(89mg,0.45mmol)并攪拌4小時(shí)。然后將混合物用水稀釋并用DCM萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到直接用于下一步的粗產(chǎn)物(134mg，粗)。

1.8 iiii的制備

向化合物8(134mg,0.32mmol，粗)于MeCN(2mL)中的溶液添加TEA(106mg,1.05mmol)和胺(0.84mmol)。將所得的混合物在室溫下攪拌直至原料耗盡。然后，向所得的混合物添加LiOH(150mg,3.6mmol)于MeOH/H₂O(2mL/0.5mL)中的混合物并攪拌14小時(shí)。將混合物用水稀釋并用EA萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮。殘余物進(jìn)行制備型HPLC以得到產(chǎn)物。

一般程序C

1.1化合物2的制備

向3-溴-4-羥基-苯甲酸甲酯(1.00g,4.33mmol,1.00當(dāng)量)于甲苯(15.00mL)中的溶液添加乙酸乙烯酯(745.54mg,8.66mmol,2.00當(dāng)量)、氯(1,5-環(huán)辛二烯)銥(I)二聚體(29.08mg,43.30umol,0.01當(dāng)量)和Na₂CO₃(229.47mg,2.17mmol,0.50當(dāng)量)。將混合物在100℃下在N₂保護(hù)下攪拌16小時(shí)。TLC檢測(cè)到反應(yīng)完成，蒸發(fā)溶劑，將殘余物通過(guò)色譜(硅膠，用PE:EA＝10:1洗脫)純化以得到呈無(wú)色油狀物的產(chǎn)物3-溴-4-乙烯基氧基-苯甲酸甲酯(730.00mg,2.84mmol,65.58％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.29(d,J＝1.76Hz,1H),7.99(dd,J＝8.53,2.01Hz,1H),7.06(d,J＝8.53Hz,1H),6.65(dd,J＝13.80,6.02Hz,1H),4.98(dd,J＝13.80,2.01Hz,1H),4.70(dd,J＝5.90,1.88Hz,1H),3.93(s,3H)。

1.2化合物3的制備

向3-溴-4-乙烯基氧基-苯甲酸甲酯(1.00g,3.89mmol,1.00當(dāng)量)于DCM(15.00mL)中的溶液在0℃下在N₂保護(hù)下添加ZnEt₂(960.91mg,7.78mmol,2.00當(dāng)量)。然后將混合物在0℃下攪拌30分鐘，并添加ClCH₂I(1.72g,9.73mmol,2.50當(dāng)量)。將形成的混合物在25℃下攪拌16小時(shí)。將混合物傾倒至NH₄Cl溶液中，并用EA萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮，將殘余物稀釋于THF(5.00mL)和H₂O(5.00mL)中，添加NaIO₄(832.00mg,3.89mmol,1.00當(dāng)量)和K₂OsO₄(74.01mg,389.00umol,0.10當(dāng)量)，將混合物在25℃下攪拌30分鐘，然后將反應(yīng)物用飽和Na₂SO₃猝滅、用EA萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮，將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝10:1)純化以得到呈無(wú)色油狀物的產(chǎn)物3-溴-4-(環(huán)丙氧基)苯甲酸甲酯(530.00mg,1.95mmol,50.26％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)8.23(d,J＝2.01Hz,1H),8.00(dd,J＝8.78,2.01Hz,1H),7.28-7.33(m,1H),3.92(s,3H),3.88(t,J＝4.39Hz,1H),0.76-0.99(m,4H)。

1.3化合物4的制備

向3-溴-4-(環(huán)丙氧基)苯甲酸甲酯(530.00mg,1.95mmol,1.00當(dāng)量)和(4-甲氧基苯基)甲烷硫醇(451.12mg,2.93mmol,1.50當(dāng)量)于甲苯(10.00mL)中的溶液在N₂保護(hù)下添加Pd₂(dba)₃(89.28mg,97.50umol,0.05當(dāng)量)、Xantphos(112.83mg,195.00umol,0.10當(dāng)量)和DIPEA(504.04mg,3.90mmol,2.00當(dāng)量)。然后將混合物在100℃下在N₂保護(hù)下攪拌16小時(shí)。TLC檢測(cè)到反應(yīng)完成，蒸發(fā)溶劑，將殘余物用水洗滌，將水層用EA萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮，將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝5:1)純化以得到產(chǎn)物呈白色固體的4-(環(huán)丙氧基)-3-[(4-甲氧基苯基)甲基硫烷基]苯甲酸甲酯(600.00mg,1.74mmol,89.34％產(chǎn)率)。LCMS:345[M+1]。

1.4化合物5的制備

向4-(環(huán)丙氧基)-3-[(4-甲氧基苯基)甲基硫烷基]苯甲酸甲酯(1.00g,2.90mmol,1.00當(dāng)量)于MeCN(8.00mL)、AcOH(100.00uL)和H₂O(200.00uL)中的混懸液在-15℃下添加1,3-二氯-5,5-二甲基-咪唑啉啶-2,4-二酮(914.17mg,4.64mmol,1.60當(dāng)量)，將混合物在-15℃下攪拌2小時(shí)。將殘余物用水洗滌，將水層用EA萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步。

