一種虎奶菇多糖及其提取方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物的提取、分離和純化領(lǐng)域，公開(kāi)了一種虎奶菇多糖及其提取方法。所述方法包括以下步驟：虎奶菇干燥粉末加水超聲波萃取2～4h，離心，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，用木瓜蛋白酶進(jìn)行水解，用Sevag試劑進(jìn)行脫蛋白，利用體積百分?jǐn)?shù)95％乙醇進(jìn)行醇析，多糖重溶于蒸餾水，超濾膜超濾并收集10000道爾頓以上的組分，再進(jìn)行Sephadex G-100柱層析得純化多糖，收集多糖組分，冷凍干燥，得到虎奶菇多糖。該提取方法產(chǎn)品回收率高、純度好，虎奶菇多糖得率為1.8％，多糖的純度為91.2％，其中主要含有質(zhì)量百分?jǐn)?shù)44.2％的葡萄糖、質(zhì)量百分?jǐn)?shù)40.0％的半乳糖。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種虎奶菇多糖及其提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物的提取、分離和純化領(lǐng)域，具體涉及一種虎奶菇多糖及其提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]虎奶燕[Pleurotustuber_regium(Fr.) Sing.],屬于擔(dān)子菌綱(Basid1mycetes)側(cè)耳屬，是熱帶地區(qū)一種珍貴的食用菌及藥用菌，主要分布在我國(guó)云南省以及部分東南亞國(guó)家。擔(dān)子菌綱的很多食用菌含有被稱(chēng)作生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑(B1logical ResponseModifiers, BRMs)的生物活性多糖,如香燕多糖(Lentinan)、云芝多糖(Krestin)、裂裙菌多糖(Sizofiran)等。這些多糖因具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及抗腫瘤等藥理作用，且沒(méi)有毒性，而成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。對(duì)虎乃菇多糖的研究表明，虎奶菇多糖亦是一種生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑，能顯著提高機(jī)體免疫功能，在醫(yī)學(xué)、保健品、食品、藥物載體等領(lǐng)域有良好的應(yīng)用前景。
[0003]多糖是由二十多個(gè)到上萬(wàn)個(gè)單糖組成的大分子，在植物、動(dòng)物、微生物廣泛。多糖的分離純化過(guò)程包括提取、分離、純化和純度鑒定。食用菌子實(shí)體的多糖，因細(xì)胞或組織外多有脂質(zhì)包圍，故常用醇或醚回流脫脂，然后利用不同的溫度、極性、PH的溶劑提取多糖。此夕卜，也可采用一些生化和物理的處理方法:如酶解、弱堿溶解或超聲波處理以破壞細(xì)胞壁，增加多糖的溶出。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種產(chǎn)品回收率高、純度好的虎奶菇多糖的提取方法。
[0005]本發(fā)明的另一目的在于提供上述提取方法得到的虎奶菇多糖。
[0006]本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)予以實(shí)現(xiàn):
[0007]—種虎奶菇多糖的提取方法，按照以下操作步驟:
[0008](I)將自然風(fēng)干的虎奶菇進(jìn)行粉碎并過(guò)篩，得到虎奶菇干燥粉末；
[0009](2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末質(zhì)量30?50倍的蒸餾水，在80?100°C下用輸出功率為50?100W超聲波萃取2?4h，離心5?20min，取上清液；離心后的虎奶菇固體殘?jiān)偌尤肫滟|(zhì)量30?50倍的蒸餾水，重復(fù)上述超聲波萃取操作3?5次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A ;
[0010](3)利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在80?100°C下對(duì)虎奶菇多糖提取液A進(jìn)行濃縮2?4h，得到虎奶菇多糖提取液B ;
[0011](4)將虎奶菇多糖提取液B的pH值調(diào)節(jié)至3?8，加入虎奶菇多糖提取液B質(zhì)量0.5?2倍的木瓜蛋白酶，30?70°C下水解I?5h，沸水浴處理5?lOmin，得虎奶菇多糖提取液C ;所述木瓜蛋白酶的活性為80000?100000U/g ；
