專利名稱：具有生長激素釋放性質(zhì)的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的肽衍生物、包含它們的組合物，以及它們在治療由生長激素缺陷引起的疾病上的用途。
背景技術(shù)：
生長激素是刺激所有能夠生長的組織的生長的激素。此外，已知生長激素對代謝過程具有許多作用(例如，刺激蛋白質(zhì)合成和游離脂肪酸動員)和引起從碳水化合物至脂肪酸代謝的能量代謝轉(zhuǎn)換。生長激素缺陷可以導(dǎo)致一些嚴重的疾病，例如，侏儒癥。
生長激素從垂體釋放。這一釋放過程直接或間接地在一些激素與神經(jīng)遞質(zhì)的嚴格控制下。生長激素釋放可以受到生長激素釋放激素(GHRH)的刺激和生長激素釋放抑制因子的抑制。在兩種情況下，所述激素從下丘腦釋放，但是它們的作用主要經(jīng)由位于垂體的特異性受體介導(dǎo)。也已描述了刺激生長激素從垂體釋放的其它化合物。例如精氨酸、L-3，4-二羥基苯丙氨酸(L-多巴)、胰高血糖素、后葉加壓素、PACAP(垂體腺苷酰環(huán)化酶激活肽)、毒蕈鹼受體興奮劑和合成的六肽，GHRP(生長激素釋放肽)通過直接作用在垂體上或通過影響GHRH和/或生長激素釋放抑制因子從下丘腦的釋放來釋放內(nèi)源性生長激素。
在需要生長激素增加的水平的疾病或病態(tài)中，生長激素蛋白質(zhì)的性質(zhì)需要腸胃外施用。此外，其他直接作用的天然促分泌劑(例如GHRH和PACAP)是高分子量的多肽，因此腸胃外施用是優(yōu)選的。
用于在哺乳動物中增加生長激素水平的更短的肽的用途以前已描述過，例如在EP18 072、EP83 864、WO89/07110、WO89/01711、WO89/10933、WO88/9780、WO83/02272、WO91/18016、WO92/01711和WO93/04081中。
生長激素釋放肽或者肽衍生物的結(jié)構(gòu)對它們的生長激素釋放潛能以及它們的生物利用率來說是重要的。因此本發(fā)明的目的是提供新的具有生長激素釋放性質(zhì)的肽，這些肽具有相對于這種類型的已知肽而言的改善的性質(zhì)。
發(fā)明概述通式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽A-B-C-D(-E)pI其中p是0或1；A是氫或R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)sCO-。其中q是0或選自下組的整數(shù)1，2，3，4，5；r是0或1；s是0或選自下組的整數(shù)1，2，3，4，5；R1是氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基或N(R2)-R3，其中R2和R3各自分別是氫或低級烷基(可被可不被一個或多個羥基、吡啶基或呋喃基取代的)；并且，當r是1時X是-NH-、-CH2-、-CH＝CH-、-C(R16)(R17)-；
其中R16和R17各自分別是氫或低級烷基；B是(G)t-(H)u，其中t和u各自分別是0或1；G和H是氨基酸殘基，該殘基選自由天然L-氨基酸或它們的相應(yīng)的D-異構(gòu)體或非-天然氨基酸(例如1，4-二氨基丁酸、氨基-異丁酸、1，3二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、1，2，3，4-四氫降哈爾滿(norharman)-3-羧酸、N-甲基鄰氨基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、N-芐基甘氨酸、3-氨甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異-3-哌啶甲酸)組成的組；并且其中，當t和u兩者都是1時，G和H之間的酰胺鍵可以被可以不被Y-NR18-替代，其中Y是-CO-或-CH2-，且R18是氫、低級烷基或低級芳烷基；C是式-NH-CH((CH2)w-R4)-CO-的D-氨基酸，其中w是0，1或2；且R4選自由以下基團組成的組
以上各種可以是被或不被下列基團取代的鹵素、低級烷基、低級烷氧基、低級烷氨基、氨基或羥基；當p是1時，D是式-NR20-CH((CH2)k-R5)-CO-的D-氨基酸或者當p是0時，D是-NR20-CH((CH2)1-R5)-CH2-R6或-NR20-CH((CH2)m-R5)-CR6，其中k是0，1或2；l是0，1或2；m是0，1或2；R20選自由低級烷基或低級芳烷基組成的組；R5選自由以下基團組成的組
以上各種可以是被或不被以下基團取代的鹵素、低級烷基、低級烷氧氨基或羥基；且R6是哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R7)-R8，其中R7和R8各自分別是氫成低級烷基；當p是1時，E是-NH-CH(R10)-(CH2)v-R9，其中v是0或選自下組的整數(shù)1，2，3，4，5，6，7，8；R9是氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-N(R11)-R12或
其中n是0，1或2，且R19是氫或低級烷基，
其中o是選自下組的整數(shù)1，2，3，R11和R12各自分別是氫或低級烷基或
以上各種可以是被或不被以下基團取代的鹵素、低級烷基、低級烷氧基、氨基、烷氨基、羥基或氨基和吡喃己糖或吡喃己糖基-吡喃己糖的Amadori重排產(chǎn)物，且當p是1時，R10選自由H、-COOH、-CH2-R13、-CO-R13或-CH2-OH組成的組，其中R13是哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R14)R15其中R14和R15各自分別是氫或低級烷基；除了C和D之間的鍵外，所有式I內(nèi)的酰胺鍵可以分別地由-Y-NR18替代；其中Y是-CO-或-CH2-，且R18是氫，低級烷基或低級芳烷基；但不包括下列化合物(3-氨甲基苯甲?；?-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2、H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2、H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2、3-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉代丙烷、2-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷、((3R)-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2、3-((3-氨甲基苯甲?；?-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉基丙烷、2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷、2-(((3R)-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷、2-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-R-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷、3-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉基丙烷、3-(((3R)-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉代丙烷、3-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉代丙烷、2-((3-氨甲基苯甲?；?-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷、2-(((3R)哌啶羰基)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷。
因為在肽序列中存在鄰近的D-氨基酸(以及可有可無地由-Y-NR18(例如氨基亞甲基(-CH2-NH-))取代酰胺鍵(-CO-NH-)(如上所述))和/或修飾肽的N-或C-末端，式I的肽衍生物顯示出對酶的蛋白降解的改進的抗性。并且本發(fā)明的肽衍生物的增加的生物利用率(與現(xiàn)有技術(shù)文獻中所提出的肽的生物利用率比較)被認為是由于其對蛋白降解的抗性以及小的體積引起的。
在上述結(jié)構(gòu)式和本說明書全文中，下列術(shù)語具有所指出的含義以上所限定的低級烷基部分旨在包括那些指定長度(優(yōu)選地具有1-6個碳原子)的線性、支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的烷基部分。線性烷基的例子是甲基、乙基、正丙基、丁基、戊基和己基。支鏈烷基的例子是異丙基、仲丁基、叔丁基、異戊基和異己基。環(huán)狀烷基的例子是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
以上所限定的低級烷氧基部分旨在包括那些指定長度(優(yōu)選地具有1-6個碳原子)的線性、支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的烷氧基部分。線性烷氧基的例子是甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基。支鏈烷氧基的例子是異丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、異戊氧基和異己氧基。環(huán)狀烷氧基的例子是環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基和環(huán)己氧基。
以上所限定的低級烷氨基部分旨在包括那些指定長度(優(yōu)選地具有1-6個碳原子)的線性、支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的烷氨基部分。線性烷氨基的例子是甲氨基、乙氨基、丙氨基、丁氨基、戊氨基和己氨基。支鏈烷氨基的例子是異丙氨基、仲丁氨基、叔丁氨基、異戊氨基和異己氨基。環(huán)狀烷氨基的例子是環(huán)丙氨基、環(huán)丁氨基、環(huán)戊氨基和環(huán)己氨基。
在本文上下文中，術(shù)語″芳基″旨在包括芳族環(huán)，如選自由以下基團組成的組的碳環(huán)和雜環(huán)芳族環(huán)苯基、萘基、吡啶基、1-H-四唑-5-基、噻唑基、咪唑基、吲哚基、嘧啶基、噻二嗪基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻吩基、喹啉基、吡嗪基或異噻唑基，這些基團是可被可不被一個或多個C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、氨基或者芳基取代的。芳基優(yōu)選地是可被可不被鹵素，氨基，羥基，C1-6烷基或C1-6烷氧基取代的苯基、噻吩基、咪唑基、吡啶基、吲哚基、喹啉或萘基。
以上所限定的低級芳烷基部分由低級烷基部分和芳基部分形成，其中低級烷基部分和芳基部分是如上所限定的。
