專利名稱：新的氨基酸衍生物及其作為凝血酶抑制劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及新的藥用化合物，具體涉及胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶特別是凝血酶的競爭性抑制劑，它們作為藥物的用途，含有它們的藥用組合物以及生產(chǎn)它們的合成途徑。
背景血液凝固是涉及淤血(即阻止血液從受損血管流失)和血栓形成(即在血管中形成血液凝塊，有時導(dǎo)致血管阻塞)二者的極其重要的過程。
凝固是一系列復(fù)雜的酶反應(yīng)的結(jié)果。這一系列反應(yīng)的最終步驟之一是酶原前凝血酶轉(zhuǎn)化為活性的酶-凝血酶。
已知凝血酶在凝固過程中起著一種核心的作用。它激活血小板、引起血小板聚集，使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白單體，后者自發(fā)地聚合成纖維蛋白聚合體，并且激活凝血因子Ⅷ，該因子依次使所述聚合體交聯(lián)形成不溶性的纖維蛋白。而且凝血酶激活因子Ⅴ和因子Ⅷ，引起由凝血酶原生成凝血酶的“正反饋”發(fā)生。
通過抑制血小板聚集以及凝血酶的形成和交聯(lián)，有效的凝血酶抑制劑有望表現(xiàn)出抗凝活性。此外，期望通過有效抑制正反饋機制來增強抗凝活性。
先有技術(shù)Claesson在Blood Coagul.Fibrinol((1994)5,411.)中描述了早期開發(fā)的凝血酶的低分子量抑制劑。
Blomback等(在J.Clin.Lab.Invest.24,Suppl.107,59,(1969))報道基于位于纖維蛋白原Aα鏈的裂解位點附近的氨基酸序列的凝血酶抑制劑。這些作者提出，在討論的氨基酸序列中，三肽序列Phe-Val-Arg(P9-P2-P1，此后稱P3-P2-P1序列)將是最有效的抑制劑。
從美國專利號4346078和國際專利申請WO 93/11152中得知，以在P1-位置上具有α,ω-氨基烷基胍的二肽基衍生物為基礎(chǔ)的凝血酶抑制劑。同樣地，結(jié)構(gòu)相關(guān)的二肽基衍生物也有報道。例如，國際專利申請WO 94/29336公開了在P1-位置上具有如氨基甲基芐脒、環(huán)氨基烷基脒和環(huán)氨基烷基胍的化合物；歐洲專利申請0648780公開了在P1-位置上具有如環(huán)氨基烷基胍的化合物。
從歐洲專利申請0468231、0559046和0641779中得知，以在P1-位置上也具有環(huán)氨基烷基胍(例如，3-氨基甲基-1-脒基哌啶，或者4-氨基甲基-1-脒基哌啶)的肽基衍生物為基礎(chǔ)的凝血酶抑制劑。
歐洲專利申請0185390首次公開了基于在P1-位置上具有精氨醛的三肽基衍生物的凝血酶抑制劑。
最近報道了在P3-位被修飾的基于精氨醛的肽基衍生物。例如，國際專利申請WO 93/18060公開了在P3-位上的羥基酸，歐洲專利申請0526877公開了P3-位上的脫氨氨基酸(des-amino acids)，歐洲專利申請0542525公開了P3-位上的鄰甲基扁桃酸。
基于P1-位上親電子酮的絲氨酸蛋白酶(例如凝血酶)抑制劑也已經(jīng)知道。例如，歐洲專利申請0195212公開了在P1-位上的精氨酸的肽基α-酮基酯和酰胺衍生物，歐洲專利申請0362002公開了在P1-位上的精氨酸的氟代烷基酰胺酮衍生物，歐洲專利申請0364344公開了在P1-位上的精氨酸的α,β,δ-三酮基化合物衍生物以及歐洲專利申請0530167公開了在P1-位上的精氨酸的α-烷氧基酮衍生物。
從歐洲專利申請0293881得知其它結(jié)構(gòu)不同的以精氨酸及其異硫脲鎓(isothiouronium)類似物的C-末端硼酸(boronic acid)衍生物為基礎(chǔ)的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶抑制劑。
最近歐洲專利申請0669317和國際專利申請WO 95/35309、WO95/23609和WO 94/29336公開了基于肽基衍生物的凝血酶抑制劑。
然而，仍存在著對有效的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶(如凝血酶)抑制劑的需求。特別是對這樣一些化合物的需求，即所述化合物具有優(yōu)于其它絲氨酸蛋白酶的抑制凝血酶的口服生物可利用性和選擇性。對凝血酶顯示出競爭性抑制活性的化合物有望用作(特別是)抗凝劑，因而用于血栓形成及有關(guān)疾病的治療中。
本發(fā)明的公開根據(jù)本發(fā)明提供了式Ⅰ化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1代表H、C(O)R11、SiR12R13R14或C1-6烷基，后一基團任選由一個或多個選自O(shè)R15或(CH2)qR16的取代基取代或作為末端基團；R12、R13和R14獨立代表H、苯基或C1-6烷基；R16代表C1-4烷基、苯基、OH、C(O)OR17或C(ON(H)R18；R18代表H、C1-4烷基或CH2C(O)OR19；R15和R17獨立代表H、C1-6烷基或C7-9烷基苯基；R11和R19獨立代表H或C1-4烷基；和q代表0、1或2；R2和R3獨立代表H、C1-4烷基、環(huán)己基或苯基；Rx代表式Ⅱa、Ⅱb或Ⅱc的結(jié)構(gòu)片段，
其中k、l和m獨立代表0、1、2、3或4；R4和R5獨立代表H、Si(Me)3、1-或2-萘基、多環(huán)烴基、CHR41R42或C1-4烷基(其中后一基團任選由一個或多個氟原子取代)，或C3-8環(huán)烷基苯基、亞甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氫苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氫香豆素基(其中后十二個基團任選由一個或多個C1-4烷基(其中后一基團任選由一個或多個鹵素取代基取代)、C1-4烷氧基、鹵代、羥基、氰基、硝基、SO2NH2、C(O)OH或N(H)R43取代)；R41和R42獨立代表環(huán)己基或苯基；R6和R7獨立代表H、C1-4烷基、C3-8環(huán)烷基、苯基(其中后一個基團任選由一個或多個C1-4烷基(其中后一基團任選由一個或多個鹵素取代基取代)、C1-4烷氧基、鹵代、羥基、氰基、硝基、SO2NH2、C(O)OH或N(H)R44取代)或與它們所連接的碳原子一起形成C3-8環(huán)烷基環(huán)；R43和R44獨立代表H或C(O)R45；及R45代表H、C1-4烷基或C1-4烷氧基；Y代表CH2、(CH2)2、CH=CH、(CH2)3、CH2CH=CH或CH=CHCH2，其中后三個基團任選由C1-4烷基、亞甲基、氧代或羥基取代；n代表0、1、2、3或4；B代表式Ⅳa、Ⅳb或Ⅳc的結(jié)構(gòu)片段
其中X1和X2獨立代表單鍵或CH2。
式Ⅰ化合物可以表現(xiàn)出互變異構(gòu)現(xiàn)象。所有的互變異構(gòu)形式及其混合物均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
式Ⅰ化合物也可含有一個或多個不對稱碳原子，因而可表現(xiàn)出旋光和/或非對映異構(gòu)現(xiàn)象。使用常規(guī)技術(shù)如層析或分步結(jié)晶可以分離所有的非對映異構(gòu)體。通過使用常規(guī)技術(shù)，如分步結(jié)晶或HPLC技術(shù)分離所述化合物的外消旋體或其它混合物可以分離各種立體異構(gòu)體。另外，在不引起外消旋作用或差向異構(gòu)作用的條件下，通過適當(dāng)?shù)男饣钚栽?，或通過例如同手性酸的衍生作用、然后再通過常規(guī)方法(如HPLC、硅膠層析)分離非對映的衍生物可以制備所需的旋光異構(gòu)體。所有的立體異構(gòu)體均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19和R45可以代表的烷基，烷基取代的R4、R5和Y；R45可以代表的烷氧基，烷氧基取代的R4和R5；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R41和R42可以代表的環(huán)烷基；R15和R17可代表的烷基苯基均可以是直鏈的或者支鏈的，可以是飽和的或者未飽和的。
R4、R5、R6和R7可以被鹵素取代，R4、R5、R6和R7上的取代基可被鹵素取代，所述鹵素包括氟、氯和溴。
式Ⅱa、Ⅱb或Ⅱc的片段中碳原子鄰近的點表示該片段與式Ⅰ化合物的接點。
式Ⅳa、Ⅳb或Ⅳc的片段中碳原子上的波浪線表示該片段的鍵的位置。
縮略語列在本說明書末尾。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了如上所述的式Ⅰ化合物，條件是(a)當(dāng)Rx代表式Ⅱa的結(jié)構(gòu)片段時，則R4和/或R5(適當(dāng)時)不代表(ⅰ)由鹵素-取代的C1-6烷基取代的苯基；(ⅱ)亞甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氫苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氫香豆素基；(b)當(dāng)Rx代表式Ⅱc的結(jié)構(gòu)片段時，則R6和/或R7(適當(dāng)時)代表未取代的苯基。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了如上所述的式Ⅰ化合物，其中(a)當(dāng)Rx代表式Ⅱ的結(jié)構(gòu)片段時，則R4和/或R5(適當(dāng)時)代表(ⅰ)由鹵素-取代的C1-6烷基取代的苯基；(ⅱ)亞甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氫苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氫香豆素基；(b)當(dāng)Rx代表式Ⅱc的結(jié)構(gòu)片段時，則R6和/或R7(適當(dāng)時)代表取代的苯基。
當(dāng)n代表2,B代表式Ⅳb的結(jié)構(gòu)片段時，優(yōu)選的式Ⅰ化合物包括其中X1和X2二者不都代表CH2。
優(yōu)選的式Ⅰ化合物包括其中基團為下列的化合物R1代表任選取代的C1-6烷基或(特別是)H；Rx代表式Ⅱa的結(jié)構(gòu)片段；Y代表CH2或(CH2)2；n代表1；B代表式Ⅳa的結(jié)構(gòu)片段。優(yōu)選其片段是S-構(gòu)型的式Ⅰ化合物
以上片段中氮原子和碳原子上的波浪線表示所述片段的鍵的位置。
優(yōu)選的式Ⅰ化合物包括實施例1-、11、12、16-39、41、42、43的化合物和(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Aze-Pab。
制備根據(jù)本發(fā)明也提供了制備式Ⅰ化合物的方法，它包括(a)使式Ⅴ化合物，
其中R1、R2、R3和Rx如前定義，與式Ⅵ化合物偶合，
其中Y、n和B如前定義；或(b)使式Ⅶ化合物，
其中R1、R2、R3、Rx和Y如前定義，與式Ⅷ化合物偶合，H2N-(CH2)n-BⅧ其中n和B如前定義，例如，偶合可以在偶合體系(如在DMF、EDC、DCC、HBTU或TBTU中用草酰氯)、適當(dāng)?shù)膲A(如吡啶、DMAP、TEA或DIPEA)和適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑(如二氯甲烷、乙腈或DMF)的存在下進行。
式Ⅴ化合物可通過商業(yè)獲得，從文獻中得知或采用已知技術(shù)獲得。例如，在室溫下，在適當(dāng)?shù)膲A(如氫氧化鋰)和適當(dāng)?shù)娜軇?如THF和/或水)存在下，通過水解式Ⅸ化合物，
其中R為C1-6烷基或C1-3烷基苯基，R1、R2、R3和Rx如前定義，來制備式Ⅴ化合物。
式Ⅵ化合物可以通過使式Ⅹ化合物
其中Y如前定義，與如前定義的式Ⅷ化合物，例如在如上述合成式Ⅰ化合物的條件下反應(yīng)而制備。
采用已知技術(shù)可以很容易獲得式Ⅶ化合物。例如，通過使如前定義的式Ⅴ化合物與如前定義的式Ⅹ化合物，例如在如上述合成式Ⅰ化合物的條件下反應(yīng)，可制備式Ⅶ化合物。
例如，在低于室溫下(如在-70℃至-5℃之間)，在適當(dāng)?shù)倪€原劑(如硼氫化鈉)和適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑(如MeOH或EtOH)存在下，通過還原式Ⅺ化合物，
其中R、Rx和R2如前定義，可以制備其中R1和R3均為H的式Ⅸ化合物。
在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的條件下，在適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑(如THF)存在下，通過使如前定義的式Ⅺ化合物與式Ⅻ有機金屬試劑R3aMⅫ其中R3a代表C1-4烷基、環(huán)己基或苯基，M代表Li或MgHal而Hal代表氯、溴或碘，反應(yīng)可以制備式Ⅸ化合物，其中R1代表H,R3代表C1-4烷基、環(huán)己基或苯基。
在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的條件下，通過使式ⅩⅢ化合物RO-C(O)-C(Rx)H2ⅩⅢ其中R和Rx如前定義，與式ⅩⅣ化合物R2-C(O)-R3ⅩⅣ其中R2和R3如前定義，反應(yīng)也可以制備其中R1代表H的式Ⅸ化合物。
在適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑(如THF)中，在適當(dāng)?shù)倪€原劑(如甲硼烷)存在下，通過還原式ⅩⅤ化合物
其中Rxa代表如前定義的式Ⅱa的結(jié)構(gòu)片段，其中k和l均不代表0,R如前定義，可以制備式Ⅸ化合物，其中R1、R2和R3均代表H,Rx代表如前定義的式Ⅱa的結(jié)構(gòu)片段，其中k和l均不代表0。
從J.Org.Chem.54,3831(1989)可以得知或者按照與其所述相似的方法制備式Ⅺ化合物。
式ⅩⅤ化合物可見于文獻中，或采用已知的技術(shù)，例如使適當(dāng)?shù)谋嵫苌锱c式ⅩⅥ烷化劑RxaL ⅩⅥ其中L為離去基團(如鹵代(氯、溴、碘)或甲苯磺?；?，Rxa如前定義，例如在適當(dāng)?shù)膲A(如氫化鈉或乙醇鈉)存在下，在適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑中反應(yīng)而制備。
式Ⅷ、Ⅹ、Ⅻ、ⅩⅢ、ⅩⅣ和ⅩⅥ化合物可從商業(yè)獲得，或從文獻中得知或采用已知技術(shù)獲得。
采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可以對式Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅺ、ⅩⅢ、ⅩⅤ和ⅩⅥ含有的取代基，特別是苯基進行互變。
采用常規(guī)技術(shù)可將式Ⅰ化合物從其反應(yīng)混合物中分離出來。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，在上述過程中，中間體化合物的功能基團可能需要通過保護基團加以保護。
需要保護的功能基團包括羥基、氨基和羧酸。羥基的適當(dāng)?shù)谋Ｗo基團包括三烷基硅烷基或二芳烷基硅烷基(如叔-丁基二甲基硅烷基、叔-丁基二苯基硅烷基和三甲基硅烷基)和四氫吡喃基。羧酸的適當(dāng)?shù)谋Ｗo基團包括C1-6烷基或芐基酯。氨基、脒基和胍基的適當(dāng)?shù)谋Ｗo基團包括叔-丁氧基羰基或芐氧基羰基。脒基和胍基氮可以被單保護或雙保護。
功能基團的保護和去保護可以在偶合之前或偶合之后進行。
具體講，式Ⅰ化合物可以通過包括N-酰化的氨基酸或N-保護的氨基酸的偶合在內(nèi)的方法制備。當(dāng)使用N-保護的氨基酸時，可以在偶合后引入?；缓蟛捎脴?biāo)準(zhǔn)方法進行氮原子的去保護。
根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，或此后描述的技術(shù)，可以除去保護基團。
式Ⅰ化合物的某些保護的衍生物為新的化合物，它們可以在最后的去保護階段之前被制備以形成式Ⅰ化合物。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了式Ⅰa化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，
其中B1代表式Ⅳd、Ⅳe或Ⅳf的結(jié)構(gòu)片段
其中D1和D2獨立代表H、OH、ORa、OC(O)Rb、OC(O)ORc、C(O)ORd、C(O)Re,Ra、Rb、Rd、Rd和Re獨立代表苯基、芐基、(CH2)2OC(O)CH3或C1-6烷基，后一基團任選由氧間斷；及R1、R2、R3、Rx、Y、n、X1和X2如前定義，條件是D1和D2不能二者都代表H。
Ra、Rb、Rc、Rd和Re可代表的烷基基團可以是線性的或支鏈的，并可以是飽和的或未飽和的。
式Ⅳd、Ⅳe或Ⅳf的片段中碳原子上的波浪線表示該片段的鍵的位置。
優(yōu)選的式Ⅰa化合物包括其中D1代表H和D2代表OH、OCH3、OC(O)Rb或C(O)ORd(其中Rb和Rd如前定義)的那些化合物。
優(yōu)選的式Ⅰa化合物包括實施例8、9、10、13、14、15、40的化合物和(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Pro-Pab(Z)。
式Ⅰa化合物也可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)直接由式Ⅰ化合物制備。例如，于40℃、在適當(dāng)?shù)膲A(如TEA)存在下，在適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑(如TEF)中，使相應(yīng)的式Ⅰa化合物(其中D1或D2(適當(dāng)時)代表COORd,Rd如前定義)與羥胺(或其氫鹵酸鹽)反應(yīng)，可以制備其中D1或D2代表OH的式Ⅰa化合物。
另外，式Ⅰa化合物也可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)通過其它保護的式Ⅰa衍生物來制備。例如，于室溫下、在適當(dāng)?shù)膲A(如TEA、吡啶或DMAP)存在下，在適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑中，使相應(yīng)的式Ⅰa化合物(其中D1或D2(適當(dāng)時)代表OH)與式ⅩⅦRcC(O)-O-C(O)RcⅩⅦ(其中Rc如前定義)反應(yīng)可以制備其中D1或D2代表CO(O)ORc和Rc如前定義的式Ⅰa化合物。
例如，于40-60℃、在適當(dāng)?shù)膲A(如TEA)存在下，在適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑(如THF、CH3CN、DMF或DMSO)中，通過使式ⅩⅧ化合物
其中Ba代表1,4-亞苯基或1,4-亞環(huán)己基，而R1、R2、R3、Rx、Y和n如前定義，與式ⅩⅨ化合物H2NORa1ⅩⅨ其中Ra1代表H或Ra而Ra如前定義，反應(yīng)可以制備式Ⅰa化合物，其中B1代表式Ⅳd或Ⅳf的結(jié)構(gòu)片段，D1代表H和D2代表OH或ORa(其中Ra如前定義)。
根據(jù)肽偶合技術(shù)，例如與前述制備式Ⅰ化合物的方法類似的方式可以制備式ⅩⅧ化合物。式ⅩⅦ和ⅩⅨ化合物是商業(yè)可得的，是文獻中熟知的，或用已知技術(shù)獲得。
J W McOmie編輯的“Protective Groups in Organic Chemistry”(Plenum Press(1973))和“Protective Groups in Organic Synthesis”(2ndedition,T W Greene&P G M Wutz,Wiley-Interscience(1991))對保護基團的使用作了充分的描述。
本領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)理解，雖然式Ⅰ化合物的被保護的衍生物可能本身并不具有藥理活性，但它們經(jīng)胃腸外或口服給藥后，會在體內(nèi)形成具有藥理活性的本發(fā)明化合物。因而此類衍生物可被稱作“藥物前體”。式Ⅰ化合物的所有藥物前體均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
特別用作藥物前體的式Ⅰ化合物的被保護的衍生物包括式Ⅰa化合物。
式Ⅰ化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，及其藥物前體(包括為式Ⅰ化合物的藥物前體的式Ⅰa化合物)此后統(tǒng)稱為“本發(fā)明的化合物”。
醫(yī)藥用途本發(fā)明的化合物是有用的，因為它們具有藥理活性。因而它們被稱作藥物。
因此，根據(jù)本發(fā)明的另一個方面提供了用作藥物的本發(fā)明化合物。
特別是，本發(fā)明的化合物無論是以其本身或是作為藥物前體給藥，均為有效的凝血酶抑制劑，如在下述試驗中所證明的那樣。
因而期望本發(fā)明的化合物可用于需要抑制凝血酶的那些疾病。
因此本發(fā)明的化合物適用于治療或預(yù)防動物包括人的血液和組織中的血栓形成和高凝固性。
已知高凝固性可導(dǎo)致血栓栓塞性疾病?？梢蕴峒暗呐c高凝固性和血栓栓塞性疾病有關(guān)的疾病包括活化蛋白C的抗性，如因子Ⅴ-突變(因子Ⅴ Leiden)、及抗凝血酶Ⅲ、蛋白C、蛋白S、肝素輔因子Ⅱ的先天性或獲得性缺乏。已知與高凝固性和血栓栓塞性疾病有關(guān)的其它疾病包括循環(huán)抗磷脂抗體(Lupus抗凝劑)、高胱氨酸血癥(homocysteinemi)、肝素誘導(dǎo)的血小板減少和纖維蛋白溶解缺陷。因而本發(fā)明化合物適應(yīng)于這些疾病的治療和/或預(yù)防性治療。
本發(fā)明化合物還適應(yīng)于治療這些病癥，在這些病癥中出現(xiàn)不需要的過量的凝血酶而無凝固性過高的體征，例如神經(jīng)退化性疾病如Alzheimer氏病。
可以提及的特殊疾病狀態(tài)包括治療和/預(yù)防性治療下列疾病靜脈血栓形成和肺血栓栓塞，動脈血栓形成(如心肌梗塞、不穩(wěn)定性心絞痛、基于血栓形成的中風(fēng)和外周動脈血栓形成)和動脈原纖維形成期間常常來自心房的系統(tǒng)性栓塞，或透壁心肌梗塞后來自左心室系統(tǒng)性血栓栓塞。
而且，本發(fā)明化合物還有望用于預(yù)防血栓溶解、經(jīng)皮透腔血管成形術(shù)(PTA)和冠狀動脈分流術(shù)后的再閉塞；防止通常因顯微手術(shù)和血管手術(shù)引起的血栓再形成。
其它的適應(yīng)癥包括預(yù)防和/或治療因細菌、多發(fā)性創(chuàng)傷、中毒或任何其它機制引起的播散性血管內(nèi)凝血；血液在體內(nèi)與異物表面如血管移植物、血管移植片固定模、血管導(dǎo)管、機械和生物修復(fù)的瓣膜或任何其它的醫(yī)學(xué)裝置接觸時抗凝劑治療；血液與體外醫(yī)學(xué)裝置如心血管手術(shù)期間使用的心-肺機或血液透析裝置接觸時的抗凝劑治療。
除了凝血酶對凝固過程的作用外，已知它還激活大量的細胞(如中性白細胞、成纖維細胞、內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞)。因此，本發(fā)明化合物也可用于治療和/或預(yù)防治療自發(fā)的和成人呼吸窘迫綜合征、放療或化療后的肺纖維化、敗血癥性休克、敗血病、炎癥性反應(yīng)，這包括(但不限于)水腫、急性或慢性動脈粥樣硬化如冠狀動脈病、腦動脈病、外周動脈病、再灌注損害和經(jīng)皮透腔血管成形術(shù)(PTA)后的再狹窄。
抑制胰蛋白酶和/或凝血酶的本發(fā)明化合物也可用于治療胰腺炎。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供治療其中凝血酶需要抑制的疾病的方法，該方法包括對患有此類疾病或?qū)Υ祟惣膊∫赘械娜巳航o予治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明化合物通?？梢运幱弥苿┑男问浇?jīng)口、靜脈、皮下、頰下、直腸、皮膚、鼻內(nèi)、氣管、支氣管、經(jīng)任何其它的胃腸外途徑或通過吸入給予，該制劑包括在藥學(xué)上可接受的劑型中的作為自由堿，或者作為藥學(xué)上可接受的無毒有機酸或無機酸的加成鹽的活性成分。根據(jù)接受治療的疾病和病人及給藥途徑，可以給予不同劑量的所述組合物。
本發(fā)明化合物可以與任何具有不同作用機理的抗凝劑例如抗血小板藥乙酰水楊酸、噻氯匹定、clopidogrel、血栓烷受體和/或合成酶抑制劑、纖維蛋白原受體拮抗劑、擬前列環(huán)素、磷酸二酯酶抑制劑和ADP-受體(P2T)拮抗劑聯(lián)合和/或共同給予。
本發(fā)明化合物可以與溶栓劑如組織纖維蛋白溶酶原激活劑(天然的，重組的或修飾的)、鏈激酶、尿激酶、尿激酶原、甲氧苯甲酰纖維蛋白溶酶原-鏈激酶激活劑配合物(APSAC)、動物涎腺纖維蛋白溶酶原激活劑等聯(lián)合和/或共同給予以治療血栓形成病，特別是心肌梗塞。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供包括本發(fā)明化合物與藥學(xué)上可接受的輔助劑、稀釋劑或載體混合的藥用制劑。
本發(fā)明化合物在人的治療中口服給予的適宜的日劑量約為0.001-100mg/kg體重，胃腸外給予約為0.001-50mg/kg體重。
與現(xiàn)有已知化合物相比，本發(fā)明化合物具有更有效、較少副作用、作用時間長、活性范圍廣更有效力、較少產(chǎn)生副作用，且更容易吸收的優(yōu)點，或者它們可能具有其它有用的藥學(xué)特性的優(yōu)點。
生物學(xué)試驗試驗A凝血酶凝固時間(TT)測定將人凝血酶(T6769,Sigma Chem Co)在緩沖液(pH7.4,100μl)和抑制劑溶液(100μl)中孵育1分鐘。然后加入混合的正常含枸櫞酸鹽的人血漿100μl并在自動裝置(KC10,Amelung)上測量凝固時間。
根據(jù)凝固時間(秒)對抑制濃度繪圖，用內(nèi)插法確定IC50TT。
在本試驗中，IC50TT是在人血漿凝血酶凝固時間兩倍處的抑制濃度。
試驗B用生色自動分析(robotic assay)測定凝血酶抑制根據(jù)生色底物方法，在Plato 3300自動微滴定板處理器(Rosys AG,CH-8634 Hombrechtikon,Switzerland)，用96-孔、半體積的微滴定板(Costar,Cambridge,MA,USA；Cat No 3690)測定溶血酶抑制劑效價。將實驗物質(zhì)在DMSO(72μl)中的儲備液(1mmol/L)用DMSO系列稀釋1∶3(24+48μl)獲得10種不同的濃度，以便在測定中作為樣品進行分析。用124μl測試緩沖液稀釋2μl實驗樣品，加入在測試緩沖液中的12μl生色底物溶液(S-2366,Chromogenix,Mlndal,Sweden)，最后加入在測試緩沖液中的12μlα-凝血酶溶液，(人α-凝血酶，Sigma Chemical Co.)，并將樣品混合。最終的測試濃度是試驗物質(zhì)0.00068-13.3μmol/L,S-2366 0.30mmol/L,α-凝血酶0.020NIHU/ml。于37℃孵育40分鐘時的線性吸收增量被用于計算試驗物質(zhì)(與無抑制劑的空白對照比較)抑制百分率。IC50-自動值，即對應(yīng)引起凝血酶活性50％抑制的抑制劑濃度，由log劑量與％抑制曲線來計算。
試驗C人凝血酶抑制常數(shù)Ki確定采用生色底物方法，于37℃在Cobas Bio離心分析儀(Roche,Basel,Switzerland)上進行以獲得Ki確定值。在三種不同的底物濃度下，人α-凝血酶與各種濃度的試驗物質(zhì)孵育后測定殘留酶活性并測定405nm處光吸收變化。
將試驗化合物溶液(100μl；通常在含有BSA 10g/L的緩沖液或鹽水中)與200μl 人α-凝血酶(Sigma Chemical Co)在含有BSA(10g/L)的測試緩沖液(0.05mol/L Tris-HCl pH7.4，氯化鈉調(diào)節(jié)離子強度0.15)中混合，并在Cobas Bio上作為樣品來分析。將60μl樣品與20μl水一起加入到在測試緩沖液中的320μl底物S-2238(Chromogenix,Mlndal,Sweden)中，并監(jiān)測吸收度的改變(ΔA/min)。S-2238的最終濃度是16、24和50μmol/L，而凝血酶是0.125 NIH U/ml。
穩(wěn)態(tài)反應(yīng)率用于繪制Dixon圖，即抑制劑濃度對1/(ΔA/min)的圖?？赡嫘愿偁幰种苿τ诓煌孜餄舛鹊臄?shù)據(jù)點通常形成截距為X=-Ki的直線。
實驗D
激活的部分組織促凝血酶原激酶時間(APTT)的測定在備用的正常含枸櫞酸鹽的血漿中，用Stago生產(chǎn)的試劑PTTAutomated 5測定APTT。將所述抑制劑加入該血漿(10μl抑制劑溶液對90μl血漿)中，隨后加入所述試劑和氯化鈣溶液，根據(jù)試劑生產(chǎn)廠商的說明書，采用血凝分析儀KC10(Amelung)測定該混合物中的APTT。根據(jù)凝固時間(秒)對在血漿中的抑制劑濃度繪圖，通過內(nèi)推法確定IC50APTT。
IC50APTT定義為在兩倍激活的部分組織促凝血酶原激酶時間處的人血漿中的抑制劑濃度。
實驗E體外凝血酶時間的測定在實驗的前一天或前兩天，對清醒的大鼠的頸動脈插入取血樣的導(dǎo)管，并在口服或胃腸外給予溶解于乙醇∶SolutolTM∶水(5∶5∶90)式Ⅰ和Ⅰa化合物后測定凝血酶的抑制。在將所述化合物加入含有1份枸櫞酸鈉溶液(0.13mol/L)和9份血的塑料試管中后，于實驗的當(dāng)天定時抽取血樣。離心該管以獲得含較少血小板的血漿。按照以下所述，用該血漿測定凝血酶時間。
用鹽水溶液(0.9％,100μl)稀釋含枸櫞酸鹽的鼠血漿(100μl),通過加入在緩沖溶液(pH7.4,100μl)中的人凝血酶(T6769,Sigma Chem Co,USA)開始凝固血漿。用自動裝置(KC10,Amelumg,Germany)測量凝固時間。
給予式Ⅰa化合物時，通過使用與儲備的含枸櫞酸鹽的鼠血漿的凝血酶時間對溶解在鹽水中的相應(yīng)的“活性”凝血酶抑制劑的已知濃度有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，來估算適宜的活性凝血酶抑制劑在鼠血漿中的濃度。
根據(jù)估算的式Ⅰ活性凝血酶抑制劑(假定凝血酶時間延長是由上述化合物引起)在大鼠中的血漿濃度，用梯形法則和外推數(shù)據(jù)至無窮來計算口服和/或胃腸外給予式Ⅰa的相應(yīng)的藥物前體后曲線下的面積(AUCpd)。
按照下式計算口服或胃腸外給予式Ⅰa的藥物前體后活性的式Ⅰ凝血酶抑制劑的生物利用度[(AUCpd/劑量)/(AUC活性的、胃腸外/劑量)]×100其中(AUC活性的、胃腸外)代表如上所述的經(jīng)胃腸外給予清醒大鼠以式Ⅰ的相應(yīng)的活性凝血酶抑制劑后的AUC。