[0012](5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其體積1/3的Sevag試劑，充分抽提0.5?3h,離心5?20min,取上清液；上清液繼續(xù)用其1/3體積的Sevag試劑進(jìn)行脫蛋白，充分抽提0.5?3h，離心5?20min最終獲得的上清液為虎奶菇多糖提取液D ；
[0013](6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其體積3?5倍的乙醇，在O?25°C下醇析2?24h，離心10?20min，棄上清液并室溫?fù)]發(fā)干乙醇，得到多糖；再用多糖質(zhì)量5?15倍的蒸餾水進(jìn)行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E ;
[0014](7)利用超濾膜將虎奶菇多糖提取液E進(jìn)行超濾，收集分子量10000道爾頓以上的組分，再進(jìn)行Sephadex G-100于25°C下進(jìn)行柱層析得純化多糖，收集多糖組分，冷凍干燥，得到虎奶菇多糖。
[0015]步驟⑴所述過(guò)篩是過(guò)50?120目篩。
[0016]步驟(4)所述pH值調(diào)節(jié)至4.5?7.2，所述木瓜蛋白酶的活性為80000U/g。
[0017]步驟(5)所述充分抽提的時(shí)間為0.5?Ih ;所述Sevag試劑為體積比為4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液。
[0018]步驟(6)所述乙醇是濃度為體積百分比95%的乙醇。
[0019]步驟⑵、步驟(5)和步驟(6)所述離心的速度為8000?12000轉(zhuǎn)/分鐘。
[0020]一種由上述提取方法得到的虎奶菇多糖。
[0021]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下的優(yōu)點(diǎn)及有益效果:
[0022](I)本發(fā)明提取方法產(chǎn)品回收率高、純度好，虎奶菇多糖得率為1.8%，多糖的純度為91.2%，其中主要含有葡萄糖(質(zhì)量百分含量44.2% )、半乳糖(質(zhì)量百分含量40.0% )。
[0023](2)本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，所用試劑易得，生產(chǎn)成本低，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化。

【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合具體的實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的敘述，但本發(fā)明的實(shí)施方法靈活，不僅僅限于此例所述的具體操作方式。
[0025]實(shí)施例1
[0026](I)將自然風(fēng)干的虎奶菇進(jìn)行粉碎并過(guò)80目篩，得到虎奶菇干燥粉末；
[0027](2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末質(zhì)量30倍的蒸餾水，在80°C下用輸出功率為50W超聲波萃取2h，10000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心lOmin，取上清液；離心后的虎奶菇固體殘?jiān)偌尤肫滟|(zhì)量30倍的蒸餾水，重復(fù)上述超聲波萃取操作3次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A ;
[0028](3)利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在100°C下對(duì)虎奶菇多糖提取液A進(jìn)行濃縮2h，得到虎奶菇多糖提取液B ；
[0029](4)將虎奶菇多糖提取液B的pH值調(diào)節(jié)至7.2，加入虎奶菇多糖提取液B質(zhì)量0.5倍的木瓜蛋白酶，50°C下水解2h，沸水浴處理lOmin，得虎奶菇多糖提取液C ;所述木瓜蛋白酶的活性為80000U/g ；
[0030](5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其體積1/3的Sevag試劑(體積比為4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液)，充分抽提lh，10000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心lOmin，取上清液；上清液繼續(xù)用其1/3體積的Sevag試劑進(jìn)行脫蛋白，充分抽提lh，10000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心1min最終獲得的上清液為虎奶菇多糖提取液D ；
[0031](6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其體積3倍的乙醇(體積百分比濃度95%)，在10°C下醇析2h，10000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心lOmin，棄上清液并室溫?fù)]發(fā)干乙醇，得到多糖；再用多糖質(zhì)量10倍的蒸餾水進(jìn)行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E ；
