專利名稱：促生長(zhǎng)激素釋放類肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及促生長(zhǎng)激素釋放類肽，是新的肽衍生物，包括它們的組合物，以及它們?cè)谥委熡缮L(zhǎng)激素缺陷引起的疾病上的用途。屬于肽類化合物。
生長(zhǎng)激素是刺激組織生長(zhǎng)的激素。已知生長(zhǎng)激素對(duì)代謝過(guò)程具有許多作用(例如，刺激蛋白質(zhì)合成和游離脂肪酸動(dòng)員)和引起從碳水化合物至脂肪酸代謝的能量代謝轉(zhuǎn)換。生長(zhǎng)激素缺陷可以導(dǎo)致一些嚴(yán)重的疾病，例如，侏儒癥。
生長(zhǎng)激素從垂體釋放，這一釋放過(guò)程直接或間接地在一些激素與神經(jīng)遞質(zhì)的嚴(yán)格控制下。生長(zhǎng)激素釋放可以受到生長(zhǎng)激素釋放激素(CHRH)刺激和生長(zhǎng)激素釋放抑制因子的抑制。在兩種情況下，所述激素從下丘腦釋放，但是它們的作用主要經(jīng)由位于垂體的特異性受體介導(dǎo)。例如精氨酸、L-3、4-二羥基苯丙氨酸、胰高血糖素、后葉加壓素、PACAP(垂體腺苷酰環(huán)化酶激活肽)、毒草鹼受體興奮劑和合成的六肽、GHRP(生長(zhǎng)激素釋放肽)通過(guò)直接作用在垂體上或通過(guò)影響GHRH和/或生長(zhǎng)激素釋放抑制因子從下丘腦的釋放來(lái)釋放內(nèi)源性生長(zhǎng)激素。
在需要生長(zhǎng)激素增加水平的疾病或病態(tài)中，目前生長(zhǎng)激素的蛋白質(zhì)性質(zhì)決定只能腸胃外施用。此外，其他直接作用的天然促分泌劑(例如GHRH和PACAP)是高分子量的多肽，因此也只能腸胃外施用。經(jīng)檢索96l94947.3專利申請(qǐng)為該類化合物最新技術(shù)，但其分子大、易分解，也只能腸胃外施用，而且必須用固相合成法，不僅工藝控制難，而且收率低，成本高。
本發(fā)明的目的是提供一種分子結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易合成，成本低，口服時(shí)不易被酶或胃腸分解的小分子促生長(zhǎng)激素釋放類肽。
發(fā)明概述通式I給出了化合物結(jié)構(gòu)式A-B-C IA是氫或R′-(CH2)q-Xr(CH2)sCO-，其中q是0或選自下組的整數(shù)1、2、3、4、5；r是0或1；S是0或選自下組的整組1、2、3、4、5；R′是氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基或N(R2)-R3，其中R2和R3各自分別是氫或低級(jí)烷基(可被可不被一個(gè)或多個(gè)羥基、吡啶基或呋喃基取代的)；并且，當(dāng)r是1時(shí)，X是-NH-、-CH2-、-CH＝CH-、-C(R4)(R5)-、-CH(N(R6)(R7))-、
或
其中R4、R5、R6和R7各自分別是氫或低級(jí)烷基；B是(G)t-(H)u，其中t和u各自分別是0或1；G和H是氨基酸殘基，該殘基選自由天然L-氨基酸或它們的相應(yīng)的D-異構(gòu)體或非天然氨基酸(例如1、4-二氨基丁酸、氨基異丁酸、1、3-二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、1、2、3、4-四氫異喹啉-3-羧酸、1、2、3、4-四氫降哈爾滿(norharman)-3-羧酸、N-甲基鄰氨基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、N-芐基甘氨酸、3-氨甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異-3-哌啶甲酸)組成的；并且，當(dāng)t和u都是1時(shí)，G和H之間的酰胺鍵可被可不被Y-NR8-替代，其中Y是-CO-或-CH2-，且R8是氫低級(jí)烷基或低級(jí)芳烷基；
C是-(CH2)K-R9；其中K是0、1、2、3、4或5；R9是-N(R10)(R11)、
或
并且以上所有環(huán)上可被可不被一個(gè)或多個(gè)低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素或羥基取代。其中R10和R11是低級(jí)烷基(可被可不被一個(gè)或多個(gè)鹵素、羥基取代的。)在上述的結(jié)構(gòu)式和本說(shuō)明書全文中，下列術(shù)語(yǔ)具有所指出的含義以上所限定的低級(jí)烷基部分旨在包括那些指定長(zhǎng)度(優(yōu)選地具有1-6個(gè)碳原子)的線性、支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的烷基部分，線性烷基的例子是甲基、乙基、正丙基、丁基、戊基和已基。支鏈烷基的例子是異丙基、仲丁基、叔丁基、異戊基或異已基。環(huán)狀烷基的例子是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)已基。
