專利名稱：有機(jī)化合物的或與之有關(guān)的改進(jìn)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用作細(xì)胞素釋放抑制劑和IL-1拮抗劑的化合物。
本發(fā)明提供了新的式Ⅰ化合物
式中R4和R6相同或不同，代表H、OH、C1-4烷氧基或C1-4烷基COO-，R5是OH、C1-4烷氧基或C1-4烷基COO-，-a-b-和-d-e-中的一個(gè)是-CHR7-CHR8-，而另一個(gè)是順式或反式-CR7＝CR8-，其中R7和R8相同或不同，代表H、OH、C1-4烷氧基或C1-4烷氧基或C1-4烷基COO-，c是CH-OH或C＝O，-f-g-是-CH2-CH2-或順式或反式-CH＝CH-，條件是，當(dāng)R4是H、R6是OH而-f-g-是反式-CH＝CH-時(shí)，1.當(dāng)-a-b-是-CH2-CH2-、c是C＝O而-d-e-是-CH2-CH2-時(shí)，R5不是OH，或2.當(dāng)-a-b-是-CH2-CH2-或順式-CH＝CH-、c是C＝O或CH-OH而-d-e-是-CHOH-CHOH時(shí)，R5不是甲氧基，
所述式Ⅰ化合物是游離形式或堿鹽形式或其生理上可水解或接受的酯形式，并且其中標(biāo)星號(hào)“＊”的不對(duì)稱碳和為不對(duì)稱碳時(shí)的原子a和/或b或d和/或e具有R或S構(gòu)型，或所述化合物包括其旋光異構(gòu)體的任何混合物。
優(yōu)選地，R4和R6相同或不同，它們是H、-OH、MeO-或MeCOO-。優(yōu)選地，R5是-OH、MeO-或MeCOO-。更優(yōu)選地，R4是H或MeO，R5是MeO，而R6是OH或MeO。
優(yōu)選地，-a-b-是順式或反式-CR′7＝CR′8，其中R′7和R′8相同或不同，它們是H、OH、MeO-或MeCOO-。更優(yōu)選地，-a-b-是順式或特別是反式-CH＝CH-。
優(yōu)選地，-d-e-是-CHR′7-CHR′8-，其中R′7和R′8如上定義。更優(yōu)選地，-d-e-是-CH2-CH2-或特別是-CHOH-CHOH-，其中OH基可以是游離形式或被保護(hù)的形式。
最優(yōu)選地，-f-g-是反式-CH＝CH-。
優(yōu)選地，本發(fā)明化合物的不對(duì)稱碳原子都具有S-構(gòu)型。
在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了這樣的式Ⅰ化合物，其中R4是H或MeO-，R5是MeO-，R6是OH，-a-b-是順式或反式-CH＝CH-，c是CHOH或C＝O，-d-e-是-CHOH-CHOH-，而-f-g-是反式-CH＝CH-;條件是，當(dāng)-a-b-是順式-CH＝CH-時(shí)，那么R4是MeO-，而c是C＝O，所述化合物是游離形式或堿鹽形式或是生理上可水解或接受的酯形式。
式Ⅰ′化合物是這樣一種式Ⅰ化合物，其中R4和R5是MeO-，R6是OH，-a-b-是順式-CH＝CH-，c是C＝O，-d-e-是CHOH-CHOH-，-f-g-是反式-CH＝CH-，而標(biāo)星號(hào)“＊”的不對(duì)稱碳原子都具有S-構(gòu)型，
式Ⅰ′的結(jié)構(gòu)已被確定為稱為87-250904-F1的新代謝物，具有下列特性白色針狀物(甲醇/水1∶1)，m.p.173-174℃;25D＝-43.6°(MeOH，c＝0.76);
MS(FAB)m/e＝393(MH+);
IR(KBr)見(jiàn)

圖1;
1H-NMR(CDCl3，360MHz，TMS為內(nèi)標(biāo))見(jiàn)圖2;
溶解性幾乎不溶于水，易溶于甲醇、DMSO、氯仿;
HPLC柱LiChrospher 100RP-8(5μm)(LiChroCART125-4，Merck)流動(dòng)相乙腈/水/正磷酸3506500.175(體積比)流速1.0ml/分檢測(cè)UV210nm保留時(shí)間3.8分鐘。
式Ⅰ化合物是新化合物，它們與zearalenone屬于同一類化合物，后者是式Ⅱ化合物，
式中R1＝R2＝R3＝R4＝H，-a-b-是-CH2-CH2-，而c是C＝O。已知zearalenone具有同化作用。Ellestad等人在J.Org.Chem.，43，2339(1978)中描述了其中R1是甲基、R2＝R3＝OH、R4＝H、-a-b-是-CH2-CH2-或順式-CH＝CH-而c是C＝O或CHOH的式Ⅱ化合物，其中他們聲明所述化合物“沒(méi)有任何特別有意義的活性”，并且推測(cè)酚醚的存在(即苯環(huán)上的甲氧基)可能是導(dǎo)致活性缺乏的原因。
鑒于此，式Ⅰ化合物具有任何藥理活性是令人驚訝的。
式Ⅰ化合物也與根赤殼菌素有關(guān)，后者是式Ⅲ化合物，
式中R是Ho相應(yīng)的其中R為甲基的甲氧基化合物也是已知的。
根赤殼菌素是Monosporium bonorden的一種代謝物，已知具有抗菌特性[Delmotte，Nature 171，344(1953)]。
令人驚奇地，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)上述化合物即式Ⅰ的新化合物、根赤殼菌素、O-甲基根赤殼菌素和Ellestad等人所述的zearalenone衍生物也具有細(xì)胞素釋放抑制劑性質(zhì)，具體講，它們抑制IL-1、IL-6和TNF-α的釋放，并且也起IL-1功能性拮抗劑的作用。
式Ⅰ′化合物可以通過(guò)在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)一種產(chǎn)生該化合物的微生物菌株制備。優(yōu)選的微生物是分生孢子器不完善的真菌菌株，特別是F/87-250904菌株，它產(chǎn)生代謝物87-250904-F1。
從在南非采集的未鑒定的地衣中已經(jīng)分離出這種菌株，該菌株的活培養(yǎng)物于1991年11月6日按布達(dá)佩斯條約的規(guī)定保藏在ARS Patent Culture Collection，US Dept.of Agriculture，Northern Regional Research Center，Peoria，Illinois，USA，其保藏號(hào)為NRRL18919。該培養(yǎng)物也可以從Sandoz Ltd，Basle，Switzerland獲得。
所述的真菌菌株NRRL18919在最普通的真菌瓊脂培養(yǎng)基如2%麥芽汁瓊脂上生長(zhǎng)。生長(zhǎng)的溫度范圍大約為5-37℃，最佳生長(zhǎng)溫度大約是24-32℃。在培養(yǎng)皿中2%的麥芽汁瓊脂上于27℃經(jīng)過(guò)10天培養(yǎng)后，NRRL18919菌株將形成直徑25-35mm的菌落。該菌落呈現(xiàn)棕色至黑綠色至黑色，具有適度發(fā)育的氣生菌絲體。在這些條件下沒(méi)有任何明顯的可擴(kuò)散的色素形成。NRRL18919菌株可以降解淀粉和角蛋白，但不降解或僅非常有限度地降解纖維素和幾丁質(zhì)。
