專利名稱：秦皮甲素預防和/或治療心腦血管疾病的新用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及秦皮甲素的預防和/或治療和晚期糖基化終產物相關 疾病以及心腦血管疾病的藥物中應用，尤其是在制備預防和治療動脈 粥樣硬化的藥物中應用。技術背景眾所周知，心腦血管疾病是全球死亡率最高的疾病，動脈粥樣硬 化是許多心腦血管病的主要病理基礎和主要病因，其發(fā)生過程涉及血 液和血管壁的眾多細胞及其分泌的細胞因子，是動脈壁細胞、細胞外 基質、血液成分(單核細胞、血小板及低密度脂蛋白)、局部血流動力學、 環(huán)境及遺傳等諸多因素相互作用引起動脈機械性狹窄的病理過程，是 一種復雜的、多因素疾病，其發(fā)病的分子和細胞機制至今還不太明確。蛋白質在轉錄后經非酶糖化/氧化修飾可形成棕色、帶有熒光活性的聚合物，被稱為晚期糖基化終產物(advanced glycosylation end products, AGEs)。蛋白糖化反應在正常機體緩慢進行，隨著年齡的增長 逐漸積累，但在持續(xù)高血糖、氧化應激、腎功能障礙等病理狀態(tài)下， 由于排泄和代謝障礙，循環(huán)中AGEs潴留，在血管壁動脈粥樣硬化病 變部位可見AGEs的沉積。AGEs不僅可通過與其他蛋白質發(fā)生交聯， 直接影響細胞和組織功能；而且與其特異受體的結合，通過信號轉導 機制導致疾病的發(fā)生和發(fā)展，在動脈粥樣硬化、糖尿病并發(fā)癥、老年 性疾病、終末期腎臟病的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。機體內AGEs含量隨著年齡增長而升高，組織中AGEs的過度蓄 積將引起各種組織的病理改變。有多種阻止AGEs累積與形成的治療 方法，降糖藥、氨基胍類化合物、ALT946、吡哆胺(pyridoxamine)可以 在不同途徑阻滯AGEs形成[2]，而AGEs裂解劑可以裂解已經形成的 AGEs交聯結構。實驗表明AGEs抑制劑以及AGEs交聯結構裂解劑， 可以從不同的階段阻斷AGEs的形成，特別是AGEs裂解劑能夠逆轉 或軟化由AGEs造成的組織、器官以及血管的硬化，因而有希望成為 一類新型治療藥物，用于治療糖尿病和衰老過程中由于AGEs引發(fā)的 各種并發(fā)癥，尤其是動脈粥樣硬化。抗動脈粥樣硬化藥物是國際制藥業(yè)爭奪的制高點之一。目前，尚 無理想的品種上市。針對動脈粥樣硬化的病理生理學特征，臨床上常用的藥物類型包括調血脂藥、抗氧化藥、抗血小板藥、f丐拮抗劑、抗血栓形成藥等，這些藥物與治療途徑均不能從根本上解決動脈粥樣 硬化。秦皮為常用的中藥，系木犀科植物白蠟樹Fra^"船c/z/"e"w;s i ox6等五種植物的干燥枝皮或樹千皮，是我國一味常用中藥，始載于漢代 的藥學專著《神農本草經》，歷代本草均有記載。秦皮具有清熱燥濕、 收澀、明目之功效,常用于治療熱痢、泄瀉、赤白帶下、目赤腫痛、目 生翳膜等癥?，F代藥理研究表明，秦皮具有抗炎鎮(zhèn)痛、降低尿血酸、 抗凝、止咳祛痰平喘以及抗腫瘤作用，主要用于治療腸炎、痢疾、白 帶、慢性氣管炎、結膜炎，用于治療痛風效果甚佳。正品秦皮中主要 成分為香豆素類(秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素、宿柱白蠟苷、 6， 7—二甲氧基香豆素等)，此外還有芬類、皂苷和鞣質等，其中秦皮 甲素、秦皮乙素是治療氣管炎和菌痢疾患的有效成份。迄今為止，我 們沒有看到秦皮甲素對動脈粥樣硬化的研究報道。
發(fā)明內容本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種新的AGEs抑制劑、AGEs裂 解劑以及AGEs受體拮抗劑一秦皮甲素。本發(fā)明提供了秦皮甲素在制備預防和/或治療和晚期糖基化終產 物相關疾病的藥物中應用。所述的晚期糖基化終產物相關疾病包括糖尿病并發(fā)癥、老年性疾 病、終末期腎臟病。本發(fā)明提供了秦皮甲素在制備預防和/或治療心腦血管疾病的藥 物中應用。所述的心腦血管疾病包括高血脂癥、動脈粥樣硬化。為解決本發(fā)明的技術問題，本發(fā)明采用如下的技術方案。本發(fā)明 通過3個不同的藥物作用耙點建立AGEs抑制劑、AGEs裂解劑以及 AGEs受體拮抗劑藥物篩選模型，通過對4800個樣品進行AGEs抑制 劑和裂解劑的篩選，發(fā)現秦皮甲素具有較好的AGEs抑制作用(半數 抑制濃度為2ng/ml)和裂解作用(半數抑制濃度〈lng/ml)。本發(fā)明的發(fā)明人還對秦皮甲素的體內抗動脈粥樣硬化活性進行了 進一步評價，證實秦皮甲素有治療動脈粥樣硬化的作用。整體動物藥 效評價實驗結果表明，秦皮甲素低劑量組、秦皮甲素高劑量組與高膽 固醇模型組、靜脈注射AGEs高膽固醇模型組比較，可顯著降低血清 中的CHO、 LDL-C、 TG的含量，顯著升高血清中HDL-C/CHO含量和 SOD活力，顯著降低高脂血癥大鼠的MDA含量，抑制大鼠動脈粥樣 硬化斑塊的形成。