以上所限定的低級(jí)烷基部分旨在包括那些指定長(zhǎng)度(優(yōu)選地具有1-6個(gè)碳原子)的線性，支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的邊遠(yuǎn)氧基部分。線性烷基的例子是甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和已氧基。支鏈烷基氧基的例子是異丙氧基、伸丁氧基、叔丁氧基、異戊氧基和異已氧基。環(huán)狀烷基的例子是環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基和環(huán)已氧基。
術(shù)語(yǔ)″鹵素″旨在包括F、CI、Br和I。
通用的三字母代碼用于代表天然氨基酸，例如ALa用于代表丙氨酸。
發(fā)明詳述在式I的化合物的優(yōu)選實(shí)例中，A是Aib、(pentyl)Aib或(2-hydroxyethy)Aib；t和u是1，G是D phe、D_Trp、D_a_Nal；H是Ala、D_pro、D_Hpro、D_His、Gly、D_Arg；C是piperidine、3-Methyl piperidine、diisobutylamide或dipentyamideamide。
本發(fā)明還優(yōu)選以下化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽Aib-D_phe-D_pro-piperidineAib-D_Trp-D_pro-3 MethylpiperidineAib-D_Trp-D_pro-diiso butylamideAib-D_Trp-D_pro-dipentylamide amide(pentyl)-D_Trp-D_pro-diisobutylamide(2-hydroxy ethyl)Aib-D_Trp-D_pro-diissobutylamide。
本發(fā)明還包括多種藥物組合物，該組合物包含作為活性成份的按照上述任一的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的任意組合。
上述類肽的用途，用于刺激人的生長(zhǎng)激素從垂體釋放或治療疾病時(shí)，可以上述一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽單獨(dú)用，也可以將上述所涉及的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽中的任意幾種的組合物使用，其有效劑量為每天0.001-100mg/Kg體重。
上述用途，可通過(guò)口服、經(jīng)皮、鼻、肺部或腸胃外施用，優(yōu)選劑量是每天0.01-50mg/Kg體重。
上述類肽的用途，用于提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度和程度，從而提高動(dòng)物奶、毛產(chǎn)量或質(zhì)量或治療疾病時(shí)，包括將上述涉及的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的每一種單獨(dú)使用或其中任意幾種的組合物使用均有效，其有效劑量是從0.0001-200mg/Kg體重。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是分子結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，可用液相合成法生產(chǎn)，工藝易控制，收率高，成本低，可口服，口服時(shí)不易被酶或胃腸道分解。
本發(fā)明的化合物的實(shí)施例舉下述幾種結(jié)構(gòu)式1、Aib-D_phe-D_pro-pioperidine
2、Aib-D_Trp-D_pro-3 Methylpiperidine
3、Aib-D_Trp-D_pro-diiso butylamide
4、Aib-D_Trp-D_pro-dipentylamide amide
5、(pentyl)-D_Trp-D_Pro-diisobutylamide
6、(2 hydroxy ethy)Aib-D_Trp-D_pro-diisobutylamide
現(xiàn)以Aib-D_Trp-D_pro-3 MethylpiperidineA-氨基-異丁酰-D-色氨酰-D-脯氨酰-3-甲基哌啶為例敘述其制作方法將1mmol的DBP轉(zhuǎn)入100ml圓底燒瓶中，加30ml無(wú)水CH2CL2，然后加入1mmolHOBT，同時(shí)在冰浴條件下，通氮攪拌。