術(shù)語″鹵素″旨在包括Cl、F、Br和I。
通用的三字母代碼用于代表天然氨基酸，例如Ala用于代表丙氨酸。發(fā)明詳述在式I的化合物的優(yōu)選的實例中，A是氫、3-N-Me-AMB、3-AMB或Aib。當t是1時，在式I的化合物中G優(yōu)選地是Ala、Gly、肌氨酸、3-氨甲基苯甲酰基、R-3-哌啶甲基(nipecotinyl)、3-哌啶甲酸或異3-哌啶甲酸，更優(yōu)選地是3-氨甲基苯甲?；?、R-3-哌啶甲基、3-哌啶甲酸或異3-哌啶甲酸。當u是1時，H優(yōu)選地是His、Phe、Tic、Phe(4-NH2)、3-Pyal、Gly、Ala、Sar、Pro、Tyr、Arg、Orn、3-氨甲基苯甲酸或D-Phe，H更優(yōu)選地是His、Phe或Ala，H最優(yōu)選地是His或Ala.。C在式I的化合物中優(yōu)選地是D-2-萘基丙氨酸(D-2Nal)、D-1-萘基丙氨酸(D-1Nal)、D-Phe或D-Trp，更優(yōu)選地是D-2Nal或D-Phe，最優(yōu)選地是N-Me-D-2Nal、D-2Nal、D-Phe或N-Me-D-Phe。D在式I的化合物中優(yōu)選地是-NR20-CH((CH2)k-R5)-CO-，其中k優(yōu)選地是1，R20是低級烷基，D更優(yōu)選地是D-Phe或D-2Nal。D最優(yōu)選地是N-Me-D-Phe-醇、N-Me-D-Phe、N-Me-D-2Nal-醇、N-Me-D-Phe-NH2、N-Me-D-Phe-NH-Me或N-Me-D-(4-1)Phe-NH-Me。
當p是1時，在式I的化合物中E優(yōu)選地是Lys-NH2、Ser-NH2、NH-(2-(1-哌嗪基)乙基)、NH-(3-(1-嗎啉代)丙基)、NH-(2-氨乙基)、NH-(4-氨甲基芐基)、NH-(芐基)、Lys-OH、NH-(1-羥基-6-氨基-2S-己基)、NH-(2-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙基)或3-N，N-二甲基-氨基丙基，E最優(yōu)選地是NH-(2-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙基)，3-N，N-二甲基-氨基丙基、Lys-NH2或Ser-NH2，或在式I的化合物中，R4優(yōu)選地是2-萘基。R5優(yōu)選地是苯基。v優(yōu)選地是2-6，R9是NH2、2-嗎啉代乙基、3-嗎啉代丙基或(1-甲基吡咯烷基)乙基。R10優(yōu)選地是-COOH、-CH2-OH、-H、-CONH2或-CON(CH3)2。
本發(fā)明特定的化合物例子是(2R)-2-((3-氨甲基苯甲?；?)-N-Me-D-2Nal-N-Me)-3-(2-萘基)丙醇
(3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
3-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-NMe-D-Phe-NH)-N，N-二甲基氨基丙烷
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
(3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2；
H-Aib-Ala-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH22-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉代乙烷
(3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-Me
3-((3-甲基氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-N，N-二甲基氨基丙烷
(3-氨甲基苯甲酰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-N-Me2
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-R-Me-D-Phe-NHMe
3-甲基氨甲基-Nme-D-2Nal-Nme-D-Phe-NH-CH3
哌啶-4-羧酸-N-((1R)-1-(N-((1R)-2-(4-碘苯基)1-(甲基氨基甲?；?乙基)-N-甲基氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基)-N-甲酰胺
非天然氨基酸殘基的結(jié)構(gòu)
用于肽鍵取代的縮寫
式I的化合物可以用溶液或者固相肽合成的常規(guī)方法制備。例如，固相合成基本上可以按照Stewart和Young，固相肽合成，2nd.Ed.，Rockford，Illinois，USA，1976所描述的方法進行?；旧峡梢园凑绽鏐odansky etal.，肽合成，2nd.Ed.，紐約，紐約，USA，1976所描述的方法進行。
可以按照Y.Sasaki和D.H.Coy，肽8(1)，1987，pp.119-121所描述的方法引入作為酰胺鍵取代基的氨基亞甲基。包含單或二-吡喃己糖衍生化氨基基團的肽衍生物可以基本上用由R.Albert等，生命科學(xué)53，1993，pp.517-525所描述的方法的Amadori重排制備。合適的單或二-吡喃己糖的例子是葡萄糖，半乳糖，麥芽糖，乳糖或纖維素二糖。在合成中用作起始原料的衍生物可以是市售的(需要時，提供合適的保護基)，或者可以通過已知的方法制備用于制備通式I中的“A”部分的起始原料并根據(jù)需要可按本身已知的方法加以保護。
用于保護基的縮寫
式I的化合物的藥學(xué)上可接受的酸的加成鹽包括通過使肽與無機或有機酸反應(yīng)制備的那些，所述酸例如氫氯酸，氫溴酸，硫酸，醋酸，磷酸，乳酸，馬來酸，鄰苯二甲酸，檸檬酸，戊二酸，葡萄糖酸，甲磺酸，水楊酸，琥珀酸，酒石酸，草酸，甲苯磺酸，三氟乙酸，氨基磺酸和富馬酸。
在另一個方面，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，該組合物包含作為活性組分的通式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
包含本發(fā)明的化合物的藥物組合物可以用常規(guī)技術(shù)制備，例如，按照Remington的藥物科學(xué)，1985中所描述的技術(shù)進行。所述組合物可以以常規(guī)形式出現(xiàn)，例如膠囊，片劑，氣霧劑，溶液，懸液，膏藥或局部施用物。
所使用的藥物載體或稀釋劑可以是一種常規(guī)的固體或液態(tài)載體。固相載體的例子是乳糖，石膏粉，蔗糖，環(huán)糊精，滑石，明膠，瓊脂，果膠，阿拉伯膠，硬脂酸鎂，硬脂酸或纖維素的低級烷基醚。液態(tài)載體的例子是糖漿，花生油，橄欖油，磷脂，脂肪酸，脂肪酸胺，聚氧乙烯和水。
同樣地，載體或者稀釋劑可以包括本領(lǐng)域已知的任何持續(xù)釋放物質(zhì)，如單獨的或與蠟混合的單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
如果固相載體用于口服施用，所述制劑可以是壓片的，以粉末狀或片狀形式置于硬明膠膠囊中，或者可以是錠劑或菱形劑形式。固相載體的量可以廣泛地變化，但通常在大約25毫克到大約1克之間。
可以用常規(guī)壓片技術(shù)制備的一個典型的片劑可以包含核心活性化合物(游離化合物或其鹽)100毫克膠體二氧化硅(Aerosil) 1.5毫克纖維素，微晶(Avicel) 70毫克改性的纖維素樹膠(Ac-Di-Sol)7.5毫克硬脂酸鎂包衣HPMC約 9毫克*Mywacett9-40T約 0.9毫克*用作膜包衣的增塑劑的?；膯嗡岣视王?。
如果使用液態(tài)載體，則所述制劑可以是糖漿，乳狀液，軟膠囊或無菌的可注射液體(如含水或不含水懸液或者溶液)的形式。
對于鼻或者肺部施用，所述制劑可以包含溶解或懸浮在液態(tài)載體(特別是含水載體)中的式I的化合物，作為氣溶膠施用。載體可以包含添加劑，例如增溶劑(如丙二醇)，表面活性劑(如膽汁酸鹽聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧乙烯高級醇醚)，吸收增強器(如卵磷脂(磷脂酰膽堿)或環(huán)糊精)或防腐劑(如羥苯甲酸甲酯)。
對于經(jīng)皮施用，所述制劑可以是適合于粘貼或離子電滲療法的形式。
一般地，本發(fā)明的化合物以單位劑量形式配藥，其中每單位劑量包含0.0001-100毫克的活性成分和藥學(xué)上可接受的載體。
根據(jù)本發(fā)明的化合物的劑量合適地是1-500mg/天，例如當作為藥物施用給患者(例如人)時，每劑約100毫克。
已經(jīng)證明，式I的化合物具有體內(nèi)釋放內(nèi)源性生長激素的能力。因此這些化合物可以用于疾病的治療，這些疾病需要增加的血漿生長激素水平，例如在生長激素缺陷的人或年長患者或家畜中。
這樣，在一個特定的方面，本發(fā)明涉及刺激生長激素從垂體釋放的藥物組合物，該組合物包含作為活性組分的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體或者稀釋劑。
在另一方面，本發(fā)明涉及刺激生長激素從垂體釋放的方法，該方法包括向需要這種刺激的對象施用有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一方面，本發(fā)明涉及式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于刺激生長激素從垂體釋放之藥物上的用途。
式I的化合物具有令人感興趣的藥理學(xué)性質(zhì)。這樣的性質(zhì)的例子是刺激生長激素從垂體釋放(其自身作為生長激素具有相似的作用或用途)。生長激素的用途可以總結(jié)如下在年長者中刺激生長激素釋放；預(yù)防糖皮質(zhì)激素分解代謝的副作用，治療骨質(zhì)疏松，刺激免疫系統(tǒng)，加速創(chuàng)傷愈合，加速骨折修復(fù)，治療生長遲緩，治療腎衰竭或由生長遲緩引起的腎功能低下，治療生理矮小(包括生長激素缺陷兒童和與慢性疾病相關(guān)的矮小)，治療肥胖癥和生長緩慢相關(guān)的肥胖癥，治療生長緩慢相關(guān)的Prader-Wilii綜合癥和Tumer′s綜合癥；加速恢復(fù)和減少燒傷患者的住院治療；治療子宮內(nèi)的生長緩慢，骨胳發(fā)育異常，腎上腺皮質(zhì)機能亢進和Cushing綜合癥；誘導(dǎo)脈動生長激素釋放；在緊張狀態(tài)患者中代替生長激素，治療骨軟骨發(fā)育不良，Noonan′s綜合癥，精神分裂癥，抑郁癥，Alzheimer′s病，延緩傷口愈合和精神喪失，治療肺部機能障礙和呼吸困難，在大手術(shù)后削弱蛋白質(zhì)分解代謝反應(yīng)，降低噁病體質(zhì)和蛋白質(zhì)喪失(由慢性疾病如癌或愛滋病引起的)；治療血胰島素增多(包括胰島細胞增殖癥)，輔助治療排卵誘導(dǎo)；刺激胸腺發(fā)育和預(yù)防胸腺功能的年齡相關(guān)性衰退，治療免疫抑制患者，改善肌肉力量，運動性，保持皮膚厚度，代謝平衡，在虛弱的年長者中的腎部平衡，刺激成骨細胞，骨改型和軟骨生長，在同伴動物中刺激免疫系統(tǒng)和在同伴動物中治療老化疾病，促進家畜生長和刺激羊毛生長。