AGEs斷裂劑——秦皮甲素能對抗實驗性高脂血癥， 抑制大鼠動脈粥樣硬化的形成，具有預防和治療動脈粥樣硬化形成的 作用。本發(fā)明還涉及以本發(fā)明化合物作為活性成份的藥物組合物。該藥 物組合物可根據本領域公知的方法制備?？赏ㄟ^將本發(fā)明化合物與一 種或多種藥學上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑結合，制成適于 人或動物使用的任何劑型。本發(fā)明化合物在其藥物組合物中的含量通常為0.1-95重量％。本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給 藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、 鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可 以是溶液劑(包括真溶液和膠體溶液)、乳劑(包括o/w型、w/o型和 復乳)、混懸劑、注射劑(包括水針劑、粉針劑和輸液)、滴眼劑、滴 鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑(包括普通片、腸溶片、 含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片)、膠囊劑(包括硬膠囊、 軟膠囊、腸溶膠囊)、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、 氣(粉)霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑 等。本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、 靶向制劑及各種微粒給藥系統。為了將本發(fā)明化合物制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種 賦形劑，包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑。 稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、 木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是 水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡 萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠衆(zhòng)、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲 基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、 聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是干淀粉、微晶纖維素、 低取代羥丙基纖維素、交聯聚乙烯吡咯烷酮、交聯羧甲基纖維素鈉、 羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十 二垸基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸 鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、
腸溶包衣片，或雙層片和多層片。為了將給藥單元制成膠囊劑，可以將有效成分本發(fā)明化合物與稀釋劑、助流劑混合，將混合物直接置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有 效成分本發(fā)明化合物先與稀釋劑、黏合劑、崩解劑制成顆?；蛭⑼瑁?再置于硬膠囊或軟膠囊中。用于制備本發(fā)明化合物片劑的各稀釋劑、 黏合劑、潤濕劑、崩解劑、助流劑品種也可用于制備本發(fā)明化合物的 膠囊劑。為將本發(fā)明化合物制成注射劑，可以用水、乙醇、異丙醇、丙二 醇或它們的混合物作溶劑并加入適量本領域常用的增溶劑、助溶劑、pH調劑劑、滲透壓調節(jié)劑。增溶劑或助溶劑可以是泊洛沙姆、卵磷脂、 羥丙基-(3-環(huán)糊精等；pH調劑劑可以是磷酸鹽、醋酸鹽、鹽酸、氫氧化 鈉等；滲透壓調節(jié)劑可以是氯化鈉、甘露醇、葡萄糖、磷酸鹽、醋酸 鹽等。如制備凍干粉針劑，還可加入甘露醇、葡萄糖等作為支撐劑。此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、 矯味劑或其它添加劑。為達到用藥目的，增強治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可 用任何公知的給藥方法給藥。