專利名稱：一種復(fù)方茵陳蒿制劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開(kāi)發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種復(fù)方茵陳蒿制劑及其用途。本發(fā)明產(chǎn)品對(duì)D31 (鰻弧菌V. anugui llarum)、D32 (哈維氏弧菌V. harveyi)、D61 (溶藻膠弧菌V. alginolyticus)、D230 (嗜鹽弧菌Vibrio vulnificus)具有抑菌作用，可開(kāi)發(fā)相應(yīng)制劑用于防治水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中發(fā)生的弧菌病，本發(fā)明產(chǎn)品適合工業(yè)化生產(chǎn)。
背景技術(shù)：
近年來(lái)我國(guó)大力發(fā)展海水養(yǎng)殖業(yè)，但因養(yǎng)殖面積過(guò)速擴(kuò)展、養(yǎng)殖密度過(guò)高和管理不當(dāng)，養(yǎng)殖魚(yú)類疾病繁生，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。這其中由D31(鰻弧菌 V. anugui llarum)、D32 (哈維氏弧菌 V. harveyi)、D61(溶藻膠弧菌 V. alginolyticus)、 D230 (Vibrio vulnificus)引起的弧菌病是被公認(rèn)的魚(yú)類養(yǎng)殖過(guò)程中出現(xiàn)的最為嚴(yán)重的病害之一，也是限制該產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要性因素，此外弧菌還可以通過(guò)食物鏈引起食物中毒，危害食用者的身體健康。然而，目前我國(guó)對(duì)于水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的疾病防治主要以抗生素等化學(xué)藥物為主，但由于長(zhǎng)期濫用已經(jīng)造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染、病菌抗藥、人畜安全受到威脅等一系列問(wèn)題。相比較化學(xué)藥物，植物源抑菌藥物具有殺菌功效較強(qiáng)，毒性較低，不易產(chǎn)生抗藥性，以及成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，因此從植物中尋找抑菌活性物質(zhì)是保障魚(yú)類養(yǎng)殖業(yè)穩(wěn)步發(fā)展的一條有效途徑。但是令人遺憾的是近年來(lái)從事致魚(yú)病菌抑菌活性植物篩選工作卻與其優(yōu)點(diǎn)相背離，一味的追求強(qiáng)效殺菌活性，使得被篩選植物聚集到高毒高成本的一類植物中，這使得植物源殺菌劑的開(kāi)發(fā)普及停滯不前，因此探討開(kāi)發(fā)高效、低毒、價(jià)廉的植物源殺菌劑刻不容緩。茵陳蒿為屬菊科植物茵陳蒿Artemisia capillaries的莖葉。茵陳蒿煎劑對(duì)金黃色葡萄球菌有明顯的抑制作用。對(duì)痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、白喉?xiàng)U菌、牛型及人型結(jié)核桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、綠膿桿菌、枯草桿菌、腦膜炎雙球菌等有不同程度的抑制作用。茵陳蒿乙醇提取物對(duì)流感病毒有抑制作用。黃芩為唇形科植物黃.kutellaria baicalensis Georgi的根。有清熱燥濕，涼血安胎，解毒功效。主治溫?zé)岵　⑸虾粑栏腥尽⒎螣峥人?、濕熱黃膽、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎動(dòng)不安、高血壓、癰腫癤瘡等癥。黃芩的臨床應(yīng)用抗菌比黃連還好，而且不產(chǎn)生抗藥性。連翹葉為木犀科植物連翹R)rsythia suspense(Thunb. ) Vahl.的干燥葉。連翹通常以果實(shí)入藥，對(duì)多種革蘭陽(yáng)性及陰性細(xì)菌均有抑制作用.其濃縮煎劑在體外可抑制傷寒桿菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、白喉?xiàng)U菌及霍亂弧菌、葡萄球菌、鏈球菌等。對(duì)于連翹葉抗菌作用鮮見(jiàn)報(bào)道。大蒜精油為蒜Allium sativum L. (Garlic)的鱗莖經(jīng)水蒸氣蒸餾獲得的揮發(fā)油。 大蒜含揮發(fā)油約0.2%，油中主要成分為大蒜辣素，具有殺菌作用，是大蒜中所含的蒜氨酸受大蒜酶的作用水解產(chǎn)生。

發(fā)明內(nèi)容
1、一種復(fù)方茵陳蒿制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑茵陳蒿提取物2g_3g、黃芩提取物lg_2g、連翹葉提取物lg_2g、大蒜精油 0.OOlg-O. 002go2、權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方茵陳蒿制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟步驟(一)分別取茵陳蒿、黃芩和連翹葉各30g-40g，分別加入600mL-800mL乙醇，用搖床震蕩浸提Mh，用離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)?；步驟(二)將(一)中殘?jiān)謩e加入400mL-600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)?；步驟(三)將(二)中殘?jiān)謩e加入200mL-400mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)?，殘?jiān)鼦壢?，合并三次上清液，過(guò)濾，得濾液，將濾液進(jìn)行減壓濃縮，烘干， 得到茵陳蒿、黃芩和連翹葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜10g_20g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸餾時(shí)間1. 5h-2. 0h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權(quán)利要求1所述的重量配比制成復(fù)方茵陳蒿制劑。