NRRL 18919菌株的分生孢子器在形狀和大小上變化很大。其范圍從大約30μ大、球形至梨形、具有單個(gè)孔口至不規(guī)則形狀的、一直到600μ大的具有幾個(gè)孔口的分生孢子器或分生孢子器復(fù)合體。分生孢子器的外壁由棕色細(xì)胞構(gòu)成。分生孢子是透明的、無(wú)隔的、桿狀的、腎形至臘腸狀，通常是縊縮的，大小為3.0-5.5×1.0-1.7μ。分生孢子由細(xì)長(zhǎng)的瓶梗在分生孢子器內(nèi)產(chǎn)生并內(nèi)在小孔外聚集成白體。NRRL 18919菌株最好歸入莖點(diǎn)霉屬(Phoma Sacc.)，并與Phoma cava Schulzer的描述非常一致。
新的NRRL 18919菌株可以在合適的溫度下于各種培養(yǎng)基中用合適的營(yíng)養(yǎng)物和礦物質(zhì)作為需氧表面或浸式培養(yǎng)物培養(yǎng)。本發(fā)明還提供了通過(guò)培養(yǎng)產(chǎn)生87-250904-F1的真菌菌株特別是NRRL菌株18919得到的發(fā)酵液。本發(fā)明的進(jìn)一步方面提供了制備式Ⅰ化合物的方法，包括培養(yǎng)產(chǎn)生87-250904-F1真菌菌株和分離形成的87-250904-F1代謝物的步驟。
發(fā)酵培養(yǎng)基應(yīng)該含有可利用的碳源和任選的礦物鹽和生長(zhǎng)因子，所有這些可以以有嚴(yán)格規(guī)格的產(chǎn)品形式或作為復(fù)合物混合物形式加入，這些形式見(jiàn)于各種來(lái)源的生物制品中。
為了生產(chǎn)新的代謝物87-250904-F1，也可以使用通過(guò)在紫外照射的影響、X-射線或其它手段如用化學(xué)誘變劑而選擇或突變得到的菌株。
只要在培養(yǎng)物中積蓄了足夠量的代謝物，就可以立即將其通過(guò)常規(guī)方法如萃取和隨后層析方法進(jìn)行濃縮和分離。
其中a-b為反式-CH＝CH-的式Ⅰ化合物可通過(guò)在溫和的堿性條件如在吡啶溶液中在0-80℃之間、優(yōu)選大約50℃適宜地異構(gòu)化12-48小時(shí)由相應(yīng)的其中a-b為順式-CH＝CH-的化合物制備。
式Ⅰ化合物也可以用常規(guī)的合成技術(shù)通過(guò)化學(xué)全合成或部分合成制備。
因此，在本發(fā)明的另一方面，它提供了制備其中c為CHOH的式Ⅰ化合物的方法，該方法包括使式Ⅳ化合物環(huán)化，并脫除其中的任何羥基保護(hù)基
式中R4、R5、R6、-a-b、-d-e-和-f-g-如上所定義，但-a-b或-d-e-上的任何羥基取代基處在適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)形式，R11是H或羥基保護(hù)基。
其中c為C＝O的式Ⅰ化合物可以通過(guò)c處的CHOH的氧化而由環(huán)化產(chǎn)物制備。
其中-f-g-為反式-CH＝CH-的式Ⅳ化合物可通過(guò)式Ⅴ和Ⅵ化合物鍵連，并脫除羥基保護(hù)基R12和R13來(lái)制備，
式中R4、R5、R6、R11、-a-b、-d-e-和-f-g-如上對(duì)式Ⅳ所定義，R12和R13是羥基保護(hù)基。
式Ⅳ化合物可以如下制備使4-羥基丁-1-炔的羥基保護(hù)的類似物與己-1-烯-5-酮鍵連，部分地或完全地還原炔鍵，并且適當(dāng)?shù)脑?，引入R11羥基保護(hù)基。
其中-f-g-為-CH2-CH2-的式Ⅳ化合物可以通過(guò)下法制備使式Ⅶ和Ⅷ化合物鍵連，部分地或完全地還原炔鍵，并且適當(dāng)?shù)脑挸チu基保護(hù)基，
式中R4、R5、R6、和R12如上對(duì)式Ⅳ和Ⅴ所定義，R14是羥基保護(hù)基。
式Ⅶ化合物可以如下制備使如上的式Ⅴ化合物與6-羥基-己-1-烯的羥基保護(hù)的類似物鍵連，還原相應(yīng)于式Ⅰ中f-g的炔鍵，從C6側(cè)鏈上的末端羥基脫除保護(hù)基，以及將該羥基氧化成醛基。
上述各方法可以用常規(guī)的合成步驟、試劑和條件進(jìn)行，例如，如下述實(shí)施例中所述的那樣進(jìn)行。
優(yōu)選的其中a-b為反式-CH＝CH-的化合物是式Ⅰ″、Ⅹ和Ⅺ化合物，
優(yōu)選的其中a-b是順式-CH＝CH-的化合物是式Ⅰ′、Ⅻ和ⅩⅢ化合物，
本發(fā)明化合物具有藥理性質(zhì)。具體講，它們顯示出細(xì)胞素抑制作用，它們不僅抑制IL-1、IL-6和TNF-α的釋放，而且也是IL-1的功能性拮抗劑，正如下述在體內(nèi)外試驗(yàn)方法中所表明的那樣1.THP-1細(xì)胞的細(xì)胞素釋放
THP-1細(xì)胞系通常是易得的，Tsuchiya等人在Int.J.Cancer 26 171-176(1980)中對(duì)其進(jìn)行了描述。將900μl THP-1細(xì)胞(0.5×106個(gè)細(xì)胞)與100Uγ-干擾素/0.9ml RPMI 1640培養(yǎng)基(含2mM L-谷氨酰胺和5%熱失活的胎牛血清)一起吸移到24孔培養(yǎng)皿中。然后加入100μl待試化合物。在5%CO2/95%空氣氣氛中于37℃下3小時(shí)后，加入10μl脂多糖(500μg/ml)，再繼續(xù)培養(yǎng)40小時(shí)。同時(shí)也進(jìn)行適當(dāng)?shù)膶?duì)照試驗(yàn)(有或沒(méi)有刺激，溶劑)。然后取出培養(yǎng)基，通過(guò)在1000g下離心10分鐘使之澄清。于各孔中加入1.0ml 0.01%毛地黃皂苷以溶胞，細(xì)胞用橡膠淀帚刮松，在4℃下放置10分鐘。然后立即進(jìn)行乳酸脫氫酶測(cè)定，并將樣品儲(chǔ)存在-20℃待進(jìn)行其它測(cè)定。檢測(cè)項(xiàng)目包括 IL-1β(培養(yǎng)基和溶胞產(chǎn)物)，IL-6(培養(yǎng)基)，TNF-α(培養(yǎng)基)，PGE2(培養(yǎng)基和溶胞產(chǎn)物)，乳酸脫氫酶(LDH)(培養(yǎng)基和溶胞產(chǎn)物)以及DNA(溶胞產(chǎn)物)。IL-1β、IL-6和TNF-α檢測(cè)用市售ELISA試劑盒(Cistron)進(jìn)行，PGE2用標(biāo)準(zhǔn)RIA測(cè)定，而DNA用DAPI(4′，6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽)采用熒光測(cè)定法測(cè)定。