本發(fā)明化合物藥物組合物的給藥劑量依照所要預防或治療疾病的 性質和嚴重程度，患者或動物的個體情況，給藥途徑和劑型等可以有 大范圍的變化。 一般來講，本發(fā)明化合物的每天的合適劑量范圍為 0.001-150mg/Kg體重，優(yōu)選為0.1-100mg/Kg體重，更優(yōu)選為l-60mg/Kg 體重，最優(yōu)選為2-30mg/Kg體重。上述劑量可以一個劑量單位或分成 幾個劑量單位給藥，這取決于醫(yī)生的臨床經驗以及包括運用其它治療 手段的給藥方案。本發(fā)明的化合物或組合物可單獨服用，或與其他治療藥物或對癥 藥物合并使用。當本發(fā)明的化合物與其它治療藥物存在協同作用時， 應根據實際情況調整它的劑量。本發(fā)明的優(yōu)點秦皮甲素為常用中藥中提取的單體化合物，具有毒性低、提取工
藝簡單等優(yōu)點；其原材料資源廣闊，具有很好的應用與開發(fā)前景。 本發(fā)明的秦皮甲素具有晚期糖基化終產物抑制作用和裂解作用。 具有清除超氧陰離子自由基、保護機體細胞免受自由基損傷的作用。能夠預防和治療動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展。


縮寫CHO:血清總膽固醇；LDL-C:低密度脂蛋白膽固醇；HDL-C:高密度脂蛋白膽固醇；TG:甘油三脂；SOD:超氧化物歧化酶；MDA:丙二醛；control:空白對照組；model:高脂血癥模型組；AGE model : AGEs模型組；QP10mg/kg:秦皮低劑量組(10mg/kg);QP50mg/kg:秦皮高劑量組(50mg/kg);Tatin3.5 mg/kg:辛伐他汀(0.35mg/kg)陽性對照組。圖1秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠血清總膽面醇含量的影響。 圖2為秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇 含量的影響。圖3為秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠血清甘油三脂含量的影響。
圖4為秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠血清高密度脂蛋白膽固醇 含量的影響。圖5為秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠血清SOD活力的影響。 圖6為秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠血清MDA含量的影響。 圖7為秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠主動脈病變的影響。
具體實施方式
以下將通過實施例進一步描述本發(fā)明，但這些實施例僅是說明本 發(fā)明，而不應理解為對本發(fā)明范圍的任何限制。 藥理實驗實施例l:根據牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)與乙二 醛(Glyoxyl)共同孵育而生成AGEs，將樣品與BSA、 Glyoxyl—起溫 孵，以氨基胍(AGN)為陽性藥，通過AGEs的熒光值變化來判斷樣 品對AGEs的抑制作用。通過對4800個樣品進行AGEs抑制劑和裂解 劑的篩選，發(fā)現秦皮甲素具有較好的AGEs抑制作用(半數抑制濃度 為2ng/ml)和裂解作用(半數抑制濃度〈lng/ml)。實施例2:秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠的降低血脂作用。雄性SD大鼠，隨機分為空白對照組(給予普通飼料喂養(yǎng))即control,高脂血癥模型組即mc)del、AGEs模型組艮卩AGE model、秦皮低劑量組U0mg/kg)即QP10mg/kg、秦皮高劑量組(50mg/kg)即QP50mg/kg、辛伐他汀(0.35mg/kg)陽性對照組即Tatin3.5 mg/kg。給予大鼠高脂飼料喂養(yǎng)90天，同時每日上午灌服受試藥物；下午 灌服膽酸鈉(300 mg/kg)和丙基硫氧嘧啶(150 mg/kg); AGEs模型組、
