專利名稱：：修飾和嵌合的超抗原及其用途的制作方法本申請已通過瑞士專利中請NO9601245-5和美國專利申請08/695,692獲得優(yōu)先權(quán)，它們是分別于1996年3月29日和1996年8月12日提交的，在此均被引入作為參考。發(fā)明領域本發(fā)明是關于具有功能活性的修飾超抗原，它是野生型超抗原(SAI)，其中一個或幾個氨基酸殘基被取代，但仍然保留超抗原功能。當一個或幾個這種取代殘基(或者是其一個保守的氨基酸殘基)出現(xiàn)在另一個野生型超抗原(SAII)相應的位置時，此修飾的超抗原被稱為嵌合體(有時稱為雜種分子)。嵌合超抗原因此將包含有來自至少二個不同野生型超抗原的部分序列/區(qū)段。所謂“相應的”意指，相互取代的殘基，部分序列和區(qū)段在超抗原I和II中具有功能上相同的位置，這樣，取代將導致形成能象超抗原一樣行使功能的嵌合體形式。專門術(shù)語移植(grafted/grafting/graft)可用于連接超抗原II完整序列的各部分，此超抗原II已具有被取代的超抗原I的相應部分，即使是僅有單獨一個氨基酸被取代了。修飾/嵌合超抗原也包括以其它方式修飾的功能性超抗原，例如，在除了與本發(fā)明有關的其它各區(qū)域內(nèi)通過氨基酸取代進行修飾，結(jié)合于一個尋靶部分，當該部分是多肽/蛋白質(zhì)時，也包括構(gòu)成融合形式。實施修飾的程序也可以改變。見下文。超抗原根據(jù)最初的定義(大約1988-1993)，超抗原是細菌或病毒蛋白質(zhì)，它能夠與II類MHC(MHCClassII)抗原結(jié)合而無需經(jīng)過細胞內(nèi)預先處理，并能夠通過與T細胞受體(TCR)的β-鏈可變區(qū)(Vβ)結(jié)合而被激活T細胞。這種結(jié)合將導致T細胞相當大部分/亞群的Vβ系有限制的激活，并且導致IJ類MHC表達細胞的溶解(超抗原依賴性細胞介導的細胞溶解＝SDCC)。葡萄球菌腸毒素(SEA，SEB，SEC1，SEC2，SED，SEE和SEH)是符合上述定義的被熟知的野生型超抗原。另一些實例有中毒性休克癥毒素1(TSST-1，也來源于葡萄球菌)，剝落毒素(Exft)，鏈球菌熱原外毒素A，B，和C(SPEA，B和C)，小鼠乳房腫瘤病毒蛋白(MMTV)，鏈球菌M蛋白，產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素(CPET)，關節(jié)炎支原體超抗原等。有關超抗原及其特性的綜述參見文獻Kotjin等1993。在九十年初曾發(fā)現(xiàn)，在超抗原與能夠結(jié)合于細胞表面結(jié)構(gòu)的尋靶部分結(jié)合的情況下，激活和隨后的細胞溶解，可能以不依賴II類MHC的方式進行(DohlstenetalWO9201470和AbrahmsenetalWO9601650)。當靶細胞(攜帶有適合尋靶部分的靶標結(jié)構(gòu))和效應細胞(T細胞)與此結(jié)合物共同溫育時，靶細胞將被溶解(超抗原抗體依賴性細胞介導的細胞溶解＝SADCC)，完全不需要II類MHC的表達。根據(jù)當前有關超抗原的概念以及在本發(fā)明中的應用，如果不另行說明，它應包括能夠結(jié)合于細胞表面結(jié)構(gòu)(靶標結(jié)構(gòu))和一條以上多形TCR鏈，特別是Vβ鏈的任何化合物(優(yōu)選的是多肽結(jié)構(gòu))，并因此而能夠激活涉及此結(jié)合過程的，表達特異性TCR鏈的T細胞亞群。這些T細胞將因此而變成對攜帶有表面結(jié)構(gòu)(靶標結(jié)構(gòu)，靶細胞)的細胞具有細胞毒性。通常被激活的T細胞亞群占T細胞個體總量的約1-20％。技術(shù)背景-利用突變和嵌合的超抗原進行的結(jié)構(gòu)功能研究。對包含有點突變形式的嵌合超抗原，以前曾有論述(KappleretalWO9314364，Kappleretal1992，Grossmanetal1991，Hufnagleetal1991，Hartwigetal1993，F(xiàn)raseretal1993，Mollicketal1993，Irwinetal1992，Hudsonetal1993，和Blancoetal1990)。Mollicketal和Hudsonetal根據(jù)對嵌合體的研究顯示，SEA和SEE的Vβ特異性定位在存在于羧基末端區(qū)域的某些氨基酸序列中(即氨基酸殘基200，206和207)。除了主要取決于此區(qū)域的Vβ特異性之外，Molliketal還能夠證明，為了完全重組與SEA同樣活性的SEE，并且此SEA包含有針對Vβ8的SEE移植體，需要一個來自SEE的，含有N-末端70個氨基酸殘基的片段。此片段含有類似SEE的II類MHCα鏈結(jié)合位點部分，并且，包含有來自SEE這部分的嵌合SEA/SEE分子，以類似于SEE的方式抑制了SEA對II類MHCDRl的結(jié)合。最近，已有入描述了一種SEE-SEA嵌合體，它包含有，與對TCRVβ結(jié)合有關的區(qū)域交換(Lamphaeretal，J.Immunol.156(March15，1996)2178-2185)。在ABRF’96BiomolecularTechmiquts，HolidayInnGoldenGateway，SanFrantisco，CalifbniaMarch30-April2，1996(Biorketal，M45)中，已對SEE超抗原Fab抗體融蛋白作了論述，其中與T細胞相互作用有關的SEE功能區(qū)，已被用相應的非同源SEA功能區(qū)代替了。技術(shù)背景-超抗原的治療用途已建議將非結(jié)合的超抗原用于治療，推測它可能是通過免疫系統(tǒng)的普遍激活而具有治療作用(KallandetalWO9104053，TermanetalWO9110680andWO9324136，Newalletal1991)還有人建議使用結(jié)合于尋靶部分的修飾超抗原(DohlstenetalWO9201470，AbrahmsenetalWO9601650，二者均被引入作為參考)。這樣有可能通過Vβ獲得T細胞激活的廣泛治療用途。迄今研究的結(jié)合物具有減弱的II類MHC親和性，并因此又導致降低了通常與天然超抗原有關的嚴重的全身性毒性。Termanetal(WO9110680，WO9324136)曾暗示建議以修飾的超抗原和超抗原片段用于癌癥治療。Kappleretal(WO9314634)曾建議使用經(jīng)突變喪失了其對Vβ或?qū)I類MHC結(jié)合親和性的非結(jié)合超抗原(SEB)(從疫苗的角度，并設法中和超抗原的毒性作用)。Abrahrmsenetal(WO9601650)建議，以對II類MHC抗原具有經(jīng)修飾的結(jié)合親和性的結(jié)合超抗原用于癌癥治療，優(yōu)選的是降低了結(jié)合親和性的超抗原。這類修飾包括單一突變，以及構(gòu)造不同超抗原間的嵌合體。本發(fā)明將解決的作為目標的問題正常情況下的人群血清含有高滴度的超抗原抗體。例如對于葡萄球菌超抗原，相對滴度是TSST-1＞SEB＞SEC1＞SE3＞SEC2＞SEA＞SED＞SEE。這些相對滴定顯示在非經(jīng)腸道給予SE3情況下的免疫原性問題，以及與中和抗體有關的問題。若僅僅根據(jù)這些問題，SEE應該是優(yōu)選的葡萄球菌超抗原。但是，根據(jù)以融合蛋白進行的工作，我們已發(fā)現(xiàn)，對于T細胞II類MHC非依賴性細胞毒性，超抗原-抗體依賴性細胞的細胞毒性(SADCC)，SEE結(jié)合物的能力很差?？筍E的滴度還表明，將一個“高滴度”的超抗原修飾成更像“低滴度”的超抗原可能更有利。本發(fā)明的目的第一個目的是，在降低其免疫原性，以及與中和抗原體反應的方面，對以前已知的超抗原進行改進。第二個目的是，提供當用作藥物時具有較小副作用的超抗原。第三個目的是提供經(jīng)改進的超抗原，在治療患如下疾病的哺乳動物中可用作活性成分癌癥，自身免疫性疾病，寄生蟲感染，病毒感染，或其它與細胞有關的疾病，在這種細胞的表面能表達II類MHC抗原和/或結(jié)構(gòu)，此抗原和結(jié)構(gòu)對于相應的疾病是特異性的，并且能與摻入超抗原的尋靶部分相結(jié)合。導致本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)SEA和SEE的序列同源性分析(圖2)揭示，不相同的氨基酸殘基都集中在8個不同的區(qū)域。在此8個區(qū)域之外，構(gòu)成序列的34％，這二種SE3的同質(zhì)性為97％，并且保守氨基酸的取代造成剩余的差異。其中4個區(qū)域結(jié)構(gòu)上與二個II類MHC結(jié)合位點靠近(BAA37-50，D71-78，E136-149，和G189-195)，并且似乎不與TCR相互作用。另外的4個區(qū)域(AAA20-27，C60-62，F(xiàn)161-176和H200-207)位于分子的邊緣，在推測的TCR結(jié)合位點的附近，假定存在于二個亞結(jié)構(gòu)域之間的凹槽中。