3、權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方茵陳蒿制劑的用途，其特征在于對(duì)鰻弧菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌、嗜鹽弧菌具有抑菌作用。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的“ ％，，是重量百分比。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所述的涉及一種復(fù)方茵陳蒿制劑及其用途包括以下實(shí)施例，下面的實(shí)施例可進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1 1、一種復(fù)方茵陳蒿制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑茵陳蒿提取物2g、黃芩提取物lg、連翹葉提取物lg、大蒜精油0. OOlg。2、權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方茵陳蒿制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟步驟(一)分別取茵陳蒿、黃芩和連翹葉各30g，分別加入600mL乙醇，用搖床震蕩浸提Mh，用離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)?；步驟(二)將(一)中殘?jiān)謩e加入400mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)徊襟E(三)將(二)中殘?jiān)謩e加入200mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)瑲堅(jiān)鼦壢?，合并三次上清液，過(guò)濾，得濾液，將濾液進(jìn)行減壓濃縮，烘干，得到茵陳蒿、黃芩和連翹葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜10g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸餾時(shí)間1.5h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權(quán)利要求1所述的重量配比制成復(fù)方茵陳蒿制劑。
3、權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方茵陳蒿制劑的用途，其特征在于對(duì)鰻弧菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌、嗜鹽弧菌具有抑菌作用。實(shí)施例2 1、一種復(fù)方茵陳蒿制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑茵陳蒿提取物3g、黃芩提取物2g、連翹葉提取物2g、大蒜精油0. 002g。2、權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方茵陳蒿制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟步驟(一)分別取茵陳蒿、黃芩和連翹葉各40g，分別加入SOOmL乙醇，用搖床震蕩浸提Mh，用離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)?；步驟(二)將(一)中殘?jiān)謩e加入600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)?；步驟(三)將(二)中殘?jiān)謩e加入400mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)?，殘?jiān)鼦壢?，合并三次上清液，過(guò)濾，得濾液，將濾液進(jìn)行減壓濃縮，烘干，得到茵陳蒿、黃芩和連翹葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜20g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸餾時(shí)間2. 0h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權(quán)利要求1所述的重量配比制成復(fù)方茵陳蒿制劑。3、權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方茵陳蒿制劑的用途，其特征在于對(duì)鰻弧菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌、嗜鹽弧菌具有抑菌作用。藥理實(shí)驗(yàn)復(fù)方茵陳蒿制劑的抑菌作用實(shí)驗(yàn)1材料及方法1. 1供試材料1. 1. 1供試菌株本實(shí)驗(yàn)所使用的四致魚(yú)病菌均來(lái)自山東大學(xué)威海分校微生物實(shí)驗(yàn)室，分別是D31 (鰻弧菌V. anugui llarum)、D32 (哈維氏弧菌V. harveyi)、D61 (溶藻膠弧菌 V. alginolyticus)、D230 (嗜鹽弧菌Vibriovulnif icus)。試驗(yàn)中病菌用2216E固體和液體
培養(yǎng)基培養(yǎng)。2216E培養(yǎng)基蛋白胨5g，酵母膏l(xiāng)g，磷酸高鐵0. Olg，陳海水IOOOmL,煮沸的5% 氫氧化納溶液調(diào)PH值7. 6-7. 8，瓊脂15-20g (液體培養(yǎng)基不加)。1. 1.2試驗(yàn)儀器超凈工作臺(tái)、光照培養(yǎng)箱、電子游標(biāo)卡尺、離心機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、烘箱、中藥粉碎機(jī)、 高壓滅菌鍋等。1.1. 3供試植物樣品本實(shí)驗(yàn)選取植物為茵陳蒿、黃芩、連翹葉、大蒜。1. 2實(shí)驗(yàn)方法1. 2. 1植物提取物的制備及復(fù)方茵陳蒿制劑的配制分別取茵陳蒿、黃芩、連翹葉各40g，分別加入SOOmL mL乙醇，用搖床震蕩浸提 Mh，用離心機(jī)離心得上清液(1)和殘?jiān)?1)；將殘?jiān)?1)分別加入600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機(jī)離心得上清液⑵和殘?jiān)麿)；將殘?jiān)品謩e加入400mL乙醇，震蕩浸提 12h，離心機(jī)離心得上清液(3)和殘?jiān)?3)，殘?jiān)鼦壢?