專利名稱：從中藥秦皮中分離純化單體化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，具體是涉及一種從中藥秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的 方法。
背景技術(shù)：
秦皮為木犀科植物苦櫪白臘樹Fraxinus rhynchophylla Hance、白臘樹Fraxinus chinensis Roxb.、尖葉白臘積 Fraxinus szaboana Lingelsh.或宿柱白臘申對Fraxinus stylosa Lingelsh.的干燥枝皮或干皮,性味苦、寒,具有清熱燥濕、清肝明目、平喘止咳功效。用于熱毒瀉痢、目赤腫痛、目生翳障。秦皮中的主要有效成分為香豆素類成分，主要有秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素?，F(xiàn)已有文獻報道從秦皮中提取、制備香豆素成分的方法。《秦皮香豆素提取方法》(中國專利，申請?zhí)?00610137703.4)將秦皮水提醇沉后，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，濃縮液吸附到大孔樹脂吸附法上、洗脫、收集洗脫液、濃縮、干燥，獲得秦皮香豆素的方法。所得物為秦皮總香豆素混合物?！兑环N秦皮提取物的制備方法和用途》(中國專利，申請?zhí)?00510098808. 9)采用水煎煮提取，大孔樹脂分離純化制備秦皮香豆素組合物。該秦皮香豆素組合物是由一定比例的秦皮甲素(aesculin)、秦皮乙素(aesculetin)、秦皮苷(fraxin)、秦皮亭(fraxetin)等組成的總香豆素混合物?！陡呒兌惹仄ぜ姿丶捌渲苽浞椒ā?中國專利，申請?zhí)?00510030722. 2)提供了一種秦皮甲素的制備方法，包括提取、柱層析、濃縮和結(jié)晶步驟，可得到秦皮甲素單體成分。王晶[秦皮中秦皮乙素分離純化的工藝研究，中成藥，2009年02期]利用柱層析，建立了從秦皮中純化秦皮乙素的方法，可得到秦皮乙素單體成分。上述方法或主要是進行秦皮混合香豆素的提取，或是進行單一成分的純化，不能得到多種高純度秦皮香豆素成分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡便、綠色環(huán)保、分離量大、綜合成本低、生產(chǎn)周期短的快速從中藥秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，以滿足對秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的需要。本發(fā)明的方案如下
從秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，步驟為
(1)秦皮提取物的制備取粉碎好的秦皮藥材，用乙醇或甲醇回流提取，提取液經(jīng)回收溶劑得到提取物；
(2)柱層析純化將秦皮提取物用甲醇溶解，上SupeiOse12柱進行層析分離純化，用甲醇-水或乙醇-水為洗脫液進行洗脫，洗脫液流速為每小時1-10倍柱體積，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，得到高純度秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的單體化合物。
前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(I)回流提取時介質(zhì)溫度為50_90°C，液固比為3-20，回流提取時間O. 5-3小時，回流提取次數(shù)1-6次。更加優(yōu)選的是，介質(zhì)溫度為60-800C (優(yōu)選75°C)，液固比為5-10 (優(yōu)選7)，回流提取時間O. 5-2小時(優(yōu)選I小時)，回流提取次數(shù)2-5 (優(yōu)選3次)。前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(I)提取時所用乙醇或甲醇的質(zhì)量濃度為50%-100% (優(yōu)選 70%-95%，更優(yōu)選 85%)。前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(2)洗脫液為10%_80%的甲醇-水洗脫液(優(yōu)選 20%-60%，更優(yōu)選 30%)。 前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(2)用洗脫液進行洗脫時，洗脫液流速為每小時1-6倍柱體積(優(yōu)選每小時3倍柱體積)。本發(fā)明從秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，所得提取物目標(biāo)化合物含量高，雜質(zhì)低，這一優(yōu)點從提取物HPLC圖(圖I)可清楚看出。除此之外，還具有如下優(yōu)勢