試驗F在體外尿中凝血酶時間的測定口服或胃腸外給予本發(fā)明化合物(溶于乙醇∶SolutolutolTM∶水(5∶5∶90))后由尿排泄的式(Ⅰ)凝血酶抑制劑的量，通過測定在體外尿中的凝血酶時間來測算(假定凝血酶時間延長是由上述化合物引起)。
口服給予本發(fā)明化合物后，將清醒鼠置于代謝籠24小時，分開收集尿和糞便。如下所述測定收集的尿中的凝血酶時間。
將正常的含枸櫞酸鹽的人血漿(100μl)與濃縮的鼠尿或其鹽水稀釋液一起孵育1分鐘。然后通過加入在緩沖液(pH 7.4；100μl)中的人凝血酶(T6769,Sigma Chem Company)使血漿開始凝固。在自動裝置(KC10；Amelung)上測定凝固時間。
使用在正常的含枸櫞酸鹽的人血漿中的凝血酶時間對溶解于濃縮鼠尿(或其鹽水稀釋液)中的已知濃度的上述活性凝血酶抑制劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測算鼠尿中的活性式(Ⅰ)凝血酶抑制劑濃度。用在尿中估算的上述活性抑制劑的平均濃度乘以24小時產(chǎn)生的鼠尿總量，可以計算尿中排泄活性抑制劑的量(AMOUNTpd)。
按照下式計算口服或胃腸外給予式Ⅰa的藥物前體后活性的式Ⅰ凝血酶抑制劑的生物利用度[(AMOUNTpd/劑量)/(AMOUNT活性的、胃腸外/劑量)]×100其中(AMOUNT活性的，胃腸外)代表如上所述的經(jīng)胃腸外給予清醒大鼠以式Ⅰ的相應(yīng)的活性凝血酶抑制劑后尿中的排泄量。
通過以下實施例說明本發(fā)明實施例一般試驗方法用裝備有電噴界面的Finnigan MAT TSQ 700三相四極質(zhì)譜儀(FAB-MS)和裝備有電噴界面的VG PlatformⅡ質(zhì)譜儀(LC-MS)記錄質(zhì)譜。在BRUKER ACP 300和Varian UNITY plus 400、500和600光譜儀上進行1H NMR和13C NMR測定，1H的操作頻率分別為300.13、399.96、499.82和599.94MHz，而13C則分別為75.46、100.58、125.69和150.88MHz。采用UV檢測器(270-290nm)，以10-50ml/min的流速在反相柱(250mm,20或50mm；5-7μM相ChromasilC8)進行制備性HPLC。
原料的制備實施例AH-Aze-Pab(Z)(ⅰ)Boc-Aze-OH于室溫攪拌下，將碳酸氫二叔丁酯(di-tert-butyl dicarbonate)(13.75g；63mmol)加入L-氮雜-2-環(huán)丁烷羧酸(H-Aze-OH；5.777g；57mmol)和碳酸鈉(6.04g；57mmol)在水(50ml)和THF(100ml)的混合物中。60小時后真空除去THF，用水稀釋該混合物，然后用2M硫酸氫鉀酸化。用二氯甲烷提取，再經(jīng)干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)溶劑得到殘留物，使該殘留物從二氯甲烷己烷中結(jié)晶得到10.87g(95％)無色晶體。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ4.85-4.7(br s,1H),4.0-3.75(m,2H),2.65(m,2H),1.4(s,9H)。
(ⅱ)Boc-Aze-Pab(Z)在室溫下，將EDC(13.5g；70mmol)加入Boc-Aze-OH(10.87g；54mmol；得自上述步驟(ⅰ))、H-Pab(Z)×HCl(18.31g；57mmol；根據(jù)國際專利申請WO 94/29336所述方法制備)和DMAP(9.9g；81mmol)在乙腈(270ml)的混合物中。16小時后真空蒸發(fā)溶劑，并用乙酸乙酯代替。用水和枸櫞酸水溶液洗滌該混合物。干燥(硫酸鎂)有機層，真空蒸發(fā)溶劑得到殘留物，該殘留物從二氯甲烷、甲苯、二異丙醚和石油醚中結(jié)晶得到17.83g Boc-Aze-Pab(Z)。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ7.85-7.75(d,1H),7.45-7.2(m,7H),5.2(s,2H),4.7(t,1),4.6-4.4(m,2H),3.95-3.8(“q”,1H),3.8-3.7(q,1H),2.5-2.3(m,2H),1.4(s,9H)。
(ⅲ)H-Aze-Pab(Z)使Boc-Aze-Pab(Z)(2.44g；5.2mmol)溶于三氟乙酸(10ml)和二氯甲烷(10ml)的混合液中。30分鐘后真空除去溶劑和三氟乙酸，使殘留物溶于二氯甲烷中。用碳酸鈉/水溶液(10％)洗滌有機相，干燥(碳酸鉀)。真空除去溶劑得到殘留物，該殘留物從二氯甲烷中結(jié)晶得到為無色晶體1.095g(57％)H-Aze-Pab(Z)。1H NMR(300MHz；CD3OD):δ 7.85-7.75(d,2H),7.45-7.25(m,7H),5.2(s,2H),4.5(s,2H),4.3(d,1H),3.65(q,1H),3.4-3.3(m,1H),2.7-2.5(m,1H),2.4-2.2(m,1H)。
實施例BH-Pic-Pab(Z)×2HCl(ⅰ)Boc-Pic-OH根據(jù)M.Bodanszky和A.Bodanszky(“The Practice of PeptideSynthesis”,Springer-Verlag(1984))的方法制備，但用THF代替二氧六環(huán)作為溶劑。
1H NMR(300MHz；CDCl3):δ5.0-4.8(br d,1H),4.0(br s,1H),3.0(br s,1H),2.20(d,1H),1.65(m,2H),1.5-1.3(s+m,13H)。
(ⅱ)Boc-Pic-Pab(Z)使Boc-Pic-OH(2.02g；8.8mmol；得自上述步驟(ⅰ))、H-Pab(Z)×1HCl(2.36g；7.4mmol；根據(jù)國際專利申請WO 94/29336所述方法制備)和3.9g(32mmol)DMAP溶于二氯甲烷(40ml)中。冷卻該混合物至0℃并加入1.99g(10.4mmol)EDC。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物3天。將該混合物倒入0.2M硫酸氫鉀溶液中，并用二氯甲烷提取兩次。干燥(硫酸鈉)有機層并蒸發(fā)。粗品經(jīng)硅膠快速層析，用乙酸乙酯∶甲苯7∶3作為洗脫劑得到1.59g(44％)產(chǎn)物。FAB-MS m/z495(M+1)+1H NMR(400MHz；CDCl3):δ7.83(d,2H),7.43(d,2H),7.36-7.11(m,5H),6.52(bs,NH),5.20(s,2H),4.81-4.72(m,1H),4.61-4.34(m,2H),4.10-3.90(m,1H),2.79-2.64(m,1H),2.36-2.25(m,1H),1.7-1.3(m,14H)。
(ⅲ)H-Pic-Pab(Z)×2HCl使Boc-Pic-Pab(Z)(1.59g；3.25mmol；得自以上步驟(ⅱ))溶于100ml用HCl飽和的乙酸乙酯中。半小時后，蒸發(fā)該反應(yīng)混合物得到定量產(chǎn)量的標(biāo)題產(chǎn)物。FAB-MS m/z395(M+1)+1H NMR(300MHz；D2O):δ7.82(d,2H),7.63-7.41(m,7H),5.47(s,2H),4.69-4.49(AB-系統(tǒng)位于δ4.59,2H),4.03(dd,lH),3.52(bd,1H),3.10(dt,lH),2.29(dd,1H),2.08-1.61(m,5H)。
實施例CH-Aze-Pig(Z)×2HCl(ⅰ)Boc-Aze-Pig(Z)在室溫下，使Boc-Aze-OH(1.03；5.12mmol；得自上述實施例A(ⅰ))溶于乙腈(50ml)中，并將DMAP(1.57g,12.8mmol)加入該生成的溶液中。然后加入在DMF(20ml)和EDC(1.47g；7.68mmol)中的H-Pig(Z)×2HCl(1.86g,5.12mmol；根據(jù)國際專利申請WO 94/29336所述方法制備)，于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物20小時。隨后濃縮該反應(yīng)混合物，用二氯甲烷(100ml)稀釋，用水(2×30ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)有機層并蒸發(fā)。粗品產(chǎn)物(3.77g)經(jīng)硅膠柱快速層析純化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)洗脫，得到1.24g(51％)標(biāo)題化合物。1H NMR(400MHz；CDCl3):δ7.27-7.43(m,5H),5.12(s,2H),4.60-4.67(t,1H),4.16-4.26(d,2H),3.86-3.95(m,1H),3.74-3.82(m,1H),3.11-3.30(m,2H),2.78-2.89(m,2H),2.33-2.52(bs,2H),1.71-1.83(m,3H),1.44(s,9H),1.15-1.29(m,2H)。
(ⅱ)H-Aze-Pig(Z)×2HCl于室溫下,將在用HCl飽和的乙酸乙酯(75ml)中的Boc-Aze-Pig(Z)(1.2g；2.53mmol；得自以上步驟(ⅰ))攪拌1小時。蒸發(fā)該反應(yīng)混合物，用水稀釋并用甲苯提取。凍干水層得到1.085g(96％)標(biāo)題化合物。1H NMR(500MHz；CD3OD):δ7.32-7.46(m,5H),5.28(s,2H),4.99-5.05(t,1H),4.08-4.16(m,1H),3.91-3.99(m,3H),3.13-3.25(m,4H),2.79-2.88(m,1H),2.47-2.57(m,1H),1.82-1.96(m,3H),1.26-1.40(m,2H)。
實施例D(R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OH(ⅰ)(R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(O)OTBDMS使(R,S)-托品酸(6.6g；0.040mol)溶于DMF(20ml)中。加入咪唑(13.0g；0.192mol)和TBDMS-Cl(14.4g；0.096mol)，于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物4天。加入水(0.5L)并用乙醚提取三次。用枸櫞酸水溶液(10％)、水、碳酸氫鈉水溶液和水洗滌合并的有機層并蒸發(fā)。粗品產(chǎn)物可不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。1H NMR(500MHz；CDCl3):δ7.17-7.40(m,5H),4.16-4.23(m,1H),3.77-3.87(m,2H),0.88-0.92(m,18H),0.02-0.29(m,12H)。
(ⅱ)(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)OH將(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)OTBDMS(16.0g；0.040mol；來自步驟(ⅰ))、碳酸鉀(14.0g；0.10mol)、MeOH(400ml)和水(150ml)的混合物于室溫下攪拌過夜。濃縮后用乙醚提取水層。用枸櫞酸調(diào)節(jié)pH，用乙醚再次提取提取水層三次。用水洗滌合并的有機層，干燥并蒸發(fā)得到9.7g(87％)標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ7.20-7.40(m,5H),4.05-4.20(m,1H)，3.75-3.90(m,2H),0.85(s,9H),0.00-0.10(m,6H)。
(ⅲ)(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OBn
于室溫下，將EDC(游離堿；1.45ml；8.4mmol)加入(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)OH(2.01g；7.2mmol；來自以上步驟(ⅱ))、脯氨酸芐酯鹽酸鹽(1.85g；7.6mmol)和DMAP(1.41g；11.5mmol)在乙腈(20ml)的混合物中。18小時后真空除去溶劑，粗品產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱快速層析，用乙酸乙酯∶甲苯(2∶1)作為洗脫劑，得到2.7g(80％)產(chǎn)物。
(ⅳ)(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OH將(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OBn(2.6g；5.56mmol；來自以上步驟(ⅲ))溶于乙醇(100ml)中，加入Pd/C(10％；0.29g)。使該混合物于常壓下氫化3小時。過濾后蒸發(fā)該溶液。標(biāo)題化合物的產(chǎn)量為1.7g(81％)。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ7.15-7.40(m,5H),4.45-4.65(m,1H),4.15-4.30(m,1H),3.85-3.95(m,1H),3.55-3.80(m,2H),3.25-3.40(m,1H),2.30-2.40(m,1H),1.75-2.10(m,3H),0.75-0.90(m,9H),-0.20-0.05(m,6H)。13C NMR(75.5MHz；CDCl3)脒和羰基碳174.00,172.63。
實施例E(R,S)-3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸(ⅰ)(R,S)-3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸乙酯于-70℃，將硼氫化鈉(2當(dāng)量)加入3-氧代-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸乙酯(0.067g；0.3mmol；根據(jù)J.Org.Chem.54,3831(1989)所述方法制備)的乙醇溶液中。于-70℃攪拌2小時，于-5℃攪拌4小時后，加入水，濃縮該反應(yīng)混合物并用乙酸乙酯提取。用鹽水洗滌有機相，干燥(硫酸鎂)并濃縮得到標(biāo)題化合物。
(ⅱ)(R,S)-3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸將來自以上步驟(ⅰ)的(R,S)-3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸乙酯溶于THF∶水(1∶1)中。加入氫氧化鋰×水(2當(dāng)量)，并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物1小時。濃縮該反應(yīng)混合物，用二氯甲烷提取。干燥(硫酸鎂)有機相，并濃縮得到3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸，它可不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。LC-MS m/z195(M-1)-1H NMR(400MHz；CD3OD):δ6.73-6.79(m,1H),6.34-6.46(m,3H),3.57-3.66(m,1H),3.30(s,3H),3.22-3.29(m,2H)。
實施例F(R,S)-3-羥基-2-(3,4-二甲氧基苯基)-丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,4-二甲氧基苯基)-丙酸乙酯作為原料制備。LC-MS m/z225(M-1)-1H NMR(400MHz；CD3OD):δ6.84-6.95(m,3H),4.01-4.10(m,1H),3.81(s,3-H),3.79(s,3H),3.65-3.73(m,2H)。
實施例G(R,S)-3-羥基-2-(2-萘基)-丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(2-萘基)-丙酸乙酯作為原料制備。LC-MS m/z215(M-1)-1H NMR(400MHz；CD3OD):δ7.77-7.85(m,4H),7.41-7.50(m,3H),4.14-4.22(m,1H),3.89-3.95(s,1H),3.80-3.87(m,1H)。
實施例H(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二甲基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,5-二甲基苯基)丙酸乙酯作為原料制備。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.94(s,1H),6.89(s,2H),4.13(dd,1H),3.80(m,2H),3.3(s,6H)。
實施例I(R,S)-3-羥基-2-(3-三氟甲基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3-三氟甲基苯基)丙酸乙酯作為原料制備。
LC-MS m/z233(M-1)-實施例J(R,S)-3-羥基-2-(3-羥基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3-羥基苯基)丙酸乙酯作為原料制備。
LC-MS m/z181(M-1)-實施例K(R,S)-3-羥基-2-(3-氟代苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3-氟代苯基)丙酸乙酯作為原料制備。
LC-MS m/z183(M-1)-；FAB-MS m/z185(M+1)+實施例L(R,S)-3-羥基-2-(3-氯代苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3-氯代苯基)丙酸乙酯作為原料制備。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ7.34-7.30(m,3H),7.21(dt,1H),5.67(b,2H),4.15(dd,1H),3.87(m,2H)。
實施例M(R,S)-3-羥基-2-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯作為原料制備。
LC-MS m/z183(M-1)-實施例N3-羥基-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-丙酸(ⅰ)3-溴甲基-5-甲基苯甲醚將3,5-甲基苯甲醚(13.6g；0.1mol)、NBS(17.8g,0.1mol)和AIBN(1.1g；6.7mmol)在四氯化碳中的混合物回流2小時。冷卻生成的混合物，過濾并蒸發(fā)。粗品產(chǎn)物(含有約20％的原料)可用于下一步驟。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.82(s,1H),6.77(s,1H),6.68(s,1H),4.47(s,2H),3.82(s,3H),2.37(s,3H)。
(ⅱ)3-甲氧基-5-甲基苯乙腈將NaCN(8.2g；0.16mol)加入3-溴代甲基-5-甲基苯甲醚(17g；0.008mol；來自以上步驟(ⅰ))的DMSO(25ml)溶液中。該混合物在加入氰化物后溫度升高，用1小時使之冷卻至室溫。然后加入乙腈(25ml)，使該混合物回流1小時。濃縮該反應(yīng)混合物，加入水(200ml)，用乙醚提取生成的溶液三次。用水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并濃縮得到9g(70％)黃色油狀的副標(biāo)題化合物，它可不經(jīng)進一步純化而使用。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.74(s,1H),6.67(2s,2H),3.79(s,3H),3.68(s,2H),2.33(s,3H)。
(ⅲ)3-甲氧基-5-甲基苯乙酸攪拌下、于120℃、在高壓釜中，將3-甲氧基-5-甲基苯乙腈(9g；0.06mol；來自以上步驟(ⅱ))和氫氧化鉀(17g；0.3mol)在150ml水∶iPrOH(2∶1)的溶液加熱過夜，然后在室溫下放置兩天。濃縮反應(yīng)混合物并用乙醚提取。酸化該水相并用乙醚提取兩次。用水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)為殘留物，使殘留物溶于乙醇中，用活性炭處理，過濾并蒸發(fā)得到黃色晶體的副標(biāo)題化合物(8,1g；80％)。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.68(s,1H),6.63(s,2H),3.78(s,3H),3.58(s,2H),2.31(s,3H)。
(ⅳ)3-甲氧基-5-甲基苯乙酸乙酯將濃硫酸加入3-甲氧基-5-甲基苯乙酸(8.1g；0.045mol；得自以上步驟(ⅲ))的乙醇(100ml)溶液中，使該溶液靜置40小時。濃縮該反應(yīng)混合物，使粗產(chǎn)物在水和乙醚中分配。用碳酸氫鈉水溶液和水洗滌有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到8.0g(85％)棕色油狀的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.71(s,1H),6.65(s,1H),6.64(s,1H),4.16(q,2H),3.79(s,3H),3.55(s,2H),2.23(s,3H),1.27(t,3H)。
(ⅴ)3-氧代-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)丙酸乙酯將鈉(0.39g；17mmol)分小塊加入3-甲氧基-5-甲基苯乙酸乙酯(3.0g；14mmol；得自以上步驟(ⅳ))和甲酸乙酯(1.9g；26mmol)在乙醚(75ml)的溶液中。冷卻該溶液至0℃，然后加入乙醇(abs；0.24ml)。向生成的淤漿加入乙醚(100ml)、乙醇(5ml)和水直至淤漿溶解。收集水相，酸化至pH 2(HCl/aq)并用乙醚提取。用碳酸氫鈉水溶液洗滌該有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到2g(59％)的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ12.12(d,0.5H),7.31(d,0.5H),6.62(bs,2H),4.26(q,2H),3.80(s,3H),2.35(s,3H),1.33(t,3H)。
(ⅵ)3-羥基-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)丙酸乙酯使3-氧代-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)丙酸乙酯(1.9g；8.2mmol；得自以上步驟(ⅴ))的甲醇(50ml)的攪拌溶液冷卻至-15℃。分批加入硼氫化鈉(0.61g；16mmol)。于-15℃至-5℃攪拌該混合物3小時。然后加入水，濃縮生成的混合物。用乙酸乙酯提取水相，用水洗滌有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到2.0g(59％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.65(s,1H),6.63(s,1H),6.58(s,1H),4.3-4.05(m,3H),3.8(m,5H),2.30(s,3H),1.32(t,3H)。
(ⅷ)3-羥基-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)丙酸于室溫下，將3-羥基-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)丙酸乙酯(1.7g；7.1mmol；得自以上步驟(ⅵ))和氫氧化鈉(7.0g,180mmol)在200ml甲醇∶水(1∶1)的溶液攪拌2小時。濃縮該反應(yīng)混合物，用乙醚洗滌，酸化。用乙醚提取生成的混合物兩次，用水洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到1.47g(98％)。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.70(s,1H),6.66(s,1H),6.65(s,1H),4.12(dd,1H),3.85-3.75(m,2H),3.75(s,3H),2.32(s,3H)。
實施例O(R,S)-3-羥基-2-(2,5-二甲氧基苯基)-丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(2,5-二甲氧基苯基)丙酸乙酯作為原料制備。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.89(d,1H),6.85(d,1H),6.78(dd,1H),4.86(寬峰，2H),4.14(dd,1H),3.98(dd,1H),3.78(s,3H),2.72(s,3H),3.67(dd,1H)。
實施例P(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二甲氧基苯基)-丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,5-二甲氧基苯基)丙酸乙酯作為原料制備。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.44(s,2H),6.40(s,1H),4.13(dd,1H),3.85-3.75(m,2H),3.75(s,6H)。
實施例Q(R,S)-3-羥基-2-(3,4-亞甲二氧基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,4-亞甲二氧基苯基)丙酸乙酯作為原料制備。
1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.78(s,1H),6.73(s,2H),5.95(s,2H),4.08(dd,1H),3.78(m,2H)。
實施例R(R,S)-3-羥基-2-(1-萘基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(1-萘基)丙酸乙酯作為原料制備。
LC-MS m/z215(M-1)-實施例S(R,S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBDMS)COOH(ⅰ)(R,S)-甲氧基苯基-CH(CH2OTBDMS)COOTBDMS將咪唑(6.7g；97.8mmol)和TBDMS-Cl(7.4g；48.9mmol)加入(R,S)-3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)丙酸(4g；20.4mmol；得自以上實施例E(ⅱ))的DMF(20ml)溶液中。于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物3天。然后加入水(0.5L)，用乙醚提取該混合物三次。用枸櫞酸(10％)、水、碳酸氫鈉水溶液和水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品(8.53g；98％的黃色油狀物)可不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.22(t,1H),6.90(d,1H),6.88(m,1H),6.81(m,1H),4.16(t,1H),3.80(s,3H),3.82-3.72(m,2H),0.88(s,6H),0.87(s,6H),0.22(d,6H),0.02(d,6H)。
(ⅱ)(R,S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBDMS)COOH于室溫下，將(R,S)-甲氧基苯基-CH(CH2OTBDMS)COOTBDMS(8.0g；18.8mmol)、碳酸鉀(6.25g；45.2mmol)、甲醇(120ml)和水(40ml)的混合物攪拌過夜。濃縮后用乙醚洗滌水層。用枸櫞酸酸化并用乙醚提取三次。用水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到5.0g(87％)的黃色油狀的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CD3OD):δ7.21(t,1H),6.89(s+d,2H),6.82(m,1H),4.86(b,2H),4.13(dd,1H),3.76(s,3H),3.8-3.7(m,2H),0.86(s,9H),0.02(d,6H)。
實施例T(R,S)-3-羥基-2-(3-Boc-氨基苯基)丙酸(ⅰ)3-氨基苯乙酸乙酯將間-氨基苯甲酸(3.0g；19.8mm0l)和濃硫酸(2ml)的乙醇(abs.；20ml)溶液于75℃加熱3天。濃縮該溶液，加入碳酸鈉水溶液并用乙醚(80ml)提取該混合物。用鹽水洗滌有機層，干燥(硫酸鈉)并濃縮得到2.9g(82％)的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.10(t,1H),6.77(d,1H),6.62(t,1H),6.58(m,1H),4.15(q,2H),3.65(b,2H),3.52(s,2H),1.25(t,3H)。
(ⅱ)3-(Boc-氨基)苯乙酸乙酯于室溫下，將3-氨基苯乙酸乙酯(1.9g；11mmol；得自以上步驟(ⅰ))和Boc2O(2.3g；11mmol)的THF(50ml)溶液攪拌過夜。濃縮該反應(yīng)混合物，加入鹽酸水溶液。用乙醚提取混合物水溶液，用水洗滌有機層，干燥(硫酸鈉)并濃縮得到2.5g(84％)的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.33(s,1H),7.24(dd,2H),6.96(m,1H),6.50(b,1H),4.15(q,2H),3.58(s,2H),1.53(s,9H),1.26(t,3H)。