對上述適應(yīng)癥而言，劑量可以隨所使用的式I的化合物、施用方式和所需的療法變化。然而，一般地每天0.0001和100毫克/kg體重之間的劑量水平可以施用于患者和動物，以獲得內(nèi)源性生長激素的有效的釋放。通常，適合于口頭或鼻施用的劑量形式包含約0.0001毫克到約100毫克，優(yōu)選地約0.001毫克到約50毫克式I的化合物，該化合物與藥學(xué)上可接受的載體或者稀釋劑混合在一起。
式I的化合物可以以藥學(xué)上可接受的酸的加成鹽形式(合適時以堿金屬或堿土金屬或低級烷銨鹽形式)施用。這樣的鹽形式被認為與游離堿形式顯示出大致相同級別的活性。
選擇性地，本發(fā)明的藥物組合物可以包含式I的化合物以及一種或多種顯示出不同活性的化合物，例如，抗生素或者其它藥理學(xué)上的活性物質(zhì)。這可以另一種促分泌素，如GHRP(1或6)或GHRH或其類似物、生長激素或其類似物，或者生長調(diào)節(jié)素，如IGF-1或IGF-2。
給藥路線可以是任何有效地將活性化合物運輸?shù)胶线m的或所需的作用位點的途徑，例如，口服，鼻，肺部，經(jīng)皮或者腸胃外，口服途徑是優(yōu)選的。
式I的化合物除了藥學(xué)用途之外，它們作為研究生長激素釋放的調(diào)節(jié)的體外工具還可以是有用的。
式I的化合物作為評價垂體釋放生長激素能力的體內(nèi)工具也可以是有用的。例如，在向人施用這些化合物之前和之后所采取的血清樣品可以用于測定生長激素。在每種血清樣品中生長激素的比較將直接確定患者垂體釋放生長激素的能力。
式I的化合物可以施用到有商業(yè)重要性的動物上，以增加它們的生長速率和生長程度，并增加奶產(chǎn)量。藥理學(xué)方法式I的化合物可以就它們在大鼠初級促生長激素細胞中釋放生長激素的功效和效能進行體外評價。
可以基本上按照以前的描述(Chen等，內(nèi)分泌學(xué)1991，129，3337-3342和Chen等，內(nèi)分泌學(xué)1989，124，2791-2798)制備大鼠初級促生長激素細胞。簡言之，去頭處死大鼠。迅速切除垂體。以在Hanks平衡鹽溶液中的0.2％膠原酶和0.2％透明質(zhì)酸酶消化垂體。將細胞懸浮在Dulbecco′s改良的Eagle′s培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基包含0.37％NaHCO3、10％馬血清、2.5％胎牛血清、1％非必需氨基酸、1％谷氨酰胺和1％青霉素/鏈霉素，并調(diào)節(jié)至1.5×105個細胞/ml。在釋放實驗進行之前，將這種懸液1ml放置在24-孔盤的各孔中2-3天。
在實驗的第一天，將細胞以包含25mM HEPES的上述培養(yǎng)基(pH7.4)洗滌兩次。通過添加包含25mM HEPES和試驗化合物的培養(yǎng)基起始生長激素釋放。于37℃培養(yǎng)15分鐘，在培養(yǎng)后，通過標準的RIA測定釋放至培養(yǎng)基中的生長激素。
可以按照以前的描述(Bercu等，內(nèi)分泌學(xué)1991，129，2592-2598)在戊巴比妥麻醉的雌性大鼠中評價式I的化合物體內(nèi)對生長激素釋放的作用。簡言之，成年雄性Sprague-Dawley大鼠用戊巴比妥50mg/kg ip麻醉。在大鼠完全麻醉之后，將導(dǎo)管插管和導(dǎo)液管植入大鼠的頸動脈和頸靜脈。在15分鐘的恢復(fù)之后，采取血液樣品(時間0)。經(jīng)iv施用垂體促分泌劑，將動脈血樣放在冰上15分鐘，然后在12,000xg下離心2分鐘。倒出血清，利用標準的RIA測定生長激素的量。
本發(fā)明由下列實施例進一步說明，這些實施例不以任何方式限制所要求的本發(fā)明的范圍。
在以下實施例中所制備的化合物以三氟乙酸(TFA)鹽分離出。實施例1制備2(R)-2-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me)-3-苯基丙醇
在0℃下，將165.7mg Boc-N-Me-D-2Nal-OH和165.2mg(R)-甲基氨基-3-苯基-丙-1-醇(從H-N-Me-D-Phe-OH按照McKennon M.J.；Meyers，I.有機化學(xué)雜志。1993，58，3568-71)和68.1mg HOAt溶解在2ml DMF和4ml DCM的混合物中。添加115mg EDAC，將混合物在0℃下攪拌1小時，然后在室溫下攪拌18小時。
在添加50ml EtOAc之前，經(jīng)氮氣流從混合物除去DCM，所形成的混合物用100ml5％NaHCO3水溶液、100ml H2O，100ml 5％KHSO4水溶液和100ml H2O依次抽提。所形成的有機相用Na2SO4干燥，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上真空濃縮成油狀物。
通過添加2滴DMF將502.6mg3-Boc-氨甲基苯甲酸溶解在10ml DCM中，然后，通過與191.6mg EDAC一起攪拌10分鐘轉(zhuǎn)變成對稱的酸酐。
將上述凍干的2(R)-(H-N-Me-D2Nal-N-Me)-3-苯基丙醇和342μl DIEA在5ml DCM中的溶液加入到這一混合物中，然后在室溫下反應(yīng)20小時。接著將反應(yīng)混合物濃縮成油狀物，并再溶解于50ml EtOAc中。將這一溶液用100ml5％NaHCO3水溶液，100ml H2O，100ml 5％KHSO4水溶液和100ml H2O依次提取。將所形成的有機相用Na2SO4干燥，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上真空濃縮成油狀物。然后使油狀物溶解在4ml DCM/TFA1∶1中并攪拌。10分鐘后，通過氮氣流濃縮混合物，將所形成的油狀物再溶解于20ml 70％CH3CN/0.03M HCl中，加入480ml H2O。
然后通過半制備型HPLC純化粗產(chǎn)物(在25mm×250mm柱上進行7次，該柱填裝有7μC-18二氧化硅，用在0.05M(NH4)2SO4中的28％CH3CN(用4M H2SO4調(diào)節(jié)到pH 2.5)預(yù)平衡過)。
在40℃下，用梯度28％-38％CH3CN(在0.05M(NH4)2SO4中，pH2.5)洗脫(在47分鐘期間10ml/分鐘)柱，收集包含肽的組分，用3倍體積的H2O稀釋，上到Sep-PakC18柱(Waters part.#51910)上，該柱用0.1％TFA平衡過。用70％CH3CN(在0.1％TFA中)從Sep-Pak柱洗脫肽，用水稀釋后通過凍干從洗脫物分離肽。
通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)(質(zhì)譜±0.9原子質(zhì)量單位)質(zhì)譜與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)一致。
用UV檢測(在214nm)和Vydac 218TP54 4.6mm×250mm 5μC-18二氧化硅柱(The Separations Group，Hesperia)進行RP-HPLC分析，于42℃在1ml/分鐘的流速下洗脫柱。采用兩種不同的洗脫條件A1用在緩沖液中的5％CH3CN平衡柱，上述緩沖液由0.1M(NH4)2SO4組成，用4M H2SO4調(diào)節(jié)到pH2.5，在50分鐘期間用梯度5％-60％CH3CN(在相同的緩沖液中)洗脫柱。B1用5％CH3CN/0.1％TFA/H2O平衡柱，在50分鐘期間通過梯度5％CH3CN/0.1％TFA/H2O到60％CH3CN/0.1％TFA/H2O洗脫柱。
采用洗脫條件A1和B1的保留時間分別為29.90分鐘和31.52分鐘。合成3-Boc-氨甲基苯甲酸將25g 3-氰基苯甲酸溶解在70ml 25％NH3/H2O和200ml H2O中，在氮氣流下加入5g10％Pd/C。在大氣壓和室溫下氫化混合物，通過添加12％NH3/H2O將pH持續(xù)調(diào)節(jié)到10.5。在18小時期間在吸收約41Hz后，終止反應(yīng)，經(jīng)過濾除去催化劑。在真空下濃縮濾液至20ml，通過在用200ml 1.5M鹽酸酸化后用乙酸乙酯提取除去未反應(yīng)的起始原料。將水溶液相濃縮至干并再溶解于400ml THF和343ml 1M NaOH中。加入30g Boc-酐在100ml THF中的溶液，將混合物攪拌一夜。然后用1N HCl將反應(yīng)混合物酸化到pH3，用3×300ml EtOAc抽提。將有機相蒸發(fā)成泡沫狀。產(chǎn)量為22g?？s寫r.t. 室溫EDAC N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺氫氯化物EtOAc 乙酸乙酯Boc叔-丁氧羰基N-Me-D-2NalN-甲基-D-2-萘基丙氨酸DCM二氯甲烷DIEA 二異丙基乙基胺DMFN，N-二甲基甲酰胺HOAt 1-羥基-7-氮雜苯并三唑N-Me-D-Phe-醇 N-甲基-D-苯基丙氨醇TFA三氟乙酸THF四氫呋喃實施例23-((3-氨甲基苯甲?；?)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)N，N-二甲基氨基丙烷
將Boc-N-Me-D-Phe-OH(279mg)溶解在DMF(4ml)中，與HOBt(168mg)和EDAC(230mg)一起攪拌10分鐘。加入3-二甲氨基-1-丙基胺(188μl)，在室溫下攪拌混合物18小時，然后加入5％碳酸氫鈉水溶液(50ml)，用EtOAc(50ml)抽提所形成的混合物，在Na2SO4上干燥有機相，并在真空下濃縮成油狀物。
在室溫下使這一油狀物與TFA/DCM 1∶1(6ml)一起攪拌10分鐘。在通過氮氣流蒸發(fā)掉這一TFA/DCM后，將所形成的油狀物溶解在70％CH3CN(10ml)，1N HCl(3ml)和水(37ml)的混合物中，立即冷凍所形成的混合物并凍干。
將從凍干獲得的產(chǎn)物溶解在DMF(6ml)和DCM(12ml)中。在攪拌下向這一混合物中加入Boc-N-Me-D-2Nal-OH(494mg)，HOAt(204mg)，DIEA(171μl)，并在冷卻到℃后，加入EDAC(288mg)。在室溫下攪拌18小時小時后，通過氮氣流蒸發(fā)掉DCM，加入EtOAc(100ml)。用5％碳酸氫鈉水溶液(100ml)和用水(100ml)抽提這一混合物兩次，在Na2SO4上干燥，并在真空下濃縮成油狀物(480mg)。
在室溫下把這一油狀物與TFA/DCM 1∶1(6ml)一起攪拌10分鐘。在通過氮氣流蒸發(fā)掉這一TFA/DCM后，將所形成的油狀物溶解在70％CH3CN(10ml)中，加入1N HCl(1ml)和水(47ml)，立即冷凍所形成的混合物并凍干，產(chǎn)生一種油狀物(2HCl，H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-(CH2)3-N(CH3)2)。
將一半上述油狀物(2HCl，H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-(CH2)3-N(CH3)2)溶解在DCM(9ml)中，加入2滴DMF和DIEA(342μl)。
將這一溶液加入到Boc-3AMB-OH(503mg)和EDAC(192mg)在DCM(5ml)中的溶液(在室溫下已攪拌15分鐘)中。