在該試驗(yàn)中，本發(fā)明化合物以大約0.001-10μM的濃度抑制IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE2的釋放。相反，DNA水平保持基本上不受影響，因?yàn)長(zhǎng)DH釋放不發(fā)生變化，所以化合物是無(wú)毒的。
2.人單核細(xì)胞的細(xì)胞素釋放a)人單核細(xì)胞單核細(xì)胞通過(guò)離心從健康自愿者的血液中得到，在含各種濃度的試驗(yàn)化合物的組織培養(yǎng)皿上培養(yǎng)[Schnyder等人，Agents&Actions，30，350-362(1990)]。4小時(shí)后通過(guò)洗滌數(shù)次除去非粘著的淋巴細(xì)胞。加入新鮮培養(yǎng)基、試驗(yàn)化合物和作為刺激劑的LPS(10μg/ml)，并將所述單核細(xì)胞再培養(yǎng)一天。匯集的培養(yǎng)基用新鮮培養(yǎng)基按1∶10稀釋后加到會(huì)合的兔軟骨細(xì)胞中。如下所述，再2天后測(cè)定在軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基中的金屬蛋白酶(MP)活性。本發(fā)明化合物在本試驗(yàn)方法中在大約0.001-10μM的濃度時(shí)可有效地抑制單核細(xì)胞素釋放。
b)通過(guò)軟骨細(xì)胞試驗(yàn)測(cè)定IL-1純化的IL-1、 重組人IL-1-β(rhIL-1)或由經(jīng)過(guò)刺激的人單核細(xì)胞、小鼠巨噬細(xì)胞或小鼠細(xì)胞系P388D1收集的條件培養(yǎng)基，引起軟骨細(xì)胞的分泌模式的特征性變化。具體講，在減少血纖維蛋白溶酶原激活劑分泌的同時(shí)，誘導(dǎo)了潛伏金屬蛋白酶(MP)。金屬蛋白酶或基質(zhì)溶素(stromelysin)的性質(zhì)已有詳細(xì)描述[Chin等人，J.Biol.Chem.260，12367-12376(1985)]，血纖維蛋白溶酶原激活劑的性質(zhì)也已有詳細(xì)描述[Schnyder等人，Analyt.Biochem.200，156-162，1992]。用純化的或重組IL-1制做的劑量-響應(yīng)曲線和用針對(duì)人單核細(xì)胞IL-1的抗體進(jìn)行中和的結(jié)果已表明，該體系可用作IL-1特異性和靈敏的生物檢測(cè)法。對(duì)兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞潛伏金屬蛋白酶分泌的刺激作用相對(duì)來(lái)說(shuō)是IL-1特異性的，IL-2、TNF-α、重組人干擾素-α和-γ、佛波醇十四酸酯乙酸酯、伴刀豆球蛋白A、E型前列腺素和消炎痛沒(méi)有任何影響[Schnyder and Payne，Brit.J.Rheumatol.24(suppl.1)，128-132(1985);Schnyder等人，J.Immunol.，138，496-503(1987)]。
如所述的那樣收集并培養(yǎng)軟骨細(xì)胞[Evequoz等人，Biochem.J.219，667-677(1984)]。簡(jiǎn)言之，通過(guò)用蛋白酶處理從得自大約1.2Kg重的雌性新西蘭白兔的遠(yuǎn)股骨關(guān)節(jié)軟骨的切片釋放軟骨細(xì)胞。洗滌后，將細(xì)胞在含1%抗生素、2mM谷氨酰胺和10%熱失活的胎牛血清的DMEM中在48孔培養(yǎng)皿上進(jìn)行培養(yǎng)。達(dá)到會(huì)合后，將細(xì)胞與20μl IL-1生物測(cè)定的試驗(yàn)培養(yǎng)基樣品一起培養(yǎng)，并做成300μl Iscove改進(jìn)的Dulbecco培養(yǎng)基。48小時(shí)后收集上清培養(yǎng)基，離心并加工以供進(jìn)行生化分析。
c)生化檢測(cè)用與個(gè)人電腦連接的96孔平皿Twinreader(Flow Laboratories AG)通過(guò)動(dòng)力學(xué)方法測(cè)定金屬蛋白酶(MP)。用脊椎動(dòng)物膠原酶的合成底物Ac-Pro-Leu-Gly-S-Leu-Gly-OC2H5來(lái)測(cè)定MP[Weingarten and Feder，Anal.Biochem.，147，437-440(1985)]。將50μl潛伏MP在37℃用50μl胰蛋白酶(120μg/ml在50mM PIPES pH6.8中，含20mM CaCl2)活化30分鐘，之后，通過(guò)加入150μl大豆胰蛋白酶抑制劑(SBTI;166μg/ml在上述緩沖液中)中止所有絲氨酸蛋白酶的活性。然后將50μl等份的活化MP與100μl試劑溶液(2.5mM 5，5′-聯(lián)硫基-雙-2-硝酸苯甲酸;DTNB，100μg/ml SBTI，20mM CaCl2在上述緩沖液中)混合，并在室溫下保持10分鐘以使所有游離巰基反應(yīng)。然后通過(guò)加入100μl底物溶液(1.25mM在含100μg/mlSBTI的緩沖液中)啟動(dòng)反應(yīng)，以1分鐘的間隔測(cè)定414nm處吸光度的變化11次。
3.功能性IL-1拮抗作用重復(fù)上述2)中所述的試驗(yàn)方法，但不向軟骨細(xì)胞培養(yǎng)物中加入人單核細(xì)胞，而是以1ng/ml濃度加入IL-1本身(重組人IL-1β，Sandoz)。2天后測(cè)定軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基中MP活性。本發(fā)明化合物在1-30nM濃度時(shí)具有功能性IL-1拮抗劑的活性。
4.LPS熱給雄性Tuttlingen SD大鼠(150-160g)注射LPS懸浮液(Sigma，No.L-5886;100μg/5ml葡萄糖溶液/Kg皮下)。2小時(shí)后，用與ELLAB遙測(cè)溫度計(jì)連接的熱敏電阻器直腸探子測(cè)量體溫。4小時(shí)后，給予試驗(yàn)化合物。2小時(shí)后(給予LPS后6小時(shí))再次測(cè)量體溫。把未處理的對(duì)照顯示的溫度增加作為100%，處理組的溫度增加用該值的百分比表示。ED50是抑制對(duì)照大鼠測(cè)量的溫度增加的50%的劑量。在該試驗(yàn)中，本發(fā)明化合物的ED50一般為大約0.1-大約1mg/Kg。
5.角叉菜膠誘發(fā)的大鼠爪水腫將體重150-170g的五只OFA雄性大鼠作為一組。在注射角叉菜膠前1小時(shí)，口服給予試驗(yàn)化合物在生理鹽水/0.5%西黃蓍膠中的懸浮液。將角叉菜膠(0.1ml 1%在生理鹽水中的懸浮液)跖下注射到一只后爪內(nèi)。按Kemper&Amelm的方法借助消炎量器測(cè)量該爪的腫脹程度。注射后立即讀取對(duì)照讀數(shù)，3和5小時(shí)后測(cè)量腫脹情況。扣除對(duì)照讀數(shù)后取3和5小時(shí)讀數(shù)的平均值，由處理動(dòng)物所得到的值表示為從未處理對(duì)照所得值的百分?jǐn)?shù)。ED50是3小時(shí)后抑制角叉菜膠誘發(fā)的腫脹的50%的劑量。在該試驗(yàn)中本發(fā)明化合物的ED50值通常為大約0.1-大約1mg/Kg。
