一種冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種改進的發(fā)酵冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法，通過菌粉水提醇沉得到粗多糖；將粗多糖脫脂、脫蛋白、透析，進行柱色譜提純得到精制多糖。該精制多糖不僅提取效率高，純度好，而且具有相當好的抗氧化效果，其效果遠遠優(yōu)于目前采用現(xiàn)有技術(shù)進行提取的冬蟲夏草多糖。
【專利說明】一種冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥活性成分提取領(lǐng)域，具體涉及ー種冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]冬蟲夏草是鱗翅目蝙蝠蛾屬的蟲草蝙蝠蛾(Hepialus armoricamus Oberthur)幼蟲感染中國被毛孢真菌后，在體內(nèi)大量繁殖后形成的蟲菌復(fù)合體，即中國被毛孢菌以蝙蝠蛾幼蟲為營養(yǎng)源不斷在其體內(nèi)繁殖，直至僵死成為僵蟲，最后長出子座形成天然冬蟲夏草。從天然冬蟲夏草的形成過程來看，中國被毛孢在蝙蝠蛾幼蟲體內(nèi)繁殖過程中不斷通過幼蟲攝取營養(yǎng)物質(zhì)，即營養(yǎng)補給呈動態(tài)形式。
[0003]它是我國傳統(tǒng)名貴中藥，具有止咳、化痰、降低血清膽固醇、調(diào)節(jié)和增強免疫力、抗腫瘤等多種藥理作用。近年來，國內(nèi)外對冬蟲夏草需求劇増。但由于冬蟲夏草有其嚴格的寄生性和特殊的生長地理環(huán)境，產(chǎn)量相當有限，藥源比較緊缺。
[0004]因此，如何對冬蟲夏草中的活性成分進行最高效的提取，是研究的熱點之一。多糖是冬蟲夏草中含量最大的生理活性物質(zhì)，具有很強的降血糖，抗腫瘤，延緩衰老，保護肝臟的功能。大量醫(yī)學(xué)實驗研究表明，蟲草多糖對單核巨噬細胞系統(tǒng)和體液免疫功能有增強作用。能增強巨噬細胞的吞噬能力，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌，提高人體免疫力。
[0005]現(xiàn)今的提取蟲草多糖技術(shù)主要有超聲波法，超臨界ニ氧化碳萃取法，水提醇沉法，稀醇提取法四種。水提醇沉法是應(yīng)用水浸提冬蟲夏草，使蟲草多糖溶于水中，再經(jīng)脫蛋白，用こ醇沉淀蟲草多糖，收集沉淀干燥即得蟲草多糖產(chǎn)品。水提醇沉法因設(shè)備和操作簡單，現(xiàn)在仍被大家所接受。但是 其仍然存在不少缺陷，例如提取率不能令人滿意、多糖純度不足、分布不好、活性不高等。
[0006]本發(fā)明通過研究，試圖提供一種改進的冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法，以獲得提取效率高、活性好的多糖提取方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法大致分為以下步驟:
[0008]冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法
[0009]1、菌粉水提醇沉得到粗多糖；
[0010]2、將粗多糖脫脂、脫蛋白、透析，進行柱色譜提純；
[0011]3、得到精制多糖。
[0012]一、菌粉多糖的提取方法的優(yōu)化:
[0013]提取出的粗多糖溶液濃縮后用4倍體積的95%的こ醇于4°C條件下沉淀24h，8000rpm / min冷凍離心IOmin,用無水こ醇、丙酮、こ醚分別洗漆兩次,50°C烘干。
[0014]在初步對提取各實驗參數(shù)進行篩選后，采用正交設(shè)計法，對多糖的提取溫度、時間、料液比、提取次數(shù)進行了實驗，結(jié)果如下:(多糖提取率)=(菌粉水提醇沉后的質(zhì)量/菌粉質(zhì)量)*100% )(表1、圖1)
[0015]表I因素水平表
[0016]
【權(quán)利要求】
1.一種冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法，其特征在于:包括以下步驟:冬蟲夏草菌粉水提醇沉得到粗多糖；對粗多糖進行提純即得。