在攪拌20小時后，在氮氣流下將反應(yīng)混合物濃縮成油狀，與5％碳酸氫鈉水溶液(100ml)一起攪拌15分鐘。
然后添加EtOAc(50ml)，分離有機相，并用5％碳酸氫鈉水溶液(100ml)和用水(100ml)抽提，然后在Na2SO4上干燥，并在真空下濃縮成油狀物(340mg)。
在室溫下把這一油狀物與TFA/DCM 1∶1(6ml)一起攪拌10分鐘。在通過氮氣流蒸發(fā)掉這一TFA/DCM后，將所形成的油狀物溶解在70％CH3CN(10ml)中，用水稀釋成終體積為50ml。
然后通過半制備型HPLC(8次)純化這一粗產(chǎn)物，采用類似于實施例中所描述的方法凍干。
通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+608.2原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+608.8原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為25.23分鐘和26.58分鐘。實施例33-(((3R)-3-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-N，N-二甲氨基丙烷
將一半在實施例2中以油狀物獲得的2HCl，H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-(CH2)3-N(CH3)2溶解在DCM(9ml)和2滴DMF中，加入DIEA(342μl)。
將這一溶液加入到Boc-(R)-3-哌啶甲酸(459mg)和EDAC(192mg)在DCM(5ml)中的溶液(在室溫下已攪拌15分鐘)中。
在攪拌20小時后，在氮氣流下將反應(yīng)混合物濃縮成油狀，與5％碳酸氫鈉水溶液(100ml)一起攪拌15分鐘。
然后添加EtOAc(50ml)，分離有機相，并用5％碳酸氫鈉水溶液(100ml)和用水(100ml)抽提，然后在Na2SO4上干燥，并在真空下濃縮成油狀物。
在室溫下把這一油狀物與TFA/DCM 1∶1(6ml)一起攪拌10分鐘。在通過氮氣流蒸發(fā)掉這一TFA/DCM后，將所形成的油狀物溶解在70％CH3CN(10ml)中，用水稀釋成終體積為50ml。
然后通過半制備型HPLC(5次)純化這一粗產(chǎn)物，采用類似于實施例中所描述的方法凍干。
通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+586.3原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+585.8原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為25.33分鐘和26.35分鐘。實施例42-(((3R)-3-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷
將Boc-N-Me-D-Phe-OH(279mg)溶解在DMF(10ml)中，與HOBt(168mg)和EDAC(384mg)一起攪拌10分鐘。加入2-(氨基乙基)-1-甲基-吡咯烷(290μl)和DIEA(171μl)，并在室溫下攪拌混合物20小時。然后將混合物濃縮成油狀物，使其溶解在50ml水中并凍干。將產(chǎn)物再溶解到25ml水中，然后上到Sep-PakC18柱(Waters part.#43345)上，該柱用0.03N鹽酸平衡過。用70％CH3CN(在0.03N鹽酸中)從Sep-Pak柱洗脫產(chǎn)物，在用水稀釋后通過凍干從洗脫物中分離產(chǎn)物。在室溫下將所形成的物質(zhì)與TFA/DCM1∶1(6ml)一起攪拌10分鐘。在這一步驟后，通過氮氣流蒸發(fā)掉TFA/DCM，將所形成的油狀物溶解在70％CH3CN(10ml)中，加入1N鹽酸(2ml)。在用水稀釋后通過凍干分離產(chǎn)物(50ml)。
將所形成的物質(zhì)溶解在DMF(3ml)中，并在室溫下在添加Boc-N-Me-D-2Nal-OH(329mg)，HOAt(136mg)，EDAC(230mg)和DIEA(171μl)后攪拌18小時。然后加入EtOAc(50ml)，用5％碳酸氫鈉水溶液(50ml)，用5％硫酸氫鉀水溶液(50ml)和用水(50ml)抽提這一混合物。用硫酸鈉干燥有機相，并在真空下濃縮成油狀物。
將這一油狀物在室溫下與TFA/DCM 1∶1(6ml)一起攪拌10分鐘。在這一步驟后，通過氮氣流蒸發(fā)掉TFA/DCM，將所形成的油狀物溶解在70％CH3CN(10ml)中，加入1N鹽酸(3ml)。在用水(50ml)稀釋后通過凍干分離產(chǎn)物。
將286mg這一凍干產(chǎn)物溶解在DCM(15ml)和DIEA(17μl)中。把這一溶液加入到Boc-(R)-3-哌啶甲酸(459mg)和EDAC(192mg)在DCM(10ml)中的溶液(其已在室溫下攪拌25分鐘)中。
在攪拌20小時后，通過氮氣流將反應(yīng)混合物濃縮成油狀物，然后再溶解到EtOAc(100ml)中，用5％碳酸氫鈉水溶液(50ml)，用5％硫酸氫鉀水溶液(50ml)和用水(50ml)抽提。用硫酸鈉干燥有機相，并在真空下濃縮成油狀物。
將這一油狀物在室溫下與TFA/DCM 1∶1(6ml)一起攪拌10分鐘。在這一步驟后，通過氮氣流蒸發(fā)掉TFA/DCM，將所形成的油狀物溶解在70％CH3CN(10ml)中，再用水稀釋至終體積50ml。
然后通過半制備型HPLC(3次)純化這一粗產(chǎn)物，采用類似于實施例中所描述的方法凍干。
通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+612.2原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+612.39原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1所限定的洗脫條件A1的RP-HPLC保留時間為25.80分鐘。實施例5(2R)-2-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me)-3-(2-萘基)丙醇
(R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲氨基)-3-(2-萘基)丙酸甲酯
將(R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酸(5.0g；16.4mmol)溶解在無水DMF(50ml)中。加入碘甲烷(6.2ml；98.4mmol)和氧化銀(I)(13.3g；57.4mmol)，將混合物攪拌一夜。過濾反應(yīng)混合物，用二氯甲烷(200ml)抽提濾液。用氰化鉀(2×50ml；5％)和水(3×75ml)洗滌有機相。干燥有機相(MgSO4)，在真空下除去溶劑。對殘余物用乙酸乙酯和庚烷(1∶2)為洗脫劑進行色譜分離(二氧化硅，5×40cm)，產(chǎn)生4.98g(R)2-(N-叔丁氧羰基-N-甲氨基)-3-(2-萘基)丙酸甲酯。1H-NMR(CDCl3)1.30，1.35(兩個s，9H)；2.71，2.75(兩個s，3H)；3.19，3.47(兩個m，2H)；3.74，3.77(兩個s，3H)；4.65，5.05(兩個dd，1H)；7.29-7.82(m，7H)(旋光異構(gòu)體混合物)(R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲氨基)-3-(2-萘基)丙酸
將(R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸甲酯(21.73g；65.57mmol)溶解在1，4-二噁烷(200ml)中，加入水(20ml)。反應(yīng)混合物在冰浴上冷卻，加入氫氧化鋰(1.73g；72.13mmol)。15分鐘后，加入水(140ml)，然后在室溫下攪拌反應(yīng)混合物另外3小時。加入乙酸乙酯(400ml)和水(300ml)，用硫酸氫鈉1M(110ml)將pH調(diào)節(jié)到2.5。進行相分離，用乙酸乙酯(200ml)提取水溶液相。合并的有機相用水(300ml)洗滌，干燥(MgSO4)，并在真空下除去溶劑，產(chǎn)生20.1g(R)2-(N-叔丁氧羰基-N-甲氨基)-3-(2-萘基)丙酸。1H-NMR(DMSO)1.18，1.21(兩個s，9H)；2.62，2.66(兩個s，3H)，3.11-3.58(m，2H)；4.75，4.90(兩個dd，1H)；7.48-7.88(m，7H)；1.85(s(br)，1H)(旋光異構(gòu)體混合物)(R)2-甲?；被?3-(2-萘基)丙酸。
將(R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酸(18.11g；84.14mmol)溶解在甲酸(204ml)中，逐滴加入乙酸酐(70ml)。將反應(yīng)混合物加熱到55℃和在室溫下攪拌3.5小時。逐滴加入冰冷水(70ml)，在0℃下攪拌20分鐘。過濾反應(yīng)混合物，用冰冷水(20ml)洗滌，產(chǎn)生20.26g(R)2-甲?；被?3-(2-萘基)丙酸。1H-NMR(DMSO)3.05(dd，1H)；3.27(dd，1H)；4.64(m，1H)；7.48-7.87(m，7H)；7.95(s，1H)；8.45(d，1H)；12.9(s(br)，1H)。(R)-甲氨基-3-(2-萘基)丙-1-醇
將(R)-2-甲?；被?3-(2-萘基)丙酸(4.37g；18mmol)溶解在無水四氫呋喃(100ml)中，并加入硼氫化鈉(1.6g；43.2mmol)。將碘(4.57g；18mmol)溶解在無水四氫呋喃(40ml)中并在40℃以下逐滴添加到反應(yīng)混合物中。在添加后，將反應(yīng)混合物加熱回流12小時。加入氫氧化鉀(50ml；20％)。用甲基叔丁基醚(4×50ml)抽提水溶液相。合并的有機層用飽和氯化鈉(150ml)洗滌，干燥(MgSO4)并在真空下除去溶劑。對殘余物用DCM/甲醇/氨(100∶10∶1)進行色譜分離(二氧化硅，5×40cm)，產(chǎn)生1.81g(R)甲氨基-3-(2-萘基)丙-1-醇。1H-NMR(CDCl3)2.43(s，3H)；2.88-3.05(m，3H)；3.10(s(br)，2H)；3.42(dd，1H)；3.69(dd，1H)；7.30-7.82(m，7H)。N-{(1R)-1-[N-((1R)-2-羥基-1-((2-萘基)甲基)乙基)-N-甲基氨基甲?；鵠-2-(2-萘基)乙基}-N-甲基氨基甲酸叔丁酯
