一種從秦皮中提取高純度秦皮甲素和秦皮苷的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種從秦皮中提取高純度秦皮甲素和秦皮苷的方法。采用常規(guī)方法粉碎秦皮原料和熱回流提取、制備雙水相、溶解、萃取、濃縮、除鹽、結(jié)晶步驟。主要步驟包括：1)制備雙水相體系，分離上相和下相后備用，用上相溶劑溶解秦皮提取物；2)離心或過濾上述含有秦皮提取物的溶液后，加入適量下相溶劑，充分?jǐn)嚢杌旌?，靜置，分離得到的上相溶液濃縮，可有效去除秦皮提取物中無機(jī)物、單糖、多糖及植物蛋白、葉綠素等固體雜質(zhì)，提高秦皮甲素和秦皮苷的含量。上述步驟得到的溶液經(jīng)過常規(guī)方法除鹽等雜質(zhì)后，濃縮至合適濃度，可先后得到秦皮甲素和秦皮苷結(jié)晶。本發(fā)明克服了目前從秦皮中制備秦皮甲素和秦皮苷存在的不易結(jié)晶或生產(chǎn)成本高、操作復(fù)雜等問題，具有生產(chǎn)設(shè)備簡單、綠色環(huán)保等特點(diǎn)。
【專利說明】一種從秦皮中提取高純度秦皮甲素和秦皮苷的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種采用無機(jī)鹽/能與水互溶的有機(jī)溶劑形成的雙水相體系的上、下 相溶液溶解、萃取秦皮提取物中的秦皮甲素和秦皮苷的方法，屬于生物化工【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前，高純度的秦皮甲素的主要用途有①作為生化檢測試劑：利用某些代謝活潑 的細(xì)菌的結(jié)構(gòu)酶可快速使秦皮甲素水解生成秦皮乙素和葡萄糖，生成的秦皮乙素又可與培 養(yǎng)基中枸櫞酸鐵銨或者檸檬酸鐵分解產(chǎn)生的Fe 2+反應(yīng)，生成藍(lán)黑色物質(zhì)，使培養(yǎng)基呈現(xiàn)藍(lán) 黑色斑點(diǎn)，以此可直觀、準(zhǔn)確的鑒別某些含氧細(xì)菌的種類，最快可在15 -30分鐘內(nèi)即可得出 檢測結(jié)果，與傳統(tǒng)的采用微生物的常規(guī)培養(yǎng)法檢測相比，是一種新型的快速、有效的微生物 檢查試劑。②用于化妝品中可以起到美白、防曬、抑汗的作用，作為重要的天然化妝品原料， 已有百年的應(yīng)用歷史。
[0003] 另外，秦皮甲素、秦皮苷作為主要物質(zhì)基礎(chǔ)制成有滴眼液、口腔清洗劑等應(yīng)用于人 體健康調(diào)節(jié)。
[0004] 目前，從秦皮中分離制備高純度的秦皮甲素和秦皮苷的方法可以分為柱層析法和 有機(jī)溶劑萃取兩種方法。其中柱層析法的形式主要有：《從中藥秦皮中分離純化單體化合物 的方法》（中國專利CN102924416B)提出的采用凝膠過濾填料Superose 12為分離載體，以 10 - 80%的甲醇-水為洗脫液，分部收集目標(biāo)組分，經(jīng)過濃縮得到98%以上的秦皮甲素、秦 皮乙素、秦皮苷和秦皮素。另外，《高純度秦皮甲素及其制備方法》（中國專利CN1955173B) 提出采用大孔樹脂為吸附和分離載體，以去離子水為洗脫劑，洗至澄清后，收集10?15倍 柱體積的洗脫溶液，濃縮，過濾、重結(jié)晶可得到純度97%以上的秦皮甲素。上述方法采用凝 膠和大孔樹脂作為分離載體，生產(chǎn)成本高，載體的吸附量有限，載體的前處理和使用后的再 生處理復(fù)雜，多次使用后其吸附量必然下降，工藝重復(fù)性差，不利于操作的連續(xù)進(jìn)行和規(guī)模 化制備秦皮甲素和秦皮苷。有機(jī)溶劑萃取法的實(shí)施過程為，采用氯仿萃取除去秦皮提取液 中的樹脂、葉綠素等脂溶性雜質(zhì)后，再用乙酸乙酯萃取除去其中的秦皮乙素等雜質(zhì)，濃縮經(jīng) 過2次萃取處理的秦皮提取物液至合適體積，放置，結(jié)晶、或重結(jié)晶得到秦皮甲素。該方法 主要存在的主要問題為，待結(jié)晶溶液中含有大量植物多糖和單糖、蛋白等，粘度高，不易結(jié) 晶。
[0005] 因此，本領(lǐng)域需要一種可以克服現(xiàn)存秦皮甲素和秦皮苷的生產(chǎn)中存在的諸多問 題，可以降低生產(chǎn)成本，易于規(guī)?；a(chǎn)，對環(huán)境友好型的高純度秦皮甲素和秦皮苷的方 法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種從秦皮中提取高純度秦皮甲素和秦皮苷的方法，該方 法易于操作和規(guī)?；a(chǎn)，具有生產(chǎn)成本低、設(shè)備簡單、綠色環(huán)保等特點(diǎn)。