通過對各個區(qū)域進行移植(替換不同的氨基酸殘基)，現(xiàn)在我們發(fā)現(xiàn)，SEA結(jié)合物誘發(fā)細胞毒性反應的特性，以及在不存在II類MHC時促進強增殖反應的特性，是存在于SEA的TCR結(jié)合功能區(qū)中的一個區(qū)域內(nèi)。此區(qū)域(A)可以轉(zhuǎn)移給SEE，并且，雖然它對超抗原的Vβ特異性僅有有限的作用，但當II類MHC不存在時對活性有很大的影響(圖6，表2)。所有的區(qū)域(A，C，F(xiàn)和H)似乎都直接或間接地參與同TCR的相互作用，對鼠T細胞雜交瘤的不同刺激作用證明了這點(表2)由于相似的作用模式因此可以想象到，這些TCRVβ結(jié)合特性的類似結(jié)構(gòu)差異，對于與SEA和SEE相似的超抗原也是顯而易見的。同樣的情況也可能適用于以不同方式組織連接結(jié)構(gòu)的其它類型超抗原，我們的發(fā)現(xiàn)已經(jīng)使我們能夠設計構(gòu)建，作為治療藥劑可能具有極大價值的嵌合超抗原。本發(fā)明本發(fā)明的第一方面是一種用于治療哺乳動物疾病的方法，是通過給予治療有效(免疫激活)劑量經(jīng)修飾的，優(yōu)選的是嵌合的超抗原來激活其免疫系統(tǒng)。哺乳動物優(yōu)選的是人。所述的疾病幾乎都與在其表面能表達結(jié)合于超抗原的靶結(jié)構(gòu)的細胞有關。在絕大多數(shù)情況下，這種靶結(jié)構(gòu)是不同于正常與超抗原結(jié)合的TCR抗原表位。結(jié)合于靶結(jié)構(gòu)之后，則也有可能與TCR結(jié)合并激活T細胞。其例證性實例是II類MHC抗原和可能在與病程有關的細胞上被表達的其它細胞表面結(jié)構(gòu)。包括任何類型癌癥的惡性腫瘤(如癌，肉瘤，黑素瘤，淋巴瘤等)，病毒感染，寄生蟲感染和自身免疫性疾病是例證性疾病。需治療的癌可能位于結(jié)腸，乳房，子宮頸，腎，胃，小腸，十二指腸，前列腺，睪丸，皮膚，肺，肝，胰腺，骨骼等部位，還包括在不同部位轉(zhuǎn)移的癌，本發(fā)明的活性劑還可以用于所謂的多藥物抗性型癌。表達靶結(jié)構(gòu)的細胞還可能是以某種方式控制或調(diào)節(jié)所治療疾病發(fā)展的細胞。本方法的特征性特點是可以采用一種修飾的超抗原，其中在某一區(qū)域(區(qū)域I)中一個或多個氨基酸殘基被各自的氨基酸取代，該區(qū)域在野生型超抗原(SAI)中提供了通過多型性TCR鏈，特別是TCRVβ與T細胞亞群結(jié)合，用于取代的氨基酸殘基仍然保有對如此修飾的超抗原的超抗原活性。目前優(yōu)選的實施方案是一種嵌合的超抗原，其中在第一個野生型超抗原(SAI)的一個區(qū)域(區(qū)域I)內(nèi)，一個或幾個氨基酸殘基已被第二個野生型超抗原(SAII)的一個相應的區(qū)域(區(qū)域II)內(nèi)相應的一個或幾個氨基酸殘基取代了。區(qū)域I和II的差別在于其氨基酸序列不同。如此選擇超抗原I和II，是為了使區(qū)域I和II能夠相互取代而不喪失超抗原功能。就此而言必須考慮到如下事實雖然當同決定TCR結(jié)合和T細胞激活的其它區(qū)域一起交換時，結(jié)果可形成具有功能活性的超抗原，但是某種區(qū)域I單獨可能不能同另一野生型超抗原的相應區(qū)域交換。這些有關的區(qū)域通常含有20以下氨基酸殘基，特別是對于類似于SEA的超抗原。取代的氨基酸殘基因此不同于被取代的殘基，并且想象還可能包括保守性取代和其它的氨基酸取代，這將導致功能活性修飾的超抗原能與TCRVβ結(jié)合，并激活T細胞亞群。這意味著，此創(chuàng)造性修飾的超抗原，在其最廣義上包括在上述區(qū)域內(nèi)一個或幾個氨基酸已被功能上取代的任何修飾超抗原。名詞“保守性取代”指的是，以一個化學相似的殘基取代一個氨基酸殘基，例如，以一個疏水性殘基取代另一個不同的疏水性殘基，以一個帶電荷的殘基取代另一個不同的，但帶同樣電荷的殘基等。作為超抗原I，II等，葡萄球菌腸毒素，特別是與鋅配價的，目前是優(yōu)選的，即SEA，SEE，SED，以及可能還有SEH。所涉及的區(qū)域可能具有上述二種功能(見標題“導致本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)”和實驗部分)1.本身對超抗原的活性有很大的影響，而對TCR的特異性，特別是對Vβ的特異性僅有局限的作用。對于SEA-型超抗原，指的是區(qū)域A(氨基酸位置20-27)。2.對于與多形性TCR鏈，如Vβ鏈結(jié)合的特異性，有深刻的影響。對于SEA-型超抗原，這指的是區(qū)域C(氨基酸位置60-62)，區(qū)域F(氨基酸位置110-126，以及區(qū)域H(氨基酸位置200-207)。對于類似于SEA的超抗原，這意味著具有一個或幾個取代(用于從SEA移植到SEE；SEE/A嵌合體)區(qū)域AR20G，N21T，S24G，R27K區(qū)域CG60D，P62S區(qū)域FH111R，H114Q，G115Y，F(xiàn)117Y，G118N，S124V，G126D區(qū)域HD200G，P206S，D207N目前，對每個區(qū)域?qū)崿F(xiàn)所有取代是優(yōu)選的。對于其它超抗原，想象在相應的位置/區(qū)域之間也可能進行類似的取代。典型地可以從一個第一超抗原，如SEE和SED開始，然后，以第二超抗原(如SEA)的相應區(qū)域取代其一個或幾個特有的Vβ結(jié)合區(qū)，對第一和第二超抗原優(yōu)選的選擇是，使在正常人血清中對第一超抗原的抗體滴度，比對第二超抗原的低。對于SEA和SEE嵌合體，最佳模型相當于嵌合體SEE/A-A，SEE/A-AH，和SEA/E-BDEG，并對SEE/A-A有絕對的偏愛。參見實驗部分和插圖。隨同區(qū)域A，C，F(xiàn)和H一起，其它部分的氨基酸殘基也可以被交換。一種類似交換是降低結(jié)合II類MHC的能力，因為這種特性與在超抗原治療中(普遍性免疫激活，伴隨著腫瘤壞死因子(TNF)和γ-干擾素的全身性釋放)遇到的共同副作用有關。對于超抗原如SEA，SED和SEE，對與鋅離子配價能力重要的位置優(yōu)選地可能被改變，即位置225和227，例如在SEA中，突變的H225A以及特別是D227A，對減少毒性副作用將有陽性影響(見AbrahmsemeralWO9601650和Frasereral1993)。只要不破壞超抗原的功能，對整個分子還可以進行其它的取代作用，例如保守性取代，特別是在與結(jié)合于II類MHC和TCR有關的區(qū)域之外。為變更對II類MHC的結(jié)合而改變DNA序列或在DNA水平上發(fā)生任何其它的改變，可以在用于對TCR結(jié)合的區(qū)域改變之前或改變之后進行。這些其它類型的修飾，在區(qū)域I中氨基酸取代發(fā)生之前，可同樣方便地被引入。因此從本發(fā)明的角度，根據(jù)權(quán)利要求，在著手修飾時使用的“野生型超抗原”概念，主要指的是區(qū)域I中的野生型氨基酸序列，并在其外面可能已經(jīng)存在原有的修飾。根據(jù)本專業(yè)熟知的技術(shù)，可實施構(gòu)建嵌合和突變的超抗原。從對一個超抗原特異性的區(qū)域轉(zhuǎn)換成另一個超抗原的相應區(qū)域，可在基因水平上進行，并且可通過取代完整的序列來實現(xiàn)，或者通過那些在所希望的氨基酸序列中，終止序列所需要的特異性堿基的點突變來實現(xiàn)。參見例如實驗部分以及前面引用的以往的技術(shù)文獻。名詞“突變”包括，通過對編碼被變異蛋白質(zhì)的DNA序列進行修飾而取代，插入或刪除一個或幾個氨基酸殘基。本發(fā)明方法中使用的超抗原，可以是一個如上所述修飾的非結(jié)合超抗原，即一個缺乏特異性結(jié)合的尋靶部分，但具有借助TCR與II類MHC抗原和T細胞亞群結(jié)合的顯著能力的修飾超抗原。更優(yōu)選地，此修飾的超抗原，最好是嵌合超抗原，是與一個尋靶部分結(jié)合的。在后一種情況下，優(yōu)選的變異體是尋靶部分和修飾超抗原之間形成的融合體。此結(jié)合物本身就是新穎的，并且是本發(fā)明的獨到之處。本發(fā)明的結(jié)合物的結(jié)構(gòu)類似于先前已知的抗體一起抗原結(jié)合物(DohlstenetalWO9201470，AbrahmsenetalWO9601650，此二專利文獻在此均被引入作為參考)，即該結(jié)合物通常符合如下結(jié)構(gòu)式T-B-SA(m)其中T代表尋靶部分，SA(m)代表如前所規(guī)定的修飾超抗原，優(yōu)選的是嵌合超抗原，而B是將T和SA(m)連接在一起的共價橋。原則上T可能包含另外的超抗原部分(SA(m))，并且SA(m)也可能包含另外的尋靶部分，雖然在優(yōu)選的結(jié)合物中僅存在如上面規(guī)定的一個尋靶部分和一個修飾的超抗原部分。原則上T可以是能夠結(jié)合于細胞表面結(jié)構(gòu)，優(yōu)選的是疾病特異性結(jié)構(gòu)的任何結(jié)構(gòu)。T與它相對的結(jié)構(gòu)通常不同于(a)SA(m)與之結(jié)合的VP鏈表位，也不同于(b)超抗原與之結(jié)合的II類MHC抗原表位。尋靶部分主要選自白介素(如白介素-2)，激素，抗體，包括抗體的抗原結(jié)合片段，生長因子等。