生長激素釋放因子(grf)類似物及其用途
【專利摘要】本文描述了缺失賴氨酸-21、亮氨酸-22以及亮氨酸-23的生長激素釋放因子(GRF)類似物。這些類似物保留GRF活性。還描述了所述類似物例如作為GRF受體激動劑例如以誘導(dǎo)受試者或生物系統(tǒng)中的生長激素分泌的用途。
【專利說明】生長激素釋放因子(GRF)類似物及其用途
[0001]相關(guān)申請的交叉引用
[0002]本申請要求于2011年4月21日提交的美國臨時申請序列號61/477，775的權(quán)益，所述申請以全文引用的方式并入本文。
【技術(shù)領(lǐng)域】 [0003]本發(fā)明總體上涉及生長激素釋放因子(GRF)受體的激動劑及其用途。具體地說，本發(fā)明涉及GRF類似物及其用途。
【背景技術(shù)】
[0004]生長激素(GH)在哺乳動物的垂體前葉腺的生長激素細(xì)胞中產(chǎn)生并且在整個生命中都分泌。生長激素主要由以下兩種下丘腦肽在腦中進(jìn)行控制:GRF，其刺激生長激素的分泌和合成；和生長素抑制素，其抑制生長激素的分泌和合成。多種周圍因子調(diào)節(jié)GH分泌。其中，胰島素樣生長因子I (IGF-1)代表重要的一種，因為它是由肝響應(yīng)于GH而產(chǎn)生并且作用于下丘腦以便對GH分泌施加負(fù)反饋。
[0005]在人和動物中所證實的GH分泌隨著年齡而減少有利于朝著分解代謝進(jìn)行代謝轉(zhuǎn)換，所述分解代謝引發(fā)或參與生物體的老化。在老年人中所觀察到的肌肉質(zhì)量的損失、脂肪組織的累積、骨質(zhì)脫鈣、以及在損傷之后組織再生能力的損失與GH分泌的減少相關(guān)聯(lián)。
[0006]GH因此是在兒童的線性生長中所涉及的并且控制成人蛋白質(zhì)代謝的生理合成代謝劑。
[0007]GRF(還被稱為GH釋放激素或GHRH)是由下丘腦分泌的44個氨基酸的肽，所述GRF調(diào)節(jié)來自垂體前葉的生長激素細(xì)胞的GH的表達(dá)、合成以及釋放(Frohman LA等，Endocrine Reviewsl986，7:223-253)。由人 GRF 的前 29 個氨基酸組成的肽(hGRFa_29)；舍莫瑞林(sermorelin))保留全長肽的生物活性(Lance, V.A.等，Biochemical andBiophysical Research Communi cat ions 1984, 119:265-272)并且已經(jīng)在臨床上用于治療兒童 GH 缺乏癥(Thorner, M.等，Journal of Clinical Endocrinology andMetabolisml996, 81:1189-1196)。最近，已經(jīng)評估了 GRF逆轉(zhuǎn)生長激素細(xì)胞GH-胰島素樣生長因子(IGF)-1軸的功能中年齡相關(guān)的衰退的潛力(Khorram, 0.等，Clinical Obstetricsand Gynecology2001, 44:893-901)。
[0008]hGRF(1_29)的藥物制劑已經(jīng)可供用于臨床使用(Gere働，Laboratoires Serono
S.A.)。然而，它的藥理學(xué)價值受它的短的半衰期(在人中靜脈注射后大約12分鐘)限制，所述短的半衰期主要是由于它對快速酶降解的敏感性(Frohman, L.A.等，Journal ofClinical Investigation1986, 78:906-913)。
[0009]因此需要研發(fā)表現(xiàn)出對GRF受體或GHRH受體(GHRHr)的激動劑特性的新型的GRF類似物。
[0010]本說明書參考多個文獻(xiàn)，所述文獻(xiàn)的內(nèi)容以全文引用的方式并入本文。
[0011]發(fā)明概述[0012]本發(fā)明涉及GRF類似物及其用途。
[0013]第一方面，本發(fā)明提供一種生長激素釋放因子(GRF)類似物，其包含式(I)的域(SEQ IDNO:1):
[0014]Xl-X2-Asp-Ala-1le-Phe-Thr-X8-X9-Tyr-Xll-X12-X13-Leu-X15-Gln-Leu-X18-X19-Arg-Gln-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33(I)
[0015]其中:[0016]Xl 是 Tyr 或 His;
[0017]X2 是 Ala、D_Ala、Ser、Leu、α -氨基異丁酸(Aib)、Val 或 Gly ；
[0018]Χ8 是 Asn、Asp、Ala、Gin、Ser 或 Aib ；
[0019]X9 是 Ser、Asp 或 Ala ;
[0020]Xl I是Arg或L_高精氨酸；
[0021]X12是Lys、L-鳥氨酸或L-高精氨酸；
[0022]X13 是 Val 或 lie;
[0023]X15 是 Gly 或 Ala;
[0024]X18是Lys、L-鳥氨酸、L-2，4_ 二氨基丁酸、L-2，3_ 二氨基丙酸或Ser ；
[0025]X19 是 Ala 或 Leu ；
[0026]X22 是 Asp 或 Glu ；
[0027]X23 是 Ile 或 Leu;
[0028]X24 是 Met、lie、Nle 或 Leu ;
[0029]X25 是 Ser、Asn、Aib 或 Ala ;
[0030]X26 是 Arg、D-Arg, L-高精氨酸或 Lys ；
[0031 ]X27是Ala或不存在；
[0032]X28是Ala或不存在；
[0033]X29是Arg或不存在；
[0034]X30是Ala或不存在；
[0035]X31是Ala或不存在；
[0036]X32是Arg或不存在；
[0037]X33是HoSer或不存在；
[0038]并且其中如果X18是Ser，那么X27至X32或X27至X33存在，
[0039]或其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0040]在一個實施方案中，Xl是Tyr。
[0041]在一個實施方案中，X2是Ala或D-Ala。
[0042]在一個實施方案中，X8是Ala或Asp，在另一個實施方案中是Asp。
[0043]在一個實施方案中，X9是Ser。
[0044]在一個實施方案中，Xll是Arg。
[0045]在一個實施方案中，X12是Lys或L-高精氨酸，在另一個實施方案中是Lys。
[0046]在一個實施方案中，X15是Ala。
[0047]在一個實施方案中，X18是L-鳥氨酸或Lys，在另一個實施方案中是Lys。
[0048]在一個實施方案中，X22是Asp。[0049]在一個實施方案中，X23是lie。
[0050]在一個實施方案中，X24是Leu。
[0051]在一個實施方案中，X25是Ala或Ser，在另一個實施方案中是Ala。
[0052]在一個實施方案中，X26是Arg或D_Arg，在另一個實施方案中是Arg。
[0053]在一個實施方案中，X27是Ala。
[0054]在一個實施方案中，X28是Ala。
[0055]在一個實施方案中，X29是Arg。 [0056]在一個實施方案中，X30是Ala。
[0057]在一個實施方案中，X31是Ala。
[0058]在一個實施方案中，X32是Arg。
[0059]在一個實施方案中，X33是HoSer。
[0060]在另一個實施方案中，X27至X33中的至少一個不存在。在另一個實施方案中，X27至X33不存在。
[0061]在一個實施方案中，上述域是:
[0062]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R(SEQ ID NO:2)；
[0063]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-S-r(SEQ ID NO:3)；
[0064]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-aib-R(SEQ ID NO:4)；
[0065]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-0-A-R-Q-D-1-L-S-r(SEQ ID NO:5)；