因此，本發(fā)明化合物適用于治療由過(guò)量細(xì)胞素釋放特別是IL-Iβ釋放引起的或與之有關(guān)的疾病，例如在各種炎性狀態(tài)和疾病中，諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性休克、牛皮癬、粥樣硬化、炎性腸病、克羅恩氏病和哮喘。
對(duì)于上述用途，所需劑量當(dāng)然根據(jù)給藥方式、所治療的具體的疾病和所希望的效果而變化。但是，通常在大約0.1-20mg/Kg動(dòng)物體重，優(yōu)選0.5-5mg/Kg的劑量范圍便可獲得滿意的結(jié)果。已經(jīng)確定，式Ⅰ′化合物在THP-1試驗(yàn)中的IC50值(抑制50%IL-1β釋放的化合物濃度)是0.06μM。因此表明了，該化合物可以按8mg至2g的日劑量給大型哺乳動(dòng)物如人口服。
根據(jù)上述，本發(fā)明也提供了ⅰ)治療需要此種治療的主體的由過(guò)量細(xì)胞素釋放特別是IL-1β釋放引起的或與之有關(guān)的疾病諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性休克、牛皮癬、粥樣硬化、炎性腸病、克羅恩氏病和哮喘的方法，該方法包括使所述主體服用有效量的游離形式或堿鹽形式的下列化合物或其生理上可水解或接受的酯a)如上定義的式Ⅰ化合物;或b)式Ⅱ化合物，其中R1是H或甲基;
R2和R3是H或OH;
R4是H或甲氧基;
-a-b是-CH2-CH2-或-CH＝CH-及c是C＝O或CH-OH(不是式Ⅰ化合物);或
c)其中R是H或甲基的式Ⅲ化合物。
ⅱ)用作藥物例如用于治療上面公開(kāi)的任何疾病的游離形式或堿鹽形式的式Ⅱ化合物或其生理上可水解或接受的酯，式Ⅱ中，R1是甲基;R2和R3是H或OH;R4是H或甲氧基;-a-b-是CH2-CH2-或順式-CH＝CH-;及c是C＝O或CH-OH。
本發(fā)明化合物可通過(guò)任何常規(guī)途徑給藥，具體講鼻內(nèi)、腸內(nèi)，優(yōu)選口服，例如以片劑或膠囊形式，或非經(jīng)胃腸道給藥，例如以注射液或注射懸浮液形式或以栓劑形式。單位劑型含有例如大約2mg至1g的本發(fā)明化合物。本發(fā)明也提供了一種藥物組合物，它包含有效量的如上b)中定義的式Ⅱ化合物及可藥用的稀釋劑或載體。這樣的組合物可以按常規(guī)方法制備。
優(yōu)選的藥用化合物是式Ⅰ′、Ⅰ″、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ和ⅩⅢ化合物。
下列實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例1發(fā)酵實(shí)施例將NRRL18919菌株的種子培養(yǎng)物接種到2升的錐形瓶中，該瓶中裝有1升無(wú)菌的由在去離子水中含2%麥芽汁和0.4%酵母提取物組成的液體培養(yǎng)基。將該錐形瓶在200rpm的旋轉(zhuǎn)搖床上于24℃培養(yǎng)3天，然后將其用作供50升發(fā)酵用的預(yù)培養(yǎng)物。該中間培養(yǎng)在75升的裝有由在去離子水中含2%麥芽汁和0.4%酵母提取物的溶液組成的無(wú)菌液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行。在該發(fā)酵期間，溫度保持在恒定25℃，攪拌速度在50rpm，通氣速度為50升/分，過(guò)壓為0.5巴。預(yù)培養(yǎng)物發(fā)酵持續(xù)僅一天，之后，用其接種最后的大規(guī)模發(fā)酵。該生產(chǎn)培養(yǎng)在5000升裝有3000升無(wú)菌液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行，所述培養(yǎng)基由在去離子水中含20g/l葡萄糖、2g/l大豆蛋白、2g/l麥芽汁、2g/l酵母提取物、2g/lKH2PO4和2g/l MgSO4的溶液組成。在接種前，向無(wú)菌培養(yǎng)基中加入1mg/l溶液在小體積的甲醇中的環(huán)孢菌素A。發(fā)酵期間，溫度保持恒定在25℃，攪拌速度在25rpm，通氣速度在3000升/分，過(guò)壓為0.5巴。通過(guò)控制地加入防沫劑防止過(guò)多的泡沫產(chǎn)生。用HPLC監(jiān)測(cè)本發(fā)明化合物的產(chǎn)生，在所需代謝物滴定度最高時(shí)收獲生產(chǎn)培養(yǎng)物。
實(shí)施例2代謝物的分離從培養(yǎng)液中分離菌絲體，上清液(2800升)用2800升乙酸乙酯提取。棄去菌絲體。將乙酸乙酯溶液在45-50℃于真空下蒸發(fā)至干。所需化合物可以如下直接由提取殘留物結(jié)晶得到將提取殘留物(大約1kg)溶于60℃的5升甲醇中，驟冷所得溶液，然后保持在室溫下20小時(shí)。過(guò)濾分離產(chǎn)生的晶體(大約250g)，重新溶于75℃的甲醇中，在-25℃重結(jié)晶過(guò)夜。吸濾出晶體，用冷甲醇洗滌，真空下干燥。產(chǎn)物是[3S-(3R＊，5Z，8R＊，9R＊，11E)]-3，4，9，10-四氫-8，9，16-三羥基-13，14-二甲氧基-3-甲基-1H[2]-苯并氧雜環(huán)十四烷-1，7[8H]-二酮，以白色針狀物形式得到，具有下列性質(zhì)m.p.170-172℃，[α]20D＝-43.1°(c＝0.49，甲醇)。
實(shí)施例3式Ⅰ″化合物的制備如下制備式Ⅰ″化合物[3S-(3R＊，5E，8R＊，9R＊，11E)-3，4，9，10-四氫-8，9，16-三羥基-13，14-二甲氧基-3-甲基-1H-2-苯并氧雜環(huán)十四烷-1，7(8H)-二酮。
將實(shí)施例2的產(chǎn)物(1g)溶于100ml吡啶中，在氬氣氛下于50℃攪拌24小時(shí)。真空下濃縮產(chǎn)生的黃色溶液，殘留物溶于乙酸乙酯中，與1N酒石酸一起振搖。分出有機(jī)相，用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。固體殘留物在硅膠上用乙酸乙酯作為流動(dòng)相進(jìn)行層析，得到式Ⅰ″化合物。m.p.171-173℃。NMR(CDCl3)1.47(d，3H)，2.25-2.85(m，4H)，3.60(s，3H)，3.89(s，3H)，4.17(m，1H)，4.65(d，1H)，5.40(m，1H)，5.93(m，1H)，6.45(s，1H)，6.47(d，1H)6.63(dd，1H)，7.00(dt，1H)，11.21(s，1H)ppm.