1.1.5化合物7的制備

向3-氯磺?；?4-(環(huán)丙氧基)苯甲酸甲酯(840.00mg,粗,2.89mmol,1.00當(dāng)量)于MeCN(10.00mL)中的溶液添加1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-6-醇(338.49mg,2.89mmol,1.00當(dāng)量)和TEA(584.88mg,5.78mmol,2.00當(dāng)量)。將所得的混合物在28℃下攪拌直至原料耗盡。去除溶劑并將殘余物通過(guò)色譜(硅膠，用PE:EA＝3:1洗脫)純化以得到呈白色固體的所需的化合物4-(環(huán)丙氧基)-3-[(6-羥基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-基)磺酰基]苯甲酸甲酯(620.00mg,1.67mmol,57.76％產(chǎn)率)。LCMS:372[M+1]。

1.6化合物8的制備

向4-(環(huán)丙氧基)-3-[(6-羥基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-基)磺?；鵠苯甲酸甲酯(620.00mg,1.67mmol,1.00當(dāng)量)于THF(5.00mL)和H₂O(1.00mL)中的溶液。將形成的混合物在50℃下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用1N HCl溶液中和并用EA萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮以得到呈白色固體的粗產(chǎn)物4-(環(huán)丙氧基)-3-[(6-羥基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-基)磺?；鵠苯甲酸(510.00mg,1.43mmol,85.45％產(chǎn)率)。

1.7化合物2081的制備

向4-(環(huán)丙氧基)-3-[(6-羥基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-基)磺酰基]苯甲酸(170.00mg,475.68umol,1.00當(dāng)量)和3-氯-4-氟-苯胺(69.24mg,475.68umol,1.00當(dāng)量)于MF(5.00mL)中的溶液添加HATU(180.87mg,475.68umol,1.00當(dāng)量)和DIPEA(122.95mg,951.36umol,2.00當(dāng)量)。將混合物在25℃下攪拌16小時(shí)。TLC檢測(cè)到反應(yīng)完成，將混合物傾倒至水中、用EA萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水Na2SO4干燥、濃縮，將殘余物通過(guò)制備型-HPLC(FA)純化以得到呈白色固體的產(chǎn)物N-(3-氯-4-氟-苯基)-4-(環(huán)丙氧基)-3-[(6-羥基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-基)磺?；鵠苯甲酰胺(94.10mg,194.05umol,40.79％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ8.48(d,J＝2.01Hz,1H),8.23(dd,J＝8.66,2.13Hz,1H),7.96(dd,J＝6.78,2.51Hz,1H),7.70(d,J＝8.78Hz,1H),7.59-7.65(m,1H),7.27(t,J＝8.91Hz,1H),4.07-4.13(m,1H),4.03(t,J＝6.53Hz,1H),3.77-3.97(m,4H),3.61-3.73(m,2H),3.21-3.30(m,1H),3.11(dd,J＝14.56,7.53Hz,1H),0.84-1.04(m,4H)。LCMS:485/487[M+1]。

2082/2083通過(guò)與2081相同的程序制備。

一般程序D

1.1化合物2的制備

將4-溴-3-氯磺酰基-苯甲酸(6.90g,23.04mmol,1.00當(dāng)量)于SOCl₂(27.41g,230.40mmol,10.00當(dāng)量)中的混合物在80℃下攪拌3小時(shí)。然后蒸發(fā)溶劑。將殘余物于甲苯(50mL)中稀釋，并添加MeOH(959.66mg,29.95mmol,1.30當(dāng)量)，將形成的混合物在110℃下攪拌2小時(shí)。形成固體并蒸發(fā)溶劑，將固體用PE洗滌并過(guò)濾以得到呈白色固體的產(chǎn)物4-溴-3-氯磺酰基-苯甲酸甲酯(7.22g,23.03mmol,99.94％產(chǎn)率)。

1.2化合物4的制備

向4-溴-3-氯磺?；?苯甲酸甲酯(7.22g,23.03mmol,1.00當(dāng)量)于DCM(100mL)中的溶液添加氮雜環(huán)庚烷-4-醇(2.65g,23.03mmol,1.00當(dāng)量)和TEA(2.33g,23.03mmol,1.00當(dāng)量)。將所得的混合物在25℃下攪拌直至原料耗盡。去除溶劑并將殘余物通過(guò)硅膠色譜(PE:EA＝1:1)純化以得到所需化合物4-溴-3-(4-羥基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺酰基-苯甲酸甲酯(7.00g,17.85mmol,77.49％產(chǎn)率)。LCMS:393/395[M+1]。

1.3化合物5的制備

向4-溴-3-(4-羥基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?苯甲酸甲酯(1.00g,2.55mmol,1.00當(dāng)量)于DMF(15mL)中的混合物在0℃下在N₂下分配添加NaH(153.00mg,3.82mmol,1.50當(dāng)量)。將混合物在25℃下攪拌30分鐘。然后添加溴甲基苯(654.19mg,3.82mmol,1.50當(dāng)量)并在25℃下攪拌16小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物傾倒至NH₄Cl水溶液中并用EA萃取。將合并的有機(jī)相用飽和鹽水洗滌、用無(wú)水Na₂SO₄干燥、過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠色譜(用PE/EA＝10/1,2/1洗脫)純化以得到呈白色固體的3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?4-溴-苯甲酸甲酯(550.00mg,1.14mmol,44.71％產(chǎn)率)。LCMS:482/484[M+1]。

