小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉的純化方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉的純化方法，其是采用改進的馬丁法提取小麥籽粒面粉中的淀粉，在此基礎(chǔ)上用不同的方法處理淀粉，最后提取出高純度的直鏈淀粉和支鏈淀粉。利用本發(fā)明方法能夠快速從小麥籽粒中提取出高純度的直鏈淀粉和支鏈淀粉，并且檢測提取物的純度。本方法制備出的小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品可以用于比色法測定小麥淀粉的含量及組成，與目前常用的馬鈴薯來源標準品相比，大大提高小麥淀粉組成分析的準確性，在小麥淀粉品質(zhì)研究領(lǐng)域具有很好的應(yīng)用前景。
【專利說明】小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉的純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物化學領(lǐng)域，具體地說，涉及一種小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉的純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002]籽粒淀粉是小麥籽粒最主要的組分，占籽粒重量的65% _70%。根據(jù)葡萄糖分子之間的連接方式不同小麥淀粉可分為直鏈淀粉和支鏈淀粉，直鏈淀粉(IO3-1O4Da)與支鏈淀粉(IO5-1O6Da)獨立存在，分別占淀粉總含量的22% -26%和74% -78%。直鏈淀粉和支鏈淀粉具有不同的理化特性，直鏈淀粉吸水能力較弱，而支鏈淀粉吸水能力較強；直鏈淀粉含量低的淀粉形成的凝膠強度小，回生老化慢，加工的食品質(zhì)地較軟、富有彈性且保質(zhì)期長，直鏈淀粉含量高的淀粉則與之相反。籽粒淀粉含量和組成影響小麥的加工品質(zhì)和最終加工用途，對小麥淀粉含量和組成進行準確測量是小麥品質(zhì)研究的重要環(huán)節(jié)。
[0003]淀粉含量及組成的測定方法包括物理方法、化學方法和生物化學方法等。比色法具有簡單快速、重復性高的特點，因而在實際操作中受到更多研究者的青睞。比色法的原理是基于淀粉與碘的顏色反應(yīng)，可以分為單波長法、雙波長法和多波長法。通過比色法測定淀粉含量及組成，需要制作高可靠性和高相關(guān)性的標準曲線。已有一些研究發(fā)現(xiàn)，在測定不同物種的淀粉含量時，需要利用從相應(yīng)的物種中提取出直鏈淀粉和支鏈淀粉制作標準曲線，利用單一物種來源的標準品進行不同物種淀粉含量測定會造成較大誤差。目前尚無商品化的小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品，前期對小麥淀粉含量及組成的研究大都采用商品化的馬鈴薯來源直鏈淀粉和支鏈淀粉替代。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉的純化方法，以獲得高純度的直鏈淀粉和支鏈淀粉，從而可以用于小麥籽粒淀粉的比色法測定。
[0005]基于上述目的，本發(fā)明參考并改進已有的馬鈴薯和玉米淀粉研究的一些方法和技術(shù)，用不同品種的小麥籽粒作為材料，提取了這些材料中的直鏈淀粉和支鏈淀粉并檢驗了提取物的純度。通過兩種不同的方法處理，使淀粉懸浮液分層，分層后的上清液中分別含有直鏈淀粉或支鏈淀粉，而其他雜質(zhì)則形成沉淀。此外，在后續(xù)的純化過程中，增加了額外的純化步驟和純化次數(shù)，最大限度地去除了其他雜質(zhì)，提高了直鏈淀粉和支鏈淀粉的純度。