參見如Woodworth，preclinicalandclinicaldevelopmentofcytokinetoxinspresentedattheconference“Molecularapprochestocancerimmunotherapy”，Ashville，NorthCarolina，November7-11，1993。目前，優(yōu)選的是，T是一個抗體(全長度的抗體)，F(xiàn)ab，F(xiàn)(ab)2，F(xiàn)V，單鏈抗體和其它任何結(jié)合抗原的抗體片段)，特別突出的是針對所謂的C242抗原表位的(LindhohnetalWO9301303)，或更優(yōu)選地是針對肺癌特異性5T4抗體所結(jié)合的抗原表位的抗體活性片段如Fab(SternetalWO8907947)。但是，這并不排除其它癌特異性抗體也可能同樣地發(fā)揮良好的功能，或者甚至更好。名詞“抗體”包括單克隆以及多克隆變異體，優(yōu)選的是單克隆制備物。T還可能針對不同程度健康細胞上的，調(diào)節(jié)或控制疾病發(fā)展的獨特結(jié)構(gòu)。橋B可以如以前所述進行選擇(DohlstemetalWO9201470，和AbrahmsenmetalWO9601650)，即B優(yōu)選地將是親水性的，并呈現(xiàn)有一個或幾個選自酰胺，硫醚，二硫化物等的結(jié)構(gòu)。最卓越的橋是那些通過重組技術(shù)得到的，即在基因水平發(fā)生的偶聯(lián)作用。在這種情況下，含有親水性氨基酸殘基如谷氨酰胺(Gln)，絲氨酸(Ser)，甘氨酸(Gly)，谷氨酸(Gln)，脯氨酸(pro)，組氨酸(His)和精氨酸(Arg)的寡肽橋是優(yōu)選的。特別優(yōu)選的Bs是由1-10個氨基酸殘基組成的肽橋，并對3-7個氨基酸殘基的有絕對的偏愛。一個典型的橋是三肽GlyGlyPro，見SEQIDNo1。制備本發(fā)明新穎的結(jié)合物，原則上可按照二個主要的途徑來進行1.重組技術(shù)，2.如上述所規(guī)定的，將尋靶部分T化學地連接于經(jīng)修飾的，優(yōu)選地是嵌合的超抗原(SA(m))。這些方法對普通的專業(yè)工作者是熟知的，并且包括許多變異形式。要使修飾的非結(jié)合超抗原與尋靶部分T化學地相連接，通常是利用這些化合物中許多位置存在的功能基因(例如伯氨基或羧基)。由此可見，最后產(chǎn)物將包含連接位置不同的偶聯(lián)分子混合物，以及雜型-和同型-結(jié)合物。至于重組結(jié)合物(融合蛋白質(zhì))，其連接位置將是一致的。或者是將嵌合超抗原的氨基末端連接于尋靶部分的羧基末端，或者是相反。對于抗體，如完整的抗體和抗原結(jié)合片段(Fab，F(xiàn)V，單鏈抗體等)，輕鏈或者重鏈都可以用于融合，目前優(yōu)選的是重組結(jié)合物，最好的是Fab片段，并且是嵌合超抗原的氨基末端連接于抗體重鏈的第一恒定功能區(qū)(CH1)，不排除對輕鏈或?qū)H和VL功能區(qū)的類似連接，這樣也可能得到相當好的結(jié)果。用于大規(guī)模重組生產(chǎn)本發(fā)明修飾超抗原(融合形式以及非結(jié)合形式)的主要宿主細胞是大腸桿菌(E.Coli)。在原則上，這種宿主細胞可提供二種途徑細胞內(nèi)產(chǎn)生和分泌。后一種變異體是優(yōu)選的，因為它便于從外周胞質(zhì)和從培養(yǎng)基中純化得到正確折疊的蛋白質(zhì)。以上并不排除，也可能在其它宿主細胞，例如真核細胞如酵母或哺乳動物細胞產(chǎn)生活性結(jié)合物。藥劑組合物，劑量和給藥途徑本發(fā)明的第三方面是藥劑組合物，它含有如上述規(guī)定的，本發(fā)明修飾的，優(yōu)選的是嵌合的超抗原(結(jié)合的和非結(jié)合的形式)。除了含有的本發(fā)明超抗原之外，設計的組合物都是本領域所熟知的。例如，該組合物可能是以冷凍干燥的顆粒物形式，無菌的或無菌生產(chǎn)的溶液形式，片劑，安瓿等形式?？赡艽嬖谫x形劑如水(優(yōu)選的是以如PBS緩沖至生理可接受的pH值)或者其它惰性的固體或液體物質(zhì)。一般地說，該組合物可通過將此結(jié)合物與一種或幾種賦形劑混合，溶于其中，與之結(jié)合，或者與之組合來制備，賦形劑可以是水溶性的或非水溶性的，液態(tài)的或非液態(tài)的，必要時可同時加入適當?shù)奶砑觿┖妥魟?。絕對必要的是，賦形劑和制備條件對修飾超抗原的活性，必須沒有損害性影響。正常情況下，本發(fā)明的超抗原將按預先調(diào)整配的劑量出售和給藥，每份含有效量的結(jié)合物，據(jù)目前提供的結(jié)果，認為是在10ng-50mg的范圍內(nèi)，例如在10ng-1mg，或10μg-50mg的范圍內(nèi)。精確的劑量將隨病情而改變，并取決于病人的體重，年令，給藥途徑，疾病類型，尋靶部分、超抗原，連接方式(-B-)等。給藥途徑將是本領域內(nèi)通常使用的方法，也就是，使靶細胞殺滅有效劑量的，或者有治療活性劑量的按本發(fā)明修飾的超抗原，與靶細胞接觸。對于上面指出的適應癥，這主要指的是非腸道給藥，例如，對哺乳動物如人注射或輸注給藥(皮下，靜脈內(nèi)，動脈內(nèi)，肌內(nèi)，腹膜內(nèi))。所設計的修飾超抗原，優(yōu)選地是嵌合超抗原，可以被局部或全身給藥。用名詞“靶細胞殺滅有效劑量”表示，此劑量對于激活和指導T細胞破壞靶細胞是有效的。目前優(yōu)選的給藥途徑是根據(jù)DohlstemetalWO9201470和AbrahmsenetalWO9601650設計用于超抗原結(jié)合物的途徑相同，這指的是每天進行1-5小時靜脈內(nèi)輸注(優(yōu)選的是4小時)，并合并給予退燒藥劑(樸熱息痛)。如此給藥重復幾天，如4天，密切注意引發(fā)針對此結(jié)合物抗體的危險性。本發(fā)明的超抗原可以作為主要的治療給藥，或者按優(yōu)選的模式輔助治療，與手術(shù)或其它藥物相配合。從治療的角度我們發(fā)現(xiàn)，其有純的非共價連接抗體重鏈和輕鏈的抗體制備物，比含有其中的鏈是借助于胱氨酸鍵連接在一起的抗體制備物更優(yōu)越。因此，本發(fā)明的第四方面是一種抗體制備物治療用途，特別是一種Fab制備物，其中將各鏈連接在一起的半胱氨酸殘基，已被不允許二硫化物形成的氨基酸如絲氨酸取代了。這方面對于本發(fā)明最優(yōu)選的特異性抗體目前有C242mab(Lindholmetal，WO9301302)以及如在上述引證的文獻中所規(guī)定的5T4mab。在這些優(yōu)選的變異形式中，一條抗體鏈是與超抗原融合，如前所述此超抗原能夠以Vβ特異性方式激活T細胞亞群。如前面所述或者如DohlstenetalWO9201470或AbrahnseretalWO9601650所述，該超抗原可以是一個野生型的，一個嵌合體或者一個點突變型式(及其組合)。本發(fā)明的這方面還包括上述的藥劑組合物，但是它含有本發(fā)明對此規(guī)定的抗體制備物，而不是嵌合超抗原。當前優(yōu)選的是應用5T4抗體的Fab片段(Sternetal，WO8907947)，并與帶有突變D227A的SEE/A-A嵌合體組合。使該優(yōu)選的Fab二條鏈中提供鏈間二硫鍵(半胱氨酸對絲氨酸)的位置發(fā)生突變。當用E.Coli生產(chǎn)時，為了增加抗體/融合蛋白的產(chǎn)率，也可以在Vkappe鏈中的某些位置進行突變。參見實驗部分。材料和方法構(gòu)造SEA/SEE嵌合基因應用基于聚合酶鏈反應(PCR)的方法，序列折疊延伸法進行SEA/SEE嵌合體的構(gòu)建(Hortonetal)。據(jù)廠商的推薦，以U/Tme(Perkin-Elmer)施行PCR反應。將PCR產(chǎn)生的片段克隆進行PCR原本中(Stratagene，USA)，并進行測序，以證實序列的正確性。然后將嵌合的超抗原基因亞克隆進入表達載體PKP9889(Abrahmsenetal1995)，將SE結(jié)構(gòu)融合至鼠單克隆抗體C215的Fab片段重鏈部分。SEA和SEE重組融合蛋白是作為全長度多肽被產(chǎn)生的，與信號肽斷裂的共有序列相一致(VonHeijne1986)。蛋白質(zhì)表達和純化以大腸桿菌K12的UL635菌株用于表達Fab-SE融合蛋白和SEA突變體(如以前所述，Abrahmisenetal1995)。如以前所述(Abrahmsenetal1995)，通過在5000g下離心收獲Fab-SE融合蛋白，上清液組分在蛋白GSepharose(pharmaciaBiotechAB，uppsala，Sweden)上進行純化。以SDS-PAGE分析表明，親和性純化的Fab-SE變異體的純度＞90％。細胞將人β-細胞的淋巴瘤細胞-Raji株和人結(jié)腸癌細胞Colo205培養(yǎng)在完全性R-培養(yǎng)基中(含有如下添加成分的RPMI-164010％胎牛血清(GibcoBRL，LifeTechnologies，Ltd，PaisleyScotland)。