(ⅲ)2-((3-Boc-氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯將鈉(0.34g；15mmol)分小塊加入3-(Boc-氨基)苯乙酸乙酯(2.4g；8.6mmol；得自以上步驟(ⅱ))和甲酸乙酯(1.1g；15mmol)在無水乙醚(60ml)的溶液中。將該溶液置冰浴上冷卻，其后加入乙醇(abs；0.15ml)。于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物3天。將乙醚∶乙醇(50∶5ml)加入到生成的灰色淤漿中，攪拌該溶液一段時間，加水至形成澄清的黃色溶液。分離各相，用水提取有機相一次。用3％鹽酸水溶液酸化該水相至pH2，此時形成沉淀。加入一小部分鹽水并用乙醚提取該化合物水溶液。用碳酸氫鈉水溶液(10％)洗滌該有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。分離出澄清的帶棕色油狀的副標(biāo)題化合物，該物質(zhì)具有足夠的純度可供使用而不需進一步純化。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.4(m,3H),7.0(m,1H),6.6(b,1H),4.3(m,2H),1.5(s,9H),1.3(m,3H)。
(ⅳ)(R,S)-3-羥基-2-(3-Boc-氨基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用2-((3-Boc-氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步驟(ⅲ))作為原料制備。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,3H),6.95(d,1H),6.55(b,1H),4.15(m,2H),1.50(s,9H),1.20(t,3H)。
實施例U(R,S)-3-羥基-2-(3-(Boc-甲基氨基)苯基)丙酸(ⅰ)3-(甲酰氨基)苯乙酸乙酯用Dean-Stark trap使3-氨基苯乙酸乙酯(3.0g；0.017mol；得自以上實施例T(ⅰ))和甲酸(1.5g；0.034mol)在二異丙醚(150ml)中的溶液回流過夜。將該溶液濃縮至干，并溶于乙醚中，用稀鹽酸洗滌以除去殘留的原料。干燥(硫酸鈉)并濃縮得到副標(biāo)題化合物(3.1g；89％)。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ8.65(d,1H),8.40(b,1H),7.45(m,1H),7.25(m,1H),7.05(m,2H),4.15(m,2H),3.55(s,2H),1.30(m,3H)。
(ⅱ)3-(甲基氨基)苯乙酸乙酯將甲硼烷-二甲硫配合物(2M在THF中；20ml)溶液加入3-(甲酰氨基)苯乙酸乙酯(4.1g；0.02ml；得自以上步驟(ⅰ))在THF(干燥；100ml)的冰冷溶液中，并攪拌該反應(yīng)混合物1小時。將生成的溶液傾入稀鹽酸中，并將該混合物靜置15分鐘，其后用乙醚洗滌以除去未反應(yīng)的原料。使該水溶液調(diào)至堿性(碳酸氫鈉)，用乙醚提取(三次)。用水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到3.0g(78％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.10(t,1H),6.60(d,1H),6.50(m,2H),4.10(q,2H),3.50(s,2H),2.80(s,3H),1.20(t,3H)。
(ⅲ)3-(N-Boc-甲氨基)苯乙酸乙酯于室溫下，將3-(甲氨基)苯乙酸乙酯(3.0g；0.016mol；得自以上步驟(ⅱ))和Boc2O(3.4g；0.016mol)的THF(100ml)溶液攪拌12天。濃縮生成的溶液得到副標(biāo)題化合物(4.9g；定量)。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.35(d,1H),7.10(m,3H),4.15(q,2H),3.60(s,2H),3.25(s,3H),1.45 s,9H),1.25(t,3H)。
(ⅳ)2-((N-Boc-甲氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯根據(jù)上述實施例T(ⅲ)所述方法制備，由3-(N-Boc-甲氨基)苯乙酸乙酯(2.0g；6.8mmol；得自以上步驟(ⅲ))得到1.6g(73％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ12.1 5(d,0.5H),7.74(s,0.5H),7.25(m,4H),4.2(m,2H),3.26(s,3H),1.46(s,9H),1.29(m,3H)。
(ⅴ)(R,S)-3-羥基-2-(3-Boc-氨基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用2-((N-Boc-甲氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步驟(ⅳ))作為原料制備。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,1H),7.15(m,3H),7.05(d,1H),4.05(m,1H),3.80(m,2H),1.40(s,9H)。
實施例V(R,S)-3-羥基-2-(3-氯代-5-甲基苯基)丙酸
(ⅰ)3-氯代-5-甲基芐基溴將5-氯代-間-二甲苯(14.06g；0.1mol)、NBS(17.8g；0.1mol)和AIBN(1.1g；6.7mmol)的四氯化碳溶液回流兩小時。冷卻生成的混合物，過濾除去形成的固體物質(zhì)。濃縮得到副標(biāo)題化合物(17.9g；80％)。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.20(s,1H),7.11(s,1H),7.09(s,1H),4.41(s,2H),2.34(s,3H)。
(ⅱ)3-氯代-5-甲基苯乙腈制備在DMSO(25ml)中的3-氯代-5-甲基芐基溴(17.6g；0.8mol；得自以上步驟(ⅰ))和NaCN(8.2g；0.16mol)的溶液。將生成的溫?zé)岬幕旌衔锷陨岳鋮s，然后于室溫下攪拌1小時。接著加入乙腈(25ml)，并回流該混合物1小時。冷卻后，加入水(200ml)。用乙醚提取生成的溶液三次。合并的有機相用水洗滌三次，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到16.6g(80％)粗制的副標(biāo)題化合物，它可不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.14(s,1H),7.12(s,1H),7.04(s,1H),3.69(s,2H),2.35(s,3H)。
(ⅲ)3-氯代-5-甲基苯乙酸在攪拌下，將3-氯代-5-甲基苯乙腈(13.3g；得自以上步驟(ⅱ))和氫氧化鉀(17g；0.3mol)在150ml水∶異丙醇(2∶1)的混合物于120℃、在高壓釜加熱過夜，然后在室溫下放置兩天。蒸發(fā)異丙醇，并將殘留物酸化(6M HCl)至pH2，用乙醚提取三次。合并的有機層用水洗滌兩次，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到副標(biāo)題化合物(10.4g；70％)。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.09(s,2H),6.97(s,1H),3.57(s,2H),2.18(s,3H)。FAB-MS m/z366(M-1)-(ⅳ)3-氯代-5-甲基苯乙酸乙酯將3-氯代-5-甲基苯乙酸(5.0g；27.09mmol；得自以上步驟(ⅲ))和濃硫酸(0.1ml)在乙醇(25ml)中的溶液回流過夜。濃縮該溶液，使生成的溶液在碳酸鈉溶液(75ml)中堿化(digerated)。用乙醚(2×75ml)提取后，合并的有機相用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到4.92g(85％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.07(s,1H),7.08(s,1H),6.97(s,1H),4.15(q,2H),3.54(s,2H),2.31(s,3H),1.25(t,3H)。
(ⅴ)3-氧代-2-(3-氯代-5-甲基苯基)丙酸乙酯按照類似于以上實施例N(ⅴ)所述的方法，由3-氯代-5-甲基苯乙酸乙酯(4.89g；23mmol；得自以上步驟(ⅳ))、甲酸乙酯(3.3g；41.4mmol)和鈉(0.63g；27.6mmol，分小塊加入)在干燥乙醚(50ml)中制備得到3.4g(61％)澄清油狀的副標(biāo)題化合物，該物質(zhì)放置后緩慢結(jié)晶。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ12.2(b,lH),7.28(s,1H),7.09(s,1H),7.07(s,lH),6.94(s,lH),4.30(q,2H),2.33(s,3H),1.30(t,3H)。FAB-MS m/z238,240(M-1)-(ⅵ)(R,S)-3-羥基-2-(3-氯代-5-甲基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3-氯代-5-甲基苯基)-丙酸乙酯(得自以上步驟(ⅴ))作為原料制備。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.12(s,1H),7.10(s,1H),6.98(s,1H),4.12(m,1H),3.82(m,2H),2.30(s,3H)。
實施例W(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二甲氧基苯基)丙酸(ⅰ)3,5-二甲氧基苯乙酸乙酯將3,5-二甲氧基苯乙酸(2.0g；10mmol)和濃硫酸(0.2ml)在乙醇(50ml)中的溶液回流過夜，濃縮該溶液，使生成的物質(zhì)溶于氫氧化鈉水溶液(1M)中。用乙醚(2×75ml)提取后，合并的有機相用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到2.0g(88％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.46(d,2H),6.38(t,1H),4.17(q,2H),3.71(s,6H),3.55(s,2H),1.27(t,3H)。
(ⅱ)2-(3,5-二甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯根據(jù)J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由3,5-二甲氧基苯乙酸乙酯(2.0g；8.9mmol；得自以上步驟(ⅰ))制備得到3.4g(61％)澄清油狀的副標(biāo)題化合物，經(jīng)放置后緩慢結(jié)晶。該物質(zhì)具有足夠的純度，可不需進一步提純而用于下一步驟。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.25(m,1H)；6.40(m,3H)；4.27(q,2H)；3.75(s,6H)；1.30(t,3H)。
(ⅲ)(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二甲氧基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用3-氧代-2-(3,5-二甲氧基苯基)丙酸乙酯(得自以上步驟(ⅱ))作為原料制備。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.44(s,2H)；6.39(s,1H)；4.12(m,1H)；3.76(m,8H)。
實施例X(R,S)-3-羥基-2-(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)丙酸(ⅰ)2-氯代-5-(Boc-氨基)芐基醇向5-氨基-2-氯代苯甲酸(9.0g；33mmol)在THF∶DMF(200ml；1∶1)中的冰冷溶液加入TEA(4.0g；40mmol)，接著加入氯代甲酸異丁酯(5.4g40mmol；滴加)。然后再攪拌該混合物30分鐘，過濾除去形成的白色沉淀，使濾液冷卻至-15℃，加入硼氫化鈉(3.8g；100mmol)和水(20ml)。15分鐘后，加入水(200ml)并于室溫下攪拌該溶液1小時。蒸發(fā)后，使殘留物溶于甲醇中。過濾和濃縮得到粗產(chǎn)物，經(jīng)快速層析(硅膠，二氯甲烷∶甲醇(9∶1))純化得到7.4g(87％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.48(s,1H)；7.27(m,2H)；6.58(s,1H)；4.74(d,2H)；1.52(s,9H)。
(ⅱ)2-氯代-5-(Boc-氨基)芐基甲磺酸酯向2-氯代-5-(Boc-氨基)芐醇(7.4g；29mmol；得自以上步驟(ⅰ))的二氯甲烷(100ml)中的冰冷溶液加入TEA(2.9g；29mmol)，接著加入MsCl(3.3g；29mmol；滴加)。攪拌2小時后，將生成的混合物傾入水中。分離有機層，用水洗滌，干燥(硫酸鈉)和濃縮得到10g(100％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.50(m,1H)；7.40(m,1H)；7.32(s,1H)；6.55(b,1H)；5.27(s,2H)；3.05(s,3H)；1.50(s,9H)。
(ⅲ)(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙腈向攪拌的2-氯代-5-(Boc-氨基)芐基甲磺酸酯(得自以上步驟(ⅱ))的DMSO(100ml)溶液加入NaCN(2.9g；60mmol)，于室溫下攪拌該溶液過夜。將混合物傾入水(300ml)中，并用乙醚(4×50ml)提取水樣懸浮液。用水洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)和濃縮。經(jīng)快速(硅膠；庚烷∶乙酸乙酯(8∶2))層析后，得到5.2g(65％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.52(d,1H)；7.35(m,2H)；6.50(b,1H)；3.80(s,2H)；1.50(s,9H)。
(ⅳ)(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙酸向(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙腈(5.2g；20mmol；得自以上步驟(ⅲ))水∶異丙醇(37ml；2∶1)的溶液加入氫氧化鉀(5g；89mmol)，并使該溶液回流過夜。然后濃縮該混合物，加入水∶THF(50ml；1∶1)和Boc2O，攪拌該混合物過夜。蒸發(fā)THF，用乙醚(1×50ml)洗滌水相，用稀鹽酸酸化，用乙酸乙酯(3×30ml)提取。合并的有機層用水洗滌，干燥(硫酸鈉)并濃縮得到2.8g(50％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.40(b,1H)；7.26(s,1H)；7.21(d,1H)；6.55 (b,1H)；3.77(s,2H)；1.50(s,9H)。
(ⅴ)(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙酸乙酯向(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙酸(2.8g；9.8mmol；得自以上步驟(ⅳ))丙酮(100ml)的溶液加入碳酸鉀(2.1g；15mmol)。然后加入EtI(70.6g；150mmol)，同時攪拌和回流該反應(yīng)混合物。濃縮該混合物并使生成的混合物在乙醚和水(1∶1；60ml)中分配。分離有機層，用乙醚(30ml)提取水層一次。合并的有機層用水洗滌，干燥(硫酸鈉)并濃縮得到3.0g(98％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.35(b,1H)；7.25(s,1H)；7.20(d,1H)；6.52(b,1H)；4.15(q,2H)；3.70(s,2H)；1.50(s,9H)；1.25(t,3H)。
(ⅵ)2-(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯根據(jù)J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)乙酸乙酯(3.0g；9.6mmol；得自以上步驟(ⅴ))制備得到1.6g(49％)澄清棕色油狀的副標(biāo)題化合物，該物質(zhì)具有足夠的純度以供使用，而不需進一步提純。1H-NMR(300MHz；MeOD):δ8.98(b,0.5H)；7.89(s,0.5H)；7.25(m,3H)；4.88(s,2H)；4.15(q,2H)；1.45(s,9H)；1.20(t,3H)。
(ⅶ)(R,S)-3-羥基-2-(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用2-(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步驟(ⅵ))作為原料制備。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,4H)；6.70 (b,1H)；4.37(m,1H)；4.15(b,1H)；4.05(t,1H)；3.90(d,1H)；1.50(s,9H)。
實施例Y(R,S)-3-羥基-2-(3-甲基苯基)丙酸(ⅰ)2-(3-甲基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯根據(jù)J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由3-甲基苯乙酸乙酯(3.0g；17mmol)制備得到2.5g(72％)副標(biāo)題化合物，該物質(zhì)具有足夠的純度以供使用，而不需進一步提純。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,2H)；7.05(m,3H)；4.30(q,2H)；2.40(q,2H)；1.30(t,3H)。
(ⅱ)(R,S)-3-羥基-2-(3-甲基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，由3-氧代-2-(3-甲基苯基)丙酸乙酯(得自以上步驟(ⅰ))制備得到1.6g(80％)標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.20(m,1H)；7.05(m,3H)；4.12(t,1H)；3.80(m,2H)；2.32(s,3H)。
實施例Z(R,S)-3-羥基-2-(2,5-二甲基苯基)丙酸(ⅰ)(2,5-二甲基苯基)乙酸乙酯將(2,5-二甲基苯基)乙酸(3.0g；18.3mmol)和濃硫酸(0.1ml)在乙醇(40ml)中的溶液回流6天。濃縮該溶液，加入乙醚(40ml)，用碳酸鈉溶液(2×25ml)和水(1×25ml)洗滌生成的混合物。干燥(硫酸鈉)有機相并蒸發(fā)得到2.94g(84％)澄清無色液體的副標(biāo)題化合物。純度97％。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.08(d,1H)；7.02(d,1H)；7.00(s,1H)；4.17(q,2H)；3.61(s,2H)；2.33(s,3H)；2.29(s,3H)；1.28(t,3H)。
(ⅱ)2-(2,5-二甲基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯根據(jù)J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由(2,5-二甲基苯乙酸乙酯(2.92g；15mmol；得自以上步驟(ⅰ))開始制備得到2.89g(86％)棕黃色油狀的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ12.00(d,1H)；7.10(m,2H)；6.92(s,1H)；4.25(b,2H)；2.33(s,3H)；2.18(s,3H)；1.25(t,3H)。
(ⅲ)(R,S)-3-羥基-2-(2,5-二甲基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，由3-氧代-2-(2,5-二甲基苯基)丙酸乙酯(2.87g；13mmol；得自以上步驟(ⅱ))制備得到1.37g(55％)白色粉末狀的標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.10(d,1H)；7.01(d,1H)；7.00(s,1H)；4.14(m,2H)；3.73(q,1H)；2.37(s,3H)；2.29(s,3H)。
實施例AA2-(4-芐氧基-3-甲氧基苯基)-3-羥基-丙酸(ⅰ)4-芐氧基-3-甲氧基苯乙酸芐酯將碳酸銫(17.88g；54.9mmol)加入在乙腈中的高香草酸(2.0g；11mmol)中，其后用10分鐘滴加BnBr(4.3g；24.15mmol)。使該混合物回流過夜，通過Hyflo過濾并濃縮。使生成的混合物溶于乙酸乙酯(100ml)，加入水(30ml)，分離水層。用枸櫞酸溶液(5％；1×20ml)和鹽水洗滌有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到4.25g(定量)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.43(d,2H)；7.34(m,8H)；6.82(d,2H)；6.74(dd,1H)；5.33(s,4H)；3.84(s,3H)；3.59(s,2H)。
(ⅱ)2-(4-芐氧基-3-甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯根據(jù)J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由4-芐氧基-3-甲氧基苯乙酸乙酯(4.12g；11.4mmol；得自以上步驟(ⅰ))制備，得到1.4g(31.5％)副標(biāo)題化合物。LC-MS m/z327(M-1)-11H-NMR(400MHz；CDCl3):δ12.03(d,1H)；7.44(d,2H)；7.30(m,5H)；6.85(d,2H)；6.72(dd,1H)；5.15(s,2H)；4.27(q,2H)；3.88(s,3H)；1.30(t,3H)。
(ⅲ)2-(4-芐氧基-3-甲氧基苯基)-3-羥基-丙酸乙酯將2-(4-芐氧基-3-甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(1.356g；3.47mmol；得自以上步驟(ⅱ))的甲醇∶二氯甲烷(3∶1,20ml)的溶液冷卻至-15--5℃,分批加入硼氫化鈉(0.264g；6.95mmol)。攪拌該冷卻的反應(yīng)混合物。其后使之達到室溫。加入水，部分濃縮該混合物。用乙酸乙酯(2×25ml)提取后，用鹽水洗滌有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得到1.32g(97.1％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.42(d,2H)；7.32(m,4H)；6.82(m,2H)；6.74(dd,1H)；5.13(s,2H)；4.15(m,3H)；3.88(s,3H)；3.78(m,2H)；1.23(t,3H)。
(ⅳ)2-(4-芐氧基-3-甲氧基苯基)-3-羥基-丙酸向2-(4-芐氧基-3-甲氧基苯基)-3-羥基-丙酸乙酯(1.29g；3.29mmol；得自以上步驟(ⅲ))的THF(12.5ml)溶液加入氫氧化鋰(0.273g；6.75mmol)的水(5ml)溶液，并于室溫下攪拌該混合物2.5小時。部分濃縮生成的混合物，加入水(25ml)，用2份二氯甲烷洗滌該混合物，用鹽酸水溶液(2M)酸化，用3份二氯甲烷提取，用鹽水洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到10.55g(定量)黃色粉末。純度83.2％。1H-NMR(400MHz；MeOH):δ7.41(d,2H)；7.32(m,4H)；6.94(d,2H)；6.82(dd,1H)；5.06(s,2H)；4.04(m,1H)；3.83(s,3H)；3.70(m,2H)。
實施例AB(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二氯苯基)丙酸(ⅰ)3,5-二氯芐醇根據(jù)以上實施例X(ⅰ)所述方法，由3,5-二氯苯甲酸(15.3g；80mmol)、TEA(8.9g；88mmol)、氯代甲酸異丁酯(12g；88mmol)和硼氫化鈉(9.0g；240mmol)制備，得到10.5g(74％)副標(biāo)題化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.27(t,1H)；7.28(d,2H)；4.68(s,2H)。
(ⅱ)3,5-二氯苯乙腈根據(jù)以上實施例X(ⅱ)和X(ⅲ)所述方法，由3,5-二氯芐醇(10.3g；58mmol；得自以上步驟(ⅰ))、TEA(6.5g；64mmol)和MsCl(7.0g；61mmol)制備得到9.6g(89％)副標(biāo)題化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.37(m,3H)；3.74(s,2H)。
(ⅲ)3,5-二氯苯乙酸根據(jù)以上實施例X(ⅳ)所述方法，由3,5-二氯苯乙腈(9.6g；52mmol；得自以上步驟(ⅱ))和氫氧化鉀(12.3g；220mmol)制備得到7.6g(72％)副標(biāo)題化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.31(t,1H)；7.20(d,2H)；3.63(s,2H)。
(ⅳ)3,5-二氯苯乙酸乙酯根據(jù)以上實施例T(ⅱ)所述方法，由3,5-二氯苯乙酸(7.5g；37mmol；得自以上步驟(ⅲ))和濃硫酸(0.1ml)制備得到3.0g(35％)副標(biāo)題化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.28(t,1H)；7.1 8(d,2H)；4.17(q,2H)；3.56(s,2H)；1.27(t,3H)。(ⅴ)2-(3,5-(二氯苯基)-3-氧代丙酸乙酯根據(jù)以上J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由(3,5-二氯苯乙酸乙酯(3.0g；12.9mmol；得自以上步驟(ⅳ))制備得到澄清油狀的副標(biāo)題化合物(3.0g；89％)，該物質(zhì)可不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ12.20(d,1H)；7.29(t,1H)；7.23(d,2H)；4.32(q,2H)；1.33(t,3H)。
(ⅵ)(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二氯苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用2-(3,5-二氯苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步驟(ⅴ))制備。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.34(t,1H)；7.24(d,2H)；4.12(dd,1H)；3.91(dd,1H)；3.84(dd,1H)。
實施例AC(R,S)-3-羥基-2-(2,3-二甲氧基苯基)丙酸(ⅰ)2,3-二甲氧基苯乙酸乙酯向2,3-二甲氧基苯基乙酸(2.52g；12.8mmol)的乙醇(abs.；20ml)溶液加入硫酸(30μl)，使該溶液回流20小時。濃縮生成的溶液，使之溶于乙醚中，用碳酸氫鈉水溶液(2×30ml)和鹽水洗滌醚溶液，干燥(硫酸鎂)并濃縮，得到副標(biāo)題化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.99(m,1H)；6.83(m,2H)；4.16(q,2H)；3.85(s,3H)；3.82(s,3H)；3.65(s,2H)；1.25(t,3H)。
(ⅱ)2-(2,3-二甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯根據(jù)以上J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由2,3-二甲氧基苯乙酸乙酯(2.14g；9.5mmol；得自以上步驟(ⅰ))制備得到澄清黃綠色油狀的副標(biāo)題化合物(1.53g；64％)，該物質(zhì)具有足夠的純度，可不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ12.00(d,1H)；7.19(d,1H)；7.05(m,2H)；6.91(m,2H)；6.74(dd,1H)；4.24(q,2H)；3.87(s,3H)；3.74(s,3H)；1.24(t,3H)。
(ⅲ)(R,S)-3-羥基-2-(2,3-二甲氧基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，由2-(2,3-二甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步驟(ⅱ))制備。LC-MS m/z225(M-1)-11H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.05(t,1H)；6.87(dd,1H)；6.82(dd,1H)；4.15(m,3H)；3.85(s,6H)；3.75(m,1H)。
實施例AD(R,S)-3-羥基-2-(3-甲氧基-5-氯代苯基)-丙酸(ⅰ)3-甲氧基-5-氯代苯甲醛將3,5-二氯苯甲醚(1.1g；6.8mmol)分批加入在THF(干燥，20ml)的中鎂屑(0.20g；8.2mmol)。在第一次加入后，加入EtBr(0.1ml)以啟動反應(yīng)。在全部加入后，于60℃攪拌該反應(yīng)混合物過夜，其后將該混合物冷卻至0℃，加入DMF。攪拌1小時后，將該混合物傾入鹽酸水溶液中，濃縮，用醚(3×50ml)提取。用水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)和濃縮，得到2.35g副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ9.91(s,1H)；7.43(t,1H)；7.28(t,1H)；7.15(t,1H)；3.87(s,3H)。