[0006] 根據(jù)不同的原理，之前報道的直鏈淀粉和支鏈淀粉純化方法包括溫水抽提法、配合劑分離法、鹽析法、色譜法等?？傮w來說，這些方法在操作性、產(chǎn)量純度、產(chǎn)量方面具有各自特點。但是，單獨利用上述方法，難以同時獲得高純度的直鏈淀粉和支鏈淀粉，或存在產(chǎn)量過低的問題。本發(fā)明結(jié)合并改進不同方法，利用不同品種的小麥籽粒作為原料，從中提取出高純度的直鏈淀粉和支鏈淀粉，通過改進的層析方法對其進行純度檢驗，并與商品化的馬鈴薯來源標準品進行比較分析。檢驗結(jié)果證明，利用本方法制備的小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉具有非常高的純度。此外，吸收光譜顯示不同小麥來源的直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品的性質(zhì)存在高度相似性，而與馬鈴薯來源的標準品存在巨大差異。
[0007]為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉的純化方法，包括以下步驟:
[0008]I)小麥籽粒淀粉的提取
[0009]將一定量的小麥籽粒用帶過濾篩網(wǎng)的磨粉機打磨成粉并去除麩皮，稱取50_200g面粉，加入面粉重量50-60%的水在和面機^OOW)中攪拌30min-45min，攪拌結(jié)束后，將面團轉(zhuǎn)入干凈的容器中，于室溫靜置30min-45min，用4-6層紗布將靜置后的面團包裹，將紗布與面團置于燒杯中，分三次加入面團重量2-3倍的水揉洗面團，洗出的乳狀液即為淀粉粗提液；將粗提液轉(zhuǎn)入離心管中，3500-4000g離心5-10min，棄上清，并移除沉淀上方的黃色膠狀層，收集管底的白色沉淀即為小麥籽粒淀粉顆粒。
[0010]2)小麥直鏈淀粉的提取
[0011]稱取步驟I)中提取的淀粉顆粒10_20g配制成2-4w/V%的淀粉液，在磁力攪拌器上持續(xù)攪拌淀粉液并加熱至65°C 土1°C，然后轉(zhuǎn)入65°C 土1°C水浴鍋中靜置分層l_2h ;然后收集上層液體，轉(zhuǎn)入離心管中3000-4000g離心15-20min，收集上清液即為小麥直鏈淀粉粗提取液；用濾紙過濾直鏈淀粉粗提取液，向濾液中添加濾液1/3體積的丁醇，攪拌l_2h，室溫靜置過夜后3000-4000g離心15-20min收集沉淀；將丁醇和水按1:3的體積比加入沉淀中并攪拌l_2h，室溫靜置4-6h后3000-4000g離心15_20min收集沉淀，用無水乙醇漂洗沉淀3-4次，冷凍真空干燥沉淀，研磨成粉，于4°C保存。
[0012]3)小麥支鏈淀 粉的提取
[0013]稱取步驟I)中提取的淀粉顆粒10_20g配制成2-4w/V%的淀粉液，在磁力攪拌器上攪拌并煮沸淀粉液30-45min，當?shù)矸垡簻囟冉抵?0_55°C時，加入磷酸緩沖液將淀粉液pH值調(diào)至6.3 ;然后將淀粉液放入滅菌鍋中121°C蒸煮2-3h，再轉(zhuǎn)入沸水浴中攪拌l_2h，加入淀粉液1/3體積的丁醇，在磁力攪拌器上50-55°C攪拌30-45min，轉(zhuǎn)入泡沫盒中靜置過夜使直鏈淀粉和其他雜質(zhì)自然緩慢沉淀，然后轉(zhuǎn)入離心管中8000-8700g離心20-30min ;離心后溶液分為三層，收集中間層即為支鏈淀粉粗提取液；向支鏈淀粉粗提液中加入粗提液1/5體積的丁醇，沉淀殘留的直鏈淀粉，攪拌30-60min后8000_8700g離心20_30min，收集上清液；重復丁醇沉淀直鏈淀粉的步驟，直至離心后無沉淀產(chǎn)生，然后向粗提液中加入等體積的丁醇，攪拌30-60min后8000_8700g離心20_30min，向粗提液中加入2倍體積的甲醇，搖勻，8000-8700g離心10-15min收集沉淀；然后用無水乙醇漂洗沉淀3_4次，冷凍真空干燥沉淀，研磨成粉，于4°C保存。