[0007] 本發(fā)明提供了一種從秦皮中提取高純度秦皮甲素和秦皮苷的方法，其特征在于包 括以下步驟：
[0008] (1)采用甲醇或水常規(guī)方法得到含秦皮甲素、秦皮苷等不同質(zhì)量濃度的秦皮提取 物；
[0009] (2)制備雙水相體系，并分離得到雙水相的上相和下相溶液，用上相溶液反復(fù)溶解 秦皮提取物，至秦皮提取物中不含有秦皮甲素和秦皮苷為止；
[0010] (3)離心或過濾上述含有秦皮甲素和秦皮苷的溶液后，加入上述溶液1?3倍量 的下相溶液，充分萃取，至上相中的固形物雜質(zhì)比例不再明顯減少為止，分離得到的上相溶 液，濃縮得到主要含秦皮甲素和秦皮苷的溶液；
[0011] ⑷采用常規(guī)手段除鹽及脂溶性雜質(zhì)成分后，濃縮、結(jié)晶得到高純度秦皮甲素和秦 皮苷。
[0012] 所述雙水相體系采用Na2HP04、（NH4) 2SCV K2HPO4以及能夠形成雙水相的無機(jī)鹽制 備所得。
[0013] 所述雙水相體系中的有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇。
[0014] 所述雙水相體系的溶液溫度為20°?30°C。
[0015] 本發(fā)明所指秦皮，指以2010年版中國藥典規(guī)定的正品秦皮藥材（包括木犀科苦 櫪白錯(cuò)樹 Fraxinus rhynchophylla Hance、白錯(cuò)樹 Fraxinus chinensis Roxb.、尖葉白錯(cuò) 樹Fraxinus szaboana Lingelsh.或宿柱白錯(cuò)樹Fraxinus stylosa Lingelsh.)及披針葉 白錯(cuò)樹Fraxinus baroniana Diels、小葉白錯(cuò)樹Fraxinus bungeana DC.的干燥枝皮或干 皮。并以此為原料，經(jīng)常規(guī)方法如甲醇、乙醇、水經(jīng)回流提取、濃縮的流浸膏或浸膏經(jīng)過噴粉 等得到的粉末等，秦皮甲素和秦皮苷的質(zhì)量濃度一般分別為5 %?30 %和3 %?20 %左右。
[0016] 上述提取物中主要有效成分包括秦皮甲素（Esculin)、秦皮乙素（Aesculetin，）、 秦皮苷（Fraxin)、秦皮素（Fraxetin)等香豆素類成分，以及大量的葉綠素、糖類和樹脂等， 其中秦皮甲素和秦皮苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0017]

【權(quán)利要求】
1. 一種從秦皮中提取高純度秦皮甲素和秦皮苷的方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 采用甲醇或水常規(guī)方法得到含秦皮甲素、秦皮苷等不同質(zhì)量濃度的秦皮提取物； (2) 制備雙水相體系，并分離得到雙水相的上相和下相溶液，用上相溶液反復(fù)溶解秦皮 提取物，至秦皮提取物中不含有秦皮甲素和秦皮苷為止； (3) 離心或過濾上述含有秦皮甲素和秦皮苷的溶液后，加入上述溶液1?3倍量的下相 溶液，充分萃取，至上相中的固形物雜質(zhì)比例不再明顯減少為止，分離得到的上相溶液，濃 縮得到主要含秦皮甲素和秦皮苷的溶液； (4) 采用常規(guī)手段除鹽及脂溶性雜質(zhì)成分后，濃縮結(jié)晶得到高純度秦皮甲素和秦皮苷。
2. 如權(quán)利要求1所述的從秦皮中提取高純度秦皮甲素和秦皮苷的方法，其特征在于所 用秦皮原料包括2010年版中國藥典規(guī)定的正品秦皮藥材、披針葉白蠟樹、小葉白蠟樹以及 其他含有秦皮甲素和秦皮苷的木犀科植物的干燥枝皮或干皮；其中秦皮甲素和秦皮苷的質(zhì) 量濃度分別為5%?30%和3%?20%。
3. 如權(quán)利要求1所述的從秦皮中提取高純度秦皮甲素和秦皮苷的方法，其特征在于所 述雙水相體系采用Na2HP0 4、（NH4)2SCVK2HPo4以及能夠形成雙水相的無機(jī)鹽制備所得。
4. 如權(quán)利要求1所述的從秦皮中提取高純度秦皮甲素和秦皮苷的方法，其特征在于所 述雙水相體系中的有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇。
5. 如權(quán)利要求1所述的從秦皮中提取高純度秦皮甲素和秦皮苷的方法，其特征在于所 述雙水相體系的溶液溫度為20°?30°C。
【文檔編號】C07H1/08GK104311616SQ201410519725
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月30日
【發(fā)明者】周軍輝, 上官建國, 石新衛(wèi), 衛(wèi)偉光 申請人:陜西省西安植物園