秦皮低劑量組、秦皮高劑量組每周靜脈注射AGEs (5mg/kg)。給藥12 周時測定血清總膽固醇(CHO)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高 密度脂蛋白膽固醇(HDL,C)、甘油三脂(TG)。結果表明高脂血癥模型組與空白對照組相比血清中的CHO、LDL-C、 TG明顯升高，而HDL-C明顯降低；AGEs模型組與空白對照 組相比血清中的CHO、 LDL-C、 TG明顯升高，但對HDL-C無顯著性 差異；秦皮高、低劑量組可明顯降低AGEs模型組、高脂血癥模型組 血清中的CHO、 LDL-C、 TG含量，明顯升高血清中的HDL-C含量。 結果表明，秦皮甲素可顯著降低實驗性高脂血癥動物血清中CHO、 LDL-C、 TG含量，升高HDL-C含量，說明秦皮甲素具有降低血脂的 作用。具體見圖1、 2、 3和4。實施例3:秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠血清超氧化物歧化酶 (SOD)的作用。給藥方案和實施例2完全相同，給藥12周時取血，檢測血清SOD。 結果表明，AGEs模型組、高脂血癥模型組與空白對照組比較血清 中SOD活力明顯降低；秦皮甲素給藥組可明顯升高SOD活力。結果表明，秦皮甲素(10mg/kg)、秦皮甲素(50mg/kg)組可顯著升高高脂血癥大鼠的SOD活力；說明秦皮甲素對高脂血癥大鼠氧化與抗氧化平衡起著重要作用，并能清除超氧陰離子自由基。具體見圖5。實施例4:秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠血清丙二醛(MDA) 含量的作用。給藥方案和實施例2完全相同，給藥12周時取血，檢測MDA。 結果表明，AGEs模型組、高脂血癥模型組與空白對照組比較血清 中MDA含量明顯升高；秦皮甲素給藥組可顯著降低MDA含量。
結果表明，秦皮甲素(10mg/kg)、秦皮甲素(50mg/kg)組可顯著 降低高脂血癥大鼠的MDA含量；說明秦皮甲素具有保護高脂血癥大鼠 機體細胞受自由基損傷的作用。具體見圖6。實施例5:秦皮甲素對實驗性動脈粥樣硬化大鼠抑制動脈粥樣硬化斑塊 形成的作用。給藥方案和實施例2完全相同，給藥12周時用常規(guī)病理切片法 觀察主動脈動脈粥樣硬化斑塊的形成。結果表明空白對照組內皮細胞正常，無平滑肌細胞增殖，無斑 塊形成；而高脂血癥模型組、AGEs模型組內皮細胞腫脹、脫落，平滑 肌細胞明顯增殖，管壁外層有脂質沉積，有炎癥細胞浸潤，有斑塊形 成；秦皮低劑量組、秦皮高劑量組內皮細胞完整、無明顯腫脹、脫落 情況減輕，平滑肌細胞增殖不明顯，有少量炎癥細胞浸潤，無斑塊形 成，陽性藥辛伐他汀組大部分內皮細胞正常，有部分內膜、內皮細胞 脫落，平滑肌細胞略有增殖不明顯，無斑塊形成。結果表明，秦皮甲素具有對抗和抑制動脈粥樣硬化斑塊形成的作 用。具體見圖7。毒理實驗實驗例6:秦皮甲素的體外細胞毒性作用。體外培養(yǎng)小鼠來源的成纖維細胞NIH/3T3細胞株，加入l、 0.1、 0.01、 0.001、 0.0001 mM濃度的秦皮甲素，24小時后觀察細胞形態(tài)學， 并用MTT法檢測其細胞毒性。結果顯示加入秦皮甲素作用24小時后，對細胞形態(tài)學無明顯改 變；MTT比色法結果顯示，秦皮甲素對NIH/3T3細胞生長增殖無顯著 性抑制和殺傷作用，說明秦皮甲素含量在lmM和lmM以下無體外細 胞毒作用。實施例7:秦皮甲素的小鼠體內急性毒性作用。取健康昆明種小白鼠，雌雄各半，體重22士lg。禁食12h，正常飲 水，每只鼠每次灌胃0.2ml/10g體重，間隔6h，其中含秦皮甲素(5g/Kg)， 分兩次給藥，相當動物有效劑量的用量的200倍(未測出LD5(,)。用藥后動物未出現明顯的中毒癥狀及死亡情況，連續(xù)觀察一周， 動物全部存活，活動自如，毛發(fā)光滑，飲食正常，呼吸、鼻、眼、口 腔無異常分泌物，體重增加。 一周后解剖動物，肉眼及顯微鏡觀察重 要臟器，未出現明顯的病理學改變。急性毒性實驗結果證實，秦皮甲 素無急性毒性作用，在最大灌胃量內，未測出明顯的LD^。
權利要求
1、秦皮甲素在制備預防和/或治療和晚期糖基化終產物相關疾病的藥物中應用。
2、 根據權利要求l的應用，其特征在于，所述的晚期糖基化終產物相 關疾病包括糖尿病并發(fā)癥、老年性疾病、終末期腎臟病。
3、 秦皮甲素在制備預防和/或治療心腦血管疾病的藥物中應用。
4、 根據權利要求l的應用，其特征在于，所述的心腦血管疾病包括高 血脂癥、動脈粥樣硬化。
5、 一種藥物組合物，其特征在于，含有藥物有效劑量的秦皮甲素及藥 用載體。
全文摘要
本發(fā)明公開了秦皮甲素的預防和/或治療和晚期糖基化終產物相關疾病以及心腦血管疾病的藥物中應用，尤其是在制備預防和治療動脈粥樣硬化的藥物中應用。本發(fā)明的秦皮甲素具有晚期糖基化終產物裂解作用；具有清除超氧陰離子自由基、保護機體細胞免受自由基損傷的藥理作用；能對抗實驗性高脂血癥，抑制動脈粥樣硬化的形成。秦皮甲素為常用中藥中提取的單體化合物，具有毒性低、提取工藝簡單等優(yōu)點；其原材料資源廣闊，具有很好的應用與開發(fā)前景，是一種比較理想的新型的治療心腦血管疾病的中藥。
文檔編號A61P3/10GK101129394SQ20061011164
公開日2008年2月27日 申請日期2006年8月21日 優(yōu)先權日2006年8月21日
發(fā)明者孫緬恩, 張東明, 方蓮花, 杜冠華, 楊敬芝 申請人:中國醫(yī)學科學院藥物研究所