本發(fā)明涉及萬古霉素沉淀方法技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種萬古霉素沉淀方法。

背景技術(shù)：

萬古霉素(Vancomycin)是1956年Micormick等從一株東方擬無枝酸菌發(fā)酵液中分離得到的一種糖肽類抗生素，是放線菌產(chǎn)生的糖肽類抗生素中具有代表性的一種。

萬古霉素用于治療革蘭氏陽性菌引起的感染疾病，特別是目前臨床上對由β-內(nèi)酰胺類抗生素引起的耐藥金黃色葡萄球菌引起的嚴(yán)重感染疾病有較好的療效。

由于萬古霉素的意義及其重要性，人們一直在尋找這種抗生素發(fā)酵混合物中分離萬古霉素的方法。萬古霉素的發(fā)酵和分離方法在美國專利(專利號：3067099)中公布，之后也有專利公開過萬古霉素的回收方法，包括：使用與水混合的非溶劑如異丙醇、乙醇或丙酮凈化發(fā)酵液，沉淀后分離產(chǎn)物(美國專利號：4440753)；使用磷酸鹽離析產(chǎn)物(歐洲專利號：0145484)；使用銅鹽離析產(chǎn)物(美國專利號：4845194)；調(diào)整發(fā)酵液pH到7.8，在不攪拌的情況下沉淀產(chǎn)物(歐洲專利號：0323150)；通過咪唑/萬古霉素混合后過濾回收(美國專利號4868285)。

在抗生素的生產(chǎn)過程中，萬古霉素發(fā)酵液中不僅含有抗生素，而且還 有不溶的菌絲體懸浮在未反應(yīng)的中間體稀溶液中，還有新陳代謝雜質(zhì)以及產(chǎn)物。提取抗生素是非常困難的，需要經(jīng)過分離，富集和純化的步驟，這些多級步驟不僅價格昂貴，而且每步都會造成萬古霉素的損失。

美國專利(專利號：5235037)公開了一種萬古霉素的沉淀方法，用于從萬古霉素水溶液中分離萬古霉素，該方法通過往萬古霉素水溶液中添加堿金屬鹽或堿土金屬鹽來沉淀萬古霉素，但是，該沉淀過程控制性不強(qiáng)，混合液過濾困難，得到的萬古霉素堿顏色較深，粉末呈粘狀，難以溶解。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種萬古霉素沉淀方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：本發(fā)明提供一種萬古霉素沉淀方法，包括以下步驟：

a、萬古霉素發(fā)酵液在堿性條件pH＝8.5～10.5下通過0.02～0.5μm的聚乙烯膜過濾，得到的澄清濾液通過大孔吸附色譜樹脂柱，萬古霉素被吸附在大孔吸附色譜樹脂柱上，大孔吸附色譜樹脂柱用純化水洗后再用占流動相用量30～50％的乙醇和占流動相用量50～70％的鹽酸水溶液洗脫，萬古霉素被洗脫下來，得到含有萬古霉素的洗脫液，洗脫液中加入活性炭脫色，過濾得到的濾液濃縮得到鹽酸萬古霉素水溶液；

b、在沉淀容器中沉淀步驟a中所得的鹽酸萬古霉素水溶液，得到晶體，并且攪拌該晶體漿料，將PH值連續(xù)調(diào)節(jié)至所需程度，直至完全沉淀，得到晶體沉淀物；

c、將步驟b得到的晶體沉淀物溶解為水溶液，然后通過陰離子交換 樹脂將其轉(zhuǎn)為萬古霉素。

本發(fā)明優(yōu)選的，根據(jù)步驟a中，所述鹽酸的pH范圍為1.0～3.0，所述乙醇的pH范圍為2.0～5.0。

本發(fā)明優(yōu)選的，根據(jù)步驟b中，通過在含凈抗生素活性洗脫液中加入與水互溶的有機(jī)溶劑來結(jié)晶，結(jié)晶前溶液中萬古霉素含量為5.0％～30.0％。

本發(fā)明優(yōu)選的，所述機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇或丙酮。

本發(fā)明優(yōu)選的，所述機(jī)溶劑加入量為：甲醇為2～6倍結(jié)晶液體積；乙醇為1.5～5.5倍結(jié)晶液體積；異丙醇為1.2～5倍結(jié)晶液體積；丙酮為1.0～4.5倍結(jié)晶液體積。

本發(fā)明優(yōu)選的，根據(jù)步驟b中，結(jié)晶過程起始溫度為25～60℃；結(jié)晶過程終點溫度為0～30℃；結(jié)晶過程降溫速度為0.5～5℃/分鐘。

本發(fā)明優(yōu)選的，根據(jù)步驟c中，晶體用水溶解后的萬古霉素濃度為1.0％～20.0％。

本發(fā)明優(yōu)選的，根據(jù)步驟c中，所述陰離子交換樹脂為717樹脂、D293樹脂或D301FD樹脂。

本發(fā)明優(yōu)選的，所述陰離子交換樹脂用量按制備1克萬古霉素需要用2～10mL的陰離子交換樹脂計。

本發(fā)明的有益效果如下：

采用上述方案，本發(fā)明通過聚乙烯膜過濾，得到的澄清濾液通過大孔吸附色譜樹脂柱，萬古霉素被吸附在大孔吸附色譜樹脂柱上，沉淀過程易控制，混合液易過濾，得到的萬古霉素堿顏色淺，粉末松散，易溶解；本發(fā)明具有沉淀方法簡便和工藝流程適用于大批量生產(chǎn)的優(yōu)點。