[0032](7)利用超濾膜將虎奶菇多糖提取液E進(jìn)行超濾(B1maX-10，MillipOre公司，下同)，壓力不超過(guò)0.4MPa，收集分子量10000道爾頓以上的組分，再進(jìn)行S^)hadex G-1OO于25°C下進(jìn)行柱層析得純化多糖，收集多糖組分，冷凍干燥，得到虎奶菇多糖?；⒛坦蕉嗵堑寐蕿?.6%，多糖的純度為91.2%，其中主要含有葡萄糖(質(zhì)量百分含量44.2% )、半乳糖(質(zhì)量百分含量40.0% )。
[0033]本實(shí)施例制備的虎奶菇多糖為淺褐色粉末，易吸濕，易溶于水，質(zhì)量含量為91%，經(jīng)檢測(cè)符合下述指標(biāo):
[0034]1.重金屬指標(biāo):pb〈l.5ppm、As〈l.0ppm、Hg〈0.3ppm。
[0035]2.衛(wèi)生指標(biāo):細(xì)菌數(shù)〈1000個(gè)/g大腸桿菌、活螨不得檢出，霉菌數(shù)〈35個(gè)/g。
[0036]多糖含量的檢測(cè):
[0037]準(zhǔn)確稱(chēng)取虎奶菇多糖1mg于10mL燒杯中，讓其充分溶解，吸取多糖溶液0.5mL,加入5%苯酹1.0mL及濃硫酸3.0mL,靜置1min,搖勻，室溫下放置15min,以0.5mL蒸懼水為空白，于490nm處測(cè)吸光度值。
[0038]實(shí)施例2
[0039](I)將自然風(fēng)干的虎奶菇進(jìn)行粉碎并過(guò)100目篩，得到虎奶菇干燥粉末；
[0040](2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末質(zhì)量50倍的蒸餾水，在90°C下用輸出功率為10W超聲波萃取4h，10000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心lOmin，取上清液；離心后的虎奶菇固體殘?jiān)偌尤肫滟|(zhì)量50倍的蒸餾水，重復(fù)上述超聲波萃取操作3次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A ;
[0041](3)利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在100°C下對(duì)虎奶菇多糖提取液A進(jìn)行濃縮2h，得到虎奶菇多糖提取液B ；
[0042](4)將虎奶菇多糖提取液B的pH值調(diào)節(jié)至7.2，加入虎奶菇多糖提取液B質(zhì)量I倍的木瓜蛋白酶，60°C下水解4h，沸水浴處理5min，得虎奶菇多糖提取液C ;所述木瓜蛋白酶的活性為100000U/g ；
[0043](5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其體積1/3的Sevag試劑(體積比為4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液)，充分抽提0.8h，10000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心lOmin，取上清液；上清液繼續(xù)用其1/3體積的Sevag試劑進(jìn)行脫蛋白，充分抽提0.8h，10000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心1min最終獲得的上清液為虎奶菇多糖提取液D ；
[0044](6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其體積3倍的乙醇(體積百分比濃度95%)，在4°C下醇析2h，10000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心lOmin，棄上清液并室溫?fù)]發(fā)干乙醇，得到多糖；再用多糖質(zhì)量10倍的蒸餾水進(jìn)行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E ；
[0045](7)利用超濾膜將虎奶菇多糖提取液E進(jìn)行超濾，壓力不超過(guò)0.4MPa，收集分子量10000道爾頓以上的組分，再進(jìn)行S印hadex G-100于25°C下進(jìn)行柱層析得純化多糖，收集多糖組分，冷凍干燥，得到虎奶菇多糖?；⒛坦蕉嗵堑寐蕿?.8%，多糖的純度為91.2%，其中主要含有葡萄糖(質(zhì)量百分含量44.2% )、半乳糖(質(zhì)量百分含量40.0% )。
[0046]本實(shí)施例制備的虎奶菇多糖為淺褐色粉末，易吸濕，易溶于水，含量為91%，且符合下述指標(biāo):
[0047]1.重金屬指標(biāo):pb〈l.5ppm、As〈l.0ppm、Hg〈0.3ppm。
[0048]2.衛(wèi)生指標(biāo):細(xì)菌數(shù)〈1000個(gè)/g大腸桿菌、活螨不得檢出，霉菌數(shù)〈35個(gè)/g。
[0049]多糖含量的檢測(cè):