[0066]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-0-A-R-Q-D-1-L-S-r(SEQ ID NO:6)；
[0067]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-S-r(SEQ ID NO:7)；
[0068]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:8)；
[0069]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-S-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:9)；
[0070]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:10)；
[0071 ] Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-L-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:11)；
[0072]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:12)；
[0073]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:13)；
[0074]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:14)；
[0075]Y-S-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:15)；
[0076]Y-G-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:16)；
[0077]Y-L-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:17)；
[0078]Y-G-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer(SEQ ID NO:18)；
[0079]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer(SEQ ID NO:19)；
[0080]其中a=D-Ala，O=L-鳥氨酸，Aib= α -氨基異丁酸，HoSer=L-高絲氨酸并且T=D-Arg0
[0081]在一個實施方案中，上述GRF類似物進(jìn)一步包含(i)氨基末端修飾基團(tuán)；(ii)羧基末端修飾基團(tuán)；或(iii) (i)和(ii)。
[0082]在另一個實施方案中，上述氨基末端修飾基團(tuán)是直鏈的或支鏈的飽和C1-C6酰基或不飽和C3-C6?；?。在又一個實施方案中，上述氨基末端修飾基團(tuán)是乙?；?Ac)。在另一個實施方案中，上述氨基末端修飾基團(tuán)是反式-3-己烯?；?。
[0083]在另一個實施方案中，上述羧基末端修飾基團(tuán)是NH2。
[0084]在實施方案中，上述GRF類似物是:
[0085]反式-3-己烯?；?br>
[0086]-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-NH2 (SEQ IDNO:20)；
[0087]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-S-r-NH2 (SEQ IDN0:21)；
[0088]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-aib-R-NH2 (SEQ IDNO:22)；
[0089]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-0-A-R-Q-D-1-L-S-r-NH2 (SEQ IDNO:23)；
[0090]反式-3-己烯?；?br>
[0091]-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-O-A-R-Q-D-1-L-St-NH2 (SEQ IDNO:24)；
[0092]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-S-r-NH2 (SEQ IDNO:25)；
[0093]反式-3-己烯?；?br>
[0094]-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ IDNO:26)；
[0095]反式-3-己烯?；?br>
[0096]-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-S-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:27)；
[0097]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:28)；
[0098]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-L-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:29)；
[0099]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:30)；
[0100]反式-3-己烯?；?br>
[0101]-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:31)；
[0102]反式-3-己烯酰基
[0103]-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:32)；
[0104]Y-S-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:33)；
[0105]Y-G-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:34)；
[0106]Y-L-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:35)；
[0107]Y-G-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer-NH2(SEQ ID NO:36);或
[0108]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer-NH2(SEQ ID NO:37)；
[0109]其中a=D_Ala, O=L-鳥氨酸，Aib= α -氨基異丁酸,并且 r=D_Arg。
[0110]在另一個實施方案中，上述GRF類似物是
[0111]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:28)。
[0112]在另一其它實施方案中，上述GRF類似物是
[0113]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-L-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:29)。
[0114]在另一其它實施方案中，上述GRF類似物是
[0115]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:30)。
[0116]在另一其它實施方案中，上述GRF類似物是反式-3-己烯?；?Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID N0:31)。
[0117]在另一其它實施方案中，上述GRF類似物是反式-3-己烯?；?Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:32)。
[0118]另一方面，本發(fā)明提供一種包含上述GRF類似物的藥物組合物。