1.4化合物6的制備

將于甲苯(20mL)中的3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?4-溴-苯甲酸甲酯(1.30g,2.69mmol,1.00當(dāng)量)、烯丙基(三丁基)錫烷(1.07g,3.23mmol,1.20當(dāng)量)LiCl(136.83mg,3.23mmol,1.20當(dāng)量)和Pd(PPh3)4(310.85mg,269.00umol,0.10當(dāng)量)脫氣，然后在N₂下加熱至110℃持續(xù)16小時(shí)。TLC(PE:EtOAc＝1:1)顯示原料和產(chǎn)物在相同的位點(diǎn)。將反應(yīng)混合物傾倒至H₂O中、用EA萃取。將有機(jī)相經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、真空濃縮以得到殘余物，其通過(guò)柱色譜(硅膠，用PE:EA＝1:1洗脫)純化以得到呈淺黃色固體的純4-烯丙基-3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?苯甲酸甲酯(630.00mg,1.42mmol,52.80％產(chǎn)率)。

1.5化合物7的制備

向4-烯丙基-3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?苯甲酸甲酯(630.00mg,1.42mmol,1.00當(dāng)量)于THF(10mL)和H₂O(2mL)中的溶液在0℃下添加OsO₄(36.10mg,142.00umol,0.10當(dāng)量)和NaIO₄(607.45mg,2.84mmol,2.00當(dāng)量)。將混合物在25℃下攪拌3小時(shí)。TLC檢測(cè)到反應(yīng)完成，將混合物傾倒至飽和Na₂S₂O₃溶液中、用DCM萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、濃縮，將殘余物于MeOH(10mL)中稀釋，向形成的混合物添加NaBH₃CN(88.86mg,1.41mmol,1.00當(dāng)量)。將混合物在25℃下攪拌3小時(shí)。TLC檢測(cè)到反應(yīng)完成，將反應(yīng)物用水猝滅、用EA萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、濃縮，將殘余物通過(guò)色譜(硅膠，用PE:EA＝3:1至1:1洗脫)純化以得到產(chǎn)物3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?4-(2-羥基乙基)苯甲酸甲酯(340.00mg,759.71umol,53.88％產(chǎn)率)。LCMS:448[M+1]。

1.6化合物8的制備

向3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?4-(2-羥基乙基)苯甲酸甲酯(340.00mg,759.71umol,1.00當(dāng)量)于MeCN(10mL)中的溶液添加PBSF(458.86mg,1.52mmol,2.00當(dāng)量)、N,N-二乙基乙胺；三氫氟化物(244.95mg,1.52mmol,2.00當(dāng)量)和TEA(307.50mg,3.04mmol,4.00當(dāng)量)。將混合物在28℃下在N₂保護(hù)下攪拌16小時(shí)。TLC檢測(cè)到反應(yīng)完成，將混合物傾倒至水中、用EA萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、濃縮，將殘余物通過(guò)色譜(硅膠，用PE:EA＝1:1洗脫)純化以得到呈無(wú)色油狀物的產(chǎn)物3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?4-(2-氟乙基)苯甲酸甲酯(180.00mg,400.42umol,52.71％產(chǎn)率)。

1.7化合物9的制備

向3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺酰基-4-(2-氟乙基)苯甲酸甲酯(180.00mg,400.42umol,1.00當(dāng)量)于THF(5mL)和H₂O(1mL)中的溶液。將形成的混合物在下攪拌3小時(shí)。將形成的混合物在25-50℃下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用1N HCl溶液中和并濃縮以得帶粗產(chǎn)物3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?4-(2-氟乙基)苯甲酸(160.00mg,367.39umol,91.75％產(chǎn)率)。

1.8化合物10的制備

向3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?4-(2-氟乙基)苯甲酸(80.00mg,183.69umol,1.00當(dāng)量)和苯胺(202.06umol,1.10當(dāng)量)于MeCN(5mL)中的溶液添加HATU(76.83mg,202.06umol,1.10當(dāng)量)和DIEA(47.48mg,367.38umol,2.00當(dāng)量)。將混合物在25℃下攪拌16小時(shí)。TLC檢測(cè)到反應(yīng)完成，將混合物傾倒至水中、用EA萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水Na2SO4干燥、濃縮，將殘余物通過(guò)制備型-TLC(用PE:EA＝2:1洗脫)純化以得到呈白色固體的產(chǎn)物3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?N-(3-氯-4-氟-苯基)-4-(2-氟乙基)苯甲酰胺(65.00mg,115.44umol,62.85％產(chǎn)率)。

1.9 2205/2206的制備

向3-(4-芐基氧基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?N-(3-氯-4-氟-苯基)-4-(2-氟乙基)苯甲酰胺(65.00mg,115.44umol,1.00當(dāng)量)于MeOH(15mL)中的溶液在N₂下添加Pd/C(30.00mg,115.44umol,1.00當(dāng)量)。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂下在25℃下攪拌16小時(shí)。TLC顯示原料完全耗盡。過(guò)濾反應(yīng)混合物，并將濾液濃縮、通過(guò)制備型-TLC(用PE:EA＝1:1洗脫)純化以得到呈白色固體的產(chǎn)物N-(3-氯-4-氟-苯基)-4-(2-氟乙基)-3-(4-羥基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?苯甲酰胺(24.00mg,50.75umol,43.96％產(chǎn)率)。

一般程序E

1.1化合物2的制備

向化合物1(6.0g,21.6mmol)于MeOH(80mL)中的溶液在0℃下在N₂下添加SOCl₂(10.2g,86.5mmol)。將反應(yīng)混合物加熱至85℃持續(xù)3小時(shí)。將所得的混合物真空濃縮以得到化合物2(6.2g，粗)，其直接用于下一步。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝8.17–8.19(m,1H),8.03–8.05(m,2H),3.88(s,3H)。