實(shí)施例4式Ⅹ化合物的制備按照與實(shí)施例3相似的方法，得到了式Ⅹ化合物[3S-(3R＊，5E，8R＊，9R＊，11E)]-3，4，9，10-四氫-8，9，16-三羥基-14-甲氧基-3-甲基-1H-2-苯并氧雜環(huán)十四烷-1，7(8H)-二酮。m.p.154-159℃。
實(shí)施例5式Ⅺ化合物的制備按照與實(shí)施例3相似的方法，得到了泡沫狀的式Ⅺ化合物[3S-(3R＊，5E，8R＊，9R＊，11E)]-3，4，9，10-四氫-8，9-二羥基-13，14，16-三甲氧基-3-甲基-1H-2-苯并氧雜環(huán)十四烷-1，7(8H)-二酮，NMR譜如下NMR(CDCl3)1.4(d，3H);2.2-3.0(m，5H);3.61(s，3H);3.78(s，3H);3.83(s，3H);3.7-4.15(m，2H);4.75(d，3H);2.2-3.0(m，1H);6.15(d，1H);6.31(d，1H);6.38(s，1H);7.85(m，1H)ppm.
實(shí)施例6a)戊-1-烯-5-酮在室溫下，將在100ml二氯甲烷中的10g(100mmol)5-羥基戊-1-烯加到在二氯甲烷中的43g氯鉻酸吡啶中。1.5小時(shí)后，加入乙醚，通過(guò)硅膠過(guò)濾懸浮液，固體殘留物用乙醚洗數(shù)次，乙醚也濾過(guò)硅膠，合并各部分乙醚，緩慢蒸發(fā)，得到7g戊-1-烯-5-酮粗品。
b)4-三甲基甲硅烷氧基己-1-炔將8.1g 4-羥基己-1-炔、16g叔丁基二甲基甲硅烷基氯和7.2g咪唑在100ml乙腈中的混合物在室溫下攪拌過(guò)液，然后加入乙醚，通過(guò)硅膠過(guò)濾懸浮液，然后蒸發(fā)濾液，殘留物在水泵減壓下于70℃蒸餾，得到17.8g(93%)標(biāo)題產(chǎn)物。
c)2-三甲基甲硅烷氧基-7-羥基-十一碳-4-炔-10-烯在-78℃下將丁基鋰溶液(37ml)滴加到13.8g上述b)中的產(chǎn)物在20ml四氫呋喃中的溶液中，并將混合物在-78℃攪拌1.5小時(shí)，然后緩慢地加入6.0g上述a)中的產(chǎn)物醛在10ml四氫呋喃中的溶液。將混合物在-78℃下攪拌1小時(shí)，然后溫?zé)嶂潦覝亍＜尤胨?，用乙酸乙酯提取混合物，將有機(jī)相干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)，得到13.1g(72%)的不純的標(biāo)題產(chǎn)物。
d)2-三甲基甲硅烷氧基-7-羥基-十一碳-順式-4，10-二烯。
向10.1g上述c)產(chǎn)物在300ml吡啶中的溶液中加入1g 10%Pd/BaSO4，并在室溫下氫化混合物。24小時(shí)后吸收了420ml氫，再24小時(shí)后吸收了720ml氫。通過(guò)Hyflo吸濾混合物除去催化劑，濃縮產(chǎn)物，溶于乙酸乙酯中，用10%檸檬酸溶液和飽和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮。然而此時(shí)薄層層析表明僅有15%的起始原料發(fā)生了轉(zhuǎn)化。因此將產(chǎn)物重新溶于300ml吡啶中，加入1.5g10%Pd/BaSO4，在室溫下攪拌進(jìn)行氫化?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，6小時(shí)后已吸氫700ml。薄層層析表明產(chǎn)物(10.2g)中有大約90%發(fā)生了轉(zhuǎn)化。
e)2-三甲基甲硅烷氧基-7-[(2-甲氧基)乙氧基]甲氧基-十一碳-順式-4，10-二烯。
在室溫和攪拌下將10g上述d)步的標(biāo)題產(chǎn)物溶于80ml二氯甲烷中，用1分鐘時(shí)間滴加8.5ml二異丙基乙胺，然后用10分鐘時(shí)間滴加在20ml二氯甲烷中的5.7ml 1-氯甲基-2-甲基乙二醇。2小時(shí)后薄層層析表明反應(yīng)完全。將反應(yīng)混合物用10% NaHCO3，10%檸檬酸溶液和飽和鹽水洗滌，Na2SO4干燥，濃縮，得到14g標(biāo)題產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物用硅膠層析純化(己烷/乙醚8∶1)，得量10.5g(83%)。
f)其中R4是H、R5和R6是Me、-a-b-是順式-CH＝CH-、-d-e-是-CH2-CH2-、-f-g-是反式-CH＝CH-的式Ⅳ化合物。
在氬氣氛和攪拌下，向90ml三乙胺中加入7.5g其中R4是H、R5和R6是MeO而R12是Me的式Ⅴ化合物，接著加入10.8g上述e)步產(chǎn)物、0.104g二乙酸鈀、0.564g三(鄰甲苯基)膦和3.9g乙酸銀。攪拌下用油浴將混合物溫?zé)嶂?0℃，60小時(shí)后，加入另外0.104g二乙酸鈀和0.564g三(鄰甲苯基)膦，繼續(xù)反應(yīng)48小時(shí)，此時(shí)由薄層導(dǎo)板判斷反應(yīng)己完全。濃縮產(chǎn)物混合物，用乙酸乙酯處理，通過(guò)Hyflo吸濾除去不溶殘留物。濃縮液體，通過(guò)硅膠層析(己烷/乙酸乙酯4∶1)純化中間體三甲基甲硅烷氧基/R12是Me的產(chǎn)物，得到大約14g。
將5.1g NaOH溶于50ml DMSO和30ml水中，加入7.44g上述中間產(chǎn)物，在油浴中將混合物在100℃加熱攪拌4小時(shí)。冷卻混合物，用水稀釋，用乙醚洗滌3次，用冰冷卻，用2N HCl調(diào)節(jié)pH至3。然后用乙酸乙酯提取產(chǎn)物三次，用飽和鹽水洗滌兩次，Na2SO4干燥，濃縮，高真空下干燥，得到6g標(biāo)題產(chǎn)物(m/z453(MH+)，348(60)，329(100)，285(60)，207(60))。
g)式ⅩⅢ化合物在室溫和攪拌下，將5.4g上述f)步產(chǎn)物加到3.5升四氫呋喃中，加入18.7ml偶氮二羧酸二乙酯，接著加入31.3g三苯膦，將混合物在油浴中溫?zé)嶂?0℃，反應(yīng)過(guò)夜。濃縮產(chǎn)物混合物，用2個(gè)Al2O3柱純化殘留物，用己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脫。從第一柱得到的級(jí)分6-1和從第二柱中得到的級(jí)分7-20一起得到了5g粗產(chǎn)物，再通過(guò)硅膠層析純化，得到3.2g(62%)純化樹(shù)脂狀中間產(chǎn)物，該產(chǎn)物相應(yīng)于其中c是CH-OCH2-O-CH2-CH2-OCH3保護(hù)形式的式ⅩⅢ化合物。
