乙醇沉淀法從肝素副產(chǎn)物制備舒洛地特原料的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從肝素副產(chǎn)物分離制備舒洛地特原料的方法，將肝素副產(chǎn)物溶解，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液至高pH值，以適量乙醇做低溫沉淀，去沉淀后得到硫酸多糖溶液；以鹽酸調(diào)該硫酸多糖溶液至低pH值，以適量乙醇做低溫沉淀，去沉淀后得到硫酸多糖溶液；再以氫氧化鈉調(diào)節(jié)該溶液至pH中性，以適量乙醇做室溫沉淀，取沉淀烘干得到制得的舒洛地特原料。本發(fā)明的工藝簡單、成本低、容易放大、適于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】乙醇沉淀法從肝素副產(chǎn)物制備舒洛地特原料的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種制備舒洛地特原料的方法，尤其涉及一種從肝素副產(chǎn)物分離舒洛地特原料的方法。
【背景技術】
[0002]舒洛地特Sulodexide，商品名為偉素VESSEL DUE F，化學名稱為葡糖醛酸基葡糖胺聚糖硫酸鹽。由意大利Alfa Wassermann公司原創(chuàng)生產(chǎn)，1974年在意大利首先上市,2003年進入中國市場。適應癥為有血栓形成危險的血管疾病，是一種可口服吸收的抗凝血藥。近年顯示其對糖尿病腎病的治療有效果。
[0003]舒洛地特由豬腸粘膜提取，是高度純化的糖胺聚糖，由重復的二糖結(jié)構單元組成帶有負電荷的長鏈大分子，二糖單元包含兩個改構糖，即乙酰半乳糖胺或乙酰葡糖胺及糖醛酸，如葡糖醛酸或艾杜糖醛酸。瓊脂凝膠電泳法測得含有80%的快速移動肝素(fast moving heparin, FMH)(基于電泳遷移率)即低分子肝素(1wmolecularweightheparin, LMWH)和20%的硫酸皮膚素(dermatan sulfate, DS)及少量慢速移動肝素(slowmoving heparin, SMH)(不得大于2%)。其中的LMWH部分與未分級肝素一樣含有二糖聚合結(jié)構，但硫酸化程度較低，多糖鏈的長度較短。未降解DS是由許多不同二糖組成的多糖，平均相對分子質(zhì)量25000Da。
[0004]肝素生產(chǎn) 過程會產(chǎn)生大量副產(chǎn)物，其中含有硫酸軟骨素(chondroitin sulfate,CS)、硫酸皮膚素、快移動肝素、慢移動肝素等，是分離制備舒洛地特原料的良好的材料。
[0005]專利“一種從肝素副產(chǎn)物分離舒洛地特原料的方法(申請?zhí)?01210064002.8)”給出了一種從肝素副產(chǎn)物分離舒洛地特原料的方法，采用醋酸鉀沉淀、斑氏試劑沉淀、乙醇沉淀、陰離子交換樹脂處理等步驟，從肝素副產(chǎn)物中分離出舒洛地特原料。
[0006]本專利提供另一種從肝素副產(chǎn)物分離舒洛地特原料的方法，分別采用高pH、低pH、中pH條件下乙醇沉淀法將不同的無效成分分離除去，從而簡單快速地從肝素副產(chǎn)物中分離出舒洛地特原料。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種從肝素副產(chǎn)物分離舒洛地特原料的方法。
[0008]在生產(chǎn)肝素的過程中產(chǎn)生大量副產(chǎn)物，其中主要組成是硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、快移動肝素、慢移動肝素等。本發(fā)明中建立了一種新的分離純化工藝，從肝素副產(chǎn)物分離出舒洛地特原料，本發(fā)明包括以下步驟:
(I)將肝素副產(chǎn)物溶解為5-15% (m/m)的溶液，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至10.0-11.5，加乙醇至質(zhì)量濃度為29-33%，在2-8°C沉淀1-2小時。離心收集上液得到清除慢肝素后的硫酸多糖溶液。
[0009](2)向經(jīng)過步驟(1)純化的硫酸多糖溶液中加水，使乙醇濃度為24%，以鹽酸調(diào)節(jié)pH至1.5-2.5，加乙醇至質(zhì)量濃度為38-42%，在2-8°C沉淀1_2小時。離心收集上液得到硫酸皮膚素減量后的硫酸多糖溶液。
[0010](3)向步驟⑵得到的溶液中加水，使乙醇濃度為36%，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至
5.5-8.5，加固體NaCl至質(zhì)量濃度為2%，再加乙醇至質(zhì)量濃度為40_50%，8_10°C沉淀過夜。轉(zhuǎn)移走上清，得沉淀。
[0011](4)步驟(3)得到的沉淀以60_75°C烘干，即為舒洛地特藥物原料。
[0012]步驟(1)所述的肝素副產(chǎn)物溶液濃度優(yōu)選為8%_12%，進一步優(yōu)選為10%，溶液pH優(yōu)選為11.0，沉淀時乙醇濃度優(yōu)選為31% ;步驟(2)溶液pH優(yōu)選為2.0，沉淀時乙醇濃度優(yōu)選為40%、(3)溶液pH優(yōu)選為7.0，沉淀時乙醇濃度優(yōu)選為45%。步驟(1)、(2)、(3)使用乙醇做有機溶劑沉淀，但同理也可使用甲醇、丙酮做有機溶劑沉淀，只需將參數(shù)做微調(diào)即可。