[0014]本發(fā)明還提供根據(jù)上述方法制備的小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品。
[0015]本發(fā)明進一步提供所述小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品在小麥淀粉的含量及組成測定中的應(yīng)用。
[0016]優(yōu)選地，采用比色法測定小麥淀粉的含量及組成。
[0017]基于直鏈淀粉和支鏈淀粉與碘結(jié)合顯色反應(yīng)以及凝膠層析方法的原理，對本發(fā)明提取的直鏈淀粉和支鏈淀粉純度進行了檢測。前期研究結(jié)果顯示，高純度的直鏈淀粉與碘結(jié)合呈現(xiàn)藍色，支鏈淀粉與碘結(jié)合呈現(xiàn)紫紅色。本發(fā)明提取的直鏈淀粉與支鏈淀粉與碘結(jié)合顯色結(jié)果分別如圖1和圖2所示，顯色結(jié)果均符合前期的報道。通過凝膠層析進一步分析了本發(fā)明提取的直鏈淀粉和支鏈淀粉的純度，結(jié)果分別如圖3和圖4所示。兩者的洗脫曲線均為單峰，說明樣品具有非常高的純度。此外，直鏈淀粉和支鏈淀粉的洗脫體積存在明顯的差異，說明提取的樣品確實是單一物質(zhì)，且兩者的洗脫先后順序也符合凝膠層析的原理。
[0018]為了檢測本發(fā)明提取的小麥來源直鏈淀粉和支鏈淀粉在比色法應(yīng)用中的吸光特性，比較了不同品種小麥來源的直鏈淀粉和支鏈淀粉與碘結(jié)合后的吸收光譜，并進一步與商品化的馬鈴薯來源直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品進行了比較。直鏈淀粉吸收光譜(圖5)的對比分析顯示，不同小麥來源的直鏈淀粉吸收曲線高度相似，而與馬鈴薯來源的直鏈淀粉相比具有明顯的差異。支鏈淀粉吸收光譜(圖6)的對比分析顯示，不同小麥來源的支鏈淀粉吸收曲線也高度相似，而與馬鈴薯來源的直鏈淀粉吸收光譜相比較，兩者在最大吸收值特征上存在差異。
[0019]結(jié)合所有的實驗數(shù)據(jù)分析，本發(fā)明提取的直鏈淀粉和支鏈淀粉具有非常高的純度，可以用于比色法測定小麥淀粉含量及組成。此外，從小麥與馬鈴薯直鏈淀粉、支鏈淀粉吸收光譜對比結(jié)果分析，用馬鈴薯來源的直鏈淀粉和支鏈淀粉作為標準品來測定小麥淀粉可造成較大誤差。因此在利用比色法測定小麥的淀粉含量和組成時，應(yīng)該使用小麥來源的直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品。綜上所述，利用本發(fā)明提供的方法，能夠制備高純度的直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品，從而有利于大大提聞小麥桿粒淀粉研究的精確性和效率。此外，本發(fā)明提供的方法也適用于其他麥類作物直鏈淀粉和直鏈淀粉的制備和檢測。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1為本發(fā)明實施例2中良麥4號來源直鏈淀粉與碘結(jié)合顯色反應(yīng)結(jié)果。
[0021]圖2為本發(fā)明實施例2中良麥4號來源支鏈淀粉與碘結(jié)合顯色反應(yīng)結(jié)果。
[0022]圖3為本發(fā)明實施 例2中良麥4號來源直鏈淀粉凝膠層析洗脫曲線。
[0023]圖4為本發(fā)明實施例2中良麥4號來源支鏈淀粉凝膠層析洗脫曲線。
[0024]圖5為本發(fā)明實施例3中不同小麥來源的直鏈淀粉與商品化的馬鈴薯來源直鏈淀粉吸收光譜對比圖。
[0025]圖6為本發(fā)明實施例3中不同小麥來源的直鏈淀粉與商品化的馬鈴薯來源支鏈淀粉吸收光譜對比圖。
【具體實施方式】