通過(guò)用酸處理將上述中間產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成進(jìn)一步的其中c是CHOH的中間產(chǎn)物。將5.2g上述中間產(chǎn)物溶于12ml四氫呋喃中，加入10ml 1N鹽酸，將混合物在45℃攪拌24小時(shí)，然后用乙酸乙酯提取3次，用飽和鹽水和碳酸氫鈉溶液洗滌，用Na2SO4干燥乙酸乙酯相，濃縮，用硅膠層析(己烷/乙酸乙酯1∶1)純化，得到約3.4g粘的進(jìn)一步的中間產(chǎn)物。
在室溫下對(duì)2ml二氯甲烷進(jìn)行攪拌，加入76μl草酰氯，將混合物冷卻至-60℃，用3分鐘時(shí)間滴加0.13ml DMSO在1ml二氯甲烷中的溶液。使產(chǎn)生的氣體放出3分鐘后，用5分鐘時(shí)間滴加280mg上述進(jìn)一步的中間產(chǎn)物在3ml二氯甲烷中的溶液，同時(shí)有沉淀形成，再將混合物攪拌15分鐘，然后用5分鐘時(shí)間加入0.56ml三乙胺，同時(shí)允許產(chǎn)生的糊狀沉淀在室溫下聚積。用二氯甲烷提取糊狀物，有機(jī)相用10%檸檬酸洗兩次，然后用飽和鹽水溶液洗兩次，Na2SO4干燥，濃縮，通過(guò)硅膠層析(二氯甲烷)純化，得到純的式ⅩⅢ標(biāo)題產(chǎn)物。該純產(chǎn)物具有下列特性m.p.159℃;m/z344(M+)，217(80)，189(60)，178(100)，95(60)。
實(shí)施例7式Ⅻ化合物的制備a)其中c為CH-OCH2-O-CH2-CH2-OCH3的式Ⅻ化合物類似物將2.9g碘和0.55g鎂加到20ml乙醚中，攪拌直至放熱反應(yīng)完全，棕色消失。用注射器移取11g生成的溶液，用10分鐘滴加到1.64g上述實(shí)施例6的g)步中第一個(gè)中間產(chǎn)物在苯中的溶液中。形成了黃色沉淀，將混合物在油浴中溫?zé)嶂?0℃，攪拌1.5小時(shí)，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。產(chǎn)物用乙酸乙酯提取兩次，用NaHCO3和飽和鹽水洗滌，Na2SO4干燥，濃縮，硅膠層析(己烷/乙酸乙酯7∶3)純化，得到1.6g純的標(biāo)題產(chǎn)物。
b)其中c是CHOH的式Ⅻ化合物類似物將510mg該實(shí)施例的a)步產(chǎn)物溶于12ml四氫呋喃中，加入10ml 1NHCl，將混合物在45℃攪拌24小時(shí)，產(chǎn)物混合物用乙酸乙酯提取三次，用飽和鹽水和NaHCO3洗滌。乙酸乙酯相用Na2SO4干燥，濃縮，通過(guò)硅膠層析(己烷/乙酸乙酯1∶1)純化，得到330mg粘的標(biāo)題產(chǎn)物(m/z332(M+)，314(10)，203(75)，190(55)，164(60))。
c)式Ⅻ化合物在攪拌和室溫下，將280mg b)步產(chǎn)物溶于10ml二氯甲烷中，加入475mg重鉻酸吡啶，將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。然后再加入158mg重鉻酸吡啶，再將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜以及另外24小時(shí)。通過(guò)Hyflo過(guò)濾，將所產(chǎn)生的產(chǎn)物溶液與固體副產(chǎn)物分離，層析純化(二氯甲烷洗脫)，得到純的標(biāo)題產(chǎn)物。m.p.137℃;m/z330(M+)，312(20)，202(100)，175(75)。
實(shí)施例8其中R4為H、R5和R6為OMe、-a-b-為順式-CH＝CH-、c為C＝O而-d-e和-f-g-為-CH2-CH2-的式Ⅰ化合物a)4-二甲基叔丁基甲硅烷氧基戊-1-炔在攪拌和室溫條件下，將17.8g(±)-4-戊炔-2-醇溶于150ml乙腈中，加入15.8g咪唑，接著加入35g二甲基叔丁基甲硅烷基氯，引起放熱反應(yīng)，因此所有反應(yīng)混合物組分開(kāi)始時(shí)都溶解了，但后來(lái)立即形成沉淀。將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，然后吸濾，濃縮液體部分，加入另外的2.9g咪唑和6.3g二甲基叔丁基甲硅烷基氯。3小時(shí)后，再次將反應(yīng)混合物吸濾，濃縮液體部分，然后分餾。標(biāo)題產(chǎn)物在頭三個(gè)餾分中，合并之，在64-68℃下減壓(12mmHg)蒸餾純化產(chǎn)物。
b)其中R4是H、R5和R6是OMe而R12是Me的式Ⅶ產(chǎn)物將14.6g相應(yīng)的式Ⅴ化合物、14.6g該實(shí)施例a)步產(chǎn)物、0.3g二乙酸鈀、1.1g三(鄰甲苯基)膦和7.6g乙酸銀加到60ml四氫呋喃中，將混合物在測(cè)浴中攪拌下溫?zé)嶂?0℃，48小時(shí)后，薄層層析判斷結(jié)果是大約70%的反應(yīng)已完全，加入另外的0.3g二乙酸鈀和1.1g三(鄰甲苯基)膦，將混合物在70℃溫?zé)醿商烊埂Ｈ缓笸ㄟ^(guò)Hyflo吸濾混合物，高真空下濃縮，硅膠層析(己烷/乙酸乙酯4∶1)純化，得到第一個(gè)中間產(chǎn)物，即，其中R6＝OMe、R5＝OMe、R4＝H、R12＝Me而C6側(cè)鏈的醛基是二甲基叔丁基甲硅烷基保護(hù)的羥基的相應(yīng)的式Ⅶ化合物類似物。
將6.7g該第一中間產(chǎn)物溶于100ml甲醇中，加入500mg含10%鈀的Pd/C催化劑(Pd/C 10%)，攪拌下對(duì)混合物氫化48小時(shí)(頭24小時(shí)后吸收了350ml H2)。然后通過(guò)Hyflo吸濾反應(yīng)混合物，濃縮;但在該階段由NMR判斷發(fā)現(xiàn)C6側(cè)鏈的雙鍵只有30%被還原。因此，再次將反應(yīng)產(chǎn)物溶于150ml甲醇中，加入500mg 10%Pd/C/催化劑，將混合物在室溫下氫化兩天三夜。通過(guò)Hyflo吸濾所得的反應(yīng)混合物，濃縮，通過(guò)硅膠層析(己烷/乙酸乙酯2∶1)將第二中間產(chǎn)物即其中C6側(cè)鏈的醛基是OH的相應(yīng)的式Ⅶ化合物的類似物與相應(yīng)的甲硅烷氧基保護(hù)的化合物分離，得量4.9g。
