臭椿酮在制備治療前列腺疾病的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及中藥單體臭椿酮在制備治療前列腺疾病的藥 物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 前列腺癌（prostaticcarcinoma,PCa)是男性生殖系最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率 隨年齡增加而增長。在我國，前列腺癌發(fā)病率從1993年的1. 71人/10萬男性人口增加到 2005年的7. 9人/10萬男性人口，2008年中國男性前列腺癌發(fā)病率為11. 00/10萬，世界人 口標(biāo)化發(fā)病率（世標(biāo)率）為6. 73/10萬。我國前列腺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯持續(xù)增長趨勢， 前列腺癌正成為嚴(yán)重影響我國男性健康的泌尿系惡性腫瘤（中國前列腺癌發(fā)病現(xiàn)狀和流 行趨勢分析，《臨床腫瘤學(xué)雜志》2013年第04期）。
[0003] 前列腺癌潛伏期較長，很難察覺，一旦發(fā)現(xiàn)一般已經(jīng)發(fā)展為晚期前列腺癌。前列 腺癌的生長和轉(zhuǎn)移密切依賴于雄激素，雄激素的分泌約90%來自于睪丸，約10%來自腎上 腺。雄激素（如雙氫睪酮，DHT)分泌后進入細(xì)胞可以與雄激素受體（Androgenreceptor， AR)結(jié)合，雄激素受體是重要核轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控眾多的基因表達(dá)和前列腺癌細(xì)胞增殖。當(dāng)雄 激素與雄激素受體結(jié)合后，雄激素受體進入細(xì)胞核啟動基因表達(dá)（如篩查前列腺癌的重要 指標(biāo)：前列腺特異性抗原PSA)，從而促進前列腺癌的增殖和轉(zhuǎn)移。因此，去雄激素治療（包 括去勢治療即切除睪丸和藥物抑制雄激素水平）對于大多數(shù)前列腺癌有明顯療效。但去雄 激素治療對腫瘤的控制一般僅能維持1. 5到4. 0年，幾乎所有前列腺癌患者最終均轉(zhuǎn)為雄 激素非依賴前列腺癌（Androgen-independentProstateCancer,AIPC)，進而發(fā)展為激素 難治性前列腺癌（HormoneRefractoryProstateCancer,HRPC)，也稱去勢抵抗性前列腺 癌（CastrationResistantProstateCancer，CRPC)。此時，去雄激素治療也就失去了效 果，CRPC是導(dǎo)致前列腺癌病人死亡的重要原因。CRPC的發(fā)生機制有很多，包括雄激素受體 突變、雄激素受體表達(dá)消失以及在低雄激素環(huán)境下雄激素不敏感的細(xì)胞群擴增等。即，雖 然去雄激素治療沒有效果，但是在大多數(shù)去勢抵抗性前列腺癌中雄激素受體也同樣扮演著 重要的角色，所以雄激素受體是目前治療一般前列腺癌和去勢抵抗型前列腺癌的重要靶點 (去勢抵抗的前列腺癌的新療法：抑制雄激素的持續(xù)分泌和雄激素受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)， 《泌尿外科雜志（電子版）》2011年第01期）。
[0004] 最新FDA批準(zhǔn)的治療去勢抵抗性前列腺癌（CastrationResistantProstate Cancer，CRPC)的藥物包括阿比特龍（Abiraterone)和MDV3100 (Enzalutamide)，前者是抑 制雄激素的合成，后者是雄激素受體的拮抗劑，這兩種藥物都是針對雄激素受體信號通路， 在去勢抵抗性前列腺癌（CRPC)治療方面取得較好一定的療效，但是經(jīng)過上述藥物治療后， 病人依然會產(chǎn)生藥物抵抗，且上述兩種藥不是我國自主知識產(chǎn)權(quán)的藥物。因此，研發(fā)具有我 國自主知識產(chǎn)權(quán)的新型抑制雄激素受體的藥物對臨床治療具有十分重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提出式（I)所示的臭椿酮化合物或其水合物或藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué) 上可接受的載體在制備治療前列腺癌惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用；