2.—種冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)、菌粉水提醇沉得到粗多糖:取冬蟲夏草菌粉，進行水提取，提取溫度100°C，提取時間為90min，料液比為1:10(g / mL)，提取次數(shù)為3次；提取出的粗多糖溶液濃縮后用4_8倍體積的95%的こ醇于4°C條件下沉淀12-24h，8000-10000rpm / min冷凍離心5-10min，用無水こ醇、丙酮、こ醚分別洗滌兩次，50°C烘干； 2)、將粗多糖脫脂、脫蛋白:將烘干得到的粗多糖加入料液比為1:8-12(g / mL)無水こ醇，室溫脫脂8-12小時后，減壓蒸餾至無醇味，加水配制成質(zhì)量濃度為I %的粗多糖溶液，調(diào)節(jié)PH值為8-9，加熱至85°C，加氯化鈣使其濃度為5% (w / v)，攪拌，冷卻，離心，取上清液濃縮； 3)、將粗多糖透析:將步驟2)得到的脫脂、脫蛋白的粗多糖產(chǎn)品加入料液比為1:8(g / mL)的蒸餾水溶解，用截留分子量為8000的半透膜進行透析； 4)、將透析后的粗多糖溶液冷凍干燥，采用硅膠柱色譜，以20%-50%こ醇水溶液進行梯度洗脫，先以20%こ醇水溶液洗脫2個柱體積；再以30%こ醇水溶液洗脫5個柱體積；最后以50%こ醇水溶液洗脫3個柱體積，收集第3-10個柱體積的洗脫液，濃縮干燥后得到本發(fā)明制備的冬蟲夏草多糖。
3.如權(quán)利要求2所述的冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)、菌粉水提醇沉得到粗多糖:取冬蟲夏草菌粉100g，進行水提取，提取溫度100°C，提取時間為90min，料液比為1:10(g / mL)，提取次數(shù)為3次；提取出的粗多糖溶液濃縮后用4倍體積的95%的こ醇于 4°C條件下沉淀24h,8000rpm / min冷凍離心IOmin,用無水こ醇、丙酮、こ醚分別洗滌兩次，50°C烘干； 2)、將粗多糖脫脂、脫蛋白:將烘干得到的粗多糖加入料液比為1:8(g / mL)無水こ醇，室溫脫脂8小時后，減壓蒸餾至無醇味，加水配制成質(zhì)量濃度為I %的粗多糖溶液，調(diào)節(jié)PH值為8-9，加熱至85°C，加氯化鈣使其濃度為5% (w / V)，攪拌，冷卻，離心，取上清液濃縮； 3)、將粗多糖透析:將步驟2)得到的脫脂、脫蛋白的粗多糖產(chǎn)品加入料液比為1:8(g / mL)的蒸餾水溶解，用截留分子量為8000的半透膜進行透析； 4)、將透析后的粗多糖溶液冷凍干燥，采用硅膠柱色譜，以20%-50%こ醇水溶液進行梯度洗脫，先以20%こ醇水溶液洗脫2個柱體積；再以30%こ醇水溶液洗脫5個柱體積；最后以50%こ醇水溶液洗脫3個柱體積，收集第3-10個柱體積的洗脫液，濃縮干燥。
4.如權(quán)利要求2所述的冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)、菌粉水提醇沉得到粗多糖:取冬蟲夏草菌粉，進行水提取，提取溫度100°C，提取時間為90min，料液比為1:10(g / mL)，提取次數(shù)為3次；提取出的粗多糖溶液濃縮后用6倍體積的95%的こ醇于4°C條件下沉淀20h, IOOOOrpm / min冷凍離心5min,用無水こ醇、丙酮、こ醚分別洗滌兩次，50°C烘干； 2)、將粗多糖脫脂、脫蛋白:將烘干得到的粗多糖加入料液比為1:12(g / mL)無水こ醇，室溫脫脂12小時后，減壓蒸餾至無醇味，加水配制成質(zhì)量濃度為I %的粗多糖溶液，調(diào)節(jié)PH值為8-9，加熱至85°C，加氯化鈣使其濃度為5% (w / v)，攪拌，冷卻，離心，取上清液濃縮； 3)、將粗多糖透析:將步驟2)得到的脫脂、脫蛋白的粗多糖產(chǎn)品加入料液比為1:8(g / mL)的蒸餾水溶解，用截留分子量為8000的半透膜進行透析； 4)、將透析后的粗多糖溶液冷凍干燥，采用硅膠柱色譜，以20%-50%こ醇水溶液進行梯度洗脫，先以20%こ醇水溶液洗脫2個柱體積；再以30%こ醇水溶液洗脫5個柱體積；最后以50%こ醇水溶液洗脫3個柱體積，收集第3-10個柱體積的洗脫液，濃縮干燥。
5.如權(quán)利要求2所述的冬蟲夏草胞內(nèi)多糖的提取方法，其特征在于:所述的多糖含糖量為99%以上。
6.如權(quán)利要求1-5任一項所述的制備方法制備的冬蟲夏草胞內(nèi)多糖在制備治療抗氧化的藥物中的應(yīng)用。`
【文檔編號】C08B37/00GK103435712SQ201310392266
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月27日
【發(fā)明者】王玉花, 王輝, 樊國軍, 謝建軍, 楊成香 申請人:王輝