將(R)-(N-叔丁氧羰基-N-甲氨基)-3-(2-萘基)丙酸(0.55g；1.67mmol)和(R)甲氨基-3-(2-萘基)丙-1-醇(0.38g；2.00mmol)溶解在二氯甲烷(15ml)和二甲基甲酰胺(7.5ml)中。將反應(yīng)混合物在冰浴上冷卻。加入1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.24g；2.09mmol)和N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亞胺氫氯化物(0.38g；2.0mmol)。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌12小時。在真空下使反應(yīng)混合物濃縮。加入乙酸乙酯(200ml)，用水(100ml)、碳酸氫鈉/碳酸鈉(pH9)(75ml)、硫酸氫鈉(75ml；10％)和水(100ml)洗滌有機溶液，并干燥(MgSO4)。在真空下除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯進行色譜分離(二氧化硅，2×45cm)，產(chǎn)生0.25g N-{(1R)-1-[N-((1R)-2-羥基-1-((2-萘基)甲基)乙基)-N-甲基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}-N-甲基氨基甲酸叔丁酯。1H-NMR(DMSO)0.80-1.99(幾個s，9H)；2.45-4.20(m，12H)；4.70-5.12(m，2H)(所選擇的峰，旋光異構(gòu)體混合物)。(2R)-N-((1R)-2-羥基-1-((2-萘基)甲基)乙基)-N-甲基-2-甲氨基-3-(2-萘基)丙酰胺
將N-{(1R)-1-(N-[(1R)-2-羥基-1-((2-萘基)甲基)乙基)-N-甲基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(0.25g；0.475mmol)溶解在DCM(3ml)中。加入三氟乙酸(1ml)，將反應(yīng)混合物攪拌20分鐘。在真空下除去溶劑。加入DCM(5ml)，在真空下除去并重復(fù)這一操作。將殘余物溶解在甲醇(5ml)中。添加碳酸氫鈉/碳酸鈉(5ml；pH9)，用乙酸乙酯(2×10ml)抽提溶液。干燥有機相(MgSO4)，除去溶劑，產(chǎn)生0.22g(2R)-N-((1R)-2-羥基-4-((2-萘基)甲基)乙基)-N-甲基-2-甲氨基-3-(2-萘基)丙酰胺。1H-NMR(CDCl3)1.70，2.37，2.45，2.93(四個s，6H)；2.56-3.05(m，2H)，3.52-3.85(m，7H)；4.25，4.97(兩個m，1H)；6.86-7.78(m，14H)(所選擇的峰，旋光異構(gòu)體混合物)。(2R)-2-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me)-3-(2-萘基)丙醇
將3-Boc-氨甲基苯甲酸(502.6mg)溶解在DCM(6ml)中，然后與EDAC(191.6mg)一起攪拌15分鐘轉(zhuǎn)變成對稱的酸酐。
將(2R)-N-((1R)-2-羥基-1-((2-萘基)甲基)乙基)-N-甲基-2-甲氨基-3-(2-萘基)丙酰胺(200mg)在DCM(5ml)中的溶液加入到這一混合物中，然后在室溫下反應(yīng)20小時。
接著將反應(yīng)混合物濃縮成油狀物，并再溶解到EtOAc(100ml)中。將這一溶液依次用5％NaHCO3水溶液(2×50ml)，5％KHSO4水溶液(2×50ml)和H2O(2×50ml)提取。用Na2SO4干燥所形成的有機相，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上真空濃縮成油狀物。然后將油狀物溶解在DCM/TFA1∶1(6ml)中并攪拌。10分鐘后，通過氮氣流濃縮混合物，將所形成的油狀物再溶解到70％CH3CN/0.1％TFA(5ml)中，用水稀釋到100ml體積。
然后通過半制備型HPLC(2次)純化這一粗產(chǎn)物，采用類似于實施例中所描述的方法凍干。
通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+559.5原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+560.72原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為33.07分鐘和34.63分鐘。實施例6H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
按照Fmoc策略在Applied Biosystems 431肽合成儀上以0.22mmol規(guī)模合成肽，其中使用制造商提供的FastMoc UV方案(其在NMP和UV監(jiān)測Fmoc保護基的脫保護中采用HBTU介導(dǎo)的偶聯(lián))。用于合成的起始樹脂是cat.#D-1675(來源于Bachem Feinchemikalien AG，Bubendorf，Switzerland)427mg，它是通過酰胺鍵連接到氨甲基聚苯乙烯樹脂上的Fmoc-2，4-二甲氧基-4′-(羧甲氧基)-二苯甲基-胺。取代額為0.55mmol/g。所使用的保護的氨基酸衍生物是Fmoc-N-Me-D-Phe-OH、Fmoc-D-2Nal-OH、Fmoc-His(Trt)和Fmoc-Aib-OH。以雙偶聯(lián)進行Fmoc-N-Me-D-Phe-OH的偶聯(lián)。合成后，通過在室溫下與8m1 TFA、600mg苯酚、200μl乙二硫醇，400μl苯硫基甲烷和400μl H2O的混合物一起攪拌180分鐘從750mg肽樹脂上裂解下肽。過濾裂解混合物，通過氮氣流將濾液濃縮到約2ml。用50ml二乙醚從這一油狀物沉淀粗肽，并用50ml二乙醚洗滌2次。
干燥粗肽，并通過半制備型HPLC(1次)純化，采用類似于實施例中所描述的方法凍干。
通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+598.5原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+598.73原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為24.68分鐘和25.58分鐘。實施例7H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Ser-NH2
采用與實施例6中所描述的類似的方法合成這一化合物。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+685.6原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+685.81原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為24.42分鐘和25.92分鐘。實施例8(3-氨甲基苯甲?；?-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
采用與實施例6中所描述的類似的方法合成這一化合物。不同之處僅在于采用HATU為活化劑進行Fmoc-D-2Nal-OH的偶聯(lián)。在DIEA(2mmol)存在下用1mmol HATU使H-N-Me-D-Phe-樹脂(0.23mmol)與1mmol Fmoc-D-2Nal-OH偶聯(lián)150分鐘。
通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+511.2原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+509.6原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為30.73分鐘和32.47分鐘。實施例9(4-哌啶羰基)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
采用與實施例8中所描述的類似的方法合成這一化合物。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+486.8原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+487.6原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為27.03分鐘和28.48分鐘。實施例10((3R)-3-哌啶羰基)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
采用與實施例8中所描述的類似的方法合成這一化合物。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+486.9原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+487.6原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為28.03分鐘和29.50分鐘。實施例11(3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
采用與實施例8中所描述的類似的方法合成這一化合物。不同之處在于通過使用對稱的酸酐偶聯(lián)引入最后的殘基。將Boc-3-氨甲基苯甲酸(251mg)與EDAC(96mg)在DCM中攪拌15分鐘。然后添加樹脂(429mg)，連續(xù)攪拌18小時。其它不同之處是用于從樹脂裂解肽的時間減少至60分鐘。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+522.9原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+523.6原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為28.83分鐘和30.13分鐘。實施例12H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
采用與實施例8中所描述的類似的方法合成這一化合物。其中采用HATU偶聯(lián)Fmoc-N-Me-D-2Nal-OH和Fmoc-His(Trt)，用于從樹脂裂解肽的時間減少至60分鐘。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+612.3原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+612.8原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為24.33分鐘和26.20分鐘。實施例13(3-氨甲基苯甲酰基)-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
采用與實施例8中所描述的類似的方法合成這一化合物。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+587.2原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+586.74原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為21.13分鐘和22.60分鐘。實施例14(3-氨甲基苯甲酰基)
采用與實施例11中所描述的類似的方法合成這一化合物。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+601.6原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+601.77原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為20.40分鐘和21.70分鐘。實施例15((3R)-3-哌啶羰基)-N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