1mM谷氨酰胺(HycloneEurope，LtdCramlington)，5×10-3Mβ-巰基乙醇(ICNBiomedicelsINC.CostaMesaCA)，0.1MNaHCO3(SeromedBiochrome)，1×10-2MHepes緩沖液(HycloneEurope.Ltd.Cramlington)，0.1mg/ml慶大霉素(BiologicalIndustriesKibbutgBeitHaemekIsrael)，1×10-3M丙酮酸鈉(HycloneEurope，LtdCramlington)。將以人C215和CD80分子轉(zhuǎn)染的CHO細胞培養(yǎng)在添加有0.5mg/mlGeniticin(G418)(GibcoBRL，LifeTechnologies，Ltd.PaislyScotland)的完全性R-培養(yǎng)基中。從來自正常供血者的肝素化血中制備外周血單核細胞(PBM)。如以前所述(Dohlstemetal1991)通過在Ficoll-paque上進行密度離心將該細胞分離出。用MiniMACS柱，按照廠商說明書通過陽性選擇將人T淋巴細胞純化成均質(zhì)性細胞，此柱結(jié)合了以人CD4和CD8(Milteny；BiotecGmbH，Germany)特異性單克隆抗體包被的磁珠。按以前所述(Dohlstenetal1994)的方法產(chǎn)生人SEA和SEE反應性細胞株。借助TCRVβ22特異性單克隆抗體(Immnnotech，F(xiàn)rance)包被的Dyna磁珠(DynalA.S.Norway)，通過陽性選擇法，從初次激發(fā)的SEA反應性細胞株產(chǎn)生人TCRVβ22表達細胞株。如借助于流式細胞儀所測定的，富集的細胞中含有大于95％的/TCRVβ22+T細胞(數(shù)據(jù)未顯示出)。鼠T細胞雜交瘤(I1B3，2B4和11.40)按以前所述的方法產(chǎn)生(Fleuryetal1991)。細胞毒性測定如以前所述，在作用4小時或6小時之后，按標準的51Cr釋放試驗測定細胞毒性(Dohlstemetal1991)。用人Colo205細胞或Raji細胞作靶細胞。以30∶1的效應細胞對靶細胞比率加入效應細胞，SEA或SEE反應性人T細胞株或者TCRVβ細胞株。將51Cr-標記的靶細胞用于細胞毒試驗中，在V形底微量滴定板孔中每孔加入2500個細胞/200ml完全培養(yǎng)基。按所標明的加入各種濃度的C215Fab-SEA/E雜交體，g-計數(shù)器測定51Cr的釋放。按如下公式計算比細胞毒性的百分率100×〔(實驗釋放c.p.m.-背景釋放c.p.m)/(總釋放c.p.m-背景釋放c.p.m.)〕。淋巴細胞增殖試驗在加有不同量C215Fab-SEA/E雜交體的U-形96孔微量滴定板的200ml完全培養(yǎng)基中，將105人應答T細胞在37℃與104個經(jīng)照射的(20,000Rad)刺激物細胞共同培育72小時，以便測定其增殖作用。通過〔3H〕-胸苷的摻入來測算增殖作用(如Dohlstenetal1988所述)。對Fab-SAg誘發(fā)IL-2產(chǎn)生的分析在有2×104Raji刺激物細胞存在下，在含有C215Fab-SEA/E嵌合蛋白質(zhì)的200ml完全性R培養(yǎng)基中，對鼠T-T雜交瘤細胞(105個)進行培育。48小時之后，收集上清液，并對鼠IL-2的存在進行分析。簡而言之，就是用大鼠抗小鼠細胞因子單克隆抗體(mAb)作捕捉抗體來分析細胞因子的含量。純化的大鼠抗小鼠IL-2，生物素標記的大鼠抗小鼠IL-2，rIL-2均購自pharMingen(SanDiego，CA)。以生物素標記的抗細胞因子mAb，VectastainABC試劑盒(VectorLaboratories，CA)和過氧化物酶底物試劑盒(Bio-RadLaboratories，CA)用于測定細胞因子。用ImmunoReaderNJ2000(InterMedRoskilde，Denmark)在405或450nm測定光吸收度。5T4Fab的突變構(gòu)建在E.Coli內(nèi)表達5T4Fab-SEA的載體編碼FV的5T4部分是從5T4雜交瘤克隆產(chǎn)生，從DrPeterstern得到(Sternetal.WO8907947)。更詳細地說是從mRNA制得CDNA，整個可變區(qū)和部分信號序列區(qū)，以及重鏈的第一恒定區(qū)和輕鏈的恒定區(qū)均借助PCR進行擴增。寡核苷酸5′-CAATTTTCTTGTCCACCTTGGTGC-3′(EQIDNO2)和5′-ACTAGTCGACATGGATGGAGCTITATCATIyTCTT-3′(SEQIDNO3)用于重鏈，產(chǎn)生一個553bp的片段，而寡核苷酸5′-ACTAGTCGACATGGGCITCAAGATGGAGTCACAKWYYCwGG-3′(SEQIDNO4)和5′-GCGCCGTCTAGAATTAACACTCATTCCTGTTGAA-3′(SEQIDNO5)用于輕鏈，產(chǎn)生一個724bp的片段。對每條鏈的三個不同的克隆進行測序，發(fā)現(xiàn)是相同的。在第二次PCR步驟中可得到適合于插入表達載體(ref)的DNA片段。為了裝備Fab表達質(zhì)柱，可將5T4的可變區(qū)，融合于編碼來自鼠IgG1/K抗體C242mAb恒定區(qū)的序列(Limdhlometal，WO9301302)。將編碼來自葡萄球菌腸毒素A(SEA)超抗原的區(qū)域融合在重鏈之后。結(jié)果中給出了5T4抗體VKappa鏈抗體構(gòu)架的確證序列。5T4的誘變在編碼核抗體構(gòu)架的區(qū)域內(nèi)導入了7個氨基酸取代。這些取代是phe10Ser，thr45Lys，Ile63Ser，Tyr67Ser，phe73Leu，Thr77Ser和Leu78Val。類似地，在二條鍵中與功能區(qū)二硫鍵有關的Cys殘基被絲氨酸殘基取代了，導致在重鏈中的Cy458Ser突變，以及在輕鏈中的Cys214Ser突變。這些突變是借助基于PCR的誘變而導入的，并通過測序?qū)Φ玫降腄NA序列進行確證。5T4Fab-SEA的發(fā)酵罐表達及純化表達質(zhì)粒包含卡那霉素抗性基因和一個可以用IPTG誘導的lacUV5-啟動子。用蛋白GSepherose和SP-Sepharose(phermhciaBiotec，Uppsala，Sweden)從澄清的培養(yǎng)基中純化出融合蛋白質(zhì)，并用SephadexG-25將其配制在檸檬酸緩沖液中，方法基本如以前所述。用SDS-PAGE，逆相HPLC和質(zhì)譜法所作的品質(zhì)鑒定表明，經(jīng)純化的融合蛋白質(zhì)，其純度大于95％，并且具有正確的分子量。結(jié)果超抗原的修飾作用用SEA-和SEE反應性人T細胞作效應細胞株，對C215Fab-SEA和C215Fab-SEE抗II類MHC+Raji細胞的超抗原依賴性細胞的細胞毒性(SDCC)進行分析。盡管在SEA和SEE之間存在Vβ特異性的差別，但是這二種超抗原都顯示出對二種效應細胞株有類似程度的細胞毒性誘導作用(圖1)。為了區(qū)別在TCR識別中II類MHC顯示的作用和SEA和SEE的直接作用，對它們進行了抗C215表達Colo205細胞的超抗原-抗體依賴性的細胞毒性(SADCC)檢測。在此測定中，F(xiàn)ab部分使融合蛋白指向C215-表達靶細胞，并導致將融合的SE分子引向不取決于II類MHC分子的細胞毒性T細胞(CTL)(Dohlstenetal1994)。盡管在SEA和SEE之間，氨基酸序列存在大于80％的相同性，但是，SEA和SEE的TCR相互作用，在這種類型的檢測中顯示出有質(zhì)的差異。C215Fab-SEA融合蛋白保持了它使SEA和SEE反應性CTL針對II類MHC-靶細胞的能力(圖1)，而C215Fab-SEE，不論是用SEA或SEE反應性CTL，都不能誘發(fā)對II-類MHC靶細胞的細胞毒性(圖1)。以前曾有其它研究者報導，SEA和SEE間的Vβ特異性差別，主要與前面環(huán)中和不規(guī)則的a5螺旋中的3個氨基酸差異有關(Irwinetal1992，Hudsonetal1993，F(xiàn)raseretal1993，和Mollicketal1993)。在此研究中報導的關于TCR相互作用的差異與不同的TCRVβ特異性無關，因為C215Fab-SEA誘發(fā)II類MHC非依賴性細胞毒性的能力并不局限于SEA反應性CTL，當用SEE反應性CTL時也能看到。SEA和SEE的序列相同性分析指示，不相同的氨基酸殘基都集中在8個不同的區(qū)域。在此8個區(qū)域之外，構(gòu)成序列34％的區(qū)域中，此2個SES的相同性為97％，并帶有可解釋仍然存在差異原因的保守的氨基酸取代；4個不相同的區(qū)域結(jié)構(gòu)上緊靠2個II類MHC結(jié)合位點(B，D，E和G)，并且很可能不與TCR相互作用(圖3)。另外的4個區(qū)域(AAA20-27，C60-62，F(xiàn)161-176，和H200-207)位于分子的邊緣(圖3)，在TCR結(jié)合位點的附近，位于2個亞功能區(qū)之間的凹陷之中(Kapperetal1992)。為了探查SEA和SEE之間在TCR識別中的本質(zhì)差別，我們通過移植構(gòu)建了雜交蛋白質(zhì)，即從SEA將這些區(qū)域移植至SEE，作為如雙區(qū)域雜交體(SEE/A-AH)的單區(qū)域嵌合體(SEE/A-A，SEE/A-C，SEE/A-F，SEE/A-H)，并且將SEE上位于II類MHC結(jié)合位點附近的區(qū)域移植至SEA(SEA-/E-BDEG)(圖4)。