，合并三次上清液，過(guò)濾，得濾液，將濾液進(jìn)行減壓濃縮，烘干，得到茵陳蒿、黃芩、連翹葉提取物；取搗碎的大蒜20g，加入IOOOmL 圓底燒瓶中，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸餾時(shí)間2. 0h，靜置，得大蒜精油；取茵陳蒿提取物3g、黃芩提取物2g、連翹葉提取物2g、大蒜精油0. 002g配制復(fù)方茵陳蒿制劑。以旋蒸回收乙醇做為溶劑溶解復(fù)方茵陳蒿制劑，使生藥含量為lg/mL，密封后 0 4°C冰箱保存待用。1. 2. 2復(fù)方茵陳蒿制劑對(duì)致魚(yú)病弧菌抑茵活性的測(cè)定1. 2. 2. 1菌懸液的制備菌株經(jīng)活化后轉(zhuǎn)接于固體平板于培養(yǎng)24h后，挑起適量菌苔接種于液體培養(yǎng)基，而后再于振蕩培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)Mh，各錐形瓶均渾濁后涂布平板計(jì)數(shù)并稀釋至 4X108CFU/mL 備用。1. 2. 2. 2復(fù)方茵陳蒿制劑對(duì)致魚(yú)病弧菌抑菌活性試驗(yàn)采用平板擴(kuò)散法，制備直徑為IOcm的2216E固體培養(yǎng)基平板，要求每個(gè)平板厚度 4mm，加100 μ 1各菌懸液涂布均勻后放置30min，平板底部畫(huà)線分三區(qū)，于每個(gè)區(qū)中央打孔器各打一孔，打孔器直徑為5mm ；試驗(yàn)以多菌靈為陽(yáng)性對(duì)照，多菌靈濃度為lmg/mL，以旋蒸回收乙醇做為溶劑對(duì)照，每種菌做三個(gè)平行，于各個(gè)孔滴加復(fù)方茵陳蒿制劑30 μ L，結(jié)束后放置30min。放置完畢后將平板置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)Mh，游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑。抑菌效果的判定參照參考文獻(xiàn)，抑菌圈直徑> 20mm為極敏，以“***”表示； 15-19mm為高敏，以“**”表示；10-14為中敏，以“*”表示；10以下為低敏，以“_”表示。2 結(jié)果2. 1復(fù)方茵陳蒿制劑對(duì)致魚(yú)病弧菌的抑制作用見(jiàn)表1。表1復(fù)方茵陳蒿制劑對(duì)致魚(yú)病弧菌的抑制活性
供試植物
D31
VanuguiUarum
D32 Vharveyi
D230 Vibrio vulnificus
A
B
A
B
D61
V.algmolyticus
A
溶劑對(duì)照5.00 -5.005.005.00-多菌靈26.5522.4925.97***21.32***復(fù)方鹵陳蒿制劑22.0121.5823.1118.86**
B 注“A”表示抑菌圈直徑/mm ；“B”表示相對(duì)敏感性。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方茵陳蒿制劑，其特征在于是由下述重量配比制成的制劑茵陳蒿提取物2g-3g、黃芩提取物lg_2g、連翹葉提取物lg_2g、大蒜精油 0.OOlg-O. 002g。
2.權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方茵陳蒿制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟 步驟(一)分別取茵陳蒿、黃芩和連翹葉各30g-40g，分別加入600mL-800mL乙醇，用搖床震蕩浸提Mh，用離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)?；步驟(二)將(一)中殘?jiān)謩e加入400mL-600mL乙醇，用搖床震蕩浸提18h，離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)徊襟E(三)將(二)中殘?jiān)謩e加入200mL-400mL乙醇，震蕩浸提12h，離心機(jī)離心得上清液和殘?jiān)瑲堅(jiān)鼦壢?，合并三次上清液，過(guò)濾，得濾液，將濾液進(jìn)行減壓濃縮，烘干，得到茵陳蒿、黃芩和連翹葉提取物；步驟(四)取搗碎的大蒜10g_20g，加入IOOOmL圓底燒瓶中，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，蒸餾時(shí)間1. 5h-2. 0h，靜置，得大蒜精油；步驟(五)按權(quán)利要求1所述的重量配比制成復(fù)方茵陳蒿制劑。
3.權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方茵陳蒿制劑的用途，其特征在于對(duì)鰻弧菌、哈維氏弧菌、 溶藻膠弧菌和嗜鹽弧菌具有抑菌作用。
全文摘要
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開(kāi)發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種復(fù)方茵陳蒿制劑及其用途。分別取茵陳蒿、黃芩和連翹葉分別加入乙醇，用搖床震蕩浸提，用離心機(jī)離心得上清液；重復(fù)提取2次，合并三次上清液，過(guò)濾，將濾液進(jìn)行減壓濃縮，烘干，得到茵陳蒿、黃芩和連翹葉提取物；取搗碎的大蒜，加入圓底燒瓶中，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，得大蒜精油；取茵陳蒿提取物、黃芩提取物、連翹葉提取物和大蒜精油制成復(fù)方茵陳蒿制劑。本發(fā)明產(chǎn)品對(duì)鰻弧菌、哈維氏弧菌、溶藻膠弧菌和嗜鹽弧菌具有抑菌作用，可開(kāi)發(fā)相應(yīng)制劑用于防治水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中發(fā)生的弧菌病，本發(fā)明產(chǎn)品適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K36/8962GK102266469SQ20111008205
公開(kāi)日2011年12月7日 申請(qǐng)日期2011年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月28日
發(fā)明者張崇禧, 潘漫, 盛園園, 程傲星, 邢翔, 鄭友蘭 申請(qǐng)人:山東大學(xué)威海分校