(ⅱ)3-甲氧基-5-氯代苯基乙醛根據(jù)P.Weierstahl等在Liebigs Ann.1389,(1995)所述方法，由3-甲氧基-5-氯代苯甲醛(2.35g；13.8mmol；來自以上步驟(ⅰ))開始制備，得到2.0g(約54％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ9.71(t,1H)；6.84(t,1H)；6.81(t,1H)；6.64(t,1H)；3.79(s,3H)；3.62(s,2H)。
(ⅲ)(3-甲氧基-5-氯代苯基)乙酸根據(jù)S.E.de Laszlo和P.G.Willard在J.Am.Chem.Soc.107,199(1985)所述方法，由3-甲氧基-5-氯代苯基乙醛(102mg；0.55mmol；來自以上步驟(ⅱ))制備，得到37mg(33.6％)副標(biāo)題化合物。LC-MS m/z199(M-1)-1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ6.82(t,1H)；6.75(t,1H)；6.62(t,1H)；3.72(s,3H)；3.50(s,2H)。
(ⅳ)(3-甲氧基-5-氯代苯基)乙酸乙酯使3-甲氧基-5-氯代苯基)乙酸(0.983g；4.9mmol；得自以上步驟(ⅲ))和濃硫酸(0.1ml)在乙醇(25ml)中的溶液回流過夜。濃縮生成的混合物，加入碳酸鈉水溶液(75ml)。用乙醚(2×75ml)提取該混合物，用鹽水洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并濃縮得到0.989g(88.3％)棕色油狀的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ6.88(t,1H)；6.81(t,1H)；6.72(t,1H)；4.16(q,2H)；3.79(s,3H)；3.54(s,2H)；1.26(t,4H)。
(ⅴ)2-(3-甲氧基-5-氯代苯基)3-氧代-丙酸乙酯根據(jù)J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由(3-甲氧基-5-氯代苯基)乙酸乙酯(0.989g；4.33mmol；得自以上步驟(ⅳ))開始制備得到0.347g(31.3％)副標(biāo)題化合物，該物質(zhì)具有足夠的純度以供使用，而不需進一步提純。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ12.15(b,1H)；7.31(s,1H)；6.86(t,1H)；6.82(t,1H)；6.70(t,1H)；4.30(q,2H)；3.80(s,3H)；1.31(t,3H)。
(ⅵ)(R,S)-3-羥基-2-(3-甲氧基-5-氯代苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用2-(3-甲氧基-5-氯代苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步驟(ⅴ))作為原料制備。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ6.89(t,1H)；6.84(t,1H)；6.74(t,1H)；4.12(dd,1H)；3.83(m,2H)；3.79(s,3H)。
實施例AE(R,S)-3-羥基-2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)-丙酸(ⅰ)2-(2-溴代-5-甲氧基苯基-1,3-二氧戊環(huán)向2-溴代-5-甲氧基苯甲醛(5.0g；23.2mmol)的甲苯(300ml)溶液加入乙二醇(2.16g,34.2mmol)和p-TsOH(20mg)，其后使該混合物回流12小時。使生成的混合物冷卻至室溫，用碳酸氫鈉水溶液洗滌，干燥(硫酸鈉)并濃縮得到產(chǎn)量5.918g(98％)的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.44(d,1H)；7.16(d,1H)；6.78(dd,1H)；6.04(s,1H)；4.12(m,4H)；3.80(s,3H)。
(ⅱ)2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊環(huán)在氮氣環(huán)境下，將2-(2-溴代-5-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊環(huán)(5.44g；21mmol；得自以上步驟(ⅰ))的THF(干燥，60ml)溶液冷卻至-78℃，通過注射器滴加正-丁基鋰(1.4M；19.5ml)。加入完畢后，于-78℃攪拌該溶液35分鐘，其后加入MeI(13.41g；94.5mmol)。緩慢攪拌生成的混合物使達到室溫，然后用氯化銨水溶液使之驟冷并用乙醚提取。有機相經(jīng)干燥(硫酸鈉)并濃縮，得到4.25g(定量)棕色油狀的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.12(d,1H)；7.08(d,1H)；6.81(dd,1H)；5.93(s,1H)；4.10(m,4H)；3.80(s,3H)；2.35(s,3H)。
(ⅲ)2-甲基-5-甲氧基苯甲醛于室溫下，將2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)-1,3-二氧戊環(huán)(4.2g；21.6mmol；來自以上步驟(ⅱ))在THF(60ml)和鹽酸水溶液(5％；30ml)的混合液攪拌過夜，濃縮該溶液并用乙醚提取。干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)有機相得到2.956g(91％)深棕色液體的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ10.28(s,1H)；7.33(d,1H)；7.16(d,1H)；7.04(dd,1H)；3.84(s,3H)；2.60(s,3H)。
(ⅳ)(2-甲基-5-甲氧基)乙酸乙酯根據(jù)以上實施例AD(ⅱ)至AD(ⅳ)所述方法，由2-甲基-5-甲氧基苯甲醛(得自以上步驟(ⅲ))制備，得到1.18g(三步共30％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.08(d,1H)；6.77(d,1H)；6.73(dd,1H)；4.16(q,2H)；3.78(s,3H)；3.59(s,2H)；2.24(s,2H)；1.26(t,3H)。
(ⅴ)2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯根據(jù)J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由2-甲基-5-甲氧基乙酸乙酯(1.16g；5.57mmol；得自以上步驟(ⅳ))開始制備，得到0.745g(57％)副標(biāo)題化合物，該物質(zhì)具有足夠的純度以供使用，而不需進一步提純。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ11.97(d,1H)；7.14(d,1H)；7.10(d,1H)；6.67(dd,1H)；4.24(q,2H)；3.78(s,3H)；2.14(s,2H)；1.23(t,3H)。
(ⅵ)(R,S)-3-羥基2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，用2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(得自以上步驟(ⅴ))作為原料制備。1H-NMR(400MHz；MeOD):δ7.09(d,1H)；6.84(d,1H)；6.72(dd,1H)；4.03(m,2H)；3.73(s,3H)；3.64(dd,1H)；2.32(s,2H)。
實施例AF(ⅰ)托品酸甲酯向在甲苯∶二氯甲烷(150ml；2∶1)中的托品酸(5.0g,30mmol)溶液加入DBU(4.6g；30mmol)，接著加入MeI(4.3g；30mmol)。將該混合物攪拌過夜，加入水并分離各相。用乙醚提取水相，用碳酸氫鈉水溶液、乙酸水溶液和水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并濃縮得到0.95g(18％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,5H)；4.25(m,1H)；3.88(m,2H)；3.73(s,3H)。
(ⅱ)2-甲基-2-苯基-3-甲氧基丙酸甲酯將氫化鈉(0.87g；20mmol)加入在DMF(10ml)中的托品酸甲酯(0.9g；5.0mmol；得自以上步驟(ⅰ))的冷溶液中，攪拌生成的混合物15分鐘，其后加入MeI(2.8g；20mmol)，于室溫下攪拌該混合物過夜。將該混合物傾入(200ml)中，用乙醚(4×25ml)提取生成的懸浮液。用水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并濃縮得到0.70g(約65％)粗產(chǎn)物，它可不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.25(m,5H)；4.00(d,1H)；3.67(s,3H)；3.60(d,1H)；3.35(s,3H)；1.67(s,3H)。
(ⅲ)(R,S)-2-甲基-2-苯基-3-甲氧基丙酸將氫氧化鈉水溶液(2M；50ml)加入2-甲基-2-苯基-3-甲氧基丙酸甲酯(0.7g；3.4mmol；得自以上步驟(ⅱ))的甲醇(50ml)溶液中，攪拌該混合物2小時。用鹽酸水溶液酸化該混合物，用乙醚(3×50ml)提取。用水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并濃縮，得到0.40g(約61％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ7.35(m,5H)；4.00(d,1H)；3.60(d,1H)；3.40(s,3H)；1.66(s,3H)。
實施例AG(R,S)-3-羥基-2-(2-氯代-3-甲基苯基)丙酸(ⅰ)2-氯代-3-甲基苯甲酸將亞硝酸鈉(14.0g；0.2mol)加入2-氨基-3-甲基苯甲酸(30.2g；0.2mol)的水(200ml)和氫氧化鈉水溶液(30％；24ml)的混合液中。使該溶液冷卻至0℃，并在攪拌下滴加至鹽酸(87.6ml)和冰(100g)的混合物中。攪拌數(shù)分鐘后，將生成的溶液加入濃鹽酸(23％；100g)、氯化亞銅(20g；0.2mol)和水(40ml)的冰冷混合物中。于室溫下攪拌該溶液30分鐘，再于100℃攪拌30分鐘，冷卻，過濾分離生成的沉淀物，用水洗，干燥過夜，得到27.4g(80.3％)白色晶狀物質(zhì)。LC-MS m/z169,171(M-1)-1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.79(d,1H)；7.43(d,1H)；7.25(t,1H)；2.46(s,3H)。
(ⅱ)2-氯代-3-甲基芐醇根據(jù)以上實施例X(ⅰ)所述方法，由2-氯代-3-甲基苯甲酸(13.65g；0.08mol；得自以上步驟(ⅰ))制備，得到11.38g(90.8％)白色結(jié)晶的副標(biāo)題化物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.32(d,1H)；7.31(d,1H)；7.18(dd,1H)；4.78(d,2H)；2.40(s,3H)。
(ⅲ)2-氯代-3-甲基苯乙腈根據(jù)以上實施例X(ⅱ)和X(ⅲ)所述方法，由2-氯代-3-甲基芐醇(11.3g；72.15mmol；得自以上步驟(ⅱ))制備，得到11.4g(93％)紅棕色固體的副標(biāo)題化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.35(d,1H)；7.24(t,1H)；7.21(d,1H)；3.84(s,2H)；2.41(s,3H)。
(ⅳ)2-氯代-3-甲基苯乙酸乙酯根據(jù)以上實施例T(ⅱ)所述方法，由2-氯代-3-甲基苯乙腈(5.28g；32mmol；得自以上步驟(ⅲ))制備，得到6.3g(88.2％)副標(biāo)題化物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.12(d,2H)；7.16(dd,1H)；4.17(q,2H)；3.77(s,2H)；2.39(s,3H)；1.26(t,3H)。
(ⅴ)2-(2-氯代-3-甲基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯根據(jù)J.Org.Chem.54,3831(1989)所述的方法，由2-氯代-3-甲基苯乙酸乙酯(6.28g；29.53mmol；得自以上步驟(ⅳ))制備得到5.418g(76.2％)副標(biāo)題化合物，該物質(zhì)具有足夠的純度，可不需進一步提純而用于下一步驟。LC-MS m/z239,241(M-1)-1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ11.96(b,1H)；7.21(d,lH)；7.14(m,1H)；7.03(d,1H)；4.25(m,2H)；2.41(s,3H)；1.23(t,3H)。
(ⅵ)(R,S)-3-羥基-2-(2-氯代-3-甲基苯基)-丙酸根據(jù)以上實施例E所述方法，由2-(2-氯代-3-甲基苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(5.39g；22.39mmol；得自以上步驟(ⅴ))制備，得到4.03g(79.8％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.25(d,1H)；7.21(m,1H)；7.16(d,1H)；4.36(dd,1H)；4.02(dd,1H)；3.74(dd,1H)；2.38(s,3H)。
本發(fā)明化合物實施例1(R)-和(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HCl(ⅰ)(R)-和(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)將(R,S)-托品酸(0.25g,1.5mmol)、H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.73g；1.7mmol；得自以上實施例A)和TBTU(0.53g；1.7mmol)在10mlDMF中的混合物于冰浴上冷卻。加入DIPEA(0.78g；6.0mmol)，于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物48小時。隨后濃縮該反應(yīng)混合物，用400ml水稀釋(用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至8)，并用乙酸乙酯(3×75ml)提取。用碳酸氫鈉水溶液(3×50ml)和水(1×50ml)洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品(0.59g)經(jīng)硅膠柱(120g)快速層析純化，用二氯甲烷(300ml)、二氯甲烷∶THF(500ml；3∶1)和THF(1750ml)洗脫。收集20ml的各組分。濃縮組分41-54得到150mg化合物1A(非對映體比率＞99∶1)。濃縮組分70-90得到化合物2B(非對映體比率為89∶11)。化合物1A1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ8.27(m,1H),7.67(d,2H),7.38(d,2H),7.3-7.1(m,10H),5.49(d,1H),5.15(s,2H),4.73(m,1H),4.4-4.2(m,2H),4.10(m,1H),4.02(m,1H),3.71(m,1H),3.63(m,2H),2,34(m,1H),2.23(m,1H)。13C NMR(100MHz；CDCl3)脒和羰基碳173.7,171.0,168.5,164.4?；衔?B1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ8.27(m,1H，次要的非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.14(m,1H，主要的非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.9-7.7(m,2H),7.5-7.1(m,12H),5.56(d,1H),5.22(s,2H，主要的非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.20(s,2H，次要的非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.89(m,1H，主要的非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.82(m,1H，次要的非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.3(m,2H),4.2-4.0(m,2H),3.8-3.6(m,3H),2.48(m,1H),2.38(m,1H)13C-NMR(100MHz；CDCl3)，脒和羰基碳174.8,170.8,168.0,164.7(ⅱ)(R)-或(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HCl將化合物1A(100mg；0.19mmol；得自以上步驟(ⅰ))溶于10ml乙醇中并加入5％Pd/C(52mg)。在常壓下氫化該化合物5小時。過濾和蒸發(fā)后，使該產(chǎn)物溶于5ml水中，加入190μl鹽酸(1M)。凍干后獲得白色粉末狀標(biāo)題化合物。產(chǎn)量為60mg(74％)，非對映體比率99∶1。1H-NMR(400MHz；D2O)δ8.75(m,1H，主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.59(m,1H，次要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.69(d,2H，主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.63(d,2H,次要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.5-7.0(m,7H),5.10(m,1H；來自相同質(zhì)子的信號與HDO-信號迭加)，4.47(bs,1H),4.27(m,1H，主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.17(1H，次要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.1-3.6(m,5H),2.67(m,1H，次要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.40(m,1H，主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.3-2.1(m,1H)。13C NMR(75MHz；D2O)，脒和羰基碳(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)177.4,176.4,175.3,174.8,160.0,157.6。
(ⅲ)(S)-或(R)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HCl根據(jù)實施例1(ⅱ)的方法，由50mg(0.097mmol)化合物1B(得自以上步驟(ⅰ))制備標(biāo)題化合物。產(chǎn)量為32mg(79％)，非對映體比率83∶17。1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.8-7.0(m,9H),5.10(m,1H，次要的非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.83(m,1H，主要的非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.2(m,3H),4.1-3.4(m,4H),2.54(m,1H，主要的非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.39(m,1H，次要的非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.2-2.1(m,1H)13C NMR(75MHz；D2O)，脒和羰基碳176.6,174.9,168.9實施例2(R)-和(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc(ⅰ)(R)-和(S)-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)將H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.387g；0.88mmol；得自以上實施例A)加入(R,S)-3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸(0.157g；0.8mmol；來自以上實施例E)的DMF(10ml)溶液中，并使該混合物于冰浴上冷卻。加入TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.20mmol)，并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物48小時。隨后蒸發(fā)該反應(yīng)混合物，使殘留物溶于水(100ml)中，隨后用乙酸乙酯(3×25ml)提取。用碳酸氫鈉水溶液(3×25ml)和水(25ml)洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品經(jīng)硅膠柱快速層析純化，用二氯甲烷∶甲醇(98∶2)、乙酸乙酯、乙酸乙酯∶乙醇(95∶5)、乙酸乙酯∶乙醇(9∶1)和乙酸乙酯∶乙醇(85∶15)洗脫。濃縮某些部分得到177mg化合物2A(非對映體比率88∶12)。濃縮其它部分得到164mg化合物2B(非對映體比率為88∶12)?；衔?A1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.20-8.27(m,NH),7.79-7.85(m,2H),7.18-7.48(m,8H),6.70-6.88(m,3H),5.20-5.24(m,2H),4.84-4.99(m,1H),4.34-4.64(m,2H),3.98-4.16(m,2H),3.56-3.82(m,6H),2.26-2.70(m,2H)?；衔?B1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.14-8.21(m,NH),7.78-7.88(m,2H),7.1 8-7.48(m,8H),6.70-6.87(m,3H),5.20-5.24(m,2H),4.86-5.00(m,1H),4.34-4.64(m,2H),4.00-4.16(m,2H),3.58-3.82(m,6H),2.39-2.69(m,2H)。
(ⅱ)(R)-或(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc向化合物2A(0.164g；0.30mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(7ml)溶液加入乙酸(0.018g；0.30mmol)和Pd/C(5％；0.08g)。在常壓下氫化該化合物4小時。通過硅藻土過濾該反應(yīng)混合物并濃縮濾液。使粗產(chǎn)物溶于水中并凍干得到128mg(91％)標(biāo)題化合物，非對映體比率88∶12。LC-MS m/z411(M+1)+1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.67-7.85(m,2H),7.25-7.62(m,3H),6.89-7.04(m,2H),6.74-6.83(m,1H),5.16-5.22(m,1H),4.24-4.66(m,2H),3.97-4.19(m,3H),3.64-3.94(m,5H),2.18-2.82(m,2H)。
(ⅲ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc向化合物2B(0.142g；0.26mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(7ml)溶液加入乙酸(0.016g；0.26mmol)和Pd/C(5％；0.07g)。在常壓下氫化該化合物4小時。通過硅藻土過濾該反應(yīng)混合物并濃縮濾液。使粗產(chǎn)物溶于水中并凍干得到113mg(92％)標(biāo)題化合物，非對映體比率88∶12。LC-MS m/z411(M+1)+1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.26-7.86(m,5H),6.88-7.04(m,2H),6.75-6.83(m,1H),4.91-4.96(m,1H),4.26-4.68(m,3H),3.96-4.18(m,2H),3.64-3.94(m,5H),2.18-2.70(m,2H)。
實施例3(R,S)-3,4-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc(ⅰ)(R,S)-3,4-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3,4-二甲氧基苯基)-丙酸(0.23g,1.0mmol；得自以上實施例F)、H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.48g；1.1mmol；得自以上實施例A)和TBTU(0.35g；1.1mmol)在DMF(10ml)中的混合物于冰浴上冷卻。加入DIPEA(0.52g；4.0mmol)，于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物4天。隨后濃縮該反應(yīng)混合物，殘留物用乙酸乙酯∶水(1∶2；300ml)稀釋，用碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH至9，接著用乙酸乙酯(3×100ml)提取。用碳酸氫鈉水溶液(3×100ml)和水(3×125ml)洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品(0.43g)經(jīng)硅膠柱(50g)快速層析純化，用乙酸乙酯(200ml)、乙酸乙酯∶乙醇(95∶5；200ml)、乙酸乙酯∶乙醇(9∶1；200ml)和乙酸乙酯∶乙醇(85∶15；200ml)洗脫。產(chǎn)量為244mg(42％)標(biāo)題化合物，非對映體比率52∶48。FAB-MS m/z575(M+1)+1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ8.18-8.26(m,1H),8.00-8.08(m,1H),7.76-7.84(d,1H),7.63-7.68(d,1H),7.25-7.47(m,6H),7.02-7.07(d,1H),6.64-6.84(m,3H),5.20(s,2H),4.82-5.00(m,1H),4.40-4.79(m,2H),3.98-4.24(m,2H),3.84-3.87(m,6H),3.53-3.82(m,3H),2.26-2.69(m,2H)。
(ⅱ)(R,S)-3,4-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc將(R,S)-3,4-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(0.095g；0.17mmol；得自以上步驟(ⅰ))、乙酸(0.010g；0.17mmol)和Pd/C(5％,0.087g)加入乙醇(10ml)中。在常壓下氫化該化合物5小時。過濾該反應(yīng)混合物并蒸發(fā)濾液。使殘留物溶于水中并凍干獲得70mg(85％)白色粉末狀標(biāo)題化合物，非對映體比率52∶42。LC-MS m/z441(M+1)+1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.29-7.85(m,4H),6.85-7.09(m,2H),6.71-6.81(m,1H),4.90-5.19(m,1H),4.31-4.65(m,2H),3.95-4.28(m,3H),3.62-3.90(m,8H),2.1 5-2.84(m,2H)。
實施例4(R)-和(S)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc
(ⅰ)(R)-和(S)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)將H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.483g；1.1mmol；得自以上實施例A)的DMF(10ml)于冰浴上冷卻。加入(R,S)-3-羥基-2-(2-萘基)-丙酸(0.216g,1.0mmol；得自以上實施例G)、TBTU(0.353g；1.1mmol)和DIPEA(0.517g；4.0ml)，并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物3天。隨后蒸發(fā)該反應(yīng)混合物，使殘留物溶于乙酸乙酯∶水的混合液中，接著用乙酸乙酯(2×75ml)提取。用碳酸氫鈉水溶液(3×30ml)和水(25ml)洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品經(jīng)硅膠柱快速層析純化，用乙酸乙酯、乙酸乙酯∶乙醇(95∶5)、乙酸乙酯∶乙醇(9∶1)洗脫。濃縮某些部分得到204mg(36％)化合物4A(非對映體比率95∶5)。濃縮其它部分得到219mg(39％)化合物4B(非對映體比率為90∶10)?；衔?ALC-MS m/z565(M+1)+1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.23-8.31(t,NH),7.20-7.88(m,16H),5.22(s,2H),4.85-4.92(m,1H),4.44-4.64(m,2H),4.07-4.24(m,2H),3.64-3.92(m,3H),2.21-2.70(m,2H)?；衔?BLC-MS m/z565(M+1)+,587(M+Na)+1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.13-8.21(t,NH),7.20-7.90(m,16H),5.24(s,2H),4.95-5.02(m,1H),4.31-4.65(m,2H),4.09-4.24(m,2H),3.62-3.92(m,3H),2.38-2.76(m,2H)。