所有嵌合的SES都作為C215Fab融合蛋白被表達，這些融合蛋白能夠在II類MHC不存在時察覺它們活性的差異。在與C215Fab部分的融合過程中，SEA/E雜種蛋白質(zhì)在Fab定向的細胞毒性測定中顯示出差別用SEA-反應性人T細胞作效應細胞，對C215Fab-SEE/A雜交蛋白質(zhì)對抗II類MHC+Raji細胞的SDCC活性進行了分析。所有C215Fab-SE雜種分子及C215Fab-SEAwt和C215Fab-SEEwt的EC50值均在容許的誤差范圍之內(nèi)(如10-12-10-11M，圖5)。唯一可測定的差異是對于C215Fab-SEE/A-AH雜種分子，其直線的平穩(wěn)態(tài)稍有降低，表明反應性T細胞喪失了。另一方面，在SADCC實驗中，當細胞毒性是針對II類MHC-/C215+Colo205細胞株時，只有C215Fab-SEE/A-A，C215Fab-SEE/A-AH和C215Fab-SEA/E-BDEG象C215Fab-SEAwt一樣，能誘發(fā)類似的細胞毒性(圖5)。在較高的濃度(EC50＞10-10M)，C215Fab-SEE/A-F雜種分子能誘發(fā)C215定向的細胞毒性。雖然C215Fab-SEE/A-H雜種分子以象C215Fab-SEAwt一樣的類似的半數(shù)最高濃度(例如EC5010-13M)能誘發(fā)C215定向的細胞毒性，但是，細胞毒性的絕對水平大大降低了(圖5)。這種差異可能是由于C215Fab-SEE/A-H局限的Vβ特異性的結(jié)果，而對于反應性T細胞II群，誘發(fā)C215定向的細胞毒性的能力占優(yōu)勢。為對這種想法作進一步探查，我們制備了人Vβ22寡克隆CTL細胞株。就人Vβ22是SEA而非SEE特異性Vβ類而言，人Vβ22與鼠Vβ3是類似的。光學已證明(Mollicketal1993)，SEAVβ和SEEVβ的大部作用，主要歸咨于在SEA和SEE之間區(qū)域H中(AA200-207)3個氨基酸的差異。在針對II類MHC+Raji靶細胞的SDCC檢測中，用Vβ22寡克隆的CTL細胞株作效應細胞，只有含有SEA-H區(qū)的雜種分子能夠引起類似C215Fab-SEAwt的反應(例如C215Fab-SEE/A-H，C215Fab-SEE/-AH和C215Fab-SEA/E-BDEG，圖6)。能夠以整個CTL細胞群作效應細胞而誘發(fā)充分SDCC反應的C215Fab-SEE/A-A雜種分子，在此檢測中，其半數(shù)最高濃度和平穩(wěn)態(tài)濃度都大大降低了(圖6)。當Vβ22CTL的細胞毒性是針對II類MHC/C215+Colo205細胞株時，只有包含SEA-A和SEA-H(例如C215Fab-SEE/A-AH和C215Fab-SEA/E-BDEG)區(qū)的雜種分子，能夠誘發(fā)類似于C215Fab-SEAwt的細胞毒性反應(圖6)。只含有SEA區(qū)域A(C215Fab-SEE/A-A)的雜種分子，誘發(fā)具有類似EC50值的較低水平細胞毒性反應。這表明，在以整個T細胞群作效應細胞的SADCC檢測中，用C215Fab-SEE/A-H雜種分子所看到的保存活性，并不是在局限的T細胞群中雜種分子誘發(fā)反應的結(jié)果。對此發(fā)現(xiàn)一個更可能的解釋是，C215Fab-SE雜種蛋白質(zhì)誘發(fā)SADCC反應的能力主要是歸咨于SEA-A區(qū)，SEA-H和SEA-F區(qū)只有次要的作用。沒有證據(jù)表明這種性質(zhì)僅局限于在組合的SEA-SEE反應性T細胞群中的任何T細胞亞群，因為C215FabSEA能夠誘發(fā)與用SEE反應性CTLs同樣的反應，并且C215Fab-SEE/A-A能夠完全重現(xiàn)以C215Fab-SEA所看到的反應。在與C215Fab部分的融合過程中，SEA/E雜種蛋白質(zhì)在Fab定向的增殖測定中顯示出差別以前曾有研究顯示，通過對II類MHC-/C215+/CD80+細胞株提供C215Fab-SEA，可誘導純化的靜止人T細胞進行增殖(Landoetal1993)。但是，C215Fab-SEA誘導II類MHC非依賴性增殖的能力，用C215Fab-SEE時明顯地降低了(表1)。為了查明是否這種質(zhì)的差異表明對SEA區(qū)域A有同樣的限制，如通過SADCC所看到的，我們對C215Fab-SE雜種分子的促增殖能力進行了檢測，是通過CHODR1+/CD80+或者CHO-C215+/CD80+轉(zhuǎn)染的細胞株將此雜種分子提供給純化的靜止人T細胞。當把Fab-SE結(jié)合物提供給CHO-DR1+/CD80+，在不同的SE蛋白質(zhì)之間未發(fā)現(xiàn)任何差異(數(shù)據(jù)未顯示)。但是，在SEE中SEA的區(qū)域A，C，和H移植物，可增強其增殖活性，達到與C215Fab-SEE相類似。通過移植SEA的區(qū)域A和H得到了最佳的結(jié)果，這表明區(qū)域A有重要的作用，如對于II類MHC非依賴性細胞毒性所看到的。通過應用陰性選擇法，有可能Fab-SEA和Fab-SEE間的差異變得更顯著。SE-雜種分子的Vβ特異性為了進一步探明C215Fab-SEA/SEE雜種分子融蛋白質(zhì)是否與某種Vβ特異性有關，我們使用了表達Vβ1，Vβ3和Vβ11的SEA反應性鼠T細胞雜交瘤。從得到的數(shù)據(jù)表明，被探查的所有區(qū)域均直接或間接地影響其與TCR的相互作用。通過在C215Fab-SEE中移植SEA的區(qū)域C和F，使針對SEA和SEE交叉反應性Vβ1，雜交瘤I1B3的活性遭到破壞。與C215Fab-SEE相比較，相同的嵌合體對Vβ3和Vβ11雜交瘤(2.B4和11.40)的活性似乎沒有，或僅有微小的作用。通過在C215Fab-SEE中移植SEA的區(qū)域A，可使針對Vβ3(2.B4)的活性，與C215Fab-SEE相比較至少提高至100倍。以相同的細胞株，通過在C215Fab-SEE中移植SEA的區(qū)域H，觀察到更顯著的作用。在以前的研究中也已注意到這種借助SEA的區(qū)域H影響Vβ3特異性的顯著作用(Mollicketal1993)。但是，同樣的嵌合體(C215Fab-SEA/A-H)似乎使其針對SEA/SEE交叉反應性Vβ1和Vβ11雜交瘤(I1B3和11.40)的活性降低至1/10?？傊?，SEA與TCR的相互作用似乎涉及到整個SEA-SEE，可變區(qū)A，C，F(xiàn)和H。血清反應性用來自全世界不同區(qū)域的混合血清樣品及單個人的血清樣品，研究了人血清樣品對嵌合SEs的血清反應性。通過在SEE中移植SEA的區(qū)域A區(qū)和H，我們獲得了中等程度的血清反應性(圖8)。還觀察到對抗嵌合體C215Fab-SEE/A的類似的血清反應性。但是，SEE中單獨移植物SEA區(qū)域A(C215Fab-SEAE/A-A)僅給出類似C215Fab-SEE的血清反應性，表明SEA的區(qū)域H區(qū)對保持的抗C215Fab-SEE/A-AH血清反應性起決定性作用。這表明，SEA的區(qū)域H是SEA中占優(yōu)勢的抗原表位部分。從來自世界其它地區(qū)(日本和美國)的混合血清樣品，以及來自瑞典的14個單獨血清樣品的血清反應性部確證了這種相同的普遍模式(數(shù)據(jù)未顯示)。結(jié)果融合蛋白質(zhì)Fab部分的突變5T4FabSEA-構(gòu)建物的表達發(fā)現(xiàn)在發(fā)酵罐中E.Coli的5T4Fab-SEA產(chǎn)量水平顯著低于我們實驗室以前研究的其它Fab超抗原結(jié)構(gòu)的產(chǎn)量水平。為了增加產(chǎn)量水平，因而引入了兩種類型的修飾作用。首先是在輕鏈的構(gòu)架區(qū)引入了7個不同的點突變。它們是phe10Ser，Thr45Lys，Ile63Ser，Tyr67Ser，phe73Leu，Thr77Ser和Leu78Val。第二是，構(gòu)成連接重鏈和輕鏈間二硫鍵的半胱氨酸殘基被絲氨基殘基取代了。后一種修飾作用導致產(chǎn)量水平增加至3倍，而7個點突變導致另外12倍的增加。除了顯著地增加產(chǎn)量水平外，刪除二硫鍵還能產(chǎn)生更均一的產(chǎn)品，因為這些反應性硫醇基與其它含硫醇試劑反應的可能性被排除了。檢查了修飾的5T4分子對其抗原的親和性以及在SADCC中的生物活性。在這些試驗中，未能檢測出在突變形式和野生型形式之間有任何差異。在其它幾個單克隆抗體Fab片段的重鏈和輕鏈中也實施了Cys/Ser突變。產(chǎn)物變成均質(zhì)性，并且充分保留了抗原結(jié)合能力。5T4Vkappa鏈抗體構(gòu)架區(qū)的序列DAVMTQTPTFLLVSAGDRVTITCKASOSVSNDVAWYQQKPGQSPTLLISY50TSSRYAGVPDRFIGSGYGTDFTFTISTLQAEDLAVYFCOODYNSPPTFGG100GTKLEIK(SEQIDNO6)底下劃線的序列是CDRs。