[0119]在一個實施方案中，上述藥物組合物進(jìn)一步包含一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。
[0120]一方面，本發(fā)明提供一種用于誘導(dǎo)有需要的受試者中的生長激素分泌的方法，所述方法包括對所述受試者施用有效量的上述GRF類似物或藥物組合物。
[0121]另一方面，本發(fā)明提供上述GRF類似物或藥物組合物用于誘導(dǎo)受試者中的生長激素分泌的用途。
[0122]另一方面，本發(fā)明提供上述GRF類似物或藥物組合物用于制備用以誘導(dǎo)受試者中的生長激素分泌的藥劑的用途。
[0123]另一方面，本發(fā)明提供上述GRF類似物或藥物組合物，其用于制備用以誘導(dǎo)受試者中的生長激素分泌的藥劑。[0124]另一方面，本發(fā)明提供上述GRF類似物或藥物組合物，其用于誘導(dǎo)受試者中的生長激素分泌。
[0125]另一方面，本發(fā)明提供上述GRF類似物或藥物組合物作為藥劑的用途。
[0126]另一方面，本發(fā)明提供上述GRF類似物或藥物組合物，其用作藥劑。
[0127]在一個實施方案中，上述GRF類似物以約0.1mg至約20mg的日劑量施用或被適配來施用。
[0128]在實施方案中，上述GRF類似物是通過靜脈內(nèi)、口服、經(jīng)皮、皮下、經(jīng)粘膜、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、肺內(nèi)、腸胃外、直腸內(nèi)或局部，在其它實施方案中經(jīng)皮或皮下施用或被適配來施用。
[0129]本發(fā)明的其它目的、優(yōu)點以及特征將在閱讀其具體實施方案的以下非限制性描述時變得更明顯。
[0130]發(fā)明的公開內(nèi)容
[0131]本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了表現(xiàn)出對表達(dá)GHRHr的細(xì)胞的激動活性并且誘導(dǎo)動物模型中的GH分泌的新型的GRF類似物。
[0132]天然人GRF是具有以下結(jié)構(gòu)的44個氨基酸的肽:
[0133]Tyr-Ala-Asp-Ala-1le-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser~Ala~Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-1Ie-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu(SEQ ID NO:38)。
[0134]被稱為GRF(1_29)的GRF(1_44)的29個氨基酸N末端片段已經(jīng)顯示表現(xiàn)出與GRF(1_44)類似的生物活性和效力。grf(1_29)具有以下序列:
[0135]Tyr-Ala-Asp-Ala-1le-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser~Ala~Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-1Ie-Met-Ser-Arg(SEQ ID N0:39)。
[0136]GRF(1_29)與GRF(1_44)之間的中間體形式(在長度上)也具有GRF活性，所述中間體形式即，具有GRF(1_29)的序列，在所述序列的C末端添加I至14個氨基酸，所述氨基酸對應(yīng)于天然的人GRF的殘基30至43 (或其它殘基)。此外，已知在天然序列中具有一個或多個氨基酸取代的某些GRF變體具有GRF活性。
[0137]本發(fā)明的GRF類似物是GRF的變體及其活性片段和/或其變體，其包含在對應(yīng)于天然人GRF(1_44)的殘基21至23 (以上所描繪的序列中加下劃線的Lys-Leu-Leu)的位置處的3個氨基酸殘基缺失、其N末端片段GRF(1_29)、或以上所指出的中間體形式。本發(fā)明的GRF類似物可以進(jìn)一步包含對應(yīng)于位置18(在以上所描繪的序列中的斜體字)的絲氨酸的改變，優(yōu)選用Lys、L-鳥氨酸、L-2, 4- 二氨基丁酸或L-2，3- 二氨基丙酸取代天然人GRF(1_44)、其N末端片段GRF(1_29)、或以上所指出的中間體形式。這些GRF類似物表現(xiàn)出對表達(dá)GHRHr的細(xì)胞的激動活性，并且誘導(dǎo)動物模型中的GH分泌。
[0138]術(shù)語“GRF類似物”、“GRF受體激動劑”、“GRF肽”、“GRF肽化合物”或“肽化合物”
在本文可互換使用以指對表達(dá)GHRHr的細(xì)胞表現(xiàn)激動活性并且誘導(dǎo)動物模型中的GH分泌的本發(fā)明化合物，這些會在以下進(jìn)一步詳細(xì)地描述。
[0139]術(shù)語“GRF” (生長激素釋放因子)和“GHRH” (生長激素釋放激素)在本文可互換使用。類似地，術(shù)語“GRF受體”、“GRFr ”、“GHRH受體”以及“GHRHr ”在本文可互換使用。
[0140]本發(fā)明提供一種生長激素釋放因子(GRF)類似物，其包含式⑴的域(SEQ IDNO:1):
[0141]Xl-X2-Asp-Ala-1le-Phe-Thr-X8-X9-Tyr-Xll-X12-X13-Leu-X15-Gln-Leu-X18-X19-Arg-Gln-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33(I)
[0142]其中:
[0143]Xl 是 Tyr 或 His;
[0144]X2 是 Ala、D_Ala、Ser> Leu、α -氨基異丁酸(Aib)、Val 或 Gly ； [0145]Χ8 是 Asn、Asp、Ala、Gin、Ser 或 Aib ；
[0146]X9 是 Ser、Asp 或 Ala ;
[0147]Xl I是Arg或L_高精氨酸；
[0148]X12是Lys、L-鳥氨酸或L-高精氨酸；
[0149]X13 是 Val 或 lie;
[0150]X15 是 Gly 或 Ala;
[0151]X18是Lys、L-鳥氨酸、L-2，4_ 二氨基丁酸、L-2，3_ 二氨基丙酸或Ser ；
[0152]X19 是 Ala 或 Leu
[0153]X22 是 Asp 或 Glu;
[0154]X23 是 Ile 或 Leu;
[0155]X24 是 Met、lie、Nle 或 Leu ;
[0156]X25 是 Ser、Asn、Aib 或 Ala ;
[0157]X26 是 Arg、D-Arg, L-高精氨酸或 Lys ；
[0158]X27是Ala或不存在；
[0159]X28是Ala或不存在；
[0160]X29是Arg或不存在；
[0161 ]X30是Ala或不存在；
[0162]X31是Ala或不存在；
[0163]X32是Arg或不存在；
[0164]X33是HoSer或不存在；
[0165]并且其中如果X18是Ser，那么X27至X32或X27至X33存在，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0166]本發(fā)明進(jìn)一步提供一種生長激素釋放因子(GRF)類似物，其包含式(II)的域(SEQID NO:40):
[0167]Xl-X2-Asp-Ala-1le-Phe-Thr-X8-X9-Tyr-Xll-X12-X13-Leu-X15-Gln-Leu-X18-X19-Arg-Gln-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33(II)
[0168]其中:
[0169]Xl是任何氨基酸，在一個實施方案中是Tyr或His，在另一個實施方案中是Tyr ；
[0170]X2是任何氨基酸，在一個實施方案中是Ala、D-Ala、Ser、Leu、α-氨基異丁酸(Aib)、Val或Gly，在另一個實施方案中是Ala或D-Ala ；
[0171]X8是任何氨基酸，在一個實施方案中是Asn、Asp、Ala、Gin、Ser或Aib，在另一個實施方案中是Ala或Asp，在另一個實施方案中是Asp ；
[0172]X9是任何氨基酸，在一個實施方案中是Ser、Asp或Ala，在另一個實施方案中是Ser ；