附圖說明

圖1為本發(fā)明所述一種萬古霉素沉淀方法的流程圖。

具體實施方式

以下結(jié)合附圖和具體實施例，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。

請參閱圖1，本發(fā)明提供一種萬古霉素沉淀方法，包括以下步驟：

a、萬古霉素發(fā)酵液在堿性條件pH＝8.5～10.5下通過0.02～0.5μm的聚乙烯膜過濾，得到的澄清濾液通過大孔吸附色譜樹脂柱，萬古霉素被吸附在大孔吸附色譜樹脂柱上，大孔吸附色譜樹脂柱用純化水洗后再用占流動相用量30～50％的乙醇和占流動相用量50～70％的鹽酸水溶液洗脫，萬古霉素被洗脫下來，得到含有萬古霉素的洗脫液，洗脫液中加入活性炭脫色，過濾得到的濾液濃縮得到鹽酸萬古霉素水溶液；

b、在沉淀容器中沉淀步驟a中所得的鹽酸萬古霉素水溶液，得到晶體，并且攪拌該晶體漿料，將PH值連續(xù)調(diào)節(jié)至所需程度，直至完全沉淀，得到晶體沉淀物；

c、將步驟b得到的晶體沉淀物溶解為水溶液，然后通過陰離子交換樹脂將其轉(zhuǎn)為萬古霉素。

根據(jù)步驟a中，所述鹽酸的pH范圍為1.0～3.0，所述乙醇的pH范圍為2.0～5.0。

根據(jù)步驟b中，通過在含凈抗生素活性洗脫液中加入與水互溶的有機(jī)溶劑來結(jié)晶，結(jié)晶前溶液中萬古霉素含量為5.0％～30.0％。

所述機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇或丙酮。

所述機(jī)溶劑加入量為：甲醇為2～6倍結(jié)晶液體積；乙醇為1.5～5.5倍結(jié)晶液體積；異丙醇為1.2～5倍結(jié)晶液體積；丙酮為1.0～4.5倍結(jié)晶液體積。

根據(jù)步驟b中，結(jié)晶過程起始溫度為25～60℃；結(jié)晶過程終點溫度為0～30℃；結(jié)晶過程降溫速度為0.5～5℃/分鐘。

根據(jù)步驟c中，晶體用水溶解后的萬古霉素濃度為1.0％～20.0％。

根據(jù)步驟c中，所述陰離子交換樹脂為717樹脂、D293樹脂或D301FD樹脂。

所述陰離子交換樹脂用量按制備1克萬古霉素需要用2～10mL的陰離子交換樹脂計。

實施例一：

本發(fā)明包括以下步驟：

a、萬古霉素發(fā)酵液在堿性條件pH＝9下通過0.4μm的聚乙烯膜過濾，得到的澄清濾液通過大孔吸附色譜樹脂柱，萬古霉素被吸附在大孔吸附色譜樹脂柱上，大孔吸附色譜樹脂柱用純化水洗后再用占流動相用量40％的乙醇和占流動相用量60％的鹽酸水溶液洗脫，萬古霉素被洗脫下來，得到含有萬古霉素的洗脫液，洗脫液中加入活性炭脫色，過濾得到的濾液濃縮得到鹽酸萬古霉素水溶液，所述鹽酸的pH范圍為2.0，所述乙醇的pH范圍為3.5；

b、在沉淀容器中沉淀步驟a中所得的鹽酸萬古霉素水溶液，得到晶體，并且攪拌該晶體漿料，將PH值連續(xù)調(diào)節(jié)至所需程度，直至完全沉淀，得到晶體沉淀物，通過在含凈抗生素活性洗脫液中加入與水互溶的有機(jī)溶劑來結(jié)晶，結(jié)晶前溶液中萬古霉素含量為20.0％，所述機(jī)溶劑為乙醇，所述機(jī)溶劑加入量為：乙醇為4倍結(jié)晶液體積，結(jié)晶過程起始溫度為50℃；結(jié)晶過程終點溫度為20℃；結(jié)晶過程降溫速度為3℃/分鐘；

c、將步驟b得到的晶體沉淀物溶解為水溶液，然后通過陰離子交換樹 脂將其轉(zhuǎn)為萬古霉素，晶體用水溶解后的萬古霉素濃度為15.0％，所述陰離子交換樹脂為D301FD樹脂，所述陰離子交換樹脂用量按制備1克萬古霉素需要用8mL的陰離子交換樹脂計。

綜上所述，采用上述方案，本發(fā)明通過聚乙烯膜過濾，得到的澄清濾液通過大孔吸附色譜樹脂柱，萬古霉素被吸附在大孔吸附色譜樹脂柱上，沉淀過程易控制，混合液易過濾，得到的萬古霉素堿顏色淺，粉末松散，易溶解；本發(fā)明具有沉淀方法簡便和工藝流程適用于大批量生產(chǎn)的優(yōu)點。

以上僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。