粗體字位置發(fā)生了突變phe/oSer，Thr45Lys，Ile63Ser，Ile63Thr，Tyr67Ser，phe73Leu，Thr77Ser，Leu78Val表1</tables>表圖1以人SEE和SEACTL測定的II類MHC依賴性和非依賴性細胞毒性。以C215Fab-SEA(■)和C215Fab-SEE(▲)作效應分子的II類MHC依賴性細胞的細胞毒性(A和B)，以及C215依賴性細胞的細胞毒性(C和D)。用SEE-反應性人T細胞株(A和C)及SEA-反應性人T細胞株(B和D)，按標準的4小時51Cr釋放測定法分析細胞毒性。靶細胞株是II類MHC+/C215-Raji細胞(A和B)和II類MHC-/C215+Colo205細胞(C和D)。數(shù)據(jù)來源于代表2次(A和C)至5次(B和D)獨立試驗的單獨測定結(jié)果。圖2.SEA和SEE的同質(zhì)性排列SEA/SEE可變區(qū)緊靠TCR結(jié)合位點(A，C，F(xiàn)和H)，并且可變區(qū)緊靠二個II類MHC結(jié)合位點。圖3.SEA的卡通模型SEA晶體(Schadetal1995)的分子繪制模型(Molscriptmodel)(Kraulis.1991)。SEA/SEE可變區(qū)緊靠TCR結(jié)合位點(A，C，F(xiàn)和H)，并且可變區(qū)緊靠二個II類MHC結(jié)合位點。鋅離子以園球表示。圖4.嵌合SE分子的示意圖表示對SEA序列的伸展作了壓縮，SEA/SEE可變區(qū)以A，B，C，D，E.F，G和H表示。圖5.以人SEA反應性CTL測定的II類MHC依賴性和非依賴性細胞毒性C215Fab-SEE/A-A(◆)，C215Fab-SEE/A-C(□)，C215Fab-SEE/A-F(◇)，C215Fab-SEE/A-H(●)，C215Fab-SEE/A-AH(△)，和C215Fab-SEA/E-BDEG(○)的(A)II類MHC依賴性細胞的細胞毒性和(B)C215依賴性細胞的細胞毒性。用SEA-反應性人T細胞株，按標準的4小時51Cr釋放測定法分析細胞毒性。靶細胞株是II類MHC+/C215-Raji細胞(A)和II類MHC-/C215+Colo205細胞(B)。數(shù)據(jù)來源于代表5次獨立試驗的單獨測定結(jié)果。圖6.用人Vb22+CTL測定的II類MHC依賴性和非依賴性細胞毒性以C215Fab-SEA(■)，C215Fab-SEE(◆)，C215Fab-SEE/A-A(◆)，C215Fab-SEE/A-C(□)，C215FabSEE/A-F(◇)，C215Fab-SEE/A-H(●)，C215Fab-SEE/A-AH(△)，和C215Fab-SEA/E-BDEG(○)作效應分子的(A)II類MHC依賴性細胞的細胞毒性及(B)C215依賴性細胞的細胞毒性。用Vb22選擇的SEA反應性人T細胞株，按標準的4小時51CT釋放測定法分析細胞毒性。靶細胞株是II類MHC+/C215-Raji細胞(A)和II類MHC-/C215+Colo205細胞(B)。數(shù)據(jù)來源于代表2次獨立試驗的單獨測定結(jié)果。圖7.II類MHC依賴性和非依賴性細胞增殖作用。(在優(yōu)先申請中未提供)Fab-SE雜種分子對II類MHC依賴性(A)和非依賴性(B)T細胞增殖的作用。以對II類MHC+/C215-CHO-DR4/C215轉(zhuǎn)染子(A)和對II類MHC-/C215+CHO-CD80/C215轉(zhuǎn)染子(B)提供的C215Fab-SEA(■)，C215Fab-SEE(◆)，C215Fab-SEE/A-A(◆)，C215Fab-SEE/A-C(□)，C215Fab-SEE/A-F(◇)，C215Fab-SEE/A-H(●)，C215Fab-SEE/A-AH(△)和C215Fab-SEA/E-BDEG(○)，刺激純化的人T細胞96小時。在72小時之后，對細胞加入〔3H〕-胸苷，作用24小時，測定摻入的標記，以半數(shù)量最高濃度(EC50)表示。數(shù)據(jù)來源于代表2次獨立試驗的單獨測定結(jié)果。圖8.在混合人Ig中的血清反應性來自南歐健康供血者的5000份以上抗C215Fab-SE融合蛋白質(zhì)血清的混合物。使雜列稀釋的人Ig在室溫下分別與C215Fab-SEAwt，C215Fab-SEEwt，C215Fab-SEE/A-A，C215Fab-SEE/A-H和FabSEE/A-AH相互作用1小時。以1ng/孔的濃度固相化在微量滴定板上。通過在每個點扣除對C215Fab的OD值，對結(jié)合于血清蛋白的C215Fab進行校正。各點代表二份樣品的平均值。進一步的詳情參見“材料和方法”表1.以對II類MHC陰性的CHO-CD80/C215轉(zhuǎn)染子提供的各種C215Fab-SE，刺激純化的人T細胞96小時。在72小時之后，對細胞加入3H-胸苷，作用24小時，測定摻入的標記，以半數(shù)最高濃度(EC50)表示。表2.以天然的或者嵌合的Fab結(jié)合的超抗原，刺激鼠T細胞雜交瘤48小時。以IL-2的產(chǎn)生來測定其活性，以半數(shù)最高濃度(EC50)表示。前一年期間的工作為了使超抗原嵌合抗體融合C242Fab-SEE/A-A的毒性降低至最小，如在WO9601650所述，使嵌合體SEE/A-A在II類MHC結(jié)合位點發(fā)生突變，并與C215Fab融合。結(jié)構(gòu)是C215Fab-SEE/A-A-D227A，C215Fab-SEE/A-A-F47A/D227A，C215Fab-SEE/A-A-H187A/D227A，C215Fab-SEE/A-A-W130A/D227A，C215Fab-SEE/A-A-D70A/D227A，C215Fab-SEE/A-A-N50S/D227A，C215Fab-SEE/A-A-N50S/D70A/D227A，C215Fab-SEE/A-A-F47Y/D227A和C215Fab-SEE/A-A-D70R/D227A。對所有的融合測定了它們誘發(fā)人PBMC增殖的能力，以便鑒定與C215Fab-SEE/A-A-D227A相比較具有降低活性的突變體。對于C215Fab-SEE/A-A-F47A/D227A，C215Fab-SEE/A-A-F47Y/D227A和C215Fab-SEE/A-A-D70R/D227A觀察到降低的增殖活性。對某些嵌合型融合還在人正常血清中測定了其抗體滴定(C215Fab-SEE/A-A-D227/A，C215Fab-SEE/A-AD70A/D227A和C215Fab-SEE/A-A-D70A/D227A)。與C215Fab-SEE-D227A和C215Fab-SEE-D227A進行了比較。相對于C215Fab-SEA-D227A，各受試嵌合體的滴定都非常低。相對于C215Fab-SEE-D227A，各受試嵌合體的滴定都略高些。這意味著，在相當于位置47，50，70，130，187，227的1個或幾個位置，優(yōu)選的是2個位置發(fā)生了取代，如圖2中在SEQIDNO7和8中所限定的。因為在這里所闡明的本發(fā)明概念的范圍內(nèi)，還可能設計許多變化的和不同的實施方案，并且因為，還可以根據(jù)所描述原理的要求，對在此詳述的實施方案進行修改，所以應該認為，在此的詳述將被理解是例證性的，而沒有限制性含義。參考文獻AbrahmsenLetal(1995)對超抗原葡萄球菌腸毒素A中二個不同的II類MHC結(jié)合位點的特性鑒定。EMBOJ142978-86。Abrahmsenetal(1996)WO9601650(專利申請)。修飾超抗原和尋靶化合物間的一種結(jié)合物，以及該結(jié)合物的用途。AntonssonPetal(1996)在用于腫瘤治療中具有降低了血清反應性并保持了定向細胞毒性T細胞能力的葡萄球菌腸毒素A和E嵌合體。ABRF′96BiomoleculerTechniques，HolidayInnGoldenGateway，SanFrancisco，California.March30-April2，1996。Dohlstemetal(1988)用Leu-18和UCHL1單克隆抗體可分辨具有不同的產(chǎn)生IL-2和γ-干抗素能力的人外周血CD4+T輔助細胞的二個亞群。EurJImmunol181173-1178。Blancoetal(1990)葡萄球菌毒素休克癥毒素1的突變體通過中和單克隆抗體的促有絲分裂性和識別作用。Infect.Immun.58(1990)3020-3028。DohlstenMetal(1994)單克隆抗體一起抗原融合蛋白用于基于T細胞腫瘤治療的腫瘤特異性藥劑，ProcNatlAcadSciUSA918945-8949。DohlstenMetal(1991)單克隆抗體定向的超抗原一種不同類型的抗腫瘤藥劑。ProcNatlAcadSciUSA889287-9291。Dohlstenetal(1992)WO9201470(專利申請)。靶標特異性抗體-超抗原結(jié)合物及其制備。FleurySetal(1991)CD4和II類MHC間相互作用的突變分析II類抗原，Cell661037-49。