[0173]XlI是任何氨基酸，在一個實施方案中是Arg或L-高精氨酸，在另一個實施方案中是 Arg ；
[0174]X12是任何氨基酸，在一個實施方案中是Lys、L_鳥氨酸或L-高精氨酸，在另一個實施方案中是Lys或L-高精氨酸，在又一個實施方案中是Lys ；
[0175]X13是任何氨基酸，在一個實施方案中是Val或Ala，在另一個實施方案中是Val ；
[0176]X15是任何氨基酸，在一個實施方案中是Gly或Ala，在另一個實施方案中是Ala ；
[0177]X18是任何氨基酸，在一個實施方案中是Lys、L-鳥氨酸、L~2, 4_ 二氨基丁酸酸或L-2, 3- 二氨基丙酸，在另一個實施方案中是Lys或L-鳥氨酸，在又一個實施方案中是Lys ；
[0178]X19 是 Ala 或 Leu;
[0179]X22是任何氨基酸，在一個實施方案中是Asp或Glu，在另一個實施方案中是Asp ；
[0180]X23是任何氨基酸，在一個實施方案中是Ile或Leu，在另一個實施方案中是Ile ；
[0181]X24是任何氨基酸，在一個實施方案中是Met、lie、Nle或Leu，在另一個實施方案中是Met或Leu，在另一個實施方案中是Leu ；
[0182]X25是任何氨基酸，在一個實施方案中是Ser、Asn、Aib或Ala，在另一個實施方案中是Ala或Ser，在又一個實施方案中是Ala ；
[0183]X26是任何氨基酸，在一個實施方案中是Arg、D-Arg、L_高精氨酸或Lys，在另一個實施方案中是Arg或D-Arg,在又一個實施方案中是Arg ；
[0184]X27是任何氨 基酸，在一個實施方案中是Ala，或不存在；
[0185]X28是任何氨基酸，在一個實施方案中是Ala，或不存在；
[0186]X29是任何氨基酸，在一個實施方案中是Arg，或不存在；
[0187]X30是任何氨基酸，在一個實施方案中是Ala，或不存在；
[0188]X31是任何氨基酸，在一個實施方案中是Ala或不存在；
[0189]X32是任何氨基酸，在一個實施方案中是Arg，或不存在；以及
[0190]X33是任何氨基酸，在一個實施方案中是HoSer，或不存在；
[0191]并且其中如果X18是Ser，那么X27至X32或X27至X33存在，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0192]如本文所用的術(shù)語“氨基酸”包括在肽化學(xué)法中用以制備肽的合成類似物的天然存在的氨基酸以及其它氨基酸(例如，天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸、不是由核酸序列編碼的氨基酸，等)的L-異構(gòu)體和D-異構(gòu)體。天然存在的氨基酸的實例是甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸，等。
[0193]其它氨基酸包括例如氨基酸的非遺傳編碼的形式，以及L-氨基酸的保守性取代。天然存在的非遺傳編碼的氨基酸包括例如丙氨酸、3-氨基-丙酸、2，3-二氨基丙酸、α-氨基異丁酸(Aib)、4_氨基-丁酸、N-甲基甘氨酸(肌氨酸)、羥基脯氨酸、鳥氨酸(例如，L-鳥氨酸)、瓜氨酸、叔丁基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、N-甲基異亮氨酸、苯基甘氨酸、環(huán)己基丙氨酸、正亮氨酸(Nle)、正纈氨酸、2-萘基丙氨酸、吡啶基丙氨酸、3-苯并噻吩基丙氨酸、4-氯苯基丙氨酸、2-氟苯基丙氨酸、3-氟苯基丙氨酸、4-氟苯基丙氨酸、青霉胺、1，2，3，4-四氫-異喹啉-3-甲酸、β -2-噻吩基丙氨酸、蛋氨酸亞砜、L-高精氨酸(Hoarg)、N-乙?；嚢彼?、2-氨基丁酸、2-氨基丁酸、2，4- 二氨基丁酸(D-或L-)、對氨基苯基甘氨酸、N-甲基纈氨酸、高半胱氨酸、高絲氨酸(HoSer)、半胱氨酸、ε -氨基己酸、δ -氨基戊酸、或2，3-二氨基丁酸(D-或L-)，等。這些氨基酸是生物化學(xué)/肽化學(xué)領(lǐng)域中熟知的。
[0194]在實施方案中，本發(fā)明的域或GRF類似物包括相對于上述域或GRF類似物具有含有功能上等效的氨基酸殘基的取代的改變序列的多肽。例如，所述序列內(nèi)的一個或多個氨基酸殘基可以被用作功能等效物的具有類似極性(具有類似的物理化學(xué)特性)的另一個氨基酸取代，從而導(dǎo)致沉默改變。用于所述序列內(nèi)的氨基酸的取代可以選自所述氨基酸所屬的類的其它成員。例如，帶正電荷的(堿性)氨基酸包括精氨酸、賴氨酸以及組氨酸(以及高精氨酸和鳥氨酸)。非極性(疏水性)氨基酸包括亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、脯氨酸、色氨酸以及蛋氨酸。不帶電荷的極性氨基酸包括絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺以及谷氨酰胺。帶負(fù)電荷的(酸性)氨基酸包括谷氨酸和天冬氨酸。氨基酸甘氨酸可以包括于非極性氨基酸家族抑或不帶電荷的(中性)極性氨基酸家族。氨基酸家族內(nèi)所進(jìn)行的取代通常被認(rèn)為是保守性取代。
[0195]上述域或GRF類似物可以包含所有L-氨基酸、所有D-氨基酸或L-氨基酸和D-氨基酸的混合物。在一個實施方案中，上述域或GRF類似物包含至少一個D-氨基酸(例如，
1、2、3、4、5或更多個D-氨基酸)。在一個實施方案中，上述域或GRF類似物包含至少一個D-Ala和/或D-Arg殘基。在一個實施方案中，所述至少一個D-氨基酸位于所述域或GRF類似物的N末端和/或C末端部分中(例如，在最后2或3個N末端和/或C末端殘基內(nèi))。一個或多個D-氨基酸的存在通常產(chǎn)生由于對蛋白酶/肽酶裂解的敏感性降低而穩(wěn)定性(例如，在體內(nèi))提高但保留生物活性的肽。
[0196]在實施方案中，上述GRF類似物是呈鹽，例如藥學(xué)上可接受的鹽的形式。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指保留母體化合物的生物活性并且不在生物學(xué)上或其它方面不合意的化合物的鹽。所述鹽可以在所述類似物的最終分離和純化期間原位制備或可以通過使游離堿官能團(tuán)與適合的酸反應(yīng)來單獨地制備。由于存在氨基和/或羧基或與其類似的基團(tuán)，因此本文所公開的許多GRF類似物能夠形成酸鹽和/或堿鹽。
[0197]藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可以從無機(jī)酸和有機(jī)酸制備。代表性酸加成鹽包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、癸酸鹽、二葡萄糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽(異硫代硫酸鹽)、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、辛酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽以及十一烷酸鹽。衍生自無機(jī)酸的鹽包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。衍生自有機(jī)酸的鹽包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸等。可以用于形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的酸的實例包括例如無機(jī)酸，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸以及磷酸；和有機(jī)酸，例如草酸、馬來酸、琥珀酸以及檸檬酸。