[0050]準(zhǔn)確稱(chēng)取虎奶菇多糖1mg于10mL燒杯中，讓其充分溶解，吸取多糖溶液0.5mL,加入5%苯酹1.0mL及濃硫酸3.0mL,靜置1min,搖勻，室溫下放置15min,以0.5mL蒸懼水為空白，于490nm處測(cè)吸光度值。
[0051]實(shí)施例3
[0052](I)將自然風(fēng)干的虎奶菇進(jìn)行粉碎并過(guò)50目篩，得到虎奶菇干燥粉末；
[0053](2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末質(zhì)量40倍的蒸餾水，在100°C下用輸出功率為80W超聲波萃取3h，8000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心20min，取上清液；離心后的虎奶菇固體殘?jiān)偌尤肫滟|(zhì)量40倍的蒸餾水，重復(fù)上述超聲波萃取操作5次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A ;
[0054](3)利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在80°C下對(duì)虎奶菇多糖提取液A進(jìn)行濃縮4h，得到虎奶菇多糖提取液B ；
[0055](4)將虎奶菇多糖提取液B的pH值調(diào)節(jié)至4.5，加入虎奶菇多糖提取液B質(zhì)量2倍的木瓜蛋白酶，30°C下水解5h，沸水浴處理8min，得虎奶菇多糖提取液C ;所述木瓜蛋白酶的活性為100000U/g ；
[0056](5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其體積1/3的Sevag試劑(體積比為4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液)，充分抽提2h，8000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心20min，取上清液；上清液繼續(xù)用其1/3體積的Sevag試劑進(jìn)行脫蛋白，充分抽提2h，8000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心20min最終獲得的上清液為虎奶菇多糖提取液D ；
[0057](6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其體積5倍的乙醇(體積百分比濃度95%)，在0°C下醇析24h，8000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心lOmin，棄上清液并室溫?fù)]發(fā)干乙醇，得到多糖；再用多糖質(zhì)量5倍的蒸餾水進(jìn)行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E ；
[0058](7)利用超濾膜將虎奶菇多糖提取液E進(jìn)行超濾，收集分子量10000道爾頓以上的組分，再進(jìn)行Sephadex G-100于25°C下進(jìn)行柱層析得純化多糖，收集多糖組分，冷凍干燥，得到虎奶菇多糖。本實(shí)施例制備的虎奶菇多糖為淺褐色粉末，易吸濕，易溶于水，質(zhì)量含量為91 %，經(jīng)檢測(cè)符合下述指標(biāo):
[0059]1.重金屬指標(biāo):pb〈l.5ppm、As〈l.0ppm、Hg〈0.3ppm。
[0060]2.衛(wèi)生指標(biāo):細(xì)菌數(shù)〈1000個(gè)/g大腸桿菌、活螨不得檢出，霉菌數(shù)〈35個(gè)/g。
[0061]多糖含量的檢測(cè):
[0062]準(zhǔn)確稱(chēng)取虎奶菇多糖1mg于10mL燒杯中，讓其充分溶解，吸取多糖溶液0.5mL，加入5%苯酹1.0mL及濃硫酸3.0mL,靜置1min,搖勻，室溫下放置15min,以0.5mL蒸懼水為空白，于490nm處測(cè)吸光度值。
[0063]實(shí)施例4
[0064](I)將自然風(fēng)干的虎奶菇進(jìn)行粉碎并過(guò)120目篩，得到虎奶菇干燥粉末；
[0065](2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末質(zhì)量30倍的蒸餾水，在90°C下用輸出功率為50W超聲波萃取4h，8000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液；離心后的虎奶菇固體殘?jiān)偌尤肫滟|(zhì)量30倍的蒸餾水，重復(fù)上述超聲波萃取操作4次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A ;
[0066](3)利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在90°C下對(duì)虎奶菇多糖提取液A進(jìn)行濃縮3h，得到虎奶菇多糖提取液B ；
[0067](4)將虎奶菇多糖提取液B的pH值調(diào)節(jié)至3，加入虎奶菇多糖提取液B質(zhì)量1.5倍的木瓜蛋白酶，70°C下水解lh，沸水浴處理8min，得虎奶菇多糖提取液C ;所述木瓜蛋白酶的活性為90000U/g ；