1.2化合物3的制備

將化合物2(5.6g,19.2mmol)、PMBSH(3.8g,24.7mmol)、Pd₂(dba)₃(1.7g,1.9mmol)、Xantphos(2.2g,3.8mmol)和DIPEA(4.9g,38.0mmol)于1,4-二噁烷(100mL)中的混合物加熱至100℃持續(xù)16小時(shí)。真空濃縮反應(yīng)混合物并通過(guò)柱色譜純化以得到化合物3(3.9g,56％)。

1.3化合物4的制備

向化合物3(1.2g,3.3mmol)于MeCN/HOAc/H₂O(16/0.2/0.4,mL)中的溶液在-15℃下添加1,3-二氯-5,5-二甲基咪唑啉啶-2,4-二酮(0.97g,4.9mmol)并攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水稀釋并用EA萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(1.0g，粗)。

1.4化合物6的制備

向化合物4(1.0g,3.2mmol)于MeCN(10mL)中的溶液在25℃下添加化合物5(553mg,4.8mmol)和Et₃N(810mg,8.0mmol)并攪拌1小時(shí)。將混合物用EA(100mL)稀釋并用水(80mL)洗滌。將有機(jī)相真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)快速柱色譜純化以得到所需產(chǎn)物(0.54g,43％)。LCMS:392.0[M+1]。

1.5化合物8的制備

將化合物6(540mg,1.4mmol)、化合物7(261mg,2.1mmol)、Cs₂CO₃(898mg,2.8mmol)和Pd(dppf)Cl₂(140mg,0.2mmol)于THF/H₂O(10/1,mL)中的混合物加熱至80℃持續(xù)16小時(shí)。將反應(yīng)混合物用EA(100mL)稀釋并用鹽水(60mL)洗滌。將有機(jī)相真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(451mg，粗)。

1.6化合物9的制備

將化合物8(451mg,1.4mmol)和NaOH(112mg,2.8mmol)于THF/H₂O(5/1,mL)中的混合物加熱至35℃持續(xù)16小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水(80mL)稀釋并用EA(80mL)萃取。將水相用HCl(2M)調(diào)節(jié)至pH＝6.0并用EA(80mL)萃取。將有機(jī)相經(jīng)Na₂SO₄干燥并濃縮以得到粗產(chǎn)物，其直接用于下一步(305mg,71％)。

1.7 2018的制備

將化合物9(143mg,0.46mmol)、HATU(209mg,0.55mmol)、DIPEA(119mg,0.92mmol)、化合物9(80mg,0.55mmol)于MeCN(5mL)中的混合物加熱至50℃持續(xù)3小時(shí)。將混合物用EA(80mL)稀釋并用水(60mL)洗滌。將有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)制備型-HPLC純化以得到所需產(chǎn)物(149.64mg,74％)。LCMS:441.0[M+1]。

一般程序F

1.1化合物2的制備

向化合物1(5g,0.023mol)于SOCl2(30mL)中的溶液在0℃下添加MeOH(1.104g,0.035mol)。并且將溶液在80℃下攪拌2小時(shí)。然后將溶液冷卻至18℃并濃縮以去除溶劑。將其用水(20mL)洗滌并用EA(100mL)萃取、經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮以得到化合物2(5.3g,93.8％)。

LCMS:229[M+1]

1.2化合物3的制備

向化合物2(5.3g,0.023mol)于CCl4(50mL)中的溶液在N2下一次性添加NBS(3.72g,0.021mol)、BPO(557mg,0.002mol)。將混合物加熱至80℃持續(xù)2小時(shí)。將混合物用飽和Na₂SO₃(50mL)洗滌并用EA(100mL*2)萃取。將合并的有機(jī)層經(jīng)Na₂SO₄干燥并真空濃縮。將殘余物通過(guò)PE純化以得到化合物3(6.2g，粗)。

1.3化合物4的制備

向化合物3(6.2g,0.02mol)于MeCN(100mL)中的溶液一次性添加CsF(18.35g,0.121mol)、18-冠-6(1.06g,4.03mmol)，并將其加熱至90℃持續(xù)16小時(shí)。將混合物過(guò)濾并在40℃下減壓濃縮。將殘余物通過(guò)硅膠上的柱色譜(PE/EA＝30/1,20/1,10/1)純化以得到呈固體的化合物4(360.00mg,對(duì)于兩步為7.24％)。¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)＝8.16-8.10(m,1H),8.05-7.99(m,1H),7.86-7.80(m,1H),5.54-5.49(m,1H),5.42-5.37(m,1H),3.95(s,3H)。

1.4化合物5的制備

向化合物4(0.36g,1.46mmol)于1,4-二噁烷(40mL)中的溶液在18℃下添加PMBSH(0.338g,2.19mmol)、DIPEA(0.337g,2.92mmol)、Xantphos(42.24mg,0.073mmol)。然后將Pd₂(dba)₃(66.85mg,0.073mmol)添加至溶液，并將其加熱至120℃持續(xù)16小時(shí)。將混合物溶液濃縮并通過(guò)硅膠上的柱色譜(PE/EA＝30/1,20/1,10/1)純化以得到化合物5(0.464g,99.2％)

LCMS:321[M+1]