采用與實施例11中所描述的類似的方法合成這一化合物。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+579.4原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+579.8原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為19.88分鐘和21.20分鐘。實施例16H-Aib-His-N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
采用與實施例11中所描述的類似的方法合成這一化合物。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+690.6原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+690.9原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為15.71分鐘和17.82分鐘。實施例17((3R)-3-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
采用與實施例11中所描述的類似的方法合成這一化合物。采用Fmoc-N-Me-D-Phe-OH、Fmoc-N-Me-D-2Nal-OH和Boc-(R)-3-哌啶甲酸，其中Fmoc-N-Me-D-2Nal-OH和Boc-(R)-3-哌啶甲酸兩者用HATU偶聯(lián)。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+500.7原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+501.7原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為28.18分鐘和29.55分鐘。實施例18H-Aib-Ala-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
采用與實施例6中所描述的類似的方法合成這一化合物。通過分析型RP-HPLC(保留時間)和通過等離子解吸質(zhì)譜(分子量)確定所獲得的終產(chǎn)物的特征。在方法的實驗誤差的范圍內(nèi)所測得的分子量(MH+660.7原子質(zhì)量單位)與所預(yù)期的結(jié)構(gòu)(teor.MH+660.8原子質(zhì)量單位)一致。
采用實施例1中所限定的洗脫條件A1和B1的RP-HPLC保留時間分別為25.63分鐘和26.75分鐘。實施例19H-3-氨甲基苯甲?；?N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH3
將Boc-3AMB-OH(115mg，0.458mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(62mg，0.458mmol)和1-乙基-3(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺氫氯化物(97mg，0.504mmol)溶解在DCM(8ml)和DMF(1ml)中，并攪拌15分鐘。將N-甲基-2-甲氨基-N-((1R)-1-(甲基氨基甲?；?-2-苯乙基)-3-(2-萘基)丙酰胺(185mg，0.458mmol)溶解在DCM(5ml)中，添加進上一溶液中，接著添加二異丙基乙胺(80ml，0.458mmol)，將混合物攪拌20小時。
用碳酸氫鈉(50ml，5％)、H2O(50ml)和飽和NaCl/H2O(50ml)洗滌有機相，用硫酸鈉干燥，并在真空下蒸發(fā)。將殘余物溶解在DCM(2ml)中，用TFA(2ml)處理10分鐘。用氮氣流除去揮發(fā)物。將殘余物溶解在50ml20％MeCN中，用H2O稀釋到500ml。半制備型HPLC10ml/分鐘。，5次，30-40％MeCN/0.1M(N4)2SO4，pH2.5檢測波長276nm，Sep-Pals，70％MeCN/0.1％TFA，凍干PD-MS理論值536.7實測值535.7±1HPLC A1保留時間31.20分鐘B1保留時間36.35分鐘實施例20H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NHMe
將Fmoc-L-His(三苯甲基)-OH(1.54g，2.48mmol)(BACHEM B-1570)和1-羥基氮雜苯并三唑(338mg，2.48mmol)溶解在9ml DMF中，冷卻到0-4℃，加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺氫氯化物(475mg，2.48mmol)。將反應(yīng)混合物在0-4℃下攪拌15分鐘。
將N-甲基-2-甲氨基-N-((1R)-1-(甲基氨基甲?；?-2-苯乙基)-3-(2-萘基)丙酰胺(500mg，1.24mmol)溶解在二氯甲烷(18ml)中，冷卻到0-4℃，加入到上一溶液中，在0-4℃下攪拌1小時，接著添加二異丙基乙胺(0.425ml，2.48mmol)。將混合物溫度慢慢提高到室溫，將混合物攪拌72小時。在氮氣流中蒸發(fā)DCM，向混合物中加入100ml乙酸乙酯，并用碳酸氫鈉(2×100ml，5％)和硫酸氫鉀(100ml，5％)洗滌。進行相分離，用硫酸鈉干燥有機相并在真空下蒸發(fā)。將殘余物溶解在DMF(8ml)中，用哌啶處理15分鐘。用H2O(100ml)稀釋，用乙酸(1.5ml)淬火。添加乙腈，將混合物用H2O稀釋到250ml。將澄清的溶液上到10g″Seppaks″#Water柱(用H2O/0.03M HCl洗滌和用50ml35％MeCN/0.03M HCl洗脫過)上。用H2O稀釋到200ml并凍干。
將Boc-α氨基異丁酸(756mg，3.72mmol)、1-羥基氮雜苯并三唑水合物(506mg，3.72mmol)和1-乙基-3(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺氫氯化物(713mg，3.72mmol)溶解在DMF(6ml)中，15分鐘后，加入H-L-His(三苯甲基)-NMeD2Nal-NMeDPhe-NHCH3，2HCL(溶解在DCM(12ml)中)，接著添加二異丙基乙胺(0.637ml)，攪拌72小時。在氮氣流中蒸發(fā)DCM，向混合物中加入100ml乙酸乙酯，并用碳酸氫鈉(2×50ml，5％)和硫酸氫鉀(50ml，5％)洗滌。進行相分離，用硫酸鈉干燥有機相并在真空下蒸發(fā)。將殘余物溶解在DCM(6ml)中，冷卻到0-4℃，在0-4℃下用TFA(6ml)處理10分鐘。用氮氣流除去揮發(fā)物。將油狀殘余物溶解在35ml70％乙腈中，用H2O稀釋到50ml，加入10ml濃鹽酸(12mol)，攪拌72小時。用水將混合物稀釋到200ml，固體碳酸鈉中和，最后用H2O稀釋到400ml。半制備型HPLCPD-MS，理論值550.7，實測值550.1HPLC A1保留時間31.75分鐘B1保留時間36.15分鐘實施例213-甲基氨甲基苯甲?；?N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH3
將Boc-NMe3AMB-OH(658mg，2.48mmol)、1-羥基氮雜苯并三唑水合物(338mg，2.48mmol)和1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺氫氯化物(475mg，2.48mmol)溶解在6ml DMF中，并攪拌15分鐘。加入溶解在二氯甲烷(12ml)中的N-甲基-2-甲氨基-N-((1R)-1-(甲基氨基甲?；?-2-苯基乙基)-3-(2-萘基)丙酰胺(500mg，1.24mmol)，接著添加二異丙基乙胺(0.425ml，2.48mmol)。將混合物攪拌20小時。
在氮氣流中蒸發(fā)DCM，向混合物中加入75ml乙酸乙酯，并用碳酸氫鈉(2×50ml，5％)和硫酸氫鉀(50ml，5％)洗滌。進行相分離，用硫酸鈉干燥有機相并在真空下蒸發(fā)。將殘余物溶解在10ml二氯甲烷中，冷卻到0-4℃，在0-4℃下用TFA(10ml)處理10分鐘。用氮氣流除去揮發(fā)物。將油狀殘余物溶解在25ml70％MeCN/0.1％TFA中，用H2O稀釋到600ml。半制備型HPLC大柱，40ml/分鐘，8次28-40&P11(NH4)2SO4，276nM。Seppak，凍干PD-MS理論值550.7，實測值550.1HPLC A1保留時間31.75分鐘B1保留時間36.15分鐘實施例22哌啶-4-羧酸N-((1R)-1-(N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨基甲?；?乙基)-N-甲基氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基)-N-甲酰胺
(2R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲基氨基)-3-(4-碘苯基)丙酸
按照Can J.Chem.(1977)，55，906的描述制備。1H-NMR(CDCl3)d 1.34(s，4.5H)，1.38(s，4.5H)，2.70(s，1.5H)，2.75(s，1.5H)；2.85-3.10(m，1H)，3.2-3.4(m，1H)；4.4-4.6(m，0.5H)，6.9-7.0(m，2H)，7.62(d，J＝10Hz，2Hz)，9.5-10(bs，1H)。N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨基甲?；?乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯
將(2R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲基氨基)-3-(4-碘苯基)丙酸(2.00g，4.9mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中。加入羥基苯并三唑水合物(0.67g，4.9mmol)和1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亞胺氫氯化物(0.99g，4.9mmol)，將混合物攪拌15分鐘。加入甲胺(0.38g40％的甲醇溶液，4.9mmol)，將混合物攪拌一夜。加入二氯甲烷(40ml)，用飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)和硫酸氫鈉溶液(10％，50ml)洗滌混合物。干燥有機相(MgSO4)，并在真空下除去溶劑。對殘余物在二氧化硅(2.5×20cm)上用乙酸乙酯/庚烷(2∶1)為洗脫劑進行色譜分離，產(chǎn)生1.77g N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨基甲?；?乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯。1H-NMR(CDCl3)(主要旋光異構(gòu)體的所選擇的峰)d1.39(s，9H)；2.75(s，3H)；2.80(d，3H)；3.29(dd，1H)；4.88(t，1H)。(2R)-3-(4-碘苯基)-N-甲基-2-(甲氨基)丙酰胺