(ⅱ)(R)-或(S)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc將乙酸(0.019g；0.31mmol)和Pd/C(5％,0.09g)加入化合物4A(0.175g；0.31mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(7ml)溶液中。在常壓下氫化該化合物4小時，然后通過硅藻土過濾并濃縮濾液，使粗產(chǎn)物溶于水中，并凍干得到136mg(89％)標(biāo)題化合物，非對映體比率95∶5。LC-MS m/z431(M+1)+1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.05-8.00(m,11H),5.14-5.22(m,1H),3.60-4.58(m,8H),2.12-2.81(m,2H)。
(ⅲ)(R)-或(S)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc將乙酸(0.021g；0.34mmol)和Pd/C(5％,0.09g)加入化合物4B(0.194g；0.34mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(7ml)溶液中。在常壓下氫化該化合物4小時,然后通過硅藻土過濾并濃縮濾液，使粗產(chǎn)物溶于水中并凍干得到151mg(90％)標(biāo)題化合物，非對映體比率90∶10。LC-MS m/z431(M+1)+1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.00-8.00(m,11H),4.92-4.99(m,1H),3.60-4.62(m,8H),2.12-2.83(m,2H)。
實施例5(R)-或(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig×HOAc(ⅰ)(R)-和(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig(Z)將(R,S)-托品酸(0.132g,0.8mmol)、H-Aze-Pig(Z)×2HCl(0.393g；0.88mmol；得自以上實施例C)和TBTU(0.283g；0.88mmol)在DMF(10ml)中的混合物于冰浴上冷卻。加入DIPEA(0.414g；3.20mmol)，于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物48小時。隨后濃縮該反應(yīng)混合物，用水(175ml，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至8)稀釋，并用乙酸乙酯(3×50ml)提取。用碳酸氫鈉水溶液(3×25ml)和水(25ml)洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品(0.895g)經(jīng)硅膠柱快速層析純化，用二氯甲烷、二氯甲烷∶THF(4∶1,1∶1,1∶4)和二氯甲烷∶甲醇(95∶5,9∶1)洗脫。濃縮某些部分得到117mg化合物(非對映體比率＞99∶1)。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.88-7.95(bt,NH),7.21-7.41(m,10H),7.09(bs,NH),5.11(s,2H),4.78-4.80(m,1H),4.00-4.38(m,4H),3.58-3.76(m,3H),3.12-3.34(m,2H),2.76-2.97(m,3H),2.46-2.66(m,1H),2.22-2.35(m,1H),1.66-1.78(m,2H),1.22-1.38(m,2H)。(其它的部分經(jīng)濃縮后得到156mg上面化合物的差向異構(gòu)體，非對映體比率87∶13)(ⅱ)(S)-或(R)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig×HOAc
將(R)-或(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig(Z)(0.117g；0.22mmol；得自以上步驟(ⅰ)的特征化合物)、乙酸(0.013g；0.22mmol)和Pd/C(5％,0.06g)加入乙醇(5ml)中，并在常壓下氫化該化合物2.5小時。通過硅藻土過濾反應(yīng)混合物，蒸發(fā)濾液，使殘留物溶于水中，凍干得到92mg(93％)標(biāo)題化合物，非對映體比率＞99∶1。1H-NMR(400MHz；D2O；因非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體存在出現(xiàn)復(fù)雜多峰)δ7.14-7.41(m,5H),4.60-5.06(m,1H),3.64-4.09(m,7H),2.78-3.19(m,4H),2.58-2.71(m,1H),2.34-2.45(m,1H),2.03-2.20(m,1H),0.98-1.77(m,4H)。13C NMR(100.5MHz；D2O)脒和羰基信號175.95,172.69,155.85。
實施例6(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig×HOAc(ⅰ)(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z)將EDC×HCl(0.24g；1.25mmol)加入到(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OH(0.3 8g,1.0mmol；得自以上實施例D)、(R,S)-H-Hig-Z×2HCl(0.36g；1.0mmol；通過使Boc-(R,S)-Hig(Z)(見國際專利申請WO94/29336)與氯化氫氣體(g)在乙酸乙酯中反應(yīng)，接著蒸發(fā)至干來制備)和DMAP(0.49g；4.0mmol)在乙腈(10ml)的混合物中，并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物4天。蒸發(fā)該反應(yīng)混合物，使殘留物溶于水(300ml；調(diào)節(jié)pH至9)中。用乙酸乙酯(3×150ml)提取。用碳酸氫鈉水溶液(2×25ml)和水(3×150ml)洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到0.48g副標(biāo)題化合物，它可不經(jīng)進一步純化而用于下一步驟。
(ⅱ)(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z)于0℃，將(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z)(0.265g；0.41mmol；得自以上步驟(ⅰ))在TFA(6.5ml,10％二氯甲烷溶液)中攪拌30分鐘。用碳酸鉀水溶液將該化合物的pH調(diào)至9，隨后用二氯甲烷(3×75ml)提取。用水洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品(0.24g)經(jīng)硅膠柱(50g)快速層析純化，用二氯甲烷(200ml)、二氯甲烷∶乙醇(95∶5；200ml)和二氯甲烷∶乙醇(9∶1；400ml)洗脫。產(chǎn)量為109mg(50％)的標(biāo)題化合物。LC-MS m/z536(M+1)+1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.17-7.45(m,10H),5.06-5.15(m,2H),4.46-4.62(m,1H),3.97-4.21(m,2H),3.08-3.91(m,8H),2.80-2.98(m,1H),1.35-2.30(m,9H)。13C NMR(100.5MHz；CDCl3)脒和羰基信號172.72,171.74,163.77,159.14。
(ⅲ)(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig×HOAc將(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Hig-Z(0.11mg；0.21mmol；得自以上步驟(ⅱ))、Pd/C(5％,0.06g)和乙酸(0.012g；0.21mmol)在乙醇(10ml)中的化合物在常壓下氫化4小時。過濾該反應(yīng)混合物，并蒸發(fā)濾液。使粗產(chǎn)物溶于水中并凍干得到78mg(82％)標(biāo)題化合物。LC-MS m/z402(M+1)+1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.15-7.45(m,5H),4.20-4.38(m,1H),3.89-4.14(m,2H),3.67-3.81(m,2H),2.70-3.64(m,7H),1.40-2.37(m,9H)。13C NMR(75.5MHz；D2O)脒和羰基信號174.90,173.48,154.84。
實施例7(R)-和(S)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc(ⅰ)(R)-和(S)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)將H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.387g；0.88mmol)的DMF(10ml)液于冰浴上冷卻。加入3-羥基-2-(2,5-二甲氧基苯基)-丙酸(0.181g,0.8mmol)、TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.20mmol)并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物4天。隨后蒸發(fā)該反應(yīng)混合物，使殘留物溶于水∶乙酸乙酯(2∶1；150ml)中，接著用乙酸乙酯(3×25ml)提取。用碳酸氫鈉水溶液(3×25ml)和水(25ml)洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品(0.43g)經(jīng)硅膠柱快速層析純化，用乙酸乙酯、乙酸乙酯∶乙醇(99∶1)、乙酸乙酯∶乙醇(97∶3)和乙酸乙酯∶乙醇(95∶5)洗脫。濃縮某些部分得到165mg化合物7A(非對映體比率＞99∶1)。濃縮其它部分得到185mg化合物7B(非對映體比率為93∶7)?；衔?ALC-MS m/z575(M+1)+,597(M+Na)+1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.26-8.36(m,NH),7.80-7.87(d,2H),7.24-7.48(m,7H),6.76-6.85(m,3H),5.22(s,2H),4.83-4.90(m,1H),4.43-4.59(m,2H),3.92-4.18(m,3H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.58-3.72(m,2H),2.25-2.72(m,2H)。化合物7BLC-MS m/z575(M+1)+,597(M+Na)+1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.11-8.19(m,NH),7.79-7.88(m,2H),7.24-7.48(m,7H),6.68-6.84(m,3H),5.22(s,2H),4.91-4.98(m,1H),4.36-4.67(m,2H),3.99-4.22(m,3H),3.48-3.82(m,8H),2.38-2.95(m,2H)。
(ⅱ)(R)-或(S)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc將化合物7A(0.141g；0.25mmol；得自以上步驟(ⅰ))溶于乙醇(7ml)中。加入乙酸(0.015g；0.25mmol)和Pd/C(5％,0.07g)，并在常壓下氫化該混合物3小時。通過硅藻土過濾該反應(yīng)混合物并蒸發(fā)濾液，使殘留物溶于水中，并凍干獲得113mg(90％)白色粉末狀標(biāo)題化合物，非對映體比率＞99∶1。LC-MS m/z441(M+1)+1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.34-7.84(m,4H),6.82-7.14(m,3H),5.06-5.13(m,1H),3.72-4.37(m,13H),2.11-2.86(m,2H)。
(ⅲ)(R)-或(S)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc將化合物5B(0.164g；0.286mmol；得自以上步驟(ⅰ))溶于乙醇(7ml)中。加入乙酸(0.017g；0.286mmol)和Pd/C(5％,0.08g)，并在常壓下氫化該化合物3小時。通過硅藻土過濾該反應(yīng)混合物并蒸發(fā)濾液，使殘留物溶于水中并凍干獲得130mg(91％)標(biāo)題化合物，非對映體比率93∶7。LC-MS m/z441(M+1)+1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.34-7.86(m,4H),6.78-7.10(m,3H),4.89-4.96(m,1H),3.70-4.68(m,13H),2.16-2.73(m,2H)。
實施例8(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH(ⅰ)(R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-Ph-CH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-OH(0.753g,2.0mmol，見以上實施例D)、H-Pab(Z)×HCl(0.681g；2.1mmol)、DMAP(0.366g；3.0mmol)和EDC(500μl；2.7mmol)在乙腈(7ml)中的混合物于室溫下攪拌3天。蒸發(fā)該反應(yīng)混合物，殘留物經(jīng)硅膠柱快速層析純化，用乙酸乙酯∶甲苯(2∶1)和THF∶甲苯(3∶7)洗脫。標(biāo)題化合物的產(chǎn)量為345mg(27％)。FAB-MS m/z643(M+1)+1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ6.85-7.85(m,14H),5.15(s,2H),3.15-4.80(m,8H),1.60-2.30(m,4H),0.65-0.90(m,9H),-0.80-0.05(m,6H)。
(ⅱ)(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-PhCH(CH2OTBDMS)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.345g；0.54mmol；得自以上步驟(ⅰ))加入三氟乙酸(2ml)在二氯甲烷(8ml)的混合物中。將該反應(yīng)混合物于室溫下攪拌4小時。用二氯甲烷稀釋該化合物并用碳酸氫鈉水溶液將pH調(diào)至7。干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)有機層。殘留物經(jīng)制備的RPLC得到111mg(39％)副標(biāo)題化合物。FAB-MS m/z529(M+1)+；LC-MS m/z527(M-1)-；529(M+1)+,551(M+Na)+1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.10-7.86(m,14H),5.18-5.25(m,2H),3.05-4.69(m,8H),1.66-2.28(m,4H)。
(ⅲ)(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH
將(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.111g；0.21mmol；得自以上步驟(ⅱ))加入鹽酸羥胺(0.206g；3.0mmol)和三乙胺(1.3ml；9.3mmol)在乙醇(4ml)的混合物中，并將該混合物于室溫下攪拌4天。粗產(chǎn)物經(jīng)制備的RPLC得到50mg(23％)標(biāo)題化合物。LC-MSm/z411(M+1)+；433(M+Na)+實施例9(R)-或(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-OH將鹽酸羥胺(0.083g；1.2mmol)和TEA(0.405g；4.0mmol)在11mlTHF中的溶液超聲處理35分鐘。加入(R)-或(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(來自以上實施例2(ⅰ)的化合物2A；0.109g；0.2mmol；)，于40℃攪拌該混合物過夜。蒸發(fā)溶劑，粗品經(jīng)硅膠柱快速層析純化，用二氯甲烷∶IPA:HOAc(100∶0∶0-->90∶10∶0-->80∶20∶0梯度洗脫，接著經(jīng)HPLC(乙腈∶乙酸胺(0.1M)(32.5∶67.5))純化。凍干后，獲得38mg(44％)的白色粉末。LC-MS m/z427(M+1)+實施例10(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)C(O)-Pro-Pab(Z)于0℃，將H-Pro-Pab(Z)(0.5g；1.1mmol；國際專利申請WO97/02284所述方法制備)，接著將TBTU(0.353g；1.1mmol)，然后將DIPEA(0.517g；4.0mmol)加入(R,S)-3-羥基-2-(3-甲氧基苯基)-丙酸(0.196g；1mmol；來自以上實施例E(ⅱ))的DMF(10ml)溶液中。于室溫下攪拌4天后，濃縮該反應(yīng)混合物，并經(jīng)RPLC(乙腈∶H4NOAc(1M)(40∶60))純化。濃縮各部分并用乙酸乙酯提取4次。然后干燥(硫酸鈉)合并的有機相，并蒸發(fā)得到非對映體的粗混合物。將該混合物(0.84g)經(jīng)RPLC(乙腈∶H4NOAc(1M)34∶66)層析，分離出兩種異構(gòu)體化合物10A(0.352g；83％；即移動快的非對映體；經(jīng)HPLC純度為90.5％)和化合物10B(0∶311g；74％；即移動慢的非對映體；經(jīng)HPLC純度為96.9％)?；衔?0B1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.83(d,2H)；7.46(dd,2H)；7.4-7.3(m,8H)；6.84(dd+s,3H)；5.23(s,2H)；4.62(dd,1H)；4.49(ddd,2H)；4.03(dd,1H)；3.88(dd,1H)；3.80(s,2H)；3.73(dd,2H)；3.63(m,1H)；3.2(m,1H)；2.3(m,1H)；2.1-2.0(m,2H)；1.82(m,3H)；1.74(b,3H)。
實施例11(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc將Pd/C(5％；10mg)加入(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(得自以上實施例10的化合物10B；10mg；0.018mmol)在10ml乙醇的酸化(HOAc；2.7mg；0.045mmol)溶液中。于室溫下氫化(1 atm.)該反應(yīng)混合物3.5小時。過濾該溶液，蒸發(fā)并溶于20ml乙腈∶水(50∶50)中。凍干該溶液得到10mg(100％)白色粉末的標(biāo)題化合物。LC-MS m/z425(M+1)+實施例12(R,S)-3-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc(ⅰ)(R,S)-(3-Boc-氨基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3-Boc-氨基苯基)丙酸(0.146g；0.8mmol；得自以上實施例T)的DMF(10ml)冷卻至0℃中的溶液。按下列順序加入H-Pro-Pab(Z)×HCl(0.339；0.88mmol)、TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.20mmol)，并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物4天。隨后蒸發(fā)DMF，殘留物經(jīng)制備的RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；42∶58)純化。蒸發(fā)乙腈，將水溶液凍干得到副標(biāo)題化合物(187mg；43％)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ9.48(b,1H)；7.73(d,1H)；7.43(t,1H)；7.34(m,5H)；7.20(d,1H)；6.85(d,1H)；6.80(d,1H)；5.21(d,2H)；4.62(m,1H)；4.40(m,2H)；4.02(m,1H)；3.87(m,1H)；3.75(m,1H)；3.70(dd,1H)；3.65(m,1H)；3.50(m,1H)；3.23(m,1H)；2.25(m,1H)；1.87(m,4H)；1.79(m,1H)；1.47(d,9H)。
(ⅱ)(R,S)-(3-Boc-氨基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc
將Pd/C(10％；10mg)加入(R,S)-(3-Boc-氨基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(270mg；0.42mmol；得自以上步驟(ⅰ))在10ml乙醇和HOAc(10滴)的溶液中。于室溫下氫化(1atm.)該反應(yīng)混合物2小時。通過Hyflo過濾生成的混合物。蒸發(fā)溶液，加入水并凍干該溶液得到214mg(100％)白色泡沫物的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.75(d,1H)；7.70(d,1H)；7.50(d,1H)；7.35(d,2H)；7.25(m,2H)；7.05(m,1H)；4.50(m,2H)；4.10(m,2H)；3.90(m,2H)；1.45(d,9H)。
(ⅲ)(R,S)-3-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc于室溫下，將(R,S)-(3-Boc-氨基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(172mg；0.42mmol)的HCl(6M；10ml)溶液攪拌2小時，將該產(chǎn)物凍干獲得153mg(76％；94.2％純度)白色的標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.33(m,2H)；7.16(t,1H)；7.02(m,5H)；4.07(m,3H)；3.84(q,1H)；3.68(m,1H)；3.44(m,1H)；3.24(m,1H)；2.96(m,1H)；1.83(m,1H)；1.50(m,3H)13C NMR(100MHz；D2O)174.6,174.3(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體和/或非對映體)172.1,171.9(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體和/或非對映體)；166.1。
實施例13(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH將鹽酸羥胺(149mg；2.15mmol)和TEA(725mg；7.16mmol)在11mlTHF中的溶液超聲處理35分鐘。加入(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(來自以上實施例10的化合物10B；200mg；0.36mmol；)，于40℃攪拌該混合物過夜。蒸發(fā)溶劑，粗品先經(jīng)硅膠柱快速層析純化，用二氯甲烷∶IPA:HOAc(100∶0∶0-->90∶10∶0-->80∶20∶2)梯度洗脫，然后經(jīng)RPLC(乙腈∶乙酸銨(0.1M)32.5∶67.5)純化。凍干獲得119mg(75％)白色粉末的標(biāo)題化合物。LC-MS m/z441(M+1)+1H-NMR(400MHz；CD3OD):δ7.64(d,2H)；7.38(d,2H)；7.27(t,1H)；6.93(m,2H)；6.87(m,1H)；4.47(s,3H)；4.14(dd,1H)；4.03(dd,1H)；3.80(s,1H)；3.72(dd,1H)；3.38(dt,1H)；2.12(m,1H)；2.00(m,3H)；1.48(m,1H)13C NMR(CD3OD)脒和羰基碳174.7；173.4；161.5。
實施例14(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-PTo-Pab-OC(O)Et(ⅰ)(R)和(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBDMS)COOH(3g；9.66mmol；得自以上實施例S)的DMF(100ml)溶液于冰水中冷卻，并加入H-Pro-Pab(Z)(4.8g；10.63mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)，TBTU(3.4g；10.63mg)，接著加入DIPEA(5.0g；38.65mmol)。于室溫下攪拌該混合物5天。濃縮該溶液并將殘留物溶于400ml水和200ml乙酸乙酯的混合液中。分離有機層，用乙酸乙酯(3×50ml)提取水相。用碳酸氫鈉水溶液(10％)洗滌合并的有機層兩次，用水洗滌一次，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品(6.25g棕色固體)經(jīng)硅膠柱(乙酸乙酯∶乙醇(95∶5))快速層析純化，得到4.27g粘稠的棕色油狀物。該物質(zhì)經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(70∶30))進一步純化得到兩種非對映體，化合物14A(1.49g；即移動快的異構(gòu)體)和化合物14B(1.0g；即移動慢的異構(gòu)體)。LC-MS m/z672.6(M+1)+(外消旋物)(ⅱ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OH將羥基胺×鹽酸(0.43g；6.2mmol)和TEA(2.1g；20.8mmol)在THF(50ml)中的溶液超聲處理2小時，其后加入化合物14B(0.70g；1.04mmol；來自以上步驟(ⅱ))。于56℃攪拌該溶液過夜。蒸發(fā)后，該產(chǎn)物經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(65∶35))純化得到0.396g(69％)白色粉末的副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.89(bt,1H)；7.49(d,2H)；7.25(d,2H)；6.90(s+d,2H)；6.83(m,1H)；4.93(b,2H)；4.66(m,2H)；4.24(t,1H)；4.20(d,1H)；3.88(dd,1H)；3.81(s,3H)；3.74(m,2H)；3.34(m,1H)；2.38(m,1H)；2.10(m,1H)；1.82(m,2H)；0.83(s,9H),-0.05(d,6H)。
(ⅲ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et將(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OH(130mg；0.23mmol；得自以上步驟(ⅱ))、丙酸酐(1g；7.7mmol)和DMAP(9mg；0.07mmol)的混合物于室溫下攪拌35分鐘.然后蒸發(fā)生成的混合物而得到黃色油狀物，經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(70∶30))純化得到75mg(52％)副標(biāo)題化合物(純度99.6％)。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.66(d,2H)；7.62(t,1H)；7.33(d,2H)；6.90(d+s,3H)；6.82(m,1H)；5.04(b,2H)；4.63(t,1H)；4.59(d,1H)；4.30(dd,1H)；4.23(t,1H)；3.88(dd,1H)；3.80(s,3H)；3.7(m,2H)；3.32(m,1H)；2.55(q,2H)；2.43(m,1H)；2.02(m,1H)；1.85(m,1H)；1.75(m,1H)；1.26(t,3H)；0.82(s,9H)；-0.05(d,6H)。
(ⅳ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et將TFA(0.2ml)加入(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et(75mg；0.12mmol；得自以上步驟(ⅲ))在二氯甲烷的冰冷溶液中。于0℃攪拌該溶液35分鐘，用固體碳酸鈉使該溶液呈堿性并用二氯甲烷提取。收集有機相，洗滌(水)、干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得到60mg粗品。經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(42∶58))純化并凍干，獲得41mg(67％)白色粉末的標(biāo)題化合物。LC-MS m/z497(M+1)+1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.66(d,2H)；7.34(d,2H)；6.83(dd,3H)；5.11(b,2H)；4.63(dd,1H)；4.48(ddd,2H)；4.03(dd,1H)；3.88(dd,1H)；3.80(s,3H)；3.73(dd,1H)；3.64(m,1H)；3.19(m,1H)；2.54(q,2H)；2.35(m,1H)；2.06(m,1H)；1.82(m,2H)；1.27(t,3H)。