1.5化合物6的制備

向化合物5(0.464g,1.45mmol)于THF(20mL)中的溶液添加LiOH(694.55mg,29.00mmol)于H₂O(5mL)中的溶液。將混合物溶液加熱至60℃持續(xù)2小時(shí)。將溶液通過(guò)添加HCl(3M)調(diào)節(jié)至pH<3。然后將其用EtOAc(200mL)萃取、經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮以得到化合物6(0.5g，粗)。

LCMS:307[M+1]。

1.6化合物8的制備

向化合物6(0.5g,1.63mmol)于DCM(20mL)中的溶液添加DIPEA(0.421g,3.26mmol)、HATU(0.93g,2.45mmol)。將混合物溶液在20℃下攪拌1小時(shí)。然后將化合物7(0.285,1.96mmol)添加至混合物并將其在20℃下攪拌16小時(shí)。將溶液用飽和NH₄Cl(50mL)洗滌、用EtOAc(100mL*2)萃取、經(jīng)Na₂SO₄干燥、濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)硅膠(PE/EA＝20/1,10/1,3/1)上的柱色譜純化以得到化合物8(0.7g,98.97％)

LCMS:435[M+23]

1.7 2207-2208的制備

向化合物8(100mg,0.23mmol)于MeCN/AcOH/H2O(10mL,80:1:2)中的溶液在-5℃下添加DCDMH(90.81mg,0.46mmol)。將其在-5℃下攪拌2小時(shí)。然后添加胺(0.35mmol)、Et₃N(69.96mg,0.69mmol)至溶液。將其在18℃下攪拌0.5小時(shí)。然后將其濃縮以得到粗產(chǎn)物，其通過(guò)制備型-HPLC純化以得到所需產(chǎn)物。

一般程序G

2032的制備如下示例：

1.1化合物2的制備

向HSO₃Cl(80mL)在0℃下分批添加化合物1(20.0g,0.13mol)，然后將所得的混合物加熱至140℃持續(xù)4小時(shí)。在冷卻至室溫后，將混合物傾倒至冰水中。將所得的沉淀通過(guò)過(guò)濾收集并干燥以得到呈白色固體的所需化合物2(25.0g,76％)。

1.2化合物3的制備

將化合物2(3.0g,11.7mmol)添加至HNO₃(4mL)于H₂SO₄(20mL)中的混合物，并加熱至90℃持續(xù)4小時(shí)。在冷卻至室溫后，將混合物緩慢添加至冰水。將所得的沉淀通過(guò)過(guò)濾收集并干燥以得到呈白色固體的所需化合物3(1.3g,38％)。¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ9.05(d,J＝2.0Hz,1H),8.76(d,J＝2.0Hz,1H)。

1.3化合物4的制備

將化合物3(1.3g,4.3mmol)和SOCl₂(40mL)的混合物加熱至90℃持續(xù)4小時(shí)。將混合物真空濃縮。將殘余物用甲苯(10mL)溶解并加熱至90℃。添加3-氯-4-氟苯胺(1.2mg,3.9mmol)并將混合物持續(xù)加熱至回流持續(xù)4小時(shí)。將混合物濃縮以得到呈黃色固體的所需化合物4(1.6g，粗)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化就用于下一步中。

1.4化合物6的制備

向化合物4(0.8g，粗)和5(256mg,1.8mmol)于CH₃CN(10mL)中的混合物添加Et₃N(566mg,5.6mmol)，并在室溫下攪拌4小時(shí)。將混合物用EA(50mL)稀釋，將有機(jī)層用NH₄Cl(50mL*2)洗滌并濃縮以得到呈黃色固體的所需化合物6(0.5g，粗)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化就用于下一步中。

1.5化合物7的制備

向化合物6(0.1g，粗)于MeOH(10mL)中的溶液添加氨(0.5mL,28％)，并將混合物加熱至70℃持續(xù)4小時(shí)。將混合物真空濃縮以得到呈黃色固體的所需化合物7(80mg,粗)，其不經(jīng)過(guò)純化就用于下一步中。

1.6化合物8的制備

將化合物7(80mg，粗)、Fe(62mg,1.1mmol)和NH₄Cl(59mg,1.1mmol)于MeOH-H₂O(10mL/2mL)中的混合物加熱至70℃持續(xù)4小時(shí)。將混合物過(guò)濾并用EA(50mL)洗滌。將濾液用飽和NH₄Cl(50mL*2)洗滌并濃縮以得到呈白色固體的所需化合物8(75mg，粗)，其不經(jīng)過(guò)純化就用于下一步中。

1.7 2032的制備

將化合物8(75mg，粗)于甲酸(10mL)中的混合物微波加熱至110℃持續(xù)10分鐘。將混合物真空濃縮。將殘余物溶解于MeOH-H₂O(10mL/2mL)中，并添加K₂CO₃(57mg,0.4mmol)。將混合物加熱至80℃持續(xù)2小時(shí)。在LCMS顯示反應(yīng)完成后，將混合物真空濃縮并用EA萃取。將有機(jī)相真空濃縮并將殘余物經(jīng)由酸性制備型-HPLC純化以得到呈白色固體的2032(65.89mg，產(chǎn)率64.2％)。