FraserJDetal(1993)葡萄球菌腸毒素A與II類MHC抗原相互作用的結(jié)構(gòu)模型·InHuber，BTPalmer，E(eds)CurrentCommnnicationsinCellandMolecularBiology7.ColdSprmgHorbourLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY.PP7-29。Grossmanetal(1991)葡萄球菌腸毒素A中二硫環(huán)的突變。對T細胞識別的影響。J.Immunol1473274-3281。HartwigUFetal(1993)影響超抗原鏈球菌紅斑毒素A與II類MHC結(jié)合的突變作用。Int.Immunol、5(8)869-875。HortonRMetal(1990)通過重疊延伸反應的基因剪接借助聚合酶鏈反應裁制的基因。Biotechniques8528-535。Hudsonetal(1993)在葡萄球菌腸毒素A和E中二個鄰近的殘基決定β-T細胞受體V的特異性。J.EXPMed177175-184。HufnagleWOetal(1991)A型葡萄球菌腸毒素的羧基末端區(qū)域是具有充分活性的分子所需要的。InfecImmn，592126-2134，IrwinMJetal(1992)腸毒素的一些殘基決定T細胞受體Vb結(jié)合特異性，Nature359841-3Kallandetal(1991)WO9104053(專利申請)使細胞表達II類MHC抗原的藥劑組合物是針對毒性細胞的。KapplerJWetal(1992)確定超抗原葡萄球菌腸毒素B功能范圍的突變。JEXPMed175387-396。Kappleretal(1993)WO9314634(專利申請)，突變超抗原的保護作用。KotjinBLetal(1993)超抗原及其在人類疾病中的潛在作用。AdvImmunol5499-166。KraulisPJ(1991)MOLSCRIPT繪制蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)詳細圖形和模式圖的程序。JApplCryst24946-950。LemphearJGetal(1996)葡萄球菌腸毒素E靠近氨基末端和羧基末端的殘基獨立地介導TCRVβ-特異性相互作用。Jlmmunol1562178-2185(March15，1996)。LandoPAetal(1993)IJ類MHC非依賴性T細胞增殖需要B7和被針對超抗原的共同刺激作用，但其細胞毒性不需要，Immaunology80236-241。Lindholmetal(1993)9301302(專利申請)。腫瘤，碳水化合物抗原特異性單克隆抗體和細胞株。MollickJAetal(1993)在細菌超抗原上決定T細胞受體β鏈特異性位點的定位。J.EXPMed177283-293。Newalletal(1991)在體內(nèi)試驗中，通過葡萄球菌腸毒素B激活T細胞，可阻止惡性腫瘤的過度生長。ProcNatlAcadSciUSA881074-1078。SchadEMetal(1995)超抗原葡萄球菌腸毒素A型的晶體結(jié)構(gòu)。EMBOJ143292-3301。Sternetal(1989)WO8907947(專利申請)。與抗原有關的一些改進。Termanetal(1991)WO9110680(專利申請)。腸毒素及相關化合物的殺腫瘤作用。Termanetal(1993)WO9324136(專利申請)。腸毒素及相關化合物的殺腫瘤作用。VonHeijne，G(1986)預測信號序列斷裂位點的新方法。NncleicAcidRes，14，1883-1490。序列表(2)SEQIDNo1的信息(i)序列特征(A)長度3個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)序列描述SEQIDNo1GlyGlyPro1(3)SEQIDNo2的信息(i)序列特征(A)長度24個堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(xi)序列描述SEQIDNo2CAATTTTCTTGTCCACCTTGGTGC(4)SEQIDNo3的信息(i)序列特征(A)長度35個堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(xi)序列描述SEQIDNo3ACTAGTCGACATGGATGGAGCTTTATCATIYTCTT(5)SEQIDNo4的信息(i)序列特征(A)長度41個堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(xi)序列描述SEQIDNo4ACTAGTCGACATGGGCTTCAAGATGGAGTCACAKWYYCWGG(6)SEQIDNo5的信息(i)序列特征(A)長度34個堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(xi)序列描述SEQIDNo5GCGCCGTCTAGAATTAACACTCATTCCTGTTGAA(7)SEQIDNo6的信息(i)序列特征(A)長度107個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQIDNo6AspAlaValMetThrGlnThrProThrPhe1510LeuLeuValSerAlaGlyAspArgValThr1520IleThrCysLysAlaSerGlnSerValSer2530AsnAspValAlaTrpTyrGlnGlnLysPro3540GlyGlnSerProThrLeuLeuIleSerTyr4550ThrSerSerArgTyrAlaGlyValProAsp5560ArgPheIleGlySerGlyTyrGlyThrAsp6570PheThrPheThrIleSerThrLeuGlnAla7580GluAspLeuAlaValTyrPheCysGlnGln8590AspTyrAsnSerProProThrPheGlyGly95100GlyThrLysLeuGluIleLys105(8)SEQIDNo7的信息(i)序列特征(A)長度233個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQIDNo7SerGluLysSerGluGluIleAsnGluLysAspLeu510ArgLysLysSerGluLeuGlnGlyThrAlaLeuGly1520AsnLeuLysGlnIleTyrTyrTyrAsnGluLysAla253035LysThrGluAsnLysGluSerHisAspGlnPheLeu4045GlnHisThrIleLeuPheLysGlyPhePheThrAsp505560HisSerTrpTyrAsnAspLeuLeuValAspPheAsp6570SerLysAspIleValAspLysTyrLysGlyLysLys7580ValAspLeuTyrGlyAlaTyrTyrGlyTyrGlnCys859095AlaGlyGlyThrProAsnLysThrAlaCysMetTyr100105GlyGlyValThrLeuHisAspAsnAsnArgLeuThr110115120GluGluLysLysValProIleAsnLeuTrpLeuAsp125130GlyLysGlnAsnThrValProLeuGluThrValLys135140ThrAsnLysLysAsnValThrValGlnGluLeuAsp145150155LeuGlnAlaArgArgTyrLeuGlnGluLysTyrAsn160165LeuTyrAsnSerAspValPheAspGlyLysValGln170175180ArgGlyLeuIleValPheHisThrSerThrGluPro185190SerValAsnTyrAspLeuPheGlyAlaGlnGlyGln195200TyrSerAsnThrLeuLeuArgIleTyrArgAspAsn205210215LysThrIleAsnSerGluAsnMetHisIleAspIle220225TyrLeuTyrThrSer230(9)SEQIDNo8的信息(i)序列特征(A)長度233個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQIDNo8SerGluLysSerGluGluIleAsnGluLysAspLeu510ArgLysLysSerGluLeuGlnArgAsnAlaLeuSer1520AsnLeuArgGlnIleTyrTyrTyrAsnGluLysAla253035IleThrGluAsnLysGluSerAspAspGlnPheLeu4045GluAsnThrLeuLeuPheLysGlyPhePheThrGly505560HisProTrpTyrAsnAspLeuLeuValAspLeuGly6570SerLysAspAlaThrAsnLysTyrLysGlyLysLys7580ValAspLeuTyrGlyAlaTyrTyrGlyTyrGlnCys859095AlaGlyGlyThrProAsnLysThrAlaCysMetTyr100105GlyGlyValThrLeuHisAspAsnAsnArgLeuThr110115120GluGluLysLysValProIleAsnLeuTrpIleAsp125130GlyLysGlnThrThrValProIleAspLysValLys135140ThrSerLysLysGluValThrValGlnGluLeuAsp145150155LeuGlnAlaArgHisTyrLeuHisGlyLysPheGly160165LeuTyrAsnSerAspSerPheGlyGlyLysValGln170175180ArgGlyLeuIleValPheHisSerSerGluGlySer185190ThrValSerTyrAspLeuPheAspAlaGlnGlyGln195200TyrProAspThrLeuLeuArgIleTyrArgAspAsn205210215LysThrIleAsnSerGluAsnLeuHisIleAspLeu220225TyrLeuTyrThrThr230權(quán)利要求1.