[0026]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0027]以下實施例中涉及的普通小麥Bobwhitel (PI520554)、Bobwhite2 (PI614034)從USDA-ARS(http://www.ars-grin.gov)獲得；良麥 4 號、綿麥 37、蜀麥 375、蜀麥 482、鄭麥9023，均從四川農(nóng)業(yè)大學小麥研究所獲得。馬鈴薯來源標準品購自于Sigma公司。
[0028]各試劑配方如下:
[0029]磷酸緩沖液配方為:40g/LNaH2PO4,10g/L Na2HPO4 ；
[0030]碘試劑配方為:2g/LI2, 20g/L KI ；
[0031]層析洗脫液配方為:0.02%的NaCl溶液，pH為3.6 ;
[0032]凝膠:凝膠選用Bio-rad公司的PlOOgel。
[0033]實施例1普通小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉的純化[0034]1、小麥籽粒淀粉的提取
[0035]根據(jù)改進的馬丁法提取小麥籽粒面粉中的淀粉。將一定量的小麥籽粒用帶過濾篩網(wǎng)的磨粉機打磨成粉并去除麩皮。稱取100g的面粉，將面粉和水按2:1的重量比放入和面機(600W)中攪拌30min。攪拌結(jié)束后，將面團轉(zhuǎn)入干凈的容器中，于室溫靜置30min。用6層紗布將靜置后的面團包裹，將紗布與面團置于大燒杯中，分三次加入600mL水揉洗面團，洗出的乳狀液即為淀粉粗提取液。將淀粉液轉(zhuǎn)入離心管中，3500 Xg離心5min，倒去上清液。最大限度地刮除沉淀最上方的黃色膠狀層，管底的白色沉淀即為淀粉顆粒。
[0036]2、小麥直鏈淀粉的提取
[0037]稱取步驟I中提取的小麥淀粉12g配制成4% (w/v)的淀粉液。在磁力攪拌器上持續(xù)攪拌淀粉液并加熱直至65°C，然后轉(zhuǎn)入65°C水浴鍋中靜置lh。緩慢倒出并收集上層液體，轉(zhuǎn)入離心管中3000 Xg離心15min，棄沉淀，獲得的上清液即為直鏈淀粉粗提取液。用濾紙過濾直鏈淀粉粗提取液并測量回收的溶液體積。向濾液中添加1/3體積的丁醇，攪拌lh，室溫靜置過夜后3000Xg離心15min收集沉淀。將丁醇和水按1:3 (v/v)的比例加入沉淀中并攪拌lh，室溫靜置6h后3000 Xg離心15min收集沉淀。用無水乙醇漂洗沉淀4次，冷凍真空干燥沉淀，用干凈的研缽和研磨棒將沉淀研磨成粉，于4°C保存。
[0038]3、小麥支鏈淀粉的提取
[0039]稱取步驟I中提取的小麥淀粉IOg配制成2% (w/v)的淀粉液。在磁力攪拌器上攪拌并煮沸淀粉液30min。當?shù)矸垡簻囟冉抵?5°C時，加入磷酸緩沖液將淀粉液pH值調(diào)至
6.3。將淀粉液放入滅菌鍋中121°C蒸煮2h，再轉(zhuǎn)入沸水浴中攪拌lh。加入淀粉液1/3體積量的丁醇，在磁力攪拌器上55°C攪拌30min，轉(zhuǎn)入泡沫盒中靜置過夜，然后轉(zhuǎn)入離心管中8700Xg離心30min。離心后的溶液分為三層，上層為丁醇，最底層為直鏈淀粉和其他雜質(zhì)沉淀，中間層即為支鏈淀粉粗提取液。收集支鏈淀粉粗提液，加入粗提液1/5體積量的丁醇沉淀殘留的直鏈淀粉，攪拌30min, 8700 X g離心30min收集上清液。重復丁醇沉淀直鏈淀粉步驟，直至離心后管底無肉眼可見的沉淀，然后向粗提液中加入等體積的丁醇，攪拌30min，8700 X g離心30min。向粗提液中加入2倍體積量的甲醇，用手搖勻，8700 X g離心15min收集沉淀。無水乙醇漂洗沉淀4次，冷凍真空干燥沉淀，用干凈的研缽和研磨棒將沉淀研磨成粉，于4°C保存。
[0040]實施例2小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉純度的檢測
[0041]為保證本發(fā)明提取的直鏈淀粉和支鏈淀粉可以用于比色法精確測定小麥淀粉的含量和組成，有必要對兩者的純度進行檢測。利用碘結(jié)合顯色反應(yīng)及凝膠層析法，檢測了實施例I中提取的直鏈淀粉和支鏈淀粉的純度。