實施例15(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH3
(ⅰ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH3將(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-OH(130mg；0.23mmol；得自以上實施例14(ⅱ))、乙酸酐(1ml；10mmol)和DMAP(9mg；0.07mmol)的混合物于室溫下攪拌90分鐘。蒸發(fā)后使粗品經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(60∶40))純化，得到78mg(57％)副標(biāo)題化合物。LC-MS m/z598(M+1)+(ⅱ)(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH3將0.2ml TFA加入(S)-或(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OTBTMS)-C(O)-Pro-Pab-(OC(O)CH3)(125mg；0.21mmol；得自以上步驟(ⅰ))在二氯甲烷(2.5ml)的溶液中，并于室溫下攪拌該混合物40分鐘，其后用碳酸鈉水溶液使該溶液呈堿性，并用二氯甲烷提取。用水洗滌有機層一次，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得到60mg粗品。經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(60∶40))純化并凍干，獲得36mg(36％)白色粉末的標(biāo)題化合物。LC-MS m/z484(M+1)+實施例16(R)-或(S)-3-(甲氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×2HCl(ⅰ)(R,S)-((3-Boc-甲氨基)苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3-Boc-氨基苯基)丙酸(0.28g,0.95mmol；來自以上實施例U)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Pro-Pab(Z)×HCl(0.46；0.88mmol)、TBTU(0.32g；1.0mmol)和DIPEA(0.44g；3.4mmol)，并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物4天。隨后蒸發(fā)DMF，殘留物經(jīng)制備的HPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；42∶58)純化。蒸發(fā)乙腈，將水溶液凍干得到副標(biāo)題化合物(220mg；43％)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.28(d,1H)；7.75(d,1H)；7.42(m,2H)；7.33(m,3H)；7.28(m,3H)；7.23(m,1H)；7.12(d,2H)；5.20(d,2H)；4.60(m,1H)；4.40(m,2H)；4.03(m,1H)；3.90(m,1H)；3.72(m,1H)；3.50(m,1H)；3.14(s,3H)；2.25(m,1H)；1.85(m,4H)；1.43(s,9H)。
(ⅱ)(R)-和(S)-((3-Boc-甲氨基)苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab將Pd/C(10％；10mg)加入(R,S)-((3-Boc-甲氨基)苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(270mg；0.42mmol；得自以上步驟(ⅰ))在10ml乙醇和HOAc(10滴)的溶液中。于室溫下氫化(1atm.)該反應(yīng)混合物2小時。通過Hyflo過濾生成的混合物。蒸發(fā)溶液，加入水并凍干該溶液得到214mg(100％)白色泡沫物的副標(biāo)題化合物。粗品經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；32∶68)純化，分離出非對映異構(gòu)體。蒸發(fā)乙腈并凍干水溶液得到化合物16A(即移動快的異構(gòu)體)和化合物16B(即移動慢的異構(gòu)體)?；衔?6A1H-NMR(300MHz；D2O):δ7.8(d,2H)；7.4(d,2H)；7.2(m,4H)；4.6(m,2H)；4.3(d,1H)；4.15(m,2H)；3.85(m,2H)；3.55(m,1H)；2.95(s,2H)；2.3(m,1H)；2.0(d,5H)；1.4(d,9H)?；衔?6B1H-NMR(300MHz；D2O):δ7.8(d,2H)；7.5(d,2H)；7.3(m,4H)；4.5(m,2H)；4.4(d,1H)；4.1(m,2H)；3.8(m,2H)；3.4(m,1H)；3.2(s,2H)；2.2(m,1H)；2.0(d,5H)；1.4(d,9H)。
(ⅲ)(R)-或(S)-(3-甲氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl于室溫下，將(R)-或(S)-(3-Boc-甲氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(來自以上步驟(ⅱ)的化合物16B；172mg；0.42mmol)的鹽酸(6M；10ml)溶液攪拌2小時，并將該產(chǎn)物凍干獲得153mg(76％；94.2％純度)白色的標(biāo)題化合物。FAB-MS m/z424(M+1)+1H-NMR(400MHz；D2O):δ8.77(t,1H)；7.80(d,2H)；7.72(d,1H)；7.63(t,1H)；7.54(d,2H)；7.50(m,2H)；4.55(m,2H)；4.46(m,2H)；4.46(dd,1H)；4.27(t,1H)；4.12(m,2H)；3.88(m,2H)；3.66(dd,1H)；3.42(m,1H)；3.13(s,3H)；2.22(m,1H)；2.00(m,2H)；1.90(m,1H)13C NMR(100MHz；D2O)174.6,171.9,166.6。
實施例17(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl(ⅰ)(S)-托品酸根據(jù)G Fodor等在Acta Chem.Hung.28,407(1961)中所述方法，用(1R:2R)-(-)-1-對-硝基苯基-2-氨基丙-1,3-二醇(7.85g；47mmol)使外消旋托品酸(10g；47mmol)溶解，獲得0.25g(5％)標(biāo)題化合物。[α]D20=-77℃；c=0.5(H2O)(Lit:-72℃)。
(ⅱ)(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)制備(S)-托品酸(234mg；1.4mmol；得自以上步驟(ⅰ))、H-Pro-Pab(Z)(884mg；1.95mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)和TEA(1ml；7mmol)的溶液，并冷卻至0℃。隨后加入HBTU(570mg；1.5mmol)并攪拌溶液過夜。此后蒸發(fā)溶劑，粗品經(jīng)RPLC純化得到0.50g(68％)副標(biāo)題化合物。LC-MS m/z527(M-1)-(ⅲ)(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)于室溫下，用Pd/C(10％；161mg)使(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(220mg；0.42mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(25ml)溶液在常壓下氫化18小時。通過Hyflo過濾生成的溶液并蒸發(fā)。使形成的固體溶于水中，加入1ml 2M鹽酸水溶液，并凍干該溶液，得到白色固體的標(biāo)題化合物(132mg,80％)。LC-MS m/z394.5(M+1)+實施例18(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc(ⅰ)(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)于0℃冷卻(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二甲基苯基)-丙酸(0.155g,0.8mmol；得自以上實施例H)在DMF(10ml)中的溶液。加入H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.387g；0.88mmol；得自以上實施例A)，接著加入TBTU(0.283g；0.88mmol)，然后加入DIPEA(0.414g；3.2mmol)，于室溫下攪拌該溶液4天。隨后濃縮該溶液，生成的混合物經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；40:60)蒸發(fā)乙腈并用乙酸乙酯提取水相。干燥(硫酸鈉)有機相并蒸發(fā)至干燥。分離出為白色固體的副標(biāo)題化合物(270mg；62％)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.27(bt,0.5H)；8.15(bt,0.5H)；7.80(d,2H)；7.44(m,2H)；7.34(d,2H)；7.30(d,2H)；6.91(d,1H)；6.85(s,1H)；6.65(s,1H)；5.20(d,2H)；4.90(m,1H)；4.6-4.4(m,2H)；4.1-4.0(m,2H)；3.8-3.5(m,3H)；2.58(m,1H)；2.29(s,3H)；2.21(s,3H)。
(ⅱ)(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc將乙酸(24μl)和Pd/C(5％,0.115g)加入(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(0.229g；0.42mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。在常壓下氫化該溶液2.5小時。通過Hyflo過濾該混合物，濃縮生成的溶液，并使之溶于最少量的水中，凍干獲得0.174g(88％；純度93.6％)白色固體的標(biāo)題化合物。LC-MS m/z409(M+1)+實施例19(S)-或(R)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl(ⅰ)(R)-和(S)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3-三氟甲基苯基)丙酸(0.25g,1.07mmol；來自以上實施例I)、H-Pro-Pab(Z)(0.532g；1.17mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)和TBTU(0.377g；1.7mmol)的DMF(10ml)溶液于0℃冷卻，加入DIPEA(0.72g；4.27mmol)。于室溫下攪拌生成的混合物40小時。濃縮該反應(yīng)混合物，加入水(400ml)，將pH調(diào)至9(碳酸氫鈉水溶液)。用乙酸乙酯(3×100ml)提取生成的混合物。用鹽水洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。經(jīng)HPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；45∶55)純化得到兩種非對映體，化合物19A(87mg；0.15mmol；經(jīng)HPLC純度94.4％；即移動快的非對映體)和化合物19B(120mg；0.20mmol；經(jīng)HPLC純度91％；即移動慢的非對映體)。LC-MS m/z597(M+1)+(兩種非對映體)(ⅱ)(S)-或(R)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl將Pd/C(10％)加入(R)-或(S)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(118mg；0.20mmol；得自以上步驟(ⅰ)的化合物19B)的乙醇(10ml)和鹽酸水溶液(1M；0.4ml)中。于室溫、常壓下使該混合物氫化3小時。通過Hyflo過濾生成的混合物并蒸發(fā)溶液。加入水并凍干該溶液，得到66mg(66.9％)白色固體的標(biāo)題化合物(純度94.5％(HPLC))。LC-MS m/z463(M+1)+實施例20(R,S)-3-羥基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc(ⅰ)(R,S)-3-羥基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3-羥基苯基)-丙酸(0.146g；0.8mmol；得自以上實施例J)的DMF(10ml)溶液于0℃冷卻。加入H-Aze-Pab(Z)×HCl(0.399g；0.88mmol；得自以上實施例A)、TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.2mmol)，于室溫下攪拌該溶液4天。濃縮該反應(yīng)混合物，殘留物經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；42∶58)純化。蒸發(fā)乙腈，將水溶液凍干。分離到為白色固體的副標(biāo)題化合物(187mg；43％)。1H-NMR(500MHz；CD3OD):δ7.82(d,2H)；7.41(m,3H)；7.34(m,2H)；7.25(d,1H)；7.13(t,1H)；6.78(s+d,2H)；6.66(d,1H)；5.18(b,2H)；4.5(m,2H)；4.07(m,1H)；3.93(m,1H)；3.79(m,1H)；3.65(m,1H)；3.5-3.3(m,2H)；3.30(s,1H),2.2-2.0(m,2H)；1.95(m,3H)；1.81(m,1H)。
(ⅱ)(R,S)-3-羥基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc將乙酸(18μl)和Pd/C(5％)加入(R,S)-3-羥基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.173g；0.32mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。于室溫、常壓下氫化該溶液3小時。通過Hyflo過濾該混合物，濃縮生成的溶液，并使之溶于最少量的水中，凍干獲得0.133g(89％；純度94.2％)的蓬松白色晶狀物。
LC-MS m/z411(M+1)+
實施例21(R)-或(S)-((3-氯-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl(ⅰ)(R)-和(S)-((3-氯-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3-氯-5-甲基苯基)丙酸(0.30g,1.4mmol；來自以上實施例V)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Pro-Pab(Z)×HCl(0.70g；1.54mmol)、TBTU(0.99g；1.5mmol)和DIPEA(0.94g；5.5mmol)，并于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物4天。隨后蒸發(fā)DMF，將生成的混合物傾入水(400ml)中，用碳酸氫鈉水溶液(10％)調(diào)節(jié)pH至9。用乙酸乙酯(3×100ml)提取混合物水溶液。用碳酸氫鈉水溶液(10％)、水、鹽水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品(0.674g)經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；45∶55)純化，分離到兩種非對映體。蒸發(fā)乙腈，用乙酸乙酯提取水溶液。用水洗滌有機層，干燥(硫酸鈉)并濃縮得到化合物21A(125mg；31％；即移動快的非對映體)和化合物21B(102mg；25％；即移動慢的非對映體)。化合物21BFAB-MS(m/z)577,579(M+1)+1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.76(d,2H)；7.43(m,2H)；7.30(m,5H)；7.07(d,2H)；6.95(s,1H)；5.20(s,2H)；4.58(dd,1H)；4.42(m,2H)；3.97(t,1H)；3.85(dd,1H)；3.68(m,2H)；3.23(m,1H)；2.30(s,3H)；2.25(m,1H)；2.03(m,1H)；1.85(m,4H)。
(ⅱ)(R)-或(S)-(3-氯-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl將苯硫基甲烷(1.04g；8.83mmol)加入(R)-或(S)-((3-氯-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(得自以上步驟(ⅰ)的化合物21B；0.102g；0.18mmol)在3.7ml TFA的溶液中。于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物3小時。使生成的混合物溶于水中，用乙醚洗滌該水溶液兩次，并凍干生成的溶液。粗品經(jīng)制備的HPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；35∶65)純化。蒸發(fā)乙腈并凍干該溶液，得到50mg(59％)白色粉末狀標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ9.23(b,2H)；8.74(b,2H)；7.78(d,2H)；7.57(d,2H)；7.18(s,1H)；7.12(m,2H)；4.52(s,2H)；4.52(s,2H)；4.46(dd,1H)；4.06(m,2H)；3.89(m,1H)；3.72(m,1H)；3.39(m,1H)；2.32(s,3H)；2.15(m,1H)；1.98(m,2H)；1.87(m,1H)。13C NMR(100MHz；CD3OD)174.9,173.1,168.3。
實施例22(S)-或(R)-3-氟代苯基-CH(CH2OH)C(O)-Pro-Pab×HCl(ⅰ)(R)-和(S)-3-氟代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3-氟代苯基)丙酸(0.2g,1.09mmol；來自以上實施例K)、H-Pro-Pab(Z)(0.542g；1.19mmol；根據(jù)國際專利申請WO97/02284所述方法制備)和TBTU(0.383g；1.19mmol)的DMF(10ml)溶液于0℃冷卻，加入DIPEA(0.73g；4.34mmol)。于室溫下攪拌生成的混合物22小時。濃縮該反應(yīng)混合物，加入水(400ml)，將pH調(diào)至9(碳酸氫鈉水溶液)。用碳酸氫鈉水溶液、水、然后用鹽水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。然后用EtOAc(3×100ml)提取產(chǎn)生的混合物。經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；45∶55)得到兩種非對映體，化合物22A(85mg；0.16mmol；經(jīng)HPLC純度90％；即移動快的非對映體)和化合物22B(95mg；0.17mmol；經(jīng)HPLC純度91％；即移動慢的非對映體)。LC-MS m/z547(M+1)+(兩種非對映體)(ⅱ)(S)-或(R)-3-氟代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl將Pd/C(10％)加入化合物22B(85mg；0.16mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(10ml)和鹽酸水溶液(1M；0.4ml)中，于室溫、常壓下使該混合物氫化3小時。通過Hyflo過濾生成的混合物并蒸發(fā)溶液。加入水并凍干該溶液，得到62.9mg(90.1％)白色固體(純度93.3％(HPLC))。LC-MS m/z413(M+1)+實施例23(S)-和(R)-3-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc(ⅰ)(R,S)-3-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
將(R,S)-3-羥基-2-(3-氯代苯基)-丙酸(0.30g,1.5mmol；來自以上實施例L)、H-Pro-Pab(Z)(0.77g；1.7mmol；根據(jù)國際專利申請WO97/02284所述方法制備)、TBTU(0.55g；1.7mmol)和DIPEA(0.41g；3.2mmol)的DMF(20ml)溶液攪拌2天。用甲苯∶乙酸乙酯(1∶1；300ml)提取生成的混合物，收集有機層，用碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。經(jīng)快速層析(硅膠；二氯甲烷∶THF(7∶3))得到0.50g(59％)副標(biāo)題化合物。LAB-MS m/z562.4,564.5(M+1)+(ⅱ)(S)-和(R)-(3-氯代苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc將三氟甲磺酸(0.2g；1.3mmol)加入(R,S)-3-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.15g；0.27mmol；得自以上步驟(ⅰ))的二氯甲烷和苯甲醚(43mg；0.40mmol)溶液中。攪拌生成的混合物1小時，隨后濃縮。然后加入水，用碳酸氫鈉水溶液將pH調(diào)至約9用乙醚洗滌水相并凍干得到粗產(chǎn)物。經(jīng)RPLC分離到兩種非對映體，化合物23A(11mg；19％；經(jīng)HPLC純度81.7％；即移動快的非對映體)和化合物23B(11mg；19％；經(jīng)HPLC純度90.0％；即移動慢的非對映體)?；衔?3ALC-MS m/z428.4(M+1)+化合物23BFAB-MSm/z431(M+1)+實施例24(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc(ⅰ)(R,S)-(3,5-二甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二甲基苯基)-丙酸(0.155g,0.8mmol；得自以上實施例H)在DMF(10ml)中的溶液冷卻至0℃。加入(按順序)H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.399g；0.88mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)、TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.2mmol)，于室溫下攪拌該溶液5天。隨后濃縮該反應(yīng)混合物，殘留物經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；40∶60)純化。蒸發(fā)乙腈并用乙酸乙酯提取水相。干燥(硫酸鈉)有機相并蒸發(fā)至干燥。分離出淡黃色固體的副標(biāo)題化合物(300mg；67％)。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.83(d,2H)；7.45(m,2H)；7.32(m,6H)；6.88(s,1H)；6.84(s,1H)；6.78(s,1H)；5.21(d,2H)；4.75-4.30(m,3H)；4.04(m,1H)；3.83(m,1H)；3.74(dt,1H)；3.63(m,1H)；3.47(m,1H)；3.19(m,1H)；2.28(s,3H)；2.16(s,3H)；1.95-1.75(m,3H)。
(ⅱ)(R,S)-(3,5-二甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc將乙酸(29μl)和Pd/C(5％,0.140g)加入(R,S)-(3,5-二甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.280g；0.50mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。于室溫、常壓下氫化該溶液2.5小時。通過Hyflo過濾該混合物，濃縮生成的溶液，并使之溶于最少量的水中，凍干獲得0.174g(88％；純度92.1％)白色晶狀物。LC-MS m/z423(M+1)+13C NMR(100MHz；D2O)(羰基和脒碳，非對映體/或旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)174.93,173.17,173.02,166.55,166.40。
實施例25(S)-或(R)-3,5-雙(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl(ⅰ)(R)-和(S)-2-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將3-羥基-2-(3,5-雙(三氟甲基)苯基)-丙酸(284mg,0.94mmol；來自以上實施例M)、H-Pro-Pab(Z)×2HCl(468mg；1.03mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)和TBTU(332mg；1.03mmol)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃，加入DIPEA(485mg；3.76mmol)。于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物60小時。將該溶液傾入水(400ml)中，將pH調(diào)至9(碳酸氫鈉水溶液)。用3×100ml乙酸乙酯提取該溶液。用碳酸氫鈉水溶液、水和用鹽水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。經(jīng)制備的HPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；55∶45)分離到兩種非對映體，化合物25A(161g；0.24mmol；經(jīng)HPLC純度86.9％；即移動快的非對映體)和化合物25B(241mg；0.36mmol；經(jīng)HPLC純度90.9％；即移動慢的非對映體)。化合物25B1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.80(s,3H)；7.67(d,2H)；7.56(t,1H)；7.41(dd,2H)；7.39-7.28(m,3H)；7.21(d,1H)；5.19(s,2H)；4.57(dd,1H)；4.33(m,2H)；4.12(m,1H)；3.96(t,1H)；3.84(m,1H)；3.77(dd,1H)；3.36(dd,1H)；2.17(m,1H)；2.10-1.87(m,4H)。
(ⅱ)(S)-或(R)-3,5-雙(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab將Pd/C(10％)加入化合物25B(235mg；0.35mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(10ml)和鹽酸水溶液(1M；0.7ml)中。于室溫、常壓下使該混合物氫化3小時。過濾反應(yīng)混合物并濃縮。加入水并凍干生成的溶液，得到174mg(83.3％)白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(純度92.7％(HPLC))。LC-MS m/z531(M+1)+實施例26(R,S)-3-甲氧基-5-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl(ⅰ)(R,S)-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將3-羥基-2-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-丙酸(0.19g,0.9mmol；來自以上實施例N)、H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.35g；0.99mmol；來自以上實施例A)和TBTU(0.32g；0.99mmol)在二氯甲烷中的混合物于冰浴中冷卻。加入DIPEA(0.47g；3.7mmol)。于室溫下攪拌該反應(yīng)混合物過夜，隨后蒸發(fā)二氯甲烷，粗品混合物經(jīng)快速層析(二氯甲烷∶THF∶甲醇(11∶2∶1)；Si-gel)。將收集的部分溶于水中，用乙酸乙酯提取稍微渾濁的水溶液。干燥(硫酸鈉)有機層，并蒸發(fā)得到0.18g(35％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ9.5(b,1H)；7.77(dd,2H)；7.43(m,2H)；7.37-7.21(m,6H)；6.63(d,1H)；6.59(m,1H)；5.20(d,2H)；4.67(d,0.5H)；4.58(dd,0.5H)；4.40(m,2H)；4.07(dd,0.5H)；4.00(dd,0.5H)；3.82(m,1H)；3.75(s,3H)；3.69(m,2H)；3.48(m,1H)；3.21(m,1H)；2.28(s,3H)；2.05-1.94(m,1H)；1.95-1.75(m,3H)。
