專利名稱：：具有改進的彈性的組織粘合劑的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)學粘合劑領域。更明確的，本發(fā)明涉及一種具有改進彈性的聚合物組織粘合劑，其是通過將氧化多糖與可水溶的、擴鏈多臂聚醚胺反應來形成的。
背景技術：
：組織粘合劑具有多個潛在的醫(yī)學用途，包括局部傷口閉合、在體內(nèi)手術搡作中作為縫合線或釘合釘?shù)难a充或者替代、合成高嵌體或者鑲嵌物與角膜的粘合、藥物釋放裝置、和作為抗粘障礙物來防止術后粘連。常規(guī)的組織粘合劑通常不適于廣泛的粘合應用中。例如，氰基丙烯酸酯基粘合劑已經(jīng)被用于局部的傷口閉合，但是有毒降解產(chǎn)物的釋放限制了它們用于體內(nèi)應用。纖維蛋白基粘合劑是緩慢固化的，具有差的機械強度，并且具有病毒感染的危險。此外，纖維蛋白基粘合劑不能與體內(nèi)組織共價結(jié)合。已經(jīng)發(fā)展了幾種類型的水凝膠組織粘合劑，其具有提高的粘合性和結(jié)合性，并且是無毒的。這些水凝膠通常是通過將具有親核基團的成分與具有親電子基團的成分(該成分能夠與第一個成分的親核基團進行反應)進行反應，通過共價鍵合形成交聯(lián)的網(wǎng)狀物而形成的。但是，這些水凝膠典型的是過快的溶脹或者溶解掉，或者缺少足夠的粘接性或者機械強度，由此降低了它們作為手術粘合劑的效力。水凝膠組織粘合劑的例子由Sehl等人描述在美國專利申請公開No.2003/0119985中。該粘合劑是通過將親水聚合物例如膠原質(zhì)與具有親核基團的可交聯(lián)的成分和具有親電子基團的可交聯(lián)成分進行反應而形成的。該可交聯(lián)的成分包括不同的聚乙二醇活化型。Goldmann等人在WO03/035122中描述了一種水凝膠組織粘合劑，其通過將殼聚糖或者改性的帶有氨基基團的聚乙烯醇與氧化多糖例如氧化的右旋糖苷進行反應而形成。這些公開的內(nèi)容都沒有描述通過將氧化多糖與可水溶的、多臂聚醚胺反應而形成的聚合物粘合劑。因此，要解決的問題是提供一種具有提高性能的組織粘合劑材料，其用于手術操作以及其它的醫(yī)學應用中。本申請人已經(jīng)通過發(fā)現(xiàn)了一種聚合物組織粘合劑而解決了所述的問題，該粘合劑是通過將氧化多糖與可水溶的、多臂聚醚胺反應來形成的，該多臂聚醚胺公開于美國專利申請No.ll/244756(申請日2005年10月6日并作為US2006/0078536A1而公開)中。本申請人在此進一步通過發(fā)現(xiàn)一種具有改進的彈性和提高的穩(wěn)定性的組織粘合劑而解決了所述的問題，該粘合劑衍生自氧化多糖與本發(fā)明的擴鏈聚胺產(chǎn)物的反應。發(fā)明概述本發(fā)明的一種實施方案是一種通過下面的方法制得的物質(zhì)合成物(compositionofmatter),所述的方法包含任選在第一反應溶劑中，將至少一種具有至少三個臂的多臂聚醚胺與至少一種下式的雙官能交聯(lián)劑進行反應X、R-X2該多臂聚醚胺與該雙官能交聯(lián)劑的摩爾比是大約4:l-大約50:1，由此形成擴鏈聚胺產(chǎn)物；并且在其中(i)該多臂聚醚胺的至少三個臂是用伯胺基團封端的；(ii)該多臂聚醚胺具有大約450-大約200000道爾頓的重均分子量；(iii)X、R-XZ是一種聚合物，其具有大約2000-大約20000道爾頓的重均分子量；(iv)R是二價聚合物基團；(v)X1和X2是能夠與伯胺基團反應形成碳-氮鍵的基團；條件是該擴鏈聚胺產(chǎn)物的特征在于2(TC時其在水中的溶解度至少是20wt%。本發(fā)明另外一種實施方案是一種通過下面的方法制得的物質(zhì)合成物，所述的方法包含步驟6a)任選的在第二反應溶劑中，將至少一種具有至少三個臂和具有至少三個親電子端基的多臂聚醚，與下式的伯二胺交聯(lián)劑進行反應NH2-R2-NH2該多臂聚醚與該伯二胺交聯(lián)劑的摩爾比是大約4:l-大約50:1,由此形成具有殘留親電子端基的擴鏈聚合物；和，b)任選的在第三反應溶劑中處理所述的擴鏈聚合物，目的是將殘留的親電子端基轉(zhuǎn)化為胺端基來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物；其中(i)所述的多臂聚醚至少三個臂是用親電子端基封端的，該親電子端基能夠與伯胺反應形成碳-氮鍵；(ii)該多臂聚醚具有大約450-大約200000道爾頓的重均分子量；(111)W是二價聚合物基團；(iv)NH2-R、NH2是一種聚合物，其具有大約2000-大約20000道爾頓的重均分子量；條件是該擴鏈聚胺產(chǎn)物的特征在于20。C時其在水中的溶解度至少是20wt%。衍生自氧化多糖與本發(fā)明的擴鏈聚胺產(chǎn)物反應的組織粘合劑表現(xiàn)出在下面的一種或多種屬性中的提高粘合性和結(jié)合性，在體溫時易于交聯(lián)性；保持初始尺的穩(wěn)定性，在水性環(huán)境中的穩(wěn)定性，對細胞的無毒性和不引起組織發(fā)炎。這些提高通常在此通過增加彈性來實現(xiàn)，其提供與基礎組織更大的相容性和穩(wěn)定性。圖1表示在本發(fā)明中有用的雙官能交聯(lián)劑的合成路線。圖2表示在本發(fā)明中有用的具有親電子端基的多臂聚醚的合成路線。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及一種在提供改進的組織粘合劑中有用的擴鏈聚胺產(chǎn)物，該粘合劑通過將氧化多糖與可水溶的含有多臂聚醚胺的擴鏈聚胺產(chǎn)物反應來形成，其中多臂聚醚胺的至少三個臂是通過伯胺基團封端的。該聚合物粘合劑作為醫(yī)學和獸醫(yī)應用中的粘合劑是有用的，包括但不限于局部傷口閉合，和手術操作例如腸內(nèi)吻合、脈管吻合、組織修復、止血和眼科操作。此外，該聚合物粘合劑可以用于給藥、抗粘連應用和作為膨脹劑(bulkingagent)來治療小便失禁。下面的定義用于此處，并且作為參考來解釋權利要求和說明書。術語"氧化多糖"和"多糖二醛"在此交替使用來表示一種多糖，其已經(jīng)與氧化劑反應來將醛基？1入到分子中。術語"當量/酪基，，指的是氧化多糖的分子量除以引入到該分子中的醛基數(shù)。此處術語聚環(huán)氧乙烷(PEO)和聚乙二醇(PEG)是同義的。此處術語聚環(huán)氧丙烷(PPO)和聚丙二醇(PPG)是同義的。作為此處使用的，術語"包含"、"包含著"、"包括"、"包括著"、"具有"、"具有著"或者其任何的其它變化，目的是覆蓋非排除的內(nèi)容。例如，一種包含一列要素的加工、方法、制品或者設備不必僅僅局限于這些要素，而是可以包括其它沒有明確列出的要素或者這樣加工、方法、制品或者設備所固有的要素。此外，除非有明確的相反指示，否則"或者"指的是一種包含的"或者"并且不是排除的"或者"。例如，條件A或者B滿足下面的任何一個A是真的(或者存在)和B是假的(或者不存在)，A是假的(或者不存在)和B是真的(或者存在)，和A和B二者都是真的(或者存在)。本發(fā)明的第一種實施方案是一種通過下面的方法制得的物質(zhì)合成物，所述的方法包含任選在第一反應溶劑中，將至少一種具有至少三個臂的多臂聚醚胺與至少一種下式的雙官能交聯(lián)劑進行反應X、R-X2該至少一種多臂聚醚胺與該雙官能交聯(lián)劑的摩爾比是大約4:l-大約50:1，由此形成擴《連聚胺產(chǎn)物；在其中(i)該多臂聚醚胺的至少三個臂是用伯胺基團封端的；(ii)該多臂聚醚胺具有大約450-大約200000道爾頓的重均分子量；(111)X)-R-XZ是一種聚合物，其具有大約2000-大約20000道爾頓的重均分子量；(iv)R是二價聚合物基團；(v)X1和X2是能夠與伯胺基團反應形成碳-氮鍵的基團；條件是該擴鏈聚胺產(chǎn)物的特征在于2(TC時其在水中的溶解度至少是20wt%。術語"多臂聚醚胺"指的是接枝的聚醚，其具有通過伯胺基團封端的至少三個臂，其是可水溶的并且能夠在水溶液中與第二反應物發(fā)生反應。多臂聚醚胺是具有重復單元[-0-113]-的聚醚，其中W是具有2-5個碳原子的亞烴基基團。術語"亞烴基基團"指的是一種二價基團，其是通過從經(jīng)中除去兩個氬原子而形成的，每一個氬原子來自兩個不同的碳原子的每一個。在本發(fā)明中有用的多臂聚醚胺包括樹枝狀的、梳狀的和星型支化的和超支化的聚醚，其中至少三個臂是通過伯胺基團封端的。該多臂聚醚胺具有大約450-大約200000道爾頓，優(yōu)選大約2000-大約40000道爾頓的重均分子量(Mw)?？伤艿亩啾劬勖寻返暮线m的例子包括但不限于氨基封端的星型、樹枝狀的、梳狀的聚環(huán)氧乙烷；氨基封端的星型、樹枝狀的、梳狀的聚環(huán)氧丙烷；氨基封端的星型、樹枝狀的、梳狀的聚環(huán)氧乙烷-聚環(huán)氧丙烷共聚物;和在商標名Jeffamine三胺下由HuntsmanLLC.(休斯敦，得克薩斯州)銷售的聚氧乙烯三胺。星型聚環(huán)氧乙烷胺的例子包括但不限于不同的多臂聚乙二醇胺，獲自NektarTransformingTherapeutics(Huntsville，AL),和用伯胺封端的具有3、4、6或者8個臂的星型聚乙二醇(此處分別稱作3、4、6或者8個臂的PEG胺)。一種8臂PEG胺(Mwl0000)獲自NektarTransformingTherapeutics。合適的Jeffamine⑧三胺的例子包括但不限于JeffamineT-403(CASNo.39423-51-3),JeffamineT-3000(CASNo.64852-22-8)和JeffamineT-5000(CASNo.64852-22-8)。在一種優(yōu)選的實施方案中，可水溶的多臂聚醚胺是一種八臂PEG,其具有八個由伯胺基團封端的臂并且具有大約9000-大約11000道爾頓的重均分子量。這些多臂聚醚胺是上述市售的，或者可以使用本領域已知的方法來制備。例如Larkin等人(美國專利No.4766245)描述了通過在氬氣和阮內(nèi)鎳/鋁催化劑存在下將三臂和八臂聚(丙二醇)與氨反應而轉(zhuǎn)化為相應的聚胺。Nho等人(美國專利申請公開No.2004/0225097)描述了通過將多臂PEG多元醇進行曱苯石黃?；?，隨后與氨水反應10天而轉(zhuǎn)化為它們相應的多臂PEG胺。此外，B加krnann等人(Makromol.Chem.l82:1379-1384(1981))描述了經(jīng)由兩個步驟反應將線性PEG轉(zhuǎn)化為相應的二胺，所述的反應包含將PEG與亞石危酰溴反應來形成溴衍生物，隨后與乙醇氨反應。一種優(yōu)選的廣泛用來制備多臂聚醚胺的方法公開在美國申請系列No.ll/732952(申請日2007年04月05曰)中，該方法具有端基到胺的高轉(zhuǎn)化率。所述的方法包含將亞硫酰氯與至少一種具有3-大約10個臂的多臂PEG多元醇反應來形成多臂PEG氯化物，多臂PEG多醇的至少大約95%的端羥基被轉(zhuǎn)化為氯端基；從未反應的亞硫酰氯中分離該多臂PEG氯化物，并將該多臂PEG氯化物與氨水或者無水氨反應來形成一種反應產(chǎn)物，在其中至少大約95%的多臂PEG氯化物的氯端基被轉(zhuǎn)化為胺端基。其它可用來制備多臂聚醚胺的方法由Merrill等人在美國專利No.5830986中和由Chang等人在WO97/30103中進行了描述。應當承認上述的多臂聚醚胺和多臂聚醚通常是具有臂長分布的，并且在某些情況中，具有不同數(shù)目臂的物種分布的多少異質(zhì)的混合物。當多臂聚醚或者多臂聚醚胺具有帶著不同數(shù)目臂的物種分布時，它可以以所述分布的平均臂數(shù)來稱呼。例如，在一種實施方案中，多臂聚醚胺是一種8臂星型PEG胺，其包含了多臂星型PEG胺的混合物，一些具有小于8個的臂，而一些具有大于8個的臂；但是，混合物中的多臂星型PEG胺具有平均8個的臂。因此，此處用來稱呼多臂聚醚和多臂聚醚胺的術語"8臂，，、"6臂"、"4臂"和"3臂"應當被解釋為是一種具有臂長分布的，并且在某些情況中，是具有不同數(shù)目臂的物種分布的異質(zhì)混合物，在該情況中，所述的臂數(shù)指的是混合物中的平均臂數(shù)。在本發(fā)明中有用的雙官能交聯(lián)劑是下式X'-R-X2并且是一種重均分子量為大約2000-大約20000道爾頓的聚合物。官能團X1和X2可以是任何的能夠與伯胺基團反應來形成碳-氮鍵的基團。優(yōu)選X1和乂2在任何具體的雙官能交聯(lián)劑中是相同的。優(yōu)選X1和乂2選自-CHO,-C02H,-CC^R1,-NCO,-NCS,-COC1,-COBr,-COF,-OMs(其中Ms是曱烷磺酰基)，-OTs(其中，Ts是曱苯磺?；?和-OTf(其中Tf是三氟曱烷磺酰基)，三氟乙磺酸酯(tresylate)(2,2，2-三氟乙烷石黃酸酯)，Cl,Br,I和縮水甘油醚；其中11是N-琥珀酰亞胺基，4-硝基苯基，2,4-二硝基苯基或者五氟苯基基團。特別優(yōu)選的X'和X2基團是在親核取代反應中已知的好的離去基團，包括選自-OMs，-OTs,-OTf,三氟乙磺酸酯，Cl,Br和I的這些基團。其它優(yōu)選的X^口XS基團包括羧酸和反應性羧酸酯，其可以與伯胺基團偶合來形成酰胺聯(lián)接；異氰酸酯，其可以與伯胺基團偶合來形成脲聯(lián)接；醛，其可以與伯胺縮合來提供亞胺，并可以任選的轉(zhuǎn)換為仲胺；和反應性環(huán)氧基團，例如縮水甘油醚，其可以與伯胺基團偶合來形成仲胺。R基團可以任何的二價聚合物基團，其當與X'和X^吉合時，落入所規(guī)定的雙官能交聯(lián)劑的分子量范圍內(nèi)。優(yōu)選R是一種特征在于高親水性的二價聚合物基團，目的是如果X'和XZ是羥基基團時，則相應的二醇HO-R-OH在20。C和38。C具有在水中至少lwtQ/。的溶解度。該二價聚合物基團R可以處于均聚物或者嵌段或無規(guī)共聚物的形式。這里共聚物指的是衍生自兩種或多種重復單元的聚合物。優(yōu)選R是衍生自一種或多種單體的重復單元的二價聚合物基團，所述的單體選自環(huán)氧乙烷，環(huán)氧丙烷，乙酸乙烯酯，乙烯醇，N-乙烯吡咯烷酮和氧雜環(huán)丁烷。用于本發(fā)明的優(yōu)選的雙官能交聯(lián)劑X1-R-X2包含選自下面的二價聚合物基團R:環(huán)氧乙烷的二價均聚物；和環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的二價嵌段和無規(guī)共聚物。在制備這些雙官能交聯(lián)劑中有用的羥端基聚合物是市售的。例如，名義分子量為2000、4000、6000和8000的聚乙二醇獲自AldrichChemicalCo.。名義分子量為1850-14600的聚環(huán)氧乙烷和聚環(huán)氧丙烷三嵌段共聚物(PEG-PPG-PEG)在商標名PLURONIC⑧下獲自BASF,MountOlive,NJ。用于本發(fā)明的雙官能交聯(lián)劑X、R-X2是通過公知的合成路線來獲得的。例如，其中x'和x是曱磺酸酯、曱苯磺酸酯、三氟乙磺酸酯或者三氟曱磺酸酯的雙官能交聯(lián)劑可以通過在非質(zhì)子溶劑例如二氯曱烷中，在堿例如三乙胺或者吡咬存在下，分別用甲烷磺?；取⒓妆交酋；?、2，2,2-三氟乙烷磺酰基氯和三氟甲烷磺?；葋硖幚硐鄳牧u端基聚合物而制得。其中X!和XZ是氯化物或者溴化物的雙官能交聯(lián)劑可以通過在非質(zhì)子溶劑例如曱苯中，分別用亞硫酰氯和亞硫酰溴來處理相應的羥端基聚合物而制得。可以在極性非質(zhì)子溶劑例如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中用碘化鉀進一步處理所述的氯化物或者溴化物來提供相應的碘化物。本發(fā)明其它優(yōu)選的雙官能交聯(lián)劑包括羧端基聚合物，其具有羧酸、羧酰卣或者反應性酯端基，選自環(huán)氧乙烷的均聚物和嵌段和環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的無規(guī)共聚物。這些材料是通過按照圖1描述的路線和Biickmann,A.F.等人,MakromolekulareChemie，182,1379-1384,(1981)中所述的方法來合成獲得的。例如，輕端基PEG的羧甲基化可以通過下述進行在四氫呋喃(THF)中用萘基鈉處理，隨后用2-溴乙酸乙酯進行烷基化并水解該酯來提供式(Ia)的羧曱基封端的PEG。在另外一種路線中，羥端基PEG可以用堿和丙烯腈處理來提供邁克爾加成產(chǎn)物，隨后通過腈的酸性水解來提供式(Ib)的羧乙基封端的PEG。在另外一種路線中，用甲磺酸酯，甲苯磺酸酯，三氟乙磺酸酯，三氟甲磺酸酯，氯化物，溴化物或者碘化物封端的PEG可以用氨在密封容器中處理來產(chǎn)生胺封端的PEG。作為示例，該胺封端的PEG可以用琥珀酸酐處理來轉(zhuǎn)化為羧基封端的PEG,以產(chǎn)生羧基封端的PEG(IIa)。在這個次序中有用的其它優(yōu)選的酸酐包括戊二酸酸酐，己二酸酸酐，己酸酸酐，馬來酸酸酐和氧雙乙酸酸酐。在另外一種^^線中，輕基封端的PEG和胺封端的PEG可以使用類似于由Zalipsky等人在Reac.Polym.(1994)22,243-258中所述的這些程序，分別用2-異氰酸根合乙酸乙酯來處理，隨后通過酯水解來得到氨基甲酸酯聯(lián)接的二酸(Ic)和酰亞胺聯(lián)接的二酸(Id)。表1列出了幾種在本發(fā)明中有用的羧基封端的PEG雙官能交聯(lián)劑。表l.No.式結(jié)構<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>式(Ia-d)和(Ila-e)的羧基衍生物可以進一步分別用亞硫酰氯或者亞硫酰溴處理來轉(zhuǎn)化為?；然蛘啧；?。作為示例，羧基封端的PEG可以通過用二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和N-羥基琥珀酰亞胺處理(Ila)來轉(zhuǎn)化為反應性酯，以提供圖1的式(Illa)的N-氧琥珀酰亞胺酯。許多其它的PEG封端的活化酯，包括4-硝基苯基，2,4-二硝基苯基或者五氟苯基可以以類似的方式，分別使用DCC和4-硝基苯酚、2,4-二硝基苯酚和五氟苯酚來制得。表2列出了幾種在本發(fā)明中有用的活化的酯封端的PEG雙官能交聯(lián)劑。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>PEG二羧酸二酯是在商標名SUNBRIGHT下從NOF美國公司，WhitePlains,NY獲得的，其分子量為3400-20000。這些作為N-羥基琥珀酰亞胺基(NHS)酯活化的市售產(chǎn)物包括PEG-二羧曱基NHS，PEG-琥珀酸NHS酯(IIIa),PEG-戊二酸氫NHS酯(IIIb),和PEG-己二酸氫NHS酯(IIId)。還可以獲得PEG-二(對硝基苯基)碳酸酯。本發(fā)明的其他優(yōu)選的雙官能交聯(lián)劑包括醛封端的聚合物，選自環(huán)氧乙烷的均聚物和環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的嵌段和無規(guī)共聚物。例如，羥基封端的PEG可以在四氬呋喃(THF)中用萘基鈉進行處理，隨后用2-溴乙醛縮二乙醇進行烷基化并水解該縮醛來提供來提供乙醛封端的PEG。以類似的方式，3-溴丙醛縮二乙醇可以用來提供丙醛封端的PEG(A-PEG)。A-PEG的一種市售來源是SUNBRIGHTDE-050AL(MW=5000)。本發(fā)明其它優(yōu)選的雙官能交聯(lián)劑包括異氰酸酯或者硫代異氰酸酯封端的聚合物，選自環(huán)氧乙烷的均聚物和環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的嵌段和無規(guī)共聚物。例如，胺封端的PEG可以根據(jù)Greenwald等人(J.Med.Chem.(1999)42，3657-3667),用三光氣進行處理。羥基封端的PEG可以根據(jù)下面的方案用過量的六亞甲基二異氰酸酯處理來提供異氰酸酯封端的PEG:HO-PEG-OH->^0:C:N-(CH2)6_No—PEG~0g—(CH2)rN:C:O0:C:N-(CH2)6—N:C:0過量過量的二異氰酸酯可以通過不同的方法除去，包括減壓蒸發(fā)，或者使用非溶劑將該PEG聚合物從溶液中分級沉淀。其它可以用來以類似的方式改性羥基封端的PEG的二異氰酸酯包括但不限于亞乙基二異氰酸酯，四亞甲基二異氰酸酯和曱基五亞曱基二異氰酸酯。本發(fā)明其它優(yōu)選的雙官能交聯(lián)劑包括用包括縮水甘油醚的反應性14環(huán)氧基團封端的聚合物，并選自環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的均聚物和嵌段以及無規(guī)共聚物。在制備這些環(huán)氧雙官能交聯(lián)劑中有用的羥基封端的聚合物是上面公開的市售品。環(huán)氧雙官能交聯(lián)劑的合成可以根據(jù)下面的方案來艽成NaOHHO-PEG-OH綠醇-^>^^0-peg-0nv^<J其中X^口xa是不同官能團的雜雙官能PEG作為本發(fā)明的雙官能交聯(lián)劑是有用的。含有雜雙官能PEG的聚合物的制備描述于下面的幾個論文中"Poly(ethyleneglycol)ChemistryandBiologicalApplications",丄MiltonHarris禾口SamuelZalipskyeds.,ACSSymposiumSeries.680,AmericanChemicalSociety,華盛頓DC(1997)。幾種有用的雜雙官能交聯(lián)劑包括通過下面的方法所提供的那些交聯(lián)劑根據(jù)下面的方案，使用類似于由Zalipsky等人，React.Polym.(1994),22，243-258所述的那些方法，從PEG單氯來合成的<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>通過離子交換色譜法將中間體一元酸從同官能雜質(zhì)中分離來提供純凈的雜雙官能化合物(IVa-b)和(Va-b)。其它有用的雜雙官能交聯(lián)劑是通過由PEG丙醛(A-PEG-OH)合成來提供的，該PEG丙醛是在當3,3-二乙氧基丙基醇鹽被用作環(huán)氧乙烷(EO)聚合引發(fā)劑時而獲得的，所述的環(huán)氧乙烷(EO)的聚合是根據(jù)Nagasaki等人(BioconjugateChem.,(1995)6,231)所述的方法來進行的。A-PEG-OH是由NOF公司市售的，并且名義Mw為500-3000。醛雜雙官能交聯(lián)劑(其可以衍生自A-PEG-OH)包括但不限于通過下面的方案所合成的這些<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>其中A二3-丙醛本發(fā)明的衍生自雙官能交聯(lián)劑的擴鏈聚胺產(chǎn)物進一步的特征在于通過尺寸排阻色語法(SEC)所測定的Mw比用來制造該擴鏈聚胺產(chǎn)物的多臂聚醚胺(一種或多種)的Mw高出至少大約10%。本發(fā)明另外一種實施方案是一種通過下面的方法制得的物質(zhì)合成物，所述的方法包含步驟a)任選的在第二反應溶劑中，將至少一種具有至少三個臂和具有至少三個親電子端基的多臂聚醚，與下式的伯二胺交聯(lián)劑進行反應NH2-R2-NH2該至少一種多臂聚醚與該伯二胺交聯(lián)劑的摩爾比是大約4:l-大約50:1,由此形成具有殘留親電子端基的擴鏈聚合物；和b)任選的在第三反應溶劑中處理所述的擴鏈聚合物，目的是將殘留的親電子端基轉(zhuǎn)化為胺端基來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物；和其中(i)所述的多臂聚醚至少三個臂是用親電子端基封端的，該親電子端基能夠與伯胺反應形成碳-氮鍵；(ii)該多臂聚醚具有大約450-大約200000道爾頓的重均分子量；(lii)W是二價聚合物基團；(iv)NH2-R2-NH2是一種聚合物，其具有大約2000-大約20000道爾頓的重均分子量；條件是該擴鏈聚胺產(chǎn)物的特征在于20。C時其在水中的溶解度至少是20wt%。在本發(fā)明的第二實施方案中有用的伯二胺交聯(lián)劑是一種胺封端的聚合物，其具有大約2000-大約20000道爾頓的重均分子量。優(yōu)選W是一種特征在于高親水性的二價聚合物基團，目的是相應的二醇HO-R、OH在20。C和38。C具有在水中至少lwt。/。，優(yōu)選至少3wt。/。的溶解度。該二價聚合物基團R2可以處于均聚物或者嵌段或無規(guī)共聚物的形式。優(yōu)選W是衍生自一種或多種單體的重復單元的二價聚合物基團，所述的單體選自環(huán)氧乙烷，環(huán)氧丙烷，乙酸乙烯酯，乙烯醇，N-乙烯吡咯烷酮和氧雜環(huán)丁烷。用于本發(fā)明的優(yōu)選的伯二胺交聯(lián)劑包含選自下面的二價聚合物基團R:環(huán)氧乙烷的二價均聚物；和環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的二價嵌段和無規(guī)共聚物。在制備伯二胺交聯(lián)劑中有用的羥端基聚合物是如果上面所公開的市售品。該伯二胺交聯(lián)劑可以使用圖1中用于胺封端的PEG所示的路線來合成。例如，用亞硫酰溴處理PEG提供了溴封端的PEG,其可以進一步用氨處理來提供期望的伯二胺交聯(lián)劑。包含了封端的氨丙基團，合適作為伯二胺交聯(lián)劑的胺封端的PEG還可獲自NOF公司，其M、.是3400-大約20000。術語"具有至少三個臂和具有至少三個親電子端基的多臂聚醚"指的是支化的聚醚，具有至少三個用親電子端基封端的臂，其可水溶的，并且能夠與伯二胺交聯(lián)劑進行反應。多臂聚醚是具有重復單元的[-0-R的聚醚，其中W是具有2-5個碳原子的亞烴基基團。術語"亞烴基基團"指的是一種二價基團，其是通過從烴中除去兩個氫原子而形成的，每一個氬原子來自兩個不同的碳原子的每一個。在本發(fā)明中有用的多臂聚醚包括樹枝狀的、梳狀的和星型支化的和超支化的聚醚，其中至少三個臂是通過親電子端基封端的。該多臂聚醚具有大約450-大約200000道爾頓，優(yōu)選大約2000-大約40000道爾頓的重均分子量。具有至少三個臂和具有至少三個親電子端基的多臂聚醚是如下所述市售的，或者可以使用本領域已知的方法來制備。例如，其中至少三個臂是用羥基基團封端的多臂聚乙二醇(PEG)是通過根據(jù)Merrill在J.B腿ater.Sci.PolymerEdn,5,第1-11頁(1993)中的方法合成的。3、4、6和8臂星型PEG還可以/人7>司例如NektarTransformingTherapeutics;SunBio,Inc.,AnyangCity,韓國；NOFCorp.,日本東京；和JenKemTechnology美國，Allen,得克薩斯州來獲得。多臂PEG可以使用亞硫酰溴和由Biickmann等人(Makromol.Chem.l82:1379-1384,1981)所述的方法來轉(zhuǎn)化為具有親電子端基的多臂聚醚。在另外一種優(yōu)選的方法中，多臂PEG可以如上面所公開的，使用亞硫酰氯來轉(zhuǎn)化為反應性氯化物。多臂PEG可以通過在非質(zhì)子溶劑例如二氯甲烷中，在堿例如三乙胺或者吡啶存在下，分別用曱烷磺?；?、曱苯磺?；?、2,2,2-三氟乙烷磺?；群腿淄榛酋；葋硖幚矶D(zhuǎn)化為甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、三氟乙磺酸酯或者三氟甲磺酸酯?；?的多臂PEG，其具有羧酸、羧酰卣或者反應:生羧酸酯々:基。這些材料是通過按照圖2中所示的路線合成來獲得的，其中多臂PEG-OH表示具有至少三個臂，優(yōu)選4-8個的臂的多臂PEG,所述的臂是羥基基團封端的。在該路線中，基本上全部的端鞋基基團轉(zhuǎn)化為所示的不同的衍生物。對于制備羧端基多臂PEG聚合物有用的不同的路線類似于圖1中所述的用于雙官能交聯(lián)劑的那些路線。例如，作為示例，胺封端的多臂PEG可以用琥珀酸酐處理來轉(zhuǎn)化為羧基封端的PEG,以提供羧基封端的多臂PEG(XIIa)。戊二酸酸肝、己酸酸酐、己二酸酸酐、馬來酸酸酐和氧聯(lián)雙乙酸酸酐可以用以代替琥珀酸酐來產(chǎn)生多種羧基封端的多臂PEG。表3列出了幾種在本發(fā)明中有用的羧基封端的多臂PEG。表3No.式結(jié)構<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>式(Xa-d)和(XIIa-e)的羧基封端的多臂PEG可以進一步分別用亞硫酰氯或者亞硫酰溴處理來轉(zhuǎn)化為?；然蛘啧；寤铩Ｗ鳛槭纠?，羧基封端的多臂PEG可以通過用二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和N-羥基琥珀酰亞胺處理(XIIa)來進一步轉(zhuǎn)化為反應性酯，以提供圖2的式(XIIIa)的N-氧琥珀酰亞胺酯。許多其它的PEG封端的活化酯，包括4-硝基苯基，2，4-二硝基苯基或者五氟苯基可以以類似的方式，分別使用DCC和4-硝基苯酚、2，4-二硝基苯酚和五氟苯酚來制得。表4列出了作為本發(fā)明的雙官能交聯(lián)劑有用的幾種活化的酯封端的多臂PEG。表4No.式結(jié)構(xme)多臂PEG-NH^^5j^C02—N^/卿g)(xnih〉(XIHi)多臂PEG-O多臂PEG-O'o多臂PEG-0~4r,co2oN〉o一些具有親電子端基的多臂聚醚是市售的。例如，在SUNBRIGHT商標名下，NOF美國公司提供四臂PEG-四戊二酰基NHS活化酯，四臂PEG-四己酸NHS酯，四臂PEG四-(4-硝基苯基)碳酸酯，8臂PEG-八戊二?；鵑HS和8-臂PEG-八(4-硝基苯基)碳酸酯。在本發(fā)明中有用的其他優(yōu)選的具有親電子端基的多臂聚醚包括醛封端的多臂PEG。例如，多臂PEG-OH可以在THF中用萘基鈉進行處理，隨后用2-溴乙醛縮二乙醇進行烷基化并水解該縮醛來提供來提供乙醛封端的多臂PEG。以類似的方式，3-溴丙醛縮二乙醇可以用來提供丙搭封端的多臂PEG。在一種優(yōu)選的實施方案中，在具有親電子端基的多臂聚醚中，該親電子端基選自-OMs，-OTs,-OTf，三氟乙磺酸酯，CI,Br和I;并且步驟(b)包含將擴鏈聚合物與足夠的氨反應來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物。用于這種實施方案的一種優(yōu)選的第三反應溶劑選自Ci-C6脂肪族醇，并且最優(yōu)選的溶劑是乙醇。在這種實施方案以及此處討論的全部其它實施方案中，所述的擴鏈聚胺產(chǎn)物包括用堿完全中和的產(chǎn)物、用堿部分中和的產(chǎn)物、或者被完全質(zhì)子化形成銨鹽。該擴鏈聚胺產(chǎn)物的中和程度是衍生它的溶液的pH的函數(shù)，并且無論是否通過滲析或者其它清洗手段除去鹽，其全部都落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，如果期望這樣，則擴鏈聚胺產(chǎn)物可以有過量很多的氨存在，并且通過滲析的進一步的處理會基本上除去全部的銨鹽副產(chǎn)物。在另外一種優(yōu)選的實施方案中，在具有親電子端基的多臂聚醚中，該親電子端基選自-OMs，-OTs，-OTf,三氟乙磺酸酯，CI，Br和I;并且步驟(b)包含步驟(i)將擴鏈聚合物與堿金屬疊氮化物反應來提供擴鏈的疊氮基聚合物；和(ii)將該擴鏈疊氮基聚合物用還原劑還原來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物。還原劑可以是任何的一種或多種已知的在將有機疊氮化物轉(zhuǎn)化為伯胺中有用的還原劑，包括選自下面的這些氫和選自Pt,Pd，Pt02,PdCl2,和阮內(nèi)鎳的金屬催化劑；三苯基膦；氫化鋁鋰；硼氫化物，其選自硼氫化鈉，硼氫化鋅和氨基硼氫化鋰，其中所述的胺選自二乙胺，二異丙胺，吡咯烷，哌啶和嗎啉；金屬和金屬鹽，其選自鋅和錫(II)的氯化物；和甲酸銨。用于步驟(i)的優(yōu)選的第三反應溶劑是極性非質(zhì)子溶劑例如N,N-二曱基曱酰胺或者N，N-二曱基乙酰胺。堿金屬疊氮化物優(yōu)選是疊氮化鈉。如果使用金屬催化劑，則其優(yōu)選是分散于木炭或者硅石中。金屬催化劑或者其它殘留的還原劑理想的是在還原步驟完成后除去。該實施方案能夠提供基本上不含銨鹽的擴鏈聚胺產(chǎn)物。在另外一種優(yōu)選的實施方案中，在具有親電子端基的多臂聚醚中，該親電子端基是羧酸；步驟(a)進一步包含二酰亞胺脫水劑；并且步驟(b)包含霍夫曼(Hofmann)型重排，其包含下面的步驟(i)將擴鏈聚合物與足量的?；赵噭┻M行反應來提供擴鏈的酰基囟聚合物；(ii)將該擴鏈的?；站酆衔锱c足夠的氨反應來提供擴鏈的伯酰胺聚合物；和(iii)將該擴鏈伯酰胺聚合物與足夠的活性卣素源和堿金屬氫氧化物反應來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物；如下面的方案所示o(XHa)多臂PEG-NHo1.SOCl2V2.NH3O'多臂PEG-NH^v^v^A^,uO1.NaOCLNaOH多臂PEG-NHNH2O21在這種實施方案中，步驟(a)所用的二酰亞胺脫水劑優(yōu)選是二環(huán)己基碳二亞胺。在步驟(l)中，?；赵噭┦侨魏蔚孽；?，其典型的用于將羧酸轉(zhuǎn)化為狻酰氯，并且優(yōu)選選自亞好u酰氯，亞石危酰溴，草酰氯和三氯氧化磷；并且步驟(i)典型的是在非質(zhì)子溶劑例如曱苯、THF或者二氯曱烷中進行的。在步驟(iii)中，活性鹵素源是任何的親電子氯和溴源，并優(yōu)選選自氯、溴、次氯酸鈉、次溴酸鈉、次氯酸鉀、次溴酸鉀、N-氯琥珀酰亞胺，和N-溴琥珀酰亞胺。其它親電子氯和溴源例如(二乙酸基碘代)苯和[雙(三氟乙酸基)碘代]苯同樣是有用的。堿金屬氫氧化物優(yōu)選選自氫氧化鈉、氬氧化鉀和氫氧化鋰。優(yōu)選步驟(iii)是在溶劑中進行的。一種優(yōu)選的溶劑是水。在另外一種優(yōu)選的實施方案中，在具有親電子端基的多臂聚醚中，該親電子端基是羧酸；步驟(a)進一步包含二酰亞胺脫水劑；并且步驟(b)包含庫爾提斯(Curtius)型重排，其包含下面的步驟(i)將擴鏈聚合物與足量的?；|試劑進行反應來提供擴鏈的?；站酆衔?；(ii)將該擴鏈的酰基卣聚合物與足夠的堿金屬疊氮化物反應來提供擴鏈的?；B氮聚合物；和(iii)加熱該擴鏈的?；B氮聚合物(優(yōu)選在質(zhì)子性溶劑例如水中)來引起重排，以提供擴鏈聚胺產(chǎn)物；如下面的方案所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>在步驟(11)中堿金屬疊氮化物優(yōu)選是疊氮化鈉；并優(yōu)選所用的極性非質(zhì)子溶劑是例如THF或者乙腈。在步驟(iii)中優(yōu)選使用質(zhì)子性溶劑例如水，并且優(yōu)選加熱到大約70-100°C。在另外一種優(yōu)選的實施方案中，在具有親電子端基的多臂聚醚中，該親電子端基是活化的羧酸酯或者羧酰氯；并且步驟(b)包含霍夫曼型重排，其包含下面的步驟(i)將擴鏈聚合物與足夠的氨反應來提供擴鏈的伯酰胺聚合物；和(ii)將該擴鏈伯酰胺聚合物與足夠的活性卣素源和堿金屬氫氧化物反應來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物。在另外一種優(yōu)選的實施方案中，在具有親電子端基的多臂聚醚中，該親電子端基是活化的羧酸酯或者羧酰卣；并且步驟(b)包含庫爾提斯型重排，其包含下面的步驟(i)將擴鏈聚合物與足夠的堿金屬疊氮化物反應來提供擴鏈的酰基疊氮聚合物；和(ii)加熱該擴鏈的酰基疊氮聚合物(優(yōu)選在質(zhì)子性溶劑例如水中)來引起重排，以提供擴鏈聚胺產(chǎn)物。合適的羧酰面包括羧酰氟、氯、溴和碘。優(yōu)選的羧酰卣是羧酰氯。在另外一種優(yōu)選的實施方案中，在具有親電子端基的多臂聚醚中，該親電子端基是醛，并且步驟(b)包含下面的步驟(i)將擴鏈聚合物與足夠的氨反應來提供擴鏈的亞胺聚合物；和(ii)還原該擴鏈的亞胺聚合物來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物；如下面的方案所示多臂PEG-O"-^*CHONH3NaCNBH3多臂PEG-ONH2步驟(i)優(yōu)選是在質(zhì)子性溶劑例如乙醇中進行；并且如果期望，則一種酸性催化劑例如鹽酸可以存在。步驟(ii)可以用氬化物還原劑例如三乙酸基硼氬化鈉、氰基硼氬化鈉等來進行?？蛇x擇的，步驟(ii)可以用金屬催化劑和氫氣來進行。金屬催化劑可以是貴金屬，包括Pt，PtCl4,Pt02,Pd等，優(yōu)選是在載體例如炭黑或硅石上。金屬催化劑還可以是阮內(nèi)鎳或者其它已知的將碳氮雙鍵還原成伯胺的過渡金屬催化劑。步驟(ii)優(yōu)選是在質(zhì)子性溶劑例如乙醇、曱醇、水等中進行。本發(fā)明衍生自伯二胺交聯(lián)劑的擴鏈聚胺產(chǎn)物進一步的特征在于通23過尺寸排阻色譜法(SEC)所測定的Mw比用于制造該擴鏈聚胺產(chǎn)物的多臂聚醚的Mw高出至少大約10%。本發(fā)明的擴鏈聚胺產(chǎn)物在配制聚合物組織粘合劑中是有用的。聚合物組織粘合劑是通過將氧化多糖與本發(fā)明的擴鏈聚胺產(chǎn)物反應而形成的，所述的反應是以類似于Kodokian等人在US2006/0078536Al中所述的方式進行的，通過引用并入本文。如同表5和7分別所證實的那樣，與沒有所述的擴鏈聚胺產(chǎn)物的配方相比，衍生自本發(fā)明的擴鏈聚胺的組織粘合劑通常表現(xiàn)成提高的彈'性和在水性環(huán)境中改進的穩(wěn)定性。實施例本發(fā)明進一步在下面的實施例中說明。應當理解所給出的這些實施例雖然用于表示本發(fā)明優(yōu)選的實施方案，但是它們的目的僅僅是為了說明。從上面的討論和這些實施例，本領域技術人員能夠明白本發(fā)明的本質(zhì)特性，并且不脫離其主旨和范圍，本領域技術人員能夠?qū)Ρ景l(fā)明進行不同的變化和改變來使其適應不同的用途和條件。所用的縮寫詞的含義如下"min，，表示分鐘，"h"表示小時，"mL"表示毫升，"L"表示升，"juL"表示微升，"mol"表示摩爾，"mmol"表示毫摩爾，"g"表示克，"mg"表示毫克，"mm"表示毫米，"Pa"表示帕斯卡，"kPa，，表示千帕斯卡，"psig"表示磅每平方英寸(表壓)，"wt%"表示重量百分比，"PEG"表示聚(乙二醇)，"MW"表示名義分子量，"Mw"表示重均分子量，"Mn，，表示數(shù)均分子量，"Mz"表示z均分子量，"dn/dc"表示比折光指數(shù)增值(即，每濃度變化的折射率變化)，"IV"表示特性粘度，"MHz"表示兆赫，"SEC"表示尺寸排阻色語法，"PBS"表示磷酸鹽緩沖鹽水，"HNMR"表示質(zhì)子核磁共振波語法，"DMSO-d6"表示氘化的二曱基亞砜，"Ac"表示乙酸根基團，和"RT"表示室溫。一般方法試劑右旋糖苷(MW40000)購自Sigma-Aldrich(StLouis，MO)。具有通過伯胺基團封端的八個臂的8臂PEG胺(MW二10000)購自NektarTransformingTherapeutic(Huntsville,AL)。高碘酸鈉(99%純度，CASNo.7790-28-5)購自AcrosOrgamcs(MornsPlains,新澤西)。除非另有指示，否則全部的其它試劑獲自Sigma-Aldrich。氧化右旋糖苷的制備使用下面的程序(類似于在Azzam,T.;Raskin,A.;Makovitzki，A.;Brem,H.;Vierling，P.;Lineal,M.;Domb,A.J.Macromolecules2002，35,9947-9953中所公開的程序)從分子量為10000道爾頓的右旋糖苷來制備右旋糖苷二醛，其具有大約48%的醛成分轉(zhuǎn)化率。類似的程序用于具有40000、60000和250000道爾頓分子量的右旋糖苷。如下所述，通過改變所用的高碘酸鹽溶液的濃度來獲得其它的醛轉(zhuǎn)化率。將右旋糖苷(18.9g)加入在500mL圓底燒〗f瓦中的170.1g蒸餾水中(來得到10wt。/。水溶液)。將該溶液攪拌15-30min。然后，將在158.4g蒸餾水中17.6g的NalO4(10wt。/。水溶液)加入到該右旋糖苷溶液中。該高碘酸鹽溶液的濃度可以根據(jù)期望的醛轉(zhuǎn)化率來變化。將該混合物在室溫攪拌5h。此后，將溶液從圓底燒瓶除去，分成四個等體積份，并分配到4個滲析膜管(MEMBRA-CELTM滲析管，3500道爾頓的分子量分離點(cutoff)，獲自ViskaseCompanies,Inc.,Willowb謂k,IL)中。對于具有40000、60000和250000道爾頓分子量的右旋糖苷，使用14000道爾頓分離點的滲析膜管(ViskaseCompanies,Inc.)。將該滲析管插入到含有4.5L蒸餾水的5L燒瓶中，并滲析高到4天。在該滲析過程中，將蒸餾水在2天后更換。將樣品從滲析膜管中除去并放入冷凍干燥機容器中。使用液氮冷凍該樣品并放入冷凍干燥機24-48h或者直到全部的水蒸發(fā)。使用下面的方法來測量所形成的氧化右旋糖普中的二醛含量。將氧化右旋糖苷(0.1250g)加入到在250mL厄倫美厄(Erlenmeyer)燒瓶中的10mL的0.25MNaOH中。將該混合物輕輕地回蕩，然后放入40。C的溫度受控的超聲波粉碎器浴中5min，直到全部的材料溶解，得到暗黃色溶液。將樣品從浴中除去，并立即在冷自來水下冷卻5min。然后，將15.00mL的0.25MHC1加入到該溶液中，隨后加入50mL蒸餾水和lmL的0.2%酚酞溶液。使用50mL滴定管用0.25MNaOH滴定該溶液，通過從黃色到紫紅色/紫色的顏色變化來確定終點。使用下面的式子來計算在氧化右旋糖苦樣品中的二醛含量(在此處也被稱為氧化轉(zhuǎn)化率)二醛含量=(Vb—Va)s(Vb-Va)p-------...................X100(%)Ws/MWp/MVb^咸的總毫克當量Va二酸的總毫克當量W^干樣品重量(mg)M-重復單元的分子量-162S-氧化的樣品P-初始4羊品MW10000的8-臂星型PEG氯化物的合成。該8-臂星型PEG氯化物是以下面的方式，通過將8-臂星型PEG-OH與亞石危酰氯在無溶劑下進行反應而制備的8-臂星型PEG-OH(MW10000,通過羥基端基滴定來測定，并假定全部的聚合物分子具有八個臂)獲自NOF美國公司(WhitePlains,紐約)。該8-臂星型PEG-OH(00g,在500mL的圓底燒瓶中)的干燥是通過下面兩種方式來進行的在85。C真空(0.06mm汞柱(8.0Pa))攪拌加熱4h，或者與50g甲苯在減壓下(5mm汞柱(2kPa))和6CTC的釜溫下共沸蒸餾。使該8-臂星型PEG-OH冷卻到室溫。然后，將亞硫酰氯(35mL,0.48mol)加入到裝備有回流冷凝器的燒瓶中，并將該混合物在85。C和氮氣氛下攪拌加熱24h。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去多余的亞硫酰氯(浴溫40°C)。將兩個連續(xù)的50mL甲苯部分加入并在減壓(15mm汞柱(2kPa),浴溫60°C)下蒸發(fā)來完全除去亞硫酰氯。8-臂星型PEG-C1的產(chǎn)率是100.9g(99%)。]H薩R(500MHz,DMSO-d6):53.71-3.69(m,16H),3.67-3.65(m，16H),3.50(s,800H)。通過光散射的帶有質(zhì)量分析的水性SEC[30。C,PBS(10mM磷酸鹽,2.7mMKCl，0.137MNaCl,pH7.4),0.5mL/min,兩個SupremaLinearM混合床柱(PolymerStandardsServices,SilverSprings,MD),dn/dc0.135mL/g]給出Mw7100，Mw/Mn1.2,Mz/Mw1.2和IV9.1mL/g。通過如下的殘留的羥端基的乙?；饔煤?HNMR分析確定的端基轉(zhuǎn)化率是99%。將8-臂星型PEG-C1的樣品(0.2g)溶解在0.25mL乙酸酸酐和0.35mL吡啶的混合物中，并在環(huán)境溫度放置一整夜。通過加入5g冰猝滅反應。將水性層用三個3mL部分的氯仿進行萃取，并將合并的氯仿萃取液用三個lmL部分的20%石克酸氫鈉水溶液、兩個lmL部分的碳酸氫鈉飽和水溶液和lmL水連續(xù)清洗。在減壓下蒸發(fā)氯仿。將殘留物溶26解在2mL水中，并將所形成的混濁溶液在減壓下濃縮直到透明，來除去殘留的氯仿。將溶液冷凍和冷凍干燥，將殘留物溶解在DMSO-d6中并用^NMR進行分析。在該8-臂星型PEG-C1中殘留的羥端基的比例是通過將-CH20Ac端基的]HNMR峰[5409(t,J=4.7Hz,2H,CAc)和2.00(s，3H,AcO)]的積分與CH2C1端基[53.72-3.68(m,2H，CH2C1)]的積分相比較來確定的。實施例1該實施例說明MW10000的8-臂PEG-胺的合成。將八臂PEG-OH(MW10000，NektarTransformingTherapeutics,100g)在85。C真空(0.06托)攪拌加熱4-16h。將干燥的8-臂PEG冷卻到室溫(RT),加入亞硫酰氯(35mL,0.48mol),并將該混合物在85。C和氮氣氛下攪拌加熱20h。除去多余的亞硫酰氯來提供8-臂PEG-C1:NMR(500MHz，DMSO-d6)53.71-3.69(m,16H),3.67-3.65(m,16H),3.50(s,800H);通過光散射的帶有質(zhì)量分析的水性SEC[3(TC,磷酸鹽緩沖鹽(PBS，10mM磷酸鹽，2.7mMKC1,0,137MNaCl,pH7.4)，0.5mL/min,兩個'/'昆合床4i(PolymerStandardsServicesSupremaLinearM)，dn/dc0.135mL/g]給出Mw7100,Mw/Mn1.2,M美1.2和特性粘度IV9.1mL/g。將該8-臂PEG-Cl(100.9g)溶解在640mL的濃氨水(28。/。w/w)中并在密封容器中在6(TC加熱48h,導致形成大約40psig(276kPa)的壓力。將該溶液冷卻到RT,并用干燥的氮氣鼓泡2h來驅(qū)除大約50-70g的氨。使該溶液經(jīng)過氫氧化物形式的陰離子交換樹脂柱(Purolite⑧A-860,ThePuroliteCo.,Bala-Cynwyd,PA)。將洗才是液收集并在減壓下濃縮到大約200g，按多份進行冷凍和冷凍干燥來提供8-臂PEG-胺(MW10000):!HNMR(500MHz,DMSO-d6)53.50(m，800H),3.34(t,J=5.8Hz,16H),2.62(t,J=5.8Hz，16H);通過光散射的帶有質(zhì)量分析的水性SEC(條件如上所述)給出Mw10300，Mw/Mn1.5,Mz/Mw1.7，IVllmL/g。在吡啶中用過量的乙酸酸酐處理該8-臂PEG-NH2(MW10000)，并通過^NMR測量產(chǎn)物顯示-OH端基到-NH2端基的總轉(zhuǎn)化率是99%。實施例2該實施例說明MW2000的8-臂PEG-胺的合成。向冷卻到0°C的60g的MW2000的8-臂PEG-OH(NektarTransformingTherapeutics),三乙胺(69mL)和二氯曱烷(1.5L)的溶液中加入甲烷磺?；?37.5mL)。將該混合物在RT攪拌16h,減壓(15托，40。C)下濃縮到600mL，并連續(xù)的用1.0M磷酸二氫鉀(300mL)清洗三次，用飽和的碳酸鉀(300mL)清洗一次，和用水(300mL)清洗一次。將二氯曱烷層干燥(硫酸鎂)，過濾和濃縮(15托，浴溫40。C)來提供八-臂PEG曱烷石黃酸酯(90%產(chǎn)率)NMR(500MHz,DMSO-d6)54.29(m,16H),3.66(m，16H),3.50(m，30H),3.16(s,24H);通過光散射的帶有質(zhì)量分析的水性SEC(與實施例1相同)給出Mw1700,Mw/Mn1.0,M美l.O和IV9.1mL/g。將該8-臂PEG曱烷磺酸酯(22g)溶解在536mL的濃氨水(28。/。w/w)中并在密封容器中在RT攪拌48h。將該溶液用干燥的氮氣鼓泡4h來驅(qū)除〉50g的氨，濃縮(15托，60。C)到大約200g，以10g碳酸鉀使其為堿性，并用100mL的氯仿部分萃取3次。將合并的氯仿萃取液干燥p克酸鎂)，過濾和濃縮(15托，4CTC)。將殘留物承載到300mL二氯曱烷中，過濾來除去不溶物，并濃縮(15托，4(TC)和千燥(0.06托)來得到8-臂PEG-NH2(MW2000):NMR(500MHz,DMSO-d6)53.51(m,130H)，3.35(t,JN5.8Hz,16H),2.63(t,J-5.8Hz,16H)。實施例3該實施例說明MW10000的6-臂PEG-胺的合成。將6-臂PEG-OH(MW10000,SunBio,Inc.,Orinda,CA;50g)在90'C(O.l托)攪拌加熱16h來干燥。冷卻該干燥的6-臂PEG到RT,加入亞硫酰氯(13mL,0.18mol),并將該混合物在90°C和氮氣氛下攪拌加熱16h。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(4(TC)除去多余的亞硫酰氯。將兩個連續(xù)的25mL甲笨部分加入并在減壓(15托，6(TC)下蒸發(fā)來完全除去亞硫酰氯。將產(chǎn)物在90。C攪拌(0.06托)干燥來提供6-臂PEG-Cl(49.0g,97%產(chǎn)率)]HNMR(500MHz,DMSO-d6)53.71-3.69(m,12H),3.67-3.65(m,12H)，3.50(s,620H);通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出M、v7300,Mw/Mn1.2,Mz/Mwl.l和IV9.9mL/g。將該6-臂PEG-Cl(48.9g)溶解在232mL的濃氨水(28。/ow/w)中并在密封容器中在6(TC加熱48h。將該溶液用干燥的氮氣鼓泡2h,然后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(15托，60。C)濃縮到大約160g。然后將該溶液通過氫氧化物形式的強堿性陰離子交換樹脂(Purolite⑧A-860)柱(450mL的床體積)。收集洗提液，并將三個200mL部分的去離子水通過所述的柱并收集。合并水性部分，濃縮(15托，6(TC)到大約130g,以多份冷凍和冷凍干燥來得到6-臂PEG-胺(MW10000,46.6g,96%產(chǎn)率)HNMR(500MHz,DMSO-d6)53.50(m，700H),3.34(t,JN5.8Hz,12H)，2.63(t，J=5.8Hz，12H);通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出Mw10000,Mw/Mn1.3,Mz/Mw1.4,IV5.7mL/g。實施例4該實施例說明MW2000的4-臂PEG-胺的合成將4-臂PEG-OH(MW2000,NOF美國，100g)加入到88mL(1.2mo1)的冷凍到-78。C的亞碌^酰氯中。將該攪拌的混合物升溫到RT,然后在60。C和氮氣氛下加熱20h。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(40。C)除去多余的亞硫酰氯，并加入兩個連續(xù)的50mL部分的甲苯，減壓蒸發(fā)(15托，60。C)來完成除去亞硫酰氯。將該產(chǎn)物在RT和攪拌(0.06托)下干燥來提供4-臂PEG-C1:!HNMR(500MHz,DMSO-d6)53.72-3.68(m,8H),3.68-3.64(m,8H),3.58-3.44(m,170H),3.31(s,8H)。將該4-臂PEG-Cl(100g)和1000g無水氨在密封容器中在60。C加熱48h(形成360psig的壓力)。冷卻反應混合物到RT,使得多余的氨蒸發(fā)。將所形成的殘留物溶解到大約700mL的去離子水中。將所形成的溶液通過氫氧化物形式的陰離子交換樹脂柱(Purolite⑧A-860,ThePuroliteCo.,Bala-Cynwyd,PA)。收集洗提液并減壓濃縮來得到4-臂PEG-胺(MW2000):!HNMR(500MHz,CDC13)53.70-3.47(m,170H)，3.45(t,J=5.2Hz,8H),3.35(s,8H),2.80(m,8H);通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(條件如上所述)給出Mw2400，Mw/Mn1.4，Mz/Mw1.5，IV2mL/g。實施例5該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG4000二曱磺酸酯的合成。向溶解在140mL的二氯曱烷中的PEG(20g,MW4000)中加入2.9mL三乙胺和1.6mL甲烷磺酰基氯。將該混合物在RT攪拌，用200mL氯仿稀釋，用3xl00mL的1M磷酸二氬鉀清洗，隨后用100mL飽和碳酸鉀清洗，干燥(硫酸鎂)，過濾和蒸發(fā)(15托，40°C)。將產(chǎn)物干燥(0.06托)來提供PEG4000二甲磺酸酯(9.8g,95%產(chǎn)率)^NMR(500MHz,DMSO-d6)54.29(m,4H)，3.66(m,4H),3.50(m,360H),3.16(s,6H);通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出Mw3700，Mw/Mnl.l,Mz/Mw1.0和IV5.1mL/g。實施例6該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG6000二曱磺酸酯的合成。向溶解在95mL的二氯曱烷中的PEG(20g，MW6000)中加入1.9mL三乙胺和l.OmL曱烷磺?；?。將該混合物以類似實施例5的方式處理來提供PEG4000二甲磺酸酯(17.4g,85%產(chǎn)率)'HNMR(500MHz，DMSO-d6)54.29(m，4H)，3.64(m，4H)33.55(m,580H)，3.15(s，6H);通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出Mw4900，MwZMnl.l，Mz/Mwl.l和IV6.5mL/g。實施例7該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG8000二甲石黃酸酯的合成。向溶解在70mL的二氯甲烷中的PEG(20g,MW8000)中加入1.5mL三乙胺和0.8mL甲烷磺?；取⒃摶旌衔镆灶愃茖嵤├?的方式處理來提供PEG8000二曱磺酸酯(16.4g,80%產(chǎn)率)HNMR(500MHz,DMSO-d6)54.29(m，4H),3.64(m,4H),3.55(m,700H),3.15(s,6H);通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出Mw6900，Mw/Mnl.1,M美1.1和IV8.2mL/g。實施例8該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW185O)二甲磺酸酯的合成。向溶解在200mL的二氯甲烷中的Pluronic-L43(10g，MW1850)中加入6.0mL三乙胺和3.3mL甲烷磺?；?。將該混合物以類似實施例5的方式處理來提供PEG-PPG-PEGMWl850二曱磺酸酯(9.0g,83%產(chǎn)率)'HNMR(500MHz,DMSO-d6)S4.29(m,4H)，3.66(m,4H),3.50(m,116H)，3.16(s,6H)，1.03(d,J=5.9Hz,75H);通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[30。C，.5mL/min，dn/dc0.060mL/g]給出Mw2000，Mw/Mnl.l,Mz/Mwl.l和IV7.9mL/g。實施例9該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW2200)二曱磺酸酯的合成。根據(jù)實施例8的方法，將10g的PluromcL44(MW2200)在200mL二氯甲烷中與4.9mL三乙胺和2.7mL甲烷磺?；确磻獊淼玫?在后處理之后)8.8g(82。/o產(chǎn)率)。!H畫R(500MHz，DMSO-d6):54.28(m,4H),3.67(m,4H),3.50(m,146H),3.16(s，6H),1.03(d，J=6.1Hz,~66H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[3(TC,.5mL/min,dn/dc0.060mL/g]給出了Mw2400，Mw/Mnl.l,Mz/Mwl.1和IV7.9mL/g。實施例10該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW4200)二曱磺酸酯的合成。根據(jù)實施例8的方法，將20g的PluronicP84在135mL二氯甲烷中與2.7mL三乙胺和1.5mL曱烷磺酰基氯反應來得到(在用25mL部分的1M磷酸二氫鉀和飽和碳酸鉀后處理之后)20.4g(99%產(chǎn)率)。&NMR(500MHz,DMSO-d6):54.29(m,4H),3.66(m，4H),3.50(m,260H)，3.16(s,6H)，1.03(d,J=5.9Hz，130H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[30。C,.5mL/min，dn/dc0.060mL/g]給出Mw4300,Mw/Mn1.1，Mz/Mw1.1和IV12mL/g。實施例11該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW4400)二甲磺酸酯的合成。根據(jù)實施例8的方法，將20g的PluronicL121在130mL二氯甲烷中與2.7mL三乙胺和1.5mL曱烷磺?；确磻獊淼玫?在用50mL部分的1M磷酸二氫鉀和飽和碳酸鉀后處理之后)19.2g(93Q/。產(chǎn)率)?！紿NMR(500MHz,DMSO-d6):54.29(m,4H),3.66(m，4H),3.50(m,~230H)，3.16(s,6H)，1.03(d,J=5.9Hz，180H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[3CTC，.5mL/min,dn/dc0.060mL/g]給出Mw3800,Mw/Mnl.l,M美l.l和IV13mL/g。實施例12該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW5750)二曱磺酸酯的合成。根據(jù)實施例8的方法，將20g的PluronicP123在100mL二氯曱烷中與2.0mL三乙胺和l.lmL甲烷磺?；确磻獊淼玫?在用35mL部分的1M磷酸二氫鉀和飽和碳酸鉀后處理之后)17.1g(83。/。產(chǎn)率)。NMR(500MHz，DMSO-d6):54.29(m,4H),3.66(m,4H)，3.50(m,~300H),3.16(s，6H),〗.03(d，J=5.9Hz,194H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[30。C,.5mL/min，dn/dc0.060mL/g]給出Mw4900,Mw/Mnl.l，Mz/Mwl.l和IV15mL/g。實施例13該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW5900)二曱磺酸酯的合成。才艮據(jù)實施例8的方法，將20g的PluromcP104在lOOmL二氯甲烷中與1.9mL三乙胺和1.0mL曱烷磺酰基氯反應來得到(在用30mL部分的M磷酸二氫鉀和飽和碳酸鉀后處理之后)19.0g(92。/o產(chǎn)率)。巾薩R(500MHz,DMSO-d6):M.29(m,4H)3.67(m,4H),3.50(m,~350H),3.15(s，6H)，1.03(d，JN5.9Hz，172H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[30。C,.5mL/min,dn/dc0.060mL/g]給出Mw5800,Mw/Mn1.1，Mz/Mw.1和IV14mL/g。實施例14該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW65OO)二曱磺酸酯的合成。根據(jù)實施例8的方法，將20g的PluronicP105在90mL二氯甲烷中與1.8mL三乙胺和l.OmL甲烷磺?；确磻獊淼玫?在用35mL部分的1M磷酸二氫鉀和飽和碳酸鉀后處理之后)17.8g(87。/。產(chǎn)率)。]HNMR(500MHz,DMSO-d6):54.29(m,4H),3.67(m,4H),3.50(m,460H),3.16(s,6H)，1.03(d,J=5.9Hz,~170H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[30。C,.5mL/min，dn/dc0.060mL/g]給出Mw5300，Mw/MnU,Mz/Mwl.l和IV15mL/g。實施例15該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW6600)二曱磺酸酯的合成。將PluronicF77(20g)根據(jù)實施例14的方法進行曱基磺?；瘉淼玫?3.3g(65。/。產(chǎn)率)。HNMR(500MHz,DMSO-d6):54.29(m,4H)，3.67(m,4H),3.50(m，520H)，3.16(s,6H)，1.03(d,J=6.1Hz，100H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[30。C,.5mL/min，dn/dc0.060mL/g]給出Mw5500,Mw/Mn1.0,Mz/Mw1.0和IV17mL/g。實施例16該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW8400)二曱磺酸酯的合成。根據(jù)實施例8的方法，將20g的PluronicF68在70mL二氯甲烷中與1.4mL三乙胺和0.75mL曱烷磺?；确磻獊淼玫?在用25mL部分的1M磷酸二氫鉀和飽和碳酸鉀后處理之后)16.9g(83%產(chǎn)率)。^NMR(500MHz,DMSO-d6):54.29(m,4H)，3.67(m，4H),3.50(m，660H)，3.16(s，6H)，1.03(d,J=6.1Hz,90H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[3(TC,.5mL/min，dn/dc0.060mL/g]給出Mw8000,Mw/Mn1.0,Mz/Mw1.0和IV18mL/g。實施例17該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW11400)二曱磺酸酯的合成。才艮據(jù)實施例8的方法，將20g的PluronicF88在50mL二氯曱烷中與l.OmL三乙胺和0.54mL甲烷磺酰基氯反應來得到(在用150mL氯仿稀釋以及用15mL部分的1M磷酸二氫鉀和飽和碳酸鉀后處理之后)20g(99y。產(chǎn)率)。！HNMR(500MHz,DMSO-d6):54.29(m，4H),3.67(m,4H),3.50(m,1000H),3.16(s,6H),1.03(d,J=6.1Hz,120H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[3(TC,.5mL/min,dn/dc0.060mL/g]給出Mw9400,Mw/Mn1.0，Mz/Mw1.0和IV25mL/g。實施例18該實施例說明雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(MW14600)二曱磺酸酯的合成。根據(jù)實施例8的方法，將20g的PluronicF108在50mL二氯曱烷中與0.76mL三乙胺和0.42mL甲烷磺酰基氯反應來得到(在用150mL氯仿稀釋以及用lOmL部分的1M磷酸二氬鉀和飽和石友酸鉀后處理之后)20g(99。/。產(chǎn)率)。'HNMR(500MHz,DMSO-d6):54.30(m，4H),3.67(m,4H)，3.50(m,1200H),3.16(s,6H)，1.03(d,J=6.0Hz,150H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[30°C,.5mL/min，dn/dc0.060mL/g]給出Mw13000，Mw/Mnl.l,Mz/Mwl.1和IV3lmL/g。實施例19該實施例說明雙官能交聯(lián)劑聚氧雜環(huán)丁烷(MW2013)二曱磺酸酯的33合成。聚氧雜環(huán)丁烷是根據(jù)Sunkara和Ng在美國專利申請2005/0020805A1中所述的方法來制備的。根據(jù)實施例8的方法，將20g聚氧雜環(huán)丁烷(MW2013)在125mL二氯曱烷中與5.6mL三乙胺和3.1mL甲烷磺?；确磻獊淼玫?在用100mL氯仿稀釋以及用90mL部分的1M磷酸二氫鉀和飽和碳酸鐘整理之后)18.3g(85。/。產(chǎn)率)。'HNMR(500MHz，DMSO-d6):54.22(t,J=6.3Hz,4H),3.37(m,120H)，3.13(s,6H),1.88(五重峰,J=6.3Hz,4H),1.68(五重峰，》6.3Hz，60H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的在THF中的SEC[30°C,.5mL/min,dn/dc0.060mL/g]給出Mw2960,Mw/Mn1.5,Mz/Mw1.4和IVUmL/g。實施例20該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG胺和雙官能交聯(lián)劑PEG6000二曱磺酸酯。向溶解在2mL的DMF和lmL的二氯曱烷中的l.Og的8-臂PEG-胺(MW10000,實施例l)中加入31mg的溶解在lmL的二氯甲烷中的PEG6000二曱磺酸酯(實施例6)。在將該混合物室溫攪拌一整夜之后，將其過濾、用lOmL氯仿稀釋并用3x2mL的飽和碳酸鉀清洗。將合并的水性洗滌液用lmL氯仿反萃取。將合并的氯仿層用硫酸鎂干燥、過濾和蒸發(fā)(15托，40°C)。加入水(l-2g)到殘留物中，得到混濁溶液，將其簡單濃縮(15托，4(TC)來除去二氯曱烷和氯仿。將該澄清溶液冷凍和冷凍干燥來得到0.98g(95。/o產(chǎn)率)。&麗R(500MHz,CDC13),53.59(m,~960H)，3.46(t,J=5.2Hz,16H),2.81(t，J=5.2Hz，14H),2.76(t,J=5.5Hz,2H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出擴鏈聚胺的Mw為17860,相比較而言8-臂PEG-胺起始材料的Mw為13170。實施例21該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG8000二甲磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MWIOOOO,實施例l)與41mg的PEG8000二甲磺酸酯(實施例7)反應來得到0.87g(84。/o產(chǎn)率)。]HNMR(500MHz，CDC13)53.58(m，1200H),3.48(t,J=5.2Hz,16H),2.82(t,JN4.8Hz,14H)，2.74(t，J=5.4Hz，2H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出擴鏈聚胺的Mw為18520,相比的Mw為13170。實施例22該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluronicL43)二甲磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MW10000，實施例l)與10mg的PEG-PPG-PEG(MW1850)二甲磺酸酉旨(實施例8)反應來得到0.87g(86。/。產(chǎn)率)。'HNMR(500MHz，CDC13)53.59(m,854H)，2.85(m,14H),2.76(m,2H)，1.09(m,2.8H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出擴鏈聚胺的Mw為16500，相比較而言8-臂PEG-胺起始材料的Mw為8730。實施例23該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluronicL44)二甲磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MW10000,實施例l)與12mg的PEG-PPG-PEG(Pluronic⑧L44)二甲磺酸酯(實施例9)反應來得到0.85g(84。/。產(chǎn)率)。^NMR(500MHz，CDC13)53.59(m,754H),3.50(t，J=5.2Hz,16H),2,85(m,14H),2.76(m,2H)，1.09(m,3H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例1)給出擴鏈聚胺的Mw為12600,相比較而言8-臂PEG-胺起始材料的Mw為8730。實施例24該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluronicP84)二甲磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MWIOOOO,實施例l)與22mg的PEG-PPG-PEG(PluromcP84)二甲磺酸酯(實施例IO)反應來得到0.76g(74。/。產(chǎn)率)。!HNMR(500MHz,CDCL3)53.59(m,~754H)，3'50(t，J=5.2Hz，鹿)，2.85(t,J=5.1Hz，14H)，2.76(t,J=5.4Hz,2H),1.09(m,3H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出擴鏈聚胺的Mw為12600,相比較而言8-臂PEG-胺起始材料的Mw為8730。實施例25該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluronicP123)二曱磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MW10000，實施例l)與29mg的PEG-PPG-PEG(PluronicP123)二曱磺酸酉旨(實施例12)反應來得到0.91經(jīng)(89%產(chǎn)率)。'HNMR(500MHz,CDC13)53.60(m,934H),3.47(t，風8Hz,16H),2.82(t，J=4.8Hz,14H)，2.76(t，J=5.4Hz,2H),1.09(m,IOH)。實施例26該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluronicP104)二曱磺酸酯。向溶解在80mL的DMF和40mL的二氯曱烷中的40g的8-臂PEG-胺(MWIOOOO，實施例l)中加入1.22g的溶解在40mL二氯曱烷中的PEG-PPG-PEG(PluromcP104)二甲磺酸酯(實施例13),并將該混合物在RT攪拌一整夜。將混合物過濾、用300mL的氯仿稀釋和用3x80mL飽和碳酸鉀清洗。將合并的水性洗滌液用40mL氯仿反萃取。將合并的氯仿層干燥(硫酸鎂)、過濾和蒸發(fā)(15托，4(TC)。加入水(35g)到殘留物中，得到混濁溶液，將其簡單濃縮(15托，4(TC)來除去二氯曱烷和氯仿。將澄清溶液冷凍和冷凍干燥來得到37.74g(92。/o產(chǎn)率)。^NMR(500MHz，DMSO-d6)53.50(m,880H),3.35(t，J=5.8Hz,16H),2.64(t,J=5.8Hz，16H),1.03(d,J=6.0Hz，8.0H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出擴鏈聚胺的Mw為11630,相比較而言8-臂PEG-胺起始材料的Mw為9990。實施例27該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluronicP105)二甲磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MWIOOOO,實施例l)與33mg的PEG-PPG-PEG(PluronicP105)二甲磺酸酯(實施例14)反應來得到0.97g(94。/。產(chǎn)率)。'HNMR:(500MHz,CDC13)53.58(m,1120H),2.82(m，14H),2.74(t，J=5.4Hz,2H),1.08(m,9.2H)。實施例28該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluromcF77)二甲磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MW10000,實施例l)與34mg的PEG-PPG-PEG(PluronicF77)二曱磺酸酉旨(實施例15)反應來得到0.88g(85。/o產(chǎn)率)。!H畫R:(500MHz,CDC13)53.55(m，~1040H),3.44(t，J=5.3Hz，16H),2.78(t，J=4.8Hz，14H),2.72(t,J=5.4Hz,2H),1.05(m，5.9H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出擴鏈聚胺的Mw為14810,相比較而言8-臂PEG-胺起始材料的Mw為13170。實施例29該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluronicF68)二甲磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MW10000,實施例l)與43mg的PEG-PPG-PEG(PluromcF68)二曱磺酸酉旨(實施例16)反應來得到0.56g(54。/。產(chǎn)率)。^NMR:(500MHz,CDC13)53.59(m，1160H)，3.50(t，片5.2Hz,16H)，2.85(t,J=5.2Hz，14H)，2.76(t,J=5.3Hz,2H),1.09(m,5.4H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出擴鏈聚胺的Mw為16550，相比較而言8-臂PEG-胺起始材料的Mw為13170。實施例30該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluronicF88)二曱磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MWIOOOO，實施例l)與58mg的PEG-PPG-PEG(PluronicF88)二曱磺酸酯(實施例17)反應來得到1.02g(96。/o產(chǎn)率)。'HNMR(500MHz,DMSO-d6):53.50(m,990H),3.36(t,J=5.8Hz，16H),2.65(t，J=5.8Hz,16H),1.03(d,J=6.0Hz,5.7H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出擴鏈聚胺的Mw為14140,相比較而言8-臂PEG-胺起始材料的Mw為10800。實施例31該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluromcF108)二甲磺酸酯。根據(jù)實施例26的方法，將20g的8-臂PEG-胺(MW10000,實施例l)與1.48g的PEG-PPG-PEG(Pluronic⑧F108)二甲磺酸西旨(實施例18)反應來得到20.9g(97。/。產(chǎn)率)。HNMR(500MHz，DMSO-d6):53.50(m,1060H)，3.36(t，J=5.8Hz,16H),2.65(t,J=5.8Hz,16H),1.03(d,J=6.0Hz,5.7H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出擴鏈聚胺的Mw為14820,相比較而言8-臂PEG-胺起始材料的Mw為10800。實施例32該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比8.69:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluronicP104)二甲磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MWIOOOO,實施例l)與70mg的PEG-PPG-PEG(PluronicP104)二曱磺酸酉旨(實施例13)反應來得到0.51g(48。/。產(chǎn)率)。'HNMR(500MHz,CDC13):53.59(m，~866H),3.51(t，J=5.2Hz，16H),2'85(t，J=5.0Hz,14H)，2.75(t,J=5.4Hz,2H),1.08(m，20H)。這里沒有用SEC進行洗提。實施例33(對比)粘合劑中的擴鏈聚胺的測試作為對照物，一種25重量％的MW10000的8-臂PEG-胺溶液(沒有加入擴鏈聚胺產(chǎn)物)是通過將1重量當量的8-臂PEG-胺(MW10000)溶解到3重量當量的去離子水中來制備的。類似的，一種25wt。/。的右旋糖苷二醛溶液(MWIOOOO右旋糖普，具有48%的醛轉(zhuǎn)化率，如上面的標題為"氧化右旋糖普的制備"部分所述來制備)是在去離子水中制備的。在雙管注射器(MixPacSDL005-01-50M)的一個管中裝入25重量％的右旋糖苷二醛溶液，在另外一個管中裝入25重量％的8-臂PEG-胺(MWIOOOO)的溶液，并且該注射器裝備有靜態(tài)混合管尖(tip)(12個梯級，MixPacML2.5-12-DM)。將一種粘合劑水凝膠從每個雙管注射器中擠出到玻璃片上，目的是形成大約6cm長和4-5mm直徑的延長結(jié)構。將該樣品在RT38固化并在1-2分鐘之后測定彈性。實施例34-44下面的實施例證實了將擴鏈聚胺產(chǎn)物混入到粘合劑水凝膠的PEG-胺成分中(通常，但不總是)提高了所形成的水凝膠的斷裂伸長率。來自實施例20、22-28和30-32的擴鏈聚胺產(chǎn)物的溶液(25重量％)是通過將1重量當量的擴鏈聚胺產(chǎn)物溶解在3重量當量的去離子水中來制備的。粘合劑水凝膠是從這些溶液和實施例33所述的相同的右旋糖苷二醛來制備的。每個配方和對比實施例的斷裂伸長率是根據(jù)下式來確定的，斷裂伸長率(。/。)-100x(最終長度-初始長度)/初始長度。結(jié)果表示在表5中。表5.衍生自擴鏈聚胺產(chǎn)物和8-臂PEG胺對照物的粘合劑水凝膠的斷裂伸長率實施例No.<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>a括號中的名稱表示用于制造擴鏈聚胺產(chǎn)物的二甲磺酸酯形式的雙官能交聯(lián)劑。實施例45-52豬腸體外崩裂強度下面的對比實施例45、47和50和實施例46、48、49、51和52i正實了將擴鏈聚胺產(chǎn)物混入到粘合劑水凝膠中沒有削弱所形成的水凝膠對于組織的粘合能力。在雙管注射器(MixPacSDL005-01-50M)的一個管中裝入與實施例33所述的相同的25重量％的右旋糖苷二醛溶液，并在另外一個管中裝入25、30或者50重量％的MW10000的8-臂PEG-胺溶液(作為對照)，或者裝入實施例的擴鏈聚胺產(chǎn)物，并且該注射器裝備有靜態(tài)混合管尖(8個梯級，MixPacML2.5-08-SM)。在6-8cm片段的潔凈新鮮的豬腸(獲自當?shù)氐耐涝讏?的壁上沖出0.25英寸圓孔，并將該傷口通過使用從雙管注射器中擠出的大約0.4mL的粘合刑水凝膠來封閉。在粘合劑固化2-5分鐘之后，將所述腸片段的兩端夾緊封閉。將14號的注射器針頭插過腸壁進入到腸內(nèi)腔中，所述的針通過塑料管道與裝備有壓力表的注射器泵(型號No.22，HarvardApparatus,Holliston，MA)相連接。將該腸片段浸沒到透明的水槽盤中，并將空氣通過注射器泵以11mL/h速度泵入到腸片段中。記錄每個密封的傷口泄漏時的壓力。結(jié)果在表6中給出。在這些測量中典型的試驗誤差是至少+/-20%。因此，實施例52可能是例外，全部的例子中的結(jié)果基本上是相同的。但是，實施例52仍然表現(xiàn)出了顯著高于大約lpsi腸壓的崩裂壓力，并且仍然被認為是有用的。表6.當用來密封豬腸的孔時，含有8-臂PEG-胺(對照物)或者擴鏈聚胺產(chǎn)物的粘合劑水凝膠的體外崩裂強度。實施例No.擴鏈聚胺產(chǎn)物awt%8-臂PEG-胺或者擴鏈聚胺產(chǎn)物崩裂壓力，psi對比例45無253.646實施例26(Plu匪c⑧P104)253.7對比例47無303.048實施例30(Pl腦nic⑧F88)302.949實施例31(PluronicF108)303.0對比例50無503.551實施例30(PluronicF88)503.652實施例31(PluronicF108)502.5a括號中的名稱表示用于制造擴鏈聚胺產(chǎn)物的二曱磺酸酯形式的雙官能交聯(lián)劑。實施例53-60粘合劑水凝膠的體外降解下面的實施例證實了在粘合劑水凝膠中的擴鏈聚胺產(chǎn)物不危及所形成的粘合劑水凝膠的穩(wěn)定性。將雙管注射器(MixPacSDL005-01-50M)的一個管中裝入與實施例33所述的相同的25重量％的右旋糖普二醛溶液，并在另外一個管中裝入25重量％的MW10000的8-臂PEG-胺溶液(作為對照)，或者裝入擴鏈聚胺產(chǎn)物，并且該注射器裝備有靜態(tài)混合管尖(8個梯級，MixPacML2.5-08-SM)。從每個雙管注射器中將粘合劑水凝膠擠出到聚碳酸酯圓形染料(dye)(10mm直徑x3mm厚度)中來形成小丸。稱量小丸的初始重量，然后各個放入到含有磷酸鹽緩沖鹽水(PBS,pH7.4)的廣口瓶中，并在設定為80rpm的定軌振蕩器中在37'C進行培養(yǎng)。通過視覺觀察和通過重量增加或降低來監(jiān)控小丸隨著時間變化的降解。結(jié)果匯總在表7中。表7.在pH7.4的PBS中在37。C和80rpm培養(yǎng)的粘合劑水凝膠小丸的質(zhì)量(初始質(zhì)量的％)。__<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>a除非另有指示，10%的8-臂PEG-胺(MWIOOOO)分子是通過Pluromc⑧交聯(lián)劑來交聯(lián)的。Cb表示對比實施例。"nd"表示沒有測量。實施例61-66對于NIH3T3人類成纖維細胞的體外生物適應性下面的實施例證實了在粘合劑水凝膠中的擴鏈聚胺產(chǎn)物不危及NIH3T3人類成纖維細胞培養(yǎng)物。該測試是使用NIH3T3人類成纖維細胞培養(yǎng)物根據(jù)ISO10993-5:1999來進行的。NIH3T3人類成纖維細胞獲自AmericanTypeCultureCollection(ATCC;Manassas,VA),并且在補充有0。/。胎牛血清的Dulbecco改進基礎培養(yǎng)基(DMEM)中生長。在雙管注射器(MixPacSDL005-01-50M)的一個管中裝入與實施例33所述的相同的25重量％的右旋糖苷二醛溶液，并在另外一個管中裝入30或者50重量％的MW10000的8-臂PEG-胺溶液(作為對照)，或者裝入實施例的擴鏈聚胺產(chǎn)物，并且該注射器裝備有靜態(tài)混合管尖(12個梯級，MixPacML2.5-12-DM)。將粘合劑水凝膠從每個雙管注射器中擠出到聚苯乙烯培養(yǎng)板的孔中來覆蓋大約三分之一的孔底部。然后將所述的孔在UV光下滅菌，并種入50000-100000NIH3T3細胞。在37。C培養(yǎng)48小時之后，檢查細胞培養(yǎng)物的細胞變圓(表示死亡)、孔底的鋪滿包覆層(confluentcoating)、水凝膠邊緣的生長和水凝膠的蔓延(表示細胞培養(yǎng)物對于水凝膠的粘接力)。結(jié)果匯總在表8中，該結(jié)果表明對于NIH3T3人類成纖維細胞培養(yǎng)物沒有不利的影響。表8.在含有8-臂PEG-胺(對照物)或者擴鏈聚胺產(chǎn)物的粘合劑水凝膠對于NIH3T3人類成纖維細胞的體外生物適應性。實施例61Cb62Cb63646566擴鏈聚胺產(chǎn)物a無無實施例26(PluronicPI04)實施例26(PluronicPI04)實施例31('PluronicP108)實施例31(PluronicP108)Wt%8-臂PEG-胺或者擴鏈聚胺產(chǎn)物305030503050細胞變圓否否否否否否鋪滿包覆層是是是是是是水凝膠邊緣的生長是是是是是水凝膠的蔓延否否否否否否a括號中的名稱表示用于制造擴鏈聚胺產(chǎn)物的二曱磺酸酯形式的雙官能交聯(lián)劑。Cb表示對比實施例。實施例67-74沒有體外炎癥應答下面的實施例證實了在粘合劑水凝膠中的擴鏈聚胺產(chǎn)物在使用J774巨噬細胞的體外測試中不產(chǎn)生炎癥應答。該測試是使用J774小鼠腹膜巨噬細胞培養(yǎng)物根據(jù)ISO10993-5:1999來進行的。該J774小鼠腹膜巨噬細胞獲自ATCC,并且在用10%胎牛血清補充的DMEM中進行生長。在雙管注射器(MixPacSDL005-01-50M)的一個管中裝入與實施例33所述的相同的25重量％的右旋糖苷二醛溶液，并在另外一個管中裝入30或者50重量％的MWIOOOO的8-臂PEG-胺溶液(作為對照)，或者裝入實施例的擴鏈聚胺產(chǎn)物，并且該注射器裝備有靜態(tài)混合管尖(12個梯級，MixPacML2.5-12-DM)。將粘合劑水凝膠從每個雙管注射器中擠出到聚苯乙烯培養(yǎng)板的孔中來覆蓋大約三分之一的孔底部。然后將所述44的孔在UV光下滅菌，并種入J774小鼠腹膜巨噬細胞。在37。C培養(yǎng)48小時之后，使用ELISA試驗，按照Lara等人在{JournalofDentalResearch82(6):460-465,2003}中所述來分析細胞培養(yǎng)物的胂瘤壞死因子-a(TNF-a),該因子是一種炎癥應答的指示劑。將該TNF-a滴度與無任何添加劑所培養(yǎng)的J774細胞(負對照)或者用脂多糖(革蘭氏陰性細菌細胞壁的一種成分，7.5lug/mL)培養(yǎng)的J774細胞(正對照)之進行比專交。結(jié)果匯總在表9中，該結(jié)果表明沒有炎癥應答。表9.當曝露于含有8-臂PEG-胺或者擴鏈聚胺產(chǎn)物的粘合劑水凝膠時，由J774小鼠腹膜巨噬細胞所產(chǎn)生的TNF-a。<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>a括號中的名稱表示用于制造擴鏈聚胺產(chǎn)物的二曱磺酸酯形式的雙官能交聯(lián)劑。實施例75-81沒有對VEGF分泌的在體外抑制作用血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種細胞因子和有絲分裂原，其促進了血管生成，并因此促進了傷口愈合。下面的實施例證實了在粘合劑水凝膠中的擴鏈聚胺產(chǎn)物不抑制NIH3T3人類成纖維細胞的VEGF分泌。該測試是使用NIH3T3人類成纖維細胞培養(yǎng)物根據(jù)ISO10993-5:1999來進行的。NIH3T3人類成纖維細胞獲自ATCC,并且在用10%胎牛血清補充的DMEM中進行生長。在雙管注射器(MixPacSDL005-0-50M^々一個管中裝入與實施例33所述的相同的25重量％的右旋糖普二醛溶液，并在另外一個管中裝入30或者50重量％的MW10000的8-臂PEG-胺溶液(作為對照)，或者裝入實施例的擴鏈聚胺產(chǎn)物，并且該注射器裝備有靜態(tài)混合管尖(12個梯級，MixPacML2.5-12-DM)。將粘合劑水凝膠從每個雙管注射器中擠出到聚苯乙烯培養(yǎng)板的孔中來覆蓋大約三分之一的孔底部。然后將所述的孔在UV光下滅菌，并種入50000-100000NIH3T3細胞。在37。C培養(yǎng)48小時之后，使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),按照Lam等人在{JournalofDentalResearch82(6):460-465,2003}中所述來分析細胞培養(yǎng)物的VEGF。將VEGF滴度與在空白孔中所培養(yǎng)的NIH3T3細胞的滴度相比較(負對照)。結(jié)果匯總在表10中，該結(jié)果表明沒有VEGF分泌抑制。表IO.當曝露于含有8-臂PEG-胺或者擴鏈聚胺產(chǎn)物的粘合劑水凝膠時,由NIH3T3細胞所產(chǎn)生的VEGF。<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>a括號中的名稱表示用于制造擴鏈聚胺產(chǎn)物的二曱磺酸酯形式的雙官能交聯(lián)劑。實施例82-87未損傷組織的體內(nèi)組織應答下面的實施例證實了當用于完整的兔子腸漿膜上時，在粘合劑水凝膠中的擴鏈聚胺產(chǎn)物不產(chǎn)生不利的組織應答。將在高壓滅菌的橡膠蓋管瓶中的與實施例33所述的同樣的右旋糖苷二醛溶液(25重量o/o,在去離子高壓滅菌水中)、MW10000的8-臂PEG-胺溶液(30重量％，在去離子高壓滅菌水中)和實施例的擴鏈聚胺產(chǎn)物溶液(30重量％，在去離子高壓滅菌水中)、雙管注射器(MixPacSDL005-01-50M)和靜態(tài)混合管尖(8-梯級，MixPacML2.5-08-SM)通過Y放射進行滅菌。在滅菌手術區(qū)中，將該滅過菌的雙管注射器的一個管中裝入滅過菌的25重量％的右旋糖苷二醛溶液，在另外一個管中裝入滅過菌的30重量％的MW10000的8-臂PEG-胺溶液(對照)，或者裝入實施例的擴鏈聚胺產(chǎn)物，并且該注射器裝備有滅菌靜態(tài)混合管尖。將五個雌性白色新西蘭兔(4.0-4.6kg)禁食一整夜，麻醉，剃毛，洗凈和蓋上消毒蓋布(dmped)。通過常規(guī)剖腹手術技術將每個兔子的小腸取出，并將消過毒的粘合劑水凝膠(大約0.6mL)從消過毒的雙管注射器擠出來形成包圍腸漿膜表面的1.5cm寬的帶子，從腸系膜到腸系膜。將水凝膠粘合劑施用到兩個位置。位置1是十二指腸，到小腸起點為10cm;位置2是回腸，在位置1下方10-20cm。在進一步處理所述的腸之前，將水凝膠在每個位置保持30秒。使用常規(guī)的手術程序?qū)⒃摳鼓ず透共块]合。手術后三天，通過吸入二氧化碳使兔子安樂死，并立即檢查所述的處理位置的粘合劑存在、總體的組織應答和纖維性粘合的形成。根據(jù)用于ISO10993-12皮內(nèi)反應性試驗的得分體系來評價在施用位置處的紅斑和水肺。結(jié)果匯總在表ll中，該結(jié)果表明沒有不利的組織應答。47表ll.當未損傷的組織曝露于含有8-臂PEG-胺或者擴鏈聚胺產(chǎn)物的粘合劑水凝膠時的體內(nèi)組織應答。實施例擴鏈聚胺產(chǎn)物a位置粘合劑的存在粘合水胂紅斑對比例82無1疋否bobob對比例83無2疋否bobob84實施例26(PluronicP104)1專b疋否bobob85實施例26(Plu畫c⑧P闊2疋否bobob86實施例31(Plu畫c⑧F108)1疋否bobob87實施例31(Plu讓c⑧F闊2疋否boba括號中的名稱表示用于制造擴鏈聚胺產(chǎn)物的二曱磺酸酯形式的雙官能交聯(lián)劑。b五個兔子每一個的觀測或者得分是相同的。實施例88-89損傷組織的體內(nèi)組織應答下面的實施例證實了當用于切開的(enterotomized)兔子腸漿膜上時，在粘合劑水凝膠中的擴鏈聚胺產(chǎn)物不產(chǎn)生不牙'J的組織應答。制備與實施例33所述相同的右旋糖苷二醛的已滅菌的溶液和實施例的擴鏈聚胺產(chǎn)物，并如同實施例82-85—樣將其裝入已滅菌的雙管注射器中，該注射器裝備有靜態(tài)混合管尖。將五個雌性白色新西蘭兔(4.0-4.6kg)禁食一整夜，麻醉，剃毛，洗凈和蓋上消毒蓋布。通過常規(guī)剖腹手術技術將每個兔子的小腸取出，并將消過毒的粘合劑水凝膠(大約0.6mL)從消過毒的雙管注射器擠出來形成包圍十二指腸的漿膜表面的1.5cm寬的帶子，到小腸起點為10cm，從腸系膜到腸系膜(位置1)。使粘合劑水凝膠保持2min。將回腸在位置1下方10-20cm和腸系膜對面切出長度為0.5cm并垂直于縱軸的切口。將傷口用3或者4個中斷的6/0Vicryl縫線進行閉合，并將消過毒的粘合劑水凝膠從消過毒的雙管注射器擠出來形成包圍回腸的漿膜表面的1.5cm寬的帶子，從腸系膜到腸系膜，目的是覆蓋腸切開的位置(位置2)。在該水凝膠保持2min之后，使用常規(guī)的手術程序?qū)⒃摳鼓ず透共块]合。手術后三天，通過吸入二氧化碳使兔子安樂死，并立即檢查所述的處理位置的粘合劑存在、總體組織應答和纖維性粘合的形成。根據(jù)用于ISO10993-12皮內(nèi)反應性試驗的得分體系來評價在施用位置處的紅斑和水腫。結(jié)果匯總在表12中，該結(jié)果表明沒有不利的組織應答。表12.當損傷的組織曝露于含有擴鏈聚胺產(chǎn)物的粘合劑水凝膠時的體內(nèi)應答。<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>0a括號中的名稱表示用于制造擴鏈聚胺產(chǎn)物的二曱磺酸酯形式的雙官能交聯(lián)劑。b五個兔子每一個的觀測或者得分是相同的。實施例90將染料混入到含有擴鏈聚胺產(chǎn)物的粘合劑水凝膠中該實施例證實了當染料混入到含有擴鏈聚胺產(chǎn)物的粘合劑水凝膠時，染料的顏色穩(wěn)定性。該染料在任意一個用于形成粘合劑水凝膠的組份溶液中也是穩(wěn)定的。實施例26的擴鏈聚胺產(chǎn)物溶液(25重量％，含有333ppm的酸性綠25)和與實施例33所述的相同的右旋糖苷二醛溶液(25重量％,其含有333ppm的酸性綠25)是在去離子水中制備的。將該溶液在RT和環(huán)境壓力下儲存并定期觀察。42天之后，兩種溶液仍然都是暗的土耳其玉色。在雙管注射器(MixPacSDL005-01-50M)的一個管中裝入與實施例33所述的相同的25重量％的右旋糖苷二醛溶液，并在另外一個管中裝入25重量％的實施例26的擴鏈聚胺產(chǎn)物溶液(含有333ppm的酸性綠25)，并且該注射器裝備有靜態(tài)混合管尖(12個梯級，MixPacML2.5-12-DM)。將粘合劑水凝膠從雙管注射器擠出到玻璃板上來形成大約4mm寬的珠子。將該密封劑珠大概分為兩半。一部分放在10mL的PBS中，另一部分放到含有徹底用去離子水弄濕的紙巾的ziplock塑料帶中。定期觀察樣品。在l、10和21天之后，在ziplock袋中的水凝膠是綠色的。沒有觀察到顏色的浸出或者褪色。在24h和10天之后，儲存在PBS中的樣品仍然是明顯綠色的，但是大約40%的染料已經(jīng)浸出到PBS溶液中。實施例91對比當混入到含有擴鏈聚胺產(chǎn)物的粘合劑水凝膠時，酸性靛藍顏色不穩(wěn)定性該實施例證實了當混入到含有擴鏈聚胺產(chǎn)物的粘合劑水凝膠時或者當混入到用來形成該粘合劑水凝膠的任意一個組份成分溶液中時，對比的酸性凝藍(FD&CBlue#2)的顏色不穩(wěn)定性。實施例26的擴鏈聚胺產(chǎn)物溶液(25重量％，含有750ppm的酸性散藍(FD&CBlue#2))和與實施例33所述的相同的右旋糖苷二醛溶液(其含有1000ppm的酸性龍藍)是在去離子水中制備的。將該溶液在RT和環(huán)境壓力下儲存并定期觀察。在16h之后，兩個溶液都從從深藍色褪色為鐵銹橙。在雙管注射器(MixPacSDL005-01-50M)的一個管中裝入與實施例33所述的相同的25重量％的右旋糖苦二醛溶液，并在另外一個管中裝入25重量％的實施例26的擴鏈聚胺產(chǎn)物溶液(含有1000ppm的酸性欷藍)，并且該注射器裝備有靜態(tài)混合管尖(12個梯級，MixPacML2.5-12-DM)。將粘合劑水凝膠從雙管注射器擠出到玻璃板上來形成大約4mm寬的珠子。將該密封劑珠大概分為兩半。一部分放在10mL的PBS中，另一部分放在到含有徹底用去離子水弄濕的紙巾的ziplock塑料帶中。在2h之后，兩個樣品都明顯褪色。在16h之后，兩個水凝膠樣品已經(jīng)褪色為黃橙色，但是沒有觀察到浸出。實施例92該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比為20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑聚氧雜環(huán)丁烷(MW2013)二曱磺酸酯。根據(jù)實施例20的方法，將l.Og的8-臂PEG-胺(MWIOOOO，實施例l)與11mg的聚氧雜環(huán)丁烷(MW2013)二曱磺酸酯(實施例19)反應來得到0.77g(76。/。產(chǎn)率)。NMR(500MHz，CDC13):53.58(m,930H)3.46(t,J=5.3Hz,16H)，3.42(t,J=6.4Hz，16H)，2.81(t,J=5.1Hz,14H),2.74(t,J=5.4Hz，2H),1.76(五重峰，J=6.4Hz,4.1H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出該擴鏈聚胺的M、、,為13150，比較而言8-臂PEG-胺初始材料的Mw為U040。實施例93該實施例說明具有親電子端基的多臂聚醚(8-臂PEG(MW10000)八甲磺酸酯)的合成。向溶解在100mL二氯曱烷中的20g的8-臂PEG-OH(MW10000,NektarTransformingTherapeutics)中加入4.5mL三乙胺和2.5mL甲烷石黃?；?。將該混合物在RT攪拌一整夜，用200mL氯仿稀釋，用3x80mL的1M磷酸二氬鉀清洗，隨后用80mL飽和碳酸鉀清洗，干燥(硫酸鎂)，過濾和蒸發(fā)(15托，4CTC)。將產(chǎn)物干燥(0.06托)來提供8-臂PEG(MWIOOOO)八曱磺酸酯(20.lg,94%產(chǎn)率):HNMR(500MHz,DMSO-d6)54.29(m，16H),3.67(m,16H)，3.50(m,900H),3.16(s，24H);通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出Mw7300,Mw/Mn1.0,Mz/Mw1.0和IV4.7mL/g。實施例94該實施例說明伯二胺交聯(lián)劑PluronicP104二胺的合成。向溶解在16mL乙腈中的PluronicP104二甲磺酸S旨(實施例13,10g)中加入30mL濃氨水(28。/。w/w)。將該混合物在密封容器中在RT攪拌48h。將反應混合物用氮氣鼓泡lh,然后濃縮(15托，40°C)。剩余的溶液用20mL飽和碳酸鉀溶液稀釋，用2x50mL氯仿萃取。將合并的氯仿層干燥(硫酸鎂)，過濾和蒸發(fā)(15托，40°C)。殘留物溶解在10mL水中，并將所形成的溶液蒸發(fā)直到透明(15托，40°C),冷凍和冷凍干燥來得到7.02g(72。/o產(chǎn)率)。HNMR(500MHz,DMSO-d6):53.50(m,~500H),2.62(m,4H)，1.03(d，JH5.8Hz，260H)。實施例95該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的具有親電子端基的多臂聚醚(8-臂PEG(MW1OOOO)八甲磺酸S旨)和伯二胺交聯(lián)劑(PluronicP104二胺)。向溶解在10mL的DMF中的5.0g的8-臂PEG(MW10000)八甲磺酸酯(實施例91)中加入在2mL的DMF中的139mg的PluronicPI04二胺(實施例92)。在將該混合物RT攪拌一整夜之后，將其與32mL濃氨水51合并，并且在密封容器中RT攪拌3天。將反應混合物用氮氣鼓泡lh,與2g碳酸鉀合并，并用3x25mL二氯甲烷萃取。將合并的二氯曱烷層干燥(硫酸鎂)，過濾和蒸發(fā)(15托，40°C)。將產(chǎn)物進一步干燥(0.06托)來得到4.9g(87。/。產(chǎn)率)。)HNMR(500MHz,CDC13)53.60(m，10隨)，3.47(t,J=5.2Hz,16H)，2.82(t，J=5.3Hz，15H)，2.76(t，J=5.5Hz,1H)，1.10(m,9.8H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出該擴鏈聚胺的Mw為37660,比較而言8-臂PEG八曱磺酸酯初始材料的Mw為7300。實施例96該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的4-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG-PPG-PEG(PluronicP104)二甲磺酸酯。向溶解在2mL的DMF和lmL二氯甲烷中的l.OOg的4-臂PEG-胺(MW2000,實施例4)中加入溶解在lmL二氯甲烷中的0.151g的PEG-PPG-PEG(PluronicP104)二曱磺酸酯(實施例13),將該混合物RT攪拌一整夜?；旌衔镉胠OmL氯仿稀釋，用3x2mL的1M碳酸鉀清洗。將合并的水性洗涂液用lmL氯仿反萃取。將合并的氯仿層千燥(硫酸鎂)，過濾和蒸發(fā)(15托，40。C)來得到.07g(93。/。產(chǎn)率)。^NMR(500MHz，CDCl3)53.60(m，238H),3.38(m,14H),2.82(m,7H)，2.76(t，J=5.4Hz，1H)，l.lO(m，10.5H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC(同實施例l)給出該擴鏈聚胺的Mw為3600,比較而言4-臂PEG-胺初始材料的Mw為2420。實施例97該實施例說明伯二胺交聯(lián)劑PEG6000二胺的合成。向溶解在4mL乙腈中的PEG6000二甲磺酸酯(實施例6，3.0g)中加入8mL濃氨水(28。/。w/w)。將該混合物在密封容器中在RT攪拌48h。將反應混合物在30mL氯仿和10mL飽和碳酸鉀溶液之間分配。干燥氯仿層(硫酸鎂)，過濾和蒸發(fā)(15托，4(TC)。殘留物進一步真空下(0.2托，RT)干燥來得到2.64g(89Q/。產(chǎn)率)。HNMR(500MHz,DMSO-d6):53.50(m，578H),2.63(t,J=5.8Hz,4H)。實施例98該實施例說明二異氰酸酯交聯(lián)劑PEG6000二異氰酸酯的合成。向溶解在25mL的甲苯中的lg的PEG6000二胺(實施例97)中加入60mg三光氣和0.28mL的二異丙基乙胺。將反應混合物在氮氣下在70-80。C加熱3h。將反應混合物冷卻到RT，并用20mL石油醚稀釋。通過過濾分離形成的沉淀物，用石油醚清洗，并真空干燥(0.2托，RT)。&NMR(500MHz,CDC13):53.60(m,708H),3.37(t，JN5.2Hz,4H)。將該產(chǎn)物無需進一步凈化而用于實施例99中。實施例99該實施例說明擴鏈聚胺產(chǎn)物的制備，該聚胺產(chǎn)物衍生自摩爾比20:1的8-臂PEG-胺和雙官能交聯(lián)劑PEG6000二異氰酸酯。向溶解在3mL二氯曱烷中的l.OOg的8-臂PEG-胺(MW10000,實施例l)中加入溶解在lmL二氯曱烷中的36mg的PEG6000二異氰酸酯(實施例98),將該混合物RT攪拌lh。混合物用10mL氯仿稀釋，用2x2mL的1M磷酸二氫鉀清洗，隨后用3x2mL的1M碳酸鉀清洗。將合并的水性洗滌液用lmL氯仿反萃取。將合并的氯仿層干燥(硫酸鎂)，過濾和蒸發(fā)(15托，40。C)來得到擴鏈聚胺產(chǎn)物。！HNMR(500MHz,CDC13)53.61(m,1000H),3.32(q,J=5.4Hz,14H),2.78(t，J=5.0Hz,12H)。通過光散射的具有質(zhì)量分析的水性SEC[30°C,磷酸鹽緩沖鹽水(PBS,10mM磷酸鹽,2.7mMKCl，0.137MNaCl,pH7.4)，0.5mL/min，兩個S叩remaLinearM混合床柱+1LuxS，ema訓OA柱(PolymerStandardsServices),dn/dc0.135mL/g]給出該擴鏈聚胺的Mw為18230,比較而言8-臂PEG-胺初始材料的Mw為13170。權利要求1.一種通過下面的方法制得的物質(zhì)合成物，所述的方法包括任選在第一反應溶劑中，將至少一種具有至少三個臂的多臂聚醚胺與至少一種下式的雙官能交聯(lián)劑進行反應X1-R-X2該多臂聚醚胺與該雙官能交聯(lián)劑的摩爾比是大約4∶1-大約50∶1，由此形成擴鏈聚胺產(chǎn)物；并且其中(i)該多臂聚醚胺的至少三個臂是用伯胺基團封端的；(ii)該多臂聚醚胺具有大約450-大約200,000道爾頓的重均分子量；(iii)X1-R-X2是一種聚合物，其具有大約2,000-大約20,000道爾頓的重均分子量；(iv)R是二價聚合物基團；(v)X1和X2是能夠與伯胺基團反應形成碳-氮鍵的基團；條件是該擴鏈聚胺產(chǎn)物的特征在于20℃時其在水中的溶解度至少是20wt％。2.權利要求1的合成物，其進一步的特征在于其通過尺寸排阻色譜法所測定的重均分子量比用來制造該擴鏈聚胺產(chǎn)物的多臂聚醚胺的重均分子量至少高約10%。3.權利要求1的合成物，其中X'和乂2選自-CHO，-C02H,-CC^R1,-NCO，-NCS,-COC1,-COBr，-COF，-〇Ms,-OTs,-OTf,三氟乙磺酸酯，Cl，Br，I和縮水甘油醚；其中R'是N-琥珀酰亞胺基、4-硝基苯基、2，4-二硝基苯基或者五氟苯基基團。4.權利要求1的合成物，其中X!和X2選自-OMs，-OTs,-OTf,三氟乙磺酸酯，Cl,Br和I。5.權利要求1的合成物，其中二價聚合物基團R選自環(huán)氧乙烷的二價均聚物；和環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的二價嵌段和無規(guī)共聚物。6.權利要求1的合成物，其中多臂聚醚胺具有大約2,000-大約40,000道爾頓的重均分子量。7.權利要求1的合成物，其中多臂聚醚胺是一種八臂聚乙二醇，其具有用伯胺基團封端的八個臂，并具有大約9,000-大約11,000道爾頓的重均分子量。8.—種通過下面的方法制得的物質(zhì)合成物，所述的方法包括步驟a)任選的在第二反應溶劑中，將至少一種具有至少三個臂和具有至少三個親電子端基的多臂聚醚，與下式的伯二胺交聯(lián)劑進行反應NH2-R2-NH2該多臂聚醚與該伯二胺交聯(lián)劑的摩爾比是大約4:l-大約50:1,由此形成具有殘留親電子端基的擴鏈聚合物；和，b)任選的在第三反應溶劑中，處理所述的擴鏈聚合物，目的是將殘留的親電子端基轉(zhuǎn)化為胺端基來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物；其中(i)所述的多臂聚醚至少三個臂是用親電子端基封端的，該親電子端基能夠與伯胺反應形成碳-氮鍵；(ii)該多臂聚醚具有大約450-大約200,000道爾頓的重均分子量；和(iii)W是二價聚合物基團；(iv)NH2-R、NH2是一種聚合物，其具有大約2,000-大約20,000道爾頓的重均分子量；條件是該擴鏈聚胺產(chǎn)物的特征在于2(TC時其在水中的溶解度至少是20wt%。9.權利要求8的合成物，其中親電子端基選自-OMs，-OTs，-OTf,三氟乙磺酸酯，Cl,Br和I;并且步驟(b)包括將擴鏈聚合物與氨進行反應來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物。10.權利要求8的合成物，其中親電子端基選自-OMs,-OTs，-OTf，三氟乙磺酸酯，Cl，Br和I;并且步驟(b)包括下面的步驟(i)將擴鏈聚合物與堿金屬疊氮化物反應來提供擴鏈的疊氮基聚合物；和(ii)將該擴鏈疊氮基聚合物用還原劑還原來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物。11.權利要求8的合成物，其中親電子端基是羧酸；步驟(a)進一步包括二酰亞胺脫水劑；并且步驟(b)包括下面的步驟(i)將擴鏈聚合物與足量的?；赵噭┻M行反應來提供擴鏈的?；u聚合物；(ii)將該擴鏈的?；站酆衔锱c足夠的氨反應來提供擴鏈伯酰胺聚合物；和(iii)將該擴鏈伯酰胺聚合物與足夠的活性離素源和堿金屬氫氧化物進行反應來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物。12.權利要求8的合成物，其中親電子端基是羧酸；步驟(a)進一步包括二酰亞胺脫水劑；并且步驟(b)包括下面的步驟(i)將擴鏈聚合物與足量的?；赵噭┻M行反應來提供擴鏈的?；删酆衔铮?ii)將該擴鏈的?；站酆衔锱c足夠的堿金屬疊氮化物反應來提供擴鏈的?；B氮聚合物；和(iii)加熱該擴鏈的?；B氮聚合物來引起重排，用以提供擴鏈聚胺產(chǎn)物。13.權利要求8的合成物，其中親電子端基是活化的羧酸酯或者羧酰氯；并且步驟(b)包括下面的步驟(i)將擴鏈聚合物與足夠的氨反應來提供擴鏈伯酰胺聚合物；和(ii)將該擴鏈伯酰胺聚合物與足夠的活性卣素源和堿金屬氬氧化物反應來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物。14.權利要求8的合成物，其中親電子端基是活化的羧酸酯或者羧酰氯；并且步驟(b)包括下面的步驟(!)將擴鏈聚合物與足夠的堿金屬疊氮化物反應來提供擴鏈?；B氮聚合物，和(ii)加熱該擴鏈?；B氮聚合物來引起重排，以提供擴鏈的聚胺反應產(chǎn)物。15.權利要求8的合成物，其中親電子端基是醛，并且步驟(b)包括下面的步驟(i)將擴鏈聚合物與足夠的氨反應來提供擴鏈的亞胺聚合物；和(ii)還原該擴鏈的亞胺聚合物來提供擴鏈聚胺產(chǎn)物。16.權利要求8的合成物，其進一步的特征在于其通過尺寸排阻色譜法所測定的重均分子量比用來制造該擴鏈聚胺產(chǎn)物的多臂聚醚的重均分子量至少高約10%。17.權利要求8的合成物，其中二價聚合物基團W選自環(huán)氧乙烷的二價均聚物；和環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的二價嵌段和無規(guī)共聚物。全文摘要本發(fā)明的一種實施方案是一種由下面的方法制得的可水溶的擴鏈聚胺產(chǎn)物，所述的方法包含將多臂聚醚胺與式X¹-R-X²的雙官能交聯(lián)劑進行反應。另外一種實施方案是一種由下面的方法制得的可水溶的擴鏈聚胺產(chǎn)物，所述的方法包含將具有至少三個臂和三個親電子端基的多臂聚醚與式NH₂-R²-NH₂的伯二胺交聯(lián)劑進行反應，隨后處理該擴鏈產(chǎn)物來將殘留的親電子端基轉(zhuǎn)化為胺端基。所述的擴鏈聚胺產(chǎn)物與氧化多糖的交聯(lián)提供了具有改進彈性的有用的組織粘合劑，該粘合劑提供了與基礎組織更大的相容性以及在水性環(huán)境中提高的穩(wěn)定性。文檔編號C08G73/02GK101479320SQ200780024511公開日2009年7月8日申請日期2007年6月22日優(yōu)先權日2006年6月30日發(fā)明者G·D·菲古利,H·K·舍諾申請人:納幕爾杜邦公司