[0068](5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其體積1/3的Sevag試劑(體積比為4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液)，充分抽提3h，12000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液；上清液繼續(xù)用其1/3體積的Sevag試劑進(jìn)行脫蛋白，充分抽提3h，12000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心5min最終獲得的上清液為虎奶菇多糖提取液D ；
[0069](6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其體積4倍的乙醇(體積百分比濃度95%)，在25°C下醇析5h，12000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心20min，棄上清液并室溫?fù)]發(fā)干乙醇，得到多糖；再用多糖質(zhì)量15倍的蒸餾水進(jìn)行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E ；
[0070](7)利用超濾膜將虎奶菇多糖提取液E進(jìn)行超濾，收集分子量10000道爾頓以上的組分，再進(jìn)行Sephadex G-100于25°C下進(jìn)行柱層析得純化多糖，收集多糖組分，冷凍干燥，得到虎奶菇多糖。本實(shí)施例制備的虎奶菇多糖為淺褐色粉末，易吸濕，易溶于水，質(zhì)量含量為91 %，經(jīng)檢測(cè)符合下述指標(biāo):
[0071]1.重金屬指標(biāo):pb<l.5ppm、As〈l.0ppm、Hg〈0.3ppm。
[0072]2.衛(wèi)生指標(biāo):細(xì)菌數(shù)〈1000個(gè)/g大腸桿菌、活螨不得檢出，霉菌數(shù)〈35個(gè)/g。
[0073]多糖含量的檢測(cè):
[0074]準(zhǔn)確稱(chēng)取虎奶菇多糖1mg于10mL燒杯中，讓其充分溶解，吸取多糖溶液0.5mL,加入5%苯酹1.0mL及濃硫酸3.0mL,靜置1min,搖勻，室溫下放置15min,以0.5mL蒸懼水為空白，于490nm處測(cè)吸光度值。
[0075]實(shí)施例5
[0076](I)將自然風(fēng)干的虎奶菇進(jìn)行粉碎并過(guò)80目篩，得到虎奶菇干燥粉末；
[0077](2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末質(zhì)量40倍的蒸餾水，在100°C下用輸出功率為10W超聲波萃取2h，12000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心15min，取上清液；離心后的虎奶菇固體殘?jiān)偌尤肫滟|(zhì)量40倍的蒸餾水，重復(fù)上述超聲波萃取操作4次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A ;
[0078](3)利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在90°C下對(duì)虎奶菇多糖提取液A進(jìn)行濃縮4h，得到虎奶菇多糖提取液B ；
[0079](4)將虎奶菇多糖提取液B的pH值調(diào)節(jié)至8，加入虎奶菇多糖提取液B質(zhì)量2倍的木瓜蛋白酶，60°C下水解4h，沸水浴處理8min，得虎奶菇多糖提取液C;所述木瓜蛋白酶的活性為80000U/g ；
[0080](5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其體積1/3的Sevag試劑(體積比為4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液)，充分抽提0.5h，9000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心15min，取上清液；上清液繼續(xù)用其1/3體積的Sevag試劑進(jìn)行脫蛋白，充分抽提0.5h，9000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心15min最終獲得的上清液為虎奶菇多糖提取液D ；
[0081](6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其體積4倍的乙醇(體積百分比濃度95%)，在15°C下醇析20h，9000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心15min，棄上清液并室溫?fù)]發(fā)干乙醇，得到多糖；再用多糖質(zhì)量12倍的蒸餾水進(jìn)行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E ；