(ⅱ)(R,S)-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl將(R,S)-(3-甲氧基-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(100mg；0.17mmol；得自以上步驟(ⅰ))、濃鹽酸水溶液(10滴)和Pd/C(10％)在乙醇中的混合物于室溫、常壓下使該混合物氫化2小時。用Hyflo過濾生成的混合物并濃縮。并使之溶于極少量的水中。凍干得到75mg(90％)標(biāo)題化合物(純度92％(HPLC))。LC-MS m/z440(M+1)+實施例27(R,S)-(2,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc(ⅰ)(R,S)-(2,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)于0℃冷卻(R,S)-3-羥基-2-(2,5-二甲氧基苯基)-丙酸(0.23g；1.0mmol；得自以上實施例O)的DMF(10ml)溶液。(按順序)加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.500g；1.1mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)、TBTU(0.353g；1.1mmol)和DIPEA(0.517g；4.0mmol)，并于室溫下攪拌3天。蒸發(fā)DMF，生成的混合物經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；40∶60)純化。蒸發(fā)乙腈，用乙酸乙酯提取水相。干燥(硫酸鈉)有機相并蒸發(fā)至干燥。分離出淡粉紅色的副標(biāo)題化合物(400mg；68％)。1H NMR(500MHz；CDCl3):δ7.19(d,3H)；7.43(dd,1H)；7.43(dt,1H)；7.30(d,1H)；6.82-6.72(m,4H)；6.68(d,1H)；5.20(d,3H)；4.70-4.57(m,1H)；4.52-4.30(m,5H)；3.96(m,1H)；3.72(s,3H)；3.70(m,1H)；3.60(s,3H)；3.65-3.45(m,2H)；3.18-3.02(m,1H)；2.29(m,1H)；2.04-1.96(m,1H)；1.95-1.74(m,4H)(ⅱ)(R,S)-(2,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc將乙酸(36μl)和Pd/C(5％,0.190g)加入(R,S)-(2,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.375g；0.64mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。于室溫、常壓下氫化該溶液3.5小時。通過Hyflo過濾該混合物，濃縮生成的溶液，并使之溶于最少量的水中，凍干獲得0.174g(88％；純度92.1％)的白色晶狀物。LC-MS m/z455(M+1)+實施例28(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl(ⅰ)(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二甲氧基苯基)-丙酸(0.18g；0.8mmol；來自以上實施例P)、H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.40g；0.88mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)和TBTU(0.28g；0.88mmol)的10mlDMF溶液于冰浴上冷卻，加入DIPEA(0.39g；3.0mm0l)。于室溫下攪拌該混合物過夜，其后濃縮生成的混合物。粗品經(jīng)快速層析(二氯甲烷∶THF∶甲醇(10∶3∶1)；Si-gel)。將水加入收集的部分，用乙酸乙酯提取生成的混合物。干燥(硫酸鈉)有機層并蒸發(fā)得到0.32g(68％)副標(biāo)題化合物。13H NMR(500MHz；CDCl3):δ7.76(t,1H)；7.43(dd,1H)；7.73-7.20(m,6H)；6.40(d,2H)；5.20(d,2H)；4.65-4.56(m,2H)；4.48-4.32(m,2H)；4.09-3.98(m,4H)；3.82(m,2H)；3.75(s,3H)；3.66(s,3H)；3.52-3.45(m,1H)；3.28-3.21(m,1H)；2.30-2.18(m,1H)；2.04-1.76(m,5H).
(ⅱ)(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl將濃鹽酸(10滴)和Pd/C(10％)加入(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(0.16g；0.27mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。于室溫、常壓下氫化該溶液2小時。通過Hyflo過濾生成的混合物，蒸發(fā)至干燥獲得0.14g(100％)的標(biāo)題化合物(純度94.2％(HPLC))。FAB-MS m/z455(M+1)+實施例29(R,S)-3,4-(亞甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl(ⅰ)(R,S)-(3,4-亞甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)
將(R,S)-3-羥基-2-(3,4-亞甲二氧基苯基)-丙酸(0.21g；1.0mmol；來自以上實施例Q)、H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.50g；1.1mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)、TBTU(0.35g；1.1mmol)和DIPEA(0.47g；3.7mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液攪拌7天。蒸發(fā)生成的混合物，粗品經(jīng)快速層析(二氯甲烷∶THF(7∶3))純化。濃縮合并的目的組分，將粗品產(chǎn)物溶于EtOAc中。用水洗滌該溶液，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)得到0.28g(49％)副標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz；CDCl3):δ7.79(d,1H)；7.72(d,1H)；7.42(m,2H)；7.36-7.25(m,4H)；7.22(dd,2H)；6.76-7.57(m,3H)；5.91(s,2H)；5.87(dd,1H)；5.19(d,2H)；4.62-4.52(m,1H)；4.45-4.30(m,1H)；4.00-3.90(m,1H)；3.84-3.74(m,1H)；3.64(m,1H)；3.22(m,1H)；2.28-2.23(m,1H)；2.23-2.15(m,1H)；2.03-1.75(s,4H).
(ⅱ)(R,S)-3,4-亞甲二氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl將6滴濃鹽酸和Pd/C(10％)加入(R,S)-(3,4-亞甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(90mg；0.16mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(10ml)溶液中。于室溫、常壓下氫化該混合物2小時。通過Hyflo過濾生成的混合物，蒸發(fā)至干燥獲得69mg(92％)的標(biāo)題化合物。FAB-MS m/z439(M+1)+13C NMR(100 MHz；CDCl3)(羰基和脒碳；因旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體和/或非對映體存在出現(xiàn)復(fù)雜多峰)174.96,174.79,173.04,166.58,172.99,166.45實施例30(S)-或(R)-3-(1-萘基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(ⅰ)(R)-和(S)-3-(1-萘基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)于0℃冷卻(R,S)-3-羥基-2-(1-萘基)-丙酸(0.3g,1.39mmol；得自以上實施例R)、H-Pro-Pab(Z)(0.692g；1.53mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)和TBTU(0.490g；1.53mmol)的DMF(10ml)溶液，加入DIPEA(0.93g；5.55mmol)。于室溫下攪拌生成的混合物60小時。蒸發(fā)部分DMF，將殘留物傾入400ml水中。使pH調(diào)至9(碳酸氫鈉水溶液)，用3×100ml乙酸乙酯提取該溶液。用碳酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌合并的有機相，經(jīng)制備的HPLC(乙腈∶NH4OAc(0.1M)；45∶55)分離出兩種非對映體化合物30A(262mg；0.45mmol；經(jīng)HPLC純度92.4％；即移動快的非對映體)和化合物30B(199mg；0.34mmol；經(jīng)HPLC純度99.9％；即移動慢的非對映體)。LC-MS m/z580(M+1)+(兩種非對映體)(ⅱ)(S)-或(R)-3-(1-萘基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl將Pd/C(10％)加入化合物30B(190mg；0.16mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(10ml)和鹽酸水溶液(1M；0.66ml)的溶液中。在室溫、常壓下氫化該化合物3小時，通過Hyflo過濾生成的混合物并蒸發(fā)濾液。加入水，并凍干該溶液得到157mg(99.4％)的白色泡沫物(純度99.8％(HPLC))。LC-MS m/z445(M+1)+實施例31(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc(ⅰ)(R,S)-3,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二甲氧基苯基)-丙酸(0.27g；1.2mmol；得自以上實施例W)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.57g；1.3mmol；來自以上實施例A)、TBTU(0.42g；1.3mmol)和DIPEA(0.54g；4.2mmol)，并于室溫下攪拌2天。蒸發(fā)DMF，粗品經(jīng)硅膠柱快速層析純化，用二氯甲烷∶THF∶甲醇(80∶30∶5))洗脫，得到230mg(34％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ8.20(d,1H)；7.75(t,2H)；7.40(t,2H)；7.30(m,5H)；6.40(s,1H)；6.37(m,1H)；6.30(s,1H)；5.20(d,2H)；4.85(m,1H)；4.40(m,2H)；4.05(m,2H)；3.75(s,6H)；3.65(s,3H)；2.55(m,1H)；2.35(m,1H)(ⅱ)(R,S)-3,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc將Pd/C(10％)加入(R,S)-3,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(270mg；0.42mmol；得自以上步驟(ⅰ))的乙醇(10ml)和乙酸乙酯(10滴)的溶液中，于室溫、常壓下氫化該混合物2小時。通過Hyflo過濾生成的混合物。蒸發(fā)該溶液，加入水并凍干該溶液得到170mg(89％)的標(biāo)題化合物。FAB-MS m/z441(M+1)+1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.8(m,1H)；7.68(d,1H)；7.57(m,1H)；7.39(d,1H)；6.60(m,1H)；6.54(m,1H)；6.45(m,1H)；5.00(m,1H)；4.50(m,3H)；4.10(m,3H)；3.80(m,9H)；2.60(m,1H)；2.28(m,1H)；1.95(s,3H)13C NMR(100MHz；D2O)羰基和脒碳δ182.0；174.4；174.0；(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體和/或非對映體)；173.2；172.9；172.8(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體和/或非對映體)實施例32(R,S)-2-氯代-5-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc(ⅰ)(R,S)-2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基)丙酸(0.22g；0.7mmol；得自以上實施例X)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.32g；0.75mmol；來自以上實施例A)、TBTU(0.24g；0.75mmol)和DIPEA(0.32g；2.5mmol)，并于室溫下攪拌2天。蒸發(fā)DMF，粗品經(jīng)硅膠柱快速層析純化，用二氯甲烷∶THF∶甲醇(85∶15∶5))洗脫得到(180mg；39％)副標(biāo)題化合物。1H-NMR(300MHz；CDCl3):δ9.45(b,1 H)；8.23(m,0.5H)；7.95(m,0.5H)；7.65(m,3H)；7.20(m,10H)；5.15(d,2H)；4.85(m,1H)；4.5-3.6(m,9H)；2.40(m,2H)；1.45(s,9H)(ⅱ)(R,S)-2-氯代-5-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc根據(jù)以上實施例23(ⅱ)所述方法，由(R,S)-2-氯代-5-(Boc-氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(170mg；0.26mmol；來自以上步驟(ⅰ))、TEA(5.3ml；69mmol)和苯硫基甲烷(thioanisol)(1.6g；13mmol)制備得到40mg(32％)標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.62(m,1H)；7.60(d,1H)；7.40(m,1H)；7.30(m,1H)；7.05(t,1H)；6.60(m,2H)；4.90(m,1H)；4.41(s,1H)；3.90(m,3H)；3.65(m,1H)；3.60(m,1H)；2.40(m,1H)；2.05(m,1H)；1.80(s,3H)實施例33(S)-和(R)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-HOAc(ⅰ)(R,S)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3-甲基苯基)丙酸(0.18g,1mmol；來自以上實施例Y)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.48g；1.1mmol；來自以上實施例A)、TBTU(0.35g；1.1mmol)和DIPEA(0.52g；4mmol)，并于室溫下攪拌該溶液2天。蒸發(fā)DMF，使生成的物質(zhì)溶于用碳酸氫鈉水溶液(300ml)中，加入乙酸乙酯(100ml)。分離各相，用乙酸乙酯(4×75ml)提取水相。用碳酸氫鈉水溶液(1×75ml)洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)。粗品(0.3g)經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；40∶60)純化得到(118mg；20％)副標(biāo)題化合物。LC-MS m/z528(M+1)+1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ8.25(m,1H)；7.77(d,1H)；7.40(m,8H)；7.12(m,4H)；5.25(s,2H)；4.93(m,1H)；4.50(m,2H)；4.10(m,2H)；3.70(m,2H)；3.60(m,1H)；2.60(m,1H)；2.35(s,3H)(ⅱ)(S)-和(R)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab×HOAc將Pd/C(5％；0.13g)加入(R,S)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(114mg；0.22mmol；得自以上步驟(ⅰ))在乙醇(10ml)和HOAc(17μl)的溶液中。于室溫、常壓下氫化該混合物3小時。通過Hyflo過濾生成的混合物。蒸發(fā)溶液，加入水，用乙酸乙酯洗滌該混合物，凍干該溶液得到48mg粗品。經(jīng)RPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(20∶80))純化，分離出非對映體化合物33A(即移動快的非對映體；17mg)和化合物33B(即移動慢的非對映體；15mg；純度99.1％)。實施例33ALC-MS m/z395(M+1)+1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.80(d,1H)；7.71(d,1H)；7.54(d,1H)；7.39(d,1H)；7.35(d,1H)；7.24(m,2H)；7.17(d,1H)；5.17(m,0.5H)；4.80(m,0.5H)；4.60(s,2H)；4.2-3.6(m,5H)；2.60(m,1H)；2.36(s,2H)；2.30(s,2H)；2.22(m,1H)；1.93(s,3H)13C NMR(75 MHz；D2O)羰基和脒碳δ175.7；174.6；(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；173.5；173.0(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)實施例34(S)-或(R)-2,5-二甲基苯基-CH-(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc(ⅰ)(R)-和(S)-2,5-二甲基苯基-CH-(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(2,5-二甲基苯基)丙酸(0.27g,1.2mmol；得自以上實施例Z)在DMF(10ml)中的溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.75g；1.65mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)、TBTU(0.53g；1.65mmol)和DIPEA(0.78g；6mmol)，于室溫下攪拌該溶液2天。蒸發(fā)DMF，加入碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯(3×30ml)提取該水溶液。用碳酸氫鈉水溶液(2×20ml)和水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得到0.35g(42％)粗品。經(jīng)制備的HPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；(45∶55至80∶20))分離出非對映異構(gòu)體化合物34A(即移動快的非對映體；136mg；32％；純度97.6％)和化合物34B(即移動慢的非對映體；197mg；47％；純度98.4％)?；衔?4B1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.83(d,2H)；7.45(d,2H)；7.40(m,1H)；7.35(m,4H)；7.08(d,1H)；6.99(d,1H)；5.22(s,2H)；4.63(d,1H)；4.49(m,2H)；4.04(dd,1H)；3.95(dd,1H)；3.61(dd,1H)；3.53(dt,1H)；2.92(m,1H)；2.34(3H)；2.32(m,1H)；2.26(s,3H),1.73(m,3H)。
(ⅱ)(S)-或(R)-2,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc將Pd/C(5％,45mg)加入(R)-或(S)-2,5-二甲基苯基-CH-(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(61mg；0.11mmol；得自以上步驟(ⅰ)的混合物34B)的乙醇(10ml)和HOAc(10滴)的溶液中，在室溫、常壓下氫化該溶液5小時。通過Hyflo過濾生成的混合物，濃縮該溶液，加入水并凍干獲得45mg(89％；純度97.8％)白色粉末的標(biāo)題化合物。LC-MS m/z423(M+1)+1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.65(d,2H)；7.56(d,1 H)；7.40(d,2H)；7.10(m,2H)；7.00(m,2H)；4.41(s,2H)；4.32(dd,1H)；4.11(dd,1H)；3.91(m,1H)；3.64(m,1H)；3.55(m,2H)；2.98(m,1H)；2.26(s,3H)；2.18(s,3H)；2.05(m,1H)；1.80(m,6H)；1.65(m,2H)實施例35(S)-或(R)-4-羥基-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl(ⅰ)(R)-和(S)-4-芐氧基-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(4-芐氧基-3-甲氧基苯基)丙酸(0.27g,1.2mmol；來自以上實施例AA)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.66g；1.46mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)、TBTU(0.467g；1.46mmol)和DIPEA(0.69ml；5.29mmol)，并于室溫下攪拌該溶液3天。蒸發(fā)DMF，加入碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯(3×100ml)提取水溶液。用碳酸氫鈉水溶液(1×20ml)、水、鹽水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得到0.983g(定量)粗品。經(jīng)制備的HPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(50∶50))純化分離到非對映體化合物35A(移動快的非對映體；136mg；32％；純度98.5％)和化合物34B(移動慢的非對映體；163mg；47％；純度99.2％)?；衔?5B1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.77(d,2H)；7.42(m,4H)；7.34(m,9H)；6.81(m,2H)；6.70(dd,1H)；5.20(s,2H)；5.11(s,2H)；4.59(m,1H)；4.44(m,2H)；4.00(m,1H)；3.83(m,1H)；3.66(m,2H)；3.23(m,1H)；2.28(m,1H)；2.01(m,2H)；1.81(m,3H)。
(ⅱ)(S)-或(R)-4-羥基-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
將Pd/C(10％)加入(R)-或(S)-4-芐氧基-3-甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(157mg；0.24mmol；得自以上步驟(ⅰ)的化合物35B)的乙醇(10ml)和鹽酸水溶液(1M；0.5ml)的溶液中，并在室溫、常壓下氫化該混合物4.5小時。通過Hyflo過濾生成的混合物，濃縮該溶液，加入水并凍干該溶液獲得104mg(90.9％；純度97.4％)白色粉末的標(biāo)題化合物。LC-MS m/z441(M+1)+1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.70(d,2H)；7.57(d,2H)；6.90(s,1 H)；6.75(s,2H)；4.51(s,2H)；4.44(dd,1H)；4.07(m,1H)；3.95(dd,2H)；3.83(s,3H)；3.67(dd,2H)；3.40(m,1H)；3.30(m,1H)；2.11(m,1H)；1.97(m,2H)；1.82(m,1H)13C-NMR(100MHz；D2O)羰基和脒碳δ174.8；173.9；173.1；166.3；(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)實施例36(S)-或(R)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc(ⅰ)(R)-和(S)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3,5-二氯苯基)丙酸(0.35g,1.5mmol；得自以上實施例AB)在DMF(10ml)中的溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.75g；1.65mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)、TBTU(0.53g；1.65mmol)和DIPEA(0.78g；6mmol)，并于室溫下攪拌該溶液過夜。蒸發(fā)DMF，加入水，用乙酸乙酯(3×30ml)提取該水溶液。用碳酸氫鈉水溶液(2×20ml)、水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得到0.32g(36％)粗品。經(jīng)硅膠柱(110g)快速層析，用100％乙酸乙酯至乙酸乙酯∶乙醇(100∶5)梯度洗脫分離非對映體化合物36A(移動快的非對映體；153mg；34％；純度89.2％)和化合物36B(移動慢的非對映體；166mg；37％；純度85.2％)。化合物36B1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.73(d,2H)；7.43(d,2H)；7.34(m,2H)；7.26(m,2H)；7.19(d,2H)；5.20(s,2H)；4.56(dd,1H)；4.40(m,2H)；3.91(m,2H)；3.72(m,2H)；3.60(b,1H)；3.27(q,1H)；2.22(m,1H)；2.03(m,1H)；1.94(m,1H)；1.89(m,1H)；1.75(b,1H)。
(ⅱ)(S)-或(R)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc根據(jù)以上實施例23(ⅱ)所述方法，由(R)-或(S)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(130mg；0.22mmol；來自以上步驟(ⅰ)的化合物26B)、苯甲醚(35mg；0.33mmol)和三氟甲磺酸(0.16g；1.1mmol)制備得到15mg(13％)標(biāo)題化合物。LC-MS m/z463,465(M+1)+1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.64(d,2H)；7.56(d,1H)；7.38(t,1H)；7.34(t,1H)；7.21(d,2H)；7.07(s,1H)；4.39(d,1H)；4.30(dd,1H)；4.00(m,3H)；3.68(m,2H)；3.50(m,1H)；3.26(m,1H)；2.10(m,1H)；2.08(m,1H)；1.81(m,3H)；1.73(m,1H)實施例37(S)-或(R)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc(ⅰ)(R)和(S)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(2,3-二甲氧基苯基)丙酸(0.21g；0.93mmol；得自以上實施例AC)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.46g；1.02mmol；根據(jù)國際專利申請WO 97/02284所述方法制備)、TBTU(0.32g；1.0mmol)和DIPEA(0.48g；3.7mmol)，于室溫下攪拌該溶液過夜。蒸發(fā)DMF，加入碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯(4×50ml)提取該水溶液。用碳酸氫鈉水溶液(2×20ml)、水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得到0.34g(62％)粗品。經(jīng)制備的HPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)(40∶60))分離到非對映體化合物37A(移動快的非對映體；70mg；24％)和化合物37B(移動慢的非對映體；57mg；21％)?；衔?7BLC-MS m/z590(M+1)+