一種結(jié)合物，是由a)一個被修飾的野生型超抗原和b)一個尋靶部分共同形成的，其中所述的被修飾超抗原含有第一個野生型超抗原的某一氨基酸序列，在該序列至少一個區(qū)域內(nèi)的一個或幾個氨基酸殘基已被不同的氨基酸殘基取代了，該修飾超抗原仍然保持著激活T細胞亞群的能力，此區(qū)域是i)存在于第一個野生型超抗原所述的氨基酸序列內(nèi)，并且ii)在決定與TCR的結(jié)合和激活T細胞亞群中發(fā)揮功能。2.權(quán)利要求1的結(jié)合物，其中所說的至少一個區(qū)域在決定對TCRVβ的結(jié)合中發(fā)揮功能。3.權(quán)利要求1-2中之任一結(jié)合物，其中所述的野生型超抗原是SEA，SED或SEE，或者類似的其它超抗原。4.權(quán)利要求1-3中之任一的結(jié)合物，其中的野生型超抗原是SEE，而所述的至少一個區(qū)域是選自SEQIDNO8中所定義的區(qū)域A，C，F(xiàn)，和H。5.權(quán)利要求1-4中之任一的結(jié)合物，其中的野生型超抗原是進行了如下氨基酸殘基取代的SEER20G，N21T，S24G和R27K，在此這些位置是按圖2中SEQIDNO8所定義的。6.權(quán)利要求1-5中之任一的結(jié)合物，其中修飾的超抗原是一種由a)所述第一個野生型超抗原和b)一個或幾個另外的野生型超抗原，共同形成的嵌合體，其中，在所述的第一個野生型超抗原至少一個區(qū)域中的一個或幾個氨基酸殘基的每一個，都被存在于所述一個或幾個另外的野生型超抗原相應區(qū)域中的相應氨基酸殘基取代。7.權(quán)利要求6的結(jié)合物，其中的第一個和另一個野生型超抗原是選自SEA，SED，SEE，和類似的其它超抗原。8.權(quán)利要求7的結(jié)合物，其中所述的至少一個區(qū)域是選自相應于如圖2中SQEIDNO7或8所規(guī)定的區(qū)域A，C，F(xiàn)和H。9.權(quán)利要求8的結(jié)合物，其中在相應于如圖2，SEQIDNO7和8中所定義的區(qū)域A中20，21，24，和27位置的至少一個氨基酸殘基，被以所述的一個或幾個另外的野生型超抗原區(qū)域A中相應的氨基酸殘基取代了。10.權(quán)利要求6-9中之任一的結(jié)合物，其中所述的第一個野生型超抗原是SEE，而一個或幾個另外野生型超抗原是SEA。11.權(quán)利要求7-10中之任一的結(jié)合物，其中所述的一個或幾個氨基酸取代是在相應于如圖2中，SEQIDNO7和8所定義的20，21，24，27(對于區(qū)域A)和/或60，62(對于區(qū)域C)和/或111，114，115，117，118，124，126(對于區(qū)域F)和/或200，206，207(對于區(qū)域H)位置，在所述第一個超抗原是SEE，而一個或幾個另外的超抗原是SEA的情況下，優(yōu)選的是區(qū)域A所有4個位置中的殘基都被取代。12.權(quán)利要求1-11中之任一的結(jié)合物，其中的野生型超抗原是選自那些為結(jié)合于II類MHC需要鋅離子的超抗原，并且，其中存在于該結(jié)合物中的所述第一個野生型超抗原具有一個序列，此序列中在與結(jié)合于鋅離子有關的位置中的一個氨基酸殘基被取代，以便降低這種結(jié)合能力，特別強調(diào)的是圖2，SEQIDNO7和8所定義的位置225和/或227。13.權(quán)利要求1-12中之任一的結(jié)合物，其中所述的尋靶部分是一個抗體，特別是抗體活性片段。14.權(quán)利要求1-13中之任一的結(jié)合物，其中的尋靶部分是Fab片段。15.一種通過激活哺乳動物免疫系統(tǒng)來治療哺乳動物疾病的方法，此方法包含對哺乳動物給予治療有效劑量的一種超抗原，此超抗原包括通過取代至少在一個區(qū)域中的一個或幾個氨基酸殘基而修飾的第一個野生型超抗原，此區(qū)域i.是存在于第一個野生型超抗原的氨基酸序列中，并且ii.在決定與TCR結(jié)合并隨后激活T細胞亞群中發(fā)揮功能。16.權(quán)利要求16的方法，其中所述的修飾超抗原，是由第一個超抗原和一個或幾個另外的野生型超抗原共同形成的嵌合超抗原，這意味著，在第一個野生型超抗原所述的至少一個區(qū)域中的一個或幾個氨基酸殘基的每一個，都已被存在于所述一個或幾個另外的野生型超抗原相應區(qū)域中的相應氨基酸殘基取代。17.權(quán)利要求15-16中之任一的方法，其中疾病與表達表面靶結(jié)構(gòu)的細胞有關，這種靶結(jié)構(gòu)在一種結(jié)構(gòu)上不同于TCR結(jié)合表位的表位與超抗原結(jié)合，其與表面結(jié)合結(jié)構(gòu)的結(jié)合允許與TCR結(jié)合，隨后激活T細胞亞群。18.權(quán)利要求15-17中之任一的方法，其中的疾病包括癌癥，病毒感染，寄生蟲感染和自身免疫性疾病。19.權(quán)利要求15-18中之任一的方法，其中所述的野生型超抗原是選自SEA，SED，SEE和類似的其它超抗原。20.權(quán)利要求19的方法，其中所述的至少一個區(qū)域是選自相應于圖2，SEQIDNO7和8所定義的區(qū)域A，C，F(xiàn)或H的區(qū)域。21.權(quán)利要求15-20中之任一的方法，其中所述的第一個野生型超抗原是SEE，而所述的至少一個區(qū)域是選自圖2，SEQIDNO8中所定義的區(qū)域A，C，F(xiàn)和H。22.權(quán)利要求21的方法，其中所述的至少一個區(qū)域是區(qū)域A，并且其中進行了如下氨基酸殘基的取代R20G，N21T，S24G和R27K，在此的位置是按圖2，SEQIDNO8所定義的。23.權(quán)利要求15-22中之任一的方法，其中所述的至少一個另外的野生型超抗原是SEA。24.權(quán)利要求15-23的方法，其中所述的超抗原是一種如權(quán)利要求1-14中之任一所規(guī)定的結(jié)合物。25.權(quán)利要求24的方法，其中的野生型超抗原是選自那些為了結(jié)合于II類MHC而需要結(jié)合于鋅離子的超抗原，并且，在與結(jié)合于鋅離子有關的位置，第一個野生型超抗原某序列中的一個氨基酸殘基被取代，以便降低對II類MHC的結(jié)合能力。26.權(quán)利要求25的方法，其中所述的有關位置相當于圖2，SEQIDNO7和8中所定義的227，突出的是突變D277A。27.據(jù)權(quán)利要求24-26中之任一的方法，其中的尋靶部分是一個Fab片段，其中提供鏈間鍵合的每個半胱氨酸殘基，已被用不能提供鏈間鍵合的氨基酸殘基取代了，優(yōu)選的取代氨基酸殘基是絲氨酸。28.一種含有修飾抗體的藥用組合物，此抗體中提供天然抗體中鏈間胱氨酸鍵合的半胱氨酸已被取代，以便阻止胱氨酸的形成。29.權(quán)利要求28的藥用組合物，其中的取代殘基是絲氨酸殘基。30.權(quán)利要求29的藥用組合物，其中的抗體是一個Fab片段。31.權(quán)利要求30的藥用組合物，其中該抗體被融合于一個肽部分，此肽部分能提供以Vβ特異性方式對T細胞的激活。全文摘要一種由一個尋靶部分和一個修飾的超抗原共同形成的結(jié)合物,其特征在于,該超抗原是一種野生型超抗原(SAⅠ),其中在決定與TCR,優(yōu)選地是TCRVβ結(jié)合并激活T細胞的一個超抗原區(qū)域中(區(qū)域Ⅰ),一個氨基酸殘基已被另一氨基酸殘基取代了,而仍然保持著激活T細胞亞群的能力。在一個優(yōu)選的實施方案中,該修飾超抗原是由至少二個野生型超抗原(SAⅠ,SAⅡ等)共同形成的嵌合體,其特征在于,在決定與TCR結(jié)合,并激活T細胞的一個區(qū)域中,一個或幾個氨基酸殘基已在不同的野生型超抗原間交換了。一種利用修飾/嵌合超抗原的治療方法如在以前的文章中已詳細說明。一種用作藥劑的抗體制備物此抗體中提供鏈間二硫鍵的半胱氨酸殘基已被突變,以便阻止鏈間二硫鍵橋的形成。優(yōu)選地是突變成絲氨酸殘基。文檔編號C07K19/00GK1194651SQ97190630公開日1998年9月30日申請日期1997年3月26日優(yōu)先權(quán)日1996年3月29日發(fā)明者P·安頓森,J·漢森,P·布耶爾克,M·多爾斯藤,T·卡蘭德,L·阿布拉姆森,G·福爾斯堡申請人:法馬西亞及厄普約翰公司