[0006]
[0007] 式⑴所示臭椿酮化合物是一種天然小分子化合物，又名臭椿苦酮，其化學(xué) 名：11P，20-環(huán)氧-IP，11，12a-三羥基苦樹素-3,13 (21)-二烯-2,16-二酮（113， 2〇-Epoxy-10，ll，12a-trihydroxypicrasa-3，13(21)-diene-2，16-dione)，英文名： Ailanthone，分子式：C2QH2407,分子量：376. 405,CAS登錄號：981-15-7。
[0008] 本發(fā)明應(yīng)用中，式（I)臭椿酮化合物抑制雄激素受體的轉(zhuǎn)錄活性。式（I)臭椿酮 化合物抑制雄激素受體突變的前列腺癌細(xì)胞株的增殖。其在體外和/或體內(nèi)抑制雄激素受 體突變的前列腺癌細(xì)胞株22RV1的增殖、抑制雄激素依賴性前列腺癌細(xì)胞株LNCaP的增殖。
[0009] 本發(fā)明應(yīng)用中，式（I)臭椿酮化合物在體外和/或體內(nèi)抑制前列腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
[0010] 本發(fā)明應(yīng)用中，式（I)臭椿酮化合物抑制雄激素受體活性和前列腺癌細(xì)胞生長。
[0011] 本發(fā)明應(yīng)用中，式（I)臭椿酮化合物顯著抑制原代分離的前列腺癌細(xì)胞株增殖。
[0012] 本發(fā)明應(yīng)用中，式（I)臭椿酮化合物抑制前列腺癌細(xì)胞的克隆形成。
[0013] 本發(fā)明應(yīng)用中，式（I)臭椿酮化合物促進雄激素受體突變細(xì)胞22RV1凋亡。
[0014] 本發(fā)明應(yīng)用中，式（I)臭椿酮化合物顯著抑制雄激素受體的蛋白表達(dá)；還能夠抑 制AR調(diào)控的下游基因表達(dá)。式（I)臭椿酮對雄激素陽性的前列腺癌細(xì)胞株抑制效果更為 明顯。
[0015] 本發(fā)明應(yīng)用中，式（I)臭椿酮能夠在小鼠模型中抑制去勢抵抗性前列腺癌細(xì)胞的 增殖和轉(zhuǎn)移。
[0016] 本發(fā)明應(yīng)用中，式（I)臭椿酮化合物的水合物或藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接 受的載體等同樣具有與式（I)臭椿酮相同的抑制效果。
[0017] 本發(fā)明還提出了式（I)臭椿酮化合物在抑制雄激素受體突變的前列腺癌細(xì)胞株 增殖的應(yīng)用及方法。式（I)臭椿酮可以抑制比卡魯胺或MDV3100治療無效的雄激素受體突 細(xì)胞株22RV1細(xì)胞增殖。
[0018] 本發(fā)明提出式（I)所示的臭椿酮化合物在體外和/或體內(nèi)抑制前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移 的應(yīng)用及方法。式（I)臭椿酮可以體外抑制前列腺癌細(xì)胞系PC3M、DU145和LNCaP細(xì)胞遷 移及LNCaP和22RV1細(xì)胞的體內(nèi)轉(zhuǎn)移。
[0019] 本發(fā)明提出式（I)所示的臭椿酮化合物抑制雄激素受體活性和前列腺癌細(xì)胞生 長的應(yīng)用及方法。式（I)臭椿酮可以抑制雙氫睪酮（DHT)誘導(dǎo)的雄激素受體活性以及缺 失配體結(jié)構(gòu)域的雄激素受體（AR1651)活性。式（I)臭椿酮同樣可以抑制前列腺癌細(xì)胞株 LNCaP、22RVl、PC3、DU145及病人來源原代前列腺細(xì)胞株的生長。