將1.05mmolWSCHCL溶入10mlCH2CL2中，然后快速滴加至前述溶液。
將1.1mmol的MP溶于10ml無(wú)水CH2CL2溶液中，并滴加至前述混合溶液中，將反應(yīng)混合物室溫下攪拌18hr以上。
反應(yīng)畢，將反應(yīng)混合物用20ml 20％檸檬酸水溶液、20ml NaHCO3飽和水溶液、20mlNaCL飽和水溶液分別洗滌。分離有機(jī)相，并用無(wú)水MgSO4干燥。
過(guò)濾、真空濃縮，所得化合物以硅膠柱純化(用CHCL3∶MgOH＝95∶5為流動(dòng)相)，得白色固體。
在通氮條件下，將以下固體溶于25ml CH2CL2中，在攪拌下加入10mlTFA，繼續(xù)攪拌30min。真空蒸干所有揮發(fā)物質(zhì)，并將所得固體溶入30mlCH2CL2中，用10ml飽和NaHCO3溶液洗滌；分離有機(jī)相。
將有機(jī)相用無(wú)水Na2SO4干燥、過(guò)濾、真空濃縮。用色譜柱(SiO2)純化(CHCL3∶MeOH85∶15為流動(dòng)相)，得0.73mmol(73％)化合成PMP。
將此化合物用TLC和質(zhì)譜進(jìn)行鑒定M+＝195.3將25ml無(wú)水CH2CL2轉(zhuǎn)入100ml圓底燒瓶中，并加入0.70mmolDBT，然后加入0.70mmolHOBT，在冰浴下通N2攪拌。
將0.75mmolWSCHCL溶入15ml無(wú)水CH2CL2中，然后快速滴加至前述溶液中，將反應(yīng)物在0℃下攪拌1hr。
將0.71mmolPMP溶入20mlCH2CL2中，然后加滴至前述混合溶液中，繼續(xù)在室溫下攪拌18hr以上。
將反應(yīng)混合物分別用20ml 20％檸檬酸水溶液、20ml飽和NaHCO3水溶液、20mlNaCL飽和水溶液洗滌。分離有機(jī)相，并以無(wú)水MgSO4干燥。
過(guò)濾、真空濃縮。用色譜柱(CHCL3∶MeOH＝95∶5)進(jìn)一步純化，得白色固體。
在通氮條件下，將所得固體溶于25ml CH2CL2中，在攪拌條件下滴加10ml TFA，攪拌30min。真空抽干。所剩固體溶入30ml CH2CL2中，并用10ml飽和Na2HCO3溶液洗滌；分離有機(jī)相。
將有機(jī)相用無(wú)水NaHCO3干燥、過(guò)濾，將溶液真空抽干。用色譜柱(SiO2)純化(CHCL3∶MeOH＝85∶15)，得0.55mmol化合物TPMP。
用TLC及質(zhì)譜進(jìn)行鑒定M+＝381.5將30ml無(wú)水CH2CL2轉(zhuǎn)入100ml圓底燒瓶中，并將0.50mmol BA溶入其中。冰溶下攪拌通N2加入0.51mmol HOBT。
將0.55mmol WSCHCL溶入20ml無(wú)水CH2CL2中，并快速滴加入前述溶液中，0℃下攪拌1hr。
將0.51mmol TPMP溶入15ml CH2CL2中，滴加入前述混合溶液中，在溫下攪拌18hrc h。
反應(yīng)混合物分別用20ml20％檸檬酸水溶液、20ml飽和NaHCO3水溶液、20mlNaCL飽和水溶液洗滌。分離有機(jī)相，并以無(wú)水MgSO4干燥。
過(guò)濾、真空濃縮。用色譜柱(CHCL3∶MeOH＝95∶5)進(jìn)一步純化，得白色固體。
在通氮條件下，將所得固體溶于30ml CH2CL2中，在攪拌條件下滴加10mlTFA，攪拌30min。真空抽干。所剩固體溶入30ml CH2CL中，并用10ml飽和NaHCO3溶液洗滌；分離有機(jī)相。
將有機(jī)相用無(wú)水Na2SO4干燥、過(guò)濾，將溶液真空抽干。用色譜柱(SiO2)純化(CHCL3∶MeOH＝85∶15)，得0.43mmol標(biāo)題化合物。
用TLC及質(zhì)譜進(jìn)行鑒定M+＝467.15其他化合物的制作工藝基本與上述方法相同。
縮寫DBP D-叔丁氧羰基-脯氨酸HOBT羥基苯并三唑WSCHCL 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽MP 3-甲哌啶DBT D-叔丁氧羰基-色氨酸BA 叔丁氧羰基-a-氨基異丁酸。
權(quán)利要求
1.一種促生長(zhǎng)激素釋放類肽，包括通式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽及其組合物A-B-C IA是氫或R′-(CH2)q-Xr-(CH2)sCO-，其中q是0或選自下組的整數(shù)1、2、3、4、5；r是0或1；S是0或選自下組的整數(shù)1、2、3、4、5；R′是氨、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基或N(R2)-R3，其中R2和R3各自分別是氫或低級(jí)烷基，可被可不被一個(gè)或多個(gè)羥基、吡啶基或呋喃基取代的；并且，當(dāng)r是1時(shí)，X是-NH-、-CH2-、-CH＝CH-、-C(R4)(R5)-、-CH(N(R6)(R7))-、
