本發(fā)明涉及萬(wàn)古霉素的制備方法技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種通過(guò)芐胺-正丙醛制備萬(wàn)古霉素的制備方法。

背景技術(shù)：

萬(wàn)古霉素是抗生素的一種，其分子式為C66H74Cl2N9O24。其半衰期：4～8小時(shí)，腎衰竭9天，對(duì)厭氧菌和革蘭氏陰性細(xì)菌無(wú)效，血液透析不會(huì)移除。在印度等南亞國(guó)家出現(xiàn)的“超級(jí)病菌”NDM-1，已經(jīng)蔓延到英國(guó)、美國(guó)、加拿大、澳大利亞、荷蘭等國(guó)家，國(guó)內(nèi)專(zhuān)家稱(chēng)南亞超級(jí)病菌不會(huì)大流行，萬(wàn)古霉素能見(jiàn)效。

萬(wàn)古霉素屬于糖肽類(lèi)大分子抗生素，萬(wàn)古霉素的藥力較強(qiáng)，在其他抗生素對(duì)病菌無(wú)效時(shí)會(huì)被使用。主要用于葡萄球菌(包括耐青霉素和耐新青霉素株)、難辨梭狀芽胞桿菌等所致的系統(tǒng)感染和腸道感染，如心內(nèi)膜炎、敗血癥、偽膜性腸炎等。

為制得萬(wàn)古霉素，需要通過(guò)離子交換、脫色、色譜分離、超濾、納濾、結(jié)晶、溶解、冷凍干燥等多種提取精制手段。其中結(jié)晶過(guò)程可以提高萬(wàn)古霉素純度，去除部分色素等雜質(zhì)，但因萬(wàn)古霉素鹽酸鹽晶體生長(zhǎng)緩慢，結(jié)晶過(guò)程易受雜質(zhì)干擾，結(jié)晶難度較大，僅僅通過(guò)離子交換和脫色的粗提取液很難結(jié)晶出來(lái)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種通過(guò)芐胺-正丙醛制備萬(wàn)古霉素的制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：本發(fā)明提供一種通過(guò)芐胺-正丙醛制備萬(wàn)古霉素的制備方法，包括以下步驟：

a、發(fā)酵液預(yù)處理，包括去除高價(jià)無(wú)機(jī)離子和蛋白質(zhì)，采用草酸或磷酸去除高價(jià)無(wú)機(jī)離子，蛋白質(zhì)的去除方法為：采用10％硫酸調(diào)節(jié)pH4.5-5.0加入0.05％質(zhì)量濃度的凝絮劑的方法，同時(shí)加入0.7％硅藻土作助濾劑，再通過(guò)板框過(guò)濾機(jī)多次過(guò)濾；

b、采用鼓式真空過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾；

c、將發(fā)酵濾液酸化至PH＝2，后加相當(dāng)于發(fā)酵液體積1/3的芐胺-正丙醛，混合后以萃取罐分離，進(jìn)行二級(jí)逆流萃取，得一次芐胺-正丙醛提取液，然后以1.3％-1.9％碳酸氫鈉在PH6.8-7.1條件下將萬(wàn)古霉素從芐胺-正丙醛提取液萃取到緩沖液中，然后調(diào)PH至2.0后，再一次將萬(wàn)古霉素從緩沖液轉(zhuǎn)入芐胺-正丙醛中去，重復(fù)上述步驟，得二次芐胺-正丙醛提取液；

d、將二次芐胺-正丙醛提取液以0.5mol/L NaOH液萃取，調(diào)PH至6.4-6.8，得萬(wàn)古霉素鈉鹽水濃縮液，加3-4倍體積的丁醇，在16-26℃，5-10mm汞柱下真空蒸餾，將水和丁醇的共沸物蒸出，并隨時(shí)補(bǔ)加丁醇，當(dāng)濃縮到濃縮液體積、蒸出餾分中含水達(dá)2-4％時(shí)，停止蒸餾，萬(wàn)古霉素鈉鹽結(jié)晶析出，過(guò)濾，將晶體洗滌后加入葡萄糖溶液得到萬(wàn)古霉素。

本發(fā)明優(yōu)選的，根據(jù)步驟a中，所述硫酸的pH為4.9。

本發(fā)明優(yōu)選的，根據(jù)步驟c中，所述碳酸氫鈉的pH為7。

本發(fā)明的有益效果如下：

采用上述方案，本發(fā)明制備所得萬(wàn)古霉素有效組份大大得到提高，其它雜質(zhì)大大降低，純度很高，色譜純度可達(dá)到95％以上，同時(shí)產(chǎn)品外觀顏 色得到明顯改觀，適于口服或注射給藥；本發(fā)明具有制作方法簡(jiǎn)便和工藝流程適用于大批量生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明所述一種通過(guò)芐胺-正丙醛制備萬(wàn)古霉素的制備方法的流程圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