[0042]分別用ImL無水乙醇分散IOOmg實施例1中提取的直鏈淀粉和支鏈淀粉，加入9mLNaOH溶液(lmol/L)后于沸水浴中加熱15min，期間不時搖動直至溶液變澄清。向煮沸后的溶液中加入60mL雙蒸水，用0.5M的HCl將pH調(diào)至3.6后定容至IOOmL,此溶液作為后續(xù)分析的工作液。分別取1.5mL上述直鏈淀粉或支鏈淀粉工作液，加入20 μ I碘試劑進行顯色反應(yīng)。直鏈淀粉顯色結(jié)果如圖1所示，直鏈淀粉與碘結(jié)合呈現(xiàn)藍色；支鏈淀粉顯色結(jié)果如圖2所示，支鏈淀粉與碘結(jié)合呈現(xiàn)紫紅色。另各取ImL直鏈淀粉或支鏈淀粉工作液加入預(yù)先處理好的凝膠層析柱，并連接入Bio-Gel層析系統(tǒng)進行層析，層析洗脫液為NaCl溶液(0.02%v/v,ρΗ3.6),流速為9m L/h。每個收集管收集2ml洗出液,層析結(jié)束后分別向收集管中加入20 μ I碘試劑，混勻，靜置30min，在630nm和540nm處分別測定收集到的直鏈淀粉洗出液和支鏈淀粉洗出液的吸光值，并繪制洗脫曲線。以良麥4號為例，其直鏈淀粉層析洗脫曲線如圖3所示，支鏈淀粉洗脫曲線如圖4所示。由圖3和圖4可知，洗脫曲線呈現(xiàn)單峰，說明本發(fā)明提取的直鏈淀粉和支鏈淀粉純度較高。此外，依據(jù)凝膠層析的原理，在層析過程中大分子量物質(zhì)先于小分子量物質(zhì)流出層析柱，由圖3和圖4可以看出，大分子量的支鏈淀粉的洗脫體積小于直鏈淀粉即支鏈淀粉在層析過程中先流出層析柱，結(jié)果符合凝膠層析原理。
[0043]實施例3小麥來源與馬鈴薯來源的直鏈淀粉和支鏈淀粉吸收光譜的比較
[0044]為保證本發(fā)明提取的直鏈淀粉和支鏈淀粉可以廣泛用于比色法測定麥類籽粒淀粉含量及組成，根據(jù)實施例1提取了 PI520554、PI614034、良麥4號、綿麥37、蜀麥375、蜀麥482、鄭麥9023等小麥品種的直鏈淀粉和支鏈淀粉。分別用ImL無水乙醇分散IOOmg各個小麥來源的直鏈淀粉和支鏈淀粉，加入9ml NaOH溶液(lmol/L)后于沸水浴中加熱15min，期間不時搖動直至溶液變澄清，然后定容至IOOmL作為貯藏液。分別取各小麥來源的直鏈淀粉貯藏液4mL、支鏈淀粉貯藏液2.5mL,加入30mL雙蒸水，用0.5M的HCl將pH調(diào)至3.6后加入500mL碘試劑,最后定容至50mL,顛倒混勻后靜置30min。用紫外-可見光分光光度計在400nm-900nm波長范圍對上述直鏈淀粉和支鏈淀粉的碘結(jié)合顯色反應(yīng)液進行吸光度的掃描。
[0045]不同來源直鏈淀粉吸收光譜掃描結(jié)果見圖5，由圖5可看出，本發(fā)明提取的不同來源小麥直鏈淀粉的吸收光譜在最大吸收波長，最大吸收值、波形等性質(zhì)上都非常相似，而與馬鈴薯來源的直鏈淀粉吸收光譜有較大的差異。不同來源支淀粉吸收光譜掃描結(jié)果見圖6，由圖6可以看出，本發(fā)明提取的不同來源小麥支鏈淀粉的吸收光譜非常相似，與馬鈴薯來源的直鏈淀粉吸收光譜相比較，兩者在最大吸收值特征上有一定的差異。由此說明，不同物種之間的直鏈淀粉和支鏈淀粉可能在多個方面都具有各自的獨特性。在利用比色法測定不同物種的淀粉含量和組成時，應(yīng)該使用對應(yīng)物種來源的直鏈淀粉標準品和支鏈淀粉標準品以避免由標準品特性的差異造成的誤差。該結(jié)果也進一步表明，利用本發(fā)明提供的方法，能夠從不同小麥桿粒中提取聞純度的直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品，從而有利于大大提聞小麥籽粒淀粉研究的精確性和效率。
[0046] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
【權(quán)利要求】