[0082](7)利用超濾膜將虎奶菇多糖提取液E進(jìn)行超濾，收集分子量10000道爾頓以上的組分，再進(jìn)行Sephadex G-100于25°C下進(jìn)行柱層析得純化多糖，收集多糖組分，冷凍干燥，得到虎奶菇多糖。本實(shí)施例制備的虎奶菇多糖為淺褐色粉末，易吸濕，易溶于水，質(zhì)量含量為91 %，經(jīng)檢測(cè)符合下述指標(biāo):
[0083]1.重金屬指標(biāo):pb〈l.5ppm、As〈l.0ppm、Hg〈0.3ppm。
[0084]2.衛(wèi)生指標(biāo):細(xì)菌數(shù)〈1000個(gè)/g大腸桿菌、活螨不得檢出，霉菌數(shù)〈35個(gè)/g。
[0085]多糖含量的檢測(cè):
[0086]準(zhǔn)確稱(chēng)取虎奶菇多糖1mg于10mL燒杯中，讓其充分溶解，吸取多糖溶液0.5mL，加入5%苯酹1.0mL及濃硫酸3.0mL,靜置1min,搖勻，室溫下放置15min,以0.5mL蒸懼水為空白，于490nm處測(cè)吸光度值。
[0087]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種虎奶菇多糖的提取方法，其特征在于按照以下操作步驟: (1)將自然風(fēng)干的虎奶菇進(jìn)行粉碎并過(guò)篩，得到虎奶菇干燥粉末； (2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末質(zhì)量30?50倍的蒸餾水，在80?100°C下用輸出功率為50?100W超聲波萃取2?4h，離心5?20min，取上清液；離心后的虎奶菇固體殘?jiān)偌尤肫滟|(zhì)量30?50倍的蒸餾水，重復(fù)上述超聲波萃取操作3?5次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A ； (3)利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在80?100°C下對(duì)虎奶菇多糖提取液A進(jìn)行濃縮2?4h，得到虎奶菇多糖提取液B ； (4)將虎奶菇多糖提取液B的pH值調(diào)節(jié)至3?8，加入虎奶菇多糖提取液B質(zhì)量0.5?2倍的木瓜蛋白酶，30?70°C下水解I?5h，沸水浴處理5?lOmin，得虎奶菇多糖提取液C ;所述木瓜蛋白酶的活性為80000?100000U/g ； (5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其體積1/3的Sevag試劑，充分抽提0.5?3h，離心5?20min,取上清液；上清液繼續(xù)用其1/3體積的Sevag試劑進(jìn)行脫蛋白，充分抽提0.5?3h，離心5?20min最終獲得的上清液為虎奶菇多糖提取液D ； (6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其體積3?5倍的乙醇，在O?25°C下醇析2?24h，離心10?20min，棄上清液并室溫?fù)]發(fā)干乙醇，得到多糖；再用多糖質(zhì)量5?15倍的蒸餾水進(jìn)行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E ; (7)利用超濾膜將虎奶菇多糖提取液E進(jìn)行超濾，收集分子量10000道爾頓以上的組分，再進(jìn)行Sephadex G-100于25°C下進(jìn)行柱層析得純化多糖，收集多糖組分，冷凍干燥，得到虎奶菇多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:步驟(I)所述過(guò)篩是過(guò)50?120目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:步驟(4)所述pH值調(diào)節(jié)至4.5?7.2，所述木瓜蛋白酶的活性為80000U/g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:步驟(5)所述充分抽提的時(shí)間為0.5?Ih ;所述Sevag試劑為體積比為4:1的氯仿和正丁醇配制成的混合液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:步驟(6)所述乙醇是濃度為體積百分比95%的乙醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:步驟(2)、步驟(5)和步驟(6)所述離心的速度為8000?12000轉(zhuǎn)/分鐘。
7.一種由權(quán)利要求1?6任一項(xiàng)所述提取方法得到的虎奶菇多糖。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK104277135SQ201410490763
【公開(kāi)日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月23日
【發(fā)明者】巫光宏, 葉志偉, 涂玉佩, 詹福建, 張志鵬 申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)