專利名稱：一種樣品印跡聚合物合成方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及高分子材料合成領域的一種分子印跡聚合物的合成方法，特別涉及一種樣品印跡聚合物合成方法及其應用。
背景技術：
分子印跡聚合物是在模板分子存在下合成的高分子材料。模板分子是所需或感興趣的研究對象，當它(們)被去除之后，在聚合物中留下了特殊的孔隙或結合部位，可用于對模板分子的識別。分子印跡技術及所得聚合物廣泛地應用于各種領域，包括傳感器設計、催化、分離、分子識別、抗體模擬以及晶體工程等方面。蛋白質的印跡在分子印跡技術中占有重要地位。由于蛋白質的體積龐大，結構具有一定的柔性，通常采用非共價方式進行處理，比如表面印跡、納米印跡、冷凍凝膠印跡等方式。在本發(fā)明之前，現(xiàn)有分子印跡聚合物多是針對特定已知化合物，即使用已知模板分子合成印跡聚合物。目前，無論單一印跡還是多元印跡，已知標準物質的使用都是不可避免的，即不能對未知化合物進行印跡，任何印跡聚合物的合成都是以已知標準物質的獲取為前提的。為了處理復雜樣品例如生物體液、或組織蛋白質提取液，通常需要對樣品進行預先分離、處理。尤其是蛋白質組學、生物標記物的研究，常常希望對粗蛋白質樣品進行預處理，從中除去高豐度(含量)的常見或稱“看家蛋白質”。特定高豐度蛋白質的脫除通常使用親和色譜方法，需要使用昂貴、難得的抗體等物質，方法實用面較窄且成本高昂，且印跡方法也需特定已知蛋白質標準品。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的就是要克服上述缺陷，研制一種樣品印跡聚合物合成方法及其應用。本發(fā)明的技術方案是—種樣品印跡聚合物合成方法，其主要技術步驟在于(1)將丙烯酰胺、雙丙烯酰胺、丙烯酸、烯丙基胺、過硫酸銨、四亞甲基二乙胺攪拌混勻成混合液；(2)加入實際樣品作為印跡模板，聚合后得到樣品印跡聚合物。本發(fā)明的另一技術方案是一種樣品印跡聚合物的應用，其主要技術步驟在于(1)生物體液樣品印跡聚合物置于玻璃滴管中制成過濾柱；(2)生物體液樣品溶于pH 8. 6的磷酸鹽緩沖溶液，過濾除去沉淀物；(3)滴加通過過濾柱，取濾液進行毛細管電泳分離；(4)電泳條件電壓10kV，檢測波長^Onm，毛細管長度20厘米有效長度；(5)電泳結果表明聚合物脫除樣品中高豐度蛋白質組分。
本發(fā)明的優(yōu)點和效果在于本發(fā)明實現(xiàn)了無標印跡，即不使用純化的標準化合物， 模板分子是樣品中的高豐度組分。得到的印跡聚合物恰好可以用來脫除或收集這些高豐度組分。本發(fā)明的其他優(yōu)點和效果將在下面繼續(xù)說明。


圖1——人血清印跡聚合物實物照片示意圖。圖2——印跡聚合物掃描電鏡示意圖。圖3——雞蛋清印跡聚合物脫除高豐度蛋白質電泳示意圖。其中，a)實際樣品，b) 印跡聚合物處理后的樣品示意圖。圖4——印跡聚合物可以同時脫除的部分蛋白質數(shù)據(jù)示意圖。圖5——印跡蛋白質的一種——溶菌酶，電泳后從柱子中洗出。
具體實施例方式本發(fā)明的技術思路是在此我們提出新穎的印跡聚合物合成方法，印跡模板并非已知分子，而是實際樣品如蛋白質混合物。具體的印跡分子涉及多種分子?；旌衔飿悠分械慕M分只要濃度超過某一閾值，且與聚合物單體相互作用足夠有效，則該組分可以在合成聚合物中形成作用孔隙或位點。經過充分洗脫印跡模板，所得到的印跡聚合物對原來樣品中濃度較高的幾種組分具有特異吸附、捕獲作用。下面是具體技術說明(1)將丙烯酰胺、雙丙烯酰胺、克丙烯酸、克烯丙基胺、過硫酸銨、四亞甲基二乙胺攪拌混勻成混合液；(2)加入生物體液或組織蛋白質提出取液，超聲脫氣，置于溫水浴中聚合，得到白色固體；(3)用磷酸鹽緩沖溶液充分洗滌，干燥得到成品。實施例1 1)人血清樣品印跡聚合物合成100毫升蒸餾水中加入1. 0克丙烯酰胺、0. 05克雙丙烯酰胺、0. 01克丙烯酸、0. 01克烯丙基胺、0. 015克過硫酸銨、10微升四亞甲基二乙胺， 攪拌混勻，加入10毫升人血清，超聲脫氣10分鐘，置于40°C水浴中聚合10小時，得到白色固體，如圖1所示；用0. 50mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH 8. 6，含10mmol/L十二烷基磺酸鈉) 充分洗滌，干燥得到成品，如圖2所示；動物血清樣品印跡聚合物合成與此類似。實施例2 2)人尿液樣品印跡聚合物合成新鮮人尿液濾紙過濾，14000g超速離心透析(分子截留量5000) 20分鐘，取100毫升中加入1. 0克丙烯酰胺、0. 05克雙丙烯酰胺、0. 01克丙烯酸、0. 01克烯丙基胺、0. 015克過硫酸銨、10微升四亞甲基二乙胺，攪拌混勻，超聲脫氣10 分鐘，置于40°C水浴中聚合10小時，得到白色膠狀固體。用0. 50mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH 8.6，含lOmmol/L十二烷基磺酸鈉)充分洗滌，干燥得到成品。動物尿液樣品印跡聚合物合成與此類似。