[0198]堿加成鹽還可以通過使含有羧酸的部分與適合的堿如藥學(xué)上可接受的金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽、或碳酸氫鹽或與氨或有機(jī)伯胺、仲胺或叔胺反應(yīng)來制備。藥學(xué)上可接受的鹽尤其包括但不限于基于堿金屬或堿土金屬，如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、以及鋁鹽等的陽離子；和無毒性的季氨和胺陽離子，包括銨、四甲基銨、四乙基銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、三乙基銨、二乙基銨、以及乙基銨等。適用于形成堿加成鹽的其它代表性有機(jī)胺包括例如乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。衍生自有機(jī)堿的鹽包括但不限于伯胺、仲胺以及叔胺的鹽。[0199]在一個實施方案中，在式(I)和/或(II)中，X30至X32不存在。在另一個實施方案中，X30至X33不存在。
[0200]在一個實施方案中，在式(I)和/或(II)中，X27至X29是如下:Ala-Ala_Arg。
[0201]在另一個實施方案中，在式(I)和/或(II)中，X27至X32不存在。在另一個實施方案中，X27至X33不存在。
[0202]在另一個實施方案中，在式⑴和/或(II)中，X18是Lys并且X27至X29、X27至X32或X27至X33存在。在一個實施方案中，X27至X32是如下:Ala-Ala-Arg-Ala-Ala-Arg(SEQ ID N0:41)。在一個實施方案中，X27 至 X33 是如下:Ala_AIa-Arg-Ala-Ala-Arg-HoSer(SEQ ID NO:42)。
[0203]在一個實施方案中，上述GRF類似物包含如以上所定義的式I或II的一個域。在一個實施方案中，上述GRF類似物包含如以上所定義的式I或II的兩個或更多個(例如，
2、3、4或5個)域。
[0204]在實施方案中，除以上所定義的式I或II的域之外，上述GRF類似物還可以包含共價連接至所述域的氨基末端和/或羧基末端的一個或多個氨基酸(天然存在的或合成的)。在一個實施方案中，上述GRF類似物在以上所定義的式(I)或(II)的域的N末端和/或C末端處包含多達(dá)25個另外氨基酸。在其它實施方案中，上述GRF類似物在以上所定義的式(I)或(II)的域的N末端和/或C末端處包含多達(dá)20、19、18、17、16、15、14、13、12、
11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、或I個另外氨基酸。在一個實施方案中，上述域或GRF類似物含有約100個殘基或更少，在其它實施方案中約90、80、70、60、50、40、或35個殘基或更少。在一個實施方案中，上述域或GRF類似物含有約26個殘基至約100個殘基。在另一個實施方案中，上述域或GRF類似物含有約26個殘基至約50個殘基。在另一個實施方案中，上述GRF類似物含有約26個殘基至約45個殘基。在另一個實施方案中，上述GRF類似物含有約26個殘基至約40個殘基。在另一個實施方案中，上述GRF類似物含有約26、27、28、29、30、31、
32、33、34、35、36、37、38 或 39 個殘基。
[0205]在一個實施方案中，上述域或GRF類似物是肽模擬物。肽模擬物通常以保留它的肽等效物的極性、三維大小以及官能度(生物活性)為特征，但是其中肽鍵/肽鍵聯(lián)中的一個或多個已經(jīng)經(jīng)常被更穩(wěn)定的鍵聯(lián)置換。一般來說，置換酰胺鍵的鍵(酰胺鍵替代物)保留酰胺鍵的許多或所有特性，例如構(gòu)象、空間體積、靜電性質(zhì)、氫鍵結(jié)潛力等。典型的肽鍵置換包括酯、多胺和其衍生物以及取代的烷烴和烯烴，如氨甲基和酮亞甲基。例如，上述域或GRF類似物可以具有被如-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH=CH-(順式或反式)、-CH2SO-、-CH(OH)CH2-或-COCH2-的鍵聯(lián)置換的一個或多個肽鍵聯(lián)。所述肽模擬物可以具有更大的化學(xué)穩(wěn)定性、增強(qiáng)的生物學(xué)/藥理學(xué)特性(例如，半衰期、吸收性、效力、效率，等)和/或相對于它的肽等效物減小的抗原性。
[0206]在實施方案中，GRF類似物由以上所定義的式(I)或(II)的域組成。[0207]在實施方案中，上述域包含以下序列中的一個:
[0208]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R(SEQ ID NO:2)；
[0209]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-S-r(SEQ ID NO:3)；
[0210]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-aib-R(SEQ ID NO:4)；
[0211]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-0-A-R-Q-D-1-L-S-r(SEQ ID NO:5)；
[0212]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-0-A-R-Q-D-1-L-S-r(SEQ ID NO:6)；
[0213]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-S-r(SEQ ID NO:7)；
[0214]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:8)；[0215]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-S-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:9)；
[0216]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:10)；
[0217]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-L-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:11)；
[0218]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:12)；
[0219]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:13)；
[0220]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:14)；
[0221 ] Y-S-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:15)；
[0222]Y-G-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:16)；
[0223]Y-L-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:17)；
[0224]Y-G-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer(SEQ ID NO:18)；
[0225]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer(SEQ ID NO:19)；
[0226]其中a=D_Ala，O=L-鳥氨酸，Aib= α -氨基異丁酸，HoSer=L-高絲氨酸并且T=D-Arg0
[0227]在另一實施方案中，上述域包含以下序列中的一個:
[0228]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:8)；
[0229]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-S-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:9)；
[0230]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQ8?