將N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨甲?；?乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(1.7g；4.0mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)中，加入三氟乙酸(5ml)。將混合物攪拌1小時。加入二氯甲烷(30ml)和水(30ml)。加入固體碳酸氫鈉至pH8。分離有機相，干燥(MgSO4)，并在真空下蒸發(fā)，產(chǎn)生1.22g(2R)-3-(4-碘苯基)-N-甲基-2-(甲氨基)丙酰胺。H-NMR(CDCl3)d 2.28(s，3H)；2.68(dd，1H)；2.81(d，3H)；3.08-3.19(m，2H)；6.95(d，2H)；7.63(d，2H)。N-甲基-N-((1R)-l-(N-甲基-N-((1R)-1-(甲基氨基甲酰基)-2-(4-碘苯基)乙基)氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
將(2R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲氨基)-3-(2-萘基)丙酸(1.10g；3.30mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)中，加入HOAt(0.45g，3.1mmol)和EDAC(0.66g，3.5mmol)。攪拌15分鐘后，加入(2R)-3-(4-碘苯基)-N-甲基-2-(甲氨基)丙酰胺(1.0g，3.1mmol)和二異丙基乙胺(0.45g，3.4mmole)，將混合物攪拌一夜。加入二氯甲烷(30ml)，用飽和碳酸氫鈉水溶液(30ml)和硫酸氫鈉溶液(10％，30ml)洗滌混合物。干燥有機相(MgSO4)，在真空下除去溶劑。對殘余物在二氧化硅(2.5×20cm)上用乙酸乙酯/庚烷(2∶1)為洗脫劑進行色譜分離，產(chǎn)生1.74g N-甲基-N-((1R)-1-(N-甲基-N-((1R)-1-(甲基氨基甲?；?-2-(4-碘苯基)乙基)氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。1H-NMR(CDCl3)(主要旋光異構(gòu)體的所選擇的峰)d1.38(s，9H)；2.18(d，3H)；2.45(s，3H)；2.75(s，3H)；5.05(m，1H)；5.42(m，1H)。(2R)-N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨基甲?；?乙基)-N-甲基-2-甲氨基-3-(2-萘基)丙酰胺
將N-甲基-N-((1R)-1-(N-甲基-N-((1R)-1-(甲基氨基甲?；?-2-(4-碘苯基)乙基)氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯溶解在二氯甲烷和三氟乙酸的混合物中，攪拌15分鐘。加入二氯甲烷(20ml)和水(30ml)。加入固體碳酸氫鈉至pH8。分離有機相，干燥(MgSO4)并在真空下蒸發(fā)，產(chǎn)生1.40g(2R)-N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨基甲?；?乙基)-N-甲基-2-甲氨基-3-(2-萘基)丙酰胺。1H-NMR(CDCl3)(主要旋光異構(gòu)體的所選擇的峰)d1.79(s，3H)；2.02(d，3H)；2.55(s，3H)；3.78(dd，1H)；5.44(dd，1H)。4-(N-((1R)-1-(N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨基甲?；?乙基)-N-甲基氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基氨基甲?；?哌啶-1-羧酸叔丁酯
將1-叔丁氧羰基哌啶4-羧酸(143mg，0.66mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)中，加入HOAt(90mg，0.66mmol)和EDAC(140mg，0.73mmol)。攪拌15分鐘后，加入(2R)-N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨基甲?；?乙基)-N-甲基-2-甲氨基-3-(2-萘基)丙酰胺(350mg，0.66mmol)和二異丙基乙胺(85mg，0.66mmol)并將混合物攪拌一夜。加入二氯甲烷(20ml)，用飽和碳酸氫鈉水溶液(20ml)和硫酸氫鈉溶液(10％，20ml)洗滌混合物。干燥有機相(MgSO4)，在真空下除去溶劑。對殘余物用乙酸乙酯為洗脫劑進行二氧化硅(2.5×20cm)色譜分離，產(chǎn)生412mg4-(N-((1R)-1-(N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨基甲酰基)乙基)-N-甲基氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基氨基甲?；?哌啶-1-羧酸叔丁酯。
將4-(N-((1R)-1-(N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨基甲酰基)乙基)-N-甲基氨基甲?；?-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基氨基甲?；?哌啶-1-羧酸叔丁酯(412mg 0.56mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)和三氟乙酸(5ml)的混合物中，攪拌5分鐘。加入二氯甲烷(20ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(20ml)。加入固體碳酸氫鈉至pH8。進行相分離，干燥有機相(MgSO4)并蒸發(fā)，產(chǎn)生255mg標題化合物。1H-NMR(CDCl3)(主要旋光異構(gòu)體的所選擇的峰)d2.32(d，3H)；2.58(s，3H)；2.68(s，3H)；5.33(m，1H)；5.84(t，1H)。HPLC保留時間＝33.35分鐘(A1)PDMSm/z 640.8(M+H)+?？s寫HBTU O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽NMPN-甲基吡咯烷酮HATU O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽Trt- 三苯甲基HOBT 7-羥基苯并三唑水合物3-AmB 3-氨甲基苯甲?；鵑-Me-3-AMB 3-甲基氨甲基苯甲?；?br> 權(quán)利要求
1.通式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽A-B-C-D(-E)pI其中p是0或1；A是氫或R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)sCO-，其中q是0或選自下組的整數(shù)1，2，3，4，5；r是0或1；s是0或選自下組的整數(shù)1，2，3，4，5；R1是氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基或N(R2)-R3，其中R2和R3各自分別是氫或低級烷基(可被可不被一個或多個羥基、吡啶基或呋喃基取代的)；并且，當r是1時X是-NH-、-CH2-、-CH＝CH-、-C(R16)(R17)-；
其中R16和R17各自分別是氫或低級烷基；B是(G)t-(H)u，其中t和u各自分別是0或1；G和H是氨基酸殘基，該殘基選自由天然L-氨基酸或它們的相應(yīng)的D-異構(gòu)體或非-天然氨基酸(例如1，4-二氨基丁酸、氨基-異丁酸、1，3二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、1，2，3，4-四氫降哈爾滿(norharman)-3-羧酸、N-甲基鄰氨基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、N-芐基甘氨酸、3-氨甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異-3-哌啶甲酸)組成的組；并且其中，當t和u兩者都是1時，G和H之間的酰胺鍵可以被可以不被Y-NR18-替代，其中Y是-CO-或-CH2-，且R18是氫、低級烷基或低級芳烷基；C是式-NH-CH((CH2)w-R4)-CO-的D-氨基酸，其中w是0，1或2；且R4選自由以下基團組成的組
以上各種可以是被或不被下列基團取代的鹵素、低級烷基、低級烷氧基、低級烷氨基、氨基或羥基；當p是1時，D是式-NR20-CH((CH2)k-R5)-CO-的D-氨基酸或者當p是0時，D是-NR20-CH((CH2)1-R5)-CH2-R6或-NR20-CH((CH2)m-Ru)-CR6，其中k是0，1或2；l是0，1或2；m是0，1或2；R20選自由低級烷基或低級芳烷基組成的組；R5選自由以下基團組成的組
以上各種可以是被或不被以下基團取代的鹵素、低級烷基、低級烷氧氨基或羥基；且R6是哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R7)-R8，其中R7和R8各自分別是氫或低級烷基；當p是1時，E是-NH-CH(R10)-(CH2)v-R9，其中v是0或選自下組的整數(shù)1，2，3，4，5，6，7，8；R9是氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基，-N(R11)-R12或
其中n是0，1或2，且R19是氫或低級烷基，
其中o是選自下組的整數(shù)1，2，3，R11和R12各自分別是氫或低級烷基或