實施例3 3)雞蛋清樣品印跡聚合物合成100毫升蒸餾水中加入1. 0克丙烯酰胺、0. 05克雙丙烯酰胺、0. 01克丙烯酸、0. 01克烯丙基胺、0. 015克過硫酸銨、10微升四亞甲基二乙胺， 攪拌混勻，加入1毫升雞蛋清，超聲脫氣10分鐘，置于40°C水浴中聚合10小時，得到白色膠狀固體。用0. 50mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH8. 6，含lOmmol/L十二烷基磺酸鈉)充分洗滌， 干燥得到成品。實施例4 本發(fā)明的具體應用說明4)印跡聚合物脫除高豐度組分1克干雞蛋清樣品印跡聚合物置于玻璃滴管中制成過濾柱。1毫升雞蛋清溶于10毫升0. 02mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH8. 6)，過濾除去沉淀物，滴加通過過濾柱。取濾液進行毛細管電泳分離。電泳條件電壓10kV，檢測波長觀此！!!， 毛細管長度30厘米(20厘米有效長度)，緩沖溶液為0. 02mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH 8. 6)， 進樣時間10秒(IOkV)。電泳結果與未處理樣品對比分析表明，聚合物有脫除樣品中高豐度蛋白質組分，如圖3所示。其他聚合物的應用與此類似。如圖3所示從對比譜圖可知，圖3a中7. 9分鐘、12. 3分鐘、14. 5分鐘處的高豐度蛋白質在圖 3b中不再出現(xiàn)(分別對應溶菌酶、轉鐵蛋白、卵清蛋白)，即他們被脫除。如圖4所示三種聚合物分別能夠脫除的蛋白質種類。如圖5所示合成的聚合物能夠脫除其原來印跡模板樣品里面的一種或數(shù)種蛋白質。27分鐘后溶菌酶可從柱中遷移出來。
權利要求
1.一種樣品印跡聚合物合成方法，其步驟在于(1)將丙烯酰胺、雙丙烯酰胺、丙烯酸、烯丙基胺、過硫酸銨、四亞甲基二乙胺攪拌混勻成混合液；(2)加入實際樣品作為印跡模板，聚合后得到樣品印跡聚合物。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種樣品印跡聚合物合成方法，其特征在于步驟O)中實際樣品為生物體液或組織蛋白質提取液。
3.根據(jù)權利要求2所述的一種樣品印跡聚合物合成方法，其特征在于生物體液或組織蛋白質提取液為人體血清。
4.根據(jù)權利要求2所述的一種樣品印跡聚合物合成方法，其特征在于生物體液或組織蛋白質提取液為人體尿液。
5.根據(jù)上述的一種樣品印跡聚合物的應用，其步驟在于(1)生物體液樣品印跡聚合物置于玻璃滴管中制成過濾柱；(2)生物體液樣品溶于pH8. 6的磷酸鹽緩沖溶液，過濾除去沉淀物；(3)滴加通過過濾柱，取濾液進行毛細管電泳分離；(4)電泳條件電壓10kV，檢測波長^Onm，毛細管長度20厘米有效長度；(5)電泳結果表明聚合物脫除樣品中高豐度蛋白質組分。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種樣品印跡聚合物合成方法及其應用。本發(fā)明是將丙烯酰胺、雙丙烯酰胺、丙烯酸、烯丙基胺、過硫酸銨、四亞甲基二乙胺攪拌混勻成混合液，加入實際樣品作為印跡模板，聚合后得到樣品印跡聚合物。本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術中存在的不能對未知化合物進行印跡以及需要使用昂貴、難得的抗體且印跡方法也需特定已知蛋白質標準品等缺陷。本發(fā)明實現(xiàn)了無標印跡，即不使用純化的標準化合物，模板分子是樣品中的高豐度組分，得到的印跡聚合物恰好可以用來脫除或收集這些高豐度組分。
文檔編號C08F226/02GK102504096SQ20111033639
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月28日 優(yōu)先權日2011年10月28日
發(fā)明者楊春, 欒新杰 申請人:揚州大學