^ (8?:0Ν α? 53S)
930Η-Η-ν-ν-Η-ν-ν-Η-ν-?-τα-σ.-Η-ν-}Ι-?-σ.-ν-?-Λ?-Α-τα-χ-Η-Ι-ν-α-ο-Α 〔S ㈧S
^ (ZT:ON S
r.(9Τ:0Ν S
53s) H-v-v-H-v-v-H-v-l-1-a-5-H-v-}1-l-5-v-l-1\-}1-H-A-s-a-x-d-1-v-a-c)-A1--1
^ (9T:0N S
53s)H-v-v-H-v-v-H-v-l-1-a-5-H-v-}1-l-5-v-l-1\-}1-H-A-s-a-x-d-1-v-a-s-Aogs
^ (H: ON QH
^ (ετ:ΟΝ S
^ (ZT:ON S
^ (TT:ON S
53s)H-v-v-H-v-v-H-v-l-1-a-5-H-l-}1-l-5-v-l-1\-}1-H-A-s-a-x-d-1-v-a-f A SI
^ SSN S
Ss)芐 v-v-N-v-v-N-v--J-T-a-3.-芐 v-y--J-af-v--J-A-y-N-A-s-a-1-x--H-v-a-f a
^ (8:0N
αι 53s)〒ν-ν-〒ν-?-τα-5-〒v-}1-l-5-v-l-1\-}1-〒A-s-a-x-d-1-v-a-v-A
r.(z:ON Sσ.33.Ι-Τ?-?-α-σ.-Η-ν-}Ι-?-σ.-ν-?-Λ-}Ι-Η-Α-τα-χ-Η-Ι-ν-α-τ3-Α
^ (9: ON Sσ.33.Ι-Τ?-Ι-α-σ.-Η-ν-0-?-σ.-ν-?-Λ-}Ι-Η-Α-τα-χ-Η-Ι-ν-α-ν-Α
^ (9: ON Sσ.33.Ι-Τ?-Ι-α-σ.-Η-ν-0-?-σ.-ν-?-Λ-}Ι-Η-Α-τα-χ-Η-Ι-ν-α-?-Αogs
^ (寸:ON Saf3s)H-qTT3-l-1-a-5-H-v-}K1-5-v-l-1\-}1-H-A-s-a-x-d-1-v-a-T3-A 〔茺
^ (ε:ΟΝ S SSH-s-l-1-a-5-H-v-}K1-5-v-l-1\-}1-H-A-s-a-x-d-1-v-a-T3-A 〔莢
^ (z:ON Saf3s)H-v-l-Ta-5-H-v-}K1-5-v-l-1\-}1-H-A-s-a-x-d-1-v-a-v-A Pss
? 〔9ε3β
?T3JV-a=T3 frM〔g§J乂H:ON QH
53s)H-v-v-H-v-v-H-v-l-l-a-5-H-v-}1-l-5-v-l-1\-}1-H-A-s-a-x-d-1-v-a-v-A
(π:ΟΝ QH
53s)H-v-v-H-v-v-H-v-l-1-a-5-H-v-}1-l-5-v-l-1\-}1-H-A-s-a-x-d-1-v-a-v-A
r.(ZT:ON S
53s)H-v-v-H-v-v-H-v-l-l-a-5-H-v-}1-l-5-v-l-1\-}1-H-A-s-a-x-d-1-v-a-v-A
埽(π:ΟΝ QH
53s) H-v-v-H-v-v-H-v-l-1-a-5-H-l-}1-l-5-v-l-1\-}1-H-A-s-a-x-d-1-v-a-f A1--1
^ SSN S
罔寸 ε/c! < TSZSCOOT Zo[0254]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer(SEQ ID NO:19)；
[0255]其中a=D_Ala, O=L-鳥氨酸，Aib= α -氨基異丁酸，HoSer=L-高絲氨酸并且T=D-Arg0
[0256]在其它實施方案中，上述域是(或由以下組成):
[0257]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:8)；
[0258]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-S-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:9)；
[0259]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:10)；
[0260]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-L-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO: 11);或
[0261 ] Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:12)；
[0262]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO: 13);或
[0263]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:14)，
[0264]其中a=D_Ala。
[0265]在另一個實施方案中，上述域是
[0266]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:8)。
[0267]在另一個實施方案中，上述域是
[0268]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-S-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:9)。
[0269]在另一個實施方案中，上述域是
[0270]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO: 10)，其中 B=D-Ala0
[0271]在另一個實施方案中，上述域是
[0272]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-L-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO: 11)，其中 B=D-Ala0
[0273]在另一個實施方案中，上述域是
[0274]Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO: 12)，其中 B=D-Ala0
[0275]在另一個實施方案中，上述域是
[0276]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:13)。
[0277]在另一個實施方案中，上述域是[0278]Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQID NO:14)。
[0279]在實施方案中，上述GRF類似物或域的N末端和/或C末端氨基酸可以例如通過酰胺化、乙?；?、?；虮绢I(lǐng)域已知的任何其它修飾來進(jìn)行修飾。
[0280]因此，另一方面，本發(fā)明提供一種式(III)的GRF類似物。
[0281]Zl-Xl-X2-Asp-Ala-1le-Phe-Thr-X8-X9-Tyr-Xll-X12-X13-Leu-X15-Gln-Leu-Xl8-X19-Arg-Gln-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-Z2(III)
[0282]或
[0283]Zl-[式 I 或 II 的域]-Z2
[0284]其中
[0285]X1、X2、X8、X9、X11 至 X13、X15、X18、X19 以及 X22 至 X33 是如以上所定義；
[0286]Zl是氨基末端修飾或不存在；以及
[0287]Z2是羧基末端修飾或不存在。
[0288]在一個實施方案中，GRF類似物的氨基末端殘基(即，在N末端處的游離氨基)例如通過部分/化學(xué)基團(tuán)(Zl)的共價附接來進(jìn)行修飾(例如，用于防止降解)。在一個實施方案中，氨基末端修飾(ZI)是C1-C16或C3-C16?；?直鏈的或支鏈的，飽和的或不飽和的)，在另一個實施方案中，是飽和的C1-C6?；?直鏈的或支鏈的)或不飽和的C3-C6酰基(直鏈的或支鏈的)，在另一個實施方案中是乙?；?CH3-CO-, Ac)。在另一個實施方案中，Zl是附接至Xl的一個或多個氨基酸(例如，I至25個另外氨基酸，例如20、19、18、17、16、15、14、
13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、或I個氨基酸)的序列。在一個實施方案中，如果Zl不存在，那么X2是D~Ala。
[0289]在另一個實施方案中，氨基末端修飾(Zl)是包含5至8個原子的骨架的疏水性尾部；其中所述骨架可以被CV6烷基、c3_6環(huán)烷基、或c6_12芳基CV6烷基、c3_6環(huán)烷基、或c6_12芳基取代并且所述骨架包含連接至所述骨架的至少兩個原子的至少一個固定部分；并且所述固定部分是雙鍵、三鍵、飽和的或不飽和的C3_9環(huán)烷基或c6_12芳基。在另一個實施方案中，Zl是
[0290](i)
[0291]
O
[0292]其中R是H、CH3或CH2CH3,并且雙鍵是順式的或反式的；
[0293](ii)
[0294]
[0295]其中R是H、CH3或CH2CH3，其中X呈順式或反式構(gòu)型，并且其中所述GRF類似物是外消旋混合物或純對映異構(gòu)體；[0296](iii)
【權(quán)利要求】