在室溫下將1.2ml草酰氯加到30ml攪拌著的二氯甲烷中，將混合物冷至-60℃，用5分鐘時(shí)間滴加在7ml二氯甲烷中的1.9mlDMSO，然后將混合物再攪拌3分鐘，用10分鐘時(shí)間滴加3.5g該實(shí)施例的第二中間產(chǎn)物在20ml二氯甲烷中的溶液。形成了沉淀，再將混合物攪拌20分鐘，濃縮，用5分鐘時(shí)間加入8.2ml三乙胺。形成了稠糊狀沉淀，讓其在室溫下聚積1.5小時(shí)。用二氯甲烷提取固體產(chǎn)物，用10%檸檬酸溶液洗滌兩次，用飽和鹽水和NaHCO3各洗一次，用Na2SO4干燥，濃縮，得到了3.6g膠狀的標(biāo)題產(chǎn)物。
c)其中R4為H、R5和R6為OMe、-a-b-是順式-CH＝CH-、-d-e和-f-g-是-CH2-CH2-而R11是H的式Ⅳ化合物。
在氮?dú)夥障?，?.39g該實(shí)施例a)步產(chǎn)物加到5ml四氫呋喃中，在-70℃下用2分鐘時(shí)間滴加1.2ml丁基鋰。1小時(shí)后，用5分鐘時(shí)間滴加0.5g該實(shí)施例b)步最終產(chǎn)物在4ml四氫呋喃中的溶液，將混合物在-70℃攪拌1.5小時(shí)，然后溫?zé)嶂潦覝?。此時(shí)薄層層析表明反應(yīng)已完全。在用冰冷卻下，產(chǎn)物用10%檸檬酸溶液洗滌，用乙酸乙酯提取三次，用飽和鹽水和NaHCO3洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮，得到0.87g樹(shù)脂狀第一中間產(chǎn)物，即其中COOH取代基是甲氧基酯形式、相應(yīng)于式Ⅰ化合物的-a-b-鍵的是炔鍵而在C11側(cè)鏈的C10碳原子上的OH取代基被叔丁基甲硅烷基保護(hù)的相應(yīng)的式Ⅳ化合物的類似物。
將3.1g該第一中間產(chǎn)物溶于50ml吡啶中，加入200mg 10% Pd//BaSO4，在室溫和磁力攪拌條件下，氫化混合物。4小時(shí)后，吸收了大于理論量的氫(240ml)。然后將所得產(chǎn)物取樣，濃縮，溶于二氯甲烷中，用10%檸檬酸溶液洗滌(此時(shí)用NMR判斷，反應(yīng)已完全)。通過(guò)Hyflo吸濾，將產(chǎn)物與催化劑分離，濃縮，溶于乙酸乙酯，用飽和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮，得到3.05g樹(shù)脂狀第二中間產(chǎn)物，即其中相應(yīng)于式Ⅰ化合物的-a-b-鍵的鍵是順式-CH＝CH-的該步中第一中間產(chǎn)物的類似物。
按相似于實(shí)施例6f)步的方法，將該步的第二中間產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成標(biāo)題產(chǎn)物(m/z367(MH+)，349(40)，331(100)，305(90)，191(100))。
d)其中R4是H、R5和R6是OMe、-a-b-是順式-CH＝CH-、c是C＝O而-d-e-和-f-g-是-CH2-CH2-的式Ⅰ化合物。
在攪拌下，將1.7g上述c步最終產(chǎn)物溶于1.8升乙腈中，加入5.9g碘化2-氯吡啶和6.5ml三乙胺，將混合物在攪拌下于油浴中溫?zé)嶂?0℃并過(guò)兩天三夜。然后濃縮產(chǎn)物，溶于乙酸乙酯中，用10%檸檬酸溶液、NaHCO3和飽和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮，得到1.6g粗的中間產(chǎn)物(即其中c為CHOH的標(biāo)題產(chǎn)物的類似物)，為棕色樹(shù)脂狀。通過(guò)硅膠層析(己烷/乙酸乙酯3∶2)純化該粗產(chǎn)物，用二氯甲烷溶解該中間產(chǎn)物。
在室溫下向2ml二氯甲烷中加入5μl草酰氯，將混合物冷卻至-70℃，攪拌下用3分鐘滴加在1ml二氯甲烷中的93μlDMSO。再將混合物攪拌5分鐘，然后，用5分鐘時(shí)間滴加0.2g該步中間產(chǎn)物的溶液。形成了沉淀，再將混合物攪拌15分鐘，用5分鐘時(shí)間滴加0.4ml三乙胺，在-70℃將混合物攪拌1小時(shí)，然后用1小時(shí)溫?zé)嶂潦覝?。用二氯甲烷稀釋所得產(chǎn)物混合物，用10%檸檬酸溶液洗兩次，用飽和鹽水洗一次，用Na2SO4干燥，濃縮，通過(guò)硅膠層析和重結(jié)晶純化，得到大約100mg純產(chǎn)物(m.p.110℃)。
實(shí)施例9其中R4和R6是H、R5是OMe、-a-b-是反式-CH＝CH-、c是C＝O而-d-e-和-f-g-是-CH2-CH2-的式Ⅰ化合物。
將35mg鎂與1ml乙醚和1ml苯一起攪拌，加入0.18g碘，1.5小時(shí)后，深棕色逐漸消散。將所得混合物的液相加到50mg實(shí)施例6最終產(chǎn)物在2ml苯中的溶液中，同時(shí)形成沉淀。將混合物在60℃攪拌2.5小時(shí)，產(chǎn)物溶于乙酸乙酯中，用1N HCl、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮，通過(guò)硅膠層析純化(甲苯/甲醇98∶2)。將該產(chǎn)物進(jìn)一步在硅膠柱上純化(己烷/乙酸乙酯3∶2)，得到大約30mg純的油狀標(biāo)題產(chǎn)物(m/z333(MH+)，315(80)，265(100)，177(90))。
實(shí)施例10其中R4是H、R5和R6是OMe、-a-b-是反式-CH＝CH-、c是C＝O而-d-e-和-f-g-是-CH2-CH2-的式Ⅰ化合物。
按照與實(shí)施例3和9相似的方法，通過(guò)-a-b-鍵異構(gòu)化，從其中-a-b-是順式-CH＝CH-的相應(yīng)產(chǎn)物即實(shí)施例8的最終產(chǎn)物制備標(biāo)題產(chǎn)物。得到了油狀標(biāo)題產(chǎn)物(m/z346(M+)，205(50)，191(100)，178(40)，152(40)，95(55)。
權(quán)利要求
1.式Ⅰ化合物，