以上各種可以是被或不被以下基團取代的鹵素、低級烷基、低級烷氧基、氨基、烷氨基、羥基或氨基和吡喃己糖或吡喃己糖基-吡喃己糖的Amadori重排產(chǎn)物，且當p是1時，R10選自由H、-COOH、-CH2-R13、-CO-R13或-CH2-OH組成的組，其中R13是哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R14)R15其中R14和R15各自分別是氫或低級烷基；除了C和D之間的鍵外，所有式I內(nèi)的酰胺鍵可以分別地由-Y-NR18替代；其中Y是-CO-或-CH2-，且R18是氫，低級烷基或低級芳烷基；但不包括下列化合物(3-氨甲基苯甲酰基)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2、H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2、H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2、3-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉代丙烷、2-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷、((3R)-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2、3-((3-氨甲基苯甲酰基)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉基丙烷、2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷、2-(((3R)-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷、2-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷、3-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉基丙烷、3-(((3R)-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉代丙烷、3-((3-氨甲基苯甲酰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉代丙烷、2-((3-氨甲基苯甲?；?-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷、2-(((3R)哌啶羰基)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷。
2.按照權(quán)利要求1的化合物，其中A是氫、3-AMB、N-Me-3-AMB或Aib。
3.按照權(quán)利要求1的化合物，其中t是1，u是0，且G選自由3-氨甲基苯甲?；?、3-哌啶甲酸和異3-哌啶甲酸組成的組。
4.按照權(quán)利要求1的化合物，其中t是1，u是1，G是Aib，且H選自由His，Phe和Ala組成的組。
5.按照權(quán)利要求1的化合物，其中C選自由D-2-Nal和D-Phe組成的組。
6.按照權(quán)利要求1的化合物，其中，當p是1時，D是D-Phe或D-2Nal。
7.按照權(quán)利要求1的化合物，其中，當p是0時，D是D-Phe-NH2或D-2Nal-NH2。
8.按照權(quán)利要求1的化合物，其中，當p是1時，E是-NH-CH(R10)-(CH2)v-R9，其中v是0或選自下組的整數(shù)1，2，3，4；R9是氫、嗎啉代、哌啶子基、N(R11)-R12或
其中n是0，1或2，R19是氫或低級烷基，R11和R12各自分別是氫或低級烷基，且當p是1時，R10選自由-H、-COOH、-CH2-R13、-CO-R13或-CH2-OH組成的組，其中R13是哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R14)-R15，其中R14和R15各自分別是氫或低級烷基。
9.按照權(quán)利要求1的化合物，其中A和B之間、B和C之間、D和(E)p之間以及G和H之間的至少一個酰胺鍵由-CO-N(CH3)-替代。
10.一種選自由以下化合物組成的組的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽(R)-2-((3-氨甲基苯甲酰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me)-3-苯基丙醇或其TFA鹽、3-((3-氨甲基苯甲酰基))-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-1N，N-二甲基氨基丙烷或其TFA鹽、3-(((3R)-3-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-N，N-二甲基氨基丙烷或其TFA鹽、2-(((3R)-3-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷或其TFA鹽、H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Ser-NH2，或其TFA鹽、(3-氨甲基苯甲?；?-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2，或其TFA鹽、(4-哌啶羰基)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2，或其TFA鹽、((3R)-3-哌啶羰基)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2，或其TFA鹽、(3-氨甲基苯甲?；?-D-Phe-N-Me-D-Phe-NH2，或其TFA鹽、(3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH2，或其TFA鹽、((3R)-3-哌啶羰基)-N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH2，或其TFA鹽、H-Aib-His-N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH2，或其TFA鹽、((3R)-3-哌啶羰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2或其TFA鹽、(2R)-2-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me)-3-(2-萘基)丙醇，或其TFA鹽、(3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2或其TFA鹽、3-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-Phe-NH)-1-N，N-二甲基氨基丙烷、H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2或其TFA鹽、(3-氨甲基苯甲酰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2、H-Aib-Ala-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2或其TFA鹽、H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2或其TFA鹽、2-((3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-嗎啉代乙烷、(3-氨甲基苯甲?；?-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-Me、3-((3-甲基氨甲基苯甲酰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-1-N，N-二甲氨基丙烷、(3-氨甲基苯甲酰基)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-N-Me2、H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2、3-氨甲基苯甲酰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH3，或其TFA鹽、3-甲氨基甲基苯甲酰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH3或其TFA鹽、H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NHMe或其HCl鹽、和哌啶-4-羧酸-N-((1R)-1-(N-((1R)-2-(4-碘苯基)-1-(甲基氨基甲?；?乙基)-N-甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲酰胺。
11.一種藥物組合物，該組合物包含作為活性成分的按照權(quán)利要求1到10之任一的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
12.以單位劑量形式的按照權(quán)利要求11的組合物，該組合物包含約10到約200mg按照權(quán)利要求1到10之任一的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
13.一種用于刺激生長激素從垂體釋放的藥物組合物，該組合物包含作為活性成分的按照權(quán)利要求1到10之任一的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
14.供口頭、經(jīng)皮、鼻、肺部或腸胃外施用的按照權(quán)利要求11、12或13的藥物組合物。
15.一種刺激生長激素從垂體釋放的方法，該方法包括向需要這種刺激的對象施用有效量的按照權(quán)利要求1到10之任一的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或按照權(quán)利要求11、12或14之任一的組合物。
16.按照權(quán)利要求15的方法，其中有效量的按照權(quán)利要求1到10之任一的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯在從每天約0.0001到約100mg/kg體重的范圍內(nèi)，優(yōu)選地從每天約0.001到約50mg/kg體重的范圍內(nèi)。
17.一種用于提高動物生長速率和生長程度從而提高動物奶或毛產(chǎn)量或者用于治療疾病的方法，該方法包含向需要這種刺激的對象施用有效量的按照權(quán)利要求1到10之任一的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或按照權(quán)利要求11、12或14之任一的組合物。
18.用作藥物的按照權(quán)利要求1到10之任一的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
19.按照權(quán)利要求1到10之任一的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于刺激生長激素從垂體釋放之藥物上的用途。
20.按照權(quán)利要求1到10之任一的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于提高動物生長速率和生長程度從而提高動物奶或毛產(chǎn)量或者用于治療疾病之藥物上的用途。
全文摘要
式A－B－C－D(E)p的化合物用于刺激生長激素從垂體釋放。
文檔編號C07K7/02GK1188484SQ9619494
公開日1998年7月22日 申請日期1996年6月19日 優(yōu)先權(quán)日1996年6月19日
發(fā)明者N·L·約翰遜, J·勞, K·曼德森, H·索格森, B·F·倫德特, B·派什克, T·K·漢森, B·S·漢森 申請人:諾沃挪第克公司