一般程序H

2619_D2，2626_D2的制備如下示例：

向N-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(3,6-二羥基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?4-氟-苯甲酰胺(300.00mg,650.93umol,1.00當(dāng)量)、TEA(65.87mg,650.93umol,1.00當(dāng)量)和DMAP(79.52mg,650.93umol,1.00當(dāng)量)于DCM(30.00mL)中的溶液在0℃下滴加乙酰氯(51.10mg,650.93umol,1.00當(dāng)量)。將混合物攪拌1小時(shí)。LCMS顯示30％2433_D2和32％2626_D2產(chǎn)生，且25％原料剩余。將反應(yīng)混合物用水洗滌。將有機(jī)層干燥并濃縮。將殘余物通過(guò)制備型-HPLC純化以得到呈白色固體的2619_D2(95.00mg,188.90umol,29.02％產(chǎn)率)和呈白色固體的2626_D2(90.00mg,165.15umol,25.37％產(chǎn)率)。

一般程序I

2632,2634的制備如下示例：

1用于制備2632的程序

1.1一般方案：

1.1.1 2638的制備

向N-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(3,6-二羥基氮雜環(huán)庚烷-1-基)磺?；?4-氟-苯甲酰胺(500.00mg,1.08mmol,1.00當(dāng)量)于MeCN(30.00mL)中的溶液添加1H-四唑(455.98mg,6.51mmol,6.00當(dāng)量)和N-二芐基氧基膦基-N-異丙基-丙-2-胺(1.12g,3.25mmol,3.00當(dāng)量)。將混合物在30℃下攪拌2小時(shí)。然后添加H₂O₂(737.94mg,6.51mmol,6.00當(dāng)量)，并將混合物在30℃下攪拌16小時(shí)。TLC顯示材料剩余并且～1/3的所需產(chǎn)物檢測(cè)到。將混合物傾倒至飽和Na₂SO₃(20mL)中，用乙酸乙酯(20mL*3)萃取、將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、真空濃縮。將殘余物通過(guò)色譜(硅膠，用石油醚/乙酸乙酯＝10/1～1/2洗脫)純化以得到呈白色固體的[1-[5-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基甲?；鵠-2-氟-苯基]磺?；?6-羥基-氮雜環(huán)庚烷-3-基]磷酸二芐酯(105.00mg,139.22umol,12.89％產(chǎn)率,95.61％純度。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ8.46(dd,J＝6.59,2.26Hz,1H),8.23-8.31(m,1H),7.98(dd,J＝6.78,2.45Hz,1H),7.60-7.68(m,1H),7.52(t,J＝9.32Hz,1H),7.20-7.43(m,11H),5.07(d,J＝9.04Hz,4H),4.63(br.s.,1H),3.92(br.s.,1H),3.71-3.85(m,2H),3.18(dd,J＝15.07,7.16Hz,1H),2.98(dd,J＝14.32,7.54Hz,1H),1.96-2.09(m,1H),1.72-1.90(m,3H).LCMS:721/723[M+1]。

1.1.2化合物2632的制備

向[1-[5-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基甲?；鵠-2-氟-苯基]磺酰基-6-羥基-氮雜環(huán)庚烷-3-基]磷酸二芐酯(210.00mg,291.22umol,1.00當(dāng)量)于MeOH(10.00mL)中的溶液在N₂氣氛下添加LiCl(12.34mg,291.22umol,1.00當(dāng)量)和Pd/C(10％,20mg)。將混懸液脫氣并用H₂吹掃3次。將混合物在H₂(15Psi)下在15℃下攪拌1小時(shí)。TLC顯示材料完全耗盡。過(guò)濾反應(yīng)混合物并濃縮濾液。將殘余物通過(guò)制備型-HPLC(FA)純化以得到產(chǎn)物呈白色固體的1-((5-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲?；?-2-氟苯基)磺?；?-6-羥基氮雜環(huán)庚烷-3-基二氫磷酸酯(110.30mg,192.35umol,66.05％產(chǎn)率，94.32％純度)。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ8.49(dd,J＝6.65,2.13Hz,1H),8.21-8.31(m,1H),8.02(dd,J＝6.65,2.64Hz,1H),7.61-7.70(m,1H),7.52(t,J＝9.29Hz,1H),7.27(t,J＝8.91Hz,1H),4.58(br.s.,1H),3.87-4.13(m,3H),3.03(dd,J＝14.56,7.78Hz,1H),2.88(dd,J＝13.80,9.03Hz,1H),2.10(dd,J＝11.67,6.15Hz,1H),1.80-2.01(m,3H).LCMS:527/529[M+1]。

2用于制備2634的程序

2.1一般方案：

2.1.1化合物1893i的制備

向N-(3-氯-4-氟-苯基)-4-氟-3-[(6-羥基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-4-基)磺?；鵠苯甲酰胺(500.00mg,1.12mmol,1.00當(dāng)量)和N-二芐基氧基膦基-N-異丙基-丙-2-胺(772.99mg,2.24mmol,2.00當(dāng)量)于MeCN(7.50mL)中的溶液添加2H-四唑(0.45M,7.46mL,3.00當(dāng)量)。將混合物在25℃下攪拌4小時(shí)。然后添加H₂O₂(152.22mg,1.34mmol,3.00當(dāng)量)，并將反應(yīng)物在25℃下攪拌1小時(shí)。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物用飽和Na₂SO₃(10mL)猝滅、用EA(20mL*3)萃取，將合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥、濃縮。將殘余物通過(guò)色譜(硅膠，用PE:EA＝2:1至1:1洗脫)純化以得到呈白色固體的產(chǎn)物[4-[5-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基甲?；鵠-2-氟-苯基]磺?；?1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-6-基]磷酸二芐酯(1.00g,1.41mmol,89.92％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ9.86(brs,1H),8.42(dd,J＝6.53,2.26Hz,1H),8.13-8.26(m,1H),7.95(dd,J＝6.53,2.51Hz,1H),7.71(dt,J＝7.15,4.20Hz,1H),7.24-7.39(m,10H),7.11(t,J＝8.78Hz,1H),5.07(t,J＝9.66Hz,2H),4.91-5.01(m,2H),4.40(d,J＝6.27Hz,1H),3.73-3.98(m,5H),3.57-3.69(m,2H),3.32(dd,J＝13.18,6.40Hz,1H).LCMS:707/709[M+1]。

