1.一種如式I所示的化合物(E)-2,4-二羥基-6-丙烯基苯甲醛,
2.一種如權(quán)利要求1所述的式I化合物的制備方法,包括以下步驟:發(fā)酵培養(yǎng)土曲霉(Aspergillus terreus)PF26得到含式I化合物的發(fā)酵液,即可。
3.如權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于:所述的發(fā)酵培養(yǎng)土曲霉(Aspergillus terreus)PF26菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基為:葡萄糖30g/L,(NH4)2SO420g/L,酵母提取物10g/L,MgSO4·7H2O 1g/L,F(xiàn)eSO4·7H2O 0.05g/L,水,pH 5.5,其中g(shù)/L是指各組分與發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量體積比;所述的發(fā)酵培養(yǎng)土曲霉(Aspergillus terreus)PF26菌株的發(fā)酵培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度為25~35℃,較佳地為30℃;震蕩速度為150~250r/min,較佳地為220r/min;培養(yǎng)時(shí)間為120~180h,較佳地為168h。
4.如權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于:
在所述的發(fā)酵培養(yǎng)土曲霉(Aspergillus terreus)PF26菌株之前還包括土曲霉(Aspergillus terreus)PF26菌株種子液的制備過(guò)程,包括以下步驟:將保藏在甘油管的土曲霉(Aspergillus terreus)PF26菌株孢子接種至種子培養(yǎng)基中,溫度30℃、轉(zhuǎn)速220r/min,振蕩培養(yǎng)12-36h,即可;其中,所述的種子培養(yǎng)基為:酵母提取物5g/L,蛋白胨10g/L,葡萄糖20g/L,水,pH 5.5;其中,g/L是指各組分與種子培養(yǎng)基的質(zhì)量體積比。
5.如權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于:
在得到含式I化合物的發(fā)酵液后還包括采用離心方法得到所述的發(fā)酵液的上清液的過(guò)程;其中,所述的離心方法的條件為:轉(zhuǎn)速為3000~5000rpm,較佳地為4000rpm;時(shí)間為0.5~1h;
在得到所述的發(fā)酵液的上清液后,還包括以下步驟:利用有機(jī)溶劑萃取所述的上清液,萃取液濃縮,得到式I化合物粗品,即可;所述的用有機(jī)溶劑為乙酸乙酯,氯仿,二氯甲烷,丙酮,甲醇和乙醇中的一種或幾種。
6.一種式I化合物(E)-2,4-二羥基-6-丙烯基苯甲醛的分離純化方法,其包括以下步驟:
(1)、將權(quán)利要求5中所述的式I化合物粗品采用反相硅膠層析柱進(jìn)行分離純化,依次以水、20%、40%、50%、60%、80%、100%的甲醇-水的混合液進(jìn)行梯度洗脫,收集60%的甲醇-水混合液的洗脫液并濃縮;其中,所述的百分比為甲醇占甲醇-水混合液的體積比;
(2)、將步驟(1)所得產(chǎn)物采用正相硅膠色譜進(jìn)行分離純化,流動(dòng)相為氯仿,收集含式I化合物的洗脫液并濃縮;
(3)、將步驟(2)所得產(chǎn)物采用凝膠層析柱分離,流動(dòng)相為50~100%的甲醇-水混合液,其中,所述的百分比為甲醇占甲醇-水混合液的體積比;收集含I化合物的洗脫液,濃縮。
7.如權(quán)利要求6所述的分離純化方法,其特征在于,
步驟(1)中,所述的反相硅膠層析柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠ODS-C18為填充劑;所述的ODS-C18較佳地為YMC公司生產(chǎn)的批號(hào)為9955的ODS-C18;所述反相硅膠層析柱的填充物與步驟(1)所得產(chǎn)物的質(zhì)量比為2:1~10:1,較佳地4:1~6:1;每個(gè)梯度洗脫液的用量與步驟(1)所得產(chǎn)物的體積質(zhì)量比為30mL/g~100mL/g,較佳地50mL/g;流動(dòng)相的流速為10~40mL/min,較佳地10mL/min;
和/或,步驟(1)所得產(chǎn)物的儲(chǔ)存條件為4℃下進(jìn)行低溫保存;
和/或,步驟(2)中,拌樣硅膠與所述的步驟(1)所得產(chǎn)物的重量比為2~4:1;拌樣硅膠為200~300目硅膠;裝柱硅膠與所述的步驟(1)所得產(chǎn)物的重量比為10~60:1,較佳地10~20:1,裝柱硅膠為200~300目硅膠;硅膠柱的徑高比為1:10~20;
和/或,步驟(3)中,所述的凝膠層析柱為Sephadex LH-20凝膠層析柱;上樣體積為所述的凝膠層析柱保留體積的5~20%,較佳地為10%;所述的流動(dòng)相為60~80%的甲醇-水混合液,較佳地為70%的甲醇-水混合液,其中,所述的百分比為甲醇占甲醇-水混合液的體積比;
和/或,步驟(3)中所述的收集為分管收集,每管收集的洗脫液的體積為1~5mL,較佳地3mL。
8.如權(quán)利要求6所述的分離純化方法,其特征在于,步驟(2)和步驟(3)中采用液相檢測(cè)洗脫液,所述的液相檢測(cè)的檢測(cè)條件為:65%甲醇-水等度洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm,柱溫為40℃,流速為1mL/min,所用的儀器是依利特高效液相色譜儀-DAD紫外檢測(cè)器,色譜柱為粒徑5μm,柱直徑×柱長(zhǎng)為14×150mm的Ultimate AQ-C18柱,所述的式I化合物在8~10min出峰,較佳地在8.83min出峰。
9.一種如權(quán)利要求1所述的式I化合物在制備丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制劑或抗丙型肝炎藥物中的應(yīng)用。
10.一種藥物組合物,其包含治療有效量的如權(quán)利要求1所述的式I化合物和藥學(xué)可接受的輔料。