或
其中R4、R5、R6和R7各自分別是氫或低級(jí)烷基；B是(G)t-(H)u，其中t和u各自分別是0或1；G和H是氨基酸殘基，該殘基選自由天然L-氨基酸或它們的相應(yīng)的D-異構(gòu)體或非天然氨基酸，例如1、4-二氨基丁酸、氨基異丁酸、1、3-二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶基氨酸、1、2、3、4-四氫異喹啉-3-羧酸、1、2、3、4-四氫降哈爾滿(norharman)-3-羧酸、N-甲基鄰氨基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、N-芐基甘氨酸、3-氨甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異-3-哌啶甲酸組成；并且，當(dāng)t和u都是1時(shí)，G和H之間的酰胺鍵可被可不被Y-NR8-替代，其中Y是-CO-或-CH2-，且R8是氫、低級(jí)烷基或低級(jí)芳烷基；C是-(CH2)K-R9；其中K是0、1、2、3、4或5；R9是-N(R10)(R11)、
或
并且以上所有環(huán)上可被可不被一個(gè)或多個(gè)低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、鹵素或羥基取代。其中R10和R11是低級(jí)烷基，可被可不被一個(gè)或多個(gè)鹵素或羥基取代的。
2.按照權(quán)利要求1的類肽，其化合物通式中A是Aib、penty Aib或2-hydroxyethyl Aib。
3.按照權(quán)利要求1的類肽，其化合物通式中t和u都是1，G是D Phe、D Tyr、D Trp、D a Nal；H是Ala、D Pro、D Hpro、D HiS、Gly、D Arg。
4.按照權(quán)利要求1的類肽，其化合物通式中C是piperidine、3-Methylpiperidine、diisobutyl amide或dipentylamide amide。
5.按照權(quán)利要求1的類肽，優(yōu)選以下化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽Aib-D_phe-D_pro-piperidineAib-D_Trp-D_pro-3-MethylpiperidineAib-D_Trp-D_pro-dipentylaminde amide(penty)Aib-D_Trp-D_pro-diisobutylamide(2-hydroxy ethyl)Aib-D_Trp-D_pro-diisobutylamide
6.上述類肽的用途，用于刺激人的生長(zhǎng)激素從垂體釋放或治療疾病時(shí)，可以每一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽單獨(dú)用，也可以將權(quán)利要求1-5所涉及的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽中的任意幾種的組合物使用，其有效劑量從每天0.001-100mg/Kg體重。
7.按照權(quán)利要求6的用途，可通過(guò)口服，經(jīng)皮、鼻、肺部或腸胃外施用，優(yōu)選劑量是每天0.01-50mg/Kg體重。
8.上述類肽的用途，用于提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度和程度，從而提高動(dòng)物奶、毛產(chǎn)量或質(zhì)量或治療疾病時(shí)，包括將權(quán)利要求1-5所涉及的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的每一種單獨(dú)使用或其中任意幾種的組合物使用均有效，其有效劑量是從0.0001-200mg/Kg體重。
全文摘要
本發(fā)明提供一種促生長(zhǎng)激素釋放類肽,包括通式中的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽及其組合物,通式為:A－B－C,A是氫或R′(CH
文檔編號(hào)C07K5/065GK1269364SQ9911641
公開日2000年10月11日 申請(qǐng)日期1999年4月5日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月5日
發(fā)明者徐進(jìn) 申請(qǐng)人:徐進(jìn)