式中R4和R6相同或不同，代表H、OH、C1-4烷氧基或C1-4烷基COO-，-a-b-和-d-e-中的一個(gè)是-CHR7-CHR8-，而另一個(gè)是順式或反式-CR7=CR8-，其中R7和R8相同或不同，代表H、OH、C1-4烷氧基或C1-4烷基COO-，c是CH-OH或C=O，-f-g-是-CH2-CH2-或順式或反式-CH=CH-，條件是，當(dāng)R4是H、R6是OH而-f-g-是反式-CH=CH-時(shí)，1.當(dāng)-a-b-是-CH2-CH2-、c是C=O而-d-e-是-CH2-CH2-時(shí)，R5不是OH，或2.當(dāng)-a-b-是-CH2-CH2-或順式-CH=CH-、c是C=O或CH-OH而-d-e-是-CHOH-CHOH時(shí)，R5不是甲氧基，所述式Ⅰ化合物是游離形式或堿鹽形式或其生理上可水解或接受的酯形式，并且其中標(biāo)星號(hào)“*”的不對(duì)稱碳和為不對(duì)稱碳時(shí)的原子a和/或b或d和/或e具有R或S構(gòu)型，或所述化合物包括其旋光異構(gòu)體的任何混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R4和R6相同或不同，它們是H、-OH、MeO-或MeCOO-，R5是-OH、MeO-或MeCOO-，-a-b-是順式或反式-CR′7＝CR′8-，其中R′7和R′8相同或不同，它們是H、OH、MeO-或MeCOO-，-d-e-是-CHR′7-CHR′8-，其中R′7和R′8如所定義的。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R4是H或MeO，R5是MeO，R6是OH或MeO，-a-b-是順式或反式-CH＝CH-，-d-e-是-CH2-CH2-或-CHOH-CHOH-，而-f-g-是反式-CH＝CH-。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R4是H或MeO-，R5是MeO-，R6是OH，-a-b-是順式或反式-CH＝CH-，c是CHOH或C＝O，-d-e-是-CHOH-CHOH-，而-f-g-是反式-CH＝CH-;條件是，當(dāng)-a-b-是順式-CH＝CH-時(shí)，那么R4是MeO-，而c是C＝O，所述化合物是游離形式或堿鹽形式或者生理上可水解或接受的酯的形式。
5.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中-a-b-是反式-CH＝CH-。
6.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中所有不對(duì)稱碳原子具有S-構(gòu)型。
7.如前定義的式Ⅰ′、Ⅰ″、Ⅹ、Ⅺ、Ⅹ、Ⅱ或ⅩⅢ化合物。
8.制備式Ⅰ′化合物的方法，其中包括培養(yǎng)產(chǎn)生87-2500904-F1的真菌菌株和分離形成的代謝物87-250904-F1的步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述的真菌菌株是NRRL18919。
10.NRRL18919真菌菌株的純培養(yǎng)物。
11.通過(guò)培養(yǎng)NRRL18919真菌菌株得到的發(fā)酵液。
12.制備其中-a-b-是反式-CH＝CH-的式Ⅰ化合物的方法，其中包括在溫和的堿性條件下使相應(yīng)的順式異構(gòu)體異構(gòu)化的步驟。
13.制備其中c是CHOH的式Ⅰ化合物的方法，其中包括使式Ⅳ化合物環(huán)化，并脫除其中的任何羥基保護(hù)基，
式中R4、R5、R6-a-b-、-d-e-和-f-g-如權(quán)利要求1中所定義，但-a-b-或-d-e-上的任何羥基保護(hù)基處在適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)形式，R11是H或羥基保護(hù)基。
14.制備其中c是C＝O的式Ⅰ化合物的方法，其中包括氧化其中c是CHOH的Ⅰ式化合物的c即CHOH基團(tuán)。
15.治療需要此種治療的主體的由過(guò)量細(xì)胞素釋放特別是IL-1β釋放引起的或與之有關(guān)的疾病諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性休克、牛皮癬、粥樣硬化、炎性腸病、克羅恩氏病和哮喘的方法，該方法包括使所述主體服用有效量的游離形式或堿鹽形式的下列化合物或其生理上可水解或接受的酯a)權(quán)利要求1的化合物;或
式中R1是H或甲基;R2和R3是H或OH;R4是H或甲氧基;-a-b-是-CH2-CH2-或-CH＝CH-c是C＝O或CH-OH(不是權(quán)利要求1的化合物);或c)其中R是H或甲基的式Ⅲ化合物。
16.用作藥物的權(quán)利要求15中所述的游離形式或堿鹽形式的式Ⅱ化合物或其生理上可水解或接受的酯，式Ⅱ中，R1是甲基;R2和R3是H或OH;R4是H或甲氧基;-a-b-是-CH2-CH2-或順式-CH＝CH-;c是C＝O或CH-OH。
17.包含權(quán)利要求1的化合物的藥物組合物。
18.包含權(quán)利要求15中所述的游離形式或堿鹽形式的式Ⅱ化合物或其生理上可水解或接受的酯的藥物組合物，其中式Ⅱ中，R1是甲基;R2和R3是H或OH;R4是H或甲氧基;-a-b-是-CH2-CH2-或順式-CH＝CH-;而c是C＝O或CHOH。
全文摘要
其中各基團(tuán)如說(shuō)明書(shū)中所定義的新的式I化合物是細(xì)胞素釋放抑制劑和IL-1拮抗劑，因此適用于治療由過(guò)量細(xì)胞素釋放特別是IL-1β釋放引起的或與之有關(guān)的疾病。例如在各種炎性狀態(tài)和疾病中，諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、膿毒性休克、牛皮癬、粥樣硬化、炎性腸病、克羅恩氏病和哮喘。也已發(fā)現(xiàn)相關(guān)的已知化合物Zearalenone和根赤殼菌素及其衍生物具有細(xì)胞素釋放抑制劑性質(zhì)和相似的藥物應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07D313/00GK1095417SQ9312077
公開(kāi)日1994年11月23日 申請(qǐng)日期1993年12月3日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月4日
發(fā)明者M·M·德賴發(fā)斯, A·盧特懷勒, A·R·麥肯齊, J·施奈德, R·P·特拉伯, H·馬特斯 申請(qǐng)人:山道士有限公司