1.小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉的純化方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)小麥籽粒淀粉的提取 將一定量的小麥籽粒用帶過濾篩網(wǎng)的磨粉機打磨成粉并去除麩皮，稱取50-200g面粉，加入面粉重量50-60%的水在功率為600W的和面機中攪拌30min-45min，攪拌結(jié)束后，將面團轉(zhuǎn)入干凈的容器中，于室溫靜置30min-45min，用4_6層紗布將靜置后的面團包裹，將紗布與面團置于燒杯中，分三次加入面團重量2-3倍的水揉洗面團，洗出的乳狀液即為淀粉粗提液；將粗提液轉(zhuǎn)入離心管中，3500-4000g離心5-10min，棄上清，并移除沉淀上方的黃色膠狀層，收集管底的白色沉淀即為小麥籽粒淀粉顆粒； 2)小麥直鏈淀粉的提取 稱取步驟1)中提取的淀粉顆粒10-20g配制成2-4w/V%的淀粉液，在磁力攪拌器上持續(xù)攪拌淀粉液并加熱至65°C 土1°C，然后轉(zhuǎn)入65°C 土1°C水浴鍋中靜置分層l_2h ;然后收集上層液體，轉(zhuǎn)入離心管中3000-4000g離心15-20min，收集上清液即為小麥直鏈淀粉粗提取液；用濾紙過濾直鏈淀粉粗提取液，向濾液中添加濾液1/3體積的丁醇，攪拌l_2h，室溫靜置過夜后3000-4000g離心15-20min收集沉淀；將丁醇和水按1:3的體積比加入沉淀中并攪拌l_2h，室溫靜置4-6h后3000-4000g離心15_20min收集沉淀，用無水乙醇漂洗沉淀3-4次，冷凍真空干燥沉淀，研磨成粉，于4°C保存； 3)小麥支鏈淀粉的提取 稱取步驟I)中提取的淀粉顆粒10-20g配制成2-4w/V%的淀粉液，在磁力攪拌器上攪拌并煮沸淀粉液30-45min，當?shù)矸垡簻囟冉抵?0_55°C時，加入磷酸緩沖液將淀粉液pH值調(diào)至6.3 ;然后將淀粉液放入滅菌鍋中121°C蒸煮2-3h，再轉(zhuǎn)入沸水浴中攪拌1-2h，加入淀粉液1/3體積的丁醇，在磁力攪拌器上50-55°C攪拌30-45min，轉(zhuǎn)入泡沫盒中靜置過夜使直鏈淀粉和其他雜質(zhì)自然沉淀，然后轉(zhuǎn)入離心管中8000-8700g離心20-30min ;離心后溶液分為三層，收集中間層即為支鏈淀粉粗提取液；向支鏈淀粉粗提液中加入粗提液1/5體積的丁醇，沉淀殘留的直鏈淀粉，攪拌30-60min后8000_8700g離心20_30min，收集上清液；重復丁醇沉淀直鏈淀粉的步驟，直至離心后無沉淀產(chǎn)生，然后向粗提液中加入等體積的丁醇，攪拌30-60min后8000_8700g離心20_30min，向粗提液中加入2倍體積的甲醇，搖勻，8000-8700g離心10-15min收集沉淀；然后用無水乙醇漂洗沉淀3_4次，冷凍真空干燥沉淀，研磨成粉，于4°C保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法制備的小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品。
3.權(quán)利要求2所述小麥直鏈淀粉和支鏈淀粉標準品在小麥淀粉的含量及組成測定中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，采用比色法測定小麥淀粉的含量及組成。
【文檔編號】C08B30/20GK103936872SQ201410177594
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月29日
【發(fā)明者】江千濤, 張曉偉, 王際睿, 陳國躍, 祁鵬飛, 劉亞西, 蒲至恩, 李偉, 魏育明, 鄭有良 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學