[0020] 本發(fā)明提出式（I)臭椿酮化合物對雄激素受體產(chǎn)生抑制作用的應(yīng)用及方法。式 (I)臭椿酮通過阻斷雄激素受體與其分子伴侶HSP90復(fù)合體之間的結(jié)合，使得雄激素受體 蛋白穩(wěn)定性下降而被蛋白酶體降解，因此可以顯著下調(diào)雄激素受體蛋白水平而抑制其轉(zhuǎn)錄 活性并抑制下游基因表達(dá)。
[0021] 本發(fā)明通過熒光素酶報告基因法篩選得到單體式（I)臭椿酮，該單體能夠在體外 和體內(nèi)強烈抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖和遷移，并且能夠有效阻斷雄激素受體信號通路。
[0022] 本發(fā)明研究表明式（I)臭椿酮化合物不僅能高效抑制雄激素依賴性前列腺癌細(xì) 胞株LNCaP的增殖，而且能抑制雄激素受體突變的前列腺癌細(xì)胞株22RV1 (該細(xì)胞株表達(dá) 持續(xù)激活的突變雄激素受體，且對臨床藥物雄激素受體拮抗劑比卡魯胺和MDV3100具有抗 性）的增殖。此外本發(fā)明從體外和體內(nèi)證明了該單體能夠抑制前列腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。進一 步實驗證明表達(dá)雄激素受體的前列腺癌細(xì)胞株對式（I)臭椿酮化合物具有較好的敏感性， 式（I)臭椿酮化合物單體通過抑制雄激素受體與熱休克分子伴侶之間的結(jié)合而誘導(dǎo)雄激 素受體泛素化，從而被蛋白酶體降解，進而抑制了雄激素受體活性和前列腺癌細(xì)胞生長。根 據(jù)以上結(jié)果，單體式（I)臭椿酮化合物不僅可以治療早期雄激素依賴性前列腺癌，也可以 治療晚期去勢抵抗性前列腺癌和轉(zhuǎn)移性前列腺癌。
[0023] 本發(fā)明中，"去勢抵抗性前列腺癌（CRPC) "是指，前列腺癌病人經(jīng)去勢治療（切 除睪丸或化學(xué)去勢降低雄激素）后復(fù)發(fā)，去勢治療無效的前列腺癌稱為去勢抵抗性前列腺 癌，這種前列腺癌是威脅前列腺癌患者的最大殺手。
[0024] 本發(fā)明中，"雄激素受體（AR)"是指，雄激素受體（AR)屬于核受體超家族中的 類固醇受體。AR-般由四個結(jié)構(gòu)域組成：N端轉(zhuǎn)錄激活區(qū)（NTD)、DNA結(jié)合區(qū)（DBD)、鉸 鏈區(qū)和配體結(jié)合區(qū)（LBD)。雄激素受體與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。雄激素如雙 氫睪酮（Dihydrotestosterone，DHT)與雄激素受體結(jié)合后，雄激素受體可以進入細(xì)胞核 與轉(zhuǎn)錄激活域結(jié)合啟動下游基因表達(dá)。目前臨床使用的雄激素受體拮抗劑如比卡魯胺 (Bicalutamide)及MDV3100 (Enzalutamide)都是與雄激素受體的配體結(jié)合區(qū)（LBD)結(jié)合而 抑制了其轉(zhuǎn)錄活性。
[0025] 本發(fā)明中，"蛋白質(zhì)降解"是指細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)經(jīng)泛素化后被蛋白酶體識別而發(fā)生 降解的過程。
[0026] 本發(fā)明中，"熒光素酶報告基因檢測（Luciferaseassay) "是指，熒光素酶 (Luciferase，LUC)報告基因系統(tǒng)是以熒光素（Iuciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶 (fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化熒光素生成氧化熒光素 (oxyluciferin)，在突光素氧化的過程中，會發(fā)出生物突光（Bioluminescence)。然后可以 通過熒光測定儀也稱化學(xué)發(fā)光儀（Luminometer)或液閃測定儀測定熒光素氧化過程中釋 放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表 達(dá)，是檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA