專利名稱：對苯醌二肟工業(yè)品中對苯醌二肟和對亞硝基苯酚的高效液相色譜分析法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對苯醌二肟和對亞硝基酚的分析。
背景技術(shù)：
對苯醌二肟是一種交聯(lián)劑，具有在膠料中易分散，硫化速度快，膠料定伸強度高，耐熱耐候，耐臭氧及電絕緣性能好等特點，可用作丙烯酸的阻聚劑，金屬玻璃熱熔的粘合劑，烯烴共聚物交聯(lián)的調(diào)節(jié)劑，有機單體穩(wěn)定劑和自硫化型粘合劑。對氧化劑(如Pb3O4，PbO2)有活化作用，改善聚酯纖維輪胎簾布的熱阻力[參見Russak AleksandrVladimirovich，Borejko Natalya Pavlovna，Tabaev Rakhim Garifovich，Melnikov GennadijNikolaevich，Salyakhov Danis Ravilovich(Nizhnekamskoe proizvodstvennoe Ob’edinenie“Nizhnekamskneftekhim”，Estonia)Russ，RU 2,039,757(Cl.C08F2/42)，20 Jul 1995，SUAppl.5,042,180，15 May 1992(Russ)；Gogotov A.F.，Parilova M.V.，Amosov V.V.，Khaliullin A.K.(OAO“Angarskaya Neftekhicheskaya Kompaniya”.Russia).ProizvodstvoiIspol’zovanie Elastomerov 2001，(3)，7-10(Russ).]。特別適用于定伸強度高、硫化速度快的丁基橡膠、天然膠、丁苯膠、聚硫橡膠、乙丙橡膠以及防止核輻射的橡膠制品等[參見Eto Akiko，Hirata Yasushi(Bridgestone Corp.)Jpn.Kokai Tokkyo Koho JP 03 37,240[9137,240](Cl.C08L7/00)，18 Feb1991，Appl.89/171,232,04 Jul 1989；6pp.]。
工業(yè)上對苯醌二肟由對苯醌與羥氨作用得到，在反應(yīng)過程中易形成對苯醌單肟(單肟) 對苯醌單肟與由苯酚起亞硝化反應(yīng)所得的對亞硝基酚已經(jīng)證明是同一化合物，這兩種結(jié)構(gòu)可以彼此互變，即它們?yōu)榛プ儺悩?gòu)體
日本工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[參見JIS K 6203，1979.]規(guī)定了對苯醌二肟的質(zhì)量控制方法，但沒有含量測定的項目，只是用分解點控制質(zhì)量。關(guān)于對苯醌二肟含量及其雜質(zhì)對亞硝基酚的測定，未見有文獻(xiàn)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種同時定量測定苯醌二肟和對亞硝基酚的高效液相色譜法。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種對苯醌二肟和其雜質(zhì)對亞硝基酚的高效液相色譜分析法，其高效液相色譜的條件為色譜柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流動相CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3緩沖溶液(pH＝7.0～8.0，50mM)，它們的體積百分組成為CH3OH30％；H2O50％～0％；NH4Ac-NH3緩沖溶液20％～70％；流動相流速1.0mL/min柱溫30℃；進(jìn)樣量10μL；檢測波長305nm。
上述的高效液相色譜分析法，最佳的流動相條件為CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3緩沖溶液(pH＝7.0，50mM)，它們的體積百分組成為CH3OH30％，H2O50％，NH4Ac-NH3緩沖溶液20％。
本發(fā)明的分析方法測定對亞硝基苯酚和對苯醌二肟的保留時間分別為2.27分和4.76分，兩者的出峰能相當(dāng)清晰地分離，當(dāng)信噪比S/N＝3時，測得對亞硝基酚的檢出限為0.00001mg/mL，測得對苯醌二肟的檢出限為0.00001mg/mL。
本發(fā)明的高效液相色譜分析法能方便、快捷、準(zhǔn)確、定量地分析出對亞硝基苯酚和對苯醌二肟含量。


圖1為流動相中緩沖液pH的選擇；圖2為流動相中緩沖液離子強度的選擇；圖3為流動相中甲醇比例的選擇；圖4為紫外-可見光譜圖，a對苯醌二肟，b對亞硝基酚；圖5為對亞硝基酚(A)標(biāo)樣的色譜圖；圖6為對苯醌二肟(B)標(biāo)樣的色譜圖；圖7為對亞硝基酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖8為對苯醌二肟的標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖9為對苯醌二肟樣品中主含量測定的色譜圖，A對亞硝基酚；B對苯醌二肟；圖10為對苯醌二肟樣品中對亞硝基酚測定的色譜圖，A對亞硝基酚；B對苯醌二肟。
具體實施例方式
1儀器和試劑1.1儀器Varian 5060型高效液相色譜儀，配有Rheodyne 7725i六通進(jìn)樣閥，Waters 486型紫外-可見分光光度檢測器；大連江申分離科學(xué)技術(shù)公司JS-3050色譜工作站；四川儀表四廠Type 3066筆式記錄儀。Waters Alliance 2695型高效液相色譜儀，配有真空脫氣機、數(shù)碼四元泵，120位自動進(jìn)樣器、996型紫外-可見二極管陣列(PDA)檢測器和Millinium32色譜管理系統(tǒng)。
1.2試劑對苯醌二肟對照品(95％)；對亞硝基酚對照品(99％)；甲醇(色譜純)；流動相和溶液用水均為娃哈哈純凈水(浙江娃哈哈公司生產(chǎn))。其它試劑均為分析純。
2高效液相色譜條件選擇2.1流動相pH的選擇實驗中我們首先嘗試了甲醇-水，以及甲醇-水-乙酸和甲醇-水-高氯酸體系，從色譜圖上看出，對苯醌二肟和對亞硝基酚無法分開，且對亞硝基酚的峰形不好。針對于這個情況，我們固定流動相比例30％甲醇-50％水-20％緩沖液(50mM)，選擇NH4Ac作為緩沖液，分別用乙酸和氨水調(diào)節(jié)不同pH的緩沖液進(jìn)行實驗，實驗結(jié)果顯示(見圖1所示)，當(dāng)緩沖液pH值到達(dá)7.0以上的時候，對苯醌二肟和對亞硝基酚能夠?qū)崿F(xiàn)很好的分離，另一方面，堿性條件下有利于對亞硝基酚轉(zhuǎn)為醌式(單肟)，具有較大的紫外吸收，有利于提高測定靈敏度，因此我們選擇pH＝7.0～8.0的NH4Ac-NH3調(diào)節(jié)流動相pH值。
2.2流動相離子強度的選擇根據(jù)前面的實驗結(jié)果，固定流動相中甲醇比例為30％，固定pH＝7.0，濃度為50mM的NH4Ac-NH3緩沖溶液，考察緩沖溶液濃度對色譜保留行為的影響(見圖2)，當(dāng)流動相中NH4Ac-NH3濃度從1.0mM增加到5.0mM時，對苯醌二肟和對亞硝基酚的保留值均有所減小，然后均趨于平穩(wěn)，對苯醌二肟和對亞硝基酚能夠?qū)崿F(xiàn)很好的分離，因此我們選擇流動相中緩沖溶液的濃度10～35mM，即流動相中緩沖液比例為20％～70％。
2.3流動相中甲醇濃度的選擇固定流動相中緩沖液比例為20％NH4Ac-NH3(pH＝7.0，50mM)，考察甲醇濃度變化對分析物保留行為的影響(見圖3)。試驗中甲醇的體積分?jǐn)?shù)在20％～50％之間變化時。分析物的保留時間明顯縮短，說明甲醇比例對對苯醌二肟及對亞硝基酚的保留有明顯的影響，改變甲醇比例可以有效調(diào)節(jié)分離的時間，綜合考慮分離的效果與時間，選擇流動相中甲醇比例為30％作為實驗條件。
2.4檢測波長的選擇對苯醌二肟的最大紫外吸收波長為315nm，對亞硝基酚在304nm和400nm都有吸收(見圖4)?？紤]到要同時測定對亞硝基酚和對苯醌二肟含量，選擇400nm作為測定波長不利于對苯醌二肟的測定，此時對苯醌二肟的吸收太小。另一方面，由于對亞硝基酚含量比較低，故選擇波長305nm作為檢測波長。
2.5色譜條件色譜柱選用的是Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)。流動相CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3緩沖溶液(pH＝7.0～8.0，50mM)，它們的體積百分組成為CH3OH30％，H2O50％～0％，NH4Ac-NH3緩沖溶液20％～70％。流動相流速1.0mL/min。柱溫30℃。進(jìn)樣量10μL。檢測波長305nm。其中，最佳流動相條件為CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3緩沖溶液(pH＝7.0，50mM)，它們的體積百分組成為CH3OH30％，H2O50％，NH4Ac-NH3緩沖溶液20％，本發(fā)明提供的圖4～圖10為在最佳流動相條件下獲得。
2.6樣品濃度的選擇本實驗必須兼顧對苯醌二肟主成分含量與其中雜質(zhì)對亞硝基酚含量的測定，在測定雜質(zhì)時，樣品的濃度必須較大(0.6mg/mL)，足以使對亞硝基酚能夠出峰并準(zhǔn)確測定；而測定主成分含量時，溶液濃度太大會導(dǎo)致對苯醌二肟主峰超線性畸變，使定量不準(zhǔn)，故將樣品稀釋10倍后測定(0.06mg/mL)，試驗準(zhǔn)確度令人滿意。
3標(biāo)準(zhǔn)曲線精確稱量10.00mg對亞硝基酚標(biāo)準(zhǔn)品，置于10-mL容量瓶中，用甲醇定容，配成對亞硝基酚濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。精確稱量25.00mg對苯醌二肟標(biāo)準(zhǔn)品，置于25-mL容量瓶中，用甲醇定容，配成對苯醌二肟濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液儲備液。使用時用甲醇分別逐級稀釋到所需濃度。
在對亞硝基酚標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度0.00001～0.04mg/mL范圍進(jìn)行實驗，取10μL進(jìn)樣，色譜圖見圖5，對亞硝基酚的保留時間為2.27min。以峰面積對濃度作圖(圖7)，在濃度0.00004～0.04mg/mL的范圍內(nèi)成線性，回歸方程為A(area)＝1743.86931+1.51074E7·C，相關(guān)系數(shù)r＝0.99983。當(dāng)信噪比S/N＝3時，測得對亞硝基酚的檢出限為0.00001mg/mL；在對苯醌二肟標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度0.00001～0.2mg/mL范圍進(jìn)行實驗，取10μL進(jìn)樣，色譜圖見圖6，對苯醌二肟的保留時間為4.76min，以峰面積對濃度作圖(圖8)，在溶液濃度0.00002～0.2mg/mL的范圍內(nèi)成線性，回歸方程為A(area)＝-60055.92457+9.65026E7·C，相關(guān)系數(shù)r＝0.99926，當(dāng)信噪比S/N＝3時，測得對苯醌二肟的檢出限為0.00001mg/mL。
4樣品測定4.1對苯醌二肟主含量的測定準(zhǔn)確稱取約6.00mg對苯醌二肟試樣，置于10-mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。再移取1.0mL上述溶液置于另一10-mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。平行配制5份1#樣品溶液，每份溶液進(jìn)樣2針，進(jìn)樣量為10μL(見圖9)，取兩次面積平均值，用外標(biāo)法計算單份樣品中對苯醌二肟含量，5份樣品中對苯醌二肟的平均含量為91.34％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.00％。再取不同批號的樣品4份(2#～4#)，同法處理，每一份樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣3次，測定其峰面積，用外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表1。
4.2對亞硝基酚雜質(zhì)測定稱取約6.00mg對苯醌二肟試樣，置于10-mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。同一份樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣3次，每次進(jìn)樣量為10μL。平行配制5份1#樣品溶液，每份溶液進(jìn)樣2針，進(jìn)樣量為10μL(見圖10)，取兩次面積平均值，用外標(biāo)法計算單份樣品中對亞硝基酚含量，5份樣品中對亞硝基酚的平均含量為6.24％，RSD為1.10％。再取不同批號的樣品4份(2#～4#)，同法處理，每一份樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣3次，測定其峰面積，用外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表1。
表1樣品主含量及雜質(zhì)測定結(jié)果對苯醌二肟 對亞硝基酚批號含量(％) RSD(％，n＝3) 含量(％) RSD(％，n＝3)191.34 1.00*6.24 1.10*294.81 0.35 5.20 0.31391.85 0.26 5.27 0.28476.05 0.55 4.04 0.65576.48 0.29 0.54 0.61*5份平行樣品測定值
權(quán)利要求
1.一種對苯醌二肟和其雜質(zhì)對亞硝基酚的高效液相色譜分析法，其特征是高效液相色譜的條件為色譜柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流動相CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3緩沖溶液(pH＝7.0～8.0，50mM)，它們的體積百分組成為CH3OH30％；H2O50％～0％；NH4Ac-NH3緩沖溶液20％～70％；流動相流速1.0mL/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μL；檢測波長305nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求所述的高效液相色譜分析法，其特征是所述的流動相為CH3OH-H2O-NH4Ac-NH3緩沖溶液(pH＝7.0，50mM)，它們的體積百分組成為CH3OH30％，H2O50％，NH4Ac-NH3緩沖溶液20％。
全文摘要
一種對苯醌二肟和其雜質(zhì)對亞硝基酚的高效液相色譜分析法，其高效液相色譜的條件為色譜柱Kromasil C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；流動相CH
文檔編號G01N30/00GK1648654SQ200410065978
公開日2005年8月3日 申請日期2004年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月29日
發(fā)明者練鴻振, 李丹妮, 劉雯雯 申請人:南京大學(xué)