1.一種抗包蟲(chóng)藥物高通量篩選方法,其特征在于包括如下步驟:
1)建立小鼠繼發(fā)性細(xì)粒棘球蚴感染模型,分離細(xì)粒棘球蚴生發(fā)層細(xì)胞及建立生發(fā)層細(xì)胞系;
2)制備棘球蚴生發(fā)層細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞濃度為5×104或OD508=0.2;
3)制備貼壁細(xì)胞后與待測(cè)藥物共培養(yǎng)72h;
4)測(cè)定上清液的堿性磷酸酶含量及貼壁細(xì)胞的活性以確定待測(cè)藥物的抗包蟲(chóng)活性。
2.如權(quán)利要求1所述的抗包蟲(chóng)藥物高通量篩選方法,其中步驟1)中所述小鼠繼發(fā)性細(xì)粒棘球蚴感染模型的建立包括:用羊源原頭節(jié)感染小鼠后繼續(xù)飼養(yǎng)小鼠8-10個(gè)月。
3.如權(quán)利要求1所述的抗包蟲(chóng)藥物高通量篩選方法,其中步驟1)中所述細(xì)粒棘球蚴生發(fā)層細(xì)胞的分離和所述生發(fā)層細(xì)胞系的建立包括:將羊源原頭節(jié)感染8-10個(gè)月的小鼠剖取細(xì)粒棘球蚴,分離出生發(fā)層細(xì)胞,在RPMI1640培養(yǎng)基中于37℃、5%CO2環(huán)境中鋪板培養(yǎng),21天后進(jìn)行傳代,待傳代穩(wěn)定后每2周傳代一次以建立生發(fā)層細(xì)胞系。
4.如權(quán)利要求1所述的抗包蟲(chóng)藥物高通量篩選方法,其中步驟2)中所述棘球蚴生發(fā)層細(xì)胞懸液的制備包括:取貼壁細(xì)胞加入0.25%胰酶消化5~30分鐘后加入培養(yǎng)基進(jìn)行吹打,得到細(xì)胞懸液。
5.如權(quán)利要求1所述的抗包蟲(chóng)藥物高通量篩選方法,其中步驟3)中所述制備貼壁細(xì)胞是將所述棘球蚴生發(fā)層細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)24h,使細(xì)胞完全貼壁。
6.如權(quán)利要求1所述的抗包蟲(chóng)藥物高通量篩選方法,其中步驟3)中所述待測(cè)藥物是候選抗包蟲(chóng)藥物。
7.如權(quán)利要求1所述的抗包蟲(chóng)藥物高通量篩選方法,其中步驟4)中所述測(cè)定上清液的堿性磷酸酶含量包括:加入待測(cè)藥物后72h吸取培養(yǎng)液上清,測(cè)定上清液的堿性磷酸酶含量。
8.如權(quán)利要求1所述的抗包蟲(chóng)藥物高通量篩選方法,其中步驟4)中所述貼壁細(xì)胞的活性測(cè)定采用MTT法。