[0013]本發(fā)明所述制備方法，具有成本低廉、工藝簡單、容易放大等特點。用本發(fā)明所制得的舒洛地特藥物原料用瓊脂糖電泳檢測發(fā)現(xiàn)其組成為DS 20-30%、快肝素70-80%，符合舒洛地特藥物組分要求。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為原料、第一次沉淀后產(chǎn)物、第二次沉淀后產(chǎn)物、第三次沉淀后產(chǎn)物(終產(chǎn)物)瓊脂糖凝膠電泳圖譜。
【具體實施方式】
[0015]下面結(jié)合實 例對本發(fā)明所述內(nèi)容作進一步闡述。
[0016]實施例一
將肝素副產(chǎn)物(含CS5%、DS50%、快肝素25%、慢肝素20%，效價41usp u/mg,比旋+15° )溶解為10% (m/m)的溶液，以6M氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至11.0，加乙醇至質(zhì)量濃度為31%，在2_8°C沉淀2小時。4000rpm離心30min，收集上液得到清除慢肝素后的硫酸多糖溶液。
[0017]向得到的硫酸多糖溶液中加水，使乙醇濃度為24%，以6M鹽酸調(diào)節(jié)pH至2.0，加乙醇至質(zhì)量濃度為40%，在2-8°C沉淀1-2小時。離心收集上液得到硫酸皮膚素減量后的硫酸多糖溶液。
[0018]向得到的溶液中加水，使乙醇濃度為36%，以6M氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.0，加固體NaCl至質(zhì)量濃度為2%，再加乙醇至質(zhì)量濃度為50%，8-10°C沉淀過夜。移走上清，得沉淀。
[0019]沉淀在烘箱中以70°C烘干，即為舒洛地特藥物原料(DS20%,快肝素80%，效價69usp u/mg,比旋+35° )。
[0020]實施例二
取實施例一的原料、第一次沉淀后產(chǎn)物、第二次沉淀后產(chǎn)物、第三次沉淀后產(chǎn)物(終產(chǎn)物)等做瓊脂糖凝膠電泳分析，方法參照專利“一種玻載電泳法分析粘多糖的方法200910040788.8”。結(jié)果如圖1所示，M表示肝素副產(chǎn)物原料，原料中含有CS、DS、快肝素、慢肝素，經(jīng)過第一次沉淀去除了慢肝素，經(jīng)過第二次沉淀，將DS含量降低，經(jīng)過第三次沉淀去除CS，得到最終產(chǎn)物:DS 20-30%、快肝素70-80%。
【權利要求】
1.一種從肝素副產(chǎn)物分離制備舒洛地特原料的方法，其特征包括以下步驟: (1)將肝素副產(chǎn)物溶解為質(zhì)量濃度為5-15%的溶液，以氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至10.0-11.5，加乙醇至質(zhì)量濃度為29-33%，在2-8°C沉淀1_2小時，離心收集上液得到清除慢肝素后的硫酸多糖溶液； (2)向經(jīng)過步驟(1)純化的硫酸多糖溶液中加純化水，使乙醇濃度降為24%，以鹽酸調(diào)節(jié)pH至1.5-2.5，補加乙醇至質(zhì)量濃度為38-42%，在2-8°C沉淀1_2小時，離心收集上液得到硫酸皮膚素減量后的硫酸多糖溶液； (3)向步驟⑵得到的溶液中加純化水，使乙醇濃度為36%，以氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5.5-8.5，加固體NaCl至質(zhì)量濃度為2%，再加乙醇至質(zhì)量濃度為40_50%，室溫沉淀過夜，轉(zhuǎn)移走上清，得沉淀； (4)步驟(3)得到的沉淀以60-75°C烘干，即為舒洛地特藥物原料。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(1)中所述肝素副產(chǎn)物溶解為8-12%質(zhì)量分數(shù)的溶液，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至11.0，沉淀時體系中乙醇質(zhì)量濃度為40%。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(2)所述以鹽酸調(diào)節(jié)pH至2.0，補加乙醇至質(zhì)量濃度為40%。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(3)所述以氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.0，加乙醇至質(zhì)量濃度為45%。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(1)、(2)、(3)分別在堿性、酸性、中性環(huán)境執(zhí)行乙醇沉淀。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(1)、(2)、(3)使用甲醇或者丙酮做有機溶劑沉淀。
【文檔編號】C08B37/00GK104017102SQ201410274835
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月19日 優(yōu)先權日:2014年6月19日
【發(fā)明者】馬小來, 李鋰, 張錦, 黃洪 申請人:深圳市海普瑞藥業(yè)股份有限公司