1.一種生長激素釋放因子(GRF)類似物，其包含式⑴的域(SEQ ID NO:1): Xl-X2-Asp-Ala-1le-Phe-Thr-X8-X9-Tyr-Xll-X12-X13-Leu-X15-G ln-Leu-X18_X19-Arg-Gln-X22-X23-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33(I) 其中:
Xl 是 Tyr 或 His ； X2 是 Ala、D_Ala、Ser> Leu、α -氨基異丁酸(Aib)、Val 或 Gly ；
Χ8 是 Asn、Asp、Ala、Gin、Ser 或 Aib ；
X9 是 Ser、Asp 或 Ala ； Xll是Arg或L-高精氨酸(HoArg)； X12 是 Lys > L-鳥氨酸(Orn)或 HoArg ；
X13 是 Val 或 Ile ；
X15 是 Gly 或 Ala ； X18是Lys、L-鳥氨酸、L-2，4- 二氨基丁酸、L-2，3- 二氨基丙酸、或Ser ；
X19 是 Ala 或 Leu
X22 是 Asp 或 Glu ；
X23 是 Ile 或 Leu ；
X24 是 Met、lie、Nle 或 Leu ；
X25 是 Ser> Asn、Aib 或 Ala ；
X26 是 Arg、D-Arg> HoArg 或 Lys ； X27是Ala或不存在； X28是Ala或不存在； X29是Arg或不存在； X30是Ala或不存在； X31是Ala或不存在； X32是Arg或不存在； X33是L-高絲氨酸(HoSer)或不存在； 并且其中如果X18是Ser,那么X27至X32或X27至X33存在，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
2.如權(quán)利要求1所述的GRF類似物，其中Xl是Tyr。
3.如權(quán)利要求1或2所述的GRF類似物，其中X2是Ala或D_Ala。
4.如權(quán)利要求1至3中任一項所述的GRF類似物，其中X8是Ala或Asp。
5.如權(quán)利要求4所述的GRF類似物，其中X8是Asp。
6.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的GRF類似物，其中X9是Ser。
7.如權(quán)利要求1至6中任一項所述的GRF類似物，其中Xll是Arg。
8.如權(quán)利要求1至7中任一項所述的GRF類似物，其中X12是Lys或HoArg。
9.如權(quán)利要求8所述的GRF類似物，其中X12是Lys。
10.如權(quán)利要求1至9中任一項所述的GRF類似物，其中X15是Ala。
11.如權(quán)利要求1至10中任一項所述的GRF類似物，其中X18是Orn或Lys。
12.如權(quán)利要求11所述的GRF類似物，其中X18是Lys。
13.如權(quán)利要求1至12中任一項所述的GRF類似物，其中X22是Asp。
14.如權(quán)利要求1至13中任一項所述的GRF類似物，其中X23是He。
15.如權(quán)利要求1至14中任一項所述的GRF類似物，其中X24是Leu。
16.如權(quán)利要求1至15中任一項所述的GRF類似物，其中X25是Ala或Ser。
17.如權(quán)利要求16所述的GRF類似物，其中X25是Ala。
18.如權(quán)利要求1至17中任一項所述的GRF類似物，其中X26是Arg或D_Arg。
19.如權(quán)利要求18所述的GRF類似物，其中X26是Arg。
20.如權(quán)利要求1至19中任一項所述的GRF類似物，其中X27是Ala。
21.如權(quán)利要求1至20中任一項所述的GRF類似物，其中X28是Ala。
22.如權(quán)利要求1至2 1中任一項所述的GRF類似物，其中X29是Arg。
23.如權(quán)利要求1至22中任一項所述的GRF類似物，其中X30是Ala。
24.如權(quán)利要求1至23中任一項所述的GRF類似物，其中X31是Ala。
25.如權(quán)利要求1至24中任一項所述的GRF類似物，其中X32是Arg。
26.如權(quán)利要求1至25中任一項所述的GRF類似物，其中X33是HoSer。
27.如權(quán)利要求1至19中任一項所述的GRF類似物，其中X27至X33中的至少一個不存在。
28.如權(quán)利要求27所述的GRF類似物，其中X27至X33不存在。
29.如權(quán)利要求1所述的GRF類似物，其中所述域是: Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R(SEQ ID NO:2)； Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-S-r(SEQ ID NO:3)； Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-aib-R(SEQ ID NO:4)； Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-0-A-R-Q-D-1-L-S-r(SEQ ID NO:5)； Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-0-A-R-Q-D-1-L-S-r(SEQ ID NO:6)； Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-S-r(SEQ ID NO:7)； Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R(SEQ ID NO:8)； Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-S-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:9)；
Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:10)；
Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-L-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:11)；
Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:12)；
Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R (SEQ IDNO:13)；
Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:14)；
Y-S-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R (SEQ IDNO:15)；
Y-G-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R (SEQ IDNO:16)；
Y-L-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R(SEQ IDNO:17)；
Y-G-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer(SEQID NO:18)；
Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer(SEQID NO:19)； 其中a=D-Ala, O=L-鳥氨酸，Aib= a -氨基異丁酸，HoSer=L-高絲氨酸并且r=D_Arg。
30.如權(quán)利要求1至28中任一項所述的GRF類似物，其進(jìn)一步包含(i)氨基末端修飾基團(tuán)；αυ羧基末端修飾基團(tuán)；或an) α)和αυ。
31.如權(quán)利要求30所述的GRF類似物，其中所述氨基末端修飾基團(tuán)是直鏈的或支鏈的飽和C1-C6?；虿伙柡虲3-C6酰基。
32.如權(quán)利要求31所述的GRF類似物，其中所述氨基末端修飾基團(tuán)是乙酰基(Ac)。
33.如權(quán)利要求30所述的GRF類似物，其中所述氨基末端修飾基團(tuán)是反式-3-己烯?；?。
34.如權(quán)利要求30至33中任一項所述的GRF類似物，其中所述羧基末端修飾基團(tuán)是NH2。
35.如權(quán)利要求1所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是:反式-3-己烯酰基 -Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-NH2(SEQ ID NO:20)； Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-S-r-NH2(SEQ ID NO:21)； Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-aib-R-NH2(SEQ ID NO:22)； Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-0-A-R-Q-D-1-L-S-r-NH2(SEQ ID NO:23)； 反式-3-己烯酰基