(ⅱ)(S)-或(R)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc將Pd/C(5％；44mg)加入(R)或(S)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(57mg；0.097mmol；得自以上步驟(ⅰ)的化合物37B)的乙醇(10ml)和HOAc(15mg)的溶液中，并在室溫、常壓下氫化該混合物4.5小時。通過Hyflo過濾生成的混合物，濃縮該溶液，加入水并凍干該溶液，得到44mg(88％；純度97.2％)白色粉末的標(biāo)題化合物。LC-MS m/z455(M+1)+1H-NMR(300MHz；D2O):δ7.78(d,2H)；7.50(d,2H)；7.20(m,2H)；6.90(d,1H)；4.50(s,2H)；4.40(m,4H)；4.08(m,2H)；3.90(s,3H)；3.87(s,3H)；3.80(m,6H)；3.32(m,1H)；2.18(m,1H)；1.92(m,3H)實施例38(S)-或(R)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl(ⅰ)(R)-和(S)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(3-甲氧基-5-氯代苯基)丙酸(0.112g；0.49mmol；得自以上實施例AD)的DMF(4ml)溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.242g；0.53mmol；根據(jù)國際專利申請WO97/02284所述方法制備)、TBTU(0.171g；0.53mmol)和DIPEA(0.33ml；2.12mmol)，于室溫下攪拌該溶液5天。蒸發(fā)DMF，加入水，將該溶液的pH調(diào)至9(碳酸氫鈉水溶液)，并用乙酸乙酯(3×30ml)提取該水溶液。用碳酸氫鈉水溶液(2×20ml)、水和鹽水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得到0.242g(83％)粗品。經(jīng)制備的HPLC(乙腈∶10％NH4OAc(45∶55))分離到非對映體化合物38A，即移動快的非對映(50mg；33％)和化合物38B，即移動慢的非對映體(44.8mg；31％)。化合物38BLC-MS m/z 592,594(M+1)+(ⅱ)(S)-或(R)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HCl
根據(jù)以上實施例23(ⅱ)所述方法，由(R)-或(S)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(來自以上步驟(ⅰ)的化合物38B；44mg；0.074mmol)、TFA(1.53ml；20mmol)和苯硫基甲烷(0.44ml；3.7mmol)制備得到18mg(49％)標(biāo)題化合物，純度93.5％。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ9.24(b,1H)；8.73(b,1H)；7.77(d,2H)；7.57(d,2H)；6.96(t,1H)；6.86(m,2H)；4.51(s,2H)；4.45(dd,1H)；4.04(m,2H)；3.86(m,1H)；3.71(m,1H)；3.40(m,1H)；2.15(m,1H)；1.99(m,2H)；1.87(m,1H)實施例39(S)-或(R)-2-甲基-5-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc(ⅰ)(R)-和(S)-2-甲基-5-甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(2-甲基-5-甲氧基苯基)丙酸(0.168g,0.8mmol；來自以上實施例AE)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃。按所述順序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.399g；0.88mmol；根據(jù)國際專利申請WO97/02284所述方法制備)、TBTU(0.283g；0.88mmol)和DIPEA(0.414g；3.2mmol)，并于室溫下攪拌該溶液3天。蒸發(fā)DMF，加入水，用乙酸乙酯(3×30ml)提取該水溶液。干燥(硫酸鈉)合并的有機相并蒸發(fā)。經(jīng)制備的HPLC(乙腈∶NH4OAc(10％)；(40∶60))純化分離到非對映體化合物39A(移動快的非對映體；147mg；64％；純度92.8％)和化合物39B(移動慢的非對映體；147mg；64％；純度99.1％)?；衔?9BLC-MS m/z573(M+1)+1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.76(d,2H)；7.50(t,1H)；7.42(d,2H)；7.33(t,1H)；7.27(m,3H)；7.08(d,1H)；6.71(m,2H)；5.19(s,1H)；4.58(d,1H)；4.40(m,2H)；4.03(dd,1H)；3.97(t,1H)；3.70(s,3H)；3.58(m,2H)；2.95(q,2H)；2.28(s,2H)；2.22(m,1H)；1.99(m,1H)；1.78(m,2H)。
(ⅱ)(S)-或(R)-2-甲基-5-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc將Pd/C(5％；70mg)加入化合物39B(131mgl；0.23mmol)的乙醇(10ml)和HOAc(13ml)的溶液中，并在室溫、常壓下氫化該混合物3小時。通過Hyflo過濾生成的混合物，濃縮該溶液，加入水并凍干該溶液獲得96mg(84％；純度95.9％)標(biāo)題化合物。1H-NMR(400MHz；D2O):δ7.78(d,2H)；7.54(d,2H)；6.68(m,2H)；6.75(d,1H)；4.72(d,1H)；4.54(s,1H)；4.46(dd,2H)；4.25(m,4.05(t,1H)；3.77(s,3H)；3.70(dd,1H)；3.64(m,1H)；3.10(m,1H)；2.36(s,2H)；2.15(m,1H)；1.95(m,4H)；1.76(m,1H)13C-NMR(100MHz；D2O)羰基和脒碳176.0；174.3；167.6；LC-MS m/z439(M+1)+實施例40(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Aze-Pab(z)將(R,S)-2-甲基-2-苯基-3-甲氧基丙酸(0.40g,2.1mmol；來自以上實施例AF)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃。按所述順序加入H-Pro-Pab(Z)×2HCl(0.93g；2.1mmol；根據(jù)國際專利申請WO97/02284所述方法制備)、TBTU(0.64g；2.1mmol)和DIPEA(0.90g；7mmol)，并于室溫下攪拌該溶液2天。蒸發(fā)DMF，加入碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯(3×30ml)提取該水溶液。用碳酸氫鈉水溶液(2×20ml)、水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并蒸發(fā)，得到粗品，經(jīng)硅膠柱快速層析，用二氯甲烷∶THF∶甲醇(90∶10∶2)洗脫得到0.50g(44％(最后三步總收率))。1H-NMR(500MHz；CDCl3):δ7.83(m,2H)；7.41(d,2H)；7.30(m,9H)；7.11(d,1H)；5.21(s,2H)；4.77(m,1H)；4.70(m,1H)；4.53(m,1H)；4.43(m,1H)；4.12(d,1H)；3.90(d,1H)；3.62(t,1H)；3.23(s,3H)；2.90(m,2H)；2.18(m,1H)；2.03(m,1H)；1.8-1.4(m,9H)13C-NMR(100MHz；CDCl3)羰基和脒碳δ174.6；173.1；172.2；172.0；167.9；164.4(非對映體和/或旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。
實施例41(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Aze-Pab×HCl將Pd/C(10％；20mg)加入(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Aze-Pab(Z)(190mg；0.34mmol；得自上述實施例40)的乙醇(10ml)和濃鹽酸水溶液(10滴)的溶液中，并在室溫、常壓下氫化該混合物2小時。通過Hyflo過濾生成的混合物，濃縮該溶液，加入水并凍干該溶液獲得160mg(100％；純度77％)標(biāo)題化合物。LC-MS m/z423(M+1)+1H-NMR(500MHz；D2O):δ7.80(m,2H)；7.55(m,2H)；7.35(m,5H)；4.50(m,3H)；3.88(d,0.5H)；3.78(m,1H)；3.76(d,0.5H)；3.21(d,3H)；3.15(m,1H)；2.78(m,1H)；2.18(m,1H)；1.70(m,3H)；1.63(d,3H)13C-NMR(100MHz；D2O)羰基和脒碳176.4；176.3；176.1；175.9；167.1(非對映體和/或旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)實施例42(S)-或(R)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-HOAc(ⅰ)(R)-和(S)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)將(R,S)-3-羥基-2-(2-氯代-3-甲基苯基)丙酸(0.3g,1.4mmol；來自以上實施例AG)的DMF(10ml)溶液冷卻至0℃。按順序加入H-Aze-Pab(Z)×2HCl(0.739g；1.68mmol；來自以上實施例A)、TBTU(0.495g；1.54mmol)和DIPEA(0.94g；5.6mmol)，并于室溫下攪拌該溶液5天。濃縮反應(yīng)混合物，并使之溶于水(400ml)中，其后用碳酸氫鈉水溶液將pH調(diào)至9。用乙酸乙酯(3×100ml)提取生成的混合物。用碳酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)并濃縮。粗品(0.636g)經(jīng)RPLC(乙腈∶10％NH4OAc(40∶60))純化，其后分離出非對映體化合物42A(即移動快的非對映體；127mg；32％；純度95％)和化合物42B(即移動慢的非對映體；131mg；33％；純度85％)?；衔?2BLC-MS m/z563,564(M+1)+1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ8.23(t,1H)；7.80(d,2H)；7.44(d,2H)；7.33(m,4H)；7.18(m,3H)；5.21(s,2H)；4.86(dd,1H)；4.50(m,2H)；4.28(dd,1H)；4.13(m,1H)；3.96(dd,1H)；3.75(dd,1H)；3.62(q,1H)；2.60(m,1H)；2.41(s,3H)；2.31(m,1H)(ⅱ)(S)-或(R)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-HOAc根據(jù)以上實施例23(ⅱ)所述方法，由(R)-或(S)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)(來自以上步驟(ⅰ)的化合物42B；129mg；0.23mmol)、TFA(4.7ml；62mmol)和苯硫基甲烷(1.35ml；11.5mmol)制備得到45mg(40.2％)標(biāo)題化合物(純度90.4％)。LC-MS m/z429,431(M+1)+1H-NMR(400MHz；CDCl3):δ7.77(d,2H)；7.55(d,2H)；7.26(m,2H)；7.19(d,1H)；4.75(dd,1H)；4.55(s,2H)；4.34(m,2H)；4.04(dd,1H)；3.88(m,1H)；3.70(dd,1H)；2.48(m,1H)；2.40(s,3H)；2.27(m,1H)；1.89(s,3H)13C NMR(100MHz；CD3OD)羰基和脒碳174.0；172.9；167.9實施例43(S)-或(R)-2,3-(亞甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab×HOAc根據(jù)以上實施例29所述方法，由(R,S)-3-羥基-2-(2,3-亞甲二氧基苯基)-丙酸(0.26g)作為原料，并通過(2,3-亞甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)制備，從后者分離(RPLC)出兩種非對映體化合物43A(即移動快的非對映體；0.27g；40％)和化合物43B(即移動慢的非對映體；0.18g；26％)。使(R)-或(S)-(2,3-亞甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)(化合物43B；130mg,81mg(72％))去保護制備標(biāo)題化合物。LC-MS m/z439(M+1)+實施例44
用以上試驗A測試實施例1-7、11、12、16-39、41、42和43的化合物(均為式Ⅰ化合物)，發(fā)現(xiàn)所有的化合物顯示IC50TT值小于0.3μM。
實施例45用以上試驗A測試實施例8、9、10、13、14、15和40的化合物(均為式Ⅰa化合物)，發(fā)現(xiàn)所有的化合物顯示出IC50TT值小于1μM。
實施例46用以上試驗C測試實施例8、9、10、13、14、15和40的化合物(均為式Ⅰa化合物)，發(fā)現(xiàn)所有的化合物在大鼠中均顯示出如相應(yīng)的式Ⅰ活性抑制劑口服/或胃腸外的生物利用度。
縮略語AIBN= 偶氮雙異丁腈aq=水溶液Aze= 氮雜-2-環(huán)丁烷羧酸Boc= 叔-丁氧基羰基Bn=芐基Bu=丁基Ch=環(huán)己基DBU= 1,8-二碳雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯DCC= 二環(huán)己基碳二亞胺DIPEA= 二異丙基乙胺DMAP= N,N-二甲基氨基吡啶DMF= 二甲基甲酰胺DMSO= 二甲基亞砜EDC= 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽Et=乙基EtOH= 乙醇h= 小時HBTU= [N,N,N’,N’-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)uronium六氟磷酸鹽]HCl= 鹽酸H-Hig= 1-脒基-3-氨基乙基吡咯烷H-Hig(Z)= 3-氨基乙基-1-(N-芐氧基羰基脒基)吡咯烷HOAc= 乙酸H-Pab= 1-脒基-4-氨基甲基苯H-Pab(Z)= 4-氨基甲基-1-(N-芐氧基羰基脒基)苯H-Pig= 1-脒基-3-氨基甲基哌啶H-Pig(Z)= 3-氨基甲基-1-(N-芐氧基羰基脒基)哌啶HPLC= 高效液體色譜Me=甲基MeOH= 甲醇MsCl= 甲磺酰氯NBS= N-溴代琥珀酰亞胺Ph=苯基Pr=丙基i-PrOH=異丙醇RPLC= 制備的反相高效液相色譜TBDMS= 叔-丁基二甲基硅烷基TBTU= [N,N,N’,N’-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)uronium四氟硼酸鹽TEA= 三乙胺THF= 四氫呋喃THP= 四氫吡喃基TMS= 三甲基硅烷基p-TsOH=對-甲苯磺酸WSCI=水溶性碳二亞胺Z= 芐氧基羰基前綴n、s、i和t有其通常的意義正、異、仲和叔。氨基酸的立體化學(xué)不包括(by default)(S)型，除非另外指明。
權(quán)利要求
1．式Ⅰ化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，
其中R1代表H、C(O)R11、SiR12R13R14或C1-6烷基，后一基團任選由一個或多個選自O(shè)R15或(CH2)qR16的取代基取代或作為末端基團；R12、R13和R14獨立代表H、苯基或C1-6烷基；R16代表C1-4烷基、苯基、OH、C(O)OR17或C(O)N(H)R18；R18代表H、C1-4烷基或CH2C(O)OR19；R15和R17獨立代表H、C1-6烷基或C7-9烷基苯基；R11和R19獨立代表H或C1-4烷基；和q代表0、1或2；R2和R3獨立代表H、C1-4烷基、環(huán)己基或苯基；Rx代表式Ⅱa、Ⅱb或Ⅱc的結(jié)構(gòu)片段，
其中k、l和m獨立代表0、1、2、3或4；R4和R5獨立代表H、Si(Me)3、1-或2-萘基、多環(huán)烴基、CHR41R42或C1-4烷基(其中后一基團任選被一個或多個氟原子取代)，或C3-8環(huán)烷基苯基、亞甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氫苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氫香豆素基(其中后十二個基團任選由一個或多個C1-4烷基(其中后一基團任選由一個或多個鹵素取代基取代)、C1-4烷氧基、鹵代、羥基、氰基、硝基、SO2NH2、C(O)OH或N(H)R43取代)；R41和R42獨立代表環(huán)己基或苯基；R6和R7獨立代表H、C1-4烷基、C3-8環(huán)烷基、苯基(其中后一個基團任選由一個或多個C1-4烷基(其中后一基團任選由一個或多個鹵素取代基取代)、C1-4烷氧基、鹵代、羥基、氰基、硝基、SO2NH2、C(O)OH或N(H)R44取代)或與它們所連接的碳原子一起形成C3-8環(huán)烷基環(huán)；R43和R44獨立代表H或C(O)R45；及R45代表H、C1-4烷基或C1-4烷氧基；Y代表CH2、(CH2)2、CH=CH、(CH2)3、CH2CH=CH或CH=CHCH2、其中后三個基團任選由C1-4烷基、亞甲基、氧代或羥基取代；n代表0、1、2、3或4；B代表式Ⅳa、Ⅳb或Ⅳc的結(jié)構(gòu)片段
其中X1和X2獨立代表單鍵或CH2。
2．權(quán)利要求1定義的式Ⅰ化合物，其中n代表2,B代表式Ⅳb的結(jié)構(gòu)片段，X1和X2不能都代表CH2。
3．權(quán)利要求1或權(quán)利要求2定義的式Ⅰ化合物，其中R1任選代表取代的C1-6烷基或H。
4．權(quán)利要求3定義的式Ⅰ化合物，其中R1代表H。
5．上述權(quán)利要求中任一項定義的式Ⅰ化合物，其中Rx代表式Ⅱa的結(jié)構(gòu)片段。
6．上述權(quán)利要求中任一項定義的式Ⅰ化合物，其中Y代表CH2或(CH2)2。
7．權(quán)利要求1或權(quán)利要求3-6中任一項定義的式Ⅰ化合物，其中n代表1。
8．權(quán)利要求1或權(quán)利要求3-7中任一項定義的式Ⅰ化合物，其中B代表式Ⅳa的結(jié)構(gòu)片段。
9．上述權(quán)利要求中任一項定義的式Ⅰ化合物，其中結(jié)構(gòu)片段
S-構(gòu)型。
10．權(quán)利要求1化合物為下列化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽(R)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R,S)-3,4-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-2-萘基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig；(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pig；(R,S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig；(R)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-2,5-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-(甲氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3-(甲氨基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-PhCH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3-羥基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-((3-氯代-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-((3-氯代-5-甲基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3-氟代苯基-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab；(R)-3-氟代苯基-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab；(S)-3-氯代苯基-CH(CH2OH)C(O)-Pro-Pab；(R)-3-氯代苯基-CH(CH2OH)C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3,5-雙(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3,5-雙(三氟甲基)苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3-甲氧基-5-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-(2,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-(3,5-二甲氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3,4-(亞甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3-(2-萘基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-(2-萘基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-3,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R,S)-2氯代-5-氨基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-2,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-2,5-二甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-甲氧基-4-羥基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3-甲氧基-4-羥基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3,5-二氯苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-2,3-二甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-3-甲氧基-5-氯代苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R)-2-甲基-5-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-2-甲基-5-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Pro-Pab(R)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(S)-2-氯代-3-甲基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab；(R)-2,3-(亞甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；(S)-2,3-(亞甲二氧基苯基)-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab；或(R,S)-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Aze-Pab。
11．權(quán)利要求1定義的式Ⅰ化合物，條件是當(dāng)Rx代表式Ⅱa的結(jié)構(gòu)片段時，則R4和/或R5(適當(dāng)時)不代表由鹵素-取代的C1-6烷基取代的苯基。
12．權(quán)利要求1定義的式Ⅰ化合物，條件是當(dāng)Rx代表式Ⅱa的結(jié)構(gòu)片段時，則R4和/或R5(適當(dāng)時)不代表亞甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氫苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氫香豆素基。
13．權(quán)利要求1定義的式Ⅰ化合物，條件是當(dāng)Rx代表式Ⅱc的結(jié)構(gòu)片段時，則R6和/或R7(適當(dāng)時)代表未取代的苯基。
14．權(quán)利要求1定義的式Ⅰ化合物，條件是當(dāng)Rx代表式Ⅱa的結(jié)構(gòu)片段時，則R4和/或R5(適當(dāng)時)代表由鹵素-取代的C1-6烷基取代的苯基。
15．權(quán)利要求1定義的式Ⅰ化合物，條件是當(dāng)Rx代表式Ⅱa的結(jié)構(gòu)片段時，則R4和/或R5(適當(dāng)時)代表亞甲二氧基苯基、苯并二噁烷基、苯并呋喃基、二氫苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、香豆冉酮基、香豆素基或二氫香豆素基。
16．權(quán)利要求1定義的式Ⅰ化合物，條件是當(dāng)Rx代表式Ⅱc的結(jié)構(gòu)片段時，則R6和/或R7(適當(dāng)時)代表取代的苯基。
17．式Ⅰa化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，
其中B1代表式Ⅳd、Ⅳe或Ⅳf的結(jié)構(gòu)片段
其中D1和D2獨立代表H、OH、ORa、OC(O)Rb、OC(O)ORc、C(O)ORd、C(O)Re而Ra、Rb、Rc、Rd和Re獨立代表苯基、芐基、(CH2)2OC(O)CH3或C1-6烷基，后一基團任選由氧間斷；及R1、R2、R3、Rx、Y、n、X1和X2如權(quán)利要求定義，條件是D1和D2不能二者都代表H。
18．權(quán)利要求17定義的式Ⅰa化合物，其中D1代表H,D2代表OH、OCH3、C(O)ORb或C(O)ORd且Rb和Rd如權(quán)利要求17所定義。
19．權(quán)利要求17的化合物為下列化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽(R,S)-Ph-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH；(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-OH；(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)-C(O)-Aze-Pab-OH；(S)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab(Z)；(R)-3-甲氧基苯基-CH(CH2OH)CO-Pro-Pab(Z)；(S)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH；(R)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OH；(S)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et；(R)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)Et；(S)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH3；(R)-3-甲氧基-CH(CH2OH)-C(O)-Pro-Pab-OC(O)CH3；(R,S)-3-Ph-C(Me)(CH2OMe)-C(O)-Pro-Pab(Z)；或(R,S)-甲基苯基-CH(CH2OAc)-C(O)-Pro-Pab-OMe。
20．包括權(quán)利要求1-19中任一項所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽并與藥學(xué)上可接受的輔助劑、稀釋劑或載體混合的藥用制劑。
21．用作藥物的權(quán)利要求1-19中任一項所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
22．權(quán)利要求1-19中任一項所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于治療需要抑制凝血酶的病癥。
23．權(quán)利要求1-19中任一項所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于治療血栓形成。
24．權(quán)利要求1-19中任一項所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用作抗凝劑。
25．權(quán)利要求1-19中任一項所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分在生產(chǎn)治療凝血酶需要抑制的病癥的藥物中的用途。
26．權(quán)利要求25所要求的用途，其中所述病癥是血栓形成。
27．權(quán)利要求1-19中任一項所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分在生產(chǎn)抗凝劑中的用途。
28．治療凝血酶需要抑制的病癥的方法，該方法包括對患有或易感此種病癥的人群給予治療有效量的權(quán)利要求1-19中任一項所定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
29．權(quán)利要求28的方法，其中所述病癥是血栓形成。
30．權(quán)利要求28的方法，其中所述病癥是血液和組織的高凝固性。
31．權(quán)利要求17、18或19中任一項所定義的化合物作為藥物前體的用途。
32．制備式Ⅰ化合物的方法，它包括(a)使式Ⅴ化合物，
其中R1、R2、R3和Rx如權(quán)利要求1所定義，與式Ⅵ化合物偶合，
其中Y、n和B如權(quán)利要求1所定義；或(b)使式Ⅶ化合物，
其中R1、R2、R3、Rx和Y如權(quán)利要求1所定義，與式Ⅷ化合物偶合，H2N-(CH2)n-BⅧ其中n和B如權(quán)利要求1所定義。
全文摘要
提供了式(Ⅰ)化合物,其中R
文檔編號C07D401/04GK1226895SQ9719686
公開日1999年8月25日 申請日期1997年6月5日 優(yōu)先權(quán)日1996年6月7日
發(fā)明者D·古斯塔夫松, J·E·奈斯特勒姆 申請人:阿斯特拉公司