(I)提取物經(jīng)過一步分離純化就可以同時得到秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素等多種高純度單體化合物。不像已有技術(shù)一樣只能得到混合香豆素或經(jīng)過多個步驟才能得到一種單體成分。本發(fā)明只需要一個分離步驟即可得到多種高純度化合物，方法操作簡單，效率高,工藝周期短,節(jié)省試劑，降低了生產(chǎn)成本。(2)純化過程中不使用對環(huán)境危害大的氯仿等有機溶劑，綠色環(huán)保。(3)優(yōu)化了層析方法的條件(洗脫液組成)，使純度和效率都大為提高。


圖I是秦皮提取物的高效液相色譜圖。圖2是實施例3層析色譜圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例和附圖詳細說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護范圍不被此限制。實施例中所用設(shè)備或原料皆可從市場獲得。所用SupeiOse 12購自通用電氣(中國)醫(yī)療集團，所用試劑均購自天津試劑四廠，所用水為去離子水。實施例秦皮藥材經(jīng)粉碎后，裝入回流裝置系統(tǒng)，以85%乙醇為提取溶劑，液固比為7，介質(zhì)溫度為75°C，每次回流提取時間為I小時，回流次數(shù)3次。提取液經(jīng)回收溶劑后得到秦皮藥材提取物。將秦皮藥材提取物粗粉用30%甲醇溶解，上Suppose 12層析，用甲醇-水為洗脫液進行洗脫，洗脫液流速為每小時3倍柱體積，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，即得到所要分離的單體化合物。發(fā)明人通過使用不同濃度的甲醇，采用不同洗脫方式，優(yōu)選出了實現(xiàn)本發(fā)明目的的純化條件，有關(guān)實驗結(jié)果如下
表一柱層析條件
權(quán)利要求
1.從中藥秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，其特征是，步驟為(1)秦皮提取物的制備取粉碎好的秦皮藥材，用乙醇或甲醇回流提取，提取液經(jīng)回收溶劑得到提取物；(2)柱層析純化將秦皮提取物用甲醇溶解，上SupeiOse12柱進行層析分離純化，用甲醇-水或乙醇-水為洗脫液進行洗脫，洗脫液流速為每小時1-10倍柱體積，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，得到高純度秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素單體化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征是，步驟(I)回流提取時介質(zhì)溫度為50-90°C，液固比為3-20，回流提取時間O. 5-3小時，回流提取次數(shù)1-6次。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是，介質(zhì)溫度為60-80°C，液固比為5-10，回流提取時間O. 5-2小時，回流提取次數(shù)2-5次。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是，介質(zhì)溫度為75°C，液固比為7，回流提取時間I小時，回流提取次數(shù)3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征是，步驟(I)提取時所用乙醇或甲醇的質(zhì)量濃度為 50%-100% (優(yōu)選 70%-95%，更優(yōu)選 85%)。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征是，步驟(2)洗脫液為10%-80%的甲醇-水洗脫液(優(yōu)選20%-60%，更優(yōu)選30%)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征是，步驟(2)用洗脫液進行洗脫時，洗脫液流速為每小時1-6倍柱體積(優(yōu)選每小時3倍柱體積)。
全文摘要
本發(fā)明涉及從秦皮中分離純化秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的方法，是以秦皮為原料，經(jīng)過下述步驟(1)秦皮提取物的制備取粉碎好的秦皮藥材，用乙醇或甲醇回流提取，提取液經(jīng)回收溶劑后得到提取物粗粉；(2)柱層析純化以Superose12為分離介質(zhì)層析分離純化，用甲醇-水或乙醇-水為洗脫液，得到高純度秦皮素、秦皮苷、秦皮甲素和秦皮乙素的單體化合物。工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴重危害。
文檔編號C07D311/16GK102924416SQ201210434068
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月5日
發(fā)明者白風(fēng)沙, 柳仁民, 孫愛玲 申請人:聊城大學(xué)