2.1.2 2634的制備

向[4-[5-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基甲?；鵠-2-氟-苯基]磺?；?1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-6-基]磷酸二芐酯(1.00g,1.41mmol,1.00當(dāng)量)于MeOH(20.00mL)中的溶液添加LiCl(60mg,1.41mmol,1.00當(dāng)量)，然后在N2下添加Pd/C(15.00mg)。將混懸液真空脫氣并用H₂吹掃數(shù)次。將混合物在H₂(15psi)下在25℃下攪拌1小時(shí)。LCMS顯示反應(yīng)完成。過(guò)濾反應(yīng)混合物并濃縮濾液。將殘余物通過(guò)制備型-HPLC(FA)純化以得到呈白色固體的[4-[5-[(3-氯-4-氟-苯基)氨基甲?；鵠-2-氟-苯基]磺酰基-1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷-6-基]二氫磷酸酯(433.00mg,821.90umol,58.29％產(chǎn)率)。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ9.14(s,1H),8.51(d,J＝4.52Hz,1H),8.23(brs,1H),8.04(dd,J＝6.59,2.45Hz,1H),7.63-7.75(m,1H),7.50(t,J＝9.32Hz,1H),7.25(t,J＝8.95Hz,1H),4.49(brs,1H),3.79-4.07(m,5H),3.70(t,J＝8.85Hz,1H),3.34-3.47(m,2H)。LCMS:527/529[M+1]。

手性化合物的拆分

本發(fā)明所選的化合物的手性拆分根據(jù)表3中列出的條件進(jìn)行。

表3.

實(shí)施例：HBV組裝測(cè)定

根據(jù)由Zlotnick及同事(Nature Biotechnology 2006,24:358)所述的方法開(kāi)發(fā)熒光猝滅體外組裝HBV測(cè)定。所述測(cè)定基于以下觀察：HBV核蛋白的C-末端在衣殼形成期間聚集在一起。該測(cè)定利用突變C150HBV衣殼蛋白，其中所有野生型半胱氨酸突變?yōu)楸彼?，但C-末端半胱氨酸殘基是保守的并且用熒光BoDIPY-FL染料標(biāo)記。HBV C150Bo蛋白質(zhì)是高度熒光的，然而在衣殼組裝過(guò)程中熒光顯著減少。因此，所述測(cè)定通過(guò)監(jiān)測(cè)經(jīng)標(biāo)記的衣殼C150Bo蛋白質(zhì)的熒光測(cè)量了測(cè)試化合物調(diào)節(jié)衣殼組裝的能力和效能。

在典型的測(cè)定中，將突變HBV C150蛋白質(zhì)(氨基酸1-150、C49A、C61A、C107A、150C)克隆至在大腸桿菌中表達(dá)的T7RNA-聚合酶基表達(dá)載體中，并純化為勻質(zhì)性二聚體。將純化的HBV核蛋白脫鹽并用BODIPY-FL染料標(biāo)記。

在一個(gè)非限制性實(shí)施方案中，所述組裝測(cè)定以96-孔板形式進(jìn)行。組裝反應(yīng)在50mM Hepes緩沖液，pH 7.5和150mM NaCl中進(jìn)行。將所述化合物與HBV CA蛋白質(zhì)預(yù)孵育15分鐘，并且組裝反應(yīng)通過(guò)添加NaCl起始。使反應(yīng)在室溫下持續(xù)1小時(shí)。

為了測(cè)定對(duì)衣殼組裝的作用，每種測(cè)試化合物以至少4種獨(dú)特濃度一式兩份開(kāi)始篩選。主要命中物是在組裝測(cè)定中在10uM下顯示活性的化合物。經(jīng)鑒定的主要命中物在如本文其他地方所述的隨訪研究中確認(rèn)。已知的HBV CA組裝調(diào)節(jié)劑，諸如HAP-1和BAY 41-4109，用作這些實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照化合物，并且展現(xiàn)出于文獻(xiàn)一致的EC₅₀值。測(cè)試化合物的EC₅₀值經(jīng)由分析劑量-響應(yīng)曲線測(cè)定。

本發(fā)明所選的化合物在如上文所述的HBV組裝測(cè)定中測(cè)定。所述組裝測(cè)定以96-孔板形式進(jìn)行。組裝反應(yīng)在50mM Hepes緩沖液，pH 7.5和150mM NaCl中進(jìn)行。將所述化合物與HBV CA蛋白質(zhì)預(yù)孵育15分鐘，并組裝反應(yīng)通過(guò)添加NaCl起始。使反應(yīng)在室溫下持續(xù)1小時(shí)。所述96-孔板組裝測(cè)定自始至終具有大于0.7的Z’因子，且逐板和逐天是穩(wěn)健的且可重復(fù)的。

為了測(cè)定對(duì)衣殼組裝的作用，每種測(cè)試化合物以5種獨(dú)特濃度一式兩份開(kāi)始篩選：約30μM、10μM、3μM、1μM和0.3μM。主要命中物是在組裝測(cè)定中在約10μM下顯示>50％活性的化合物，并且這些活性化合物的代表性基團(tuán)顯示于表4中。

表4.