請(qǐng)參閱圖1，本發(fā)明提供一種通過(guò)芐胺-正丙醛制備萬(wàn)古霉素的制備方法，包括以下步驟：

a、發(fā)酵液預(yù)處理，包括去除高價(jià)無(wú)機(jī)離子和蛋白質(zhì)，采用草酸或磷酸去除高價(jià)無(wú)機(jī)離子，蛋白質(zhì)的去除方法為：采用10％硫酸調(diào)節(jié)pH4.5-5.0加入0.05％質(zhì)量濃度的凝絮劑的方法，同時(shí)加入0.7％硅藻土作助濾劑，再通過(guò)板框過(guò)濾機(jī)多次過(guò)濾；

b、采用鼓式真空過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾；

c、將發(fā)酵濾液酸化至PH＝2，后加相當(dāng)于發(fā)酵液體積1/3的芐胺-正丙醛，混合后以萃取罐分離，進(jìn)行二級(jí)逆流萃取，得一次芐胺-正丙醛提取液，然后以1.3％-1.9％碳酸氫鈉在PH6.8-7.1條件下將萬(wàn)古霉素從芐胺-正丙醛提取液萃取到緩沖液中，然后調(diào)PH至2.0后，再一次將萬(wàn)古霉素從緩沖液轉(zhuǎn)入芐胺-正丙醛中去，重復(fù)上述步驟，得二次芐胺-正丙醛提取液；

d、將二次芐胺-正丙醛提取液以0.5mol/L NaOH液萃取，調(diào)PH至6.4-6.8，得萬(wàn)古霉素鈉鹽水濃縮液，加3-4倍體積的丁醇，在16-26℃， 5-10mm汞柱下真空蒸餾，將水和丁醇的共沸物蒸出，并隨時(shí)補(bǔ)加丁醇，當(dāng)濃縮到濃縮液體積、蒸出餾分中含水達(dá)2-4％時(shí)，停止蒸餾，萬(wàn)古霉素鈉鹽結(jié)晶析出，過(guò)濾，將晶體洗滌后加入葡萄糖溶液得到萬(wàn)古霉素。

根據(jù)步驟a中，所述硫酸的pH為4.9。

根據(jù)步驟c中，所述碳酸氫鈉的pH為7。

實(shí)施例一：

本發(fā)明包括以下步驟：

a、發(fā)酵液預(yù)處理，包括去除高價(jià)無(wú)機(jī)離子和蛋白質(zhì)，采用草酸或磷酸去除高價(jià)無(wú)機(jī)離子，蛋白質(zhì)的去除方法為：采用10％硫酸調(diào)節(jié)pH4.5加入0.05％質(zhì)量濃度的凝絮劑的方法，同時(shí)加入0.7％硅藻土作助濾劑，再通過(guò)板框過(guò)濾機(jī)多次過(guò)濾；

b、采用鼓式真空過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾；

c、將發(fā)酵濾液酸化至PH＝2，后加相當(dāng)于發(fā)酵液體積1/3的芐胺-正丙醛，混合后以萃取罐分離，進(jìn)行二級(jí)逆流萃取，得一次芐胺-正丙醛提取液，然后以1.3％碳酸氫鈉在PH6.8條件下將萬(wàn)古霉素從芐胺-正丙醛提取液萃取到緩沖液中，然后調(diào)PH至2.0后，再一次將萬(wàn)古霉素從緩沖液轉(zhuǎn)入芐胺-正丙醛中去，重復(fù)上述步驟，得二次芐胺-正丙醛提取液；

d、將二次芐胺-正丙醛提取液以0.5mol/L NaOH液萃取，調(diào)PH至6.4，得萬(wàn)古霉素鈉鹽水濃縮液，加3倍體積的丁醇，在16℃，5mm汞柱下真空蒸餾，將水和丁醇的共沸物蒸出，并隨時(shí)補(bǔ)加丁醇，當(dāng)濃縮到濃縮液體積、蒸出餾分中含水達(dá)2％時(shí)，停止蒸餾，萬(wàn)古霉素鈉鹽結(jié)晶析出，過(guò)濾， 將晶體洗滌后加入葡萄糖溶液得到萬(wàn)古霉素。

實(shí)施例二：

本發(fā)明包括以下步驟：

a、發(fā)酵液預(yù)處理，包括去除高價(jià)無(wú)機(jī)離子和蛋白質(zhì)，采用草酸或磷酸去除高價(jià)無(wú)機(jī)離子，蛋白質(zhì)的去除方法為：采用10％硫酸調(diào)節(jié)pH5.0加入0.05％質(zhì)量濃度的凝絮劑的方法，同時(shí)加入0.7％硅藻土作助濾劑，再通過(guò)板框過(guò)濾機(jī)多次過(guò)濾；

b、采用鼓式真空過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾；

c、將發(fā)酵濾液酸化至PH＝2，后加相當(dāng)于發(fā)酵液體積1/3的芐胺-正丙醛，混合后以萃取罐分離，進(jìn)行二級(jí)逆流萃取，得一次芐胺-正丙醛提取液，然后以1.9％碳酸氫鈉在PH7.1條件下將萬(wàn)古霉素從芐胺-正丙醛提取液萃取到緩沖液中，然后調(diào)PH至2.0后，再一次將萬(wàn)古霉素從緩沖液轉(zhuǎn)入芐胺-正丙醛中去，重復(fù)上述步驟，得二次芐胺-正丙醛提取液；

d、將二次芐胺-正丙醛提取液以0.5mol/L NaOH液萃取，調(diào)PH至6.8，得萬(wàn)古霉素鈉鹽水濃縮液，加4倍體積的丁醇，在26℃，10mm汞柱下真空蒸餾，將水和丁醇的共沸物蒸出，并隨時(shí)補(bǔ)加丁醇，當(dāng)濃縮到濃縮液體積、蒸出餾分中含水達(dá)4％時(shí)，停止蒸餾，萬(wàn)古霉素鈉鹽結(jié)晶析出，過(guò)濾，將晶體洗滌后加入葡萄糖溶液得到萬(wàn)古霉素。

綜上所述，采用上述方案，本發(fā)明制備所得萬(wàn)古霉素有效組份大大得到提高，其它雜質(zhì)大大降低，純度很高，色譜純度可達(dá)到95％以上，同時(shí)產(chǎn)品外觀顏色得到明顯改觀，適于口服或注射給藥；本發(fā)明具有制作方法 簡(jiǎn)便和工藝流程適用于大批量生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。

以上僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。