-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-0-A-R-Q-D-1-L-S-r-NH2(SEQ ID NO:24)；
Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-S-r-NH2(SEQ ID NO:25)； 反式-3-己烯?；?br>
-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ IDNO:26)； 反式-3-己烯?；?br>
-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-S-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQID NO:27)；
Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ IDNO:28)；
Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-L-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ IDNO:29)；
Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ IDNO:30)； 反式-3-己烯酰基
-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQID N0:31)； 反式-3-己烯?；?br>
-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQID NO:32)；
Y-S-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ IDNO:33)；
Y-G-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ IDNO:34)；
Y-L-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ IDNO:35)；
Y-G-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer-NH2(SEQ ID NO:36);或
Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-HoSer-NH2(SEQ ID NO:37)； 其中a=D-Ala, O=L-鳥氨酸，Aib= a -氨基異丁酸，HoSer=L-高絲氨酸并且r=D_Arg。
36.如權(quán)利要求35所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:28)。
37.如權(quán)利要 求35所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-L-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:29)。
38.如權(quán)利要求35所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是Y-a-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQ ID NO:30)。
39.如權(quán)利要求35所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是反式_3_己烯酰基 -Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-1-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQID N0:31)。
40.如權(quán)利要求35所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是 反式-3-己烯?；?br>
-Y-A-D-A-1-F-T-D-S-Y-R-K-V-L-A-Q-L-K-A-R-Q-D-L-L-A-R-A-A-R-A-A-R-NH2 (SEQID NO:32)。
41.一種藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1至40中任一項所述的GRF類似物。
42.如權(quán)利要求41所述的藥物組合物，其進(jìn)一步包含一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。
43.一種用于誘導(dǎo)有需要的受試者中的生長激素分泌的方法，所述方法包括對所述受試者施用有效量的如權(quán)利要求1至40中任一項所述的GRF類似物或如權(quán)利要求41或42所述的藥物組合物。
44.如權(quán)利要求43所述的方法，其中所述GRF類似物是以約0.1mg至約20mg的日劑量施用。
45.如權(quán)利要求43或44所述的方法，其中所述GRF類似物通過靜脈內(nèi)、口服、經(jīng)皮、皮下、經(jīng)粘膜、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、肺內(nèi)、腸胃外、直腸內(nèi)或局部施用。
46.如權(quán)利要求45所述的方法，其中所述GRF類似物通過皮下施用。
47.如權(quán)利要求45所述的方法，其中所述GRF類似物通過鼻內(nèi)施用。
48.如權(quán)利要求45所述的方法，其中所述GRF類似物通過經(jīng)皮施用。
49.如權(quán)利要求1至40中任一項所述的GRF類似物或如權(quán)利要求41或42所述的藥物組合物的用途，其用于誘導(dǎo)受試者中的生長激素分泌。
50.如權(quán)利要求1至40中任一項所述的GRF類似物或如權(quán)利要求41或42所述的藥物組合物的用途，其用于制備用以誘導(dǎo)受試者中的生長激素分泌的藥劑。
51.如權(quán)利要求49或50所述的用途，其中所述GRF類似物是用于以約0.1mg至約20mg的日劑量施用。
52.如權(quán)利要求49至51中任一項所述的用途，其中所述GRF類似物是用于靜脈內(nèi)、口月艮、經(jīng)皮、皮下、經(jīng)粘膜、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、肺內(nèi)、腸胃外、直腸內(nèi)或局部施用。
53.如權(quán)利要求52所述的用途，其中所述GRF類似物是用于皮下施用。
54.如權(quán)利要求52所述的用途，其中所述GRF類似物是用于鼻內(nèi)施用。
55.如權(quán)利要求52所述的用途，其中所述GRF類似物是用于經(jīng)皮施用。
56.如權(quán)利要求1至40中任一項所述的GRF類似物或如權(quán)利要求41或42所述的藥物組合物，其用于制備用以誘導(dǎo)受試者中的生長激素分泌的藥劑。
57.如權(quán)利要求1至40中任一項所述的GRF類似物或如權(quán)利要求41或42所述的藥物組合物，其用于誘導(dǎo)受試者中的生長激素分泌。
58.如權(quán)利要求56或57所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是用于以約0.1mg至約20mg的日劑量施用。
59.如權(quán)利要求56至58中任一項所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是用于靜脈內(nèi)、口服、經(jīng)皮、皮下、經(jīng)粘膜、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、肺內(nèi)、腸胃外、直腸內(nèi)或局部施用。
60.如權(quán)利要求59所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是用于皮下施用。
61.如權(quán)利要求59所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是用于鼻內(nèi)施用。
62.如權(quán)利要求59所述的GRF類似物，其中所述GRF類似物是用于經(jīng)皮施用。
63.如權(quán)利要求1至40中任一項所述的GRF類似物或如權(quán)利要求41或42所述的藥物組合物的用途，其用作藥劑。
64.如權(quán)利要求1至40中任一項所述的GRF類似物或如權(quán)利要求41或42所述的藥物組合物，其用作藥劑。
【文檔編號】C07K14/60GK103547591SQ201280024235
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2012年4月17日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月21日
【發(fā)明者】K·G·佩里, A·哈比 申請人:瑟瑞技術(shù)公司