HBV組裝測(cè)定(‘+’表示在約10μM下的>50％活性)

實(shí)施例：HBV復(fù)制斑點(diǎn)印跡測(cè)定的抑制

在細(xì)胞測(cè)定中，測(cè)試HBV組裝測(cè)定中有活性的化合物的活性和毒性。在第一抗-病毒測(cè)定中，使用斑點(diǎn)印跡方法評(píng)估所述化合物抑制HBV-產(chǎn)生肝癌細(xì)胞系中HBV復(fù)制的能力。

簡(jiǎn)而言之，將HepG2-2.2.15細(xì)胞的匯合單層與含有各個(gè)濃度的測(cè)試化合物的完全培養(yǎng)基一起孵育。三天后，將培養(yǎng)基用含有適當(dāng)稀釋的測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基替代。在初始施用測(cè)試化合物后六天，收集細(xì)胞培養(yǎng)物上清液，并進(jìn)行細(xì)胞裂解。將樣品施加至Nylos膜上并通過(guò)UV交聯(lián)將DNA固定至膜。在預(yù)雜交后，添加HBV探針并進(jìn)行雜交過(guò)夜。將膜暴露于Kodak膜；抗病毒活性根據(jù)HBV DNA水平(EC₅₀)減少計(jì)算。抗病毒活性的EC₅₀根據(jù)活性化合物的劑量響應(yīng)曲線計(jì)算。隨時(shí)間推移的測(cè)定性能通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照化合物ETV、BAY 41-4109和HAP-1監(jiān)測(cè)。

化合物細(xì)胞毒性(TC₅₀)在相同的HepG2-2.2.15細(xì)胞系中使用如制造商(Promega)推薦的采用的CellTiter Blue-基細(xì)胞毒性測(cè)定測(cè)量。為了進(jìn)行和展開(kāi)這些結(jié)果。第二抗病毒測(cè)定在活性化合物上使用穩(wěn)定的HBV細(xì)胞系HepG2.2.15和測(cè)量抗-HBV效能(通過(guò)實(shí)時(shí)PCR)和細(xì)胞毒性(通過(guò)CellTiter Blue)進(jìn)行。在該測(cè)定中，在細(xì)胞接種后24小時(shí)，將HepG2-2.2.15細(xì)胞與含有各種濃度的測(cè)試化合物完全培養(yǎng)基孵育，其中BAY 41-4109和HAP-1用作陽(yáng)性對(duì)照。在三天后，將培養(yǎng)基用含有適當(dāng)稀釋的測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基替代。將細(xì)胞培養(yǎng)物在初始施用測(cè)試化合物后六天收集，然后使用QIAamp 96DNA Blood Kit(Qiagen)進(jìn)行HBV DNA萃取。將萃取的HBV DNA稀釋并通過(guò)實(shí)時(shí)PCR分析。通過(guò)Ct值對(duì)HBV質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的量作圖產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)施加施加染料攝取方法(CellTiter Blue試劑盒，Promega)與上述方法類似地測(cè)定細(xì)胞毒性。

在細(xì)胞測(cè)定中，測(cè)試所選的化合物的活性和毒性。在第一抗-病毒測(cè)定中，使用斑點(diǎn)印跡方法，評(píng)估化合物抑制HBV復(fù)制在HBV-產(chǎn)生肝癌細(xì)胞系中的能力。

將HepG2-2.2.15細(xì)胞的的匯合單層與含有各個(gè)濃度的測(cè)試化合物的完全培養(yǎng)基一起孵育。三天后，將培養(yǎng)基用含有適當(dāng)稀釋的測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基替代。在初始施用測(cè)試化合物后六天，收集細(xì)胞培養(yǎng)物上清液，并進(jìn)行細(xì)胞裂解。將樣品施加至Nylos膜上并通過(guò)UV交聯(lián)將DNA固定至膜。在預(yù)雜交后，添加HBV探針并進(jìn)行雜交過(guò)夜。將膜暴露于Kodak膜；抗病毒活性根據(jù)HBV DNA水平(EC₅₀)減少計(jì)算。抗病毒活性的EC₅₀根據(jù)活性化合物的劑量響應(yīng)曲線計(jì)算。隨時(shí)間推移的測(cè)定性能通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照化合物ETV、BAY 41-4109和HAP-1監(jiān)測(cè)。本發(fā)明所選化合物的結(jié)果示于表5中。

在相同的HepG2-2.2.15細(xì)胞系中，使用如由制造商(Promega)推薦所采用的CellTiter Blue-基細(xì)胞毒性測(cè)定測(cè)量細(xì)胞毒性(CC₅₀)。

表5

“活性”表示斑點(diǎn)印跡-測(cè)定中的活性(‘+’表示在10μM下的>50％活性)

本文引用的每個(gè)和每一個(gè)專利、專利申請(qǐng)和出版物的公開(kāi)內(nèi)容在此通過(guò)引用以其整體并入本文。

盡管本發(fā)明已參考特定的實(shí)施方案得以公開(kāi)，顯然的是本發(fā)明的其它實(shí)施方案和變型可由本領(lǐng)域的技術(shù)人員設(shè)計(jì)而不偏離本發(fā)明的真正精神和范圍。隨附的權(quán)利要求書意在被理解為包括所有此類實(shí)施方案和等效變型。